公司，型號：Heraeus〇
[0056] 細(xì)胞株：SPCA1人肺腺癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞，均購自中國科學(xué)院上海細(xì) 胞研究所。
[0057] ⑶實驗步驟：
[0058] 細(xì)胞培養(yǎng)：腫瘤細(xì)胞接種在含10%小牛血清，10011]/1111青霉素6鈉鹽及100 118/ ml硫酸鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置于37 °C、100 %相對濕度、含5 %C02的培養(yǎng)箱中，傳代3 次后備用。
[0059]MTT法測定：取對數(shù)生長期的細(xì)胞，經(jīng)0. 25%胰蛋白酶消化后（懸浮細(xì)胞無須消 化），懸浮于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，用玻璃滴管輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，顯微 鏡下用血細(xì)胞記數(shù)板記數(shù)活細(xì)胞。96孔培養(yǎng)板每孔接種細(xì)胞懸液90yL(細(xì)胞濃度調(diào)整為 6~10X104個/ml)，在37°C、100%相對濕度、含5%C02、95%空氣的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后， 每孔加 10yL藥液（終濃度設(shè)為：40yg/ml、20yg/ml、10yg/ml、5yg/ml和 2. 5yg/ml五 個濃度）。另外，每個濃度設(shè)陰性對照（等濃度DMS0)及空白本底（不加細(xì)胞），各組均設(shè) 6個復(fù)孔。再連續(xù)培養(yǎng)24h，然后每孔加入5mg/ml的MTT溶液10yL，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，仔細(xì) 吸去上清液（懸浮細(xì)胞，需要先離心，再吸去上清）。每孔加入100yLDMS0,置微量振蕩器 震蕩5min以使結(jié)晶完全溶解，酶標(biāo)儀492nm單波長比色，測定0D值。以下述方法計算細(xì)胞 生長抑制率作為評價指標(biāo)。
[0060] 抑制率（％ ) = [1-(實驗組0D均值-空白組0D均值）八對照組00均值-空白 組0D均值）]X100%。根據(jù)細(xì)胞生長抑制率，以直線回歸方法計算IC5。值。
[0061] (4)實驗結(jié)果：
[0062] 對體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的IC5。（yg/ml)
[0063]
[0064] (5)結(jié)論： 根據(jù)上述體外試驗結(jié)果，我們可以看出具有式I結(jié)構(gòu)的化合物對上述人類腫瘤細(xì)胞具 有比較強的抑制作用。
【附圖說明】
[0065] 附圖為具有式I結(jié)構(gòu)的化合物的結(jié)構(gòu)通式圖。
【具體實施方式】
[0066] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，實施例僅為解釋性的，決不意味著它 以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0067] 實施例1 :I-1的制備
[0068]
[0069]在裝有攪拌、冷凝器、溫度計的反應(yīng)瓶中，加入21.59g(0.lOmol)化合物a和 350ml乙腈，攪拌，0~15 °C，滴加23. 9g4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯（b)、 61. 5g(0. 25mol)二異丙基乙胺和150ml乙腈的混合溶液，滴加完畢后，回流反應(yīng)2h，TLC顯 示反應(yīng)完全，蒸干溶劑，殘留物用硅膠柱分離（石油醚-乙酸乙酯=7:3)，得淡黃色固體，收 率 44.8%，m/z:421.08。
[0070] 取化合物I-1固體3. 0g，溶于lOmlDMSO。冰水浴冷卻至0°C，滴加鹽酸乙醚溶液 至pH為2,繼續(xù)于冰水浴下攪拌約lh。過濾，真空干燥，得白色固體粉末，即I-1的鹽酸鹽。 [0071] 參照實施例1的方法，即可合成化合物I_2~I-6。
[0072] 實施例2 :I-2的制備
[0073] 按實施例1相似的方法制備，將4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯換成5-甲 氧幾基_2_咲喃橫酰氯。
[0074]
[0075]淡黃色固體，收率 49.6%，m/z:407.06。
[0076] 實施例3 :I-3的制備
[0077] 按實施例1相似的方法制備，將4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯換成2, 5-甲 基-3-呋喃磺酰氯。
[0078]
[0079]淡黃色固體，收率 51.9%，m/z:377. 09。
[0080] 實施例4 :I-4的制備
[0081] 按實施例1相似的方法制備，將4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯換成2-三 氟甲基-5-甲基-3-呋喃磺酰氯。
[0082]
[0083]淡黃色固體，收率 55.4%，m/z:435.09。
[0084] 取I_4固體3.8g，溶于30mLDMF。加熱至回流后加入等摩爾對甲基苯磺酸，繼續(xù) 于回流下攪拌反應(yīng)約lh。反應(yīng)完畢，于室溫下靜置2h。析出白色結(jié)晶，過濾，真空干燥，得 I-4的對甲基苯磺酸鹽。
[0085] 實施例5 :I-5的制備
[0086] 按實施例1相似的方法制備，將4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯換成2, 5-二 氯-4-硝基-3-噻吩磺酰氯。
[0087]
[0088] 黃色固體，收率 50. 9%，m/z:477. 94。
[0089] 實施例6 :I-6的制備
[0090] 按實施例1相似的方法制備，將4-甲氧羰基-5-甲基-2-呋喃磺酰氯換成 5-氯_2_噻吩橫酰氯。
[0091]
[0092] 黃色固體，收率 49.l%，m/z:398.99。
[0093] 為了更充分地說明本發(fā)明的含有苯并氮雜卓的化合物的藥物組合物，下面提供下 列制劑實施例，所述實施例僅用于說明，而不是用于限制本發(fā)明的范圍。所述制劑可以使用 本發(fā)明化合物中的任何活性化合物及其鹽。
[0094] 實施例7:
[0095] 用下述成分制備硬明膠膠囊：
[0096] 甩量屢 化合物1-1 20mg 干淀粉 240mg 硬脂酸鎂 10mg
[0097] 制備工藝：將原輔料預(yù)先干燥，過100目篩備用。按處方量將上述成分混合后，填 充入硬明膠膠囊中。
[0098] 實施例8:
[0099] 用下述成分制備片劑：
[0100]
[0101] 制備工藝：將原輔料預(yù)先干燥，過100目篩備用。先將處方量的輔料充分混勻。將 原料藥以遞增稀釋法加到輔料中，每次加時充分混勻2 - 3次，保證藥與輔料充分混勻，過 20目篩，在55°C通風(fēng)烘箱中干燥2h，干顆粒過16目篩整粒，測定中間體含量，混合均勾，在 壓片機上壓片。
[0102] 實施例9:
[0103] 注射用凍干粉的制備：
[0104]化合物I-1的鹽酸鹽 50mg
[0105]甘露醇 55 - 85%
[0106] 制備方法：取活性成分加入注射用水，用藥用堿調(diào)節(jié)pH值至4-8使其溶解。再加 入甘露醇，按注射劑的要求進行高壓滅菌，加入活性炭，采用微孔濾膜過濾，濾液進行分裝， 采用冷凍干燥法，制得疏松塊狀物，封口，即得。
【主權(quán)項】
1. 具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中： X，Y為 0,S，N; Rl，R2同時或分別為：氫，C1-C4烷基； R3為：同時或分別被C1-C4烷基，鹵素取代的Ci-C4烷基，C^匕燒氧羰基，硝基，苯基，三 氟甲基，(；-(：4烷氧基單或二或三取代的呋喃-2-基、呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基。2. 具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物為：3. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其藥學(xué)上可接受的鹽為： 式I化合物與無機酸、有機酸成鹽。4. 如權(quán)利要求3所述的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其藥學(xué)上可接受的鹽為： 鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸 鹽，對甲苯磺酸鹽。5. 權(quán)利要求1中式I化合物的制備方法，其特征在于：化合物（2)，在非質(zhì)子溶劑中，與 化合物（3)在堿性縛酸劑的催化下，-10~30°C反應(yīng)制得，X、Y、RUR2、R3定義如前所述。6. -種抗腫瘤的藥物組合物，它包含治療有效量的權(quán)利要求1~2任一項的化合物或 其藥學(xué)上可接受的鹽及一種或多種藥用載體。7. 權(quán)利要求1~2任一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在用于制備抗腫瘤藥物方面 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)的一類具有抗腫瘤作用的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中：X，Y為O，S，N；R1，R2同時或分別為：氫，C1-C4烷基；R3為：同時或分別被C1-C4烷基，鹵素取代的C1-C4烷基，C1-C4烷氧羰基，硝基，苯基，三氟甲基，C1-C4烷氧基單或二或三取代的呋喃-2-基、呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基。本發(fā)明還公開了上述化合物的制備方法，并同時公開了以該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性有效成分的藥物組合物，以及它們在作為抗腫瘤藥物，特別是在用于制備治療肺癌、胃癌藥物方面的應(yīng)用。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/427, C07D417/12
【公開號】CN105037345
【申請?zhí)枴緾N201510311971
【發(fā)明人】楊靜, 孫皓, 崔曉雪
【申請人】天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年6月9日