NA的影響
[0081] 如圖7所示(為還原劑對(duì)1，8-萘啶雙核銅⑴配合物切割pUC19質(zhì)粒DNA的瓊脂 糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖)，泳道1是只加入DNA，泳道2是DNA+本發(fā)明的配合物（1 μ Μ)，泳 道3、4、5是DNA+本發(fā)明的配合物（1 μ Μ)再分別+抗壞血酸（ImM)、過(guò)氧化氫（ImM)或巰基 丙酸（ImM)。從結(jié)果可以看出，切割效果沒(méi)有差別，本發(fā)明的配合物可直接發(fā)生氧化反應(yīng)，這 說(shuō)明本發(fā)明的配合物是通過(guò)銅（I)失去電子，將電子最終傳遞給DNA，從而切割達(dá)到DNA的 目的。這與現(xiàn)有的"銅（II)復(fù)合物要先被還原劑還原成銅（I)，然后銅（I)才能再發(fā)生氧 化反應(yīng)，失去電子，將電子傳遞給氧化劑再傳遞給水生成羥基自由基或者活性氧，從而破壞 DNA的3, 5-磷酸二酯鍵"不同。
[0082] 4、活性氧類(lèi)抑制劑對(duì)本發(fā)明的配合物切割DNA的影響
[0083] 如圖8所示(為活性氧類(lèi)抑制劑對(duì)1，8-萘啶雙核銅⑴配合物切割DNA的瓊脂糖 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖)，泳道1是只加入DNA，泳道2是DNA+本發(fā)明的配合物，泳道3、4、5是 DNA+本發(fā)明的配合物（1 μ Μ)，再分別+DMSO (lmM，羥基自由基清除劑），NaN3 (lmM，單線態(tài)氧 清除劑）和KI(lmM，過(guò)氧化物清除劑）。從結(jié)果可以看出，切割效果沒(méi)有差別。說(shuō)明本發(fā)明 的配合物切割DNA不是通過(guò)產(chǎn)生活性氧類(lèi)物質(zhì)切割DNA的，可能是通過(guò)將水作為電子中間 傳遞體，銅（I)復(fù)合物直接將電子給水，再由水傳遞給DNA，氧化DNA，從而切斷DNA。
[0084] 5、氧氣對(duì)本發(fā)明的配合物切割DNA的影響
[0085] 如圖9所示（為氧氣對(duì)1，8-萘啶雙核銅（I)配合物切割DNA的瓊脂糖凝膠電泳 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖)，泳道1是只加入DNA，泳道2是氬氣氛圍、DNA+2 μ M本發(fā)明的配合物，泳道3 是空氣氛圍、DNA+2 μ M本發(fā)明的配合物。從結(jié)果可以看出，在通入氬氣的環(huán)境中，本發(fā)明的 配合物切割DNA的活性比暴露于空氣中的切割活性稍微高一些，說(shuō)明本發(fā)明的配合物切割 DNA不僅可以在完全無(wú)氧的環(huán)境下進(jìn)行，而且其切割活性還有些許提高，這使得體內(nèi)環(huán)境下 進(jìn)行DNA切割成為可能，使其成為藥物的可能性增大。
[0086] 6、氧氣對(duì)本發(fā)明的配合物切割DNA的影響
[0087] 如圖10所示(為靜電相互作用對(duì)1，8-萘啶雙核銅⑴配合物切割DNA的瓊脂糖 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖)，泳道1是只加入DNA，泳道2-6為DNA+1. 5 μ M本發(fā)明的配合物，再分 別+1,3, 5, 10, 20mM的NaCl。從結(jié)果可以看出，隨著NaCl的濃度增大，水中的靜電相互作用 會(huì)越來(lái)越強(qiáng)，而與之對(duì)應(yīng)的是本發(fā)明的配合物對(duì)DNA的切割活性應(yīng)該越好。當(dāng)NaCl的濃度 為20mM時(shí)，超螺旋結(jié)構(gòu)基本消失，主要存在形式變?yōu)殚_(kāi)環(huán)狀態(tài)。說(shuō)明靜電相互作用會(huì)影響 本發(fā)明的配合物對(duì)DNA的切割。靜電相互作用越強(qiáng)，本發(fā)明的配合物直接將電子給水再由 水給DNA的作用就會(huì)加強(qiáng)，本發(fā)明的配合物對(duì)DNA的切割活性越好。
[0088] 7、檢測(cè)本發(fā)明的配合物與DNA相互作用的位置
[0089] 大部分DNA是B-型結(jié)構(gòu)，B-型結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)是兩條雙螺旋之間有一大一小兩個(gè)不 對(duì)稱(chēng)的溝，要想檢測(cè)本發(fā)明的配合物與DNA相互作用的具體位置就要引入競(jìng)爭(zhēng)性物質(zhì)，看 加入這些競(jìng)爭(zhēng)性物質(zhì)后是否影響本發(fā)明的配合物與DNA的相互作用，或者說(shuō)是否影響本發(fā) 明的配合物對(duì)DNA的切割作用，這樣才能知道本發(fā)明的配合物是結(jié)合到DNA的大溝、小溝還 是邊緣部分。
[0090] 采用兩種物質(zhì)：一是甲基綠，它與DNA的大溝的親和力很高，作用是結(jié)合DNA的大 溝；另一個(gè)是DAPI，它與DNA的小溝的親和力很高，作用是結(jié)合DNA的小溝。如果本發(fā)明的 配合物是結(jié)合到DNA的大溝或小溝，那一旦加入甲基綠或DAPI，本發(fā)明的配合物對(duì)DNA的切 割作用就一定會(huì)受到影響。
[0091] 圖11為檢測(cè)1，8-萘啶雙核銅（I)配合物與DNA相互作用的位置的結(jié)果圖。泳道 1是只加入DNA，泳道2為DNA+1. 5 μ M本發(fā)明的配合物，泳道3為DNA+1. 5 μ M本發(fā)明的配 合物+5 μ M甲基綠，泳道4為DNA+1. 5 μ M本發(fā)明的配合物，泳道5為DNA+1. 5 μ M本發(fā)明的 配合物+5μΜ DAPI。從結(jié)果可以看出，本發(fā)明的配合物對(duì)DNA的切割作用并沒(méi)有因?yàn)榧谆?綠或DAPI的加入而受到影響，說(shuō)明本發(fā)明的配合物是通過(guò)靜電相互作用結(jié)合在DNA邊緣的 糖部分，直接接觸3, 5-磷酸二酯鍵，從而切割3, 5-磷酸二酯鍵。
[0092] 顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì) 本發(fā)明的實(shí)施方式的限定，對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可 以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)，這里無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā) 明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 1，8-萘啶雙核銅（I)配合物，其特征在于，分子式為：2. 如權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，包括以 下步驟： 1) 合成2-醛基-1，8-萘啶 將2-甲基-1，8-萘啶與二氧化硒溶于1，4-二氧六環(huán)中，回流反應(yīng)，薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng) 進(jìn)程，反應(yīng)完成后將產(chǎn)物純化，得到2-醛基-1，8-萘啶；其中，2-甲基-1，8-萘啶與二氧化 硒的摩爾比為1 :1-2 ; 2) 合成配體 將2-醛基-1，8-萘啶與鄰氨基對(duì)甲苯酚溶于甲醇中，回流反應(yīng)至溶液析出黃色沉淀， 得到配體；其中，2-醛基-1，8-萘啶與鄰氨基對(duì)甲苯酚的摩爾比為1 :0. 7-1. 5 ; 3) 合成1，8-萘啶雙核銅（I)配合物 將配體溶于甲醇中，得到A ; 取CuCl2 · 2H20溶于甲醇中，得到B ; 將B逐滴加入到A中，攪拌反應(yīng)12-60小時(shí)，得到沉淀，為1，8-萘啶雙核銅（I)配合物； 其中，配體和CuCl2 · 2H20的摩爾比為1 :0· 92-2. 78。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 1)在氮?dú)夥諊蟹磻?yīng)；優(yōu)選地，步驟1)中，回流8-16小時(shí)；優(yōu)選地，步驟1)中，回流溫度為 80°C -130°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 1) 中，將產(chǎn)物純化包括：將產(chǎn)物干燥，之后過(guò)硅膠柱或氧化鋁柱純化，再用二氯甲烷、石油醚 或乙酸乙酯過(guò)柱，得到2-醛基-1，8-萘啶。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 2) 中，可向溶液中滴入冰醋酸作為催化劑；優(yōu)選地，步驟2)中，回流3-9小時(shí)；優(yōu)選地，步驟 2)中，回流溫度為40°C -60°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 2) 中，得到的黃色沉淀經(jīng)過(guò)濾、用冰甲醇或冰乙醇洗滌、烘干，得到配體。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 3) 中，配體和CuCl2 · 2H20的摩爾比為1 :1。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的制備方法，其特征在于，步驟 3)中，得到的沉淀經(jīng)過(guò)濾、用冰甲醇或冰乙醇洗滌、干燥，得到1，8-萘啶雙核銅（I)配合物。9. 如權(quán)利要求1-8任一所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的應(yīng)用，該1，8-萘啶雙核 銅（I)配合物可用來(lái)切割DNA。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的1，8-萘啶雙核銅（I)配合物的應(yīng)用，當(dāng)所述1，8-萘啶雙核 銅（I)配合物用來(lái)切割DNA時(shí)是按照下列步驟進(jìn)行：將IOOng pUC19質(zhì)粒DNA和本發(fā)明的 配合物混合于IOmM磷酸（PBS)緩沖液中，pH=7. 4, 37°C反應(yīng)，完成切割。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)1,8-萘啶雙核銅(I)配合物，分子式為：該配合物是目前為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有切割DNA功能的萘啶雙核銅配合物，可以在不需氧氣、還原劑參與的情況下通過(guò)水解機(jī)制裂解DNA，使其在藥物研發(fā)領(lǐng)域作為新的抗腫瘤藥物成為可能。本發(fā)明還公開(kāi)了1,8-萘啶雙核銅(I)配合物的制備方法。本發(fā)明還公開(kāi)了1,8-萘啶雙核銅(I)配合物的應(yīng)用，其可用來(lái)切割DNA。
【IPC分類(lèi)】C07F1/08, A61P35/00, C12Q1/68
【公開(kāi)號(hào)】CN104974181
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410140191
【發(fā)明人】傅文甫, 趙春超
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所
【公開(kāi)日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2014年4月9日