從廣金錢(qián)草中提取分離廣金錢(qián)草堿的方法和系統(tǒng)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種從廣金錢(qián)草中提取分離廣金錢(qián)草堿的方法和系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]廣金錢(qián)草為豆科山螞幢屬植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其藥用部位為干燥地上部分，主要化學(xué)成分為黃酮、皂苷、多糖、生物堿等化合物。具有清熱除濕，利尿通淋之功效。用于熱淋、沙淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少、黃疸尿赤、尿路結(jié)石。
[0003]廣金錢(qián)草堿(desmodimine)為白色固體；分子式:C12H15NO4;分子量:237 ;圖1顯不其化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
[0004]廣金錢(qián)草堿存在于廣金錢(qián)草藥材中，作為廣金錢(qián)草鑒別和含量測(cè)定用的對(duì)照品，以及廣金錢(qián)草及其相關(guān)藥物制劑的質(zhì)量控制用?，F(xiàn)有提取分離廣金錢(qián)草堿的方法和系統(tǒng)亟待改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題至少之一或者提供一種商業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種從廣金錢(qián)草中提取分離廣金錢(qián)草堿的方法和系統(tǒng)，利用該提取分離方法和系統(tǒng)得到的廣金錢(qián)草堿，純度高，有利于作為廣金錢(qián)草鑒別和含量測(cè)定用的對(duì)照品、以及作為廣金錢(qián)草及其相關(guān)藥物制劑的質(zhì)量控制。
[0006]依據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供一種提取分離廣金錢(qián)草堿的方法，該方法包括以下步驟:利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物；利用醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行多級(jí)色譜分離，其中包括，利用第一醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行第一色譜分離，獲得第一分離部分，利用第二醇體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，利用第三醇體系對(duì)所述第二分離部分進(jìn)行第三色譜分離，以獲得所述廣金錢(qián)草堿。
[0007]本發(fā)明的該方法，利用多級(jí)色譜分離，包括組合利用大孔樹(shù)脂純化技術(shù)，中壓制備及凝膠色譜技術(shù)，采用醇-水體系，從廣金錢(qián)草提取物中分離提取廣金錢(qián)草堿，該工藝操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)時(shí)間短，產(chǎn)品收率高，純度高，能夠獲得純度達(dá)到98%以上的廣金錢(qián)草堿，獲得的廣金錢(qián)草堿可作為含量測(cè)定用化學(xué)對(duì)照品。該工藝步驟以及各個(gè)步驟的參數(shù)條件，是發(fā)明人綜合考慮、多次調(diào)整試驗(yàn)大孔樹(shù)脂色譜、反相中壓色譜和凝膠色譜的組合及其各自的洗脫條件對(duì)廣金錢(qián)草中的廣金錢(qián)草堿的分離純化效果的影響而確定下來(lái)的，該提取純化過(guò)程不涉及毒性相對(duì)強(qiáng)的有機(jī)溶劑，提取分離操作過(guò)程及提取物都安全可靠。
[0008]圖2顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程圖。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述本發(fā)明一方面的廣金錢(qián)草堿提取分離方法，還可以具有以下技術(shù)特征至少之一:
[0009]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物，包括:利用濃度50-95%的乙醇對(duì)所述廣金錢(qián)草進(jìn)行兩次回流提取，合并兩次回流提取所得的提取液，獲得合并提取液，除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和離子，以及任選的，進(jìn)行干燥，以獲得所述提取物。兩次濃度為50-95%乙醇回流提取獲得提取物，是發(fā)明人經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)摸索確定的，既能充分利用原料也能節(jié)省時(shí)間，利于規(guī)?；a(chǎn)制備；去除提取液中的乙醇和/或離子，利于排除它們對(duì)后續(xù)分離純化的干擾。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述兩次回流提取，其中一次的乙醇和廣金錢(qián)草的重量比為12:1，回流提取的時(shí)間為1.5h_3h，任選的為2h，另一次的乙醇和廣金錢(qián)草的重量比為10:1，回流提取的時(shí)間為lh-2h，任選的為1.5h?；亓鲿r(shí)，濃度為50-95%乙醇和廣金錢(qián)草的比例以及回流時(shí)間，是發(fā)明人經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)檢測(cè)確定的，能夠使原料得到高提取。
[0011 ] 根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，所述第一醇體系為乙醇-水體系，該乙醇-水體系中的乙醇的濃度為40-45%，較佳的，所述乙醇-水體系中的乙醇的濃度為40%，所述第一色譜為大孔樹(shù)脂。該乙醇-水洗脫體系中乙醇的濃度是發(fā)明人結(jié)合后續(xù)色譜分離條件、多次試驗(yàn)檢測(cè)洗脫下來(lái)的峰中的廣金錢(qián)草堿比例，經(jīng)過(guò)多次調(diào)整優(yōu)化確定的。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，所述第二醇體系為乙醇-水體系，該乙醇-水體系中的乙醇的濃度為12-35 %，所述第二色譜為反向色譜，較佳的，選擇的反向色譜為反向中壓色譜，更佳的，選擇C18柱，其柱壓為l-10bar，洗脫流速為5?30ml/min。該乙醇-水洗脫體系中的乙醇濃度是發(fā)明人結(jié)合第一分離部分中目標(biāo)成分的比例，以及第一色譜分離中的乙醇-水洗脫體系，多次試驗(yàn)優(yōu)化確定的，利于在簡(jiǎn)單操作和短時(shí)間內(nèi)，獲得收率高、純度高的廣金錢(qián)草堿。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述利用第二醇體系對(duì)第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括:利用乙醇濃度為a的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行等度洗脫25-40min，接著換用乙醇濃度為[a，b]的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行梯度洗脫180-250min，收集以獲得所述第二分離部分，其中，a的取值范圍為12_20%，b的取值范圍為22-35%。先利用一個(gè)濃度的乙醇-水體系等度洗脫，再進(jìn)行梯度洗脫，能夠提高分離提取效率；等度洗脫和梯度洗脫的乙醇濃度或濃度范圍，以及洗脫時(shí)間，是發(fā)明人考慮收率、時(shí)間、回收的分離部分的復(fù)雜度、分離部分中目標(biāo)成分的比例等，多次試驗(yàn)確定的。
[0014]如圖3所示，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，所述利用第二醇體系對(duì)第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括:利用乙醇濃度為c的乙醇-水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[c，d]的乙醇_水體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行梯度洗脫200min，收集獲得初級(jí)第二分離部分；利用乙醇濃度為e的乙醇-水體系對(duì)所述初級(jí)第二分離部分進(jìn)行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[e，f]的乙醇-水體系對(duì)所述初級(jí)第二分離部分進(jìn)行梯度洗脫200min，收集獲得所述第二分離部分，其中，c和e的取值范圍為12-20%，d和f的取值范圍為22-35%，e>c，d>f。前后兩次，都先利用一個(gè)濃度的乙醇-水體系等度洗脫，再進(jìn)行梯度洗脫，能夠提高分離提取廣金錢(qián)草堿的效率；前后兩次的等度洗脫和梯度洗脫的乙醇濃度或濃度范圍、各自的洗脫時(shí)間、速度，是發(fā)明人結(jié)合考慮兩次等度-梯度洗脫的條件、收率、時(shí)間、回收的分離部分的復(fù)雜度、分離部分中目標(biāo)成分的比例等，多次試驗(yàn)優(yōu)化確定的，利于在簡(jiǎn)單操作和短時(shí)間內(nèi)，獲得收率高、純度高的廣金錢(qián)草堿。在本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，c = 15%, e = 18%, d = 35%, f =22%，能夠使最終獲得的產(chǎn)品純度達(dá)到98%以上。
[0015]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，所述第三醇體系為純甲醇，所述第三色譜為凝膠色譜。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所選凝膠色譜為葡聚糖凝膠色譜Sephadex G_75。利于進(jìn)一步提尚目標(biāo)化合物的純度。
[0016]依據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供一種提取分離廣金錢(qián)草堿的系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠用以實(shí)施上述本發(fā)明一方面或者任一實(shí)施例中的廣金錢(qián)草堿提取分離方法，該系統(tǒng)包括:回流提取裝置，用以利用乙醇對(duì)廣金錢(qián)草進(jìn)行回流提取，獲得廣金錢(qián)草提取物；色譜分離裝置，用于利用醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行多級(jí)色譜分離，其包括，第一色譜分離單元，與所述回流提取裝置相連，用于利用第一醇體系對(duì)所述提取物進(jìn)行第一色譜分離，獲得第一分尚部分，
[0017]第二色譜分離單元，與所述第一色譜分離單元相連，用于利用第二醇體系對(duì)所述第一分離部分進(jìn)行第二色譜分離，獲得第二分離部分，第三色譜分離單元，與所述第二色譜分離單元相連，用于利用第三醇體系對(duì)所述第二分離部分進(jìn)行第三色譜分離，以獲得所述廣金錢(qián)草堿。圖4顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中的提取分離系統(tǒng)1000的結(jié)構(gòu)，包括回流提取裝置100和色譜分離裝置200，色譜分離裝置包括第一色譜分離單元202、第二色譜分離單元204和第三色譜分離單元206。上述對(duì)本發(fā)明一方面的廣金錢(qián)草堿提