本發(fā)明屬于微生態(tài)制劑生產(chǎn)制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方中草藥微生態(tài)制劑及其基于固態(tài)發(fā)酵的快速生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)：

自上世紀(jì)起，我國(guó)畜牧產(chǎn)業(yè)得到了迅速發(fā)展，我國(guó)主要畜牧產(chǎn)品總額居于世界首位，且我國(guó)肉類(lèi)產(chǎn)品總產(chǎn)量超過(guò)10000萬(wàn)噸，禽蛋量約3500萬(wàn)噸，蟬聯(lián)世界總量的首位。另外，根據(jù)國(guó)家近年來(lái)供給側(cè)改革，全國(guó)畜牧規(guī)模及其發(fā)展將極大帶動(dòng)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，因此，全局來(lái)看，我國(guó)畜牧業(yè)的產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；?、標(biāo)準(zhǔn)化的發(fā)展將進(jìn)一步推動(dòng)，我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)在未來(lái)的發(fā)展?jié)摿薮?，空間巨大，意義重大。然而，我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)存在抗生素濫用現(xiàn)象十分嚴(yán)重的現(xiàn)象，近些年國(guó)家已加大國(guó)內(nèi)畜禽養(yǎng)殖業(yè)抗生素濫用的管理工作，國(guó)家農(nóng)業(yè)部分別于2016年和2017年出臺(tái)部分抗生素禁用的公告。同時(shí)，國(guó)內(nèi)乃至全球?qū)o(wú)抗養(yǎng)殖的呼聲越來(lái)越大，不同的抗生素替代物應(yīng)運(yùn)而生，目前科學(xué)家發(fā)現(xiàn)益生菌、中草藥、抗菌肽等的替抗?jié)摿ξ磥?lái)很大，尤其是益生菌和中草藥的配伍產(chǎn)品—微生態(tài)制劑更為發(fā)展迅速?，F(xiàn)在科學(xué)研究證明微生態(tài)制劑不僅能提高藥效、無(wú)毒無(wú)殘留，還能積極補(bǔ)充腸道益生菌利于腸道菌群的修復(fù)和再平衡，兩者藥理互配協(xié)同。

當(dāng)前，微生態(tài)制劑劑型中以發(fā)酵型微生態(tài)制劑產(chǎn)品效果更佳，國(guó)內(nèi)越來(lái)越多的動(dòng)保企業(yè)開(kāi)始加大該類(lèi)制劑的生產(chǎn)和銷(xiāo)售，然而卻存在兩類(lèi)常規(guī)問(wèn)題一直制約著該產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，一是微生態(tài)制劑發(fā)酵速度需要較長(zhǎng)的時(shí)間，截止目前的文獻(xiàn)報(bào)道或企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)情況來(lái)看固體微生態(tài)制劑的發(fā)酵時(shí)間一般為2周至2個(gè)月不等，發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)不僅降低了貨品出貨速率也增加了成本，且隨時(shí)間增長(zhǎng)還會(huì)加大外來(lái)污染菌的污染概率；二是微生態(tài)制劑在發(fā)酵過(guò)程中和貨架期內(nèi)存在雜菌污染的情況，不僅增加管理工作成本還明顯影響產(chǎn)品的質(zhì)量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術(shù)中缺少能耐受茶多酚的茶葉發(fā)酵益生菌菌株而難以制備高效發(fā)酵型茶葉微生態(tài)制劑、微生態(tài)制劑成品貨架期短的難題，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方中草藥微生態(tài)制劑及其基于固態(tài)發(fā)酵的快速生產(chǎn)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種復(fù)方中草藥微生態(tài)制劑基于固態(tài)發(fā)酵的快速生產(chǎn)方法，步驟如下：

（1）、四種發(fā)酵菌株的活化：

糞腸球菌（enterococcusfaecalis）bd-1的活化：將糞腸球菌bd-1試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，然后接種到含太子參須提取物0.2~0.5%的mrs液體培養(yǎng)基中，35~37℃靜止培養(yǎng)42~48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)（即100mlmrs液體培養(yǎng)基含太子參須提取物0.2~0.5g）；糞腸球菌bd-1為新菌株，申請(qǐng)人已將該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：武漢市武昌珞珈山，保藏日期：2017年7月7日；保藏編號(hào)：cctccno：m2017416；

丁酸梭菌（clostridiumbutyricum）rcm-2的活化：將丁酸梭菌rcm-2試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，然后接種到含太子參須提取物0.2~0.5%的mrs液體培養(yǎng)基中，35~37℃靜止培養(yǎng)42~48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)（即100mlmrs液體培養(yǎng)基含太子參須提取物0.2~0.5g）；丁酸梭菌rcm-2為新菌株，申請(qǐng)人已將該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：武漢市武昌珞珈山，保藏日期：2017年6月29日；保藏編號(hào)：cctccnom2017396；

釀酒酵母（saccharomycescerevisiae）的活化：將商品化可食用釀酒酵母粉接種到液體培養(yǎng)基中，30~37℃靜止培養(yǎng)24~32h；釀酒酵母粉的活菌數(shù)≥1.0×10⁸cfu/g；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁40~60%、葡萄糖5~10%、太子參須提取物0.2~0.5%和余量的水，自然ph；其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖和太子參須提取物的百分比以g/ml計(jì)（即100ml液體培養(yǎng)基含麥芽汁40~60ml、葡萄糖5~10g、太子參須提取物0.2~0.5g）；

楊氏梭菌（clostridiumljungdahlii）的活化：將凍存管保藏的楊氏梭菌菌液一次性接種到含太子參須提取物0.2~0.5%的改良mrs液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中果糖等量替代葡萄糖）中，35~37℃靜止培養(yǎng)42~48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)（即100mlmrs液體培養(yǎng)基含太子參須提取物0.2~0.5g）；

（2）、制備糞腸球菌bd-1和丁酸梭菌rcm-2的混合發(fā)酵種子液，計(jì)為種子液a：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液和丁酸梭菌rcm-2的活化液按體積比1∶1~5∶1組成混合活化種子液，再按體積百分比3~5%接種到含太子參須提取物0.2~0.5%的mrs液體培養(yǎng)基中，35~37℃下靜止發(fā)酵36~48h，制得種子液a；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)（即100mlmrs液體培養(yǎng)基含太子參須提取物0.2~0.5g）；

（3）、制備釀酒酵母種子液，計(jì)為種子液b：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得釀酒酵母的活化液按體積百分比5~10%接種到液體培養(yǎng)基中，30~37℃靜止培養(yǎng)30~36h，制得種子液b；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁40~60%、葡萄糖5~10%、太子參須提取物0.2~0.5%和余量的水，自然ph；其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖和太子參須提取物的百分比以g/ml計(jì)；

（4）、制備楊氏梭菌種子液，計(jì)為種子液c：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得楊氏梭菌的活化液按體積百分比3~7%接種到含太子參須提取物0.2~0.5%的改良mrs液體培養(yǎng)基中，35~37℃下靜止發(fā)酵32~36h，制得種子液c；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)（即100mlmrs液體培養(yǎng)基含太子參須提取物0.2~0.5g）；

（5）、種子液a、b、c配比制備發(fā)酵種子液：

將步驟（2）、（3）、（4）所得種子液a、b、c按體積比a∶b∶c=1∶1∶1~5∶4∶3混合成發(fā)酵種子液；

（6）、制備發(fā)酵底物基質(zhì)：

以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述發(fā)酵底物基質(zhì)由下述的組成①或組成②中的原料經(jīng)粉碎后混合而成；

組成①：太子參須20~60份、陳皮10~30份、山楂10~30份、六神曲10~30份、綠茶5~15份、大蒜素0.05~0.1份；

組成②：太子參20~30份、黃芪20~25份、黨參10~15份、板藍(lán)根10~15份、大青葉10~15份、金銀花5~10份、陳皮10~15份、懷山藥10~15份、綠茶5~15份、大蒜素0.05~0.1份；

（7）、發(fā)酵：

將步驟（5）所得發(fā)酵種子液加入步驟（6）所得發(fā)酵底物基質(zhì)內(nèi)，攪拌混勻，裝入發(fā)酵袋并密封，再將發(fā)酵袋在避光條件下于32~37℃發(fā)酵4~7d，制得復(fù)方中草藥微生態(tài)制劑；其中，以體積質(zhì)量百分比l/kg計(jì)，發(fā)酵種子液占發(fā)酵底物基質(zhì)的百分比為25~35%。

本發(fā)明中，太子參須提取物可按現(xiàn)有技術(shù)獲得，比如可參照但不限于申請(qǐng)人于2016年8月30日申請(qǐng)的名稱為“一種太子參須提取物的制備方法”的專利（申請(qǐng)?zhí)?01610758305.8）中公開(kāi)的方法獲得。

有益效果：

1、本發(fā)明中糞腸球菌bd-1分離于柘榮縣下村農(nóng)戶（坐標(biāo)：119^。51′59.7〞e，27^。13′34.0〞n）自養(yǎng)健康成年豬盲腸黏膜層，所得糞腸球菌bd-1安全無(wú)毒，37℃mrs培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h菌落表面光滑凸起，周邊整齊，菌落顏色灰白色，菌落直徑0.5~1.2mm，鏡檢g+，無(wú)芽孢，菌體長(zhǎng)度約0.5~1μm；本發(fā)明丁酸梭菌rcm-2分離于柘榮縣下村農(nóng)戶（坐標(biāo)：119^。52′04.1〞e，27^。13′32.7〞n）自圈山林地養(yǎng)殖的健康成年公雞的盲腸黏膜段，所得丁酸梭菌rcm-2安全無(wú)毒，37℃rcm培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h菌落表面光滑凸起，周邊整齊，菌落顏色乳黃色不透明，略有酸臭味，菌落直徑0.5~1.5cm，鏡檢g+，有芽孢，芽孢卵圓，芽孢端生或次端生，生芽孢的菌體呈梭狀，菌體長(zhǎng)度約3.5~7.0μm；糞腸球菌bd-1和酸梭菌rcm-2具有良好的耐茶多酚和大蒜素的能力，另外，太子參須提取物可顯著促進(jìn)兩個(gè)菌株的生長(zhǎng)；

2、本發(fā)明的發(fā)酵方法中，釀酒酵母能夠首先快速生長(zhǎng)，產(chǎn)生大量co2氣體，使得密封發(fā)酵袋短時(shí)間內(nèi)快速充氣使袋內(nèi)殘留空氣稀釋并不斷經(jīng)單向閥排出，制造co2氣體環(huán)境；然后糞腸球菌bd-1和丁酸梭菌rcm-2能夠協(xié)同發(fā)酵，不斷產(chǎn)酸和h2氣體，使得發(fā)酵袋不斷充氣，且co2氣體與h2氣體混合；隨著基質(zhì)ph開(kāi)始降低，楊氏梭菌不斷生長(zhǎng)，待固體基質(zhì)內(nèi)有機(jī)糖類(lèi)減少時(shí)（其他菌生長(zhǎng)不斷減慢）開(kāi)始不斷加速利于co2與h2氣體產(chǎn)有機(jī)酸和醇，進(jìn)一步減少密封發(fā)酵袋內(nèi)氣體含量，致使發(fā)酵袋不斷吸癟而塑形，成品制劑的外形同物料進(jìn)行吸袋機(jī)吸袋后結(jié)果相同，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)本發(fā)明的方法造成的吸袋效果更優(yōu)，極利于產(chǎn)品的儲(chǔ)存，發(fā)酵成品內(nèi)的有機(jī)酸、次真空和大蒜素還可顯著降低污染，利于運(yùn)輸，延長(zhǎng)貨架期時(shí)間；

3、本發(fā)明提供的方法能夠顯著加速發(fā)酵底物基質(zhì)的發(fā)酵速率，易于發(fā)酵產(chǎn)品的內(nèi)袋塑形，減少發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)間，利于批量化生產(chǎn)，且可降低霉菌污染幾率，適于袋裝固體發(fā)酵作業(yè)的推廣使用。

附圖說(shuō)明

圖1：糞腸球菌bd-1的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

圖2：丁酸梭菌rcm-2的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例中，楊氏梭菌購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心（atcc55380）；所述太子參須提取物按專利申請(qǐng)?zhí)枮閏n201610758305.8中實(shí)施例1公開(kāi)的方法制備而得；各培養(yǎng)基的配方為：

mrs液體培養(yǎng)基(1l)：蛋白胨10g，牛肉粉5g，葡萄糖20g，酵母粉4g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.2g，檸檬酸三銨2g，硫酸錳0.05g，吐溫801ml，純化水1l，ph值6.2±0.2；

改良mrs液體培養(yǎng)基(1l)：與上述mrs液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于，培養(yǎng)基中果糖等量替代葡萄糖；

mrs瓊脂平板或mrs斜面培養(yǎng)基（1l）：蛋白胨10g，牛肉粉5g，葡萄糖20g，酵母粉4g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.2g，檸檬酸三銨2g，硫酸錳0.05g，吐溫801ml，瓊脂15g，純化水1l，ph值6.2±0.2；

rcm瓊脂平板或rcm斜面培養(yǎng)基（1l）：酵母浸膏3g、牛肉浸膏10g、胰蛋白胨10g、葡萄糖5g、可溶性淀粉1g、氯化鈉5g、三水合乙酸鈉3g、半胱氨酸鹽酸鹽0.15g、瓊脂15g，純化水1l，ph值6.8±0.2，滅菌備用；

淀粉培養(yǎng)基（1l）：牛肉膏5g、蛋白胨5g、氯化鈉0.5g、可溶性淀粉20g、瓊脂18g，純化水1l，ph=7.2±0.1，滅菌備用；

其中，含太子參提取物、茶多酚或大蒜素的mrs液體培養(yǎng)基均是指在上述mrs液體培養(yǎng)基配方基礎(chǔ)上，再另外對(duì)應(yīng)添加太子參提取物、茶多酚或大蒜素；含溴甲酚紫指示劑、茶多酚或大蒜素的mrs/rcm瓊脂平板內(nèi)均是指在上述mrs/rcm瓊脂平板配方基礎(chǔ)上，再另外對(duì)應(yīng)添加溴甲酚紫指示劑、茶多酚或大蒜素。

實(shí)施例1--糞腸球菌bd-1的分離與鑒定

1、糞腸球菌bd-1的分離、富集、純化

無(wú)菌操作條件下，取福建省寧德市柘榮縣下村農(nóng)戶（坐標(biāo)：119^。51′59.7〞e，27^。13′34.0〞n）自養(yǎng)健康成年豬盲腸黏膜段，用滅菌的載玻片刮取黏膜黏液于ep管，用無(wú)菌生理鹽水稀釋10²倍，取0.1ml涂布于含溴甲酚紫指示劑(0.01%，g/ml)的mrs瓊脂平板上，涂布后將mrs瓊脂平板放置厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48h，挑選培養(yǎng)基變黃的菌落劃線純化，選取鏡檢革蘭氏染色陽(yáng)性、無(wú)芽孢的菌株于含溴甲酚紫(0.01%，g/ml)、茶多酚（0.01%，g/ml）和大蒜素（0.01%，g/ml）的mrs瓊脂平板上復(fù)篩，最終選取菌落黃色顏色明顯、菌落表面光滑凸起，周邊整齊的作為對(duì)象菌株，菌株命名為bd-1，并以mrs斜面培養(yǎng)基對(duì)菌種進(jìn)行斜面保藏。

2、形態(tài)學(xué)觀察

觀察菌株bd-1的菌落形態(tài)特征，可知：mrs瓊脂平板上菌落表面光滑凸起，周邊整齊，菌落顏色灰白色，菌落直徑0.5~1.2mm，鏡檢g+，無(wú)芽孢，菌體直徑約0.5~1μm。

3、生理生化特征

按乳酸菌的生化鑒定試驗(yàn)對(duì)菌株bd-1進(jìn)行鑒定，分別進(jìn)行了運(yùn)動(dòng)性、氧化酶試驗(yàn)等生化特性鑒定，試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》進(jìn)行綜合判定。結(jié)果見(jiàn)表1。

分離菌株的生理系列化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果表明與產(chǎn)乳酸腸球菌株結(jié)果相符。

4、bd-1菌株的16srdna測(cè)序比對(duì)

利用細(xì)菌基因組dna抽提試劑盒（dp302-02，tiangen）提取菌株bd-1的總dna，以菌株bd-1的總dna為模板，在引物p0(5’-agagtttgatcctggctcag-3’)和pc3(5’-ggttaccttgttacgactt-3’)的引導(dǎo)下pcr擴(kuò)增該菌株的16srdna序列，pcr反應(yīng)體系為：10×buffer5.0μl，dntp(10mmol/l)2.0μl，primer1(20μmol/l)1.0μl，primer2(20μmol/l)1.0μl，模板dna2.5μl，taq酶(5.0u/μl)0.5μl，超純水38μl，總50μl。pcr反應(yīng)條件為：先94℃5min；然后94℃1min，55℃1min，72℃1min，共30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸8min。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，比對(duì)marker獲得目的條帶。用購(gòu)自axygen公司的瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收并純化該目的條帶，送生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行dna序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果見(jiàn)seqidno.1。

將所測(cè)得的序列與genbank中的16srdna序列進(jìn)行blastn相似性分析比較，結(jié)果菌株bd-1與enterococcusfaeciumstrainkci1、enterococcuslactisstraink12419c的16srdna序列的同源性達(dá)到了100％，因此bd-1鑒定為糞腸球菌，其系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)如圖1。

結(jié)合上述形態(tài)學(xué)、生理生化特征和測(cè)序及進(jìn)化樹(shù)結(jié)果，將本發(fā)明菌株bd-1鑒定并分類(lèi)命名為糞腸球菌（enterococcusfaecalis）bd-1。

5、茶多酚對(duì)糞腸球菌bd-1生長(zhǎng)、ph的影響

（1）糞腸球菌bd-1的活化：將糞腸球菌bd-1試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

（2）按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)茶多酚的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.10%、0.25%、0.50%、1.00%，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2結(jié)果可知：本發(fā)明糞腸球菌bd-1可耐受茶多酚的濃度為1.0%，該濃度下菌體存活率為70.26%。

6、大蒜素對(duì)糞腸球菌bd-1生長(zhǎng)、ph的影響

（1）糞腸球菌bd-1的活化：同本實(shí)施例第5項(xiàng)下的步驟（1）；

（2）按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)大蒜素的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.010%、0.025%、0.050%、0.10%，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3；

由表3結(jié)果可知：本發(fā)明糞腸球菌bd-1可耐受大蒜素的濃度為0.1%，該濃度下菌體存活率為70.43%；

（3）糞腸球菌耐受茶多酚及大蒜素生長(zhǎng)對(duì)比：

按接種量3%（體積比）分別將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1（計(jì)為a）的活化液和對(duì)照菌b、c、d的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)①茶多酚的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、1.00%、2.00%，②大蒜素的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.05%、0.1%，連續(xù)培養(yǎng)48h，由0%+0%作為對(duì)照（活菌數(shù)定義為x0），通過(guò)公式：菌體損失率=（x0-x）/x0*100%來(lái)計(jì)算糞腸球菌菌體損失率，結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4結(jié)果可知：在茶多酚（2%）和大蒜素（0.1%）聯(lián)合作用下本發(fā)明糞腸球菌bd-1存活率可達(dá)53.7%，超出50%，遠(yuǎn)高于市場(chǎng)同類(lèi)菌株。

7、糞腸球菌抑菌實(shí)驗(yàn)

（1）糞腸球菌bd-1的活化：同本實(shí)施例第5項(xiàng)下的步驟（1）；

（2）糞腸球菌bd-1在mrs液體培養(yǎng)基中厭氧靜止發(fā)酵：

按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，37℃靜止培養(yǎng)48h，待發(fā)酵終點(diǎn)時(shí)取發(fā)酵液利用牛津杯法檢測(cè)對(duì)金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和大腸埃希氏菌的抑菌效果，以未接種的mrs液體培養(yǎng)基為對(duì)照；

（3）糞腸球菌bd-1在mrs液體培養(yǎng)基中有氧發(fā)酵：

按接種量（體積比）3%將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液接入裝有100mlmrs液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，37℃，150rpm下培養(yǎng)48h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)取發(fā)酵液利用牛津杯法檢測(cè)對(duì)金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和大腸埃希氏菌的抑菌效果，以未接種的mrs液體培養(yǎng)基為對(duì)照。

抑菌圈直徑大小見(jiàn)表5。

由表5結(jié)果可知：本發(fā)明糞腸球菌bd-1可顯著抑制致病菌金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和大腸埃希氏菌的生長(zhǎng)，且厭氧培養(yǎng)物較強(qiáng)于有氧培養(yǎng)物。

實(shí)施例2--丁酸梭菌rcm-2的分離與鑒定

1、丁酸梭菌rcm-2的分離、富集、純化

無(wú)菌操作條件下，取福建省寧德市柘榮縣下村農(nóng)戶（坐標(biāo)：119^。52′04.1〞e，27^。13′32.7〞n）自圈山林地養(yǎng)殖的健康成年公雞的盲腸黏膜段，用滅菌的載玻片刮取黏膜黏液于ep管，用無(wú)菌生理鹽水稀釋10²倍，然后加熱至60℃、30min，取0.1ml涂布于含溴甲酚紫指示劑(0.01%，g/ml)的rcm瓊脂平板上，涂布后將rcm瓊脂平板放置厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48h，挑選培養(yǎng)基變黃的菌落劃線純化，選取鏡檢革蘭氏染色陽(yáng)性、有芽孢的桿狀菌株于含溴甲酚紫(0.01%，g/ml)、茶多酚（0.01%，g/ml）和大蒜素（0.01%，g/ml）的rcm瓊脂平板上復(fù)篩，最后選取菌落周?chē)S色顏色明顯、菌落表面光滑凸起，乳黃色不透明，有酸臭味的作為預(yù)備菌株，然后再將預(yù)備菌株涂布于淀粉培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48h后挑選透明圈最大的作為對(duì)象菌株，菌株命名為rcm-2，并以rcm斜面培養(yǎng)基對(duì)菌種進(jìn)行斜面保藏。

2、形態(tài)學(xué)觀察

觀察菌株rcm-2的菌落形態(tài)特征，可知：rcm瓊脂平板上菌落表面光滑凸起，菌落顏乳黃色不透明，略有酸臭味，菌落直徑0.5~1.5cm，鏡檢g+，有芽孢，芽孢卵圓，芽孢端生或次端生，生芽孢的菌體呈梭狀，菌體長(zhǎng)度約3.5~7.0μm。

3、生理生化特征

參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》對(duì)菌株進(jìn)行生理生化鑒定，分別以接觸酶、淀粉酶、硝酸鹽還原和糖等進(jìn)行生理生化試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。

將其與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》和常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)中丁酸梭菌的生理生化特性進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株rcm-2與丁酸梭菌的生理生化特性基本相符，因此初步鑒定菌株rcm-2為丁酸梭菌。

4、測(cè)序及進(jìn)化樹(shù)

利用細(xì)菌基因組dna抽提試劑盒（dp302-02，tiangen）提取菌株rcm-2的總dna，以菌株rcm-2的總dna為模板，在引物p0(5’-agagtttgatcctggctcag-3’)和pc3(5’-ggttaccttgttacgactt-3’)的引導(dǎo)下pcr擴(kuò)增該菌株的16srdna序列，pcr反應(yīng)體系為：10×buffer5.0μl，dntp(10mmol/l)2.0μl，primer1(20μmol/l)1.0μl，primer2(20μmol/l)1.0μl，模板dna2.5μl，taq酶(5.0u/μl)0.5μl，超純水38μl，總50μl。pcr反應(yīng)條件為：先94℃5min；然后94℃1min，55℃1min，72℃1min，共30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸8min。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，比對(duì)marker獲得目的條帶。用購(gòu)自axygen公司的瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收并純化該目的條帶，送生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行dna序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果見(jiàn)seqidno.2。

將所測(cè)得的序列與genbank中的16srdna序列進(jìn)行blastn相似性分析比較，結(jié)果菌株rcm-2與clostridiumbutyricumstrain1005-15098的16srdna序列的同源性達(dá)到了98％，因此rcm-2鑒定為丁酸梭菌，其系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)如圖2。

結(jié)合上述形態(tài)學(xué)、生理生化特征和測(cè)序及進(jìn)化樹(shù)結(jié)果，將本發(fā)明菌株rcm-2鑒定并分類(lèi)命名為丁酸梭菌（clostridiumbutyricum）rcm-2。

5、茶多酚對(duì)丁酸梭菌rcm-2生長(zhǎng)、ph的影響

（1）丁酸梭菌rcm-2的活化：將丁酸梭菌rcm-2試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

（2）按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得丁酸梭菌rcm-2的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)茶多酚的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.10%、0.25%、0.50%、1.00%，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表7。

由表7結(jié)果可知：本發(fā)明丁酸梭菌rcm-2可耐受茶多酚的濃度為1.0%，該濃度下菌體存活率為87.3%。

6、大蒜素對(duì)丁酸梭菌rcm-2生長(zhǎng)、ph的影響

（1）丁酸梭菌rcm-2的活化：同本實(shí)施例第5項(xiàng)下的步驟（1）；

（2）按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得丁酸梭菌rcm-2的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)大蒜素的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.010%、0.025%、0.050%、0.10%，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表8；

由表8結(jié)果可知：本發(fā)明丁酸梭菌rcm-2可耐受大蒜素的濃度為0.1%，該濃度下菌體存活率為85.5%；

（3）丁酸梭菌耐受茶多酚及大蒜素生長(zhǎng)對(duì)比：

按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得丁酸梭菌rcm-2（計(jì)為a）的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)①茶多酚的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、1.00%、2.00%，②大蒜素的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.05%、0.1%，連續(xù)培養(yǎng)48h，由0%+0%作為對(duì)照（活菌數(shù)定義為x0），通過(guò)公式：菌體損失率=（x0-x）/x0*100%來(lái)計(jì)算丁酸梭菌菌體損失率，結(jié)果見(jiàn)表9。

由表9結(jié)果可知：在茶多酚（1%）和大蒜素（0.05%）聯(lián)合作用下本發(fā)明丁酸梭菌rcm-2存活率可達(dá)88.5%，超出50%，遠(yuǎn)高于市場(chǎng)同類(lèi)菌株。

7、丁酸梭菌抑菌實(shí)驗(yàn)

（1）丁酸梭菌rcm-2的活化：同本實(shí)施例第5項(xiàng)下的步驟（1）；

（2）按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得丁酸梭菌rcm-2的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，37℃靜止培養(yǎng)48h，待發(fā)酵終點(diǎn)時(shí)取發(fā)酵液利用牛津杯法檢測(cè)對(duì)金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和大腸埃希氏菌的抑菌效果，以未接種的mrs液體培養(yǎng)基為對(duì)照；抑菌圈直徑大小見(jiàn)表10。

由表10結(jié)果可知：本發(fā)明丁酸梭菌rcm-2可顯著抑制致病菌金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌和大腸埃希氏菌的生長(zhǎng)。

實(shí)施例3--太子參須提取物對(duì)發(fā)酵菌株的生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)

（1）、四種發(fā)酵菌株的活化：

糞腸球菌bd-1的活化：將糞腸球菌bd-1的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

丁酸梭菌rcm-2的活化：將丁酸梭菌rcm-2的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

釀酒酵母的活化：將商品化可食用釀酒酵母粉接種到液體培養(yǎng)基中，32℃靜止培養(yǎng)32h；釀酒酵母粉的活菌數(shù)≥1.0×10⁸cfu/g；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁45%、葡萄糖6%和余量的水，自然ph，其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖的百分比以g/ml計(jì)；

楊氏梭菌的活化：將凍存管保藏的楊氏梭菌菌液一次性接種到改良mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

（2）促生長(zhǎng)試驗(yàn)：

按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)太子參須提取物的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.10%、0.25%，37℃靜止培養(yǎng)48h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)；

按接種量3%（體積比）將步驟（1）所得丁酸梭菌rcm-2的活化液于厭氧箱中接種至含mrs液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶（頂部外連接有靈敏氣體壓力表裝置）中，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)太子參須提取物的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.10%、0.25%，37℃靜止培養(yǎng)48h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值、活菌數(shù)和終點(diǎn)壓力值；

按接種量5%（體積比）將步驟（1）所得釀酒酵母的活化液接種到含液體培養(yǎng)基的厭氧血清瓶（頂部外連接有靈敏氣體壓力表裝置）中，32℃靜止培養(yǎng)32h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值、活菌數(shù)和終點(diǎn)壓力值；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁45%、葡萄糖6%、太子參須提取物和余量的水，自然ph，其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖和太子參須提取物的百分比以g/ml計(jì)；厭氧血清瓶?jī)?nèi)的液體培養(yǎng)基內(nèi)太子參須提取物的梯度依次設(shè)置為：0%、0.10%、0.25%；

按接種量5%（體積比）將步驟（1）所得楊氏梭菌的活化液接種到改良mrs液體培養(yǎng)基中，其中改良mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)太子參須提取物的梯度依次設(shè)置為（g/ml）：0%、0.10%、0.25%，37℃下靜止發(fā)酵32h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液ph值和活菌數(shù)。

活菌數(shù)結(jié)果見(jiàn)表11，終點(diǎn)壓力增加率結(jié)果見(jiàn)表12。

由表11-12可知：太子參須提取物可顯著促進(jìn)該本發(fā)明糞腸球菌bd-1、丁酸梭菌rcm-2、釀酒酵母和楊氏梭菌的生長(zhǎng)；同時(shí)0.1~0.25%的太子參須提取物不僅顯著rcm-2、釀酒酵母的生長(zhǎng)，還顯著提升rcm-2、釀酒酵母的發(fā)酵產(chǎn)氣能力，因此0.1%~0.25%的太子參須提取物的添加將會(huì)為后期基質(zhì)固體發(fā)酵時(shí)促進(jìn)菌體生長(zhǎng)和迅速產(chǎn)氣進(jìn)而加速密封發(fā)酵袋排氣速率提供可靠技術(shù)參考。

實(shí)施例4--糞腸球菌bd-1和丁酸梭菌rcm-2共生長(zhǎng)

（1）菌株的活化

糞腸球菌bd-1的活化：將糞腸球菌bd-1的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

丁酸梭菌rcm-2的活化：將丁酸梭菌rcm-2的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，洗下培養(yǎng)基表面菌苔，然后接種到mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；

（2）然后將糞腸球菌bd-1的活化液、丁酸梭菌rcm-2的活化液以及兩者按體積比1:1復(fù)合的活化液分別按照接種量3%（體積比）接種于mrs液體培養(yǎng)基的200ml厭氧血清瓶?jī)?nèi)，其中厭氧血清瓶?jī)?nèi)的mrs液體培養(yǎng)基內(nèi)太子參須提取物的梯度依次設(shè)置為（質(zhì)量比）：0%、0.25%，37℃靜止培養(yǎng)48h，待培養(yǎng)終點(diǎn)時(shí)測(cè)定發(fā)酵液活菌數(shù)，另外測(cè)定丁酸梭菌rcm-2的芽孢率；結(jié)果見(jiàn)表13。

由表13可知：太子參須提取物可顯著促進(jìn)糞腸球菌bd-1和丁酸梭菌rcm-2的共生長(zhǎng)，且在同等濃度下對(duì)兩株菌共生促進(jìn)程度大于兩株單菌株數(shù)量之和；另外，0.25%濃度下可分別促進(jìn)rcm-2的芽孢率，共生培養(yǎng)的芽孢率有所進(jìn)一步提高。

實(shí)施例5--安全性試驗(yàn)

（1）、四種發(fā)酵菌株的活化：

糞腸球菌bd-1的活化：將糞腸球菌bd-1的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，然后接種到含太子參須提取物0.25%的的mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)；

丁酸梭菌rcm-2的活化：將丁酸梭菌rcm-2的試管斜面菌種在無(wú)菌環(huán)境下用無(wú)菌生理鹽水沖洗，然后接種到含太子參須提取物0.25%的mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)；

釀酒酵母的活化：將商品化可食用釀酒酵母粉接種到液體培養(yǎng)基中，32℃靜止培養(yǎng)32h；釀酒酵母粉的活菌數(shù)≥1.0×10⁸cfu/g；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁45%、葡萄糖6%、太子參須提取物0.25%和余量的水，自然ph，其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖和太子參須提取物的百分比以g/ml計(jì)；

楊氏梭菌的活化：將凍存管保藏的楊氏梭菌菌液一次性接種到含太子參須提取物0.25%的改良mrs液體培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)48h；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)；

（2）、制備糞腸球菌bd-1和丁酸梭菌rcm-2的混合發(fā)酵種子液，計(jì)為種子液a：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得糞腸球菌bd-1的活化液和丁酸梭菌rcm-2的活化液按體積比1:1組成混合活化種子液，再按體積百分比3%接種到含太子參須提取物0.25%的mrs液體培養(yǎng)基中，37℃下靜止發(fā)酵36h，制得種子液a；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)；

（3）、制備釀酒酵母種子液，計(jì)為種子液b：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得釀酒酵母的活化液按體積百分比8%接種到液體培養(yǎng)基中，32℃靜止培養(yǎng)32h，制得種子液b；液體培養(yǎng)基組成為：麥芽汁45%、葡萄糖6%、太子參須提取物0.25%和余量的水，自然ph，其中，麥芽汁的百分比以體積百分比計(jì)，葡萄糖和太子參須提取物的百分比以g/ml計(jì)；

（4）、制備楊氏梭菌種子液，計(jì)為種子液c：

無(wú)菌環(huán)境下，將步驟（1）所得楊氏梭菌的活化液按體積百分比5%接種到含太子參須提取物0.25%的改良mrs液體培養(yǎng)基中，37℃下靜止發(fā)酵32h，制得種子液c；其中，所述太子參須提取物的百分比以質(zhì)量體積百分比g/ml計(jì)；

（5）、安全性試驗(yàn)

試驗(yàn)動(dòng)物：km種小白鼠，spf級(jí)，體重18~22g，雌雄各半，購(gòu)于重慶市中藥研究所。

試驗(yàn)菌液：以體積比計(jì)，a∶b∶c=1∶1∶1和5∶4∶3兩種濃度的配合發(fā)酵種子液。

試驗(yàn)：選取健康小鼠10只，雌雄各半，平均體重：雌為（21.90±0.5）g，雄為（22.00±0.5）g。小鼠禁食（不禁水）12h后，用試驗(yàn)菌液灌胃給藥，一日3次等量給藥，給藥總劑量為1.5ml。給藥后小鼠正常飼養(yǎng)于清潔級(jí)飼養(yǎng)室，室溫（21±0.5）℃，相對(duì)濕度45%~60%，觀察動(dòng)物的活動(dòng)、皮毛、飲食、糞便有無(wú)異常改變，并觀察有無(wú)中毒癥狀及死亡，連續(xù)觀察三周，結(jié)果見(jiàn)表14。

可知：本發(fā)明發(fā)酵菌株組合物安全無(wú)毒。

實(shí)施例6--微生態(tài)制劑的制備

本發(fā)明微生態(tài)制劑的制備，步驟如下：

步驟（1）-（4）：分別與同實(shí)施例5的步驟（1）-（4）相同；

（5）、種子液a、b、c配比制備發(fā)酵種子液：

將步驟（2）、（3）、（4）所得種子液a、b、c按體積比a∶b∶c=1∶1∶1混合成發(fā)酵種子液；

（6）、制備發(fā)酵底物基質(zhì)：

以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述發(fā)酵底物基質(zhì)由下述原料經(jīng)粉碎后混合而成：太子參須25份、陳皮20份、山楂20份、六神曲20份、綠茶15份、大蒜素0.06份；

（7）、發(fā)酵：

首先將步驟（6）制備的發(fā)酵底物基質(zhì)投料至攪拌設(shè)備內(nèi)（設(shè)備采用實(shí)用新型專利設(shè)備，專利號(hào)：201620053478.5），預(yù)混5min，混合轉(zhuǎn)速為100rpm，將步驟（5）所得發(fā)酵種子液加入添加至設(shè)備內(nèi)，流速為30ml/s，攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為100rpm，保持時(shí)間為20min，其中，以體積質(zhì)量百分比l/kg計(jì)，發(fā)酵種子液占發(fā)酵底物基質(zhì)的百分比計(jì)為35%；攪拌均勻后迅速將混合料先后進(jìn)行稱量和裝袋，發(fā)酵袋采用實(shí)用新型專利袋（專利號(hào)：201620018088.4）內(nèi)，裝袋密封后迅速將袋面鋪平壓袋排出多余空氣，單向閥朝上，并依次擺放在發(fā)酵車(chē)（實(shí)用新型專利，專利號(hào)：201620981592.4）內(nèi)，再推進(jìn)發(fā)酵車(chē)間，發(fā)酵車(chē)間要求恒溫（35℃）和避光，在發(fā)酵車(chē)間內(nèi)發(fā)酵袋將排列堆放后，開(kāi)始發(fā)酵。

對(duì)照微生態(tài)制劑的制備：將市售混合發(fā)酵菌劑（購(gòu)自鄭州歐科拜克生物技術(shù)有限公司，商品名：拜克生；混合發(fā)酵菌劑組成為枯草芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌，總活菌數(shù)≥1.0×10⁹cfu/g）作為對(duì)照菌株，按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)方法活化制備對(duì)照發(fā)酵種子液代替本實(shí)施例的發(fā)酵種子液，再以和本發(fā)明相同發(fā)酵底物基質(zhì)和條件進(jìn)行發(fā)酵。

以發(fā)酵袋開(kāi)始吸袋并塑形時(shí)為發(fā)酵結(jié)束時(shí)間點(diǎn)，然后取樣并分別以總活菌數(shù)、終點(diǎn)ph值、發(fā)酵袋吸袋塑形強(qiáng)度、雜菌污染率為測(cè)驗(yàn)指標(biāo)，隨機(jī)5袋混勻并取樣。其中兩類(lèi)均發(fā)酵30袋，每袋裝量10kg。

結(jié)果見(jiàn)表15。

實(shí)施例7--微生態(tài)制劑的制備

與實(shí)施例6的不同之處在于：步驟（5）中，a∶b∶c=5∶4∶3；步驟（6）中，發(fā)酵底物基質(zhì)組成為：太子參20份、黃芪20份、黨參10份、板藍(lán)根10份、大青葉10份、金銀花5份、陳皮10份、懷山藥10份、綠茶5份、大蒜素0.06份。

結(jié)果見(jiàn)表16。

由表15-16可知：本發(fā)明微生態(tài)制劑具有更短的發(fā)酵周期，將近縮短一半時(shí)間，且到發(fā)酵終點(diǎn)時(shí)本發(fā)明微生態(tài)制劑具有更高的活菌總數(shù)、更低的基質(zhì)ph值、更強(qiáng)的發(fā)酵袋吸袋塑形強(qiáng)度和更低的霉菌污染率。

實(shí)施例8--成品微生態(tài)制劑的應(yīng)用例

（1）實(shí)施例6的本發(fā)明微生態(tài)制劑產(chǎn)品對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

實(shí)驗(yàn)方案：將120只1日齡艾維茵肉雞隨機(jī)分成2組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加0.2wt%（以占基礎(chǔ)日糧的質(zhì)量百分比計(jì)）的實(shí)施例6本發(fā)明微生態(tài)制劑產(chǎn)品，基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型粉狀料，參照nrc(1994年)肉仔雞營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和中國(guó)飼料營(yíng)養(yǎng)成分表配制而成。實(shí)驗(yàn)肉雞采用籠養(yǎng)，每個(gè)重復(fù)單獨(dú)給料，自由采食、飲水，日常管理與免疫程序按常規(guī)進(jìn)行。養(yǎng)殖時(shí)間設(shè)定為6周。于4周末和6周末在早飼前進(jìn)行稱重，分別計(jì)算日增重和料重比，結(jié)果見(jiàn)表17。

（2）實(shí)施例7的本發(fā)明微生態(tài)制劑產(chǎn)品對(duì)對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

實(shí)驗(yàn)方案：將60頭21日齡且體重約20kg的杜長(zhǎng)大三元斷奶仔豬隨機(jī)分成2組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加0.25wt%的實(shí)施例7本發(fā)明微生態(tài)制劑產(chǎn)品，基礎(chǔ)日糧配方：玉米56.00wt%、豆粕30.00wt%、麩皮10.00wt%、預(yù)混料4.00wt%（每千克預(yù)混料含維生素a15000iu、維生素d38000iu、維生素e60iu、vk2.5iu）。試驗(yàn)豬進(jìn)行群飼，充分飼喂，每天4次，自由飲水，試驗(yàn)期40d，管理正常。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定增重及飼料轉(zhuǎn)化率，結(jié)果見(jiàn)表18。

由表17-18可知：相比對(duì)照組，本發(fā)明成品微生態(tài)制劑組可以顯著促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)，并顯著降低料肉比。

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<110>福建貝迪藥業(yè)有限公司

<120>一種復(fù)方中草藥微生態(tài)制劑及其基于固態(tài)發(fā)酵的快速生產(chǎn)方法

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