本發(fā)明涉及一類化合物及其應(yīng)用，具體是n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺及其在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

gurdal等[jenzymeinhibitionandmedchem,2015,30(4):649-654]描述了化合物1對人結(jié)腸癌細胞hct-116、人乳腺癌細胞mcf-7和人肝癌細胞huh-7的抑制活性，其gi50分別為7.9μm、9.2μm和3.1μm，其中，對hct-116和huh-7的抑制活性優(yōu)于陽性對照物5-氟尿嘧啶。abou-seri等[eurjmedchem,2016,107:165-179]描述了化合物2對血管內(nèi)皮生長因子受體-2(vegfr-2)激酶的抑制活性，其ic50為0.40±0.04μm，與陽性對照物瓦他拉尼(ic50＝0.18±0.02μm)接近；細胞活性測試顯示，該化合物對多種癌細胞的gi50低于陽性對照物索拉菲尼。

el-messery和hassan等[eurjmedchem,2012,54:615-625；bioorg&medchemlett,2012,22(20):6318-6323]描述了一系列2-氨基噻唑衍生物3在濃度為10μm條件下對多種癌細胞的體外抑制活性：其中化合物3a對白血病細胞ccrf-cem和sr的抑制率分別為75.5％和51.8％；化合物3b對白血病細胞ccrf-cem的抑制率為69.3％；化合物3c對結(jié)腸癌細胞hct-15和腎癌細胞uo-31的抑制率分別為54.6％和51.4％；化合物對3d對非小細胞肺癌細胞hop-92的抑制率為60.2％；化合物3e對白血病細胞k562、腎癌細胞uo-31和乳腺癌細胞mda-mb-468的抑制率分別為70.7％、54.6％和55.6％。在丙酰胺(即n＝2)衍生物中，化合物3f對白血病細胞ccrf-cem的抑制率為96.2％，化合物3g對腎癌細胞uo-31的抑制率為54.0％，化合物3h對非小細胞肺癌細胞hop-92、對黑色素瘤細胞sk-mel-5、腎癌細胞a498和uo-31的抑制率分別為59.6％、52.5％、67.5％和68.9％；化合物3i對白血病細胞molt-4的抑制率為51.8％，對乳腺癌細胞mda-mb-468的抑制率為62.8％；化合物3j對結(jié)腸癌細胞ht29的抑制率為80.4％，對黑色素瘤細胞sk-mel-5和uacc-62的抑制率分別為76.2％和71.6％。

a:n＝1,r¹＝h,r²＝ch3,r³＝ch3；b:n＝1,r¹＝h,r²＝ch3,r³＝c6h5；c:n＝1,r¹＝c6h5,r²＝h,r³＝c6h5；d:n＝1,r¹＝4-clc6h4,r²＝h,r³＝c6h5；e:n＝1,r¹＝4-brc6h4,r²＝h,r³＝c6h5；f:n＝2,r¹＝ch3,r²＝co2et,r³＝ch3；g:n＝2,r¹＝c6h5,r²＝h,r³＝ch3；h:n＝2,r¹＝c6h5,r²＝h,r³＝c6h5；i:n＝2,r¹＝4-clc6h4,r²＝h,r³＝ch3；j:n＝2,r¹＝4-brc6h4,r²＝h,r³＝ch3

choi等[bioorg&medchemlett,2012,22(16):5297-5302]描述了化合物4對野生型(wild-type)致癌激酶(oncogenickinase)bcr-abl的抑制活性，其ec50為5.21μm。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一類n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺及其用途。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面是提供了一類如結(jié)構(gòu)式ⅰ或ⅱ所示的n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺及其在藥學上可接受的鹽：

i式中r選自：c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴或4-碘；n選自：1、2、3、4或5。

或i式中r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴或4-碘；n選自：1、2、3、4或5。

ⅱ式中r選自：c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴、4-碘或3,4-och2o；y¹選自：氫或羥基；y²選自：氫或c1～c2烷氧基；n選自：1、2、3、4或5。

或ⅱ式中r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴、4-碘或3,4-och2o；y¹選自：氫或羥基；y²選自：氫或c1～c2烷氧基；n選自：1、2、3、4或5。

進一步的，優(yōu)選的化合物選自：n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-哌嗪基乙酰胺、n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪基]乙酰胺或n-(4-叔丁基-5-胡椒基噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙酰胺。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

式中r選自：c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴或4-碘；n選自：1、2、3、4或5。

或r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴或4-碘；n選自：1、2、3、4或5。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面還提供了n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

式中r選自：c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴、4-碘或3,4-och2o；y¹選自：氫或羥基；y²選自：氫或c1～c2烷氧基；n選自：1、2、3、4或5。

或r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴、4-碘或3,4-och2o；y¹選自：氫或羥基；y²選自：氫或c1～c2烷氧基；n選自：1、2、3、4或5。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學上可接受的鹽的藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺及其藥學上可接受的鹽，以及任選的含有藥用載體。其中所述的藥用載體指藥學領(lǐng)域常用的藥用載體；該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽與一種或多種藥學上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑組合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽在其藥物組合物中的含量通常為0.1％～95％重量百分比。

本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆粒或微丸，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物及其藥學上可接受的鹽制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、ph調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；ph調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺(i或ⅱ)及其藥學上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用：

i式中r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴或4-碘；n選自：1、2、3、4或5。

ⅱ式中r選自：氫、c1～c2烷基；r¹選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：氫、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；x選自：4-氟、4-氯、4-溴、4-碘或3,4-och2o；y¹選自：氫或羥基；y²選自：氫或c1～c2烷氧基；n選自：1、2、3、4或5。

有益技術(shù)效果：本發(fā)明的n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

具體實施方式

以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進一步限定。

實施例1

n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-哌嗪基乙酰胺的制備

0.36gn-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]氯乙酰胺和5ml四氫呋喃，常溫攪拌，加入0.24g吡啶和0.37g1-叔丁氧羰基哌嗪；反應(yīng)過夜，減壓脫四氫呋喃，分別用二氯甲烷、飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，加石油醚析出固體，抽濾，石油醚洗，干燥得淡黃色固體n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-(4-叔丁氧羰基哌嗪基)乙酰胺，取0.20g溶于5ml二氯甲烷，加1ml三氟乙酸，常溫攪拌2h，脫溶，加乙酸乙酯，飽和碳酸氫鈉溶液洗至中性，無水硫酸鈉干燥，脫溶，干燥得黃色固體n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-哌嗪基乙酰胺，收率95.2％，m.p.105～107℃；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.36(s，9h，3×ch3)，2.02(s，1h，哌嗪4-h)，2.62(t，j＝4.8hz，4h，ch2nch2)，3.03(t，j＝4.8hz，4h，ch2nhch2)，3.19(s，2h，coch2)，4.21(s，2h，ch2)，7.11(d，j＝8.4hz，2h，c6h42，6-h)，7.25(d，j＝8.4hz，2h，c6h43，5-h)。

實施例2

n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪基]乙酰胺的制備

0.5mmoln-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺和5ml四氫呋喃，常溫攪拌，加入2.5ml1％naoh溶液和1mmol1-(4-羥基苯基)哌嗪，室溫反應(yīng)16h，tlc監(jiān)測。反應(yīng)結(jié)束后，脫溶，加二氯甲烷，稀鹽酸洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，乙醇洗，干燥得淡黃色固體n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪基]乙酰胺，收率60.9％，m.p.175～177℃；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.36(s，9h，3×ch3)，2.60(s，8h，哌嗪環(huán))，3.22(s，2h，coch2)，4.23(s，2h，ch2)，6.70(d，j＝8.0hz，2h，4-hoc6h42,6-h)，6.87(d，j＝8.0hz，2h，4-hoc6h43,5-h)，7.13(d，j＝8.0hz，2h，c6h42,6-h)，7.27(d，j＝8.0hz，2h，c6h43,5-h)；¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ：31.09，32.32，35.93，42.13，50.42，54.05，61.55，115.97，119.37，123.37，124.11，128.95，129.76，132.65，138.78，154.84，163.72，168.80。

實施例3

n-(4-叔丁基-5-胡椒基噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙酰胺的制備

0.55mmoln-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)氯乙酰胺、0.83mmol1-(2-甲氧基苯基)哌嗪和0.8mmol三乙胺溶于10ml四氫呋喃中，室溫攪拌16h，反應(yīng)液用50ml乙酸乙酯稀釋，水洗一次，飽和食鹽水洗一次，無水na2so4干燥，減壓蒸餾脫溶，加入數(shù)滴石油醚，析出固體，抽濾，干燥，得到0.23g白色固體n-(4-叔丁基-5-胡椒基噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙酰胺，收率81％，m.p.103～105℃，¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ1.38(s，9h，3×ch3)，2.81(s，4h，哌嗪環(huán)2,6-h)，3.18(s，4h，哌嗪環(huán)3,5-h)，3.26(s，2h，coch2)，3.87(s，3h，ch3)，4.16(s，2h，ch2)，5.93(s，2h，och2o)，6.62～6.70(m，2h，c6h3)，6.73(d，j＝7.8hz，1h，c6h3)，6.88(d，j＝8.0hz，1h，c6h4)，6.96～7.03(m，3h，c6h4)。¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ30.86，30.93，32.58，35.68，50.48，53.87，55.39，61.26，100.89，108.18，108.82，111.26，118.30，120.99，121.21，123.21，124.28，134.37，140.84，146.12，147.75，152.22，152.46，153.37，168.07。

實施例4

n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性

1.實驗原理

化合物munana是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活性。酶均來自a/pr/8/34(h1n1)病毒毒株。

2.實驗方法

在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶na懸浮于反應(yīng)緩沖液中(ph6.5)，加入熒光底物munana啟動反應(yīng)體系，37℃孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長為450nm的參數(shù)條件下，測定熒光強度值。根據(jù)熒光強度的減少量可以計算化合物對na活性的抑制率。

3.檢測樣品：實施例化合物

4.活性結(jié)果

在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測濃度40.0μg/ml時，n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-哌嗪基乙酰胺、n-[4-叔丁基-5-(4-氯芐基)噻唑-2-基]-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪基]乙酰胺和n-(4-叔丁基-5-胡椒基噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪基]乙酰胺對神經(jīng)氨酸酶的抑制率分別為33％、29％和43％。

n-(5-芳甲基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。