本發(fā)明涉及式(i)化合物作為fgfr4激酶選擇性抑制劑，及其制備方法、藥物組合物以及使用所述化合物和組合物用以抑制激酶活性的方法。
背景技術(shù)：
：成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblastgrowthfactor,fgf)家族包括22個(gè)結(jié)構(gòu)相近的多肽，fgf與受體酪氨酸激酶fgfr1-4(fibroblastgrowthfactorreceptor,fgfr)相互作用使受體發(fā)生同源二聚化和自身磷酸化，然后招募膜相關(guān)蛋白和胞質(zhì)輔助蛋白，激活多重信號級聯(lián)反應(yīng)(lin,b.c.,desnoyers,l.r.fgf19andcancer.adv.exp.med.biol.2012；728:183–94；powers,c.j.等,endocr.relat.cancer,2000,7:165-197)。在正常生理?xiàng)l件下，fgf19是重要的代謝調(diào)節(jié)因子；在病理?xiàng)l件下，fgf19可能與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。目前認(rèn)為fgfr4是fgf19唯一顯示有特異性的受體，fgf19通過與fgfr4結(jié)合并激活fgfr4來發(fā)揮活性。fgfr4作為fgfr家族成員之一，在胚胎發(fā)育、中樞神經(jīng)控制、組織修復(fù)，甚至在腫瘤侵襲和血管生成等過程中均發(fā)揮著重要的作用(ho,h.k.等，journalofhepatology,2009,50:118–127)。研究發(fā)現(xiàn)fgfr4在多種癌癥中均存在過表達(dá)現(xiàn)象，如肝癌(ho,h.k.等,journalofhepatology,2009,50:118–127；sawey,e.t.等,cancercell,2011,19:347-358)、胃癌(ye,y.w.等,cancer,2011,117:5304-5313；ye,y.等,ann.surg.oncol.2010,17:3354-3361)、胰腺癌(leung,h.y.等,int.j.cancer,1994,59:667-675)、腎細(xì)胞癌(takahashi,a.等,biochem.biophys.res.commun.1999,257:855-859)、橫紋肌肉瘤(taylorvi,j.g.等,j.clin.invest.doi:1o.1172/jci39703)、膽管癌(xu,y.-f.等,biochem.biophys.res.commun.2014,446:54-60)、結(jié)腸癌(barderas,r.等,j.proteomics,2012,75:4647-4655；a.,plosone,2012,8(5):e63695)、前列腺癌(xu,b.等,bmccancer2011,11:84)、卵巢癌(zaid,t.m.等,clin.cancerres.2013,19(4):809-820)等。因此，fgf19-fgfr4信號通路在人類多種癌癥的發(fā)生發(fā)展過程中均起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，pd173074為一種fgfr4小分子抑制劑，能夠抑制橫紋肌肉瘤細(xì)胞的生長并具有體內(nèi)抗腫瘤活性(crose,l.e.s.等,clin.cancerres.2012,18(14):1-11)。desnoyers等發(fā)現(xiàn)fgf19單克隆抗體能夠選擇性阻斷fgf19與fgfr4的相互作用，該抗體能抑制人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤生長并能有效防止fgf19轉(zhuǎn)基因小鼠罹患肝癌(desnoyers,l.r.等,oncogene,2008,27:85-97)。sawey等發(fā)現(xiàn)fgf19單克隆抗體能顯著抑制人肝癌移植瘤生長(sawey,e.t.等,cancercell,2011,19,347-358)。ho等發(fā)現(xiàn)fgfr4小分子抑制劑v4-015能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡并抑制癌細(xì)胞遷移(ho,h.k.等,currentmedicinalchemistry,2013,20:1203-1217)。選擇性fgfr4小分子抑制劑blu9931能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖，同時(shí)能夠抑制人肝癌異種移植瘤生長并呈劑量依賴性(hagel,m.等,cancerdiscov.2015,5(4):1-14)。這些研究表明，通過阻斷fgf19與fgfr4的相互作用可以抑制腫瘤生長，這為腫瘤的分子靶向治療提供了有效的靶點(diǎn)。靶向fgfr4的選擇性小分子抑制劑有可能成為多種腫瘤的治療藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及新型fgfr4選擇性小分子抑制劑化合物及其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明也涉及這些化合物單獨(dú)或組合有至少一種其它治療劑及視情況醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的組合物。本發(fā)明又涉及這些化合物單獨(dú)或組合有至少一種其它治療劑在預(yù)防或治療由fgfr4或fgf19介導(dǎo)的疾病中的使用方法。本發(fā)明公開一種式(i)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中，當(dāng)y為氮原子時(shí)，a為芳基，雜芳基，環(huán)烷基，雜環(huán)基或環(huán)烯基；當(dāng)y為碳原子，并且r2為氫時(shí)，a為雜芳基，環(huán)烷基，雜環(huán)基或環(huán)烯基；當(dāng)y為碳原子，并且r2不為氫時(shí)，a為芳基，雜芳基，環(huán)烷基，雜環(huán)基或環(huán)烯基；x為氧原子或者硫原子；r1分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，氨基，酰胺基，羥基，酯基，?；?，酰氧基，磺?；?，亞磺?；?nr9r10，烷基，硅基，烷氧基，芳基，環(huán)烷基，雜芳基或雜環(huán)基；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，硅基，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；榛蛲檠趸?；r9，r10分別獨(dú)立地為氫，?；榛颦h(huán)烷基；m為0，1，2，3或4。本發(fā)明所述的式(i)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括通式(ii)的化合物，其中，a為6至8元芳基，5至8元雜芳基，3至8元環(huán)烷基，3至8元雜環(huán)基或3至8元環(huán)烯基；x為氧原子或者硫原子；r1分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，酰胺基，羥基，酯基，?；Ｑ趸?，磺酰基，亞磺?；?nr9r10，c1-6烷基，硅基，c1-6烷氧基，6至8元芳基，3至8元環(huán)烷基，5至8元雜芳基，3至8元雜環(huán)基；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；?，c1-6烷基或c1-6烷氧基；r9，r10分別獨(dú)立地為氫，?；?，c1-8烷基或3至6元環(huán)烷基；m為0，1，2，3或4。本發(fā)明所述的式(ii)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括通式(iii)的化合物，其中，x為氧原子或者硫原子；r1分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，酰胺基，羥基，酯基，酰基，酰氧基，磺?；?，亞磺?；?，-nr9r10，c1-6烷基，硅基，c1-6烷氧基，6至8元芳基，3至8元環(huán)烷基，5至8元雜芳基或3至8元雜環(huán)基；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；?，c1-6烷基或c1-6烷氧基；r9，r10分別獨(dú)立地為氫，?；?，c1-8烷基或3至6元環(huán)烷基；m為0，1，2，3或4。本發(fā)明所述的式(iii)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括通式(iv)的化合物，其中，x為氧原子或者硫原子；z為氮原子或者碳原子；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；琧1-6烷基或c1-6烷氧基；r11獨(dú)立地為氫，酰基，c1-8烷基或3至6元環(huán)烷基；本發(fā)明所述的式(i)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括通式(v)的化合物，其中，當(dāng)r2為氫時(shí)，a為5至8元雜芳基，3至8元環(huán)烷基，3至8元雜環(huán)基或3至8元環(huán)烯基；當(dāng)r2不為氫時(shí)，a為6至8元芳基，5至8元雜芳基，3至8元環(huán)烷基，3至8元雜環(huán)基或3至8元環(huán)烯基；x為氧原子或者硫原子；r1分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，硅基，酰胺基，羥基，酯基，?；Ｑ趸?，磺酰基，亞磺酰基，-nr9r10，c1-6烷基，c1-6烷氧基，6至8元芳基，3至8元環(huán)烷基，5至8元雜芳基或3至8元雜環(huán)基；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；?，c1-6烷基或c1-6烷氧基；r9，r10分別獨(dú)立地為氫，?；琧1-8烷基或3至6元環(huán)烷基；m為0，1，2，3或4。本發(fā)明所述的式(v)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括通式(vi)的化合物，其中，q為氧原子，碳原子或者氮原子；r2，r3，r4，r5，r6，r7和r8分別獨(dú)立地為氫，鹵素，氰基，羥基，氨基，酰胺基，?；?，c1-6烷基或c1-6烷氧基；q為0，1，2，3或4；r為0，1，2，3或4。本發(fā)明所述的式(i)，(ii)，(iii)，(iv)，(v)，(vi)化合物，其立體異構(gòu)體，互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，其選自下述化合物：本發(fā)明所述化合物，其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或藥學(xué)上可接受的鹽，作為fgfr4激酶選擇性抑制劑，在制備治療由fgfr4或fgf19介導(dǎo)疾病的藥物或藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的藥物或藥物組合物，其用于各種癌癥的治療。本發(fā)明所述，治療的各種癌癥包括：肝癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、肉瘤、膽管癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌。發(fā)明詳述術(shù)語“氫”在本文中是指-h。術(shù)語“鹵素”在本文中是指-f、-cl、-br和-i。術(shù)語“氟”在本文中是指-f。術(shù)語“氯”在本文中是指-cl。術(shù)語“溴”在本文中是指-br。術(shù)語“碘”在本文中是指-i。術(shù)語“氰基”在本文中是指-cn。術(shù)語“氨基”在本文中是指-nh2。術(shù)語“羥基”在本文中是指-oh。術(shù)語“芳基”在本文中是指6至10元全碳單環(huán)或稠合多環(huán)(即共享相鄰碳原子對的環(huán))基團(tuán)，具有共軛的π電子體系的多環(huán)(即帶有相鄰碳原子對的環(huán))基團(tuán)。芳基可以在產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任意碳原子上與所定義的化學(xué)結(jié)構(gòu)共價(jià)連接。本文所述芳基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、?；Ⅴ０坊?、酯基、胺基、磺?；?、亞磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、炔基和環(huán)烷氧基。術(shù)語“雜芳基”在本文中是指由5至10個(gè)原子所組成的并且含有至少一個(gè)選自n、o或s等雜原子的芳香族基團(tuán)。該術(shù)語可以具有單個(gè)環(huán)(非限制性實(shí)例包括呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、惡唑、噻唑等)或多個(gè)稠環(huán)(非限制性實(shí)例包括苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、異吲哚等)，其中稠環(huán)可以是或者可以不是包含雜原子的芳香族基團(tuán)，假定連接點(diǎn)是通過芳族雜芳基基團(tuán)的原子。本文所述雜芳基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基、烷氧基、?；ⅤＱ趸?、酰胺基、酯基、胺基、磺?；?、亞磺酰基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、炔基和環(huán)烷氧基。術(shù)語“環(huán)烷基”在本文中是指具有3至10個(gè)碳原子，具有單環(huán)或多環(huán)(包括稠環(huán)、橋環(huán)及螺環(huán)系統(tǒng))的環(huán)狀烷基。環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。本文所述環(huán)烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、氧代、烷氧基、?；ⅤＱ趸?、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、烯氧基、炔基、環(huán)烷氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“雜環(huán)烷基”在本文中是指至少含有一個(gè)選自o、n和s等雜原子且任選含有一條或多條雙鍵或三鍵的非芳族環(huán)烷基。雜環(huán)烷基作為整體可以具有3至10個(gè)環(huán)原子。雜環(huán)烷基可以在產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任意雜原子或碳原子上與所定義的化學(xué)結(jié)構(gòu)共價(jià)連接。雜環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括：吡咯啉基、哌啶基、哌嗪基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、嗎啉基、吡喃基等。雜環(huán)烷基上的一個(gè)或多個(gè)n或s原子可以被氧化(例如嗎啉n-氧化物、硫嗎啉s-氧化物、硫嗎啉s，s-二氧化物)。雜環(huán)烷基還可以含有一個(gè)或多個(gè)氧代基團(tuán)，如鄰苯二酰亞氨基、哌啶酮基、惡唑烷酮基、2,4(1h,3h)-二氧代-嘧啶基、吡啶-2(1h)-酮基等。本文所述雜環(huán)烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、氧代、?；?、酰氧基、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、烯氧基、炔基、環(huán)烷氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“烯基”在本文中是指具有2至8個(gè)碳原子并且具有至少一個(gè)烯基不飽和位點(diǎn)的烯基基團(tuán)。烯基的非限制性實(shí)例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基等。本文所述烯基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、氧代、?；ⅤＱ趸?、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、烯氧基、炔基、炔氧基、環(huán)烷氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“烯氧基”在本文中是指烯基-o-，其中所述烯基如本文中所定義。術(shù)語“炔基”在本文中是指具有2至8個(gè)碳原子并且具有至少一個(gè)炔基不飽和位點(diǎn)的炔基基團(tuán)。炔基的非限制性實(shí)例包括乙炔基、炔丙基等。本文所述炔基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、氧代、?；?、酰氧基、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、烯氧基、炔基、炔氧基、環(huán)烷氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“環(huán)烯基”在本文中是指具有3至10個(gè)碳原子的非芳香族環(huán)烷基基團(tuán)，其具有單個(gè)或多個(gè)環(huán)狀的環(huán)(包括稠合、橋連的環(huán)系統(tǒng)和螺環(huán)系統(tǒng))并且具有至少一個(gè)碳碳雙鍵的不飽和環(huán)。環(huán)烯基的非限制性實(shí)例包括環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)辛烯基等。本文所述環(huán)烯基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、氧代、?；?、酰氧基、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、環(huán)烷氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“烷基”在本文中是指具有1至10個(gè)碳原子的飽和脂肪族烴基基團(tuán)，該術(shù)語包括直鏈和支鏈烴基。烷基的非限制性實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基等。本文所述烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基所取代：氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、羥基、羧基、氨基、烷基、烷氧基、?；?、酰氧基、氧代、酰胺基、酯基、胺基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、烯基、烯氧基、炔基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)烷基氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳基或雜芳基。術(shù)語“烷氧基”在本文中是指烷基基團(tuán)通過氧原子與分子其余部分相連(-o-烷基)，其中所述烷基如本文中所定義。烷氧基的非限制性實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基等。術(shù)語“酰胺基”在本文中是指-nr30-c(o)-烷基、-nr30-c(o)-環(huán)烷基、-nr30-c(o)-環(huán)烯基、-nr30-c(o)-芳基、-nr30-c(o)-雜芳基和-nr30-c(o)-雜環(huán)烷基，其中r30為氫、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基和烷基。其中所述氫、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基和烷基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“酰基”在本文中是指h-c(o)-、r31r32n-c(o)-、烷基-c(o)-、環(huán)烷基-c(o)-、環(huán)烯基-c(o)-、雜環(huán)烷基-c(o)-、芳基-c(o)-和雜芳基-c(o)-，其中所述r31和r32分別獨(dú)立地選自氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺酰基、亞磺?；?、環(huán)烯基、酰基或環(huán)烷基。其中所述氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺?；?、亞磺?；?、環(huán)烯基、酰基和環(huán)烷基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“磺?；痹诒疚闹惺侵竢33r34n-s(o)2-、環(huán)烷基-s(o)2-、環(huán)烯基-s(o)2-、芳基-s(o)2-、雜芳基-s(o)2-、雜環(huán)烷基-s(o)2-和烷基-s(o)2-，其中所述r33和r34分別獨(dú)立地選自氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺?；?、亞磺?；?、環(huán)烯基、酰基或環(huán)烷基。其中所述氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺?；喕酋；?、環(huán)烯基、?；铜h(huán)烷基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“亞磺?；痹诒疚闹惺侵竢35r36n-s(o)-、環(huán)烷基-s(o)-、環(huán)烯基-s(o)-、芳基-s(o)-、雜芳基-s(o)-、雜環(huán)烷基-s(o)-或烷基-s(o)-，其中所述r35和r36分別獨(dú)立地選自氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺?；?、亞磺?；?、環(huán)烯基、?；颦h(huán)烷基。其中所述氫、羥基、烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、磺?；?、亞磺酰基、環(huán)烯基、?；铜h(huán)烷基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“酰氧基”在本文中是指-o-c(o)-烷基、-o-c(o)-環(huán)烷基、-o-c(o)-環(huán)烯基、-o-c(o)-芳基、-o-c(o)-雜芳基和-o-c(o)-雜環(huán)烷基，其中所述烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)烷基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“酯基”在本文中是指烷基-o-c(o)-、環(huán)烷基-o-c(o)-、環(huán)烯基-o-c(o)-、雜環(huán)烷基-o-c(o)-、芳基-o-c(o)-和雜芳基-o-c(o)-，其中所述烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基等基團(tuán)如本文中所定義。術(shù)語“任選”或“任選地”是指隨后描述的事件或情形可以但不一定出現(xiàn)，并且該描述包括其中所述事件或情形出現(xiàn)的情況以及其中它不出現(xiàn)的情況。術(shù)語“任選被……所取代”是指所述結(jié)構(gòu)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明所述的取代基取代。術(shù)語“取代”在本文中是指任何基團(tuán)由指定取代基單取代或多取代至這種單取代或多取代(包括在相同部分的多重取代)在化學(xué)上允許的程度，每個(gè)取代基可以位于該基團(tuán)上任何可利用的位置，且可以通過所述取代基上任何可利用的原子連接?！叭魏慰衫玫奈恢谩笔侵竿ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法或本文教導(dǎo)的方法可化學(xué)得到，并且不產(chǎn)生過度不穩(wěn)定的分子的所述基團(tuán)上的任何位置。當(dāng)在任何基團(tuán)上有兩個(gè)或多個(gè)取代基時(shí)，每個(gè)取代基獨(dú)立于任何其它取代基而定義，因此可以是相同或不同的。在本說明書的各個(gè)位置，本發(fā)明化合物的取代基以基團(tuán)或范圍的形式進(jìn)行公開。這具體意味著本發(fā)明包括這樣的基團(tuán)和范圍的每個(gè)成員或成員中的每個(gè)個(gè)體的亞組合。如術(shù)語“c1-6烷基”具體意味著單獨(dú)公開了甲基、乙基、c3烷基、c4烷基、c5烷基和c6烷基。術(shù)語“本發(fā)明化合物”(除非另有具體指明)在本文中是指式(i)化合物及其所有純的和混合的立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑合物、前藥及同位素標(biāo)記的化合物和任何藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明化合物的溶劑合物是指與化學(xué)計(jì)量和非化學(xué)計(jì)量的溶劑結(jié)合的化合物或其鹽，如水合物、乙醇合物、甲醇合物等?；衔镆部梢砸环N或多種結(jié)晶狀態(tài)存在，即作為共晶體、多晶型物，或其可以無定形固體存在。所有此種形式均被權(quán)利要求所涵蓋。術(shù)語“藥學(xué)上可接受”表示物質(zhì)或組合物在化學(xué)上和/或毒理學(xué)上必須與構(gòu)成制劑的其它成分和/或用其治療的哺乳動(dòng)物相容。術(shù)語“立體異構(gòu)體”在本文中是指具有一個(gè)或多個(gè)立體中心的手性不同的化合物，包括對應(yīng)異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。術(shù)語“互變異構(gòu)體”在本文中是指具有不同能量的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)提可以越過低能壘，從而互相轉(zhuǎn)化。諸如質(zhì)子互變異構(gòu)體包括通過質(zhì)子遷移進(jìn)行互變，如烯醇-酮互變異構(gòu)體和亞胺-烯胺互變異構(gòu)體，或者含有連接到環(huán)-nh-部分和環(huán)＝n-部分的環(huán)原子的雜芳基基團(tuán)的互變異構(gòu)形式，如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑和四唑。化合價(jià)互變異構(gòu)體包括一些成鍵電子重組而進(jìn)行互變。術(shù)語“前藥”在本文中是指在對受試者給藥時(shí)，能夠直接或間接地提供本發(fā)明的化合物、其活性代謝物或殘基的本發(fā)明化合物的任何衍生物。尤其優(yōu)選的是那些能增加本發(fā)明化合物生物利用度、提高代謝穩(wěn)定性及組織靶向性的衍生物或前藥。本發(fā)明化合物可以以鹽的形式被使用，如從無機(jī)酸或有機(jī)酸衍生得到的“醫(yī)藥上可接受的鹽”。這些包括但并不限于下列所述：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、氫氯化物、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、鹽酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、果膠酯酸鹽、硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽和癸酸鹽。另外，堿性含氮基團(tuán)可以與以下試劑發(fā)生季銨化反應(yīng)生成季銨鹽：如低碳烷基鹵化物，包括甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；如二烷基硫酸鹽，包括二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸鹽；如長鏈鹵化物，包括癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；如芳烷基鹵化物，如苯甲基和苯乙基的溴化物等。與羥基、氨基、巰基、羧基等相關(guān)的保護(hù)基，是指將羥基、氨基、巰基、羧基等通過官能團(tuán)保護(hù)，避免其發(fā)生不期望的反應(yīng)，而且所用的保護(hù)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，如在protectivegroupsinorganicsynthesis(johnwiley&sons，newyork，第三版，1999)中提及的那些保護(hù)基。本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物，即與上述所公開的結(jié)構(gòu)相同，但該結(jié)構(gòu)中一個(gè)或多個(gè)原子被與其具有相同質(zhì)子數(shù)但不同中子數(shù)的原子所替代。結(jié)合本發(fā)明化合物的同位素實(shí)施例包括氫、碳、氮、氧、硫、氟、氯、碘的同位素，分別如2h、3h、13c、14c、15n、18o、17o、35s、18f、36cl和131i等。本發(fā)明的化合物，其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或醫(yī)藥上可接受的鹽，以及含有上述同位素和/或其他原子同位素的所述以上形式的化合物，均在本發(fā)明范圍內(nèi)。某些同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物，如被3h或14c所標(biāo)記的那些化合物可以用于藥物組織分布試驗(yàn)中，因此，這些3h或14c同位素由于其容易制備和檢測是特別優(yōu)選的。此外，被較重的同位素如2h所替代的某些本發(fā)明化合物由于具有更好的代謝穩(wěn)定性而具有某些治療優(yōu)勢，如可以增加體內(nèi)半衰期和較少劑量等，因此，2h在某些情況下也是優(yōu)選的。本發(fā)明化合物具有fgfr4選擇性抑制作用，可用于制備應(yīng)用于人類或獸醫(yī)的藥物或藥物組合物，用于治療fgfr4或fgf19介導(dǎo)的疾病例如癌癥等相關(guān)疾病。具體地，所述化合物可以用于治療人類或動(dòng)物的癌癥，包括肝癌、胃癌、胰腺癌、腎細(xì)胞癌、肉瘤、膽管癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等。具體實(shí)施方式貫穿本申請，本文提及本發(fā)明的化合物和方法的多個(gè)實(shí)施例。所述的多個(gè)實(shí)施例旨在提供多個(gè)說明性實(shí)例，不應(yīng)將其解釋為替代物的描述。同時(shí)應(yīng)注意，本文中所論述的實(shí)施例(包括各種方法和參數(shù))僅為了說明本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。。為描述本發(fā)明，以下列出了具體實(shí)施例。但需要理解，本發(fā)明不限于這些實(shí)施例，以下實(shí)施例只是提供實(shí)踐本發(fā)明的方法，并不以任何方式限制本發(fā)明的范疇。本發(fā)明化合物按照以下的制備方案進(jìn)行制備：首先市售化工品x1和單取代胺在一定條件下進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到化合物x2，化合物x2與化合物x3進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到化合物x4，化合物x4進(jìn)一步與異氰酸酯x5反應(yīng)得到通式化合物x6，化合物x6經(jīng)過硝基還原得到化合物x7，該化合物與丙烯酰氯發(fā)生酰化反應(yīng)，得到化合物i。本發(fā)明提供的化合物可以通過本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)合成方法來制備，本說明書提供了制備本發(fā)明化合物的一般方法。起始原料通?？赏ㄟ^商業(yè)化獲得，例如通過alfatci、韶遠(yuǎn)化學(xué)、安耐吉化學(xué)、愛斯特(成都)生物制藥和成都貝斯特試劑等公司購買得到，或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法進(jìn)行制備。下述反應(yīng)方法及合成步驟提供了用于合成本發(fā)明化合物以及關(guān)鍵中間體的可能途徑。關(guān)于個(gè)別反應(yīng)步驟的更詳細(xì)說明，參見下述實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明化合物也可以通過其它的合成途徑獲得。雖然下文反應(yīng)流程中使用了特定的起始原料和試劑，但是這些起始原料和試劑可以被其它類似的起始原料或試劑所取代，以提供各種衍生物。此外，在本說明書的指導(dǎo)下，通過下述方法制得的許多化合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)化學(xué)方法進(jìn)行進(jìn)一步修飾。在本發(fā)明化合物的制備中，可能需要保護(hù)中間體的某些干擾官能團(tuán)(例如，伯胺或仲胺)。對于此類保護(hù)基的要求視具體官能團(tuán)的性質(zhì)及制備方法的條件而改變。適當(dāng)?shù)陌被Ｗo(hù)基包括乙?；?、三氟乙?；⑹宥⊙豸驶?boc)、芐氧羰基(cbz)、9-芴亞甲氧羰基(fmoc)等。適當(dāng)?shù)牧u基保護(hù)基包括烯丙基、乙?；?、硅烷基、苯甲基、三苯甲基、對甲氧基苯甲基等。對于此類保護(hù)基可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地決定(具體可參考protectivegroupsinorganicsynthesis，johnwiley&sons，newyork，第三版，1999)。下文通過實(shí)施例與制備進(jìn)一步解釋并列舉本發(fā)明化合物及相應(yīng)的制備方法。應(yīng)了解，盡管具體實(shí)施例中給出了典型或優(yōu)選的反應(yīng)條件(如反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、反應(yīng)溶劑以及壓力等)，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以使用其它反應(yīng)條件。最佳反應(yīng)條件可隨所用的特定反應(yīng)底物或溶劑而發(fā)生改變，但所述條件可由所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化而確定。下述實(shí)施例化合物的結(jié)構(gòu)通過核磁共振(nmr)和/或質(zhì)譜(ms)來表征。使用brukerascend400mhznmr波譜儀，將化合物溶于適當(dāng)?shù)碾噭┲?，環(huán)境溫度下以tms為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行1h-nmr分析。nmr化學(xué)位移(δ)以ppm為單位，并使用以下簡稱：s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；brs，寬單峰。ms通過watersuplc-vevotmtqms質(zhì)譜儀(esi)測定。反應(yīng)起始原料、中間體以及實(shí)施例化合物可以通過沉淀、過濾、結(jié)晶、蒸發(fā)、蒸餾以及色譜法(如柱層析法、tlc分離純化等)等常規(guī)技術(shù)進(jìn)行分離與純化。tlc使用煙臺(tái)黃海hsgf254薄層層析硅膠板(0.2±0.03mm)，tlc分離純化使用煙臺(tái)黃海hsgf254薄層層析厚制備板(0.9～1mm)，均購自青島海洋化工廠。柱層析以煙臺(tái)黃海300～400目硅膠為載體，購自青島海洋化工廠。試驗(yàn)中使用的商品化溶劑及試劑如無特殊說明，購買后均無需進(jìn)一步純化或處理直接使用。參考其它實(shí)施例或合成方法時(shí)，反應(yīng)條件(反應(yīng)溫度、反應(yīng)溶劑、反應(yīng)物摩爾比或/和反應(yīng)持續(xù)時(shí)間)可能不同。一般而言，可通過tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，據(jù)此選擇合適的時(shí)間終止反應(yīng)并進(jìn)行后處理?；衔锏募兓瘲l件也可能發(fā)生變化，一般而言，依據(jù)tlc的rf值選擇合適柱層析洗脫劑，或通過制備tlc分離純化相應(yīng)化合物。實(shí)施例1本發(fā)明化合物1按照以下的方案實(shí)施制備：將1b(300mg,2.00mmol)溶于無水thf(60ml)中，冰浴下攪拌；分批緩慢加入1a(641mg,2.00mmol)，升溫至室溫繼續(xù)反應(yīng)30min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，旋蒸除掉大部分溶劑，將殘余物中加入30ml水，室溫下繼續(xù)攪拌10min，析出固體過濾，用少量冰水洗滌固體。收集固體，真空干燥，得1c產(chǎn)品625mg。收率72％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.46(s,1h),7.64(s,1h),7.44–7.29(m,1h),7.24(s,1h),6.80–6.54(m,2h),3.38–3.25(m,4h),2.75–2.64(m,4h),2.58(q,7.1hz,2h),1.53(s,9h),1.20(t,j＝7.2hz,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,434.24。將1c(620mg,1.43mmol)、甲胺鹽酸鹽(193mg,2.86mmol)、dipea(0.71ml,4.29mmol)依次加入無水乙醇(40ml)中，n2條件下80℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，停止反應(yīng)并冷卻至室溫。旋干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，ea萃取水層3次，合并有機(jī)層，水洗，干燥，除溶劑，粗品柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得到產(chǎn)品，真空干燥，得到1d產(chǎn)品398mg，收率65％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.20(s,1h),7.50(s,1h),7.24–6.97(m,2h),6.66(d,j＝6.7hz,1h),5.67(s,1h),3.32–3.20(m,4h),2.95(d,j＝16.4hz,3h),2.67–2.52(m,4h),2.49(q,j＝7.2hz,2h),1.51(s,9h),1.15(t,j＝7.2hz,3h).將1d(370mg,0.86mmol),1e(214mg,0.86mmol),溶解于甲苯(15ml)中，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝85:1)。得目標(biāo)化合物1f產(chǎn)品238mg，收率41％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.49(s,1h),8.51(s,1h),7.32(s,1h),7.26–7.16(m,1h),7.07(s,1h),6.78–6.50(m,2h),6.41(s,1h),3.95(s,6h),3.65–3.27(m,4h),2.95(s,3h),2.65–2.35(m,6h),1.53(s,9h),1.14(t,j＝7.1hz,3h).將1f(200mg,0.296mmol)溶解于dcm(20ml)中，于冰浴條件下攪拌，加入tfa(4ml)，緩慢升至室溫?cái)嚢?h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干溶劑，殘余物加入飽和碳酸鈉水溶液，ea萃取，合并ea層，水洗，無水硫酸鈉干燥。旋蒸除溶劑，得到目標(biāo)化合物1g產(chǎn)品120mg，收率71％。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將1g(110mg,0.19mmol)溶解于dcm(10ml)中，加入dipea(38μl,0.229mmol)，于冰浴條件下攪拌，緩慢加入丙烯酰氯(21μl)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。反應(yīng)液水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，旋蒸除溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝60:1)。得目標(biāo)化合物1共計(jì)72mg，收率61％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.11–11.55(m,1h),8.48(s,1h),7.91–7.47(m,2h),7.32(d,j＝8.9hz,1h),7.02–6.82(m,1h),6.58–6.37(m,3h),6.26–6.20(m,1h),5.79(d,j＝10.2hz,1h),3.94(s,6h),3.50(s,3h),3.27–2.96(m,4h),2.65–2.40(m,6h),1.14(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z[m+h]+,630.32。實(shí)施例2將2b(496mg,3.33mmol)溶于無水thf(60ml)中，冰浴下攪拌；分批緩慢加入2a(360mg,3.33mmol)，升溫至室溫繼續(xù)反應(yīng)30min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，旋蒸除掉大部分溶劑，將殘余物中加入30ml水，室溫下繼續(xù)攪拌10min，析出固體過濾，用少量冰水洗滌固體。收集固體，真空干燥，得2c產(chǎn)物583mg。收率79％。將2c(570mg,2.57mmol)、甲胺鹽酸鹽(347mg,5.12mmol)、dipea(1.34ml,7.71mmol)依次加入無水乙醇(40ml)中，n2條件下80℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，停止反應(yīng)并冷卻至室溫。旋干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，乙酸乙酯萃取水層3次，合并有機(jī)層，水洗，干燥，除溶劑，粗品柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得到產(chǎn)品，真空干燥。得到2d產(chǎn)物339mg，收率61％。將2d(330mg,1.53mmol)溶于混合溶液中(thf:h2o＝1:1)20ml，加入碳酸氫鈉(193mg,2.30mmol)，攪拌5分鐘，接著加入氯甲酸芐酯(215μl,1.53mmol)室溫?cái)嚢?2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干除去大部分thf，殘余物加入適量水溶液，ea萃取三次，水洗2次，ea層旋干，柱層析(純dcm)，得2e產(chǎn)品381mg。收率71％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07(s,1h),7.99–7.63(m,2h),7.47–7.30(m,6h),7.28–7.05(m,2h),6.22(s,1h),5.50(s,1h),5.20(s,2h),2.93–2.83(m,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,351.1。將2e(370mg,1.06mmol),2f(263mg,1.06mmol),溶解于甲苯(15ml)中，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝85:1)。得目標(biāo)化合物2g共計(jì)222mg，收率35％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.23–11.45(m,1h),8.49(s,1h),7.81–7.45(m,3h),7.44–7.32(m,5h),7.13–6.85(m,2h),6.55(s,1h),5.22(s,2h),3.94(s,6h),3.49(s,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,598.0。將2g(210mg,0.351mmol)溶解于meoh(20ml)中，于室溫條件下攪拌，加入pd/c80mg，通入氫氣，持續(xù)攪拌6h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。過濾固體催化劑，旋干溶劑，得到目標(biāo)化合物2h130mg，收率80％。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將2h(130mg,0.281mmol)溶解于dcm(10ml)中，加入dipea(59μl,0.337mmol)，于冰浴條件下攪拌，緩慢加入丙烯酰氯(23μl)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。反應(yīng)液水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，旋蒸除溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝60:1)。得目標(biāo)化合物2產(chǎn)物87mg，收率60％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.77(s,1h),8.47(s,1h),8.24(s,1h),7.76(s,1h),7.58(s,1h),7.35(s,1h),7.18-7.00(m,2h),6.51(s,1h),6.47-6.43(m,1h),6.27-6.20(m,1h),5.78(d,j＝10.3hz,1h),3.91(s,6h),3.49(s,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,517.92。實(shí)施例3本發(fā)明化合物3按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物3，esi-msm/z：617.2[m+h]+。實(shí)施例4本發(fā)明化合物4按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物4，esi-msm/z：630.3[m+h]+。實(shí)施例5本發(fā)明化合物5按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物5，esi-msm/z：629.5[m+h]+。實(shí)施例6本發(fā)明化合物6按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物6，esi-msm/z：631.4[m+h]+。實(shí)施例7本發(fā)明化合物7按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物7，esi-msm/z：645.2[m+h]+。實(shí)施例8本發(fā)明化合物8按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物8，esi-msm/z：631.3[m+h]+。實(shí)施例9本發(fā)明化合物9按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，，制備得到化合物9，esi-msm/z：533.4[m+h]+。實(shí)施例1050ml圓底燒瓶中加入10a(200mg，1.38mmol)，10b(420mg，2.08mmol)，乙醇(20ml)，dipea(362μl，2.08mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下在60℃油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)液旋干，加入二氯甲烷，抽濾，收集濾液，旋干后得到的殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇50:1)純化得白色固體10c(328mg，產(chǎn)率76.6％)。50ml圓底燒瓶中加入10c(150mg，0.483mmol)，10d(144mg，0.580mmol)，甲苯(20ml)，tea(67μl，0.483mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下在100℃油浴中反應(yīng)8h，反應(yīng)液抽濾，收集濾液，旋干，得到的殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇100:1)純化得白色固體10e(97mg，產(chǎn)率36.0％)。50ml圓底燒瓶中加入10e(97mg，0.174mmol)，三氟乙酸(1ml)，二氯甲烷(2ml)，室溫下攪拌反應(yīng)4h，反應(yīng)液旋干，殘?jiān)屑尤腼柡吞妓徕c和乙酸乙酯，萃取分層，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，旋干得到10f。10f溶于二氯甲烷(10ml)，置于冰浴中攪拌，加入dipea(33μl，0.187mmol)，滴加丙烯酰氯(15μl，0.187mmol)，反應(yīng)1h，反應(yīng)液旋干，加入飽和碳酸鈉和乙酸乙酯，萃取分層，收集有機(jī)相，飽和碳酸鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干得到的殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇50:1)純化得白色固體化合物10(37mg，產(chǎn)率41.5％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.11(s,1h),8.44–8.29(m,1h),6.57–6.49(m,1h),6.48–6.24(m,2h),6.24–5.99(m,2h),5.66(d,j＝10.2hz,1h),4.88–4.68(m,2h),4.24–4.05(m,2h),3.92(s,6h),3.82–3.61(m,2h),3.56–3.43(m,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,512.01。實(shí)施例11本發(fā)明化合物11按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物11，esi-msm/z：549.4[m+h]+。實(shí)施例12本發(fā)明化合物12按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物12，esi-msm/z：533.1[m+h]+。實(shí)施例13本發(fā)明化合物13按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物13，esi-msm/z：526.1[m+h]+。實(shí)施例14本發(fā)明化合物14按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物14，esi-msm/z：512.1[m+h]+。實(shí)施例15本發(fā)明化合物15按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物15，esi-msm/z：524.2[m+h]+。實(shí)施例16本發(fā)明化合物16按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物16，esi-msm/z：527.1[m+h]+。實(shí)施例17本發(fā)明化合物17按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物17，esi-msm/z：550.1[m+h]+。實(shí)施例18本發(fā)明化合物18按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物18，esi-msm/z：534.2[m+h]+。實(shí)施例19本發(fā)明化合物19按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物19，esi-msm/z：647.3[m+h]+。實(shí)施例20本發(fā)明化合物20按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物20，esi-msm/z：646.2[m+h]+。實(shí)施例21本發(fā)明化合物21按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物21，esi-msm/z：535.3[m+h]+。實(shí)施例22本發(fā)明化合物22按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物22，esi-msm/z：534.2[m+h]+。實(shí)施例23本發(fā)明化合物23按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物23，esi-msm/z：529.1[m+h]+。實(shí)施例24本發(fā)明化合物24按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物24，esi-msm/z：528.2[m+h]+。實(shí)施例25本發(fā)明化合物25按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物25，esi-msm/z：543.3[m+h]+。實(shí)施例26本發(fā)明化合物26按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物26，esi-msm/z：542.1[m+h]+。實(shí)施例27本發(fā)明化合物27按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物27，esi-msm/z：556.2[m+h]+。實(shí)施例2850ml圓底燒瓶中加入28a(210mg，0.810mmol)，28b(241mg，0.971mmol)，甲苯(30ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下在100℃油浴中反應(yīng)4h，冷至室溫，反應(yīng)液抽濾，甲苯洗滌，收集濾餅，干燥得黃色固體28c(271mg，產(chǎn)率65.9％)。250ml圓底燒瓶中加入28c(271mg，0.534mmol)，鈀碳(100mg)，thf(30ml)，乙醇(30ml)，通入氫氣，常溫常壓下反應(yīng)3h，反應(yīng)液抽濾，乙醇洗滌，合并濾液，旋干得到白色固體28d，28d溶于dmf(5ml)，置于冰浴中，加入dipea(93μl，0.534mmol)，滴加丙烯酰氯(44μl，0.534mmol)，滴畢，冰浴下反應(yīng)30min，反應(yīng)液中加入水，乙酸乙酯，萃取分層，收集有機(jī)相，依次用水，飽和碳酸鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇100:1)純化得白色固體化合物28(102mg，產(chǎn)率35.9％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(s,1h),9.69(s,1h),8.95(s,1h),7.76–7.62(m,1h),7.62–7.47(m,1h),7.25–7.17(m,2h),6.87(s,1h),6.49(dd,j＝17.0,10.2hz,1h),6.24(dd,j＝17.0,2.0hz,1h),6.10(s,1h),5.73(dd,j＝10.2,1.9hz,1h),3.93(s,6h),3.21(s,3h),2.37(s,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,530.88。實(shí)施例29100ml圓底燒瓶中加入29a(197mg，1.25mmol)，29b(600mg，1.87mmol)，pd2(dba)3(114mg，0.125mmol)，x-phos(119mg，0.250mmol)，碳酸銫(815mg，2.50mmol)，甲苯(15ml)，用氮?dú)夤呐?5min，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下在110℃油浴中反應(yīng)8h，冷至室溫，抽濾，用二氯甲烷和甲醇(5:1)混合溶劑洗滌，合并濾液，蒸除溶劑，得到的殘?jiān)?jīng)柱層析(二氯甲烷：甲醇20:1)分離純化得到類白色固體29c(151mg，產(chǎn)率27.4％)。100ml圓底燒瓶中加入29c(151mg，0.342mmol)，29d(102mg，0.410mmol)，甲苯(15ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下在100℃油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)液旋干，殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇50:1)純化得白色固體29e(105mg，產(chǎn)率44.5％)。50ml圓底燒瓶中加入29e(105mg，0.152mmol)，三氟乙酸(1ml)，二氯甲烷(2ml)，室溫下攪拌反應(yīng)4h，反應(yīng)液旋干，殘?jiān)屑尤腼柡吞妓徕c和乙酸乙酯，萃取分層，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，旋干得到29f。29f溶于二氯甲烷(10ml)，置于冰浴中攪拌，加入dipea(30μl，0.173mmol)，滴加丙烯酰氯(14μl，0.173mmol)，反應(yīng)1h，反應(yīng)液旋干，加入飽和碳酸鈉和乙酸乙酯，萃取分層，收集有機(jī)相，飽和碳酸鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干得到的殘?jiān)?jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷：甲醇20:1)純化得白色固體化合物29(13mg，產(chǎn)率13.3％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.97(s,1h),7.86(s,2h),7.15(d,j＝8.7hz,1h),6.82–6.59(m,2h),6.51(s,1h),6.40(d,j＝16.4hz,1h),6.18(dd,j＝16.7,10.3hz,1h),5.75(d,j＝10.1hz,1h),5.66(s,1h),3.92(s,6h),3.35–3.24(m,4h),3.23(s,3h),2.68–2.55(m,4h),2.55–2.39(m,5h),1.14(t,j＝6.9hz,3h).ms(esi)m/z[m+h]+,643.15。實(shí)施例30本發(fā)明化合物30按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物30，esi-msm/z：644.1[m+h]+。實(shí)施例31本發(fā)明化合物31按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物31，esi-msm/z：577.4[m+h]+。實(shí)施例32本發(fā)明化合物32按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物32，esi-msm/z：465.2[m+h]+。實(shí)施例33本發(fā)明化合物33按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物33，esi-msm/z：590.0[m+h]+。實(shí)施例34本發(fā)明化合物34按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物34，esi-msm/z：618.4[m+h]+。實(shí)施例35本發(fā)明化合物35按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物35，esi-msm/z：648.1[m+h]+。實(shí)施例36本發(fā)明化合物36按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物36，esi-msm/z：642.4[m+h]+。實(shí)施例37本發(fā)明化合物37按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物37，esi-msm/z：618.1[m+h]+。實(shí)施例38本發(fā)明化合物38按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物38，esi-msm/z：644.3[m+h]+。實(shí)施例39本發(fā)明化合物39按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物39，esi-msm/z：645.0[m+h]+。實(shí)施例40將40a(406mg,3.15mmol),40b(1316mg,4.09mmol),edci(910mg,4.72mmol),hobt(640mg,4.72mmol),et3n(653μl,4.72mmol),依次加入dmf(35ml)中溶解攪拌。n2保護(hù)下室溫?cái)嚢?2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，將停止反應(yīng)，將反應(yīng)溶液傾入冰水中，劇烈攪拌，析出大量固體，過濾，用少量冰水洗滌，真空干燥，的固體產(chǎn)品40c產(chǎn)物804mg，收率59％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.27(s,1h),8.17(d,j＝9.6hz,1h),8.05(d,j＝2.7hz,1h),6.50(dd,j＝9.6,2.8hz,1h),3.93–3.80(m,4h),3.59–3.47(m,4h),2.27(s,6h),1.56(s,9h),1.01–0.94(m,2h),0.94–0.88(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,434.35。將40c(800mg,1.85mmol)溶解于meoh(20ml)中，于室溫條件下攪拌，加入pd/c200mg，氫氣置換并保護(hù)，攪拌6h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。過濾固體催化劑，旋干溶劑，得到目標(biāo)化合物40d產(chǎn)物596mg，收率80％。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將40e(220mg,1.46mmol)溶于無水thf(60ml)中，冰浴下攪拌；分批緩慢加入40d(590mg,1.46mmol)，升溫至室溫繼續(xù)反應(yīng)30min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，旋蒸除掉大部分溶劑，將殘余物中加入30ml水，室溫下繼續(xù)攪拌10min，析出固體過濾，用少量冰水洗滌固體。收集固體，真空干燥，得產(chǎn)品40f產(chǎn)物597mg。收率79％。將40f(590mg,1.15mmol)、甲胺鹽酸鹽(156mg,2.30mmol)、dipea(0.57ml,3.45mmol)依次加入無水乙醇(40ml)中，n2條件下80℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，停止反應(yīng)并冷卻至室溫。旋干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，ea萃取水層3次，合并有機(jī)層，水洗，干燥，除溶劑，粗品柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得到產(chǎn)品，真空干燥。產(chǎn)品40g產(chǎn)物362mg，收率61％。將40g(350mg,0.68mmol),40h(168mg,0.68mmol),溶解于甲苯(15ml)中，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝85:1)。得目標(biāo)化合物40i產(chǎn)物180mg，收率35％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.42(s,1h),8.52(s,1h),7.29–7.20(m,2h),6.63–6.41(m,4h),3.93(s,6h),3.85–3.70(m,4h),3.51(s,3h),3.23–2.92(m,4h),2.31(s,6h),1.53(s,9h),1.01–0.94(m,2h),0.94–0.87(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,759.20將40i(160mg,0.21mmol)溶解于dcm(20ml)中，于冰浴條件下攪拌，加入tfa(4ml)，緩慢升至室溫?cái)嚢?h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干溶劑，殘余物加入飽和碳酸鈉水溶液，ea萃取，合并ea層，水洗，無水硫酸鈉干燥。旋蒸除溶劑，得到目標(biāo)化合物40j產(chǎn)物112mg，收率81％。ms(esi)m/z[m+h]+,659.21。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將40j(100mg,0.15mmol)溶解于dcm(10ml)中，加入dipea(30μl,0.182mmol)，于冰浴條件下攪拌，緩慢加入丙烯酰氯(15μl)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。反應(yīng)液水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，旋蒸除溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝60:1)。得目標(biāo)化合物40產(chǎn)物164mg，收率60％。1hnmr(400mhz,dmso)δ11.50(s,1h),9.38(s,1h),8.51(s,1h),6.95–6.84(m,2h),6.44–6.35(m,1h),6.11(s,1h),5.77(s,2h),4.77(s,2h),3.94(s,6h),3.70–3.59(m,4h),2.66(s,3h),2.21(s,6h),0.95–0.84(m,2h),0.79–0.71(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,713.76。實(shí)施例41將41a(807mg,2mmol),41b(287mg,2mmol),cs2co3(1303mg,4mmol)溶解于甲苯(25ml)中，通入n25分鐘后，加入pd2(dba)3(183mg,0.2mmol),xphos(190mg,0.4mmol)，攪拌下通入n25分鐘，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)8h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得目標(biāo)化合物41c產(chǎn)物317mg，收率31％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(s,1h),7.81(d,j＝2.2hz,1h),7.11(d,j＝8.7hz,1h),7.06(s,1h),6.92(s,1h),6.61(dd,j＝8.7,2.7hz,1h),5.30(s,1h),5.12(s,1h),3.90–3.78(m,4h),3.29–3.18(m,4h),2.76(d,j＝5.0hz,3h),2.30(s,6h),1.49(s,9h),0.98–0.93(m,2h),,0.92–0.85(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,511.44。將41c(310mg,0.607mmol),41d(211mg,0.851mmol),溶解于甲苯(15ml)中，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝85:1)。得目標(biāo)化合物41e產(chǎn)物160mg，收率21％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.58(s,1h),8.39(s,1h),7.74(d,j＝2.1hz,1h),7.16(d,j＝8.7hz,1h),6.87(d,j＝13.8hz,2h),6.67(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.54(s,1h),5.81(s,1h),3.94(s,6h),3.89–3.82(m,4h),3.62–3.52(m,4h),3.27(s,3h),2.34(s,6h),1.51(s,9h),1.07–0.98(m,2h),0.95–0.88(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,758.42。將41e(160mg,0.237mmol)溶解于dcm(20ml)中，于冰浴條件下攪拌，加入tfa(4ml)，緩慢升至室溫?cái)嚢?h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干溶劑，殘余物加入飽和碳酸鈉水溶液，ea萃取，合并ea層，水洗，無水硫酸鈉干燥。旋蒸除溶劑，得到目標(biāo)化合物41f產(chǎn)物130mg。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將41f(130mg,0.197mmol)溶解于dcm(10ml)中，加入dipea(35μl,0.209mmol)，于冰浴條件下攪拌，緩慢加入丙烯酰氯(13μl)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。反應(yīng)液水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，旋蒸除溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝60:1)。得目標(biāo)化合物41產(chǎn)物138mg，收率27％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.55(s,1h),8.41(s,1h),7.90(s,1h),7.82(s,1h),7.26(d,j＝8.7hz,1h),6.91(s,1h),6.79(d,j＝7.9hz,1h),6.54(s,1h),6.45(d,j＝16.8hz,1h),6.24(dd,j＝16.5,10.4hz,1h),5.90(s,1h),5.80(d,j＝10.3hz,1h),3.94(s,6h),3.90–3.81(m,4h),3.37–3.21(m,7h),2.36(s,6h),1.13–0.98(m,2h),0.96–0.87(m,2h).ms(esi)m/z[m+h]+,712.67。實(shí)施例42本發(fā)明化合物42按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物42，esi-msm/z：630.1[m+h]+。實(shí)施例43本發(fā)明化合物43按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物43，esi-msm/z：728.2[m+h]+。實(shí)施例44將44a(10g,46.1mmol),dmap(2.25g,18.4mmol)溶解于thf(500ml)中，冰浴攪拌下，緩慢滴加(boc)2o(20.1g,92.2mmol),30min滴加完成，逐漸升溫至室溫反應(yīng)12h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(pe:ea＝100:1)。得目標(biāo)化合物44b17.5g，收率91％。將44b(17.5g,42mmol)溶解于dcm(500ml)中，于冰浴條件下攪拌，加入tfa(5.02g,44mmol)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干溶劑，殘余物加入飽和碳酸鈉水溶液，ea萃取，合并ea層，水洗，無水硫酸鈉干燥。旋蒸除溶劑，得到目標(biāo)化合物44c產(chǎn)物13.05g。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將44c(13.05g,41.2mmol),高哌嗪(6.18g,61.8mmol),cs2co3(33.6g,103mmol)溶解于甲苯(250ml)中，通入n25分鐘后，加入pd2(dba)3(3.76g,4.1mmol),xphos(3.91g,8.2mmol)，攪拌下通入n25分鐘，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)20h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得目標(biāo)化合物44d產(chǎn)物4.29g，收率31％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.26(d,j＝9.4hz,1h),7.37(d,j＝3.1hz,1h),7.00(dd,j＝9.4,3.1hz,1h),3.60–3.58(m,2h),3.12–3.03(m,2h),2.77–2.67(m,2h),2.92–2.87(m,2h),2.02–1.93(m,2h),1.54(s,9h)。將44d(4.29g,12.8mmol),m(2.46g,19.2mmol),edci(2.96g,15.4mmol),hobt(2.02g,15.4mmol),et3n(1.94g,19.2mmol),依次加入dcm(100ml)中溶解攪拌。n2保護(hù)下室溫?cái)嚢?2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成，將停止反應(yīng)，將反應(yīng)溶液傾入冰水中，劇烈攪拌，析出大量固體，過濾，用少量冰水洗滌，真空干燥，的固體產(chǎn)品44e產(chǎn)物3.38g，收率59％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.13(s,1h),8.28(d,j＝9.4hz,1h),7.40(d,j＝3.1hz,1h),7.01(dd,j＝9.4,3.1hz,1h),3.85–3.53(m,8h),2.13(s,6h),2.08–1.98(m,2h),1.54(s,9h),0.95–0.87(m,2h),0.83–0.75(m,2h).將44e(3.38g,7.55mmol)溶解于dcm(100ml)中，于冰浴條件下攪拌，加入tfa(4ml)，緩慢升至室溫?cái)嚢?h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。旋干溶劑，殘余物加入飽和碳酸鈉水溶液，ea萃取，合并ea層，水洗，無水硫酸鈉干燥。旋蒸除溶劑，得到目標(biāo)化合物44f產(chǎn)物2.62g。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將44f(694mg,2mmol),44n(287mg,2mmol),cs2co3(1303mg,4mmol)溶解于甲苯(25ml)中，通入n25分鐘后，加入pd2(dba)3(183mg,0.2mmol),xphos(190mg,0.4mmol)，攪拌下通入n25分鐘，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)8h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝100:1)。得目標(biāo)化合物44g產(chǎn)物277mg，收率31％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.12(s,1h),8.34–8.23(m,2h),7.41(d,j＝3.1hz,1h),7.05(dd,j＝9.4,3.1hz,1h),5.71(s,1h),5.24(s,1h),3.93–3.51(m,8h),2.93(d,j＝5.1hz,3h),2.15(s,6h),2.08–2.03(m,2h),0.95–0.88(m,2h),0.85–0.72(m,2h)；ms(esi)m/z[m+h]+,455.26。將44g(270mg,0.607mmol),o(211mg,0.851mmol),溶解于甲苯(15ml)中，置于n2保護(hù)下攪拌加熱，100℃下恒溫反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，旋干溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝85:1)。得目標(biāo)化合物44h產(chǎn)物175mg，收率41％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.46(s,1h),9.26(s,1h),8.50(s,1h),8.32(d,j＝9.3hz,1h),7.44(d,j＝3.0hz,1h),7.07(dd,j＝9.4,3.1hz,1h),6.56(s,1h),6.31(s,1h),3.95(s,6h),3.89–3.61(m,8h),3.47(s,3h),2.25–2.00(m,8h),0.98–0.90(m,2h),0.89–0.80(m,2h)；ms(esi)m/z[m+h]+,702.44。將44h(210mg,0.351mmol)溶解于meoh(20ml)中，于室溫條件下攪拌，加入pd/c80mg，通入氫氣，持續(xù)攪拌6h。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。過濾固體催化劑，旋干溶劑，得到目標(biāo)化合物44i產(chǎn)物132mg。所得產(chǎn)品直接用于下一步反應(yīng)。將44i(132mg,0.197mmol)溶解于dcm(10ml)中，加入dipea(35μl,0.209mmol)，于冰浴條件下攪拌，緩慢加入丙烯酰氯(13μl)，緩慢升至室溫?cái)嚢?0min。tlc監(jiān)測反應(yīng)完成。反應(yīng)液水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，旋蒸除溶劑，殘留物直接柱層析(dcm:meoh＝60:1)。得目標(biāo)化合物44產(chǎn)物86mg，收率60％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.59(s,1h),8.39(s,1h),7.86(s,1h),7.70(s,1h),7.15(d,j＝8.8hz,1h),6.80(s,1h),6.60–6.52(m,2h),6.42(d,j＝16.8hz,1h),6.27–6.20(m,1h),5.86(s,1h),5.78(d,j＝10.3hz,1h),3.94(s,6h),3.89–3.57(m,8h),3.28(s,3h),2.20–1.98(m,8h),0.91–0.77(m,4h)；ms(esi)m/z[m+h]+,726.50。實(shí)施例45本發(fā)明化合物45按照實(shí)施例1的類似方案實(shí)施制備，制備得到化合物45，esi-msm/z：631.3[m+h]+。d生物測試體外生物化學(xué)激酶測試將重組fgfr4(購自promega)和底物poly(glu4，tyr1)在1×buffer(40mmtris,ph＝7.5；20mmmgcl2；0.1mg/mlbsa；2mmmncl2；50μmdtt)中混合。將化合物加入酶/底物的混合體系中，混勻并預(yù)孵，接著加入atp啟動(dòng)反應(yīng)。室溫反應(yīng)60min后，按照1:1體積比加入adp-gloreagent；然后在23℃反應(yīng)40min，按照1:1體積比加入kinasedetectionreagent繼續(xù)反應(yīng)30min。檢測每個(gè)反應(yīng)孔的熒光值。根據(jù)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度l值計(jì)算抑制率，抑制率＝[1-(l樣品-l空白)/(l陰性-l空白)]×100％。根據(jù)樣品抑制率，應(yīng)用xlfit軟件中的4parameterlogisticmodel計(jì)算化合物的ic50?；衔锞幪杅gfr4(ic50)(nm)fgfr1(ic50)(μm)10.0710.120.09>5031.212.341.522.451.815.661.711.271.524.680.933.190.2>50100.1>50111.2>50121.7>50130.5>50140.1>50151.8>50160.8>50171.9>50182.2>50190.0544.3200.0810.4210.6>50220.1>50230.3>50240.6>50以上數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明化合物對fgfr4具有顯著的抑制作用，對fgfr1的抑制活性不高，從fgfr1(ic50)數(shù)值與fgfr4(ic50)數(shù)值比值可以看出，本發(fā)明化合物對fgfr4具有選擇性地顯著抑制活性。當(dāng)前第1頁12