本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種orexin多肽的化學(xué)制備方法及用途。

背景技術(shù)：

多肽化學(xué)已經(jīng)走過(guò)了一百多年的光輝歷程，1902年，emilfischer首先開(kāi)始關(guān)注多肽合成，由于當(dāng)時(shí)在多肽合成方面的知識(shí)太少，進(jìn)展也相當(dāng)緩慢當(dāng)時(shí)合成采用了苯甲酰，乙酰保護(hù)，脫去相當(dāng)困難，而且容易導(dǎo)致肽鏈斷裂。直到1932年，maxbergmann等人開(kāi)始使用芐氧羰基(z)來(lái)保護(hù)α-氨基，該保護(hù)基可以在催化氫化或氫溴酸的條件下定量脫除，多肽合成才開(kāi)始有了一定的發(fā)展。到了20世紀(jì)50年代，隨著越來(lái)越多的生物活性多肽的發(fā)現(xiàn)，大大推動(dòng)了有機(jī)化學(xué)家們對(duì)多肽合成方法以及保護(hù)基的研究，因此這一階段的研究成果也非常豐富，人們合成了大量的生物活性多肽，包括催產(chǎn)素(oxytocin)，胰島素等，同時(shí)在多肽合成方法以及氨基酸保護(hù)基上面也取得了不少成績(jī)，這為后來(lái)的固相合成方法的出現(xiàn)也提供了實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。

臨床證據(jù)顯示老年患者的麻醉后蘇醒延遲，是增加圍術(shù)期死亡率威脅患者生命的最重要因素。針對(duì)全麻蘇醒期，盡管已有鎮(zhèn)痛以及肌松的拮抗藥物，但還沒(méi)有任何一種針對(duì)全身麻醉藥的拮抗劑問(wèn)世。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的主要原因是以往人們對(duì)于全麻覺(jué)醒的機(jī)制研究尚不深入，對(duì)于何種機(jī)制調(diào)控覺(jué)醒尚不明確，傳統(tǒng)觀念認(rèn)為覺(jué)醒過(guò)程僅僅是全麻藥物撤退后腦功能的被動(dòng)復(fù)蘇?；谶@一理論，研發(fā)了針對(duì)苯二氮類受體的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，如氟馬希尼等。然而臨床應(yīng)用中，對(duì)于全身麻醉藥物如七氟醚、異氟醚、丙泊酚等，苯二氮類受體競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑毫無(wú)作用，并不能作為促醒藥物應(yīng)用。orexin-a是存在于下丘腦的一種神經(jīng)多肽，參與調(diào)節(jié)攝食、睡眠-覺(jué)醒周期、生殖、體溫、血壓、激素分泌和感覺(jué)等生理功能。1998年yanagisawa等在大鼠下丘腦腹外側(cè)發(fā)現(xiàn)了兩種與食欲有關(guān)的神經(jīng)肽，命名為orexin-a(食欲素-a)和orexin-b(食欲素-b)。一系列研究發(fā)現(xiàn)：orexin能在神經(jīng)系統(tǒng)麻醉—覺(jué)醒調(diào)控中起到重要作用，orexin的激活可以逆轉(zhuǎn)多種全麻藥物的作用。然后現(xiàn)有的orexin-a的合成技術(shù)，無(wú)法獲得大量、大分子量、高純度的orexin多肽，且制備方法復(fù)雜，制備成本較高。orexin多肽的化學(xué)合成存在的以下問(wèn)題?；谏鲜鰡?wèn)題，本發(fā)明提出了一種orexin多肽的化學(xué)制備方法及用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法及用途。

一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，包括以下步驟：

s1、制備所需的氨基酸，將制備的氨基酸利用氫氧化銨活化成活性中間體，從而形成肽鍵；

s2、制備聚酰胺樹(shù)脂，選擇性保護(hù)側(cè)鏈官能團(tuán)，然后開(kāi)始進(jìn)入aa循環(huán)，開(kāi)始合成含有33個(gè)氨基酸的線性粗肽多肽；

s3、利用過(guò)硫酸鹽將步驟s2中制備的線性粗肽多肽氧化形成6和12位間的第一對(duì)二硫鍵，利用0.01mol/l的碘化鉀形成7和14位間的第二對(duì)二硫鍵，得到環(huán)化的orexin多肽溶液；

s4、將步驟s3中制備的環(huán)化的orexin多肽溶液經(jīng)鹽析與有機(jī)溶劑沉淀后進(jìn)行分離，將分離出的鹽經(jīng)冷凍干燥后得到orexin多肽，最后對(duì)制得的orexin多肽進(jìn)行分析測(cè)定。

優(yōu)選的，所述步驟s1中制備的氨基酸為不具備兩性離子結(jié)構(gòu)的氨基酸。

優(yōu)選的，所述步驟s1中形成肽鍵的過(guò)程為兩個(gè)氨基酸在脫水之后，通過(guò)酰胺鍵連接。

優(yōu)選的，所述步驟s2中的選擇性保護(hù)側(cè)鏈官能團(tuán)指的是暫不形成酰胺鍵的氨基和羧基。

優(yōu)選的，所述orexin多肽的化學(xué)制備方法可利用多肽合成儀完成。

優(yōu)選的，所述orexin多肽的化學(xué)制備方法為固相多肽合成法或液相多肽合成法。

優(yōu)選的，所述步驟s4中orexin多肽的分析測(cè)定方法為高效液相色譜法、親和層析法和毛細(xì)管電泳法。

本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，制備的orexin多肽在制備促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物或促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物的前體化合物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，通過(guò)制備氨基酸，利用氫氧化銨將其活化成活性中間體；制備聚酰胺樹(shù)脂，選擇性保護(hù)側(cè)鏈官能團(tuán)，然后開(kāi)始進(jìn)入aa循環(huán)，開(kāi)始合成含有33個(gè)氨基酸的線性粗肽多肽；利用過(guò)硫酸鹽將線性粗肽多肽氧化形成第一對(duì)二硫鍵，利用碘化鉀形成第二對(duì)二硫鍵，得到環(huán)化的orexin多肽溶液；將環(huán)化的orexin多肽溶液經(jīng)鹽析與有機(jī)溶劑沉淀后進(jìn)行分離，將分離出的鹽經(jīng)冷凍干燥后得到orexin多肽，本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，制備周期短，操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)物分子量高，毒副作用小，可應(yīng)用于制備促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物或促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物的前體化合物，成本低，值得推廣。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步解說(shuō)。

實(shí)施例

本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，包括以下步驟：

s1、制備所需的不具備兩性離子結(jié)構(gòu)的氨基酸，將制備的不具備兩性離子結(jié)構(gòu)的氨基酸利用氫氧化銨活化成活性中間體，使兩個(gè)氨基酸在脫水之后，通過(guò)酰胺鍵連接，從而形成肽鍵；

s2、制備聚酰胺樹(shù)脂，選擇性保護(hù)側(cè)鏈官能團(tuán)，將暫不形成酰胺鍵的氨基和羧基選擇性保護(hù)起來(lái)，然后開(kāi)始進(jìn)入aa循環(huán)，開(kāi)始合成含有33個(gè)氨基酸的線性粗肽多肽；

s3、利用過(guò)硫酸鹽將步驟s2中制備的線性粗肽多肽氧化形成6和12位間的第一對(duì)二硫鍵，利用0.01mol/l的碘化鉀形成7和14位間的第二對(duì)二硫鍵，得到環(huán)化的orexin多肽溶液；

s4、將步驟s3中制備的環(huán)化的orexin多肽溶液經(jīng)鹽析與有機(jī)溶劑沉淀后進(jìn)行分離，將分離出的鹽經(jīng)冷凍干燥后得到orexin多肽，最后利用高效液相色譜法、親和層析法和毛細(xì)管電泳法對(duì)制得的orexin多肽進(jìn)行分析測(cè)定。

本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，采用固相多肽合成法或液相多肽合成法，利用多肽合成儀制備出orexin多肽，其制備出的orexin多肽在制備促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物或促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物的前體化合物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，通過(guò)制備氨基酸，利用氫氧化銨將其活化成活性中間體；制備聚酰胺樹(shù)脂，選擇性保護(hù)側(cè)鏈官能團(tuán)，然后開(kāi)始進(jìn)入aa循環(huán)，開(kāi)始合成含有33個(gè)氨基酸的線性粗肽多肽；利用過(guò)硫酸鹽將線性粗肽多肽氧化形成第一對(duì)二硫鍵，利用碘化鉀形成第二對(duì)二硫鍵，得到環(huán)化的orexin多肽溶液；將環(huán)化的orexin多肽溶液經(jīng)鹽析與有機(jī)溶劑沉淀后進(jìn)行分離，將分離出的鹽經(jīng)冷凍干燥后得到orexin多肽，本發(fā)明提出的一種orexin多肽的化學(xué)制備方法，制備周期短，操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)物分子量高，毒副作用小，可應(yīng)用于制備促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物或促進(jìn)全身麻醉覺(jué)醒藥物的前體化合物，成本低，值得推廣。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。