1.一種利用定點(diǎn)突變及酶切技術(shù)制備熒光分子量?jī)?nèi)標(biāo)的方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1將目的DNA片段A克隆進(jìn)質(zhì)粒載體,得到重組質(zhì)粒B;
S2以步驟S1中得到的重組質(zhì)粒B為模板,在DNA片段A的不同長(zhǎng)度位置分別進(jìn)行定點(diǎn)突變,引入限制性酶切位點(diǎn),并得到相應(yīng)的重組質(zhì)粒C;
S3設(shè)計(jì)DNA片段A的擴(kuò)增引物F1、R1,并分別在引物5’端進(jìn)行熒光標(biāo)記;
S4利用擴(kuò)增引物F1、R1擴(kuò)增重組質(zhì)粒C,得到擴(kuò)增產(chǎn)物D,將產(chǎn)物D進(jìn)行純化;
S5利用限制性內(nèi)切酶酶切純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物D,得到酶切產(chǎn)物E,即熒光分子量?jī)?nèi)標(biāo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟S1中,DNA片段A長(zhǎng)度為10bp到5000bp。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟S2中,所述限制性酶切位點(diǎn)為黏性末端的酶切位點(diǎn)或者平末端的酶切位點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,步驟S2中,所述限制性酶切位點(diǎn)為BamHI、HindIII、EcorV或EcorI。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟S3中,熒光標(biāo)記為能與DNA堿基結(jié)合并能被488nm-605nm激光激發(fā)出熒光的物質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其特征在于,所述熒光標(biāo)記為ROX、HEX、FAM、CY3、CY5或LIZ。