技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種防治蘆筍莖枯病的生防菌株LS01及其生防菌劑應(yīng)用，屬于植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蘆筍莖枯病的防治。

背景技術(shù)：

蘆筍莖枯病是一種分布廣、危害重的毀滅性病害，在我國各蘆筍產(chǎn)區(qū)幾乎都有發(fā)生。近年來我國蘆筍面積不斷擴(kuò)大，其危害程度也隨之加重。一旦得了莖枯病，輕則減產(chǎn)，重則毀園絕收，給廣大筍農(nóng)造成巨大損失。同時(shí)，因?yàn)橐坏└腥厩o枯病將很難根除，因此，蘆筍莖枯病被稱為“蘆筍癌癥”。

通常采用化學(xué)農(nóng)藥來防治蘆筍莖枯病，雖然取得了一定的防效，但始終未能很好控制該病害的發(fā)生。而且化學(xué)農(nóng)藥對(duì)農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)的嚴(yán)重破壞，病原菌對(duì)藥劑的抗性越來越明顯。同時(shí)，化學(xué)農(nóng)藥不易降解，高殘留，對(duì)人畜極不安全都嚴(yán)重限制了在將來的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的使用。而生物防治對(duì)人畜安全無毒，不污染環(huán)境，無殘留，不易使病原菌產(chǎn)生耐藥性，且生防微生物還具有促進(jìn)作物生長的作用等特點(diǎn)，是最有前途的防治蘆筍莖枯病的方法。目前利用微生物制劑防治蘆筍莖枯病雖取得了一些進(jìn)展，但效果并不理想。綜上所述，開發(fā)新的、更為高效和安全的微生物殺菌劑控制蘆筍莖枯病的發(fā)生，是實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)安全和可持續(xù)發(fā)展的需要，符合社會(huì)發(fā)展要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)目前蘆筍種植過程中莖枯病防治難度大、成本高、化學(xué)農(nóng)藥抗性日益突出和農(nóng)藥殘留高等問題，本發(fā)明提供一株多粘類芽孢桿菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01，所述菌株的保藏號(hào)為CGMCC NO. 11690，保藏日期為2015年11月20日，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供所述多粘類芽孢桿菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01在防治蘆筍莖枯病中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種生防菌劑及其在防治蘆筍莖枯病中的應(yīng)用，所述生防菌劑包括所述多粘類芽孢桿菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01。

本發(fā)明還提供一種蘆筍莖枯病的防治方法，所述方法包括對(duì)具有蘆筍莖枯病的蘆筍施用所述多粘類芽孢桿菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株 LS01或所述生防菌劑。

本發(fā)明提供的多粘類芽孢桿菌 (Paenibacillus polymyxa)菌株及生防菌劑對(duì)蘆筍莖枯病有較好的防治效果，對(duì)人畜安全無毒，不污染環(huán)境，無殘留，且不易使病原菌產(chǎn)生耐藥性，是農(nóng)業(yè)與環(huán)境領(lǐng)域允許使用的安全性菌株。

附圖說明

圖1為蘆筍擬莖點(diǎn)霉菌照片，圖2 為本發(fā)明的多粘類芽孢桿菌LS01 生防菌劑在培養(yǎng)皿內(nèi)抑制蘆筍擬莖點(diǎn)霉菌絲生長的照片。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述，以使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚。以下實(shí)施例僅用于舉例說明，并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。

實(shí)施例1 多粘類芽孢桿菌LS01 生防菌劑及其制備方法。

本實(shí)施例利用多粘類芽孢桿菌LS01（即多粘類芽孢桿菌CGMCC NO. 11690）制作生防菌劑，該生防菌劑是由多粘類芽孢桿菌LS01 經(jīng)活化、種子培養(yǎng)、生產(chǎn)培養(yǎng)和菌劑制備后得到，具體制備方法包括以下步驟：

（1）活化：將多粘類芽孢桿菌LS01接種到LB固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)3-4天；然后轉(zhuǎn)接到LB液體培養(yǎng)基中，溫度為30℃，180 rpm 振蕩培養(yǎng)16-28h。

（2）種子培養(yǎng)：將步驟（1）活化后的菌液接入至容積為250 mL三角瓶中，溫度為30℃，180 rpm 振蕩培養(yǎng)16-28h，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期；

（3）生產(chǎn)培養(yǎng)：將步驟（2）培養(yǎng)得到的菌液，按LB生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的0.5%-2% 的接種量接種到發(fā)酵罐中，罐溫為30℃，攪拌速度為200rpm，培養(yǎng)時(shí)間為40h，得到發(fā)酵液。

（4）菌劑制備：將步驟（3）培養(yǎng)得到的發(fā)酵液進(jìn)行離心，收集菌體，采用微生物凍干法，制成生防菌劑，菌劑成品中活菌總濃度為1×10⁶ CFU/g 至1×10¹¹CFU/g。

實(shí)施例2 多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對(duì)蘆筍擬莖點(diǎn)霉抑制效果。

蘆筍莖枯病致病菌擬莖點(diǎn)霉經(jīng)活化兩次后，加入10mL無菌水，用接種針將孢子和菌絲小心刮下，然后倒入放有玻璃珠的三角瓶中，搖床振蕩將菌塊打碎，靜置，將上清倒入已冷卻至45℃的300mL PDA培養(yǎng)基中，搖勻后立即倒平板，冷卻凝固后，放置無菌小圓濾紙片（2個(gè)/皿），30 ℃培養(yǎng)過夜。將多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑與無菌水按照1：20稀釋后，取3μL滴加在病原菌培養(yǎng)基的濾紙片上，以無菌水作為空白對(duì)照組，30℃培養(yǎng)24-36 h，觀察抑菌圈。

抑菌試驗(yàn)結(jié)果如圖1 所示，具體檢測數(shù)值如下表1 所示。

表1 ：多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對(duì)蘆筍擬莖點(diǎn)霉的抑制效果

實(shí)施例3 溫室盆栽試驗(yàn)檢測多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對(duì)蘆筍莖枯病的防效

移栽之前，用多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑稀釋100倍后，浸種處理蘆筍幼苗30 min ；移栽時(shí)采用20 mL生防菌劑稀釋液灌根處理，移栽7 天后接種1000 個(gè)/mL 蘆筍擬莖點(diǎn)霉游動(dòng)孢子懸液20mL。另外不用多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑處理，直接接種蘆筍擬莖點(diǎn)霉菌游動(dòng)孢子懸液的處理作為對(duì)照組。每個(gè)處理組20 株，重復(fù)三次。在溫度25～28℃，相對(duì)濕度50％，培養(yǎng)4周后調(diào)查病級(jí)數(shù)，計(jì)算病害嚴(yán)重度和防效。

灌根接種法的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：

0級(jí)，無任何癥狀；

1級(jí)，幼苗根莖部稍有變黑，葉片不萎蔫或可恢復(fù)性萎蔫；

2級(jí)，幼苗根莖部變黑達(dá)1 ～ 2cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，下部葉片偶有脫落；

3級(jí)，幼苗根莖部變黑超過1 ～ 2cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯；

4級(jí)，幼苗根莖部變黑、皺縮，生長點(diǎn)外部葉脫落或整株萎蔫；

5級(jí)，植株枯死。

移栽4周后的調(diào)查結(jié)果顯示，多粘類芽孢桿菌LS01生防菌劑對(duì)蘆筍擬莖點(diǎn)霉的防效達(dá)到76.07％。

以上結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說明，這些具體實(shí)施方式僅僅是示例性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明實(shí)質(zhì)的前提下可以進(jìn)行各種修改、變化或替換。因此，依照本發(fā)明所作的各種等同變化，仍屬于本發(fā)明所涵蓋的范圍。