本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類(lèi)含脲基的ido1和ido2雙重抑制劑，它們的制備方法，以及含有這些化合物的藥物組合物及其在治療惡性腫瘤方面的用途。

背景技術(shù)：

當(dāng)前，癌癥已成為人類(lèi)死亡的主要原因之一，2016年美國(guó)被診斷為癌癥的患者達(dá)到了160多萬(wàn)人，而由于癌癥死亡的患者接近60萬(wàn)人。我國(guó)2015年新增癌癥患者達(dá)到了430萬(wàn)人，因癌癥死亡的人數(shù)達(dá)到了280萬(wàn)人。預(yù)計(jì)到2030年，全世界因癌癥死亡的人數(shù)將攀升至1310萬(wàn)。因此，癌癥已成為一個(gè)必須高度重視的公共衛(wèi)生問(wèn)題乃至社會(huì)問(wèn)題。人體的免疫系統(tǒng)負(fù)責(zé)保衛(wèi)機(jī)體健康，其中t細(xì)胞在腫瘤的監(jiān)控和殺傷中起著至關(guān)重要的作用。然而腫瘤細(xì)胞能通過(guò)多種機(jī)制來(lái)抑制t細(xì)胞的抗腫瘤活性，從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，產(chǎn)生了免疫逃逸。隨著腫瘤學(xué)與免疫學(xué)發(fā)展不斷深入，圍繞人體免疫系統(tǒng)來(lái)治療腫瘤逐步被科研界與產(chǎn)業(yè)界所接受，成為新藥研發(fā)的熱門(mén)領(lǐng)域。

吲哚胺2,3-雙加氧酶-1(ido1)是一種分解色氨酸(tryptophan)的重要酶，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，介導(dǎo)腫瘤誘導(dǎo)的免疫抑制。這種酶可局部降解色氨酸，鈍化免疫系統(tǒng)的腫瘤監(jiān)視作用及防止腫瘤排斥。ido1通過(guò)多種途徑影響與機(jī)體免疫系統(tǒng)相關(guān)的免疫抑制性分子，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成癌癥。抑制ido1的活性對(duì)于腫瘤的治療有著顯著的促進(jìn)作用，針對(duì)這種酶的特異性抑制劑，具有治療各種類(lèi)型腫瘤的潛力。目前，ido1已經(jīng)成為抗腫瘤免疫療法最重要的小分子調(diào)控靶點(diǎn)。

吲哚胺-2,3-雙加氧酶-2(ido2)是ido1的同源蛋白，含有420個(gè)氨基酸，氨基酸序列上與ido1同源性達(dá)到43％，但與色氨酸2,3-加氧酶(tdo)蛋白的結(jié)構(gòu)沒(méi)有相似型。人和小鼠的ido1與ido2的編碼基因呈頭-尾相連的串聯(lián)形式排列在第8號(hào)染色體上。ido2蛋白的表達(dá)沒(méi)有ido1廣泛，但在抗原提呈細(xì)胞、人類(lèi)原發(fā)腫瘤包括胃癌、結(jié)腸癌、腎臟都有持續(xù)表達(dá)。在人胰腺癌中，ido2不但表達(dá)于腫瘤組織內(nèi)，而且表達(dá)于腫瘤引流淋巴結(jié)內(nèi)。與ido1一樣也是催化色氨酸經(jīng)犬尿氨酸途徑代謝的限速酶，研究發(fā)現(xiàn)，ido1與ido2在腫瘤的免疫治療方面可能有著協(xié)同增效的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于尋找結(jié)構(gòu)新穎、活性高以及副作用小的抗腫瘤候選化合物。這些化合物通過(guò)與其他抗腫瘤藥物聯(lián)用，從而達(dá)到提高現(xiàn)有抗腫瘤藥物療效并降低劑量和毒性的作用。

本發(fā)明公開(kāi)了通式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

其中r¹、r²各自獨(dú)立地代表：h、f、cl、br、cf3、ch3、och3、cn或no2。r¹、r²優(yōu)選各自獨(dú)立地代表f、cl或br。

r³代表：c1～c8直鏈烷基或c3～c6環(huán)烷基；r³優(yōu)選c2～c5直鏈烷基或c3～c5環(huán)烷基。

通式(i)的化合物可與藥學(xué)上可接受的酸形成酸加成鹽，所述酸包括：氯化氫、溴化氫硫酸、碳酸、草酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或阿魏酸。

本發(fā)明優(yōu)選的部分化合物如下：

本發(fā)明通式(i)化合物及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽(i.a)可用下列方法制備：

更具體的方法包括：

其中：

由化合物ii制備化合物iii的過(guò)程，反應(yīng)試劑為亞硝酸鈉和2mol/l鹽酸，溶劑為水。

由化合物iii經(jīng)重氮化制備化合物iv的過(guò)程，反應(yīng)試劑為亞硝酸鈉、6mol/l鹽酸和氯化鈉，溶劑為冰醋酸。

由化合物iv與取代苯胺(v)經(jīng)胺化制備化合物vi的過(guò)程，去酸劑為碳酸氫鈉，溶劑為乙醇和水。

由化合物vi制備化合物vii的過(guò)程，反應(yīng)物為n,n’-羰基二咪唑(cdi)，溶劑為乙酸乙酯。

由化合物vii制備化合物i的過(guò)程，首先由化合物vii與異氰酸酯在強(qiáng)堿輔助下于無(wú)水溶劑中反應(yīng)，生成的產(chǎn)物不經(jīng)分離直接加水進(jìn)行水解得到目標(biāo)化合物i；所述的強(qiáng)堿為氫化鈉、叔丁醇鉀或叔丁醇鈉，優(yōu)選氫化鈉；所述的溶劑為四氫呋喃、1,4-二氧六環(huán)、甲苯、n,n-二甲基甲酰胺，優(yōu)選四氫呋喃。

由化合物i經(jīng)成鹽制備化合物i·a的過(guò)程，反應(yīng)物(a)為氯化氫、溴化氫、硫酸、磷酸、碳酸、草酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來(lái)酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或阿魏酸；溶劑優(yōu)選為甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、甲苯或四氫呋喃，或任意幾種的混合溶劑。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種藥物組合物，其包括藥物有效劑量的本發(fā)明的化合物或其鹽和藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明所述的化合物可以添加藥學(xué)上可接受的載體制成常見(jiàn)的藥用制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑，可以加入香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑等常用藥用輔料。

本發(fā)明所述的化合物在臨床上的給藥方式可以采用口服、注射等方式。

一般地，本發(fā)明的化合物用于治療時(shí)，人用劑量范圍為1mg～1000mg/天。也可根據(jù)劑型的不同和疾病嚴(yán)重程度，使用劑量超出該范圍。

本發(fā)明部分化合物的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果如下：

一、檢測(cè)部分目標(biāo)化合物在酶水平抑制ido1/2的活性

實(shí)驗(yàn)方法

建立ido1/2酶活性抑制分子篩選模型，檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照藥epacadostat在此模型上的抑制ic50值及抑制率，結(jié)果與多篇文獻(xiàn)報(bào)道相近，說(shuō)明篩選模型構(gòu)建成功。ido酶可以催化色氨酸上的吡咯環(huán)氧化裂解產(chǎn)生n’-甲酰犬尿氨酸(n’-formylkynurenine)。在室溫環(huán)境下，將40nm的ido酶及900um的l-色氨酸混合，并加入反應(yīng)緩沖液(20mmascorbate,3.5ummethyleneblueand0.2mg/mlcatalasein50mmpotassiumphosphatebufferph6.5)，在室溫反應(yīng)3小時(shí)，然后在酶標(biāo)儀上進(jìn)行紫外測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm。酶活性百分率(％)＝(od值給藥孔－od值本底)/(od值對(duì)照孔－od值本底)×100％，然后用prismgraphpadsofeware軟件擬合計(jì)算ic50值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1

表1部分目標(biāo)化合物在酶水平對(duì)ido1和ido2的ic50

二、檢測(cè)部分目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29的抑制活性

實(shí)驗(yàn)方法

采用磺酰羅丹明b(srb)比色法，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的ht29人結(jié)腸癌細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板(5x10³細(xì)胞/孔)，每孔加入培養(yǎng)基200μl，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜；待細(xì)胞貼壁后，加入適當(dāng)濃度的受試化合物和陽(yáng)性對(duì)照藥后在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)72小時(shí)。加入10％三氯醋酸后于4℃下固定1小時(shí)。用雙蒸水洗滌5次，干燥后，每孔加入70微升srb溶液(4mg/ml)，室溫染色20分鐘，1％醋酸洗滌5次，干燥。每孔加入100μl10mmtris-base溶液使srb溶解。酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔o(hù)d值(檢測(cè)波長(zhǎng)：515nm)；記錄結(jié)果；按下列公式計(jì)算抑制率：抑制率(％)＝(od對(duì)照－od給藥)/od對(duì)照×100％，并計(jì)算ic50。

表2部分目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29的抑制活性ic50

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-1)的制備

3-氨基-4-氨基肟基呋咱(iii)的制備

向裝有h2o(120ml)的1l三頸瓶中加入nano2(62.67g,0.91mol)，室溫(25℃)攪拌溶解，緩慢滴加丙二腈(ii)(30g,0.45mol)溶于450ml2mol/l鹽酸的溶液，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，冷卻至0℃，滴加鹽酸羥胺(69.74g,1.0mol)溶于80ml水的溶液，加畢后攪拌30分鐘，20℃以下用10mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至10，升溫至35℃反應(yīng)2小時(shí)，再加熱至回流反應(yīng)2小時(shí)。冷卻至室溫，反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取(100ml×3)，飽和nacl洗兩次(30ml×2)，無(wú)水na2so4干燥過(guò)夜，減壓蒸除溶劑得到白色粉末46.8g，收率72％，m.p.192-193℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):10.45(s,1h),6.25(s,2h),6.17(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:142[m-h]^-。

4-氨基-n-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(iv)的制備

將化合物iii(20.75g,145mmol)，h2o(300ml)，冰醋酸(150ml)和6mol/lhcl(75ml,435mmol)加到1l三頸瓶中，升溫至45℃，攪拌至化合物iii完全溶解，加入nacl(25.42g,435mmol)，攪拌至溶解，冷卻降溫至0℃，緩慢滴加nano2(10g,145mmol)溶于35ml水的溶液，0℃以下攪拌4小時(shí)，升至室溫，抽濾，濾餅水洗，水/乙醇重結(jié)晶得白色粉末12.1g，收率51.3％，m.p.188-189℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):13.40(s,1h),6.30(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:161[m-h]^-。

4-氨基-n-(3-溴-4-氟苯基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-1)的制備

將化合物iv(10g,61.53mmol)溶于乙醇(300ml)中，加3-溴-4-氟苯胺(v-1)(12.86g,67.68mmol)，再加nahco3(12.92g,153.83mmol)溶于150ml水的溶液，升溫至60℃，tlc檢測(cè)反應(yīng)，待化合物iv反應(yīng)完全后停止反應(yīng)。減壓蒸除溶劑，殘留物用乙酸乙酯(100ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，飽和nacl洗兩次(30ml×3)，無(wú)水na2so4干燥過(guò)夜，減壓蒸除溶劑，乙酸乙酯/正己烷重結(jié)晶得微黃色固體8.03g，收率41.3％，m.p.179-180℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.46(s,1h),8.89(s,1h),6.99(t,j＝8.8hz,1h),6.81(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.56-6.51(m,1h),6.28(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:314[m-h]^-。

3-(4-氨基-1,2,5-噁二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-1)的制備

將化合物vi-1(10g,31.64mmol)溶于乙酸乙酯(120ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(7.7g,47.64mmol)，25℃反應(yīng)，tlc跟蹤反應(yīng)至原料反應(yīng)完。用1mol/lhcl(116ml×2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，殘留物用甲醇重結(jié)晶得10.6g白色固體，收率98％，m.p.192-193℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):8.10(dd,j＝6.2,2.4hz,1h),7.74(m,1h),7.61(t,j＝8.7hz,1h),6.63(s,2h)；ms(esi(-)70v)m/z:340[m-h]^-。

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-1)的制備

將60％的氫化鈉(140mg,3.51mmol)與無(wú)水四氫呋喃(3ml)混合，攪拌下降溫至-78℃后，緩慢滴加化合物vii-1(0.4g,1.17mmol)溶于3ml無(wú)水四氫呋喃的溶液，滴加完畢后攪拌1小時(shí)，向反應(yīng)液中滴加異氰酸乙酯(viii-1)(99mg,1.4mmol)溶于1ml無(wú)水四氫呋喃的溶液,反應(yīng)2小時(shí)，升溫至-68℃繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)，再次升溫至-58℃反應(yīng)過(guò)夜。將反應(yīng)液緩慢升溫至-8℃(10℃/小時(shí))，加入1mlh2o，在此溫度下反應(yīng)3小時(shí)后，抽濾，濾液減壓蒸除四氫呋喃，加入乙酸乙酯(20ml)溶解，用飽和氯化銨(10ml×2)和飽和nacl(10ml×2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥保存，減壓蒸除溶劑，得棕黃色油狀物。柱層析分離(淋洗劑：二氯甲烷：乙酸乙酯＝10:1)，得白色固體0.16g，收率36.1％，m.p.192-194℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.01(s,1h),8.94(s,1h),7.22(dd,j＝6.0,2.5hz,1h),7.17(t,j＝8.8hz,1h),7.09(brs,1h),6.91–6.81(m,1h),3.22–3.07(m,2h),1.06(t,j＝7.1hz,3h)；¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.43,152.30,150.36,141.87,138.83,137.71,125.16,121.71(d,j＝7.1hz),116.00(d,j＝22.8hz),107.10(d,j＝22.2hz),34.47,15.08.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc12h13brfn6o3:387.0211；found:387.0213.

實(shí)施例2

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-2)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸正丙酯(viii-2)(119mg,1.4mmol),60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固體0.15g，收率32％，m.p.185-187℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.02(s,1h),8.94(s,1h),7.22(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(brs,1h),6.87-6.82(m,1h),3.31-3.01(m,2h),1.49-1.39(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.45,152.34(d,j＝9.7hz),150.34,141.81,138.81,137.69,125.17,121.66(d,j＝13.3hz),115.98(d,j＝23.2hz),107.12(d,j＝21.9hz),41.30,22.61,11.22.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h15brfn6o3:401.0368；found:401.0365.

實(shí)施例3

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-異丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-3)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸異丙酯(viii-3)(119mg,1.4mmol),60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固體0.31g，收率66.1％，m.p.177-179℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.83(s,1h),7.22(dd,j＝6.2,2.8hz,1h),7.16(t,j＝8.8hz,1h),7.00(brs,1h),6.83(m,1h),3.81-3.73(m,1h),1.11(d,j＝6.5hz,6h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.69,152.06(d,j＝67.2hz),149.75,141.19,138.96,137.22,125.40,121.98(d,j＝6.8hz),115.99(d,j＝23.2hz),107.15(d,j＝22.1hz),41.66,22.32.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h15brfn6o3:401.0368；found:401.0372.

實(shí)施例4

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正丁基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-4)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸正丁酯(viii-4)(139mg,1.4mmol),60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得白色固體0.24g，收率49.8％，m.p.158-160℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.40(s,1h),8.99(s,1h),8.90(s,1h),7.21(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),7.16(t,j＝8.8hz,1h),7.08(brs,1h),6.83(m,1h),3.13-3.03(m,2h),1.44-1.37(m,2h),1.33-1.20(m,2h),0.88(t,j＝7.2hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.46,152.32(d,j＝6.1hz),150.32,141.78,138.82,137.65,125.17,121.70(d,j＝6.8hz),115.97(d,j＝23.2hz),107.12(d,j＝22.0hz),39.16,31.43,19.43,13.59.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc14h17brfn6o3:415.0524；found:415.0526.

實(shí)施例5

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正己基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-5)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸正己酯(viii-5)(178mg,1.4mmol),60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝12：1)，得白色固體0.28g，收率54.1％，m.p.146-148℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.92(s,1h),7.22(dd,j＝6.1,2.6hz,1h),7.17(t,j＝8.9hz,1h),7.10(brs,1h),6.85(m,1h),3.13-3.07(m,2h),1.46-1.39(m,2h),1.27(brs,6h),0.87(t,j＝6.5hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.46,152.34,150.31,141.76,138.82,137.68,125.17,121.70(d,j＝6.8hz),115.96(d,j＝23.2hz),107.10(d,j＝22.2hz),39.53,30.94,29.31,25.96,22.04,13.88.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc16h21brfn6o3:443.0837；found:443.0848.

實(shí)施例6

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-環(huán)己基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-6)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸環(huán)己酯(viii-6)(175mg,1.4mmol),60％氫化鈉為(140mg,3.51mmol)原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固體0.17g，收率32.9％，m.p.189-191℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.40(s,1h),9.01(s,1h),8.84(s,1h),7.27–7.20(m,1h),7.20-7.12(m,1h),7.02(m,1h),6.90-6.76(m,1h),3.58-3.39(m,1h),1.86-1.73(m,2h),1.72-1.59(m,2h),1.39-1.05(m,6h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.49,151.88(d,j＝65.8hz),150.12,141.67,138.63,137.45,125.16,121.66(d,j＝6.5hz),115.99(d,j＝23.2hz),107.14(d,j＝21.8hz),48.28,32.48,25.05,24.20.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc16h19brfn6o3:441.0681；found:441.0683.

實(shí)施例7

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-正辛基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-7)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸正辛酯(viii-7)(217mg,1.4mmol)，60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得淡黃色固體0.27g，收率49.0％，m.p.130-132℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.91(s,1h),7.27–7.20(m,1h),7.17(t,j＝8.8hz,1h),7.10(m,1h),6.91-6.79(m,1h),3.13-3.04(m,2h),1.45-1.42(m,2h),1.26(brs,10h),0.86(t,j＝6.2hz).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.58,152.32(d,j＝11.9hz),149.90,141.29,138.81,137.38,125.26,121.81(d,j＝6.7hz),115.88(d,j＝23.1hz),107.09(d,j＝22.0hz),39.52,39.25,31.15,29.18,28.58,26.19,22.00,13.78.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc18h25brfn6o3:471.1150；found:471.1147.

實(shí)施例8

n-(3-溴-4-氟苯基)-4-(3-叔丁基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-8)的制備

以vii-1(0.4g,1.17mmol)，異氰酸叔丁酯(viii-8)(139mg,1.4mmol)，60％氫化鈉(140mg,3.51mmol)，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固體0.18g，收率37.0％，m.p.174-175℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.41(s,1h),9.00(s,1h),8.67(s,1h),7.22-7.20(m,1h),7.20–7.13(m,1h),6.93(s,1h),6.84–6.75(m,1h),1.29(s,9h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):155.49,152.31,150.53(d,j＝65.0hz),141.50,138.69,137.62,125.25,121.67(d,j＝7.0hz),115.98(d,j＝28.3hz),107.14(d,j＝17.4hz),49.98,28.58.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc14h17brfn6o3:415.0524；found:415.0525.

實(shí)施例9

n-(4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-9)的制備

4-氨基-n-(4-氟苯基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-2)的制備

將化合物iv(10g,61.53mmol))溶于乙醇(300ml)中，加4-氟苯胺(v-2)(7.52g,67.68mmol))，而后加nahco3(12.92g,153.83mmol)的水溶液(150ml水)，升溫至60℃，tlc檢測(cè)反應(yīng)，待iv反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，乙酸乙酯(100ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，飽和nacl洗兩次(30ml×2)，無(wú)水na2so4干燥過(guò)夜，減壓蒸除溶劑，乙酸乙酯/正己烷重結(jié)晶得粉紅色固體6.91g，收率43％，m.p.214-215℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.25(s,1h),8.71(s,1h),7.05-6.99(m,2h),6.83-6.81(m,2h),6.24(s,2h).

4-(4-氟苯基)-3-[(4-氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-2)

將化合物vi-2(10g,42.16mmol)溶于乙酸乙酯(120ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(10.25g,63.24mmol)，25℃攪拌反應(yīng)，tlc跟蹤反應(yīng)，至原料反應(yīng)完，用1mol/lhcl(150ml×2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，甲醇重結(jié)晶得10.9g白色固體，收率99％，m.p.203-204℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.65-7.64(m,2h),7.42-7.37(m,2h),6.60(s,2h).

n-(4-氟苯基)-4-(3-乙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-9)的制備

以vii-2(0.3g,1.15mmol)，異氰酸乙酯(viii-1)(98mg,1.38mmol)，60％氫化鈉(138mg,3.45mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固體0.13g，收率36.7％，m.p.177-179℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.24(s,1h),8.90(s,1h),8.83(s,1h),7.08(brs,1h),7.00(m,2h),6.88(m,2h),3.22–3.05(m,2h),1.07(t,j＝7.1hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.68,156.51,151.07(d,j＝167.7hz),141.39,139.46,136.07,123.31(d,j＝8.0hz),114.90(d,j＝22.5hz),34.3414.90.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc12h14fn6o3:309.1106；found:309.1103.

實(shí)施例10

n-(4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-10)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸正丙酯(viii-2)(157mg,1.84mmol)，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝10：1)，得白色固體0.17g，收率34.7％，m.p.175-176℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.25(s,1h),8.91(s,1h),8.85(s,1h),7.11(brs,1h),7.00(m,2h),6.88(m,4.9hz,2h),3.10-3.04(m,2h),1.50-1.40(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.56,156.40,151.28(d,j＝153.7hz),141.68,139.39,136.36,123.13(d,j＝7.9hz),114.88(d,j＝22.4hz),41.25,22.60,11.22.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h16fn6o3:323.1262；found:323.1269.

實(shí)施例11

n-(4-氟苯基)-4-(3-異丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-11)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸異丙酯(viii-3)(157mg,1.84mmol)，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固體0.20g，收率40.8％，m.p.183-185℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.22(s,1h),8.86(s,1h),8.81(s,1h),7.00(brs,3h),6.87(brs,2h),3.99-3.57(m,1h),1.11(brs,6h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.76,156.58,150.63(d,j＝136.0hz),141.07,139.57,135.91,123.43(d,j＝6.0hz),114.92(d,j＝21.8hz),41.63,22.35.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h16fn6o3:323.1262；found:323.1269.

實(shí)施例12

n-(4-氟苯基)-4-(3-正丁基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-12)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸正丁酯(viii-4)(182mg,1.84mmol)，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝20：1)，得白色固體0.15g，收率28.8％，m.p.149-151℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.26(s,1h),8.89(s,1h),8.86(s,1h),7.08(brs,1h),7.05-6.93(m,2h),6.94-6.74(m,2h),3.23-2.98(m,2h),1.43-1.40(m,2h),1.35-1.15(m,2h),0.90(brs,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.75,156.58),151.08(d,j＝189.7hz),141.17,139.54,135.96,123.41(d,j＝8.0hz),114.92(d,j＝22.5hz),39.06,31.18,19.29,13.46.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc14h18fn6o3:337.1419；found:337.1420.

實(shí)施例13

n-(4-氟苯基)-4-(3-正己基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-13)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸正己酯(viii-5)(234mg,1.84mmol))，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝6：1)，得白色固體0.20g，收率35.7％，m.p.155-157℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.26(s,1h),8.90(s,1h),8.87(s,1h),7.10(brs,1h),7.00(m,2h),6.87(m,2h),3.13-3.07(m,2h),1.53-1.37(m,2h),1.35-1.20(m,6h),0.87(t,j＝6.3hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.69,156.52,151.07(d,j＝171.9hz),141.29,139.43,136.06,123.30(d,j＝7.9hz),114.86(d,j＝22.5hz),39.31,30.85,29.14,25.85,21.97,13.79.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc16h22fn6o3:365.1732；found:365.1736.

實(shí)施例14

n-(4-氟苯基)-4-(3-環(huán)己基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒i-14)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸環(huán)己酯(viii-6)(230mg,1.84mmol)，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝8：1)，得白色固體0.16g，收率29.1％，m.p.201-203℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.27(s,1h),8.88(s,1h),8.83(s,1h),7.19-6.93(m,3h),6.86(dd,j＝8.9,4.8hz,2h),3.58-3.39(m,1h),1.93-1.73(m,2h),1.73-1.59(m,2h),1.41-1.03(m,6h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.56,156.39,150.79(d,j＝88.2hz),141.63,139.32,136.33,123.09(d,j＝8.1hz),114.90(d,j＝22.5hz),48.19,32.51,25.09,24.19.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc16h20fn6o3:363.1575；found:363.1577.

實(shí)施例15

n-(4-氟苯基)-4-(3-正辛基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-15)的制備

以vii-2(0.3g,1.15mmol)，異氰酸正辛酯(viii-7)(214mg,1.38mmol)，60％氫化鈉(138mg,3.45mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝15：1)，得淡黃色固體0.15g，收率33.3％，m.p.130-132℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.27(s,1h),8.90(s,1h),8.87(s,1h),7.10(brs,1h),7.00(m,2h),6.87(m,2h),3.13-3.06(m,2h),1.51-1.37(m,2h),1.27(brs,10h),0.86(t,j＝6.4hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.65,156.48,151.07(d,j＝162.8hz),141.35,139.37,136.14,123.23(d,j＝7.8hz),114.83(d,j＝22.5hz),39.44,38.89,31.18,29.24,28.62,26.23,22.02,13.83.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc18h26fn6o3:393.2045；found:393.2056.

實(shí)施例16

n-(4-氟苯基)-4-(3-叔丁基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-16)的制備

以vii-2(0.4g,1.53mmol)，異氰酸叔丁酯(viii-8)(182mg,1.84mmol)，60％氫化鈉(183mg,4.59mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝25：1)，得白色固體0.12g，收率23.1％，m.p.176-178℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.29(s,1h),8.89(s,1h),8.69(s,1h),7.08-6.94(m,3h),6.84(dd,j＝8.9,4.8hz,2h),1.29(s,9h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):159.60,156.43,150.48(d,j＝61.8hz),141.35,139.25,136.30,123.17(d,j＝8.0hz),114.92(d,j＝22.5hz),49.96,28.59.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc14h18fn6o3:337.1419；found:337.1423.

實(shí)施例17

n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(vi-3)的制備

將化合物iv(8g,49.22mmol)溶于乙醇(200ml)中，加3-氯-4-氟苯胺(v-3)(7.88g,54.14mmol)，而后加nahco3(0.34g,123.05mmol)的水溶液(100ml水)，升溫至60℃，tlc檢測(cè)反應(yīng)，待iv反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，乙酸乙酯(80ml)溶解，水洗三次(30ml×3)，飽和nacl洗兩次(30ml×2)，無(wú)水na2so4干燥保存過(guò)夜，減壓蒸除溶劑，乙酸乙酯/正己烷重結(jié)晶得微黃色固體6.02g，收率65.03％，m.p.160-162℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.46(s,1h),8.89(s,1h),7.22(t,j＝9.1hz,1h),6.97(dd,j＝6.5,2.6hz,1h),6.75-6.70(m,1h),6.29(s,2h),3.37(brs,2h).

4-(3-氯-4-氟苯基)-3-[(4-氨基)-1,2,5-噁二唑-3-基]-1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮(vii-3)的制備

將化合物vi-3(6g,22.09mmol)溶于乙酸乙酯(78ml)中，加n,n'-羰基二咪唑(5.37g,33.14mmol)，室溫(25℃)反應(yīng)，tlc跟蹤監(jiān)測(cè)反應(yīng)，至原料反應(yīng)完終止反應(yīng)。用1mol/lhcl(80ml×2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，甲醇重結(jié)晶得6.37g白色固體，收率97％。m.p.180-181℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.99(dd,j＝6.6,2.1hz,1h),7.74-7.76(m,1h),7.63(t,j＝8.8hz,1h),6.60(s,2h).

n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-正丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(i-17)的制備

以vii-3(0.4g,1.17mmol)，異氰酸正丙酯(viii-2)(137mg,1.61mmol),60％氫化鈉(161mg,4.02mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，二氯甲烷：乙酸乙酯＝15：1)，得淡綠色固體0.16g，收率33.3％，m.p.169-171℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.02(s,1h),8.93(s,1h),7.21(t,j＝9.1hz,1h),7.16-7.11(m,1h),7.09(brs,1h),6.87-6.74(m,1h),3.11-3.04(m,2h),1.52-1.40(m,2h),0.87(t,j＝7.4hz,3h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):154.38,151.81(d,j＝92.9hz),150.35,141.84,138.80,137.47,122.36,121.02(d,j＝6.8hz),118.69(d,j＝18.6hz),116.23(d,j＝21.7hz),41.30,22.60,11.21.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h15clfn6o3:357.0873；found:357.0875

實(shí)施例18

n-(3-氯-4-氟苯基)-4-(3-異丙基脲基)-nˊ-羥基-1,2,5-噁二唑-3-甲脒i-18)的制備

以vii-3(0.4g,1.34mmol)，異氰酸異丙酯(viii-3)(137mg,1.61mmol)，60％氫化鈉(161mg,4.02mmol)為原料，操作同i-1，柱層析分離(淋洗劑，石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得白色固體0.40g，收率83.3％，m.p.163-165℃。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6),δ(ppm):11.42(s,1h),9.03(s,1h),8.83(s,1h),7.21(t,j＝9.1hz,1h),7.15-7.06(m,1h),7.00(brs,1h),6.85-6.76(m,1h),3.88-3.61(m,1h),1.11(d,j＝6.4hz,6h).¹³c-nmr(75mhz,dmso-d6),δ(ppm):154.39,151.37(d,j＝67.2hz),150.26,141.73,138.78,137.43,122.37,121.00(d,j＝6.8hz),118.70(d,j＝23.2hz),116.23(d,j＝22.1hz),41.62,22.59.hrms(esi):m/z[m+h]⁺.calcdforc13h15clfn6o3:357.0873；found:357.0875。