本發(fā)明涉及化工技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的制備方法及其在抗癌活性方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

姜黃素，作為一種來源于姜黃中的多酚類化合物，被廣泛用作香料、食品防腐劑、味精以及染料。1,4-戊二烯-3-酮類化合物，作為一種重要的姜黃素衍生物，因其具有殺蟲、抑菌、抗植物病毒、抗腫瘤、消炎和抗氧化等較為廣譜的生物活性，已逐漸成為一種重要的醫(yī)藥先導(dǎo)體而受到人們的關(guān)注。近年來的研究表明1,4-戊二烯-3-酮類化合物除在防治農(nóng)業(yè)病害方面具有重要的作用外，在醫(yī)藥領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值。

薛偉等(薛偉,陳玉,仇秋娟,龔華玉,李海暢,楊濤.含肟酯類姜黃素衍生物的合成及抗腫瘤活性研究[j].分子科學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(3),198-204.)合成了一系列不對稱1,5-二芳基-1,4-戊二烯-3-酮肟酯類化合物，發(fā)現(xiàn)在藥劑濃度為10μg/l的情況下處理72小時(shí)后，該類化合物對前列腺癌細(xì)胞pc3細(xì)胞顯示有一定的抑制活性。luo等(luo,h.；yang,s.；cai,y.；peng,z.；liu,t.synthesisandbiologicalevaluationofnovel6-chloro-quinazolinderivativesaspotentialantitumoragents[j].europeanjournalofmedicinalchemistry,2014,84:746-752.)合成了一系列含喹唑啉的1,4-戊二烯-3-酮類化合物，發(fā)現(xiàn)在藥劑濃度為10μm的條件下處理72h后,該類化合物對人胃癌細(xì)胞(mgc-803)、人乳腺癌細(xì)胞(bcap-37)和前列腺癌細(xì)胞(pc3)具有一定的抑制活性。

劉春麗等(劉春麗,史冊,劉錦燕,魏冰,毛斐,項(xiàng)明杰,李劍.2-咪唑基-1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的合成及其抗菌活性研究[j].中國藥物化學(xué)雜志,2015,25:15-23.)合成了一系列2-咪唑基-1,4-戊二烯-3-酮類衍生物，發(fā)現(xiàn)該類化合物對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用。baldwin等(baldwin,p.r.；reeves,a.z.；powell,k.r.；napier,r.j.；swimm,a.i.；sun,a.；giesler,k.；bommarius,b.；shinnick,t.m.；snyder,j.p.；liotta,d.c.；kalman,d.monocarbonylanalogsofcurcumininhibitgrowthofantibioticsensitiveandreshistantstainsofmyco-bacoteriumtuberculosis[j].europeanjournalofmedicinalchemistry,2015,92:693-699.)設(shè)計(jì)合成了8種單羰基姜黃素衍生物，發(fā)現(xiàn)該類化合物對mycobacteriummarinum具有較好的抑制作用。

香豆素類化合物廣泛存在于自然界中，結(jié)構(gòu)類型多樣，具有抗癌、抗氧化、抗hiv、抗瘧疾、抗菌活性等較為廣譜的生物活性，已成為藥劑創(chuàng)制工作中的熱點(diǎn)。特別是近年來發(fā)現(xiàn)，天然香豆素類化合物不僅對部分惡性增殖細(xì)胞具有很好的選擇抑制活性，而且還能通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能產(chǎn)生抗癌作用。此外，香豆素在化工生產(chǎn)方面也具有重要的作用，如在化妝品和塑料制品中作為增香劑使用，由于其特殊的光學(xué)活性被廣泛的用作增白劑和熒光染料，由于其良好的光電性能被用于制備太陽能電池的有機(jī)光敏染料和生物蛋白研究中的熒光探針等。因此，香豆素作為今后新藥開發(fā)研究中的值得重視的資源之一，具有很大的開發(fā)前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的制備方法及其在抗癌活性方面的應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)的不足。合成的含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物對人體胃癌細(xì)胞sgc7901和肝癌細(xì)胞hepg2具有良好的抑制作用，可用于醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)，作抗腫瘤藥劑使用。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物，其通式如下所示：

其中，r1為苯基、取代苯基或取代芳雜環(huán)基；r2為在香豆素結(jié)構(gòu)中的5、6、7或8位上含有的一個(gè)以上的氫原子、甲氧基、硝基、甲基、三氟甲基或鹵原子。

所述的取代苯基為苯環(huán)上鄰、間、對或前述兩位上含有一個(gè)以上甲氧基、硝基、甲基、三氟甲基或鹵原子；所述的取代芳雜環(huán)基為呋喃基、吡啶基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、2-氯吡啶基或2-氯噻唑基。

一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的制備方法是以1-(2-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮和1-(4-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮與含取代基的4-氯香豆素發(fā)生醚化反應(yīng)，生成含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物：

所述的1-取代芳基-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮或1-取代芳基-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的制備方法為：(1)以丙酮、水楊醛或4-羥基苯甲醛為原料，在堿性條件下制備2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮或4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮:

(2)以取代芳香醛、2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮或4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮為原料，在堿性條件下制備1-取代芳基-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮或1-取代芳基-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮：

所述的含取代基的4-氯香豆素的制備方法為：(1)以含取代基的4-羥基香豆素和三氯氧磷原料制備含取代基的4-氯香豆素：

有益效果：本發(fā)明具體來講是提供了一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的制備方法及其在抗癌活性方面的應(yīng)用。本發(fā)明專利的特點(diǎn)如下：

1、本發(fā)明專利涉及的一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物是指上文所述通式(i)的含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物，其特征是1,5-二取代芳基-1,4-戊二烯-3-酮結(jié)構(gòu)中的酚羥基上連接有一個(gè)香豆素的結(jié)構(gòu)。

2、本發(fā)明所述的一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的制備是以水楊醛和對羥基苯甲醛與丙酮反應(yīng)羥醛縮合反應(yīng)生成4-(2-羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和4-(4-羥基苯基)-3-丁烯-2-酮，4-(2-羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和4-(4-羥基苯基)-3-丁烯-2-酮與取代芳香甲醛發(fā)生羥醛縮合反應(yīng)生成1-(2-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮和1-(4-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮，1-(2-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮和1-(4-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮與含取代基的4-氯香豆素發(fā)生醚化反應(yīng)，生成含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物。

3、本發(fā)明所述的一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物對人體胃癌細(xì)胞sgc7901和肝癌細(xì)胞hepg2具有良好的抑制作用。

4、本發(fā)明所述的一種含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物可用于醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)，作抗腫瘤藥劑使用。

附圖說明

圖1化合物在設(shè)定濃度下對胃癌sgc7901細(xì)胞作用24、48和72小時(shí)的形態(tài)學(xué)影響；

圖2化合物在設(shè)定濃度下對肝癌hepg2細(xì)胞作用24、48和72小時(shí)的形態(tài)學(xué)影響。

具體實(shí)施方式

總實(shí)施例：

(1)以丙酮、水楊醛或4-羥基苯甲醛為原料，在堿性條件下制備2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮或4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮:

(2)以取代芳香醛、2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮或4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮為原料，在堿性條件下制備1-取代芳基-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮或1-取代芳基-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮：

(3)以含取代基的4-羥基香豆素和三氯氧磷原料制備含取代基的4-氯香豆素：

(4)1-(2-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮和1-(4-羥基苯基)-5-(取代芳香基)-1,4-戊二烯-3-酮與含取代基的4-氯香豆素發(fā)生醚化反應(yīng)，生成含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物：

以下以列表的方式列出具體實(shí)施例，見下表：

實(shí)施例1

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-1)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：將4-羥基苯甲醛(6.1g)加入到60ml的丙酮中，攪拌約15min后，冰浴該反應(yīng)體系約30min后，向體系中加入約100ml的5％的naoh溶液，待滴加完畢后，撤去冰浴室，常溫?cái)嚢杓s24h。待反應(yīng)結(jié)束后，將體系轉(zhuǎn)移至500ml的燒杯中并加入適量冰水，而后用5％的稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系ph約為5～6后，有大量黃色固體析出，將固體抽出，最后用乙醇/水體系重結(jié)晶，即得黃色固體，產(chǎn)率65％。

(2)1-(2-吡啶基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：將4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮(4.0g)、吡啶-2-甲醛(2.86ml)和50ml乙醇加入到250ml的三口燒瓶中，攪拌約30min后，向體系中60ml的5％的naoh溶液,待滴加完畢后，撤去冰浴室，常溫?cái)嚢杓s24h。待反應(yīng)結(jié)束后，將體系轉(zhuǎn)移至500ml的燒杯中并加入適量冰水，而后用5％的稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系ph約為5～6后，有大量黃色固體析出，將固體抽出，即得黃色固體，產(chǎn)率80％。

(3)4-氯香豆素的合成：將4-羥基香豆素(3g)和三氯氧磷(30ml)置于100ml的三口瓶中攪拌，將三乙胺(9ml)緩慢滴加至反應(yīng)體系中，回流4h后將體系轉(zhuǎn)移至500ml的燒杯中，加入適量冰水后攪拌。而后用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉干燥有基層，去溶，得白色晶體，產(chǎn)率49％。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：將1-(2-吡啶基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮(0.83g)、4-氯香豆素(0.5g)、碳酸鉀(0.77g)和乙腈(60ml),待攪拌均勻后加熱回流，約3～4h后反應(yīng)結(jié)束，去溶，柱層析，得到黃色固體，產(chǎn)率62％。

實(shí)施例2

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(3-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-2)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(3-吡啶基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以吡啶-3-甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(3-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(3-吡啶基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例3

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2,4-二甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-3)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(2,4-二甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2,4-二甲氧基苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2,4-二甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2,4-而甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例4

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-苯基-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-4)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-苯基-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-苯基-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-苯基-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例5

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-6)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(2-甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-甲氧基苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例6

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-7)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(4-氯苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以4-氯苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氯苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(4-氯苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例7

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(3,4-二甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-7)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(3,4-二甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以3,4-二甲氧基苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(3,4-二甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(3,4-而甲氧基苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例8

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-呋喃基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-8)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(2-呋喃基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以呋喃-2-甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-呋喃基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-呋喃基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例9

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-噻吩基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-9)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-(2-噻吩基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和噻吩-2-甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-噻吩基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-噻吩基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例10

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-10)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-(2-甲氧基苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和2-甲氧基苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-甲氧基苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例11

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-11)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-(4-氟苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和4-氟苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(4-氟苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例12

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-12)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-(4-甲氧基苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和4-甲氧基苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(4-甲氧基苯基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例13

1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-13)，包括以下步驟：

(1)2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步，區(qū)別在于以水楊醛為原料。

(2)1-(2-吡啶基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以2-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮和吡啶-2-甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(2-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-吡啶基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-吡啶基)-5-(2-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例14

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-14)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(4-氟苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以4-氟苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(4-氟苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(4-氟苯基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例15

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-噻吩基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-15)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-(2-噻吩基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以噻吩-2-甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-(2-噻吩基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-(2-噻吩基)-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

實(shí)施例16

1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-苯基-1,4-戊二烯-3-酮的合成(化合物編號(hào)為ii-16)，包括以下步驟：

(1)4-(羥基苯基)-3-丁烯-2-酮的合成：如實(shí)施例1第(1)步。

(2)1-苯基-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(2)步，區(qū)別在于以苯甲醛為原料。

(3)4-氯香豆素的合成：如實(shí)施例1第(3)步。

(4)1-(4-(4-香豆素基)苯基)-5-苯基-1,4-戊二烯-3-酮的合成：如實(shí)施例1第(4)步，區(qū)別在于以1-苯基-5-(4-羥基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮為原料。

合成的含含香豆素的1,4-戊二烯-3-酮類衍生物的理化性質(zhì)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)見表1，核磁共振氫譜(¹hnmr)和碳譜(¹³cnmr)數(shù)據(jù)見表2和表3。

表1目標(biāo)化合物理化性質(zhì)及其質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)

表2目標(biāo)化合物核磁共振氫譜數(shù)據(jù)

表3目標(biāo)化合物核磁共振碳譜數(shù)據(jù)

上述目標(biāo)化合物的抗腫瘤活性

測試方法

a.細(xì)胞株的培養(yǎng)和藥劑的處理：人體胃癌細(xì)胞sgc7901和肝癌細(xì)胞hepg2用10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基，在溫度為37℃，二氧化碳為5％的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2天換一次培養(yǎng)液，4-6天傳一次代取對數(shù)生長期細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象。細(xì)胞用0.05％胰蛋白酶(含0.5mmedta)消化處理。10mm化合物溶解于dmso作為儲(chǔ)備液。在使用前，直接用培養(yǎng)基將其稀釋到所需濃度。空白對照組加入與藥物同體積的dmso，陽性對照組加入與被測藥物同濃度的表柔比星。處理藥劑中的dmso最終濃度不超過0.1％(v/v)。

b.mtt比色法體外抗腫瘤藥物篩選實(shí)驗(yàn)原理：mtt是一種接受氫離子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素c的作用下四唑環(huán)開裂，生成藍(lán)紫色的甲甲瓚結(jié)晶。甲瓚結(jié)晶的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜、sds可溶解該結(jié)晶，利用酶標(biāo)儀測定595nm處的吸光度，可以間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。在一定的細(xì)胞范圍之內(nèi)，mtt形成的結(jié)晶物的數(shù)量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。

c.mtt比色法體外抗腫瘤藥物篩選實(shí)驗(yàn)步驟：將96孔板的上、下行用滅菌二次水封邊，每孔200μl。取對數(shù)生長期細(xì)胞，常規(guī)消化后，重懸于含10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基中，以4×10⁴個(gè)/ml的終濃度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100μl，最右側(cè)一列為空白對照組，加無細(xì)胞的有血清rpmi1640培養(yǎng)基。置于37℃、5％co2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使細(xì)胞貼壁。吸掉培養(yǎng)基，加入含不同藥物濃度的有血清培養(yǎng)基，每孔200μl，注意培養(yǎng)基中dmso終濃度不能超過0.1％，空白對照組每孔加200μl完全培養(yǎng)基。分別處理實(shí)驗(yàn)要求時(shí)間，去除上清，加100μl/well濃度0.5mg/ml的mtt。培養(yǎng)4h后再補(bǔ)加100μl/well的10％的sds。37℃下10h使結(jié)晶物充分溶解后取出，微震蕩5min，放置室溫下30min，在a595波長下測od值，并計(jì)算細(xì)胞活性、抑制率和p值。

以藥物濃度或處理時(shí)間為橫軸，od值或者抑制率為縱軸，繪制曲線。每樣本濃度重復(fù)六個(gè)孔，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值為最終結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以spss軟件進(jìn)行方差分析，p<0.05時(shí)為差異顯著，p<0.01時(shí)為差異極顯著。細(xì)胞增殖的抑制率計(jì)算公式如下：

表4目標(biāo)化合物設(shè)定濃度下對胃癌sgc7901細(xì)胞作用72小時(shí)的體外抑制率

采用mtt法，以商品藥劑表柔比星為陽性對照，在測試濃度為1μm和10μm時(shí)，測試了目標(biāo)化合物對胃癌sgc7901細(xì)胞的抑制活性(見表4)。該測試結(jié)果表明：大部分目標(biāo)化合物對胃癌sgc7901細(xì)胞表現(xiàn)有良好的抑制活性。在濃度為10μm時(shí)，該系列化合物(化合物ii-7和ii-15除外)對胃癌sgc7901細(xì)胞的活性抑制范圍為85.56％～98.77％，優(yōu)于對照藥劑表柔比星(78.38％)；在濃度為1μm時(shí)，化合物ii-3、ii-10、ii-12和ii-13對胃癌sgc7901細(xì)胞表現(xiàn)有良好的抑制活性，其抑制率分別為86.98％、80.83％、42.73％和43.69％，優(yōu)于對照藥劑表柔比星(42.43％)。尤其是化合物ii-3和ii-10對胃癌sgc7901細(xì)胞表現(xiàn)有優(yōu)異的抑制活性，其抑制活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)由于表柔比星。

表5目標(biāo)化合物設(shè)定濃度下對肝癌hepg2細(xì)胞作用72小時(shí)的體外抑制率

在測試濃度為1μm和10μm時(shí)，測試了目標(biāo)化合物對肝癌hepg2細(xì)胞的抑制活性(見表5)。該測試結(jié)果表明：大部分目標(biāo)化合物對肝癌hepg2細(xì)胞表現(xiàn)有良好的抑制活性。在濃度為10μm時(shí)，該系列化合物(化合物ii-4、ii-7、ii-8和ii-16除外)對肝癌hepg2細(xì)胞的活性抑制范圍為85.80％～99.94％，優(yōu)于對照藥劑表柔比星(81.64％)；在濃度為1μm時(shí)，該系列化合物(化合物ii-9除外)對肝癌hepg2細(xì)胞表現(xiàn)有良好的抑制活性，其抑制率均優(yōu)于對照藥劑表柔比星(1,36％)。尤其是化合物ii-12和ii-13對肝癌hepg2細(xì)胞表現(xiàn)有優(yōu)異的抑制活性(分別為66.69％和44.52％)，其抑制活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)由于表柔比星。

為進(jìn)一步了解該類化合物的抗癌活性，我們研究了胃癌sgc7901細(xì)胞和肝癌hepg2細(xì)胞在電鏡下的形態(tài)，并用電鏡記錄下了藥劑處理24、48和72小時(shí)后的胃癌sgc7901細(xì)胞和肝癌hepg2細(xì)胞的形態(tài)，具體如下圖所示(注：標(biāo)號(hào)ii-1～ii-11分別對應(yīng)下圖中的2-a-1～2-a-11；標(biāo)號(hào)ii-12～ii-16分別對應(yīng)下圖中的2-a-13～2-a-17):

以上數(shù)據(jù)表明：該類化合物都對胃癌sgc7901細(xì)胞和肝癌hepg2細(xì)胞有良好的抑制活性。甚至有些化合物的抑制活性與陽性藥表柔比星相比，在同樣的劑量和作用時(shí)間要高于陽性藥(見表4和5)。最值得一提的是陽性藥對腫瘤細(xì)胞的毒性明顯太大(使得細(xì)胞全部破碎裂解)，而我們這些新的化合物在低濃度下基本對目標(biāo)細(xì)胞損傷很小，這種抑制活性主要體現(xiàn)在抑制細(xì)胞的增殖(細(xì)胞數(shù)量與對照相比明顯變少)，或者誘導(dǎo)細(xì)胞分化(從形態(tài)學(xué)觀察我們不難發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在數(shù)目減少的同時(shí)，細(xì)胞發(fā)生了變形，但是損傷不是很明顯)，但是總體上隨著化合物濃度的提高抑制活性明顯增強(qiáng)。其中部分化合物對胃癌sgc7901細(xì)胞和肝癌hepg2細(xì)胞具有優(yōu)異的抑制活性，可用作潛在的抗腫瘤藥劑使用。