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一種側孢芽孢桿菌的新型培養(yǎng)方法與流程

文檔序號:12644459閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種側孢芽孢桿菌的培養(yǎng)方法,所述方法包括如下步驟:

S1:側孢芽孢桿菌菌株活化,無菌水沖洗,得到種子液;

S2:使用第一培養(yǎng)液對種子液進行擴增培養(yǎng),得到第一擴增培養(yǎng)液;

S3:使用第二培養(yǎng)液對第一擴增培養(yǎng)液進行培養(yǎng),得到第二擴增培養(yǎng)液;

S4:第二擴增培養(yǎng)液進行液體發(fā)酵培養(yǎng),得到發(fā)酵液;

S5:將發(fā)酵液淋入固體培養(yǎng)基中進行固體發(fā)酵,并進行后處理,得到側孢芽孢桿菌發(fā)酵菌劑,從而完成側孢芽孢桿菌的所述培養(yǎng)方法。

2.如權利要求1所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述步驟S1具體如下:

S1-1:選擇側孢芽孢桿菌菌株,并在無菌條件下接種于斜面培養(yǎng)基上進行活化培養(yǎng),得到活化菌株;

S1-2:無菌水清洗斜面,得到所述種子液。

3.如權利要求2所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:步驟S1中,每100g所述斜面培養(yǎng)基的組成為:瓊脂5-6g、蛋白胨3-4g、酵母浸膏0.02-0.03g、黃豆粉2-3g、玉米粉0.8-1.4g、牛肉膏3-4g、氯化鈉0.2-0.5g、葡萄糖0.06-0.1g,余量為無菌水,并調節(jié)pH值為7-7.2。

4.如權利要求1-3任一項所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述步驟S2具體如下:

S2-1:配制第一培養(yǎng)液

分別稱取如下的物質:金屬元素水溶液25ml、維生素E 1.5g、檸檬酸0.15g、L-脯氨酸0.2mg、蔗糖2.5g、瓊脂8g、蛋白胨12g、酵母浸膏1.4g、硫酸銨1g、磷酸鈉2.5g、牛肉膏3.5g和硝酸鈉4g;

將上述物質加入到去離子水中,充分攪拌完全,并用去離子水定容至1000ml,即得到所述第一培養(yǎng)液。

S2-2:按照1:40-50的體積比,將所述種子液接種于所述第一培養(yǎng)液中,在34-36℃下通風振蕩培養(yǎng)20-24小時,從而得到所述第一擴增培養(yǎng)液。

5.如權利要求4所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:步驟S2-1中,所述金屬元素水溶液是將2.5g硫酸錳、3g氯化鋅、4g硫酸鎂、1.5g氯化鈷、2g硝酸銅、3g氯化鈣、4g氯化亞鐵、3g氯化鐵充分溶解于1000ml蒸餾水中而得到的。

6.如權利要求4-5任一項所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:步驟S2-2中,所述通風所通入的氣體中,氧氣體積含量為14-20%,優(yōu)選為16-18%,最優(yōu)選為17%。

7.如權利要求1-6任一項所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述步驟S3具體如下:

S3-1:將第一培養(yǎng)液中的酵母浸膏用量減半,且金屬元素水溶液的用量增大一倍,其它均不變,從而得到所述第二培養(yǎng)液;

S3-2:按照1:30-35的體積比,將所述第一擴增培養(yǎng)液接加入到所述第二培養(yǎng)液中,在34-36℃下通入空氣振蕩培養(yǎng)14-16小時,從而得到所述第二擴增培養(yǎng)液。

8.如權利要求1-7任一項所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述步驟S4具體如下:

將所述第二擴增培養(yǎng)液加入到為其體積20-30倍的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進行兩段式升溫發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵培養(yǎng)總時間為10-12小時,期間一直通入空氣,通入空氣的通風比為1:0.6-1,例如可為1:0.6、1:0.8或1:1,從而得到所述發(fā)酵液;

其中,所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基以每升(L)計,包含酵母浸膏0.5g、蛋白胨2g、麥芽糖4g、葡萄糖1g、硫酸錳0.6g、氯化鈉3.8g、黃豆粉7g、硼酸1.5g、硝酸鉀2.5g、尿素6g、賴氨酸0.7g和硫酸銨1.5g,余量為無菌水。

9.如權利要求8所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:其中,所述兩段式升溫發(fā)酵培養(yǎng)是指在發(fā)酵培養(yǎng)總時間的前一半時間中,發(fā)酵溫度為32-34℃,然后在10分鐘內將溫度升高至38-40℃,并在該溫度下完成后續(xù)剩余時間的發(fā)酵。

10.如權利要求1-9任一項所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述步驟S5具體如下:

按照質量比1:10-14的比例,將所述發(fā)酵液淋入固體培養(yǎng)基中,再加入適量去離子水,使整體的水分質量含量為32-36%,然后充分翻拌均勻,裝入長度為3米、寬度為1.5米和深度為1.5米的發(fā)酵槽中,自然堆積發(fā)酵60-70小時,期間始終保持整體的水分質量含量為32-36%,并通入無菌風保持發(fā)酵槽內部的中心溫度為56-60℃;發(fā)酵結束后,通熱風干燥,直至水分質量含量低于5%,得到發(fā)酵菌劑,從而完成所述培養(yǎng)方法。

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