背景技術(shù)：

卡巴他賽，英文名為Cabazitaxel，化學(xué)名為4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β,20-環(huán)氧-1-羥基-7β,10β-二甲氧基-9-氧代紫杉-11-烯-13α-基(2R,3S)-3-叔丁氧羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯，IUPAC名稱是(2α，5β，7β，10β，13α)-4-acetoxy-13-({(2R,3S)-3[(tert-butoxy carbonyl)amino]-2-hydroxy-3-phenylpropanoyl}oxy)-1-hydrox y-7,10-dimethoxy-9-oxo-5,20-epoxytax-11-en-2-yl-benzoate，是由法國Sanofi-aventi s公司研發(fā)的一種化學(xué)半合成紫杉烷類小分子化合物，并于2010年6月在美國批準(zhǔn)上市的前列腺癌的二線藥物，結(jié)構(gòu)如式I所示：

卡巴他賽Cabazitaxel的抗癌作用機(jī)制和特點與多西他賽相似，屬于抗微管類藥物。卡巴他賽通過與微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)其組裝成微管，同時阻止已組裝好了的微管解體，使微管穩(wěn)定，進(jìn)而抑制細(xì)胞的有絲分裂和間期細(xì)胞功能的發(fā)揮，是第一個在使用常用晚期前列腺癌藥物多烯紫杉醇無效甚至病情加重時首選的治療晚期、抗激素型前列腺癌的藥物?？ò退悶槿莸挚剐郧傲邢侔┗颊咛峁┝艘环N新型治療，這給前列腺癌患者帶來了希望，雖然只獲得了中度收益，但證實了前列腺癌免疫治療的有效性。進(jìn)入III期試驗的治療策略，包括對雄激素受體信號更強(qiáng)有力的抑制，骨轉(zhuǎn)移中新型信號通路的調(diào)節(jié)(這會影響到90％以上的晚期前列腺患者)，以及加強(qiáng)抗腫瘤免疫。

原研賽諾菲-安萬特公司公開卡巴他賽的合成工藝和晶型專利，其專利如下：CN 100429207 C和CN101918385 A。近幾年，在原研研究的基礎(chǔ)上，國內(nèi)各科研單位及醫(yī)藥企業(yè)相繼也公開了許多不同的合成工藝，從2011年至今，國內(nèi)公開的專利主要有如下：CN 102285947 A、CN 102311410 A、CN 102336726 A、CN102417491 A、CN 102532064 A、CN 102532065 A、CN 102659721 A、CN 102675256A、CN 102786502 A、CN102746258 A、CN103467416A等；縱觀現(xiàn)有專利可以看出，制備卡巴他賽的主要難點在于第一步紫杉醇提取物10-DAB的C-7、C-10位甲基化反應(yīng)，其可引入大量的副產(chǎn)物，對反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑的要求較為嚴(yán)格，亦或采用其他保護(hù)基間接反應(yīng)，然而無論采用何種方法，對藥品生產(chǎn)企業(yè)而言都會帶來諸多不便。鑒于，目前在國內(nèi)可以合法獲得C-7、C-10位雙甲基10-DAB即式II所示化合物，因此，采用7，10-雙甲氧基-10-DAB作為起始原料進(jìn)行制備卡巴他賽，可縮短了反應(yīng)周期，減少企業(yè)的生產(chǎn)難度，利于后期工業(yè)化生產(chǎn)的實現(xiàn)。在其他文獻(xiàn)報道的卡巴他賽的制備方法，即使以7，10-雙甲氧基-10-DAB作為起始原料，都是先進(jìn)行縮合反應(yīng)、將中間體化合物IV分離純化后，再進(jìn)行水解反應(yīng)?；衔颕V的純化過程增加了反應(yīng)操作，延長了周期，不利于工業(yè)大生產(chǎn)。

另一方面，晶型是影響藥物質(zhì)量、療效和制劑加工性能的重要因素之一。多晶型現(xiàn)象，是指同一化合物，通過控制其不同的生成條件，可形成兩種或兩種以上的分子空間排列方式，從而產(chǎn)生不同的固體結(jié)晶的現(xiàn)象。藥物多晶型是藥品研發(fā)中的常見現(xiàn)象，是影響藥品質(zhì)量的重要因素。同一化合物的不同晶型，其化學(xué)組成相同，但微觀晶體結(jié)構(gòu)不同，因而導(dǎo)致它們在外觀形態(tài)、理化性質(zhì)和生物活性上存在差異。這些特性直接影響藥物的制劑加工性能，并且會影響藥物的穩(wěn)定性、溶解度和生物利用度，進(jìn)而影響到藥物的質(zhì)量、安全性、有效性及其應(yīng)用。因此，在藥品研發(fā)中，應(yīng)全面考慮藥品的多晶型問題。

目前，卡巴他賽已知存在多種晶型，專利WO2005/028462確定并表征了卡巴他賽晶型A，即4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-環(huán)氧-1-羥基-7β，10β-二甲氧基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基醇的(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯的丙酮合物形式。

專利WO2009/115655確定并表征了卡巴他賽的無水物形式B、C、D、E、F，乙醇合物形式B、D、E，乙醇/水異溶劑合物F，一水合物形式C和二水合物形式C。

專利CN102746258確定并表征卡巴他賽的酯合物形式晶型J、水合物形式晶型G和晶型Ⅰ。

專利CN105849093確定并表征了卡巴他賽的無水晶型H。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種卡巴他賽的制備方法以及一種新型的無水化合物，制備方法使用7,10-雙甲氧基10-DAB即式II所示與III所示化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)，得到式IV所示化合物，該化合物不經(jīng)分離純化，按照“一鍋法”的處理手段，直接采用溫和的方式脫去保護(hù)基得到卡巴他賽粗品，通過進(jìn)一步的純化制備出高純度的卡巴他賽，減少了反應(yīng)步驟，縮短了反應(yīng)周期，非常有利于工業(yè)化生產(chǎn)，且制備出來的無水化合物晶型穩(wěn)定，具有廣泛的應(yīng)用前景，具體反應(yīng)式如下：

式III和IV，其中R₁選自1-甲基-1-甲氧基乙基醚(MIP-OR)、1-乙氧基乙基醚(EE-OR)或者甲氧基異丙基等羥基保護(hù)基團(tuán)；

具體步驟為：

步驟1：在醚類溶劑或DMSO、DMF、THF、DMA中，式II所示化合物與過量的III所示化合物混合、在催化量的無機(jī)堿或有機(jī)堿催化下進(jìn)行縮合反應(yīng)，然后在酸性條件下進(jìn)行水解，得到式I所示化合物粗品卡巴他賽；

步驟2：將粗品卡巴他賽用碳原子數(shù)為1～6的酯類與碳原子數(shù)為1～5的鹵代烷烴混合溶劑攪拌，然后抽濾，濾餅干燥即得單雜小于0.1％，總雜小于1.0％的高純度卡巴他賽；

步驟3：卡巴他賽溶于醇類溶劑中，攪拌下滴入水中，攪拌，過濾，濾餅用水洗滌，真空干燥得所述卡巴他賽無水化合物。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述式II所示化合物、所述式III所示化合物和所述無機(jī)堿或有機(jī)堿的摩爾比為1：1～5：0.10～0.75，優(yōu)選比例為：1.0：2.0：0.5。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述反應(yīng)溫度為-5～5℃，所述反應(yīng)時間為1～10h，優(yōu)選反應(yīng)溫度為0℃，優(yōu)選反應(yīng)時間為4h。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述溶劑包括四氫呋喃、DMSO、DMF、DMA中的一種或兩種以上的混合物，優(yōu)選于四氫呋喃。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述的無機(jī)堿或有機(jī)堿包括NaHMDS、LiHMDS、KHMDS、NaH、n-BuLi、KH中的一種或兩種以上的混合物，優(yōu)選于LiHMDS。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述酸性條件具體為四氫呋喃和0.2～1.0N稀鹽酸的混合溶液，優(yōu)選為0.2N稀鹽酸；以g/mL計，所述式IV所示化合物與所述四氫呋喃和0.2～1.0N稀鹽酸的質(zhì)量體積比為1：1～10，優(yōu)選為1：10；所述四氫呋喃和0.2～1.0N稀鹽酸的體積比為1～10：1～10，優(yōu)選為1:10。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟1中所述水解反應(yīng)溫度為25～50℃，優(yōu)選為25℃。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟2中所述碳原子數(shù)為1～6酯類化合物為乙酸乙酯、甲酸乙酯、丙二酸二乙酯，優(yōu)選于乙酸乙酯。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟2中所述碳原子數(shù)為1～5的鹵代烴為二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、三氯乙烷、氯代丙烷或氯代丁烷，優(yōu)選于二氯甲烷。

本發(fā)明提供的一些實施例中，式I所示化合物卡巴他賽的制備方法中，步驟2中所述碳原子數(shù)為1～6的酯類與碳原子數(shù)為1～5的鹵代烷烴混合溶劑的比例為10～30：1，優(yōu)選于30：1；以g/mL計，所述式IV所示化合物與所述所述碳原子數(shù)為1～6的酯類與碳原子數(shù)為1～5的鹵代烷烴混合溶劑質(zhì)量體積比為1：10～30，優(yōu)選為1：15。

本發(fā)明提供的一些事實案例中，步驟3所述醇類與水的比例為1:5-20，優(yōu)選為1:5；醇類溶劑包括甲醇、乙醇等醇類溶劑，真空干燥溫度為40-120℃。

本發(fā)明按照“一鍋法”的處理手段，直接采用溫和的方式脫去保護(hù)基得到卡巴他賽粗品，通過進(jìn)一步的純化制備出高純度的卡巴他賽，減少了反應(yīng)步驟，縮短了反應(yīng)周期，非常有利于工業(yè)化生產(chǎn)，且制備出來的無水化合物晶型穩(wěn)定，具有廣泛的應(yīng)用前景。

本發(fā)明制備的卡巴他賽無水合物晶型具有以下的優(yōu)勢：無殘留溶劑、優(yōu)異的化學(xué)純度和藥物溶解性；制備工藝簡單，沒有分離純化過程，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的新型卡巴他賽無水化合物可用作藥物，尤其是用于治療癌癥，例如非小細(xì)胞肺癌、移行細(xì)胞癌、脂肪肉瘤、激素難治性前列腺癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性前列腺癌癥、腦腫瘤等，優(yōu)選用于前列腺癌。

附圖說明

圖1示本發(fā)明實施1提供的卡巴他賽HPLC圖譜；

圖2示本發(fā)明實施2提供的卡巴他賽HPLC圖譜；

圖3示本發(fā)明實施3提供的卡巴他賽HPLC圖譜；

圖4-6示本發(fā)明實施4提供的卡巴他賽無水結(jié)晶單晶X射線衍射圖譜；

圖7示本發(fā)明實施例4提供的卡巴他賽的無水結(jié)晶X射線粉末衍射圖譜；

圖8示本發(fā)明實施4提供的卡巴他賽無水結(jié)晶差示掃描量熱法(DSC)圖譜；

具體實施方式

本發(fā)明公開了一種卡巴他賽的制備方法以及無水晶型卡巴他賽，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實施例1 5g

氮氣保護(hù)下，將5.0g(8.75mmol)式II所示化合物和6.0g(17.8mmol)溶于50ml無水四氫呋喃，冰浴降溫至0℃，滴加8.7mL(8.75mmol)LiHMDS，控制溫度小于10℃反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，加入50mL水淬滅反應(yīng)，再加入60ml四氫呋喃，加入0.2N鹽酸11mL，控制溫度25℃反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，加入200mL乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液100mL，萃取分層，收集有機(jī)層，飽和氯化鈉溶液100mL洗滌三次，純化水100mL洗滌一次，無水硫酸鎂干燥2h，減壓蒸餾的粗品卡巴他賽，HPLC檢測純度大于90.0％。

將10g粗品卡巴他賽溶于150mL乙酸乙酯和10mL二氯甲烷中攪拌8h，抽濾得到白色固體卡巴他賽精品，HPLC檢測純度大于99.0％，見圖1。

實施例2 30g

氮氣保護(hù)下，將30g(52.3mmol)式II所示化合物和37g(110.3mmol)溶于50ml無水四氫呋喃，冰浴降溫至0℃，滴加52.3mL(52.3mmol)LiHMDS，控制溫度小于10℃反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，加入100ml水淬滅反應(yīng)，再依次加入100ml四氫呋喃和0.2N鹽酸20ml，控制溫度25℃反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，加入200mL乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液100mL，萃取分層，收集有機(jī)層，飽和氯化鈉溶液100mL洗滌三次，純化水100mL洗滌一次，無水硫酸鎂干燥2h，減壓蒸餾的到11g粗品卡巴他賽，HPLC檢測純度大于90.0％。

將45g粗品卡巴他賽溶于350mL乙酸乙酯和20mL二氯甲烷中攪拌8h，抽濾得到白色固體卡巴他賽精品，HPLC檢測純度大于99.0％，見圖2。

實施例3 100g

氮氣保護(hù)下，將100g(174.6mmol)式II所示化合物和120g(357mmol)溶于100ml無水四氫呋喃，冰浴降溫至0℃，滴加174mL(174mmol)LiHMDS，控制溫度小于10℃反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，加入200mL水淬滅反應(yīng)，依次加入200ml四氫呋喃和0.2N鹽酸50mL，控制溫度25℃反應(yīng)6h，反應(yīng)結(jié)束后，加入600mL乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液300mL，萃取分層，收集有機(jī)層，飽和氯化鈉溶液300mL洗滌三次，純化水300mL洗滌一次，無水硫酸鎂干燥2h，減壓蒸餾的到粗品卡巴他賽，HPLC檢測純度大于90.0％。

將110g粗品卡巴他賽溶于1500mL乙酸乙酯和100mL二氯甲烷中攪拌8h，抽濾得到白色固體卡巴他賽精品，HPLC檢測純度大于99.0％，核磁共振檢測結(jié)果顯示，¹H譜(400MHz；CDCl₃；δ以ppm為單位；耦合常數(shù)J,以Hz為單位)：1.14(s,3H,CH₃)；1.28(s,3H,CH₃)；1.38(s,9H,C(CH₃)；1.74(s,1H,OH)；1.94(s,3H,CH₃)；1.98(s,3H,CH₃)；2.20～2.27(2dd,J＝16Hz,2H,14位*CCH₂)；2.25～2.84(m,2H,6位*CCH₂)；2.55(s,3H,COCH₃)；4.02(s,1H,10位OH)；4.04(d,J＝7Hz,1H,3位CH)；4.24～4.38(m,2H,20位CH2)；4.54(s,1H,2位H)；4.96(m,1H,5位H)；5.28(m,1H,3位H)；5.38(s,1H,10位H)；5.44(dd,J＝10和7.5Hz,1H,7位H)；5.52(d,J＝10Hz,1H,CONH)；5.74(dd,J＝7Hz,1H,2位H)；6.34(t,J＝9Hz,1H,13位H)；7.24～7.40(m,5H,3’位芳族化合物)；7.50(t,J＝7.5Hz,2H,間位OCOC₆H₅H)；7.63(t,J＝7.5Hz,1H,對位OCOC₆H₅H))；8.12(d,J＝7.5Hz,2H,鄰位OCOC₆H₅H)，HPLC檢測純度為99.75％，見圖3。

實施例4

將100g卡巴他賽溶于500ml乙醇，緩慢滴加到2.5L水中，攪拌1h,抽濾，105度下烘料30h，得到無水卡巴他賽晶型。

將實施例4制備的卡巴他賽無水合物結(jié)晶進(jìn)行單晶X射線衍射實驗。其單晶X-射線衍射圖譜見圖4-6。

將實施例4制備的卡巴他賽無水合物結(jié)晶進(jìn)行X射線粉末衍射實驗。經(jīng)過實驗表征，其X射線粉末衍射圖的2-theta在7.3099±0.2°,7.7968±0.2°,8.1665±0.2°,9.8706±0.2°,10.3414±0.2°,11.1464±0.2°,12.6816±0.2°,13.0260±0.2°,14.2842±0.2°,15.3433±0.2°,15.8223±0.2°,16.3962±0.2°,17.1633±0.2°,17.6038±0.2°,17.9544±0.2°,18.4899±0.2°，18.8239±0.2°，19.6630±0.2°,20.4986±0.2°,21.9593±0.2°,22.6240±0.2°和23.9552±0.2°處有衍射峰，見圖7。

將實施例4的卡巴他賽無水合物結(jié)晶進(jìn)行差示掃描量熱分析(DSC)實驗。該實驗采用Netzsch DSC 204F1Phoenix檢測儀器進(jìn)行分析，熱流量記錄于20-190℃，線性升溫速率(10℃/min)其圖譜見附圖8，其DSC圖譜在150.2±2℃和160.0±2℃有明顯的結(jié)晶放熱峰，見圖8。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。