本發(fā)明涉及具有抗腫瘤作用的噻唑啉取代的查爾酮類衍生物、其制備方法以及在制備抗腫瘤藥方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤極大威脅人類健康，抗腫瘤藥物研究是當(dāng)今生命科學(xué)中極富挑戰(zhàn)性且意義重大的領(lǐng)域。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年約有800萬(wàn)人死于惡性腫瘤，我國(guó)每年因癌癥死亡病例達(dá)275萬(wàn)人。癌癥已成為我國(guó)死亡第一原因，死亡人數(shù)約占全球癌其死亡人數(shù)四分之一。目前國(guó)際上臨床常用的抗腫瘤藥物已達(dá)到100余種，在臨床上治療效果也較明顯，但是大多數(shù)抗腫瘤藥物毒副作用較大，特異性低，選擇性差，容易產(chǎn)生嚴(yán)重的癌癥多藥耐藥現(xiàn)象。

隨著分子生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科的飛速發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到細(xì)胞癌變的本質(zhì)是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)胞無(wú)限增殖。當(dāng)今抗癌癥藥物正從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物，向針對(duì)細(xì)胞內(nèi)異常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的新型抗癌癥藥物發(fā)展。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)注研究最多的抗癌作用的新靶點(diǎn)之一的是蛋白酪氨酸激酶(Protein tyrosine kinases，PTKs) ，按其結(jié)構(gòu)可分為受體型酪氨酸激酶(receptor Protein tyrosine kinase，RPTKs)和非受體型(non-receptor Protein tyrosine kinases，nrPTKs)兩種。蛋白酪氨酸激酶目前有超過(guò)20多個(gè)分屬不同家族的受體和非受體酪氨酸激酶被作為靶標(biāo)進(jìn)行抗癌藥物篩選，其抑制劑已經(jīng)有幾個(gè)上市，為了尋找活性更好的藥物，近年來(lái)，分子靶向藥物治療由單靶點(diǎn)向多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑發(fā)展，成為抗腫瘤藥物研究開(kāi)發(fā)的重要方向。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一類具有式I的噻唑啉取代的查爾酮類及其藥學(xué)上可以接受的鹽。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備具有式I的化合物及其藥學(xué)上可以接受的鹽的制備方法。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有式I的化合物及其其藥學(xué)上可以接受的鹽作為有效成分，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥用組合物，以其在抗腫瘤方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)。

本發(fā)明具有式I的化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：

式中：

R¹為H或處于苯環(huán)不同取代位置及不同取代數(shù)的鹵素、烷烴基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)芳基、羥基、烷氧基、硝基、氨基、-CN、-(CO)R³、-NR⁴R⁵、-C(O)NR⁶R⁷、-(CH₂)nR⁸、-SO₂R⁹、-S(O)₂NR⁴R⁵；

R²為H或處于苯環(huán)不同取代位置及不同取代數(shù)的鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基、烷烴基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、羥基、硝基、氨基、-CN、-(CO)R³、-NR⁴R⁵、-C(O)NR⁶R⁷、-(CH₂)nR⁸、-SO₂R⁹、-S(O)₂NR⁴R⁵；

R³為羥基、烷氧基、芳氧基；

R⁴為H、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基；

R⁵為H、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或R⁴、R⁵與N組合成雜環(huán)基；

R⁶為H、烷基、芳基；

R⁷為H、烷基、芳基；

R⁸為H、-(CO)R³、-NR⁴R⁵、-C(O)NR⁶R⁷、-SO₂R⁹、-S(O)₂NR⁴R⁵；

R⁹為烷基、芳基、芳烷基、雜芳基；

n為1、2、3、4。

其中優(yōu)選的結(jié)構(gòu)式R¹為H或處于苯環(huán)不同取代位置及不同取代數(shù)的CH₃、Cl、Br、F、CH₃O、NO₂、-CH₃CH₂O；R²為H或處于苯環(huán)不同取代位置及不同取代數(shù)的CH₃、Cl、Br、F、CH₃O、NO₂、-CH₃CH₂O或。

其式（I）化合物所述鹽的形式為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乙酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、甲磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、草酸鹽。

從結(jié)構(gòu)式可以看出，噻唑啉取代的查爾酮類也可稱為(E)-1-(2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-2-噻唑啉-5)-3-芳基-丙-2-烯-1-酮衍生物。

本發(fā)明進(jìn)而提供一種工藝操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和、安全性高、反應(yīng)收率較高、穩(wěn)定、產(chǎn)品純度高、對(duì)環(huán)境污染小的噻唑啉取代的查爾酮類制備方法。

所述的(E)-1-(2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-2-噻唑啉-5)-3-芳基-丙-2-烯-1-酮衍生物的制備方法包括先由2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-5-乙酰基-4-2,3-二氫噻唑和取代苯甲醛在堿性條件下進(jìn)行Claisen-Schmidt縮合反應(yīng)得到式()化合物。反應(yīng)方程式如下：

所述的合成方法包括： 2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-5-乙?；?4-2,3-二氫噻唑和芳甲醛在有機(jī)溶劑中于-10～20℃下攪拌反應(yīng)， 滴加堿液，滴加完畢。自然升溫到常溫20-25℃反應(yīng)4～26小時(shí)，倒入冰水中，調(diào)pH至弱酸性，析出固體物，過(guò)濾，重結(jié)晶后即得。

所述的反應(yīng)原料摩爾比為2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-5-乙?；?4-2,3-二氫噻唑：芳甲醛為1：1.1～2.5。

所述的有機(jī)溶劑I為乙醇、甲醇、四氫呋喃、二氧六環(huán)等中的一種或一種以上任意比例的混合物，溶劑用量為2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-5-乙?；?4-2,3-二氫噻唑的5-20倍。優(yōu)選為甲醇：四氫呋喃=3:1，用量為2-亞胺基-3-芳基-4-甲基-5-乙?；?4-2,3-二氫噻唑的9-20倍。

上述反應(yīng)的堿液為10-40%KOH或10-40%NaOH溶液或三乙胺。

本發(fā)明還包括式(I)所述的噻唑啉取代的查爾酮類及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述式(I)化合物具有針對(duì)癌癥的抑制作用，可作為有效成分用于制備癌癥方面的治療藥物。本發(fā)明所述(I)化合物的活性是通過(guò)體外抗腫瘤活性模型驗(yàn)證的。

本發(fā)明所述式(I)化合物的有益效果體現(xiàn)在：

(1)本發(fā)明得到了一類結(jié)構(gòu)特殊的新化合物噻唑啉取代的查爾酮類。

(2)采用本發(fā)明的溶劑與反應(yīng)條件，可較高收率的得到目標(biāo)產(chǎn)物，并且后處理方便，粗品純度足夠可直接作為下一步反應(yīng)。

(3)目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)BGC-823、PC-3、NCI-H460、BEL-7402體外篩選，發(fā)現(xiàn)具有一定的生物活性。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，下述實(shí)例例僅是用于說(shuō)明，而并非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)所做出的各種變化均應(yīng)在本申請(qǐng)權(quán)利要求所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-亞胺基-3-間氯苯基-4-甲基-5-乙酰基-4-2,3-二氫噻唑(2.665g, 10mmol)和對(duì)甲苯甲醛(1.44g， 12mmol)加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)26小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后,放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色晶體，收率67.8%，m.p. 225-227°C；IRυ_max（KBr）/cm^-1: 3443, 3268, 3034, 1650, 1604, 1579, 1475. ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.73 (d, 1H, J = 15.5Hz, =CH), 7.52-7.49 (m, 4H, Ar-H), 7.33 (s, 1H, Ar-H), 7.23-7.20 (m, 3H, Ar-H), 6.92 (d, 1H, J = 14.5Hz, =CH), 2.40 (s, 3H, CH₃), 2.32 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z (%): 368 [M⁺], 351 (8), 340 (8), 312 (7), 279 (13), 277 (35), 264 (13), 236 (10), 216 (15), 201 (8), 183 (8), 152 (14), 115 (34), 91 (12), 75 (10). Anal. Calcd for C₂₀H₁₇ClN₂OS: C, 65.12; H, 4.65; N, 7.59. Found: C, 65.31; H, 4.72; N, 7.51。

實(shí)施例2

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-亞胺基-3-間氯苯基-4-甲基-5-乙酰基-4-2,3-二氫噻唑(2.665g, 10mmol)和3,4-亞甲基二氧苯甲醛(1.8g， 12mmol)加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)15小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后,放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色固體，收率70.3%，mp：225-227°C；IRυ_max（KBr）/cm^-1: 3418, 3270, 3036, 1651, 1602, 1578, 1487. ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.66 (d, 1H, J=15.0Hz, =CH), 7.53-7.49 (m, 2H, Ar-H), 7.33(s, 1H, Ar-H), 7.22-7.20 (m, 1H, Ar-H), 7.09 (d, 2H, J = 8.0Hz, Ar-H), 6.84 (d, 1H, J = 7.5Hz, Ar-H), 6.78 (d, 1H, J = 15.5Hz, =CH), 6.03 (s, 2H, CH₂), 2.31 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z (%):398 [M⁺], 381 (5), 370 (31), 363 (20), 342 (9), 277 (24), 264 (75), 236 (20), 223 (20), 201 (10), 185 (20), 152 (64), 145 (55), 135 (75), 117 (40), 89 (90), 75 (27), 63 (40). Anal. Calcd for C₂₀H₁₅ClN₂O₃S: C, 60.22; H, 3.79; N, 7.02. Found: C, 60.31; H, 3.85; N, 7.11。

實(shí)施例3

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-(3,4-二氯苯胺基)-4-甲基-5-乙酰基噻唑(3.01g, 10mmol) 和對(duì)甲苯甲醛(1.44g，12mmol)加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)20小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后,放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色固體，收率54.6%，m.p. 249-251°C；IRυ_max（KBr）/cm^-1: 3446, 3267, 1649, 1602, 1577, 1531, 1471. ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.73 (d, 1H, J = 15.5Hz, =CH), 7.64(d, 1H, J = 9.0Hz, Ar-H), 7.49 (d, 2H, J = 8.5Hz, Ar-H), 7.44 (d, 1H, J = 2.5Hz, Ar-H), 7.22 (d, 1H, J = 7.5Hz, Ar-H), 7.18 (dd, 1H, J₁ = 2.0Hz, J₂ = 2.0Hz,Ar-H), 6.90 (d, 1H, J = 15.0Hz, =CH), 2.40 (s, 3H, CH₃), 2.33 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z (%): 402 [M⁺], 387 (7), 346 (6), 311 (37), 298 (14), 270 (13), 257 (15), 216 (42), 201 (22), 186 (50), 145 (45), 128 (10), 115 (80), 91 (37), 65 (18). Anal. Calcd for C₂₀H₁₆Cl₂N₂OS: C, 59.56; H, 4.00; N, 6.95. Found: C, 59.67; H, 4.13; N, 6.84。

實(shí)施例4

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-(3,4-二氯苯胺基)-4-甲基-5-乙酰基噻唑(3.01g, 10mmol) 和3,4-亞甲基二氧苯甲醛(1.8g， 12mmol)加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)18小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后,放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色固體，收率69.4%，m.p. 247-249°C；IRυ_max（KBr）/cm^-1: 3418, 3272, 1645, 1602, 1589, 1501, 1449. ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.67 (d, 1H, J=15.5Hz, =CH), 7.65-7.64 (m*, 1H, Ar-H), 7.44(d, 1H, J = 2.5Hz, Ar-H), 7.18 (dd, 1H, J₁ = 2.0Hz, J₂ = 3.0Hz, Ar-H), 7.10-7.08 (m, 2H, Ar-H), 6.84 (d, 1H, J = 9.0Hz, Ar-H), 6.77 (d, 1H, J = 15.5Hz, =CH), 6.04 (s, 2H, CH₂), 2.33 (s, 3H, CH₃)(* overlapped with =CH). EIMS m/z (%): 432 （M⁺，100）, 404 (15), 397 (20), 311 (14), 298 (35), 270 (15), 246 (32), 218 (18), 186 (55), 169 (13), 145 (75), 135 (100), 117 (35), 109 (15), 89 (82), 74 (8), 63 (43). Anal. Calcd for C₂₀H₁₄Cl₂N₂O₃S: C, 55.44; H, 3.26; N, 6.47. Found: C, 55.29; H, 3.51; N, 6.59。

實(shí)施例5、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-間氯苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.132g，8mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲醛(1.8816g，9.6mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)9小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后,放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色固體，收率72.3%，m.p. 225～227℃。IR υmax (KBr)/cm^-1: 3446, 3284, 3130, 2991, 2917, 1625, 1583, 1502, 1472. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.66 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 7.45 (t, J = 2.0 Hz, 1H, Ar-H), 7.34-7.28 (m, 2H, Ar-H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H, Ar-H), 7.04 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 6.80 (s, 2H, Ar-H), 3.91 (s, 6H, 2′OCH₃), 3.90 (s, 3H, OCH₃), 2.71 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%): 444 (M⁺, 100), 413 (12), 364 (16), 318 (90), 277 (6), 181 (79), 111 (22), 91 (21). Anal. 計(jì)算值C₂₂H₂₁ClN₂O₄S: C, 59.39; H, 4.76; N, 6.30. 實(shí)測(cè)值C, 59.37; H, 4.81; N, 6.43。

實(shí)施例6、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-(3,4-二氯苯胺基)-4-甲基-5-乙?；邕?3.01g, 10mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲醛(2.352g，12mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)12小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間,得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，得黃色固體，收率58.4%，m.p. 241～244℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3434, 3265, 3100, 1642, 1585, 1541, 1474. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.66(d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.62 (d, J = 2.8 Hz, 1H, Ar-H), 7.45 (d, J = 9.2 Hz, 1H, Ar-H), 7.32 (dd, J₁= 2.4 Hz, J₂= 2.8 Hz, 1H, Ar-H), 7.03 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 6.81 (s, 2H, Ar-H), 3.91 (s, 6H, 2′OCH₃), 3.90 (s, 3H, OCH₃), 2.72 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%): 478 (M⁺, 15), 318 (16), 181 (20), 111 (20), 97 (32), 83 (37), 69 (55), 55 (100). Anal. 計(jì)算值C₂₂H₂₀Cl₂N₂O₄S: C, 55.12; H, 4.21; N, 5.84. 實(shí)測(cè)值 C, 55.25; H, 4.31; N, 5.65。

實(shí)施例7、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-鄰甲苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.46g, 10mmol)和間甲氧基苯甲醛(1.632g，12mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)5小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率56.2%，m.p. 193～195℃。IR υmax (KBr)/cm^-1: 3445, 3205, 2916, 2848, 1645, 1503, 1495. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.68 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H, Ar-H), 7.35-7.29 (m, 3H, Ar-H), 7.23-7.16 (m, 2H, Ar-H), 7.08 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.07 (m*, 1H, Ar-H), 6.95 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 2.8 Hz, 1H, Ar-H), 3.85 (s, 3H, OCH3), 2.70 (s, 3H, CH₃), 2.35 (s, 3H, CH³) (*與=CH峰重疊). EIMS m/z(%): 364 (M+, 100), 347 (16), 257 (47), 243 (25), 161 (25), 133 (20), 118 (45), 91 (28). Anal. 計(jì)算值C₂₁H₂0N₂O₂S: C, 69.20; H, 5.53; N, 7.69. 實(shí)測(cè)值C, 69.25; H, 5.71; N, 7.56。

實(shí)施例8、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-鄰甲苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.46g, 10mmol)和鄰氯苯甲醛(1.686g， 12mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)8小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率61.7%，m.p. 181～183℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3445, 3164, 2917, 2849, 1645, 1589, 1562, 1484. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 8.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.65 (dd, J₁ = 2.4 Hz, J₂ = 2.4 Hz, 1H, Ar-H), 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 1H, Ar-H), 7.43 (dd, J₁ = 2.0 Hz, J₂ = 0.8 Hz, 1H, Ar-H), 7.33-7.27 (m, 4H, Ar-H), 7.23-7.20 (m, 1H, Ar-H), 7.07 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 2.69 (s, 3H, CH₃), 2.35 (s, 1H, CH₃). EIMS m/z(%): 368 (M⁺, 100), 333 (29), 257 (57), 165 (25), 137 (31), 117 (21), 101 (62), 91 (25). Anal. 計(jì)算值C₂₀H₁₇ClN₂OS: C, 65.12; H, 4.65; N, 7.59. 實(shí)測(cè)值 C, 65.21; H, 4.63; N, 7.45。

實(shí)施例9、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-對(duì)氯苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.132g, 8mmol)和間甲氧基苯甲醛(1.3056g，9.6mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)9小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率58.8%，m.p. 195～197℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3445, 3283, 3129, 1644, 1608, 1555, 1486. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.72 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 7.41-7.31 (m, 5H, Ar-H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H, Ar-H), 7.13 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 7.11 (m*, 1H, Ar-H), 6.96 (dd, J₁ = 2.0 Hz, J₂ = 2.4 Hz, 1H, Ar-H), 3.86 (s, 3H, OCH₃), 2.70 (s, 3H, CH₃) (*與=CH峰重疊). EIMS m/z(%): 384 (M⁺, 100), 277 (47), 263 (25), 258 (36), 161 (18), 118 (25), 90 (25), 71 (18). Anal. 計(jì)算值C₂₀H₁₇ClN₂O₂S: C, 62.41; H, 4.45; N, 7.28. 實(shí)測(cè)值 C, 62.61; H, 4.72; N, 7.35。

實(shí)施例10、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-對(duì)甲苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.46g, 10mmol)和3,4-二氧亞甲苯甲醛(1.8g，12mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)13小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率37.8%，m.p. 228～230℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3419, 3167, 2918, 1647, 1583, 1487. ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, TMS) δ:7.66 (d, J = 15.5 Hz, 1H, =CH), 7.27-7.23 (m, 4H, Ar-H), 7.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H, Ar-H), 7.08 (dd, J₁ = 1.5 Hz, J₂ = 1.5 Hz, 1H, Ar-H), 6.97 (d, J = 15.5 Hz, 1H, =CH), 6.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H, Ar-H), 6.02 (s, 2H, CH₂), 2.66 (s, 3H, CH₃), 2.38 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%):378 (M⁺, 100), 272 (51), 257 (27), 243 (38), 145 (23), 118 (22), 91 (29), 63 (24). Anal. 計(jì)算值C₂₁H₁₈N₂O₃S: C, 66.65; H, 4.79; N, 7.40. 實(shí)測(cè)值 C, 66.79; H, 4.67; N, 7.58。

實(shí)施例11、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-鄰甲苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?1.968g, 8mmol)和苯甲醛(1.0176g，9.6mmol)加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)4小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率38.2%，m.p. 194～196℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3415, 3179, 3055, 2916, 1648, 1591, 1493. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.71 (d, J = 15.6Hz, 1H, =CH), 7.59-7.54 (m, 3H, Ar-H), 7.39 (t, J = 3.2 Hz, 3H, Ar-H), 7.33 (t, J = 7.2 Hz, 2H, Ar-H), 7.23-7.19 (m, 1H, Ar-H), 7.11 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 2.68 (s, 3H, CH₃), 2.35 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%): 334 (M⁺, 100), 317 (22), 257 (49), 228 (24), 202 (18), 131 (47), 103 (58), 91 (24). Anal. 計(jì)算值C₂₀H₁₈N₂OS: C, 71.83; H, 5.42; N, 8.38. 實(shí)測(cè)值 C, 71.77; H, 5.59; N, 8.56。

實(shí)施例12、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-對(duì)氯苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.132g, 8mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲醛(1.8816g，9.6mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)6小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率52.7%，m.p. 223～225℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3419, 3274, 3195, 3125, 2922, 1641, 1614, 1582, 1505, 1489. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.67 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.36 (dd, J₁ = 8.8 Hz, J₂ = 8.4 Hz, 4H, Ar-H), 7.01 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 6.81 (s, 2H, Ar-H), 3.92 (s, 6H, 2′OCH₃), 3.90 (s, 3H, OCH₃), 2.71 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%): 444 (M⁺, 100), 318 (87), 277 (24), 263 (15), 181 (71), 152 (15), 111 (16), 71 (26). Anal. 計(jì)算值C₂₂H₂₁ClN₂O₄S: C, 59.39; H, 4.76; N, 6.30. 實(shí)測(cè)值C, 59.15; H, 4.69; N, 6.53。

實(shí)施例13、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-對(duì)甲苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?1.476g, 6mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲醛(1.411g，7.2 mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)8小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率54.3%，m.p. 213～215℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3436, 3282, 3131, 2935, 1643, 1585, 1505, 1487. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.67 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.25 (d, J = 3.2 Hz, 4H, Ar-H), 7.01 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 6.81 (s, 2H, Ar-H), 3.91 (s, 6H, 2′OCH₃), 3.90 (s, 3H, OCH₃), 2.70 (s, 3H, CH₃), 2.37 (s, 3H, CH₃). EIMS m/z(%): 424 (M⁺, 100), 318 (56), 257 (23), 243 (28), 181 (28), 91 (24), 69 (25), 55 (45). Anal. 計(jì)算值C₂₃H₂₄N₂O₄S: C, 65.07; H, 5.70; N, 6.60. 實(shí)測(cè)值C, 65.22; H, 5.76; N, 6.64。

實(shí)施例14、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-間甲苯胺基-4-甲基-5-乙酰基噻唑(2.46g, 10mmol)和間甲氧基苯甲醛(1.632g，12mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，開(kāi)繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)7小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率40.8%，m.p. 164～166℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1: 3417, 3175, 2827, 1645, 1592, 1573, 1486. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.71 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.19 (t, J = 7.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.15-7.11 (m*, 2H, Ar-H), 7.14 (d, J = 15.6 Hz, 1H, =CH), 7.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H, Ar-H), 6.95 (dd, J₁ = 2.0 Hz, J₂ = 2.4 Hz, 1H, Ar-H), 3.85 (s, 3H, OCH₃), 2.70 (s, 3H, CH₃), 2.40 (s, 3H, CH₃) (*與=CH峰重疊). EIMS m/z(%): 364 (M⁺, 100), 257 (42), 243 (22), 231 (24), 132 (22), 118 (36), 91 (32), 77 (16). Anal. 計(jì)算值C₂₁H₂₀N₂O₂S: C, 69.20; H, 5.53; N, 7.69. 實(shí)測(cè)值C, 69.35; H, 5.78; N, 7.78。

實(shí)施例15、

在裝有機(jī)械攪拌、回流冷凝器、溫度計(jì)的100mL三口燒瓶中，將2-間氯苯胺基-4-甲基-5-乙?；邕?2.132g, 8mmol)和苯甲醛(1.018g， 9.6mmol) 加入到30mL甲醇和10mL四氫呋喃溶液中，攪拌下控制10°C以下滴加5.5mL 30% NaOH溶液，滴加完畢，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)，自然升溫至常溫25°C，反應(yīng)6小時(shí)(TLC跟蹤監(jiān)測(cè))。停止反應(yīng)，用冰醋酸調(diào)pH至中性，繼續(xù)攪拌數(shù)分鐘后，放入冰箱中靜置一段時(shí)間，得黃色固體，用丙酮/四氫呋喃重結(jié)晶后，收率36.4%，m.p. 210～212℃。IR υ_max (KBr)/cm^-1:3445, 3303, 3199, 3130, 1644, 1610, 1571, 1477. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃, TMS) δ: 7.76 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 7.63-7.59 (m, 2H, Ar-H), 7.43-7.40 (m, 4H, Ar-H), 7.36-7.28 (m, 2H, Ar-H), 7.17 (d, J = 15.2 Hz, 1H, =CH), 7.16-7.13 (m*, 1H, Ar-H), 2.72 (s, 3H, CH₃) (*與=CH峰重疊). EIMS m/z(%): 354 (M⁺, 70), 277 (37), 228 (24), 183 (19), 131 (26), 111 (27), 103 (72), 97 (28). Anal. 計(jì)算值C₁₉H₁₅ClN₂OS: C, 64.31; H, 4.26; N, 7.89. 實(shí)測(cè)值C, 64.43; H, 4.44; N, 7.71。

實(shí)施例 16

上述化合物的抑制癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

（1） 材料

細(xì)胞株：人胃癌BGC-823細(xì)胞，人前列腺癌PC-3細(xì)胞，人肺癌NCI-H460細(xì)胞，人肝癌BEL-7402細(xì)胞，均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。

試劑：DMEM培養(yǎng)基，Gibco公司產(chǎn)品；MTT，Sigma公司產(chǎn)品，上海實(shí)生細(xì)胞生物技術(shù)有限公司分裝；胎牛血清：杭州四季青生物工程材料有限公司；青霉素-鏈霉素：Gibco公司產(chǎn)品；EDTA-胰酶消化液：Gibco公司產(chǎn)品；陽(yáng)性對(duì)照：順鉑，齊魯制藥有限公司產(chǎn)品，產(chǎn)品批號(hào)：9060251DC。

儀器：CO₂ 培養(yǎng)箱，美國(guó)NAPCO公司產(chǎn)品；倒置顯微鏡，日本OLYMPUS公司產(chǎn)品；生物安全柜，美國(guó)LABCONCO公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，上海迅達(dá)醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品； LDZX-40BI 型立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；Thermo IEC冷凍高速離心機(jī)，美國(guó)熱電公司產(chǎn)品。

（2）方法

細(xì)胞的培養(yǎng)：腫瘤細(xì)胞接種在含10％滅活小牛血清，每1000 mL 培養(yǎng)基中含80 萬(wàn)單位青霉素及1.0 g鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～5d 傳代。

MTT法測(cè)定：將細(xì)胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培養(yǎng)基稀釋成1×106/mL，加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 uL ，置37℃，5％ CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種24 h 后，傾去培養(yǎng)基，加入用培養(yǎng)基稀釋的樣品，每孔 200 μL，每個(gè)濃度加3 孔，置37℃，5％CO₂ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72 h 后在細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入5 mg/mL 的MTT，每孔10 μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150 μL，用振蕩器振蕩，使甲臢完全溶解，用酶標(biāo)儀在570 nm 波長(zhǎng)下比色。以同樣條件用不含樣品，含同樣濃度DMSO的培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞作為對(duì)照，計(jì)算樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的半數(shù)致死濃度（IC₅₀）。

(3) 結(jié)果

上述實(shí)施例1-15的化合物列于表1。

表1 化合物結(jié)構(gòu)及名稱

表2 化合物體外抗腫瘤BGC-823、PC-3 、NCI-H460和 BEL-7402活性數(shù)據(jù)

(4) 結(jié)論

化合物2對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用IC₅₀為6.42μM?；衔?對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用IC₅₀為7.67μM。此類化合物對(duì)人肺癌NCI-H460細(xì)胞和人肝癌BEL-7402細(xì)胞抑制活性較弱。