本發(fā)明涉及一類具有抗腫瘤活性的達(dá)沙替尼衍生物及其應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

隨腫瘤已成為威脅人類生命的第二殺手，平均每年在全世界50多億人口中死于惡性腫瘤者達(dá)690萬人，新病例為870萬例，且該數(shù)還在逐年增加。因此，各國(guó)政府、研究機(jī)構(gòu)及制藥公司長(zhǎng)期以來一直對(duì)腫瘤研究和抗腫瘤藥物予以高度重視，在抗腫瘤藥物研發(fā)上，目前已取得了重大進(jìn)展。

隨著醫(yī)藥學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)于許多疾病的治療取得了有目共睹的成就。癌癥這些疾病，如今仍是困擾醫(yī)學(xué)界的一大難題。對(duì)于抗腫瘤藥物的研究在如火如荼地進(jìn)行。

近年來，細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、分子藥理學(xué)、腫瘤學(xué)的發(fā)展使腫瘤本質(zhì)正在逐步闡明；大規(guī)?？焖俸Y選、組合化學(xué)、基因工程等先進(jìn)技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用加速了藥物開發(fā)進(jìn)程；抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)已進(jìn)入一個(gè)嶄新的時(shí)代。

抗腫瘤藥物正從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物向針對(duì)機(jī)制的多環(huán)節(jié)作用的新型抗腫瘤藥物發(fā)展。抗腫瘤藥物近年來新進(jìn)展，包括細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物、以細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物、新生血管生成抑制劑、腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑、內(nèi)分泌治療藥等生命科學(xué)的迅猛發(fā)展，對(duì)腫瘤深入的認(rèn)識(shí)和成功的預(yù)防產(chǎn)生新的機(jī)遇。

隨著對(duì)抗腫瘤藥物的不斷研究和腫瘤生物學(xué)的飛速發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到細(xì)胞發(fā)生癌變的本質(zhì)是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路失調(diào)，從而導(dǎo)致細(xì)胞的無限增生。研發(fā)焦點(diǎn)也就從傳統(tǒng)細(xì)胞毒藥物轉(zhuǎn)向針對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中眾多靶向環(huán)節(jié)。這些靶點(diǎn)新藥針對(duì)正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞間的差異，能夠克服傳統(tǒng)細(xì)胞毒藥物的選擇性差、毒副作用強(qiáng)、易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)，可達(dá)到高選擇性和低毒性的治療效果。由此，抗腫瘤藥物進(jìn)入了一個(gè)嶄新的研發(fā)階段-靶向抗腫瘤藥物的研究。但新型抗腫瘤藥物研究和開發(fā)要達(dá)到真正治愈腫瘤還需要一個(gè)漫長(zhǎng)的過程。本發(fā)明提供了一種具有靶向抗腫瘤活性新型達(dá)沙替尼衍生物結(jié)構(gòu)，是以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選的有生物活性的化合物。具有重要的開發(fā)應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤活性的達(dá)沙替尼衍生物及其應(yīng)用。本發(fā)明的達(dá)沙替尼衍生物以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)，具有重要的開發(fā)應(yīng)用前景。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案具體介紹如下。

本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤活性的達(dá)沙替尼衍生物，其結(jié)構(gòu)如式(I)、式(II)或者式(III)所示：

其中：R為單取代、二取代或者三取代；R獨(dú)立的選自鹵素、硝基、甲氧基、氰基、甲基或三氟甲基中的一種或幾種；Y為雜環(huán)基。

本發(fā)明中，雜環(huán)基為未取代或者單取代的含氧雜環(huán)基或者含氮雜環(huán)基中任一種。優(yōu)選的，為五元雜環(huán)、六元雜環(huán)、苯并五元雜環(huán)或者苯并六元雜環(huán)。進(jìn)一步優(yōu)選的，是未取代或者單取代的哌啶基、嗎啉基、吲哚基、咪唑基、吡唑基、哌嗪基或者吡咯基；單取代時(shí)，取代基獨(dú)立的選自甲基或者羥乙基。

本發(fā)明還提供一種上述述的具有抗腫瘤活性的達(dá)沙替尼衍生物作為酪氨酸激酶的抑制劑，在制備治療、預(yù)防、緩解腫瘤的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述抗腫瘤藥物為治療、預(yù)防或緩解白血病、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌或肝癌的藥物。所述的抗腫瘤藥物為片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑或乳劑。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果如下：本發(fā)明提供的達(dá)沙替尼衍生物生物活性結(jié)果顯示其對(duì)酪氨酸激酶有良好的抑制作用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例子對(duì)本發(fā)明的達(dá)沙替尼衍生物以及生物活性做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。

實(shí)施例1 2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺的制備

(1)2-(N-叔丁氧碳基氨基)-5-噻唑甲酸乙酯的制備

首先，準(zhǔn)備干凈的50mL三口瓶一個(gè)、一包稱量紙、一個(gè)鋁制刮勺；將所需原料找出并放在指定區(qū)域待稱量；準(zhǔn)備工作完成后，打開電子天平電源開關(guān)，待示數(shù)穩(wěn)定后將三口瓶放于天平中并置零，用鋁勺向50m1的三口燒瓶中加入2-氨基噻唑-5-甲酸乙酯1.00g，置零，用干凈的鋁勺向50ml的三口瓶加4-二甲氨基吡啶141.89mg，加入15m1的重蒸過的無水THF攪拌15min至混合均勻，用天平稱取二碳酸二叔丁酯1.52g，溶于2ml無水THF中，室溫條件下，滴加溶有二碳酸二叔丁酯的無水THF溶液(2m1)，滴畢，室溫?cái)嚢?h，蒸除反應(yīng)液中的溶劑至剩余約1/5體積，過濾，濾餅用少量的THF洗滌，干燥后得到類白色粉末產(chǎn)物(1.3g)，收率82.21％。

總反應(yīng)式如下:

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù)：¹H NMR(500MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),8.13(s,1H),4.32(d,J＝7.63,Hz,2H),1.49(s,9H),1.49(s,9H),1.34(d,J＝7.63,Hz,3H)；HRMS calcd for C₁₁H₁₆N₂O₄S[M+H]⁺:273.0831,Found:273.0832.

(2)2-(N-叔丁氧碳基氨基)-5-噻唑甲酸的制備

向50m1的三口燒瓶中加入THF(6m1)和乙醇(7m1)，然后將用天平稱取Cape-1(1g)加入三口燒瓶中，室溫下攪拌20min至混合均勻；然后將反應(yīng)容器轉(zhuǎn)移至低溫恒溫反應(yīng)浴中，將溫度降至0℃，攪拌15min；向反應(yīng)容器中滴加新鮮配制的2mol/L的NaOH水溶液10m1，加畢，室溫?cái)嚢?0h。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去反應(yīng)液中的THF；將反應(yīng)容器轉(zhuǎn)移至低溫恒溫反應(yīng)浴中，將溫度降至0℃，滴加新配的10％的鹽酸調(diào)節(jié)溶液的PH至1，析出白色沉淀，過濾，濾餅用水洗滌，干燥后即得白色固體產(chǎn)物Cape-2(0.875g)，收率97.55％。

總反應(yīng)式如下:

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù)：¹H NMR(500MHz,DMSO)δ13.40(s,1H),11.81(s,1H),8.53(s,1H),1.49(s,9H)；HRMS calcd for C₉H₁₂N₂O₄S[M+H]⁺:245.0518,Found:245.0519.

(3)[5-(2-氯-6-甲基苯基氨甲酰基)噻唑-2-基]-氨甲酸叔丁酯的制備

將10m1二氯甲烷加入50m1的三口燒瓶中，然后用天平稱取1g的Cape-3加入到三口燒瓶中；將反應(yīng)容器轉(zhuǎn)移至低溫恒溫反應(yīng)浴中，調(diào)節(jié)溫度至-5℃，分批加入二氯化磷酸苯酯(1.036g)和2-氯-6-甲基苯胺(0.754g)；然后，滴加N,N-二異丙基乙胺1.6g；升溫至室溫，攪拌反應(yīng)14h。反應(yīng)液減壓濃縮掉有機(jī)溶劑后，加入5m1乙醇，攪拌打漿30min；最后，加入10m1自來水，攪拌析晶，抽濾，得到1.43g淡黃色固體Cape-3，收率95％。

總反應(yīng)式如下:

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),9.51(s,1H),8.13(s,1H),7.37(dd,J＝7.63,2.03Hz,1H),7.28-7.20(m,2H),2.21(s,3H),1.49(s,9H)；HRMS calcd forC₁₆H₁₈ClN₃O₃S[M+H]⁺:368.0757,Found:368.0756.

(4)2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺的制備

將5m1二氯甲烷和5m1三氟乙酸分別加入50m1的三口燒瓶中，將反應(yīng)容器轉(zhuǎn)移到低溫恒溫反應(yīng)浴中，調(diào)節(jié)溫度到-5℃；然后，用加料漏斗加入Cape-3(1g),攪拌30min,將反應(yīng)容器從低溫恒溫反應(yīng)浴中轉(zhuǎn)移到室溫條件下攪拌，反應(yīng)10h；將反應(yīng)液中的溶劑蒸干，加入15m1乙酸乙酯溶解，然后用5％的碳酸氫鈉溶液洗滌兩次，用飽和的食鹽水溶液洗滌一次，干燥有機(jī)相，減壓濃縮掉溶劑，得到黃色固體Cape-4(0.6188g)，收率85％。

總反應(yīng)式如下:

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.66(s,1H),7.87(s,1H),7.69(s,2H),7.36(d,J＝7.5Hz,1H),7.24(d,J＝7.5Hz,2H),2.21(s,3H)；HRMS calcd for C₁₁H₁₀ClN₃OS[M+H]⁺:268.0233,Found:268.0234.

實(shí)施例2達(dá)沙替尼衍生物的合成(A類)

用天平稱取Cape-4(100mg)加入50ml單口瓶中，然后加入重蒸的7ml的THF，同時(shí)加入113.39mg三乙胺，攪拌5min，然后將反應(yīng)容器轉(zhuǎn)移至低溫恒溫反應(yīng)浴中，將溫度降至0℃，攪拌15min；稱取84.73mg的4-氯甲基苯甲酰氯溶于1mlTHF中，后將1ml的THF緩慢滴加到反應(yīng)容器中，反應(yīng)3h，后抽濾濾除生成的鹽，柱層析可得0.12g白色固體產(chǎn)品Cape-5,收率為76.44％。

總反應(yīng)式如下:

通過以上相同的方法用Cape-4來與4-氯苯甲酰氯、4-三氟甲基苯甲酰氯、2,4-二氯-5-氟苯甲酰氯、對(duì)甲氧基苯甲酰氯、4-溴-2-氟苯甲酰氯、2-萘甲酰氯、4-硝基苯甲酰氯、2,4-二氟苯甲酰氯、鄰甲氧基苯甲酰氯、間甲氧基苯甲酰氯和4-氰基苯甲酰氯、4-甲苯甲酰氯反應(yīng)，分別制備得5b-5p。并分別對(duì)化合物5a-5p進(jìn)行生物活性測(cè)試。

化合物5b-5p的產(chǎn)率如下表1

表1化合物5b-5p的產(chǎn)率

Table 1 The yield of compounds 5b-5p

5a的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-(氯甲基)苯甲酰胺基]噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[4-(chloromethyl)benzamido]thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.76(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.5Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),4.64(s,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₅Cl₂N₃O₂S[M+H]⁺:420.0262,Found:420.0261.

5b的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氯苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-chlorobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.76(s,1H),10.24(s,1H),8.85(s,1H),7.93(d,J＝7.5Hz,2H),7.54(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.8Hz,2H),7.18-7.10(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₃Cl₂N₃O₂S[M+H]⁺:406.0106,Found:406.0105.

5c的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-(三氟甲基)苯甲酰胺基]噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[4-(trifluoromethyl)benzamido]thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.82(d,J＝7.5Hz,2H),7.65(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₃ClF₃N₃O₂S[M+H]⁺:440.0369,Found:440.0367.

5d的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2,4-二氯-5-氟苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(2,4-dichloro-5-fluorobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.85(s,1H),7.83(s,1H),7.53(dd,J＝7.6,2.5Hz,1H),7.49(s,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMScalcd for C₁₈H₁₁Cl₃FN₃O₂S[M+H]⁺:457.9622,Found:457.9621.

5e的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-溴-2-氟苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

2-(4-bromo-2-fluorobenzamido)-N-(2-chloro-6-methylphenyl)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.81(s,1H),10.20(s,1H),8.84(s,1H),7.86(d,J＝8.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.55(s,1H),7.53(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₂BrClFN₃O₂S[M+H]⁺:467.9506,Found:467.9507.

5f的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲氧基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-methoxybenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),8.13(d,J＝7.5Hz,2H),7.53(dd,J＝7.6,3.5Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),7.08(d,J＝7.8Hz,2H),3.81(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₆ClN₃O₃S[M+H]⁺:402.0601,Found:402.0602.

5g的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-萘甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

2-(2-naphthamido)-N-(2-chloro-6-methylphenyl)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),8.40(s,1H),8.15(s,1H),8.10(d,J＝7.8Hz,1H),8.06(d,J＝7.8Hz,1H),7.83-7.52(m,4H),7.17-7.11(d,J＝9.6Hz,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₂H₁₆ClN₃O₂S[M+H]⁺:422.0652,Found:422.0651.

5h的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-硝基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-nitrobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),8.39(d,J＝7.5Hz,2H),8.21(d,J＝8.2,3.6Hz,2H),7.53(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₃ClN₄O₄S[M+H]⁺:417.0346,Found:417.0347.

5i的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2,4-二氟苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(2,4-difluorobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.95(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝9.6Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₂ClF₂N₃O₂S[M+H]⁺:408.0307,Found:408.0308.

5j的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲氧基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(2-methoxybenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.19(s,1H),8.85(s,1H),7.88(d,J＝8.1Hz,1H),7.57-7.53(m,2H),7.23-7.11(m,4H),3.93(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₆ClN₃O₃S[M+H]⁺:402.0601,Found:402.0602.

5k的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-甲氧基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(3-methoxybenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.18(s,1H),8.84(s,1H),7.71(dd,J＝9.7,3.6Hz,1H),7.63(d,J＝7.8Hz,1H),7.18(d,J＝8.1Hz,2H),7.20-7.11(m,3H),3.77(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₆ClN₃O₃S[M+H]⁺:402.0601,Found:402.0602.

5l的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氰基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-cyanobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),10.23(s,1H),8.86(s,1H),8.17(d,J＝9.2Hz,2H),8.10(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₃ClN₄O₂S[M+H]⁺:397.0448,Found:397.0447.

5m的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氰基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-cyanobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.82(s,1H),8.16(d,J＝9.1Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.37(d,J＝7.8Hz,2H),7.18-7.10(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₃ClFN₃O₂S[M+H]⁺:390.0401,Found:390.0402.

5n的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-肉桂酰胺基噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-cinnamamidothiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ13.63(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.73(s,1H),7.62(d,J＝8.7Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.38-7.33(m,3H),7.17-7.11(m,2H),6.89(s,1H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₀H₁₆ClN₃O₂S[M+H]⁺:398.04652,Found:398.0653.

5o的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-methylbenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.22(s,1H),8.84(s,1H),7.84(d,J＝7.6Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(d,J＝7.6Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),2.41(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₉H₁₆ClN₃O₂S[M+H]⁺:386.0652,Found:386.0651.

5p的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-溴基苯甲酰胺基)噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-(4-bromobenzamido)thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),8.07(d,J＝7.2Hz,2H),7.70(d,J＝7.2Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,1H),7.17-7.11(m,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₁₈H₁₃BrClN₃O₂S[M+H]⁺:449.9600,Found:449.9601.

實(shí)施例3達(dá)沙替尼衍生物的合成(B類)

首先，將6m1的正丁醇加入到50m1的三口燒瓶中，然后將Cape-5(0.1g)加入到反應(yīng)容器中，室溫下攪拌15min；分別滴加三乙胺72.23mg和N-甲基哌嗪(238.31mg),攪拌升溫至120℃，回流反應(yīng)5h,冷卻到室溫，柱層析可得0.098g產(chǎn)品Cape-6,收率85.10％。

總反應(yīng)式如下：

通過以上相同的方法用Cape-5來與羥乙基哌嗪、哌嗪、吡咯、嗎啉、哌啶、吲哚、N-甲基咪唑、咪唑、吡唑反應(yīng)，分別制備得6b-6k。并分別對(duì)化合物6a-6k進(jìn)行生物活性測(cè)試。

化合物5b-5p的產(chǎn)率如下表3.3-2

表3.3-2化合物6b-6k的產(chǎn)率

Table 3.3-2 The yield of compounds 6b-6k

6a的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-{4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]benzamido}thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),3.66(s,2H),2.48(t,J＝9.5Hz,4H),2.34(t,J＝9.5Hz,4H),2.14(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₄H₂₆ClN₅O₂S[M+H]⁺:483.1496,Found:484.1497.

6b的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{4-[(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)甲基]苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-{4-[(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)methyl]benzamido}thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),4.16(s,1H),3.66(s,2H),3.42(t,J＝7.8Hz,2H),2.57-2.48(m,6H),2.29(t,J＝9.5Hz,4H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₅H₂₈ClN₅O₃S[M+H]⁺:514.1601,Found:514.1602.

6c的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯甲酰胺基]噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[4-(piperazin-1-ylmethyl)benzamido]thiazole-5-carboxami-de

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),3.66(s,2H),2.48(t,J＝9.5Hz,4H),2.34(t,J＝9.5Hz,4H),2.12(s,3H),1.07(s,1H)；HRMS calcd for C₂₃H₂₄ClN₅O₂S[M+H]⁺:470.1339,Found:470.1338.

6d的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

2-{4-[(1H-吡咯-1-基)甲基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

2-{4-[(1H-pyrrol-1-yl)methyl]-N-(2-chloro-6-methylphenyl)benzamido}thiazole-5-carboxa-mide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.8Hz,4H),7.17-7.11(m,2H),6.22(d,J＝9.6Hz,2H),3.66(s,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₃H₁₉ClN₄O₂S[M+H]⁺:451.0917,Found:451.0918.

6e的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-(嗎啉代甲基)苯甲酰胺基]噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[4-(morpholinomethyl)benzamido]thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),3.66(s,2H),3.57(t,J＝9.5Hz,4H),2.42(t,J＝9.5Hz,4H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₃H₂₃ClN₄O₃S[M+H]⁺:471.1179,Found:471.1178.

6f的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

2-{4-[(1H-咪唑-1-基)甲基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

2-{4-[(1H-imidazol-1-yl)methyl]-N-(2-chloro-6-methylphenyl)benzamido}thiazole-5-carbo-xamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,2H),7.74(s,1H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.10(m,3H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),5.46(s,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₂H₁₈ClN₅O₂S[M+H]⁺:452.0870,Found:452.0871.

6g的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

2-{4-[(1H-吲哚-1-基)甲基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

2-{4-[(1H-indol-1-yl)methyl]-N-(2-chloro-6-methylphenyl)benzamido}thiazole-5-carboxa-mide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92-7.82(m,4H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.44-7.34(m,4H),7.17-7.11(m,2H),6.83(dd,J＝7.1,2.8Hz,1H),6.36(d,J＝10.7Hz,1H),5.56(s,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd forC₂₇H₂₁ClN₄O₂S[M+H]⁺:501.1074,Found:501.1075.

6h的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-(哌啶-1-基甲基)苯甲酰胺基]噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[4-(piperidin-1-ylmethyl)benzamido]thiazole-5-carboxamid-e

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.11(m,2H),3.66(s,2H),2.45(t,J＝9.5Hz,4H),2.12(s,3H),2.34(m,6H)；HRMS calcd for C₂₄H₂₅ClN₄O₂S[M+H]⁺:469.1387,Found:469.1386.

6i的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{4-[(2-甲基-1H-咪唑-1-基)甲基]苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-{4-[(2-methyl-1H-imidazol-1-yl)methyl]benzamido}thiazole-5-carboxamide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,2H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.17-7.10(m,3H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),5.46(s,2H),2.53(s,3H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₃H₂₀ClN₅O₂S[M+H]⁺:466.1026,Found:466.1027.

6j的名稱和結(jié)構(gòu)式如下：

2-{4-[(1H-吡唑-1-基)甲基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)苯甲酰胺基}噻唑-5-甲酰胺

2-{4-[(1H-pyrazol-1-yl)methyl]-N-(2-chloro-6-methylphenyl)benzamido}thiazole-5-carbox-amide

核磁與質(zhì)譜數(shù)據(jù):¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.83(s,1H),10.21(s,1H),8.84(s,1H),7.84-7.80(m,3H),7.53(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),7.34-7.28(m,3H),7.17-7.11(m,2H),6.22(d,J＝9.2Hz,1H),5.48(s,2H),2.12(s,3H)；HRMS calcd for C₂₂H₁₈ClN₅O₂S[M+H]⁺:452.0870,Found:452.0871.

細(xì)胞生物活性測(cè)試實(shí)驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)原理：化合物抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)具體細(xì)節(jié)可以用經(jīng)MTT方法來測(cè)得。MTT法的原理是：黃色噻唑蘭可穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠讓外源性MTT還原成沉積于細(xì)胞中的藍(lán)紫結(jié)晶甲瓚，然而死細(xì)胞卻沒有這種功能。再用二甲基亞砜溶解甲瓚。在570nm波長(zhǎng)處，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定其吸光值，來間接得到活細(xì)胞數(shù)量。

2.實(shí)驗(yàn)材料：K562(人白血病細(xì)胞)。分別用DMEM+10％FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)或者使用1640+10％FBS培養(yǎng)。

3.試驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)組：190μl細(xì)胞懸液+10μl不同濃度的藥物(終濃度為10^-5～10^-10)

空白對(duì)照組：200μl PBS

陰性對(duì)照組：190μl細(xì)胞懸液+10μl 2％DMSO(DMSO終濃度為0.1％)

陽性對(duì)照組：190μl細(xì)胞懸液+10μl不同濃度的化合物

4.MTT細(xì)胞活力檢測(cè)步驟

a.接種細(xì)胞

在37℃、5％CO₂條件下，用含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)細(xì)胞。棄去培養(yǎng)皿中的上層培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞2次，再加入胰酶，放入培養(yǎng)基中消化1-2min，待細(xì)胞脫壁后，再加入新的培養(yǎng)基，輕輕吹打，使細(xì)胞完全脫落，待細(xì)胞入5ml新的培養(yǎng)基，輕輕吹打，用細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)算細(xì)胞濃度，然后接種于96孔板中。

b.細(xì)胞培養(yǎng)

將接種完的96孔板放置于37℃、5％的CO₂培養(yǎng)箱中孵育過夜，次日細(xì)胞即可貼壁。

c.加藥

按照不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入不同濃度的藥物，每組設(shè)3～4個(gè)復(fù)孔，每孔加入10μl相應(yīng)濃度的藥物，再將96孔板放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

d.MTT活力檢測(cè)

給藥后培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后，每孔加入10μl 5mg/ml的MTT，后將96孔板放置于培養(yǎng)箱中，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后取出，小心吸取每孔的上清液，每孔再加入100μl的二甲基亞砜(DMSO)溶液，放置培養(yǎng)箱中孵育10min后，震蕩40s左右，使甲瓚晶體完全溶解。

e.測(cè)吸光度并計(jì)算IC₅₀值

將96孔板置于酶標(biāo)儀中，檢測(cè)波長(zhǎng)為570nm和630nm處的吸光值。以每3～4個(gè)復(fù)孔吸光度的平均值計(jì)算其相對(duì)抑制率。根據(jù)抑制率，通過軟件“Dose-Effect Analysis withMicrocomputers”計(jì)算半數(shù)有效抑制濃度(IC₅₀)。每組樣品要做3次平行實(shí)驗(yàn)。

f.570nm讀數(shù)，計(jì)算細(xì)胞存活率，根據(jù)結(jié)果計(jì)算IC₅₀，得下表1

表1化合物結(jié)構(gòu)式及活性數(shù)據(jù)如下(μM)