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高純度臍帶血干細(xì)胞的分離方法和試劑盒與流程

文檔序號:12248687閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種臍帶血干細(xì)胞的分離方法,其包括下列步驟:

稀釋步驟:將臍帶血樣品與細(xì)胞稀釋液混合;

沉淀步驟:加入沉淀劑,并靜置沉降以得到含有干細(xì)胞的上層細(xì)胞液,將所述含有干細(xì)胞的上層細(xì)胞液離心濃縮,得到細(xì)胞沉淀;

分層步驟:將所述細(xì)胞沉淀鋪在細(xì)胞分層液上離心,得到中間云霧狀有核細(xì)胞;

純化步驟:將所述有核細(xì)胞鋪在細(xì)胞純化液上離心,得到兩條細(xì)胞帶,取下方細(xì)胞帶中的細(xì)胞即為純化的干細(xì)胞;其中,

所述細(xì)胞稀釋液為PBS液或0.8-1.0重量%氯化鈉水溶液,

所述細(xì)胞沉淀劑為4-10重量%的羥乙基淀粉水溶液,

所述細(xì)胞分層液為由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度為1.074-1.076g/ml的水溶液,

所述細(xì)胞純化液為由聚蔗糖配制成的密度為1.090-1.095g/ml的水溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法,其中所述細(xì)胞分層液中聚蔗糖和泛影葡胺的質(zhì)量比為0.8:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法,其中所述細(xì)胞分層液和/或細(xì)胞純化液包含腺嘌呤。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離方法,其中所述腺嘌呤的含量為所述細(xì)胞分層液或所述細(xì)胞純化液的0.5-2重量%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法,其中所述臍帶血樣品與所述細(xì)胞稀釋液的體積比為0.8:1-1.2:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法,其中所述沉淀步驟中的離心濃縮的轉(zhuǎn)速為2000-3000轉(zhuǎn)/分,離心時間為3-20分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法,其中所述分層步驟中的離心濃縮的轉(zhuǎn)速為1800-2200轉(zhuǎn)/分,離心時間為15-25分鐘。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法,其中所述純化步驟中的離心轉(zhuǎn)速為1500-2000轉(zhuǎn)/分,離心時間為30-40分鐘。

9.一種臍帶血干細(xì)胞的分離試劑盒,其包括:

細(xì)胞稀釋液、沉淀劑、細(xì)胞分層液和細(xì)胞純化液;其中,

所述細(xì)胞稀釋液為PBS液或0.8-1.0重量%氯化鈉水溶液,

所述細(xì)胞沉淀劑為4-10重量%的羥乙基淀粉水溶液,

所述細(xì)胞分層液為由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度為1.074-1.076g/ml的水溶液,

所述細(xì)胞純化液為由聚蔗糖配制成的密度為1.090-1.095g/ml的水溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的分離試劑盒,其中所述細(xì)胞分層液和/或細(xì)胞純化液包含腺嘌呤。

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