亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

一種異源二聚體蛇毒蛋白的制備方法與流程

文檔序號(hào):12609675閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.如圖1所示的質(zhì)粒pPIC9K-A,其中Agkisacutacin A鏈基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如圖2所示的質(zhì)粒pUCZ-B,其中Agkisacutacin B鏈基因序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種轉(zhuǎn)化體,含有權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述質(zhì)粒之一或其組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)化體,其特征在于,表達(dá)重組異源二聚體蛇毒蛋白,所述異源二聚體蛇毒蛋白由A鏈、B鏈兩條肽鏈組成,其中,A鏈氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,B鏈氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的轉(zhuǎn)化體,其特征在于,為畢赤酵母菌株。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的轉(zhuǎn)化體,其特征在于,其保藏編號(hào)為CCTCC No.M2016358,分類命名為巴斯德畢赤酵母GS115。

7.權(quán)利要求1或2所述質(zhì)粒、權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述轉(zhuǎn)化體在制備血栓治療藥物中的用途。

8.一種大量表達(dá)重組異源二聚體蛇毒蛋白的方法,其特征在于,包含以下幾個(gè)步驟:

Batch階段:取權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的轉(zhuǎn)化體二級(jí)種接入含pH4.0~6.0的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中,添加甘油至4%,擴(kuò)增菌體,溶解氧含量DO急劇上升時(shí),batch階段結(jié)束;

轉(zhuǎn)化期:持續(xù)補(bǔ)充含有10-15ml/L PTM1的50%甘油溶液,流速為10-15ml/h/L,這個(gè)過程維持至濕重在190-200g/L;

甲醇誘導(dǎo)階段:當(dāng)濕重達(dá)到190-200g/L時(shí),停止甘油流加,按恒定甲醇流速限制性流加含有12ml/L PTM1的甲醇溶液;攪拌速度800-1200rpm,總共發(fā)酵70-90小時(shí),濕重達(dá)400-600g/L;

蛋白純化:發(fā)酵結(jié)束后,調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH至8.0,經(jīng)過高速離心、過柱,純化得到重組異源二聚體蛇毒蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,整個(gè)過程溫度為28-34℃。

10.根據(jù)權(quán)利要求8-9任一項(xiàng)所述方法制備的重組蛋白。

當(dāng)前第2頁(yè)1 2 3 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1