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一種檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的引物組及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11809824閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的引物組,其特征在于,所述引物組包括上游引物TjF和下游引物TjR,序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.權(quán)利要求1所述檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的引物組在檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)方面的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的引物組在鑒定區(qū)分日本毛刺線蟲(chóng)和雪松毛刺線蟲(chóng)方面的應(yīng)用。

4.一種特異性檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的方法,其特征在于,是以待測(cè)樣品DNA為模板,利用權(quán)利要求1所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)的結(jié)果判斷樣品中是否日本毛刺線蟲(chóng)。

5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述PCR的反應(yīng)體系為: PCR反應(yīng)緩沖液12.5μL,DNA 聚合酶 0.5μL,上游引物TjF和下游引物TjR各0.5μL,模板DNA 2μL,ddH2O 補(bǔ)齊,總體積25μL。

6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述PCR的反應(yīng)體系為:PCR反應(yīng)緩沖液12.5μL,DNA 聚合酶 0.5μL,上游引物TjF和下游引物TjR各0.5μL,引物D2A和D3B各0.5~0.75μL,模板DNA 2μL,ddH2O補(bǔ)齊,總體積25μL;其中,引物D2A和D3B的序列分別如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?8℃2min; 98℃10s, 50℃15s,68℃1.5min,40個(gè)循環(huán);16℃保溫。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)的結(jié)果判斷樣品中是否日本毛刺線蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)是:當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)特異性的400bp條帶時(shí),表明待測(cè)樣品DNA中含有日本毛刺線蟲(chóng)DNA。

9.一種檢測(cè)日本毛刺線蟲(chóng)的試劑盒,其特征在于,包含有權(quán)利要求1所述的上游引物TjF和下游引物TjR。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒,其特征在于,還包含有PCR擴(kuò)增所需的PCR反應(yīng)緩沖液和DNA聚合酶。

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