1.一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,所述試劑盒包括:
用于檢測(cè)SY84位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:1,下游引物為SEQ ID NO:2,特異性熒光探針為SEQ ID NO:3;
用于檢測(cè)SY86位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:4,下游引物為SEQ ID NO:5,特異性熒光探針為SEQ ID NO:6;
用于檢測(cè)SY127位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:7,下游引物為SEQ ID NO:8,特異性熒光探針為SEQ ID NO:9;
用于檢測(cè)SY134位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:10,下游引物為SEQ ID NO:11,特異性熒光探針為SEQ ID NO:12;
用于檢測(cè)SY254位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:13,下游引物為SEQ ID NO:14,特異性熒光探針為SEQ ID NO:15;
用于檢測(cè)SY255位點(diǎn)的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:16,下游引物為SEQ ID NO:17,特異性熒光探針為SEQ ID NO:18;
用于檢測(cè)SRY基因的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:19,下游引物為SEQ ID NO:20,特異性熒光探針為SEQ ID NO:21;
用于檢測(cè)ZFY基因的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:22,下游引物為SEQ ID NO:23,特異性熒光探針為SEQ ID NO:24。
2.一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,包括PCR反應(yīng)液I和PCR反應(yīng)液II,其特征在于:所述的PCR反應(yīng)液I包含檢測(cè)SY84位點(diǎn)、SY127位點(diǎn)、SY255位點(diǎn)和SRY以及ZFY內(nèi)參基因的引物探針組合,所述的PCR反應(yīng)液II包含檢測(cè)SY86位點(diǎn)、SY134位點(diǎn)、SY254位點(diǎn)、SRY和ZFY內(nèi)參基因的引物探針組合。
3.如權(quán)利要求2所述的Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒,其特征在于,在PCR反應(yīng)液I和PCR反應(yīng)液II中包含用于檢測(cè)SRY和ZFY的的引物探針組合用于質(zhì)控,其中用于檢測(cè)SRY基因的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:19,下游引物為SEQ ID NO:20,特異性熒光探針為SEQ ID NO:21;用于檢測(cè)ZFY基因的引物探針組合中上游引物為SEQ ID NO:22,下游引物為SEQ ID NO:23,特異性熒光探針為SEQ ID NO:24。
4.如權(quán)利要求2所述的一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,所述的MgCL反應(yīng)終濃度為4.5mM。
5.如權(quán)利要求2所述的一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,所述的Taq酶反應(yīng)終濃度為5U。
6.如權(quán)利要求2所述的一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,所述的dUTP、dATP、dCTP、dGTP反應(yīng)終濃度為0.5mM。
7.如權(quán)利要求2所述的一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,所述的UDG酶反應(yīng)終濃度為0.3U。
8.如權(quán)利要求2所述的一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,PCR擴(kuò)增檢測(cè)反應(yīng)條件為37℃ 5min;95℃ 5min;95℃ 15S,60℃ 60S,40cycles。
9.一種Y染色體微缺失檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,其特征在于,包括以下操作步驟:
(1)組DNA的提?。嚎赏ㄟ^柱式提取方法或Chelex法對(duì)EDTA抗凝全血或口腔拭子等來源的樣本進(jìn)行DNA提取。
(2)熒光PCR擴(kuò)增檢測(cè):所述的多重?zé)晒釶CR擴(kuò)增檢測(cè)包括本發(fā)明的PCR反應(yīng)液I和PCR反應(yīng)液II同時(shí)對(duì)待檢樣本DNA和陽性對(duì)照、陰性對(duì)照以及空白對(duì)照進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。
(3)結(jié)果分析:根據(jù)擴(kuò)增曲線的有無判斷對(duì)應(yīng)的SY84位點(diǎn)、SY86位點(diǎn)、SY127位點(diǎn)、SY134位點(diǎn)、SY254位點(diǎn)、SY255位點(diǎn)有無缺失。