苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用圖
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]糖尿病腎病(diabeticnephropathy, DN)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)常見的并發(fā)癥，已成為糖尿病病死率增加的重要的原因。以往研究結果也發(fā)現(xiàn)，第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因編碼的蛋白(phosphatase and tensin homo logdeleted on chromosome ten, PTEN)不僅是腫瘤抑制因子,而且在腎纖維化過程中表現(xiàn)出抗纖維化的作用。但是在糖尿病大鼠腎組織中PTEN表達顯著減少，使TGF-β過度激活磷脂酸肌醇 3 激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶 B (protein kinaseB, PKB/Akt)通路，促進DN的發(fā)生發(fā)展[1]。PTEN作為PI3K/Akt的負調控因子，共同參與了 DN小管上皮細胞的分化、脂質代謝以及系膜細胞增生肥大等生理活動[2]。預防緩解糖尿病的并發(fā)癥對于改善病人的生活質量具有非常重要的意義，苦瓜不僅有良好的食用價值，而且有抗病毒、抗癌、降血糖等多種藥用功效，然而至于苦瓜皂苷緩解糖尿病發(fā)展的機制以及它能否有效緩解糖尿病腎病的發(fā)生均尚未明確。
[0003]

【發(fā)明內容】

[0004]要解決的技術問題:本發(fā)明的目的是明確苦瓜皂苷在治療和緩解糖尿病腎病中的作用，進而明確苦瓜在治療糖尿病腎病藥物中的用途。
[0005]技術方案:本發(fā)明公開了苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，所述的治療糖尿病腎病藥物包括苦瓜皂苷和其他輔料。
[0006]優(yōu)選的，所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，所述的治療糖尿病腎病藥物劑型包括口服制劑、吸入劑、注射劑、栓劑。
[0007]優(yōu)選的，所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，所述的口服制劑包括片劑、丸劑、膠囊、顆粒、膏劑、脂質體、酊劑、湯劑。
[0008]優(yōu)選的，所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.001wt%-50wt%o
[0009]進一步優(yōu)選的，所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.01wt%-10wt%o
[0010]更進一步優(yōu)選的，所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中重量比為0.lwt%_5wt%。
[0011]所述的苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途，所述的其他輔料為粘合劑、潤滑劑、甜味劑、潤濕劑、載體、填充劑中的一種或幾種。
[0012]有益效果:本發(fā)明通過明確苦瓜皂苷在緩解和治療糖尿病腎病中的效果，進而對苦瓜皂苷在治療糖尿病腎病藥物中的用途進行開發(fā)，提出了含有苦瓜皂苷的治療糖尿病腎病藥物的新型藥物。
【附圖說明】
[0013]圖1為免疫組織化學(Envis1n法)檢測各組實驗小鼠腎組織中p_PI3Kρ85 (Υ458)、p-Akt (Ser 473)及 PTEN 三種蛋白的表達情況(400Χ)。
[0014]圖2為Western blotting檢測各組中相關蛋白的表達情況。
[0015]圖3為Western blotting檢測各組中相關蛋白及相對灰度值分析。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]實施例1
一、材料
1.藥物苦瓜皂苷:相當于生藥71.9g/Kg，購于由遼寧省中藥現(xiàn)代化工程技術中心，用蒸餾水配制。
[0018]2.試劑:飼料配方基礎飼料78.8%、蛋黃粉10%、豬油10%、膽固醇1%、膽酸鈉0.2%);胰島素注射液購自南京新百藥業(yè)有限公司；鏈尿佐菌素(STZ)粉劑購自美國Sigma公司，格列本脲購自浙江嘉興生化制藥廠；ΡΤΕΝ、β-actin抗體購自Santa Cruz公司；SABC試劑盒和DAB試劑盒均購自武漢博士德生物技術有限公司；PI3K ρ85、ρ_ΡΙ3Κρ85 (Υ458)、Akt 和 p-Akt (Ser 473)抗體購自 B1world 公司；HRP 標記的二抗購自 Jackson公司。
[0019]3.動物:清潔級小鼠C57BL/6J，18_24g，實驗動物均為雄性小鼠，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，合格證號為SCXK(滬)2012-0002，飼養(yǎng)在室溫保持在22°C?25°C，濕度約50%的動物房中，每晝夜給予12h光照和12h黑暗。
[0020]二、方法
1.動物模型的制備和給藥:高脂飲食2個月聯(lián)合小劑量鏈尿佐菌素(STZ)制備糖尿病腎病小鼠模型，STZ注射劑量為85mg/kg，于高脂飲食誘導3周后開始注射，連續(xù)注射兩次，每次間隔三天，正常對照組注射等量的檸檬酸緩沖液。注射鏈脲佐菌素(STZ)3天后，禁食12h，尾靜脈取血測其空腹血糖>350mg/dl。實驗分為模型組(A組)、格列本脲組(B組)、正常對照組(C組)、苦瓜皂苷低劑量組(Dl組)、中劑量組(D2組)、高劑量組(D3組)。B組采用優(yōu)降糖蒸餾水溶液0.16 g-lkg-1 d-1灌胃，連續(xù)給藥14天；D1組、D2組、D3組分別為給予苦瓜皂苷30、60、120mg-lkg-ld-l灌胃，連續(xù)給藥14天。
[0021]2.組織芯片制備及免疫組化:腎臟組織標本經4%多聚甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色后，在顯微鏡下標記定位，制備成(2X2)的組織陣列的獨立蠟塊(每個標本取直徑為1.6mm的組織芯片)，芯片技術的專利號為:200920350099.2。免疫組化按Envis1n免疫組化法說明書進行。
[0022]3.免疫組化結果判定:PTEN、PI3K/Akt陽性表達于腫瘤細胞核及細胞漿呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。在圖像采集過程中保證設備參數(shù)一致性，每例標本在顯微鏡下隨機選取5個視野(X400)，選擇視野中呈棕黃色陽性反應的區(qū)域并統(tǒng)計這些區(qū)域的累積光密度值(1D)和面積(Area),計算光密度平均值10D/area( mean density )即為該標本的免疫組化評分(IHS)。
[0023]4.組織蛋白提取及Western bloting:剪碎20mg?40 mg新鮮的腎臟組織,加入1.0 ml預冷的RIPA裂解液，置冰浴用勻漿器充分勻漿后，冰浴10 min。將勻漿液轉移至EP管中，12 000 Xg,4 °C離心15 min,取上清加等體積的2X loadding buffer,于100°C加熱5min，蛋白質樣品的分離用100 g/L SDS-PAGE，每泳道上樣量為20 μ g，100 V電壓，電泳90?120 min后，電轉印至PVDF膜上。將膜相應的一抗抗體，4 °C孵育16 h，然后與相應的HRP標志的IgG 二抗(1:10 000)，室溫孵育I h ;然后與內參鼠抗β-a