專(zhuān)利名稱：檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域的基因芯片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。
背景技術(shù)：
貓叫綜合征(Cri-du-chat syndrome，CDCS)是由于5號(hào)染色體短臂缺失所引起的一種較為罕見(jiàn)的染色體病，是常染色體結(jié)構(gòu)畸變所致疾病中常見(jiàn)的一種。新生兒發(fā)病率為 1/50000。該病的臨床特點(diǎn)主要是高調(diào)的貓叫樣哭聲，生長(zhǎng)發(fā)育障礙和嚴(yán)重的智力低下，并具有特殊面容，如小頭、圓臉、眼距寬、內(nèi)眥贅皮、眼瞼下垂、斜視、小下頌、耳位低等，此外還有低出生體重、肌張力低下、先天性心臟病等，其中，高調(diào)的貓叫樣哭聲是具有診斷意義的特征。貓叫綜合征的大多數(shù)病例是在出生時(shí)或出生后有異常哭聲而備受注意的，有關(guān)貓叫綜合征的細(xì)胞分子遺傳學(xué)診斷目前有以下方法染色體常規(guī)顯帶技術(shù)分析，常用方法有 G顯帶、R顯帶、T顯帶、C顯帶、Q顯帶；此外，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP)分析,短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandom repeats, STRs)多態(tài)性分析、Southern印跡技術(shù)和DOP-PCR(變性寡核苷酸引物PCR)技術(shù)都可用于貓叫綜合征的診斷分析。然而尚無(wú)一種快速、低成本、大通量和自動(dòng)化檢測(cè)貓叫綜合征基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)芯片分析技術(shù)是一種突破性技術(shù)，能夠支持研究人員通過(guò)微陣列準(zhǔn)確研究與疾病有關(guān)的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)芯片分析的原理是在一張芯片上用兩份標(biāo)記不同熒光素的樣品(檢測(cè)樣品和對(duì)照樣品)同時(shí)進(jìn)行雜交，從而快速而又直觀地檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品之間基因組DNA的拷貝數(shù)量的差異。CGH應(yīng)用于疾病遺傳學(xué)的研究，可以提供一個(gè)全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個(gè)染色體組的哪個(gè)特定位置存在擴(kuò)增或缺失，那些發(fā)生擴(kuò)增的區(qū)域，極有可能存在致病基因，而缺失區(qū)域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術(shù)方案來(lái)克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷和不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡(jiǎn)單，檢測(cè)特異性高，穩(wěn)定性好，時(shí)間短，成本低。本發(fā)明還提供了前述檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片的使用方法及試劑盒。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)第一方面，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。第二方面，本發(fā)明還涉及前述檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片的使用方法，包括以下步驟 (a)制備樣品DNA片段；
(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)，獲得結(jié)果。第三方面，本發(fā)明還涉及一種用于檢測(cè)貓叫綜合征的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的基因芯片。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy3_dUTP。優(yōu)選地，該試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy5_dUTP。本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡(jiǎn)單，檢測(cè)特異性高，穩(wěn)定性好，該芯片多次試驗(yàn)重復(fù)性高；時(shí)間短，從樣本抽提到獲得掃描結(jié)果可在一天內(nèi)完成。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解為這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)見(jiàn)New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例本實(shí)施例的基因芯片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實(shí)施例基因芯片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、硅片、尼龍膜或聚本乙烯。本實(shí)施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產(chǎn)，同時(shí)本實(shí)施例的基因芯片也由安捷倫公司按照常規(guī)方法生產(chǎn)。本實(shí)施例基因芯片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的制備取患者、正常人血液，采用常規(guī)方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調(diào)到371和651，溶化10\8吐作『C (見(jiàn)下表)，短暫渦旋震蕩后離心數(shù)秒。對(duì)每個(gè)反應(yīng)來(lái)說(shuō)，將gDNA加入到適當(dāng)?shù)臒o(wú)核酸酶的PCR管中，并加入無(wú)核酸酶的水使反應(yīng)體積達(dá)到10. 1 μ L0在冰上準(zhǔn)備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特征在于，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片，其特征在于，所述固相載體選自載玻片、硅片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。
3.—種如權(quán)利要求1所述檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片的使用方法，其特征在于，包括以下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)，獲得結(jié)果。
4.一種用于檢測(cè)貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的基因芯片。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy3-dUTP。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)貓叫綜合征的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括標(biāo)記物，所述標(biāo)記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)貓叫綜合征的基因芯片及使用方法、試劑盒，所述基因芯片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)制備樣品DNA片段；(b)熒光標(biāo)記上述DNA片段；(c)洗脫上述標(biāo)記產(chǎn)物；(d)將標(biāo)記產(chǎn)物與所述基因芯片雜交；(e)掃描檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)，獲得結(jié)果；本發(fā)明還涉及包含前述基因芯片的試劑盒。本發(fā)明的基因芯片操作步驟簡(jiǎn)單，檢測(cè)特異性高，穩(wěn)定性好，從樣本抽提到得到掃描結(jié)果可在一個(gè)工作日內(nèi)完成，成本低，適用于臨床患者基因突變檢測(cè)、產(chǎn)前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102559871SQ20111041007
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者吳茜, 李笑天, 秦勝營(yíng), 賀林, 郭奇桑, 龔小會(huì) 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué), 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院