本發(fā)明屬于藥物開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有ido/tdo抑制活性的稠合咪唑衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
色氨酸(trp)是一種人體必需的氨基酸，是人體合成蛋白質(zhì)、煙酸和神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(血清素)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。色氨酸在體內(nèi)有兩種代謝途徑：5-羥色胺途徑和犬尿氨酸途徑。少部分色氨酸通過(guò)色氨酸羥化酶生成5-羥色胺，約95％的色氨酸在吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，ido)或色氨酸2，3-雙加氧酶(tryptophan2，3-dioxygenase，tdo)的作用下生成犬尿氨酸。犬尿氨酸也有兩條代謝通路，大部分在犬尿氨酸羥化酶(kynurenine3-hydroxylase)的作用下生成3-羥犬尿氨酸(3-hydroxykynurenine)，繼而由犬尿氨酸酶(kynureninase，kynu)催化水解生成3-羥鄰氨苯甲酸，最后經(jīng)過(guò)多級(jí)酶促反應(yīng)生成喹啉酸、吡啶羧酸類(lèi)及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide，nad)等活性分子參與體內(nèi)各種生理過(guò)程；另外一條通路是在犬尿氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(kynurenineaminitricoxidetransferaseiandⅱ，kati/1i)的作用下生成犬尿喹啉酸(kynurenicacid，kyna)。
吲哚胺2，3-雙加氧酶(ido)是色氨酸/犬尿氨酸途徑的限速酶，在哺乳動(dòng)物ido廣泛存在于除肝臟以外的組織細(xì)胞內(nèi)，包括星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，作用于比tdo更廣泛的含有吲哚胺的底物。tdo幾乎都在肝臟中表達(dá)，對(duì)底物有較高的選擇性。
ido可以被前炎癥因子所誘導(dǎo)，其中干擾素γ是最強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，在高水平干擾素γ的刺激活化期間，激活ido，促進(jìn)了色氨酸的代謝。
對(duì)懷孕小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，母胎體界面的合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞可以合成ido，并且ido表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化與胚胎形成一致，如果特異性阻斷ido的合成，則可導(dǎo)致小鼠流產(chǎn)，表明ido可以阻止免疫排斥，是一種免疫調(diào)節(jié)酶。ido與腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)對(duì)其監(jiān)視和攻擊的免疫逃逸有關(guān)。多種腫瘤細(xì)胞高表達(dá)ido抗原，使局部t細(xì)胞增殖受到抑制，從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。ido參與調(diào)節(jié)t細(xì)胞反應(yīng)，t細(xì)胞對(duì)色氨酸耗竭很敏感，當(dāng)色氨酸濃度降低是，t細(xì)胞增殖就會(huì)停止在g1期，ido通過(guò)降解色氨酸抑制了t細(xì)胞的活化。
ido活化與多種疾病發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，是腫瘤，阿爾茨海默氏癥，帕金森氏癥，抑郁癥等相關(guān)疾病領(lǐng)域的重要靶點(diǎn)，針對(duì)ido/tdo的抑制劑，能夠解放機(jī)體的防御系統(tǒng)，并幫助t細(xì)胞更好地攻擊腫瘤，因此具有治療廣泛類(lèi)型腫瘤的潛力，ido/tdo抑制劑具有廣闊的應(yīng)用前景，但迄今為止沒(méi)有ido/tdo抑制劑上市，因此，尋找和開(kāi)發(fā)新型高效的ido抑制劑具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
目前吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑的研發(fā)均處于研發(fā)早期，包括newlink公司的indoximod，nlg-919(ido/tdo雙特異性)，incyte公司的epacadostat(incb024360)，以及bms，flexus，iomet,iteos,curadev等公司的ido或tdo抑制劑。本發(fā)明的實(shí)施例化合物在酶學(xué)和細(xì)胞模型中對(duì)吲哚胺2,3-雙加氧酶(ido)具有很高的抑制活性，對(duì)色氨酸2，3-雙加氧酶(tdo)也具有抑制活性，并且在pk動(dòng)物模型中具有很好的暴露量。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，發(fā)明人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)一類(lèi)具有式(i)結(jié)構(gòu)的的稠合咪唑衍生物，該系列化合物對(duì)ido/tdo具有很高的抑制活性，可以單獨(dú)或聯(lián)合用藥用于治療由ido/tdo介導(dǎo)的色氨酸代謝紊亂的病理學(xué)特征的疾病?？蓮V泛應(yīng)用于治療或預(yù)防癌癥或腫瘤、病毒感染、抑郁癥、神經(jīng)變性病癥、創(chuàng)傷、年齡相關(guān)的白內(nèi)障、器官移植排斥或自身免疫疾病，也可用于抑制患者的免疫抑制，有望開(kāi)發(fā)成新一代免疫抑制劑。
本發(fā)明一方面提供一種具有如下式(i)的化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽：
其中，
r1、r2各自獨(dú)立的選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、c5-10芳基、5-10元雜芳基、-c0-8-s(o)rr5、-c0-8-o-r6、-c0-8-c(o)or6、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r7、-c0-8-nr8r9、-c0-8-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6，
任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-8烷基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-10芳基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基、-c0-8-s(o)rr5、-c0-8-o-r6、-c0-8-c(o)or6、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r7、-c0-8-nr8r9、-c0-8-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6的取代基所取代；
r、r3、r4各自獨(dú)立的選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-8烷基、任選取代或未取代的c2-8鏈烯基、任選取代或未取代的c2-8鏈炔基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-10芳基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基、-c0-8-s(o)rr5、-c0-8-o-r6、-c0-8-c(o)or6、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r7、-c0-8-nr8r9、-c0-8-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6；
r5、r6各自獨(dú)立的選自氫、氘、任選取代或未取代的c1-8烷基、任選取代或未取代的c2-8鏈烯基、任選取代或未取代的c2-8鏈炔基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-10芳基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基、任選取代或未取代的氨基或任選取代或未取代的c1-8烷?；?；
r7選自氫、氘、任選取代或未取代的c1-8烷基、任選取代或未取代的c2-8鏈烯基、任選取代或未取代的c2-8鏈炔基、任選取代或未取代的c1-8烷氧基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷氧基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)氧基、任選取代或未取代的c5-10芳基、任選取代或未取代的c5-10芳基氧基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基氧基或任選取代或未取代的氨基；
r8、r9各自獨(dú)立的選自氫、氘、羥基、任選取代或未取代的c1-8烷基、任選取代或未取代的c2-8鏈烯基、任選取代或未取代的c2-8鏈炔基、任選取代或未取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-8元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-10芳基、任選取代或未取代的5-10元雜芳基、任選取代或未取代的c1-8烷酰基或任選取代或未取代的氨基；
m為0、1、2、3或4；
n為0、1、2、3、4或5；
r為0、1或2。
作為進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，r1選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-4烷基、c2-4鏈烯基、c2-4鏈炔基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、c5-8芳基、5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6，任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6的取代基所取代；優(yōu)選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-4烷基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6或-c0-4-nr8r9，任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6的取代基所取代；更優(yōu)選自氫、氘、鹵素、氰基、c1-4烷基、鹵取代c1-4烷基、羥基取代c1-4烷基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-c(o)or6或-c0-4-nr8r9。
作為更進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，r、r3、r4各自獨(dú)立的選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c2-4鏈烯基、任選取代或未取代的c2-4鏈炔基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6；r、r3、r4各自獨(dú)立的優(yōu)選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7或-c0-4-nr8r9；r、r3、r4各自獨(dú)立的更優(yōu)選自氫、氘、氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、異丙基、羥甲基、環(huán)丙基。
作為更進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，r2選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-4烷基、c2-4鏈烯基、c2-4鏈炔基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、c5-8芳基、5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6，任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、疊氮基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6、-c0-4-o-c(o)r7、-c0-4-nr8r9、-c0-4-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6的取代基所取代；優(yōu)選自氫、氘、鹵素、氰基、c1-4烷基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、c5-8芳基、5-8元雜芳基、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6或-c0-4-c(o)r6，任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6或-c0-4-o-c(o)r7的取代基所取代。
作為更進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，所述任選取代的取代基選自氘、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、乙酰氨基、疊氮基、磺?；?、甲磺?；?、異丙磺酰基、苯磺?；?、氨基磺?；1-8烷基、三氟甲基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、c1-8烷氧基、c1-8烷氧羰基、c1-8烷基羰基、c1-8烷基羰基氧基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、氨基、單c1-8烷基氨基或二c1-8烷基氨基。
作為更進(jìn)一步優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，選自式(ⅱ)化合物：
其中，
r選自氫、氘、氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、異丙基、羥甲基、環(huán)丙基；
r1選自氫、氘、氟、氯、溴、氰基、硝基、甲基、異丙基、三氟甲基、羥甲基、環(huán)丙基、哌嗪基、嗎啉基、磺?；⒓谆酋；?、異丙磺?；?、苯磺?；?、氨基磺?；?、羧基或氨基；
r2選自氫、氘、氟、氯、溴、氰基、c1-4烷基、c3-6環(huán)烷基、哌嗪基、嗎啉基、咪唑基、吡唑基、吡咯基、吡啶基、三氮唑基、異噁唑、-c0-4-o-r6或-c0-4-c(o)or6，任選進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、任選取代或未取代的c1-4烷基、任選取代或未取代的c3-6環(huán)烷基、任選取代或未取代的3-6元雜環(huán)基、任選取代或未取代的c5-8芳基、任選取代或未取代的5-8元雜芳基、-c0-4-s(o)rr5、-c0-4-o-r6、-c0-4-c(o)or6、-c0-4-c(o)r6或-c0-4-o-c(o)r7的取代基所取代，所述任選取代的取代基選自鹵素、羥基、巰基、氰基、乙酰氨基、磺?；⒓谆酋；?、異丙磺酰基、苯磺酰基、氨基磺?；?、c1-4烷基、三氟甲基、c3-6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)基、c1-4烷氧基、c1-4烷氧羰基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基羰基氧基、3-6元雜環(huán)基氧基、3-6元雜環(huán)基硫基、c5-8芳基、c5-8芳基氧基、c5-8芳基硫基、5-8元雜芳基、5-8元雜芳基氧基、5-8元雜芳基硫基、氨基、單c1-4烷基氨基或二c1-4烷基氨基。
作為最優(yōu)選的方案，所述式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，
選自如下化合物：
本發(fā)明另一方面提供一種前所述的式(i)化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽的制備方法，包括如下步驟：
本發(fā)明另一方面提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效劑量的前述化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽及可藥用的載體。
本發(fā)明另一方面提供一種前述化合物、其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受鹽，或前述藥物組合物在制備用于治療由ido/tdo介導(dǎo)的色氨酸代謝紊亂的病理學(xué)特征的疾病的藥物中的應(yīng)用；所述ido/tdo介導(dǎo)的色氨酸代謝紊亂的病理學(xué)特征的疾病優(yōu)選自癌癥或腫瘤、病毒感染、抑郁癥、神經(jīng)變性病癥、創(chuàng)傷、年齡相關(guān)的白內(nèi)障、器官移植排斥或自身免疫疾病。
具體實(shí)施方式
詳細(xì)說(shuō)明：除非有相反陳述，下列用在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中的術(shù)語(yǔ)具有下述含義。
“c1-8烷基”指包括1至8個(gè)碳原子的直鏈烷基和含支鏈烷基，烷基指飽和的脂族烴基團(tuán)，c0-8是指不含碳原子或者c1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各種支鏈異構(gòu)體等。
烷基可以是取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以在任何可使用的連接點(diǎn)上被取代，優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“環(huán)烷基”指飽和或部分不飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)狀烴取代基，“c3-8環(huán)烷基”指包括3至8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，“5-10元環(huán)烷基”指包括5至10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，例如：
單環(huán)環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)庚三烯基、環(huán)辛基等。
多環(huán)環(huán)烷基包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán)的環(huán)烷基?！奥莪h(huán)烷基”指單環(huán)之間共用一個(gè)碳原子(稱(chēng)螺原子)的多環(huán)基團(tuán)，這些可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。根據(jù)環(huán)與環(huán)之間共用螺原子的數(shù)目將螺環(huán)烷基分為單螺環(huán)烷基、雙螺環(huán)烷基基或多螺環(huán)烷基，螺環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含：
“稠環(huán)烷基”指系統(tǒng)中的每個(gè)環(huán)與體系中的其他環(huán)共享毗鄰的一對(duì)碳原子的全碳多環(huán)基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)稠環(huán)烷基，稠環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含：
“橋環(huán)烷基”指任意兩個(gè)環(huán)共用兩個(gè)不直接連接的碳原子的全碳多環(huán)基團(tuán)，這些可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)橋環(huán)烷基，橋環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含：
所述環(huán)烷基環(huán)可以稠合于芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為環(huán)烷基，非限制性實(shí)施例包括茚滿(mǎn)基、四氫萘基、苯并環(huán)庚烷基等。
環(huán)烷基可以是任選取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“雜環(huán)基”指飽和或部分不飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)狀烴取代基，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子選自氮、氧或s(o)r(其中r是整數(shù)0、1、2)的雜原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的環(huán)部分，其余環(huán)原子為碳?！?-10元雜環(huán)基”指包含5至10個(gè)環(huán)原子的環(huán)基，“3-8元雜環(huán)基”指包含3至8個(gè)環(huán)原子的環(huán)基。
單環(huán)雜環(huán)基的非限制性實(shí)施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基等。
多環(huán)雜環(huán)基包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán)的雜環(huán)基?！奥蓦s環(huán)基”指單環(huán)之間共用一個(gè)原子(稱(chēng)螺原子)的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子選自氮、氧或s(o)r(其中r是整數(shù)0、1、2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。這些可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)。根據(jù)環(huán)與環(huán)之間共用螺原子的數(shù)目將螺環(huán)烷基分為單螺雜環(huán)基、雙螺雜環(huán)基或多螺雜環(huán)基。螺環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含：
“稠雜環(huán)基”指系統(tǒng)中的每個(gè)環(huán)與體系中的其他環(huán)共享毗鄰的一對(duì)原子的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子選自氮、氧或s(o)r(其中r是整數(shù)0、1、2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)稠雜環(huán)烷基，稠雜環(huán)基的非限制性實(shí)施例包含：
“橋雜環(huán)基”指任意兩個(gè)環(huán)共用兩個(gè)不直接連接的原子的多環(huán)雜環(huán)基團(tuán)，這些可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但沒(méi)有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的π電子系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子選自氮、氧或s(o)r(其中r是整數(shù)0、1、2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。根據(jù)組成環(huán)的數(shù)目可以分為雙環(huán)、三環(huán)、四環(huán)或多環(huán)橋環(huán)烷基，橋環(huán)烷基的非限制性實(shí)施例包含：
所述雜環(huán)基環(huán)可以稠合于芳基、雜芳基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為雜環(huán)基，非限制性實(shí)施例包含：
雜環(huán)基可以是任選取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“芳基”指全碳單環(huán)或稠合多環(huán)(也就是共享毗鄰碳原子對(duì)的環(huán))基團(tuán)，具有共軛的π電子體系的多環(huán)(即其帶有相鄰對(duì)碳原子的環(huán))基團(tuán)，“c5-10芳基”指含有5-10個(gè)碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10個(gè)碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。所述芳基環(huán)可以稠合于雜芳基、雜環(huán)基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為芳基環(huán)，非限制性實(shí)施例包含：
芳基可以是取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“雜芳基”指包含1至4個(gè)雜原子的雜芳族體系，所述雜原子包括氮、氧和s(o)r(其中r是整數(shù)0、1、2)的雜原子，5-7元雜芳基指含有5-7個(gè)環(huán)原子的雜芳族體系，5-10元雜芳基指含有5-10個(gè)環(huán)原子的雜芳族體系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述雜芳基環(huán)可以稠合于芳基、雜環(huán)基或環(huán)烷基環(huán)上，其中與母體結(jié)構(gòu)連接在一起的環(huán)為雜芳基環(huán)，非限制性實(shí)施例包含：
雜芳基可以是任選取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“烯基”指由至少兩個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳雙鍵組成的如上述定義的烷基，c2-8鏈烯基指含有2-8個(gè)碳的直鏈或含支鏈烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
烯基可以是取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“炔基”指至少兩個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳三鍵組成的如上所定義的烷基，c2-8鏈炔基指含有2-8個(gè)碳的直鏈或含支鏈炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
炔基可以是取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“烷氧基”指-o-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。c1-8烷氧基指含1-8個(gè)碳的烷基氧基，非限制性實(shí)施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
烷氧基可以是任選取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基，優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)，獨(dú)立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1-8烷基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、鹵取代c1-8烷基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr4、-c0-8-o-r5、-c0-8-c(o)or5、-c0-8-c(o)r6、-c0-8-o-c(o)r6、-c0-8-nr7r8、-c0-8-c(o)nr7r8、-n(r7)-c(o)r6或-n(r7)-c(o)or5的取代基所取代；
“鹵取代的c1-8烷基”指烷基上的氫任選的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8個(gè)碳烷基基團(tuán)，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“鹵取代的c1-8烷氧基”指烷基上的氫任選的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8個(gè)碳烷氧基基團(tuán)。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
“dmso”指二甲基亞砜。
“l(fā)da”指二異丙基氨基鋰。
“diad”指偶氮二甲酸二異丙酯。
“dmf”指n,n-二甲基甲酰胺。
“dppa”指疊氮磷酸二苯酯。
“pd(dppf)cl2”指[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀。
“thf”指四氫呋喃。
“任選取代”指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子，彼此獨(dú)立地被相應(yīng)數(shù)目的氘、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、c1‐8烷基、c2‐8鏈烯基、c2‐8鏈炔基、鹵取代c1‐8烷基、c3‐8環(huán)烷基、3‐8元雜環(huán)基、3‐8元雜環(huán)基氧基、3‐8元雜環(huán)基硫基、c5‐10芳基、c5‐10芳基氧基、c5‐10芳基硫基、5‐10元雜芳基、5‐10元雜芳基氧基、5‐10元雜芳基硫基、-c0-8-s(o)rr5、-c0-8-o-r6、-c0-8-c(o)or6、-c0-8-c(o)r7、-c0-8-o-c(o)r7、-c0-8-nr8r9、-c0-8-c(o)nr8r9、-n(r8)-c(o)r7或-n(r8)-c(o)or6的取代基所取代；優(yōu)選氘、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、乙酰氨基、疊氮基、磺酰基、甲磺酰基、異丙磺?；?、苯磺酰基、氨基磺酰基、c1-8烷基、三氟甲基、c2-8鏈烯基、c2-8鏈炔基、c3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、c1-8烷氧基、c1-8烷氧羰基、c1-8烷基羰基、c1-8烷基羰基氧基、3-8元雜環(huán)基氧基、3-8元雜環(huán)基硫基、c5-10芳基、c5-10芳基氧基、c5-10芳基硫基、5-10元雜芳基、5-10元雜芳基氧基、5-10元雜芳基硫基、氨基、單c1-8烷基氨基或二c1-8烷基氨基的取代基所取代。
“任選”或“任選地”意味著隨后所描述地事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說(shuō)明包括該事件或環(huán)境發(fā)生或不發(fā)生地場(chǎng)合。例如，“任選被烷基取代的雜環(huán)基團(tuán)”意味著烷基可以但不必須存在，該說(shuō)明包括雜環(huán)基團(tuán)被烷基取代的情形和雜環(huán)基團(tuán)不被烷基取代的情形。
“取代的”指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子，優(yōu)選為最多5個(gè)，更優(yōu)選為1～3個(gè)氫原子彼此獨(dú)立地被相應(yīng)數(shù)目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學(xué)位置，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在不付出過(guò)多努力的情況下確定(通過(guò)實(shí)驗(yàn)或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的氨基或羥基與具有不飽和鍵(如烯屬)的碳原子結(jié)合時(shí)可能是不穩(wěn)定的。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學(xué)組分的混合物，以及其他組分例如生理學(xué)/可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進(jìn)對(duì)生物體的給藥，利于活性成分的吸收進(jìn)而發(fā)揮生物活性。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說(shuō)明，但決非限制本發(fā)明，本發(fā)明也并非僅局限于實(shí)施例的內(nèi)容。
本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)是通過(guò)核磁共振(nmr)或/和液質(zhì)聯(lián)用色譜(lc-ms)來(lái)確定的。nmr化學(xué)位移(δ)以百萬(wàn)分之一(ppm)的單位給出。nmr的測(cè)定是用brukeravance-400核磁儀，測(cè)定溶劑為氘代甲醇(cd3od)和氘代氯仿(cdcl3)內(nèi)標(biāo)為四甲基硅烷(tms)。
液質(zhì)聯(lián)用色譜lc-ms的測(cè)定用agilent1200infinityseries質(zhì)譜儀。hplc的測(cè)定使用安捷倫1200dad高壓液相色譜儀(sunfirec18150×4.6mm色譜柱)和waters2695-2996高壓液相色譜儀(giminic18150×4.6mm色譜柱)。
薄層層析硅膠板使用煙臺(tái)黃海hsgf254或青島gf254硅膠板，tlc采用的規(guī)格是0.15mm～0.20mm，薄層層析分離純化產(chǎn)品采用的規(guī)格是0.4mm～0.5mm。柱層析一般使用煙臺(tái)黃海硅膠200～300目硅膠為載體。
本發(fā)明實(shí)施例中的起始原料是已知的并且可以在市場(chǎng)上買(mǎi)到，或者可以采用或按照本領(lǐng)域已知的方法來(lái)合成。
在無(wú)特殊說(shuō)明的情況下，本發(fā)明的所有反應(yīng)均在連續(xù)的磁攪拌下，在干燥氮?dú)饣驓鍤夥障逻M(jìn)行，溶劑為干燥溶劑。
氬氣氛或氮?dú)夥帐侵阜磻?yīng)瓶連接一個(gè)約1l容積的氬氣或氮?dú)鈿馇?。氫氣氛是指反?yīng)瓶連接一個(gè)約1l容積的氫氣氣球。
在無(wú)特殊說(shuō)明的情況下，實(shí)施例中的溶液是指水溶液。反應(yīng)的溫度為室溫。室溫為最適宜的反應(yīng)溫度，為20℃～30℃。
實(shí)施例中的反應(yīng)進(jìn)程的監(jiān)測(cè)采用薄層色譜法(tlc)或液質(zhì)聯(lián)用色譜(lc-ms)反應(yīng)所使用的展開(kāi)劑體系有：二氯甲烷和甲醇體系，正己烷和乙酸乙酯體系，石油醚和乙酸乙酯體系，丙酮，溶劑的體積比可根據(jù)化合物的極性不同而進(jìn)行調(diào)節(jié)。柱層析的洗脫劑的體系包括：a：二氯甲烷和甲醇體系，b：正己烷和乙酸乙酯體系，c：二氯甲烷和乙酸乙酯體系，d：乙酸乙酯和甲醇，溶劑的體積比根據(jù)化合物的極性不同而進(jìn)行調(diào)節(jié)，也可以加入少量的氨水和醋酸等進(jìn)行調(diào)節(jié)。
實(shí)施例1:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基苯基)脲
第一步：1-(2-溴苯甲基)-1h-咪唑的制備
將鄰溴甲苯(20g,117mmol)，溴代丁二酰亞胺(22.0g,123mmol)，偶氮二異丁腈(1g)溶于干燥四氯化碳(200ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流16小時(shí)。反應(yīng)冷至室溫后過(guò)濾，濾液加入咪唑(15.9g,234mmol)和碳酸鉀(33g,234mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流5小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(100ml)，用水(2x50ml)洗滌。分離有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，殘留物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2-溴苯甲基)-1h-咪唑(20g)。
lc-ms:236.9,239.1,tr＝1.541min.
第二步：5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚的制備
將1-(2-溴-苯甲基)-1h-咪唑(20g,84.0mmol)，醋酸鈀(500mg)，三苯基膦(500mg)，碳酸鉀(23g,167mmol)溶于dmso(200ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至140℃攪拌2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)液濃縮干，剩余物溶于乙酸乙酯(200ml)，依次用水(2x100ml)，飽和食鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(10.0g)。
lc-ms:157.1，tr＝1.466min.
第三步：(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲醇的制備
5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(668mg,4.277mmol)，多聚甲醛(193mg,6.427mmol)于四氫呋喃(5ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下冷至-78℃，滴加lda(3.2ml，2minthf)。緩慢升溫至室溫，攪拌過(guò)夜。加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲醇(196mg)。
lc-ms:187.1,tr＝1.396min.
第四步：2-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)異二氫吲哚-1,3-二酮的制備
將(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲醇(180mg,0.967mmol)，鄰苯二甲酰亞胺(294mg,2.0mmol)，三苯基膦(525mg,2.0mmol)溶于甲苯(5ml)中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌，室溫下滴加diad(404mg,2.0mmol)的甲苯(5ml)溶液，攪拌過(guò)夜。過(guò)濾，濾液加水，乙酸乙酯提取，干燥，柱層析純化得2-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)異二氫吲哚-1,3-二酮(93mg)。
lc-ms:316.0,tr＝1.866min.
第五步：(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲胺的制備
2-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)異二氫吲哚-1,3-二酮(93mg,0.295mmol)，水合肼(85％,1ml)于乙醇(2ml)中回流4小時(shí)，冷卻，濃縮，殘留物經(jīng)柱層析純化得(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲胺(20mg)。
lc-ms:186.1,tr＝0.618min.
第六步：1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基苯基)脲的制備
(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲胺(20mg,0.108mmol)，4-氰基苯異氰酸酯(20mg,0.139mmol)，三乙胺(22mg,0.217mmol)于dmf(2ml)中室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基苯基)脲(5mg)。
lc-ms:330.1,tr＝1.896min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ9.25(s,1h),8.24(s,1h),7.72-7.57(m,4h),7.56-7.41(m,3h),7.39-7.27(m,2h),6.64(t,j＝5.9hz,1h),5.61-5.46(m,1h),4.07-3.94(m,1h),3.66-3.55(m,1h).
實(shí)施例2:
1-(4-氰基苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
第一步：1-(2-氟-6-溴苯甲基)-1h-咪唑的制備
將1-溴-3-氟-2-甲苯(8.0g,42.3mmol)，溴代丁二酰亞胺(9.0g,50.8mmol)，偶氮二異丁腈(300mg)溶于干燥四氯化碳(100ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流16小時(shí)。反應(yīng)冷至室溫后過(guò)濾，濾液加入咪唑(8.7g,126.9mmol)和碳酸鉀(17.5g,126.9mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流5小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，殘留物經(jīng)過(guò)快速硅膠柱層析純化得到1-(2-溴-6-氟苯甲基)-1h-咪唑(6.0g)。
第二步：6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚的制備
將1-(2-溴-6-氟苯甲基)-1h-咪唑(6.0g,23.5mmol)，醋酸鈀(200mg)，三苯基膦(300mg)，碳酸鉀(6.5g,47.0mmol)溶于dmso(50ml)中，反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至140℃攪拌2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)液濃縮干，剩余物溶于乙酸乙酯(200ml)，依次用水(2x100ml)，飽和食鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮，殘留物通過(guò)快速硅膠柱純化得到6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(3.0g)。
第三步：2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸叔丁酯的制備
6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(200mg,1.148mmol)溶于干燥的四氫呋喃(2ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下冷至-78℃，滴加lda(0.86ml,2minthf)。緩慢升至室溫，攪拌3小時(shí)，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸叔丁酯(245mg)。
lc-ms:289.1，tr＝1.989min.
第四步：2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸的制備
2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸叔丁酯(245mg,0.850mmol)溶于乙酸乙酯(2ml)，加入氯化氫/二氧六環(huán)溶液(2ml)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，柱層析純化得2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(93mg)。
lc-ms:233.1,tr＝1.532min.
第五步：1-(4-氰基苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(30mg,0.129mmol)，4-氰基苯胺(17mg,0.144mmol)，dppa(39mg,0.142mmol)，三乙胺(20mg,0.198mmol)于甲苯(4ml)中氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-(4-氰基苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(11mg)。
lc-ms:348.1,tr＝1.853min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ9.57(s,1h),9.17(s,1h),7.83(s,1h),7.62(ddd,j＝15.6,12.4,7.7hz,4h),7.49(d,j＝8.7hz,2h),7.33(t,j＝9.0hz,1h),7.16(s,1h),5.99(s,1h),4.21(d,j＝15.0hz,1h),3.69(d,j＝8.2hz,1h).
實(shí)施例3:
1-(4-溴苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg,0.86mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(475mg,1.72mmol)，三乙胺(180mg,1.72mmol)，對(duì)溴苯胺(300mg,1.72mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-溴苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(6.0mg)。
lc-ms:401.0,tr＝2.118min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,1h),7.56-7.43(m,2h),7.42-7.31(m,2h),7.27-7.18(m,3h),7.15-7.03(m,1h),5.77-5.61(m,1h),4.22(dd,j＝14.4,3.9hz,1h),3.68(dd,j＝14.4,5.9hz,1h).
實(shí)施例4:
1-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
第一步：4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺的制備
將對(duì)溴苯胺(2.0g,11.5mmol)，1-甲基吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(2.4g,11.5mmol)，pd(dppf)cl2(100mg)，磷酸鉀(4.8g,23.0mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(20ml)和20ml水中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至100℃攪拌3小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(50ml)，用水(2x30ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(1.5g)。
第二步：1-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲的制備
將2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg,0.86mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(475mg,1.72mmol)，三乙胺(180mg,1.72mmol)，4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(300mg,1.72mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(20.8mg)。
lc-ms:403.15,tr＝1.831min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.97(s,1h),7.86(s,1h),7.74(s,1h),7.53-7.45(m,2h),7.44-7.38(m,2h),7.30-7.25(m,2h),7.22(s,1h),7.09(ddd,j＝9.5,6.3,2.9hz,1h),5.69(dd,j＝5.8,4.0hz,1h),4.22(dd,j＝14.4,3.9hz,1h),3.91(s,3h),3.66.
實(shí)施例5:
1-(4-氰基苯基)-3-((6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
第一步：1-(2-溴-6-(三氟甲基)苯甲基)-1h-咪唑的制備
將1-溴-3-(三氟甲基)-2-甲苯(5.0g,20.9mmol)，溴代丁二酰亞胺(3.72g,20.9mmol)，偶氮二異丁腈(300mg)溶于干燥四氯化碳(100ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流16小時(shí)。反應(yīng)冷至室溫后過(guò)濾，濾液加入咪唑(2.85g,42mmol)和碳酸鉀(4.34g,31.37mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流5小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(50ml)，用水(2x40ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮，剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2-溴-6-(三氟甲基)苯甲基)-1h-咪唑(5.0g)。
第二步：6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚的制備
將1-(2-溴-6-(三氟甲基)苯甲基)-1h-咪唑(5.0g,16.4mmol)，醋酸鈀(184mg)，三苯基膦(430mg)，碳酸鉀(4.4g,32.8mmol)溶于dmso(50ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至140℃攪拌2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)液濃縮干，剩余物溶于乙酸乙酯(200ml)，依次用水(2x100ml)，飽和食鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(2.9g)。
第三步：2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯的制備
將6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(2.9g,12.9mmol)溶于無(wú)水thf(100ml)中，在-30℃下緩慢滴加lda(9.7ml,19.4mmol,2minthf)。滴畢，在-30℃攪拌15分鐘，緩慢滴入溴乙酸叔丁酯(3.8g,19.4mmol)。在-30℃至0℃下攪拌1小時(shí)，lc-ms顯示反應(yīng)完全，用飽和nh4cl(100ml)淬滅。有機(jī)相分層干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(2g)。
第四步：2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸的制備
將2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(230mg,0.68mmol)溶于三氟乙酸(2ml)，二氯甲烷(2ml)中，在室溫下攪拌1小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，得到粗品2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg)。
第五步：1-(4-腈基苯基-3-((6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
將2-(6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg,0.71mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(487mg,1.77mmol)，三乙胺(0.4ml,2.83mmol)，4-氨基苯乙腈(0.21mg,1.77mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-腈基苯基-3-((6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(6.1mg)。
lc-ms:398.0,tr＝2.044min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.99(s,1h),7.93(d,j＝5.5hz,1h),7.73-7.64(m,2h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.46(d,j＝8.8hz,2h),7.27(s,1h),5.88-5.82(m,1h),4.35(dd,j＝14.6,2.9hz,2h),3.57(dd,j＝14.6,5.8hz,2h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-60.9.
實(shí)施例6:
1-((6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基苯基)脲
將2-(6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(420mg,1.69mmol)溶于15ml甲苯，加入dppa(511mg,1.859mmol)，三乙胺(256mg,2.533mmol)和對(duì)氰基苯胺(219mg,1.859mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基苯基)脲(58mg)。
lc-ms：364.0,tr＝1.926min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ9.02(s,1h),7.93(s,1h),7.63(dd,j＝15.8,8.1hz,3h),7.53-7.42(m,3h),7.34(dd,j＝7.7,4.2hz,1h),7.21(s,1h),6.44(t,j＝6.0hz,1h),5.61(dd,j＝6.1,3.3hz,1h),4.28(ddd,j＝14.1,5.7,3.4hz,1h),3.65-3.51(m,1h).
實(shí)施例7:
1-(3-氟-4-甲氧苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
將2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(80mg,0.35mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(190mg,0.69mmol)，三乙胺(100mg,0.9mmol)，3-氟-4-甲氧基苯胺(100mg,0.69mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(3-氟-4-甲氧苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(16.0mg)。
lc-ms:371.0,tr＝1.970min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,1h),7.54-7.44(m,2h),7.20(dd,j＝13.4,2.4hz,2h),7.09(ddd,j＝9.5,6.5,2.6hz,1h),6.96(t,j＝9.0hz,1h),6.88(ddd,j＝8.8,2.4,1.3hz,1h),5.69(dd,j＝5.7,4.1hz,1h),4.20(dd,j＝14.4,3.9hz,1h),3.82(s,3h),3.66(dd,j＝14.4,6.0hz,1h).
實(shí)施例8:
1-(3-溴苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
將2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(80mg,0.35mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(190mg,0.69mmol)，三乙胺(100mg,0.9mmol)，3-溴苯胺(120mg,0.69mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(3-溴苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(2.1mg)。
lc-ms:401.0,tr＝2.11min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.97(s,1h),7.63(s,1h),7.48(s,2h),7.15(dd,j＝26.1,17.6hz,4h),5.70(s,1h),4.22(d,j＝14.0hz,1h),3.78-3.54(m,1h).
實(shí)施例9:
1-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氟苯基)脲
將2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(80mg,0.35mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(190mg,0.69mmol)，三乙胺(100mg,0.9mmol)，4-氟苯胺(80mg,0.69mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氟苯基)脲(11.2mg)。
lc-ms:341.0,2.116min；
1hnmr(400mhzmeod)δ7.98(s,1h),7.92-7.81(m,1h),7.53-7.41(m,2h),7.22(s,1h),7.08(ddd,j＝17.2,9.7,5.1hz,3h),7.00-6.93(m,1h),5.79-5.62(m,1h),4.24(dd,j＝14.4,3.8hz,1h),3.73(dd,j＝14.5,5.6hz,1h).
實(shí)施例10:
1-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-(三氟甲基)-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例5。
lc-ms:453.1,tr＝1.983min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.86(s,1h),7.83-7.77(m,1h),7.74(s,1h),7.61(s,1h),7.59-7.49(m,2h),7.33-7.25(m,2h),7.18-7.09(m,3h),5.71(s,1h),4.21(dd,j＝14.5,3.4hz,1h),3.79(s,3h),3.39(dd,j＝14.5,6.1hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-60.9.
實(shí)施例11:
1-((6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將2-(6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(245mg,0.984mmol)溶于15ml甲苯，然后加入dppa(298mg,1.083mmol)，三乙胺(149mg,1.478mmol)和4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(188mg,1.083mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)得到1-((6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(50mg)。
lc-ms:419.0,tr＝1.920min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ8.48(s,1h),7.96(d,j＝23.3hz,2h),7.74(s,1h),7.61(d,j＝7.4hz,1h),7.45(t,j＝7.8hz,1h),7.45-7.23(m,5h),7.22(s,1h),6.20(t,j＝5.9hz,1h),5.60(dd,j＝6.1,3.2hz,1h),4.29(ddd,j＝14.1,5.7,3.5hz,1h),3.83(s,3h),3.58-3.47(m,1h).
實(shí)施例12:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2-氟苯基)脲
第一步：2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯的制備
將5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(1.0g,6.41mmol)溶于無(wú)水thf(30ml)，在-30℃下緩慢滴加lda(4.8ml,9.61mmol,2minthf)。滴畢，反應(yīng)在-30℃攪拌20分鐘，緩慢滴入溴乙酸叔丁酯(1.3g,7.05mmol)。反應(yīng)在-30℃度至0℃下攪拌2小時(shí)，lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)用飽和nh4cl(10ml)淬滅。有機(jī)相分層干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(250mg)。
第二步：2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸的制備
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(200mg,0.71mmol)溶于三氟乙酸(2ml)，二氯甲烷(2ml)中，在室溫下攪拌1小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，得到粗品2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(150mg)。
第三步:1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2-氟苯基)脲的制備
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(200mg,0.934mmol)，4-溴-2-氟苯胺(213mg,1.121mmol)，dppa(308mg,1.119mmol)和三乙胺(142mg,1.403mmol)溶于甲苯(20ml)中氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2-氟苯基)脲(97mg)。
lc-ms:401.0,403.0,tr＝2.052min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.02-7.84(m,2h),7.62(dd,j＝23.6,7.6hz,2h),7.45(t,j＝7.4hz,1h),7.40-7.10(m,4h),5.49(t,j＝4.8hz,1h),4.12(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.66(dd,j＝14.4,5.8hz,1h).
實(shí)施例13:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2-氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2-氟苯基)脲(45mg,0.112mmol)，1-甲基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(47mg,0.226mmol)，pd(dppf)cl2(40mg,0.055mmol)和碳酸鉀(31mg,0.224mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)/水(5ml/1ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加20毫升水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2-氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(1.1mg)。
lc-ms:403.1,tr＝1.885min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.93(dq,j＝17.3,8.8hz,3h),7.78(s,1h),7.63(dd,j＝22.7,7.5hz,2h),7.51-7.24(m,4h),7.19(s,1h),5.55-5.46(m,1h),4.12(dd,j＝14.3,4.1hz,1h),3.92(s,3h),3.64(dd,j＝14.3,6.1hz,1h).
實(shí)施例14:
1-(4-氰基苯基)-3-((7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
第一步：1-(2-溴-5-氟)苯甲基)-1h-咪唑的制備
將1-溴-4-氟-2-甲苯(5.0g,26.5mmol)，溴代丁二酰亞胺(5.65g,31.7mmol)，偶氮二異丁腈(400mg)溶于干燥四氯化碳(100ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流16小時(shí)。反應(yīng)冷至室溫后過(guò)濾，濾液加入咪唑(3.65g,52.3mmol)和碳酸鉀(5.42g,39.2mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流5小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(50ml)，用水(2x40ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2-溴-5-氟)苯甲基)-1h-咪唑(5.0g)。
第二步：7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚的制備
將1-(2-溴-5-氟)苯甲基)-1h-咪唑(1.5g,5.9mmol)，醋酸鈀(66mg)，三苯基膦(154mg)和碳酸鉀(1.6g,11.8mmol)溶于dmso(30ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至140℃攪拌2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)液濃縮干，剩余物溶于乙酸乙酯(100ml)，依次用水(2x100ml)，飽和食鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(0.8g)。
第三步：2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯的制備
將7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(0.8g,4.6mmol)溶于無(wú)水thf(50ml)，在-30℃下緩慢滴加lda(3.4ml,6.9mmol,2minthf)。滴畢，在-30℃攪拌15分鐘，緩慢滴入溴乙酸叔丁酯(1.4g,6.9mmol)。在-30℃到0℃下攪拌1小時(shí)，lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)用飽和nh4cl(20ml)淬滅。有機(jī)相分層干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(0.5g)。
第四步：2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸的制備
將2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(400mg,1.4mmol)溶于三氟乙酸(2ml)，二氯甲烷(2ml)中，在室溫下攪拌1小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，得到粗品2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(300mg)。
第五步：1-(4-腈基苯基-3-((7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
將2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(300mg,0.71mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(487mg,1.77mmol)，三乙胺(0.4ml,2.83mmol)和4-氨基苯乙腈(0.21mg,1.77mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-腈基苯基-3-((7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(0.10mg)。
lc-ms:348.1,tr＝1.93min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,1h),7.64(dd,j＝8.4,4.9hz,1h),7.59(d,j＝8.8hz,2h),7.52(d,j＝8.8hz,2h),7.40(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),7.20(td,j＝9.0,2.3hz,1h),7.14(s,1h),5.51(t,j＝5.1hz,1h),4.10(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.70(dd,j＝14.4,5.8hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-116.1.
實(shí)施例15:
1-(4-氰基苯基)-3-((8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
第一步：1-(2-溴-4-氟)苯甲基)-1h-咪唑的制備
將2-溴-4-氟-1-甲苯(5.0g,26.5mmol)，溴代丁二酰亞胺(5.65g,31.7mmol)，偶氮二異丁腈(400mg)溶于干燥四氯化碳(100ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流16小時(shí)。反應(yīng)冷至室溫后過(guò)濾，濾液加入咪唑(3.65g,52.3mmol)和碳酸鉀(5.42g,39.2mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流5小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(50ml)，用水(2x40ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2-溴-4-氟)苯甲基)-1h-咪唑(4.0g)。
第二步：8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚的制備
將1-(2-溴-4-氟)苯甲基)-1h-咪唑(3g,11.0mmol)，醋酸鈀(132mg)，三苯基膦(308mg)和碳酸鉀(3.2g,23.6mmol)溶于dmso(50ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至140℃攪拌2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，將反應(yīng)液濃縮干，剩余物溶于乙酸乙酯(100ml)，依次用水(2x100ml)，飽和食鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(1.6g)。
第三步：2-(8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯的制備
將8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚(1g,5.8mmol)溶于無(wú)水thf(50ml)，在-30℃下緩慢滴加lda(4.3ml,8.6mmol,2minthf)。滴畢，在-30℃攪拌15分鐘，緩慢滴入溴乙酸叔丁酯(1.6g,8.6mmol)。在-30℃到0℃下攪拌1小時(shí)，lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)用飽和nh4cl(20ml)淬滅。有機(jī)相分層干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到2-(8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(0.8g)。
第四步：2-(8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸的制備
將2-(8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸叔丁酯(400mg,1.4mmol)溶于三氟乙酸(2ml)，二氯甲烷(2ml)中，在室溫下攪拌1小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，得到粗品2-(8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(300mg)。
第五步：1-(4-腈基苯基-3-((8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
將2-(7-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(300mg,0.71mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(487mg,1.77mmol)，三乙胺(0.4ml,2.83mmol)，4-氨基苯乙腈(0.21mg,1.77mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-腈基苯基-3-((8-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(0.10mg)。
lc-ms:348.1,tr＝1.90min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.98(s,1h),7.70-7.55(m,3h),7.55-7.48(m,2h),7.41(dd,j＝8.7,2.4hz,1h),7.22(s,1h),7.15-7.03(m,1h),5.49(t,j＝4.8hz,1h),4.11(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.66(dd,j＝14.4,5.9hz,1h)；19fnmr(400mhz,meod)δ-115.0(s,1h).
實(shí)施例16:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((6-氯-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(40mg,0.095mmol)溶于8ml甲醇，然后加入10mgpd-c，在氫氣下室溫反應(yīng)3天。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液過(guò)濾，旋干濾液得粗產(chǎn)品，粗產(chǎn)品經(jīng)快速柱層析得到淡黃色固體1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(15mg)。
lc-ms：385.1,tr＝1.824min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.07(s,1h),7.72(d,j＝12.9hz,2h),7.64(d,j＝7.3hz,2h),7.57(d,j＝7.6hz,1h),7.50-7.29(m,6h),7.23(s,1h),5.57-5.48(m,1h),4.10(dd,j＝14.4,4.3hz,1h),3.93(s,3h),3.46(dd,j＝14.4,7.1hz,1h).
實(shí)施例17:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-甲氧苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(150mg,0.70mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(400mg,1.42mmol)，三乙胺(180mg,1.42mmol)和3-甲氧基-4-溴苯胺(284mg,1.42mmol)溶于無(wú)水甲苯(20ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-甲氧苯基)脲(19.0mg)。
lc-ms:413.0,tr＝2.052min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,1h),7.62(dd,j＝22.4,7.6hz,2h),7.45(t,j＝7.5hz,1h),7.40-7.31(m,2h),7.28(d,j＝2.1hz,1h),7.18(s,1h),6.70(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),5.56-5.43(m,1h),4.10(dd,j＝14.3,4.2hz,1h),3.85(s,3h),3.60(dd,j＝14.4,6.3hz,1h).
實(shí)施例18:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-甲氧基-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-甲氧苯基)脲(30mg,0.07mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(32mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)，碳酸鉀(40mg,0.28mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)和水(1.5ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，用水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-甲氧基-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(3.4mg)。
lc-ms:415.1,tr＝2.052min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,2h),7.82(s,1h),7.62(dd,j＝21.4,6.9hz,2h),7.50-7.32(m,2h),7.26(s,1h),7.19(s,1h),6.79(d,j＝7.7hz,1h),5.49(s,1h),4.10(d,j＝13.8hz,1h),3.91(s,1h),3.90(s,1h),3.71-3.52(m,1h).
實(shí)施例19:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(79mg,0.37mmol)溶于8ml甲苯，然后加入dppa(112mg,0.407mmol)，三乙胺(56mg,0.553mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(78mg,0.407mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲(15mg)。
lc-ms：403.1,tr＝1.448min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.93(s,1h),7.63(d,j＝7.6hz,1h),7.56(d,j＝7.6hz,1h),7.44(t,j＝7.5hz,1h),7.34(td,j＝7.6,1.0hz,1h),7.18(dd,j＝9.4,2.8hz,3h),6.97-6.83(m,2h),5.45(dd,j＝6.1,4.6hz,1h),4.04(dd,j＝14.3,4.3hz,1h),3.53(dd,j＝14.3,6.6hz,1h),3.22-3.03(m,4h),2.77-2.61(m,4h),2.39(s,3h).
實(shí)施例20:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(79mg,0.37mmol)溶于8ml甲苯，然后加入dppa(112mg,0.407mmol)，三乙胺(56mg,0.553mmol)和3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(85mg,0.407mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)脲(20mg)。
lc-ms：421.1,tr＝1.564min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.93(s,1h),7.64(d,j＝7.6hz,1h),7.58(d,j＝7.6hz,1h),7.44(t,j＝7.5hz,1h),7.35(td,j＝7.6,1.0hz,1h),7.26(dd,j＝14.6,2.1hz,1h),7.17(s,1h),6.97-6.86(m,2h),5.49-5.39(m,1h),4.07(dd,j＝14.4,4.3hz,1h),3.57(dd,j＝14.3,6.4hz,1h),3.33(dt,j＝3.3,1.6hz,2h),3.05(s,4h),2.65(s,4h),2.38(s,3h).
實(shí)施例21:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-苯甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(79.2mg,0.37mmol)溶于8ml甲苯，然后加入dppa(112mg,0.407mmol)，三乙胺(56mg,0.555mmol)和4-(1-苯甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(101mg,0.407mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到白色固體(20mg)。
lc-ms:416.2,tr＝2.124min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.92-7.12(m,17h),5.45(s,1h),5.33(s,2h),4.14-3.96(m,1h),3.39(dd,j＝14.4,6.6hz,1h).
實(shí)施例22:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲
2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(300mg,1.4mmol)，4-溴-3-氟苯胺(320mg,1.684mmol)，dppa(465mg,1.690mmol)和三乙胺(215mg,2.125mmol)于甲苯(20ml)中氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲的制備(330mg)。
lc-ms:401.0,tr＝2.113min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,1h),7.65(d,j＝7.6hz,1h),7.59(d,j＝7.6hz,1h),7.52-7.32(m,4h),7.18(s,1h),6.93(dd,j＝8.4,2.0hz,1h),5.57-5.44(m,1h),4.11(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.62(dd,j＝14.4,6.2hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-108.8.
實(shí)施例23:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例18。
lc-ms:403.1,tr＝1.920min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.99(s,1h),7.95-7.93(m,1h),7.81(s,1h),7.66(d,j＝7.6hz,1h),7.61(d,j＝7.6hz,1h),7.55-7.42(m,2h),7.41-7.34(m,2h),7.19(s,1h),7.00(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),5.57-5.47(m,1h),4.12(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.94(s,2h),3.62(dd,j＝14.4,6.2hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-115.8(s,1h).
實(shí)施例24:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基-3-氟苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(79mg,0.37mmol)溶于8ml甲苯，然后加入dppa(112mg,0.407mmol)，三乙胺(56mg,0.553mmol)和4-氨基-2-氟苯甲腈(55mg,0.407mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基-3-氟苯基)脲(10mg)。
lc-ms:348.1,tr＝1.979min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.98(s,1h),7.72-7.51(m,4h),7.45(t,j＝7.4hz,1h),7.41-7.33(m,1h),7.19(s,1h),7.11(dd,j＝8.6,1.9hz,1h),5.55-5.45(m,1h),4.14(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.66(dd,j＝14.4,5.9hz,1h).
實(shí)施例25:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氯-4-氰基苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(79mg,0.37mmol)溶于8ml甲苯，然后加入dppa(112mg,0.407mmol)，三乙胺(56mg,0.553mmol)和4-氨基-2-氯苯甲腈(62mg,0.407mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氯-4-氰基苯基)脲(10mg)。
lc-ms：364.0,tr＝2.008min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.16(s,1h),7.80(ddd,j＝26.8,8.8,3.3hz,4h),7.67-7.53(m,3h),7.26(dd,j＝8.6,1.9hz,1h),5.85(s,1h),4.46-4.36(m,1h),3.84-3.74(m,1h).
實(shí)施例26:
1-(4-(1h-咪唑-1-基)苯基)-3-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(100mg,0.43mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(250mg,0.92mmol)，三乙胺(232mg,2.32mmol)，4-(1h-咪唑-1-基)苯胺(150mg,0.92mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-(1h-咪唑-1-基)苯基)-3-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(3.4mg)。
lc-ms:371.0,tr＝1.468min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05(s,1h),7.96(s,1h),7.63(dd,j＝19.9,7.5hz,2h),7.48(dt,j＝16.7,5.1hz,6h),7.36(t,j＝7.5hz,1h),7.16(d,j＝19.2hz,2h),5.58-5.45(m,1h),4.12(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.63(dd,j＝14.4,6.3hz,1h).
實(shí)施例27:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3,5-二氟苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg,0.93mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(520mg,1.86mmol)，三乙胺(190mg,1.86mmol)，4-溴-3,5-二氟苯胺(400mg,1.86mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3,5-二氟苯基)脲(3.0mg)。
lc-ms:418.2,tr＝2.259min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,1h),7.62(dd,j＝21.3,7.5hz,2h),7.41(dt,j＝35.5,7.4hz,2h),7.24-7.06(m,3h),5.58-5.45(m,1h),4.11(dd,j＝14.3,4.1hz,1h),3.63(dd,j＝14.4,6.1hz,1h).
實(shí)施例28:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3,5-二氟苯基)脲(30mg,0.07mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(32mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)，碳酸鉀(20mg,0.14mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)和水(1.5ml)混合物，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，用水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(2.0mg)。
lc-ms:421.1,tr＝1.970min；
1hnmr(400mhz,meodδ7.96(d,j＝5.4hz,2h),7.83(s,1h),7.62(dd,j＝20.2,7.2hz,2h),7.41(dt,j＝34.6,7.3hz,2h),7.26-7.01(m,3h),5.50(s,1h),4.11(d,j＝11.2hz,1h),3.95(s,3h),3.62(dd,j＝14.3,6.1hz,1h).
實(shí)施例29:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-溴-4-氟苯基)脲
制備同實(shí)施例27。
lc-ms:401.0,tr＝2.083min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.94(s,1h),7.72(dd,j＝6.2,2.5hz,1h),7.64(d,j＝7.5hz,1h),7.58(d,j＝7.6hz,1h),7.45(t,j＝7.5hz,1h),7.36(t,j＝7.5hz,1h),7.23-7.15(m,2h),7.08(t,j＝8.7hz,1h),5.52-5.45(m,1h),4.09(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.60(dd,j＝14.4,6.2hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-118.2.
實(shí)施例30:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氯苯基)脲
制備同實(shí)施例27。
lc-ms:419.0,tr＝2.252min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(s,1h),7.70(d,j＝2.5hz,1h),7.65(d,j＝7.5hz,1h),7.60(d,j＝7.7hz,1h),7.50(d,j＝8.8hz,1h),7.45(t,j＝7.5hz,1h),7.36(t,j＝7.1hz,1h),7.18(s,1h),7.09(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),5.52-5.47(m,1h),4.11(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.62(dd,j＝14.4,6.2hz,1h).
實(shí)施例31:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氯-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備操作同實(shí)施例28。
lc-ms:419.0,tr＝2.416min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.84(d,j＝9.0hz,2h),7.64(s,1h),7.53(d,j＝7.5hz,1h),7.51-7.46(m,2h),7.33(t,j＝7.4hz,1h),7.26(dd,j＝14.0,8.0hz,2h),7.10-7.04(m,2h),5.43-5.34(m,1h),3.99(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.83(s,3h),3.50(dd,j＝14.3,6.2hz,1h).
實(shí)施例32:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2-甲氧苯基)脲
制備同實(shí)施例27。
lc-ms:414.0,tr＝2.140min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.94(s,1h),7.89(d,j＝8.7hz,1h),7.65(d,j＝7.6hz,1h),7.59(d,j＝7.6hz,1h),7.45(t,j＝7.5hz,1h),7.36(t,j＝7.6hz,1h),7.17(s,1h),7.08(d,j＝2.1hz,1h),7.01(dd,j＝8.6,2.1hz,1h),5.56-5.42(m,1h),4.09(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.86(s,3h),3.62(dd,j＝14.4,6.1hz,1h).
實(shí)施例33:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2-甲氧基-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例28。
lc-ms:415.1,tr＝1.888min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ8.06(s,2h),8.00(d,j＝8.3hz,1h),7.89(s,1h),7.80(s,1h),7.62(d,j＝7.6hz,1h),7.56(d,j＝7.5hz,1h),7.41(t,j＝7.4hz,1h),7.30(t,j＝7.4hz,1h),7.17-7.09(m,2h),7.03(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),6.98(t,j＝5.9hz,1h),5.43-5.40(m,1h),4.00-3.89(m,1h),3.86(s,3h),3.84(s,3h),3.65-3.47(m,1h).
實(shí)施例34:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2-氯-4-氰基苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(150mg,0.7mmol)溶于10ml甲苯，然后加入dppa(212mg,0.77mmol)，三乙胺(106mg,1.05mmol)和4-氨基-3-氯苯甲腈(118mg,0.77mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2-氯-4-氰基苯基)脲(10mg)。
lc-ms:364.0,tr＝1.981min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.23(s,1h),8.27(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),7.91-7.85(m,1h),7.76(t,j＝5.0hz,3h),7.66-7.51(m,3h),5.89(t,j＝3.8hz,1h),4.49(dd,j＝14.9,3.6hz,1h),3.88(dd,j＝14.9,4.3hz,1h).
實(shí)施例35:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-溴苯基)脲
制備方法同實(shí)施例27。
lc-ms:384.0,tr＝2.081min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.84(s,1h),7.62-7.50(m,2h),7.47(d,j＝7.6hz,1h),7.33(t,j＝7.4hz,1h),7.28-7.18(m,1h),7.12-6.94(m,4h),5.43-5.31(m,1h),3.98(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.49(dd,j＝14.4,6.2hz,1h).
實(shí)施例36:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例28。
lc-ms:385.1,tr＝1.867min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ8.59(s,1h),8.03(s,1h),7.90(s,1h),7.73(s,1h),7.63(d,j＝7.5hz,1h),7.56(dd,j＝6.5,5.1hz,2h),7.42(t,j＝7.5hz,1h),7.36-7.27(m,1h),7.23-7.13(m,3h),7.12-7.05(m,1h),6.37(t,j＝5.9hz,1h),5.52-5.37(m,1h),3.99-3.87(m,1h),3.86(s,3h),3.59-3.46(m,1h).
實(shí)施例37:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基-2-氟苯基)脲
2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(100mg,0.467mmol)，4-溴-2-氟苯胺(76mg0.558mmol)，dppa(154mg,0.560mmol)，三乙胺(75mg,0.741mmol)于甲苯(10ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氰基-2-氟苯基)脲(5.6mg)。
lc-ms:348.1,tr＝1.943min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.21(s,1h),8.25(s,1h),7.68(dd,j＝104.4,48.2hz,7h),5.88(s,1h),4.46(s,2h),3.86(s,1h).
實(shí)施例38:
1-(4-(1h-吡唑-1-基)苯基)-3-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(100mg,0.467mmol)，4-(1h-吡唑-1-基)苯胺(90mg0.565mmol)，dppa(155mg,0.563mmol)，三乙胺(75mg,0.741mmol)于甲苯(10ml),氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流4小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-(4-(1h-吡唑-1-基)苯基)-3-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(21mg)。
lc-ms:371.0,tr＝1.902min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.13(s,2h),7.51(dd,j＝113.4,52.2hz,10h),6.51(s,1h),5.55(s,1h),4.14(s,1h),3.65(s,1h).
實(shí)施例39:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2,5-二氟苯基)脲
將2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(200mg,0.93mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(520mg,1.86mmol)，三乙胺(190mg,1.86mmol)，4-溴-2,5-二氟苯胺(400mg,1.86mmol)溶于無(wú)水甲苯(10ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2,5-二氟苯基)脲(3.0mg)。
lc-ms:421.0,tr＝2.221min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.04(dd,j＝11.1,7.0hz,1h),7.95(s,1h),7.62(dd,j＝21.4,7.6hz,2h),7.45(t,j＝7.4hz,1h),7.38(dt,j＝14.1,7.0hz,2h),7.17(s,1h),5.50(t,j＝4.7hz,1h),4.15(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.70(dd,j＝14.5,5.6hz,1h).
實(shí)施例40:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2,5-二氟苯基)脲(30mg,0.07mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(32mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)，碳酸鉀(20mg,0.14mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)，水(0.5ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，用水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(2.0mg)。
lc-ms:421.0,tr＝1.963min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,2h),7.91(dd,j＝13.1,6.9hz,1h),7.83(s,1h),7.63(dd,j＝20.3,7.5hz,2h),7.45(t,j＝7.5hz,1h),7.38(dd,j＝16.0,7.7hz,2h),7.18(s,1h),5.51(s,1h),4.15(dd,j＝14.7,4.0hz,1h),3.94(s,3h),3.69(dd,j＝14.3,5.9hz,1h).
實(shí)施例41和42:
(r)-1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲和(s)-1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(420mg)經(jīng)過(guò)手性拆分得到(r-1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(176mg)和(s)-1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(202mg)。拆分條件如下：
實(shí)施例43:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-(三氟甲基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例39。
lc-ms:325.0,tr＝2.376min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.21(s,1h),7.82(d,j＝2.4hz,1h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.52(d,j＝8.8hz,1h),7.45(dt,j＝14.9,7.2hz,2h),7.37(dd,j＝8.7,2.6hz,1h),7.26(s,1h),5.59-5.49(m,1h),4.21(dd,j＝14.4,4.0hz,1h),3.64(dd,j＝14.5,5.8hz,1h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-64.1,-76.9。
實(shí)施例44:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-氟-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例40。
lc-ms:403.1,tr＝2..536min；
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.61(s,1h),8.05(d,j＝1.9hz,1h),7.91(s,1h),7.74(s,1h),7.66-7.60(m,2h),7.56(d,j＝7.5hz,1h),7.42(t,j＝7..4hz,1h),7.31(t,j＝7.5hz,1h),7.23-7.04(m,3h),6.37(t,j＝5.8hz,1h),5.515.37(m,1h),3.93-3.84(m,1h),3.86(s,3h),3.59-3.46(m,1h)；
19fnmr(400mhz,dmso)δ-124.1.
實(shí)施例45:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-乙基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(100mg,0.249mmol)，1-乙基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(110mg,0.495mmol)，pd(dppf)cl2(91mg,0.124mmol)和碳酸鉀(69mg,0.499mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-乙基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(33.4mg)。
lc-ms:417.1,tr＝1.998min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,2h),7.81(s,1h),7.61(dd,j＝20.9,7.5hz,2h),7.54-7.30(m,4h),7.17(s,1h),6.99(dd,j＝8.5,1.6hz,1h),5.47(s,1h),4.22(q,j＝7.3hz,2h),4.09(dd,j＝14.4,3.8hz,1h),3.59(dd,j＝14.3,6.0hz,1h),1.48(t,j＝7.3hz,3h).
實(shí)施例46:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(100mg,0.249mmol)，1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(97mg,0.5mmol)，pd(dppf)cl2(91mg,0.124mmol)和碳酸鉀(69mg,0.499mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)脲(16.7mg)。
lc-ms:389.2,tr＝1.793min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(d,j＝13.4hz,3h),7.76-7.30(m,6h),7.19(s,1h),7.01(d,j＝8.0hz,1h),5.51(s,1h),4.11(d,j＝11.6hz,1h),3.62(dd,j＝14.5,5.7hz,1h).
實(shí)施例47:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
第一步：1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯的制備
1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(1.0g,5.155mmol)，2-溴乙基甲基醚(0.788g,5.669mmol)和碳酸銫(5.04g,15.469mmol)溶于乙腈(20ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下50℃攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，濃縮至干得1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(1.310g)。
lc-ms:253.1，tr＝2.373min.
第二步：1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲的制備
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(129mg,0.322mmol)，1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(162mg,0.643mmol)，pd(dppf)cl2(118mg,0.161mmol)和碳酸鉀(89mg,0.644mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(53.0mg)。
lc-ms:447.1,tr＝1.912min；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.75(s,1h),8.10(s,1h),7.79(d,j＝4.2hz,2h),7.64-7.31(m,7h),7.21(s,1h),7.09(d,j＝8.1hz,1h),6.68(s,1h),5.60(d,j＝7.2hz,1h),4.30(s,3h),3.78(d,j＝5.0hz,3h),3.32(d,j＝14.5hz,3h).
實(shí)施例48:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-異丙基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(120mg,0.299mmol)，1-異丙基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(141mg,0.597mmol)，pd(dppf)cl2(109mg,0.149mmol)和碳酸鉀(83mg,0.601mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-異丙基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(14.0mg)。
lc-ms:431.2,tr＝2.101min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.00(s,1h),7.98(s,1h),7.92-7.07(m,8h),6.95(d,j＝7.9hz,1h),6.40(s,1h),5.80(s,1h),4.57(s,1h),4.36(d,j＝15.1hz,1h),3.77(s,1h),1.31(s,6h).
實(shí)施例49:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)脲(12mg,0.031mmol)，異丁基溴(8.5mg,0.062mmol)和碳酸銫(30mg,0.092mmol)于2ml乙腈中氮?dú)獗Ｗo(hù)下50℃攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，濾液柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(7.3mg)。
lc-ms:445.1,tr＝2.219min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.86(s,2h),7.73(s,1h),7.52(dd,j＝18.2,7.6hz,2h),7.45-7.21(m,4h),7.07(s,1h),6.93(dd,j＝8.4,2.0hz,1h),5.47-5.33(m,1h),3.98(dd,j＝14.3,4.3hz,1h),3.89(d,j＝7.3hz,2h),3.50(dd,j＝14.3,6.5hz,1h),2.16-2.07(m,1h),0.83(t,j＝5.8hz,6h).
實(shí)施例50:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
第一步：5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯胺的制備
4-溴-5-氯-2-氟苯胺(100mg,0.446mmol)，1-異丁基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(223mg,0.891mmol)，pd(dppf)cl2(163mg,0.223mmol)和碳酸鉀(123mg,0.890mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯胺(67.0mg)。
lc-ms:268.1，270.1,tr＝2.712min.
第二步：1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲的制備
2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(45mg,0.209mmol)，5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯胺(67mg,0.250mmol)，dppa(69mg,0.251mmol)和三乙胺(32mg,316mol)于甲苯(10ml)保護(hù)下回流5小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(9mg)。
lc-ms:479.2.0,481.1,tr＝2.310min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.11(s,1h),7.91(d,j＝29.2hz,2h),7.73(s,1h),7.53(d,j＝19.0hz,2h),7.27(dd,j＝40.6,22.5hz,3h),7.08(s,1h),5.41(s,1h),4.05(d,j＝11.8hz,1h),3.91(s,2h),3.59(d,j＝9.4hz,1h),2.12(s,1h),0.85(d,j＝3.7hz,6h).
實(shí)施例51:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
第一步：1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯的制備
1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(500mg,2.577mmol)，環(huán)丁基甲基溴(768mg,5.153mmol)和碳酸銫(2.520g,7.734mmol)溶于乙腈(10ml)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下50℃攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，濃縮至干得1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(405mg)。
第二步：5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺的制備
4-溴-5-氯-2-氟苯胺(86mg,0.383mmol)，1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(200mg,0.763mmol)，pd(dppf)cl2(140mg,0.191mmol)和碳酸鉀(105mg,0.760mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(47.0mg)。
lc-ms:280.0,282.1,tr＝2.787min.
第三步：1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲的制備
2-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5基)乙酸(30mg,0.140mmol)，5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯胺(47mg,0.168mmol)，dppa(46mg,0.167mmol)和三乙胺(21mg,0.208mmol)于甲苯(10ml)中氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流5小時(shí)，冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-環(huán)丁基甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(1.6mg)。
lc-ms:491.2,493.1,tr＝2.430min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.19(d,j＝7.6hz,1h),8.03(s,2h),7.80(s,1h),7.64(dd,j＝23.4,7.5hz,2h),7.43(dt,j＝30.5,7.4hz,2h),7.30(d,j＝12.2hz,2h),5.53(s,1h),4.20(d,j＝7.3hz,2h),3.71(dd,j＝14.5,5.6hz,1h),2.87(dt,j＝15.0,7.5hz,1h),2.24-2.17(m,1h),2.09(dd,j＝16.8,8.2hz,3h),1.89(ddd,j＝25.6,14.0,7.8hz,3h).
實(shí)施例52和53:2-(4-(4-(3-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙基乙酸酯和1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-羥乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)脲(74mg)，2-溴乙基乙酸酯(34mg,0.204mmol)和碳酸銫(167mg，0.513mmol)于乙腈(10ml)中氮?dú)獗Ｗo(hù)下50℃攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，濾液柱層析純化得到2-(4-(4-(3-(5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙基乙酸酯(5.2mg)和1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-羥乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(3.1mg)。
實(shí)施例52：
lc-ms:475.1,tr＝1.936min；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.35(s,1h),9.02(s,1h),8.00-7.31(m,8h),7.19(s,1h),5.65(s,1h),5.35(s,1h),4.41(d,j＝29.1hz,3h),3.69(d,j＝46.1hz,4h),2.04(s,3h).
實(shí)施例53：
lc-ms:433.1,tr＝2.780min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.00(s,2h),7.85(s,1h),7.65(d,j＝21.0hz,2h),7.44(d,j＝35.4hz,5h),7.00(s,1h),5.52(s,1h),4.27(s,2h),4.14(d,j＝11.6hz,1h),3.92(s,2h),3.65(s,1h).
實(shí)施例54:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-2,5-二氟苯基)脲(30mg,0.07mmol)，1-異丁基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(32mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)和碳酸鉀(20mg,0.14mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)和水(0.5ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(2.2mg)。
lc-ms:463.1,tr＝2.263min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.01-7.73(m,1h),7.54(dd,j＝21.2,7.5hz,1h),7.43-7.24(m,1h),7.11(s,1h),5.41(s,1h),4.06(dd,j＝14.3,3.7hz,1h),3.90(d,j＝7.3hz,1h),3.60(dd,j＝14.3,5.6hz,1h),2.12(dt,j＝13.5,6.8hz,1h),0.83(t,j＝8.5hz,2h).
實(shí)施例55:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備操作同實(shí)施例48。
lc-ms:486.1,tr＝2.153min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(d,j＝1.4hz,1h),7.88(s,1h),7.81(s,1h),7.56(d,j＝7.5hz,1h),7.51(d,j＝7.5hz,1h),7.42(t,j＝8.6hz,1h),7.36(t,j＝7.5hz,1h),7.32(d,j＝2.0hz,1h),7.31-7.25(m,2h),7.10(s,1h),6.92(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),5.46-5.37(m,1h),4.38(t,j＝6.3hz,2h),4.03(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.53(dd,j＝14.4,6.2hz,1h),3.34-3.24(m,2h),1.90-1.80(m,4h),1.30-1.20(m,4h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-115.7.
實(shí)施例56:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-嗎啡啉乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備操作同實(shí)施例48。
lc-ms:502.1，tr＝2.014min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.18(s,1h),8.08(s,1h),7.93(s,1h),7.90-7.82(m,1h),7.75(d,j＝8.0hz,2h),7.60(dd,j＝5.5,3.2hz,2h),7.50(t,j＝8.6hz,1h),7.38(dd,j＝13.7,1.5hz,1h),6.98(d,j＝8.4hz,1h),5.86(t,j＝4.0hz,1h),4.68(t,j＝5.8hz,2h),4.37(dd,j＝14.8,3.5hz,1h),4.20-3.80(m,4h),3.82-3.69(m,3h),3.66-3.31(m,4h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-115.6.
實(shí)施例57:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-(環(huán)丙基甲基)-1h-吡唑-4-基)-3-氟苯基)脲
制備操作同實(shí)施例48。
lc-ms:443.1,tr＝2.067min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.93(d,j＝1.4hz,1h),7.87(s,1h),7.74(s,1h),7.56(d,j＝7.5hz,1h),7.51(d,j＝7.6hz,1h),7.42(t,j＝8.6hz,1h),7.36(t,j＝7.5hz,1h),7.29(dt,j＝14.4,5.0hz,2h),7.09(s,1h),6.91(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),5.47-5.38(m,1h),4.02(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.95(d,j＝7.1hz,2h),3.53(dd,j＝14.4,6.2hz,1h),1.25(ddd,j＝12.6,7.6,4.8hz,1h),0.62-0.49(m,2h),0.35(q,j＝4.8hz,2h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-115.8.
實(shí)施例58和59:
2-(4-(4-(3((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙酸乙酯和2-(4-(4-(3((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙酸
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(120mg,0.299mmol)，1-乙酸乙酯-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(191mg)，pd(dppf)cl2(109mg,0.149mmol)和碳酸鉀(83mg,0.601mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得2-(4-(4-(3((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙酸乙酯(12.3mg)和2-(4-(4-(3((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲基)-2-氟苯基)-1h-吡唑-1-基)乙酸(3.8mg)。
實(shí)施例58：
lc-ms:475.1,tr＝2.030min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.87(d,j＝1.5hz,2h),7.74(s,1h),7.51(d,j＝7.5hz,1h),7.45(d,j＝7.5hz,1h),7.37(t,j＝8.6hz,1h),7.30(dd,j＝14.0,6.5hz,2h),7.25-7.18(m,1h),6.86(d,j＝8.3hz,1h),5.34(s,1h),4.91(s,2h),4.10(q,j＝7.1hz,2h),3.97(d,j＝11.5hz,1h),3.47(dd,j＝14.4,6.1hz,1h),1.14(d,j＝7.2hz,3h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-115.6.
實(shí)施例59：
lc-ms:447.1,tr＝1.770min；
1hnmr(400mhz,d6-dmso)δ8.97(s,1h),8.79(s,1h),8.04(d,j＝1.7hz,1h),7.90-7.75(m,2h),7.70(d,j＝9.6hz,2h),7.52(dt,j＝13.9,6.3hz,3h),7.43(dd,j＝14.0,1.7hz,1h),6.97(dd,j＝8.5,1.7hz,1h),6.44(t,j＝6.0hz,1h),5.74(s,1h),4.99(s,2h),4.21-4.07(m,1h),3.71(dt,j＝13.9,5.7hz,1h)；
19fnmr(400mhz,d6-dmso)δ-114.0.
實(shí)施例60:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-(環(huán)丁基甲基)-1h-吡唑-4-基)-3-氟苯基)脲
將化合物1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)(110mg,0.274mmol)溶于10ml1,4-二氧六環(huán)和2ml水，加入1-(環(huán)丁基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(86mg,0.329mmol)，碳酸鈉(87mg,0.823mmol)和pd(dppf)cl2(20mg,0.027mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，104℃反應(yīng)1小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-(環(huán)丁基甲基)-1h-吡唑-4-基)-3-氟苯基)脲(5.7mg)。
lc-ms:457.1,tr＝2.237min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.95(d,j＝6.4hz,2h),7.81(s,1h),7.62(dd,j＝20.2,7.5hz,2h),7.54-7.29(m,4h),7.18(s,1h),7.01(d,j＝8.4hz,1h),5.53-5.42(m,1h),4.19(d,j＝7.3hz,2h),4.10(dd,j＝14.4,4.2hz,1h),3.60(dd,j＝14.3,6.3hz,1h),2.86(dt,j＝15.2,7.6hz,1h),2.15-2.02(m,2h),2.00-1.67(m,4h).
實(shí)施例61:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(四氫-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(90mg,0.224mmol)溶于10ml1,4-二氧六環(huán)和2ml水，然后加入1-(四氫-2h-吡喃-4-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(75mg,0.269mmol)，碳酸鈉(71mg,0.673mmol)和pd(dppf)cl2(16mg,0.022mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，104℃反應(yīng)1小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(四氫-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(5.8mg)。
lc-ms:473.2,tr＝1.943min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05(d,j＝12.8hz,2h),7.85(s,1h),7.73-7.34(m,7h),7.23(s,1h),7.00(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),5.61-5.43(m,1h),4.45(ddd,j＝15.7,10.9,4.6hz,1h),4.22-3.98(m,3h),3.61(ddd,j＝13.7,11.2,5.0hz,3h),2.22-1.95(m,4h).
實(shí)施例62:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms:449.2,tr＝2.14min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.88-7.78(m,2h),7.51(dd,j＝19.5,7.5hz,2h),7.34(t,j＝7.5hz,1h),7.29-7.22(m,1h),7.06(s,1h),6.86(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.40(t,j＝4.8hz,1h),4.04(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.65(s,3h),3.58(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.06(d,j＝7.1hz,3h),1.99(s,3h).
實(shí)施例63:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-(2-羰基吡咯烷-1-基)乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-3-氟苯基)脲(100mg,0.249mmol)溶于10ml1,4-二氧六環(huán)和2ml水，加入1-(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)吡咯烷-2-酮(91mg,0.299mmol)，碳酸鈉(79mg,0.748mmol)和pd(dppf)cl2(18mg,0.025mmol)。在氮?dú)庀?04℃反應(yīng)1小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(3-氟-4-(1-(2-(2-羰基吡咯烷-1-基)乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(8.5mg)。
lc-ms:500.2,tr＝1.823min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.06(s,1h),7.97(d,j＝1.6hz,1h),7.85(s,1h),7.63(dd,j＝23.0,7.5hz,2h),7.47(dt,j＝12.1,8.0hz,2h),7.42-7.34(m,2h),7.22(s,1h),6.99(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),5.52(t,j＝5.0hz,1h),4.36(t,j＝5.8hz,2h),4.12(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.70(t,j＝5.8hz,2h),3.62(dd,j＝14.4,6.2hz,1h),3.21(t,j＝7.0hz,2h),2.31(t,j＝8.1hz,2h),2.01-1.90(m,2h).
實(shí)施例64:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
將1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-5-氯-2-氟苯基)脲(70mg,0.161mmol)溶于10ml1,4-二氧六環(huán)和2ml水，然后加入1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(57mg,0.241mmol)，碳酸鈉(51mg,0.482mmol)和pd(dppf)cl2(12mg,0.016mmol)。在氮?dú)庀?04℃反應(yīng)1小時(shí)。lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液濃縮，剩余物用快速硅膠柱層析法純化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲(3.5mg)。
lc-ms：465.1,tr＝2.007min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.24(d,j＝7.6hz,1h),7.97(s,1h),7.63(dd,j＝19.5,7.5hz,2h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(t,j＝7.5hz,1h),7.19(s,1h),7.00(d,j＝11.5hz,1h),5.52(t,j＝4.7hz,1h),4.17(dt,j＝14.4,3.7hz,1h),3.75(d,j＝13.0hz,3h),3.71(dd,j＝14.4,5.6hz,1h),2.09(d,j＝24.4hz,6h).
實(shí)施例65:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-異丁基-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例64。
lc-ms：507.1,tr＝2.35min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.24(d,j＝7.5hz,1h),7.98(s,1h),7.63(dd,j＝19.7,7.6hz,2h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(t,j＝7.5hz,1h),7.19(s,1h),7.01(d,j＝11.5hz,1h),5.52(t,j＝4.7hz,1h),4.17(dt,j＝14.4,4.0hz,1h),3.85(dd,j＝7.5,1.0hz,2h),3.71(dd,j＝14.4,5.6hz,1h),2.21(dt,j＝13.7,6.9hz,1h),2.09(d,j＝17.2hz,6h),0.94(t,j＝6.6hz,6h).
實(shí)施例66:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-4-(3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例64。
lc-ms：451.1,tr＝1.954min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.23(d,j＝7.6hz,1h),8.02(s,1h),7.64(dd,j＝20.5,7.6hz,2h),7.47(t,j＝7.5hz,1h),7.42-7.36(m,1h),7.21(s,1h),7.01(d,j＝11.5hz,1h),5.53(t,j＝4.7hz,1h),4.18(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.71(dd,j＝14.4,5.6hz,1h),2.11(s,6h).
實(shí)施例67:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-(環(huán)丙基甲基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms：489.1,tr＝2.21min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.86(s,1h),7.82(dd,j＝11.9,7.0hz,1h),7.54(d,j＝7.5hz,1h),7.49(d,j＝7.6hz,1h),7.34(t,j＝7.4hz,1h),7.26(t,j＝7.6hz,1h),7.07(d,j＝4.8hz,1h),6.87(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.40(t,j＝4.7hz,1h),4.05(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.84(d,j＝6.8hz,2h),3.59(dd,j＝14.5,5.7hz,1h),2.08(s,3h),2.01(s,3h),1.31-1.07(m,6h),0.47(q,j＝5.8hz,2h),0.29(q,j＝4.9hz,2h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-119.43,-138.60.
實(shí)施例68:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-4-(1-(環(huán)丙基甲基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例64。
lc-ms:505.1,tr＝2.24min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.24(d,j＝7.6hz,1h),7.98(s,1h),7.66(d,j＝7.5hz,1h),7.61(d,j＝7.4hz,1h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(t,j＝7.5hz,1h),7.19(s,1h),7.01(d,j＝11.5hz,1h),5.52(t,j＝4.8hz,1h),4.17(dt,j＝14.4,4.2hz,1h),3.95(dt,j＝9.8,4.9hz,2h),3.71(dd,j＝14.4,5.6hz,2h),2.14(s,3h),2.08(s,3h),0.59(d,j＝8.1hz,2h),0.45-0.35(m,2h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-134.87.
實(shí)施例69:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-異丁基-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms:491.2,tr＝2.301min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.01(s,1h),7.94(dd,j＝11.9,7.0hz,1h),7.64(dd,j＝20.5,7.6hz,2h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(t,j＝7.6hz,1h),7.20(s,1h),6.99(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.53(t,j＝4.7hz,1h),4.18(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.86(d,j＝7.5hz,2h),3.71(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.68(s,1h),2.17(s,3h),2.13(s,3h),0.94(d,j＝6.7hz,6h).
實(shí)施例70:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-2-氟-4-(1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例64。
lc-ms:509.2,tr＝2.086min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.23(d,j＝7.6hz,1h),8.00(s,1h),7.64(dd,j＝20.2,7.6hz,2h),7.46(t,j＝7.4hz,1h),7.38(t,j＝7.1hz,1h),7.20(s,1h),7.00(d,j＝11.5hz,1h),5.53(t,j＝4.8hz,1h),4.28-4.12(m,3h),3.73(qd,j＝10.3,5.3hz,3h),3.31(s,3h),2.10(d,j＝23.8hz,6h).
實(shí)施例71:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(2,5-二氟-4-(1-(2-甲氧基乙基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms:493.1,tr＝2.010min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05-7.86(m,2h),7.63(dd,j＝20.3,7.5hz,2h),7.49-7.33(m,2h),7.19(s,1h),6.98(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.52(t,j＝4.8hz,1h),4.30-4.09(m,3h),3.80-3.64(m,3h),3.32(s,3h),2.16(d,j＝24.7hz,6h).
實(shí)施例72:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(1-(環(huán)丁基甲基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms:503.2,tr＝2.35min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.97(s,1h),7.93(dd,j＝11.9,7.0hz,1h),7.66(d,j＝7.6hz,1h),7.61(d,j＝7.7hz,1h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.41-7.34(m,1h),7.19(s,1h),6.98(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.52(t,j＝4.8hz,1h),4.16(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),4.07(d,j＝7.2hz,2h),3.70(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.82(dt,j＝14.9,7.5hz,1h),2.18(s,3h),2.12(s,3h),2.10-2.00(m,2h),1.91(ddt,j＝21.7,17.7,7.5hz,4h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-119.45,-138.60.
實(shí)施例73:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-4-(1-(環(huán)丁基甲基)-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例64。
lc-ms:519.1,tr＝2.46min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.23(d,j＝7.6hz,1h),7.97(s,1h),7.66(d,j＝7.6hz,1h),7.61(d,j＝7.6hz,1h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(t,j＝7.5hz,1h),7.19(s,1h),7.00(d,j＝11.5hz,1h),5.52(t,j＝4.8hz,1h),4.17(dt,j＝14.4,4.1hz,1h),4.07(d,j＝7.1hz,2h),3.71(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.82(dt,j＝15.1,7.4hz,2h),2.12(s,3h),2.10-1.99(m,5h),1.99-1.80(m,4h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-134.86.
實(shí)施例74:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-4-(3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁-3-基)-1h-吡唑-4-基)-2-氟苯基)脲
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-溴-5-氯-2-氟苯基)脲(55mg,0.126mmol)，3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁-3-基)-1h-吡唑-4-硼酸頻哪醇酯(70mg,0.252mmol)，pd(dppf)cl2(46mg,0.0629mmol)和碳酸鉀(35mg,0.253mmol)于1,4-二氧六環(huán)/水(10ml/2ml)中攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃微波反應(yīng)1小時(shí)。冷卻至室溫，加水，二氯甲烷提取，干燥，柱層析純化得1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(5-氯-4-(3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁-3-基)-1h-吡唑-4-基)-2-氟苯基)脲(1.4mg)。
lc-ms:507.1,tr＝2.08min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.24(d,j＝7.6hz,1h),7.99(s,1h),7.63(dd,j＝20.5,7.6hz,2h),7.42(dt,j＝33.7,7.4hz,2h),7.20(s,1h),7.00(d,j＝11.4hz,1h),5.64-5.55(m,1h),5.51(s,1h),5.36(t,j＝4.7hz,1h),5.17(t,j＝6.3hz,1h),5.11(t,j＝6.3hz,1h),5.03(dd,j＝14.0,6.6hz,2h),4.17(d,j＝14.3hz,1h),3.71(dd,j＝14.3,5.6hz,1h),2.13(s,3h),2.08(s,3h).
實(shí)施例75:
1-(2,5-二氟-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
第一步：1-(4-溴-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
將2-(6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)乙酸(160mg,0.71mmol)，疊氮磷酸二苯酯(dppa)(390mg,1.4mmol)，三乙胺(1ml)，4-溴-2,5-二氟苯胺(220mg)溶于無(wú)水甲苯(15ml)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流4小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(20ml)，依次用水(2x10ml)，飽和食鹽水(10ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化和反向快速柱純化得到1-(4-溴-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(70mg)。
第二步：1-(2,5-二氟-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲的制備
將1-(4-溴-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(36mg,0.07mmol)，1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(42mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)，碳酸鉀(20mg,0.14mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)和水(0.5ml)的混合液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，用水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(6.0mg)。
lc-ms:467.0，tr＝2.53min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.99(s,1h),7.89(dd,j＝11.8,6.9hz,1h),7.49(t,j＝5.0hz,2h),7.23(s,1h),7.15-7.06(m,1h),6.97(dd,j＝11.4,6.6hz,1h),5.73(t,j＝4.2hz,1h),4.27(dd,j＝14.5,3.7hz,1h),3.84-3.78(m,1h),3.76(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h).
實(shí)施例76:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁-3-基)-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)脲
制備方法同實(shí)施例54。
lc-ms:491.2,tr:＝2.04min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.85(s,1h),7.84-7.79(m,1h),7.53(t,j＝6.7hz,1h),7.49(d,j＝7.4hz,1h),7.34(t,j＝7.5hz,1h),7.25(t,j＝7.5hz,1h),7.06(s,1h),6.86(dd,j＝11.4,6.7hz,1h),5.48(dt,j＝14.2,7.0hz,1h),5.40(t,j＝4.7hz,1h),5.01(t,j＝6.4hz,2h),4.94-4.87(m,2h),4.05(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.58(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.06(s,3h),2.02(s,3h)；
19fnmr(376mhz,meod)δ-119.44,-138.56.
實(shí)施例77:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)脲
lc-ms:435.1,tr＝1.92min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.98(s,1h),7.93(dd,j＝11.9,7.0hz,1h),7.66(d,j＝7.5hz,1h),7.61(d,j＝7.6hz,1h),7.46(t,j＝7.5hz,1h),7.38(dd,j＝10.9,4.2hz,1h),7.19(s,1h),7.00(dd,j＝11.5,6.7hz,1h),5.52(t,j＝4.8hz,1h),4.16(dd,j＝14.4,4.1hz,1h),3.70(dd,j＝14.4,5.7hz,1h),2.17(s,6h)；
19fnmr(376mhz,meod)δ-119.51,-138.67.
實(shí)施例78:
1-((5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)-3-(4-(3,5-二甲基-1-(氧雜環(huán)丁-3-基甲基)-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)脲
lc-ms:505.1,tr＝2.03min；
1hnmr(400mhz,meod)δ9.23(s,1h),8.05(m,1h),7.89(m,1h),7.77m,2h),7.64(m,2h),7.17(m,1h),6.74(s,1h),5.89(m,1h),5.36(m,4h),4.61(d,j＝9.6hz,2h),4.40(m,2h),2.21(t,j＝7.6hz,3h),2.06(m,4h).
實(shí)施例79:
1-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
將1-(4-溴-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(36mg,0.07mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環(huán)-2-基)-1h-吡唑(34mg,0.15mmol)，pd(dppf)cl2(5mg)，碳酸鉀(20mg,0.14mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)和水(0.5ml)地混合液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。lc-ms顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮，剩余物溶于二氯甲烷(10ml)，用水(2x5ml)洗滌。有機(jī)相干燥過(guò)濾，濃縮。剩余物通過(guò)快速硅膠柱純化得到1-(2,5-二氟-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(7.0mg)。
lc-ms:439.1,tr＝2.03min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(d,j＝15.5hz,2h),7.85(dd,j＝13.1,6.9hz,1h),7.80(s,1h),7.48(dd,j＝13.2,5.2hz,2h),7.35(dd,j＝12.0,6.9hz,1h),7.21(s,1h),7.15-7.01(m,1h),5.70(t,j＝4.3hz,1h),4.25(dd,j＝14.5,3.7hz,1h),3.92(s,3h),3.76(dd,j＝14.5,5.3hz,1h)；
19fnmr(376mhz,meod)δ-120.02,-120.23,-138.39.
實(shí)施例80:
1-(4-(1-(環(huán)丙基甲基)-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例80。
lc-ms:479.2,tr＝2.47min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.04(d,j＝1.3hz,1h),7.98(s,1h),7.91-7.78(m,2h),7.54-7.43(m,2h),7.38(dd,j＝12.0,6.8hz,1h),7.21(s,1h),7.14-7.02(m,1h),5.70(t,j＝4.4hz,1h),4.25(dd,j＝14.5,3.7hz,1h),4.03(d,j＝7.1hz,2h),3.76(dd,j＝14.5,5.4hz,1h),1.38-1.25(m,1h),0.64(q,j＝5.8hz,2h),0.43(q,j＝4.8hz,2h).
實(shí)施例81:
1-(2,5-二氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例80。
lc-ms:425.1,tr＝1.94min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05-7.93(m,3h),7.86(dd,j＝13.1,6.9hz,1h),7.55-7.44(m,2h),7.40(dd,j＝12.0,6.9hz,1h),7.22(s,1h),7.10(ddd,j＝9.5,6.8,2.3hz,1h),5.71(t,j＝4.5hz,1h),4.25(dd,j＝14.5,3.8hz,1h),3.77(dd,j＝14.5,5.4hz,1h)；
19fnmr(376mhz,meod)δ-120.04,-120.36,-138.39.
實(shí)施例82:
1-(2,5-二氟-4-(1-(噁丁環(huán)-3-基)-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
1-(2,5-二氟-4-(1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(15mg)和碳酸銫(100mg)溶于dmf(1ml)，3-碘噁丁環(huán)(30mg)，50℃攪拌過(guò)夜，反應(yīng)液冷卻至室溫，直接經(jīng)反相柱層析純化得到1-(2,5-二氟-4-(1-(噁丁環(huán)-3-基)-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲(3mg)。
lc-ms:481.0，tr＝2.130min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.14(s,1h),8.00(dd,j＝12.7,6.0hz,2h),7.56(d,j＝7.6hz,1h),7.42(td,j＝16.3,9.4hz,3h),7.11(t,j＝8.9hz,1h),6.43-6.35(m,1h),5.65-5.58(m,1h),5.07(d,j＝6.9hz,4h),4.61(s,1h),3.43(d,j＝2.9hz,1h),3.38(d,j＝5.4hz,1h).
實(shí)施例83:
1-(4-(1-(環(huán)丁基甲基)-1h-吡唑-4-基)-2,5-二氟苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例80。
lc-ms:493.1,tr＝2.32min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.98(d,j＝15.3hz,2h),7.91-7.75(m,2h),7.48(d,j＝7.3hz,2h),7.36(dd,j＝11.8,6.8hz,1h),7.23(s,1h),7.11(d,j＝8.7hz,1h),5.71(s,1h),4.25(dd,j＝14.5,3.2hz,1h),4.18(d,j＝7.3hz,2h),3.77(dd,j＝14.4,5.0hz,1h),2.85(dt,j＝14.9,7.5hz,1h),2.17-1.74(m,6h).
實(shí)施例84:
1-(2,5-二氟-4-(1-異丁基-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例80。
lc-ms:481.1,tr＝2.393min；
1hnmr(400mhz,meod)δ7.88(d,j＝14.0hz,2h),7.80-7.69(m,2h),7.37(t,j＝5.1hz,2h),7.27(dd,j＝12.0,6.9hz,1h),7.12(s,1h),6.99(dd,j＝11.3,7.5hz,1h),5.61(s,1h),4.15(dd,j＝14.5,3.7hz,1h),3.87(d,j＝7.3hz,2h),3.67(dd,j＝14.5,5.3hz,1h),2.10(dt,j＝13.4,6.8hz,1h),0.82(d,j＝6.7hz,6h).
實(shí)施例85:
1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)-3-((6-氟-5h-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-基)甲基)脲
制備方法同實(shí)施例81。
lc-ms:483.1,tr＝2.08min；
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05-7.94(m,2h),7.86(dd,j＝13.8,6.2hz,2h),7.55-7.43(m,2h),7.38(dd,j＝12.0,6.8hz,1h),7.22(s,1h),7.16-7.02(m,1h),5.72(t,j＝4.5hz,1h),4.34(t,j＝5.2hz,2h),4.26(dd,j＝14.4,3.8hz,1h),3.87-3.70(m,3h),3.34(s,3h)；
19fnmr(400mhz,meod)δ-120.07,-120.28,-138.44.
生物學(xué)評(píng)價(jià)
一、ido活性抑制的酶學(xué)測(cè)試
人的吲哚胺2,3-雙加氧酶(ido)購(gòu)自bpsbioscienceinc。人吲哚胺(idoleamine)2,3-雙加氧酶(ido)酶學(xué)反應(yīng)在96孔板進(jìn)行，反應(yīng)體積為20μl，反應(yīng)條件為：40nmido酶，0.2mml-色氨酸，50mmkpb(ph6.5)緩沖液，20mml-抗壞血酸鈉，10μm亞甲藍(lán)，0.2mg/ml過(guò)氧化氫酶，不同濃度的化合物，<1％二甲基亞砜。在30℃反應(yīng)60分鐘后，每孔加入5μl30％(w/v)三氯乙酸(50mmkpb緩沖液配制)50℃孵育30分鐘使n-甲?；?犬尿氨酸水解為犬尿氨酸。每孔加入25μl2％(w/v)p-(二甲基氨基)苯甲醛(p-dmba)/冰醋酸溶液，用bioteksynergyh1酶標(biāo)儀(moleculardevices)讀取490nm吸光值。
待測(cè)化合物貯備溶液用二甲基亞砜配制為10mm，實(shí)驗(yàn)時(shí)用用二甲基亞砜稀釋至試驗(yàn)最高濃度，然后進(jìn)行1：3梯度稀釋?zhuān)话阆♂尦?到10個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度點(diǎn)設(shè)復(fù)孔，每次實(shí)驗(yàn)均包含1個(gè)參照化合物。分析酶標(biāo)儀讀取490nm吸光值原始數(shù)據(jù)，計(jì)算受試化合物不同濃度點(diǎn)對(duì)ido酶活性的抑制，采用graphpadprism軟件對(duì)抑制百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合分析得到化合物的半數(shù)抑制濃度ic50值。
本發(fā)明實(shí)施例化合物的活性通過(guò)以上試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，酶學(xué)ido抑制活性ic50值結(jié)果見(jiàn)下表：
測(cè)試數(shù)據(jù)表明,本發(fā)明的實(shí)施例化合物具有較強(qiáng)的ido抑制作用。
二、ido活性抑制的細(xì)胞模型測(cè)試
干擾素γ可誘導(dǎo)hela細(xì)胞表達(dá)ido，這一模型被用來(lái)測(cè)試化合物對(duì)吲哚胺2,3-雙加氧酶(ido)活性抑制活性。hela細(xì)胞(atcc)的培養(yǎng)液為含100μml-色氨酸的不含酚紅的rpmi-1640。待測(cè)化合物貯備溶液用二甲基亞砜配制為10mm，實(shí)驗(yàn)時(shí)用二甲基亞砜稀釋至試驗(yàn)最高濃度，實(shí)驗(yàn)時(shí)用培養(yǎng)基進(jìn)行3倍系列稀釋?zhuān)话阆♂尦?到10個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度點(diǎn)設(shè)復(fù)孔。dmso終濃度為0.5％，每次實(shí)驗(yàn)均包含內(nèi)參化合物。
試驗(yàn)的程序?yàn)椋涸?6孔培養(yǎng)板上每孔加入20，000個(gè)hela細(xì)胞(atcc)過(guò)夜培養(yǎng)，24小時(shí)后將干擾素γ(終濃度為50ng/ml)和不同濃度的待測(cè)化合物和內(nèi)參化合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞。24時(shí)后，將140μl上清液/孔轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的96孔板中，每孔加入10μl6.1n的三氯乙酸，50℃孵育30分鐘使n-甲?；?犬尿氨酸水解為犬尿氨酸。反應(yīng)混合物離心(2500轉(zhuǎn)10分鐘)去除沉淀物，將上清液100μl轉(zhuǎn)移至另一個(gè)新的96孔板中，每孔加入100μl2％(w/v)p-(二甲基氨基)苯甲醛(p-dmba)/冰醋酸溶液，用bioteksynergyh1酶標(biāo)儀(moleculardevices)讀取490nm吸光值。
分析酶標(biāo)儀讀取490nm吸光值原始數(shù)據(jù)，計(jì)算受試化合物不同濃度點(diǎn)對(duì)ido酶活性的抑制，采用graphpadprism軟件對(duì)抑制百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合分析得到化合物的半數(shù)抑制濃度ic50值。
本發(fā)明實(shí)施例化合物的活性通過(guò)以上試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，細(xì)胞學(xué)ido抑制活性ic50值結(jié)果見(jiàn)下表：
測(cè)試數(shù)據(jù)表明,本發(fā)明的實(shí)施例化合物具有較強(qiáng)的細(xì)胞活性。