本發(fā)明涉及結(jié)合至nr1h4受體(fxr)并用作fxr的激動(dòng)劑或者調(diào)節(jié)劑的化合物。本發(fā)明還涉及通過(guò)用所述化合物結(jié)合所述核受體的所述化合物用于治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥的用途。

多細(xì)胞生物依賴于細(xì)胞和體室之間的信息傳遞的先進(jìn)機(jī)制。傳播的信息可能非常復(fù)雜，并且可能導(dǎo)致細(xì)胞分化、增殖或繁殖中涉及的遺傳程序的改變。信號(hào)或激素通常是低分子量分子，如肽、脂肪酸或膽固醇衍生物。

這些信號(hào)中的許多通過(guò)最終改變特定基因的轉(zhuǎn)錄來(lái)產(chǎn)生它們的作用。介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)各種信號(hào)的反應(yīng)的一個(gè)研究良好的蛋白質(zhì)組是被稱為核受體的轉(zhuǎn)錄因子家族，以下通常稱為“nr”。該組的成員包括類固醇激素、維生素d、蛻皮激素、順式和反式視黃酸、甲狀腺激素、膽汁酸、膽固醇衍生物、脂肪酸(和其它過(guò)氧化物酶體增殖物)的受體，以及所謂的孤兒受體(這種蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上類似于該組的其它成員，但是已知其沒(méi)有配體)。孤兒受體可能指示細(xì)胞中未知的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，或者可能是沒(méi)有配體活化而起作用的核受體。一些這些孤兒受體的轉(zhuǎn)錄激活可在不存在外源配體的情況下發(fā)生和/或通過(guò)源自細(xì)胞表面的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)生(d.j.mangelsdorf等人，cell1995,83,835；r.m.evans,mol.endocrinol.2005,19,1429)。

一般來(lái)說(shuō)，在nr中定義三個(gè)功能域。氨基末端結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為具有一些調(diào)控功能。之后是dna結(jié)合域，以下稱為“dbd”，其通常包含兩個(gè)鋅指元件，并識(shí)別在響應(yīng)基因啟動(dòng)子內(nèi)的特定激素應(yīng)答元件(此后稱為“hre”)?！癲bd”中的特定氨基酸殘基已顯示賦予dna序列結(jié)合特異性(m.schena和k.r.yamamoto,science1988,241,965)。以下稱為“l(fā)bd”的配體結(jié)合域位于已知nr的羧基末端區(qū)域。

在沒(méi)有激素的情況下，lbd似乎干擾dbd與其hre的相互作用。激素結(jié)合似乎導(dǎo)致nr中的構(gòu)象變化，從而打開(kāi)這種干擾(a.m.brzozowski等人，nature1997,389,753)。沒(méi)有l(wèi)bd的nr組成性激活轉(zhuǎn)錄但處于低水平。

已提出輔激活因子或轉(zhuǎn)錄激活因子除了影響目標(biāo)細(xì)胞的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)之外，還在序列特異性轉(zhuǎn)錄因子(基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄機(jī)制)之間建立聯(lián)系。數(shù)種蛋白質(zhì)如src-1、actr和grip1以配體增強(qiáng)的方式與nr相互作用(d.m.heery等人，nature1997,387,733；t.heinzel等人，nature1997,387,43；k.w.nettles和g.l.greene,annu.rev.physiol.2005,67,309)。

核受體調(diào)節(jié)劑如類固醇激素通過(guò)結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)受體并形成核受體-配體復(fù)合物影響特異性細(xì)胞的生長(zhǎng)和功能。核受體-激素復(fù)合物然后與特定基因的調(diào)控區(qū)域中的hre相互作用并改變特異性基因表達(dá)(a.aranda和a.pascual,physiol.rev.2001,81,1269)。

類法尼醇x受體α(farnesoidxreceptoralpha，以下在涉及人受體時(shí)通常也稱為nr1h4)為原型2型核受體，其在與視黃醇類x受體以異二聚體方式結(jié)合至靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域時(shí)激活基因(b.m.forman等人，cell1995,81,687)。nr1h4的相關(guān)生理配體是膽汁酸(d.j.parks等人，science1999,284,1365；m.makishima等人，science1999,284,1362)。最有效的是鵝脫氧膽酸(cdca)，其調(diào)節(jié)參與膽汁酸內(nèi)穩(wěn)態(tài)的數(shù)種基因的表達(dá)。法尼醇和衍生物(一起稱為類法尼醇)最初被描述為以高濃度激活大鼠直系同源物，但它們不激活人或小鼠受體。fxr在肝、整個(gè)胃腸道(包括食管，胃、十二指腸、小腸、結(jié)腸)、卵巢、腎上腺和腎臟中表達(dá)。除了控制細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)外，fxr似乎也通過(guò)上調(diào)細(xì)胞因子成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子15(嚙齒動(dòng)物)或19(猴、人)的表達(dá)而參與旁分泌和內(nèi)分泌信號(hào)傳導(dǎo)(j.a.holt等人，genesdev.2003,17,1581；t.inagaki等人，cellmetab.2005,2,217)。

用作fxr調(diào)節(jié)劑的小分子化合物已經(jīng)在以下出版物中公開(kāi)：wo2000/037077、wo2003/015771、wo2004/048349、wo2007/076260、wo2007/092751、wo2007/140174、wo2007/140183、wo2008/051942、wo2008/157270、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2008/025539、wo2008/025540、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2011/020615、wo2012/087519、wo2012/087520和wo2012/087521。更多的小分子fxr調(diào)節(jié)劑近來(lái)已經(jīng)被綜述(m.l.crawley,expertopinther.pat.2010,20,1047；d.merk等人，futuremed.chem.2012,4,1015和c.gege等人，curr.top.med.chem.2014,14,2143)。

在wo2013/007387中，我們公開(kāi)了具有以下通式的含羥基的環(huán)丁基和氮雜環(huán)丁烷衍生物，

其中所述變量的定義與本申請(qǐng)類似。

盡管迄今為止已經(jīng)公開(kāi)了大量fxr激動(dòng)劑，但仍然需要提供改進(jìn)的fxr激動(dòng)劑。

所述問(wèn)題已經(jīng)通過(guò)根據(jù)下式(1)的化合物，其對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑合物、前藥或者藥學(xué)上可接受的鹽被解決，

其中

r選自氫、鹵素、c1-6-烷基、c2-6-烯基、c2-6-炔基、鹵代-c1-6-烷基、c0-6-亞烷基-r⁷、c0-6-亞烷基-o-r⁷、c0-6-亞烷基-cn、c0-6-亞烷基-nr⁷r⁸、o-c3-10-環(huán)烷基、o-c1-6-亞烷基-o-r⁷、o-c3-10-雜環(huán)烷基、c0-6-亞烷基-co2r⁷、c0-6-亞烷基-c(o)r⁷、c0-6-亞烷基-c(o)nr⁷r⁸、c0-6-亞烷基-c(o)nr⁷so2r⁷、c0-6-亞烷基-n(r⁷)c(o)r⁷、c0-6-亞烷基-sox-r⁷、c0-6-亞烷基-so3h、c0-6-亞烷基-so2-nr⁷r⁸、c0-6-亞烷基-so2-nr⁸cor⁷、c0-6-亞烷基-n(r⁷)so2-r⁸和c0-6-亞烷基-so2-c3-10-雜環(huán)烷基，

其中所述亞烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基和5-或者6-元的雜芳基為未取代的或者取代有1至4個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、cn、c1-3-烷基、鹵代-c1-3-烷基、oh、氧代基團(tuán)、co2h、so3h、o-c1-3-烷基和o-鹵代-c1-3-烷基；

r⁷獨(dú)立地選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c0-6-亞烷基-c3-8-環(huán)烷基、c0-6-亞烷基-c3-8-雜環(huán)烷基、5-或者6-元的雜芳基和苯基，其中烷基、亞烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基和雜芳基為未取代的或者取代有1至6個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、cn、oh、氧代基團(tuán)、co2h、c1-3-烷基、鹵代-c1-3-烷基、o-c1-3-烷基、o-鹵代-c1-3-烷基、so3h和so2-c1-3-烷基；

r⁸獨(dú)立地選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基和c3-6-環(huán)烷基；

或者r⁷和r⁸當(dāng)與它們所連接的氮合起來(lái)時(shí)可形成3至8元環(huán)，所述3至8元環(huán)含有碳原子并任選含有1或者2個(gè)選自o、s或者n的雜原子，其中所述環(huán)是未取代的或者取代有1至4個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自氟、oh、氧代基團(tuán)、c1-4-烷基和鹵代-c1-4-烷基；

a為6-10元單環(huán)或者二環(huán)芳基或者5-10元單環(huán)或者二環(huán)雜芳基，所述雜芳基含有1至5個(gè)獨(dú)立地選自n、o和s的雜原子，其中芳基和雜芳基為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、cn、o-c1-6-烷基、o-鹵代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c3-6-環(huán)烷基和鹵代-c3-6-環(huán)烷基；

b為c5-8-環(huán)烷基環(huán)，或者如果y為n則b為含有一個(gè)氮原子的c5-8-雜環(huán)烷基，其中所述取代基q不直接相鄰于取代基a；

q選自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基、嘧啶基、噁唑基、吡唑基、咪唑基和三唑基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、c1-4-烷基、鹵代-c1-4-烷基、c1-4-烷氧基或者鹵代-c1-4-烷氧基；

y選自n、ch或者cf；

z選自

其中

l選自化學(xué)鍵、c1-3-亞烷基和c1-3-亞烷基-o-；

y'選自苯基、吡啶基、吡啶基-n-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、c4-8-環(huán)烷基和c4-8-雜環(huán)烷基，其中苯基、吡啶基、吡啶基-n-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、c4-8-環(huán)烷基和c4-8-雜環(huán)烷基取代有r²和r³并且任選地被選自以下的基團(tuán)取代一次或者兩次：氟、氯、cn、nh2、nh(c1-3-烷基)、n(c1-3-烷基)2、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、oh、c1-3-烷氧基、氟代-c1-3-烷氧基、c3-6-環(huán)烷基和氟代-c3-6-環(huán)烷基；

r¹選自c1-4-烷基和c3-6-環(huán)烷基，其中c1-4-烷基為未取代的或者取代有1至3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自氟、羥基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基，其中c3-6-環(huán)烷基為未取代的或者取代有1至3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自氟、羥基、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基；

r²和r³獨(dú)立地選自氫、鹵素、c1-3-烷基、鹵代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、鹵代-c1-3-烷氧基、環(huán)丙基和氟代-環(huán)丙基；

r⁴獨(dú)立地選自鹵素、c1-3-烷基、鹵代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、鹵代-c1-3-烷氧基、c3-6-環(huán)烷基和氟代-c3-6-環(huán)烷基；

r⁵選自氫、氟、ch3、chf2和cf3；

n選自0、1、2、3和4；和

x選自0、1和2。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及作為藥物的根據(jù)式(1)的化合物。

在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式(1)的化合物，其用于預(yù)防和/或治療由fxr介導(dǎo)的疾病。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式(1)的化合物用于制備藥物的用途，所述藥物用于預(yù)防和/或治療由fxr介導(dǎo)的疾病。

在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在需要的受試者中治療或者預(yù)防由fxr介導(dǎo)的疾病的方法，所述方法包括向所述受試者給藥有效量的根據(jù)式(1)的化合物。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的另一實(shí)施方案中，所述疾病選自慢性肝內(nèi)或者一些形式的肝外膽汁郁積性病癥；肝纖維化；肝的梗阻性或者慢性炎性障礙；肝硬化；脂肪肝和相關(guān)綜合征、與酒精誘發(fā)性肝硬化或者與病毒傳播型肝炎相關(guān)的膽汁郁積性或者纖維變性影響；在大部肝切除術(shù)(majorliverresection)之后的肝功能衰竭或者肝缺血；化療相關(guān)性脂肪性肝炎(chemotherapyassociatedsteatohepatitis，cash)；急性肝功能衰竭；和/或炎性腸病。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的另一實(shí)施方案中，所述疾病選自脂質(zhì)和脂蛋白紊亂；ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥，包括糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變和臨床顯性長(zhǎng)期糖尿病的其它觀察到的影響；由器官的慢性脂肪性和纖維性變性產(chǎn)生的病癥和疾病，例如非酒精性脂肪性肝病(nafld)，或者非酒精性脂肪性肝炎(nash)，所述器官的慢性脂肪性和纖維性變性由于強(qiáng)化的脂質(zhì)并且具體為甘油三酯積累和隨后促纖維化(profibrotic)途徑的活化所導(dǎo)致；肥胖癥或者代謝綜合征(血脂障礙、糖尿病或者異常高的體重指數(shù)的合并病癥)；和/或急性心肌梗塞、急性中風(fēng)或者作為慢性阻塞性動(dòng)脈粥樣硬化的終點(diǎn)發(fā)生的血栓形成。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的另一實(shí)施方案中，所述疾病選自非惡性過(guò)增生性障礙和惡性過(guò)增生性障礙，具體為肝細(xì)胞癌、結(jié)腸腺瘤和息肉病、結(jié)腸腺癌、乳腺癌、胰腺癌、巴雷特食管或者胃腸道和肝的其它形式的腫瘤性疾病。

本發(fā)明化合物共享在權(quán)利要求1中的根據(jù)式(1)的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在式(1)中的r選自co2h、so3h、conr⁷r⁸、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor⁷。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的又一優(yōu)選實(shí)施方案中，r⁷選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c1-6-亞烷基-r⁹、so2-c1-3-烷基。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，r⁸選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，r⁹選自cooh、oh和so3h。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，a選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、cn、o-c1-6-烷基、o-鹵代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c3-6-環(huán)烷基和鹵代-c3-6-環(huán)烷基。

更優(yōu)選地，a選自苯基、吡啶基、吲哚基、吲唑基、苯并異噻唑基、三唑并吡啶基、苯并噻唑基、噻唑基、噁唑基、喹啉基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、cn、o-c1-6-烷基、o-鹵代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c3-6-環(huán)烷基和鹵代-c3-6-環(huán)烷基。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的又一優(yōu)選實(shí)施方案中，r-a選自

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的又一優(yōu)選實(shí)施方案中，z選自

其中

l選自化學(xué)鍵、c1-3-亞烷基和c1-3-亞烷基-o-；

x選自ch、cf、n和no；

r¹選自c1-4-烷基和c3-6-環(huán)烷基，其中c1-4-烷基為未取代的或者取代有1至3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自氟、羥基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基，其中c3-6-環(huán)烷基為未取代的或者取代有1至3個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選自氟、羥基、c1-3-烷基、氟代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基和氟代-c1-3-烷氧基；

r²和r³獨(dú)立地選自氫、鹵素、c1-3-烷基、鹵代-c1-3-烷基、c1-3-烷氧基、鹵代-c1-3-烷氧基、環(huán)丙基和氟代-環(huán)丙基；和

r⁵選自氫、氟、ch3、chf2和cf3。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，z選自

其中

x選自ch、cf、n和no；

r¹選自cf3、chf2、異丙基和環(huán)丙基，其中異丙基和環(huán)丙基為未取代的或者取代有一個(gè)或兩個(gè)氟或者一個(gè)羥基；

r²選自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；

r³選自氫、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和

r⁵選自氫、氟、ch3、chf2和cf3。

在與上述或者下述的任一實(shí)施方案組合的又一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述部分選自

在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供根據(jù)式(2)的化合物

其中

a選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、cn、o-c1-6-烷基、o-鹵代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c3-6-環(huán)烷基和鹵代-c3-6-環(huán)烷基；

r選自co2h、so3h、conr⁷r⁸、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor⁷，其中

r⁷選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c1-6-亞烷基-r⁹、so2-c1-6-烷基；

r⁸選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基；和

r⁹選自cooh、oh和so3h；

q選自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基和嘧啶基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、ch3、chf2和cf3；

z選自

x選自ch、n和no；

r¹選自異丙基和環(huán)丙基，其中異丙基和環(huán)丙基為未取代的或者取代有一個(gè)或兩個(gè)氟或者一個(gè)羥基；

r²選自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和

r³選自氫、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3。

在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，提供式(3)化合物

其中

a選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、cn、o-c1-6-烷基、o-鹵代-c1-6-烷基、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c3-6-環(huán)烷基和鹵代-c3-6-環(huán)烷基；

r選自co2h、so3h、conr⁷r⁸、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮-3-基和so2nhcor⁷，其中

r⁷選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基、c1-6-亞烷基-r⁹、so2-c1-6-烷基；

r⁸選自氫、c1-6-烷基、鹵代-c1-6-烷基；和

r⁹選自cooh、oh和so3h；

q選自苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基和嘧啶基，其各自為未取代的或者取代有一個(gè)或者兩個(gè)基團(tuán)，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、ch3、chf2和cf3；

z選自

x選自ch、n和no；

r¹選自異丙基和環(huán)丙基，其中異丙基和環(huán)丙基為未取代的或者取代有一個(gè)或兩個(gè)氟或者一個(gè)羥基；

r²選自氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3；和

r³選自氫、氟、氯、ch3、chf2、cf3、ochf2和ocf3。

在本發(fā)明中，"c1-6-烷基"是指具有1至6個(gè)碳原子的飽和烷基鏈，其可以是直鏈或支鏈。其實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基和己基。

術(shù)語(yǔ)"鹵代-c1-6-烷基"是指所述烷基鏈中的一個(gè)或多個(gè)氫原子被替換為鹵素。其優(yōu)選實(shí)例是cf3。

"c2-6-烯基"是指含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的具有1至6個(gè)碳原子的烷基鏈，其可以是直鏈或支鏈。其實(shí)例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基或(1e,3z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。優(yōu)選的實(shí)例是乙烯基、丙烯基或(1e,3z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。

"c2-6-炔基"是指含有至少一個(gè)碳-碳三鍵的具有1至6個(gè)碳原子的烷基鏈，其可以是直鏈或支鏈。其實(shí)例包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基或3-己炔基。其優(yōu)選實(shí)例包括乙炔基和丙炔基。

“c0-6-亞烷基”是指相應(yīng)的基團(tuán)是二價(jià)的，并且將相連的殘基與分子的剩余部分連接。而且，在本發(fā)明中，“c0-亞烷基”表示化學(xué)鍵。

c5-10-環(huán)烷基是指包含5至10個(gè)碳原子的飽和的或部分不飽和的單、雙或者螺環(huán)環(huán)系。橋連的碳環(huán)環(huán)系包含兩個(gè)或更多個(gè)環(huán)系，其共享不相鄰的橋頭環(huán)原子。實(shí)例包括環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、二環(huán)[2.2.2]辛基、二環(huán)[3.2.1]辛基、螺[3.3]庚基、二環(huán)[2.2.1]庚基、金剛烷基和五環(huán)[4.2.0.0^2,5.0^3,8.0^4,7]辛基。

c3-10-雜環(huán)烷基是指飽和的或者部分不飽和的3至10元碳的單、雙或者螺環(huán)，其中1、2或者3個(gè)碳原子分別被1、2或者3個(gè)雜原子替代，其中所述雜原子獨(dú)立地選自n、o、s、so和so2。其實(shí)例包括氧雜環(huán)丙烷基(epoxidyl)、氧雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基、1,4-二噁烷基、嗎啉基、4-奎寧環(huán)基、1,4-二氫吡啶基和3,6-二氫-2h-硫代吡喃基。c3-10-雜環(huán)烷基可以通過(guò)碳或者氮原子與分子的剩余部分連接。

含有至多4個(gè)雜原子的5-10元的單環(huán)或者二環(huán)雜芳族環(huán)系(在本申請(qǐng)中也被稱為雜芳基)是指單環(huán)雜芳環(huán)如吡咯基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、噁二唑基和噻二唑基。它還指二環(huán)環(huán)系，其中所述一個(gè)或多個(gè)雜原子可存在于一個(gè)或者兩個(gè)環(huán)中(包括橋頭原子)。其實(shí)例包括喹啉基、異喹啉基、喹噁啉基、苯并咪唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、吲哚基、中氮茚基和吡唑并[1,5-a]嘧啶基。雜芳基體系的氮或者硫原子也可任選被氧化成相應(yīng)的n-氧化物、s-氧化物或者s,s-二氧化物。如果沒(méi)有另外說(shuō)明，雜芳基體系可以通過(guò)碳或氮原子連接。n-連接的雜環(huán)的實(shí)例為

6-10元的單環(huán)或者二環(huán)芳族環(huán)系(在本申請(qǐng)中也被稱為芳基)是指芳族碳環(huán)如苯基或者萘基。

術(shù)語(yǔ)"n-氧化物"表示其中所述雜芳族體系(優(yōu)選為吡啶基)中的氮被氧化的化合物。這種化合物可按已知方式通過(guò)以下方法得到：使本發(fā)明化合物(例如在吡啶基中)在惰性溶劑中與h2o2或者過(guò)酸反應(yīng)。

鹵素選自氟、氯、溴和碘，更優(yōu)選為氟或者氯，并且最優(yōu)選為氟。

而且，本發(fā)明化合物部分地經(jīng)歷互變異構(gòu)。例如，如果在環(huán)中含有氮原子的雜芳族基團(tuán)在與所述氮原子相鄰的碳原子上取代有羥基，那么可出現(xiàn)以下互變異構(gòu)現(xiàn)象：

c3-6-環(huán)烷基或者c3-6-雜環(huán)烷基可直接連接或者螺環(huán)連接，例如，當(dāng)環(huán)己烷取代有雜環(huán)烷基(即氧雜環(huán)丁烷)時(shí)，以下結(jié)構(gòu)是可能的：

本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，當(dāng)備選取代基的列表包括由于其價(jià)鍵要求或其它原因而不能用于取代特定基團(tuán)的成員時(shí)，該列表旨在以本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)來(lái)閱讀，以只包括適用于取代特定基團(tuán)的那些列表成員。

本發(fā)明的化合物可以是前藥化合物的形式?！扒八幓衔铩笔侵竿ㄟ^(guò)在生物體內(nèi)的生理?xiàng)l件下與酶、胃酸等反應(yīng)(例如，通過(guò)氧化、還原、水解等，其中每一種都是酶促進(jìn)行的)而轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物的衍生物。前藥的實(shí)例是這樣的化合物：其中本發(fā)明化合物中的氨基被酰化、烷基化或磷酸化以形成例如二十烷酰氨基、丙氨酰氨基、新戊酰氧基甲基氨基，或其中羥基被酰化、烷基化、磷酸化或轉(zhuǎn)化成硼酸酯，例如乙酰氧基、棕櫚酰氧基、新戊酰氧基、琥珀酰氧基、富馬酰氧基、丙氨酰氧基，或其中羧基被酯化或酰胺化。這些化合物可以根據(jù)公知的方法由本發(fā)明的化合物制備。前藥的其它實(shí)例是這樣的化合物：其中本發(fā)明化合物中的羧化物例如轉(zhuǎn)化成烷基-、芳基-、膽堿-、氨基、酰氧基甲基酯、亞麻酸酯(linolenoylester)。

在人類肝臟中，udp-葡萄糖苷酸基轉(zhuǎn)移酶作用于具有氨基、氨基甲?；?、硫基(巰基)或羥基的某些化合物，以通過(guò)糖苷鍵將尿苷二磷酸-α-d-葡萄糖醛酸綴合，或者在二期代謝過(guò)程中酯化具有羧基或羥基的化合物。本發(fā)明的化合物可以是葡糖苷酸化的，也就是說(shuō)，與葡糖醛酸結(jié)合，以形成葡糖苷酸，特別是(β-d)葡糖苷酸。

本發(fā)明化合物的代謝物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

形成膽汁的一個(gè)步驟是單個(gè)膽汁酸與氨基酸(特別是甘氨酸或牛磺酸)的綴合。本發(fā)明的化合物可以在可取代的位置與甘氨酸或?；撬峋Y合。

在可發(fā)生本發(fā)明化合物或者它們的前藥的互變異構(gòu)現(xiàn)象如酮-烯醇互變異構(gòu)現(xiàn)象的情況下，單個(gè)形式如酮和烯醇形式以及它們的任何比率的混合物均在本發(fā)明范圍內(nèi)。這同樣適用于立體異構(gòu)體，例如，對(duì)映異構(gòu)體、順式/反式異構(gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體等。

如果需要，異構(gòu)體可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法(例如，通過(guò)液相色譜)分離。這同樣適用于對(duì)映異構(gòu)體，例如，通過(guò)使用手性固定相。另外，通過(guò)將對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成非對(duì)映異構(gòu)體(即與對(duì)映體純的輔助化合物偶聯(lián))，隨后分離得到的非對(duì)映異構(gòu)體并裂解輔助殘基，可以分離對(duì)映異構(gòu)體。或者，本發(fā)明化合物的任何對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)使用光學(xué)純起始原料的立體選擇性合成獲得。從外消旋混合物中獲得純對(duì)映異構(gòu)體的另一種方法將使用手性抗衡離子的對(duì)映選擇性結(jié)晶。

本發(fā)明化合物可以是藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物的形式。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"是指由藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿或酸(包括無(wú)機(jī)堿或酸和有機(jī)堿或酸)制備的鹽。在本發(fā)明化合物含有一個(gè)或多個(gè)酸性或堿性基團(tuán)的情況下，本發(fā)明還包括其相應(yīng)的藥學(xué)上或毒理學(xué)上可接受的鹽，特別是其藥學(xué)上可用的鹽。因此，含有酸性基團(tuán)的本發(fā)明化合物可以存在于這些基團(tuán)上，并可根據(jù)本發(fā)明使用，例如作為堿金屬鹽、堿土金屬鹽或銨鹽。這些鹽的更精確的實(shí)例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽或與氨或有機(jī)胺(如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸)的鹽。含有一個(gè)或多個(gè)堿性基團(tuán)(即可被質(zhì)子化的基團(tuán))的本發(fā)明化合物可以存在并可根據(jù)本發(fā)明以其與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的加成鹽的形式使用。合適的酸的實(shí)例包括氯化氫、溴化氫、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗壞血酸、吡啶-4-羧酸、檸檬酸、己二酸以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它酸。如果本發(fā)明化合物在分子中同時(shí)含有酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，那么除了所提及的鹽形式外，本發(fā)明還包括內(nèi)鹽或內(nèi)銨鹽(兩性離子)。相應(yīng)的鹽可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法獲得，例如通過(guò)使其與有機(jī)或無(wú)機(jī)酸或堿在溶劑或分散劑中接觸，或通過(guò)與其它鹽進(jìn)行陰離子交換或陽(yáng)離子交換。本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的這樣的鹽，其由于低的生理相容性而不直接適用于藥物，但可例如用作化學(xué)反應(yīng)的中間體或用于制備藥學(xué)上可接受的鹽。

此外，本發(fā)明的化合物可以以溶劑合物的形式存在，例如包括溶劑化水，或藥學(xué)上可接受的溶劑合物，例如醇，特別是乙醇的那些。

此外，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含至少一種本發(fā)明化合物，或其前藥化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物作為活性成分，以及藥學(xué)上可接受的載體。

“藥物組合物”是指一種或多種活性成分和一種或多種構(gòu)成載體的惰性成分，以及這樣的任何產(chǎn)物：其直接或間接地源自任何兩種或更多種成分的組合、絡(luò)合或聚集，或者一種或多種成分的解離，或者一種或多種成分的其它類型的反應(yīng)或相互作用。因此，本發(fā)明的藥物組合物包括通過(guò)混合至少一種本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體而制備的任何組合物。

本發(fā)明的藥物組合物可另外包含一種或多種作為活性成分的其它化合物，如前藥化合物或其它核受體調(diào)節(jié)劑。

雖然在任何給定情況下最合適的途徑將取決于所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及活性成分的性質(zhì)，但是所述組合物適用于口服、直腸、局部、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))、眼(眼科)、肺(鼻或頰吸入)或鼻腔給藥。它們可以方便地以單位劑量形式存在并通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備。

通過(guò)用所述化合物結(jié)合所述核受體，本發(fā)明還涉及所述化合物用于治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥的用途。此外，通過(guò)用所述化合物結(jié)合所述核受體，本發(fā)明涉及所述化合物用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥。具體地，本發(fā)明涉及根據(jù)式(1)的化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防和/或治療慢性肝內(nèi)或者一些形式的肝外膽汁郁積性病癥、肝纖維化、急性肝內(nèi)膽汁郁積性病癥、由膽汁組成不當(dāng)引起的梗阻性或者慢性炎性障礙、具有減少的膳食脂肪和脂溶性膳食維生素?cái)z入的胃腸病癥、炎性腸病、脂質(zhì)和脂蛋白紊亂、ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥、由器官的慢性脂肪性和纖維性變性產(chǎn)生的病癥和疾病，所述器官的慢性脂肪性和纖維性變性由于強(qiáng)化的脂質(zhì)并且具體為甘油三酯積累和隨后促纖維化途徑的活化所導(dǎo)致，肥胖癥和代謝綜合征(血脂障礙、糖尿病和異常高的體重指數(shù)的合并病癥)、急性心肌梗塞、急性中風(fēng)、作為慢性阻塞性動(dòng)脈粥樣硬化的終點(diǎn)發(fā)生的血栓形成、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌或者寄生原生動(dòng)物的持續(xù)感染、非惡性過(guò)增生性障礙、惡性過(guò)增生性障礙、結(jié)腸腺癌和具體的肝細(xì)胞癌、脂肪肝和相關(guān)綜合征、作為慢性肝病或者外科肝切除的結(jié)果的肝功能衰竭或者肝功能失常、乙型肝炎感染、丙型肝炎感染和/或與酒精誘發(fā)性肝硬化或者與病毒傳播型肝炎相關(guān)的膽汁郁積性和纖維變性影響。

本文提及的藥物可以通過(guò)常規(guī)方法制備，包括根據(jù)本發(fā)明的化合物與藥學(xué)上可接受的載體的組合。

提出fxr是一種核膽汁酸傳感器。因此，它調(diào)節(jié)肝臟中膽汁酸的合成產(chǎn)率及其在腸道中的循環(huán)(通過(guò)調(diào)節(jié)膽汁酸結(jié)合蛋白)。但除膽汁酸生理學(xué)之外，fxr似乎還參與許多不同生理過(guò)程的調(diào)節(jié)，這些生理過(guò)程在病因?qū)W中相關(guān)并且用于治療多種疾病，例如膽固醇膽結(jié)石，代謝性疾病如ii型糖尿病、血脂障礙或肥胖癥，慢性炎性疾病如炎性腸病或慢性肝內(nèi)形式的膽汁郁積性和許多其它疾病(t.claudel等人，arterioscler.thromb.vasc.biol.2005,25,2020；y.d.wang等人，cellres.2008,18,1087)。

fxr調(diào)節(jié)肝臟和胃腸道中復(fù)雜的應(yīng)答基因模式?；虍a(chǎn)物對(duì)不同的生理過(guò)程有影響。在fxr功能分析過(guò)程中，分析的第一個(gè)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)是膽汁酸合成調(diào)節(jié)。雖然lxr通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性核受體lrh-1來(lái)誘導(dǎo)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的關(guān)鍵酶cyp7a1，但是fxr通過(guò)上調(diào)編碼shp的mrna來(lái)抑制cyp7a1的誘導(dǎo)，該shp是顯性抑制lrh-1的另一種核受體。由于fxr結(jié)合該途徑的最終產(chǎn)物，主要為膽汁酸如膽酸(ca)或cdca，這被認(rèn)為是對(duì)基因表達(dá)水平的反饋抑制的實(shí)例(b.goodwin等人，mol.cell2000,6,517；t.t.lu等人，mol.cell2000,6,507)。與通過(guò)shp抑制膽汁酸合成平行，fxr誘導(dǎo)一系列所謂的abc(用于atp結(jié)合盒)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其負(fù)責(zé)將有毒膽汁酸從肝細(xì)胞溶質(zhì)輸出到小管中，所述小管是膽汁起源的小膽管分支。通過(guò)分析fxr敲除小鼠，fxr的肝保護(hù)功能首次顯現(xiàn)(c.j.sinal等人，cell2000,102,731)，其中顯示了數(shù)種abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在肝臟中的低表達(dá)或過(guò)表達(dá)。進(jìn)一步的詳細(xì)分析顯示，主要膽汁鹽分泌泵bsep或者abcb11(m.ananthanarayanan等人，j.biol.chem.2001,276,28857；j.r.plass等人，hepatology2002,35,589)以及介導(dǎo)脂質(zhì)從脂蛋白轉(zhuǎn)移至磷脂的關(guān)鍵酶pltp(n.l.urizar等人，j.biol.chem.2000,275,39313)和磷脂的兩個(gè)關(guān)鍵小管膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,mrp-2(abcc4)(h.r.kast等人，j.biol.chem.2002,277,2908)和mdr-3(abcb4)(l.huang等人，j.biol.chem.2003,278,51085)是通過(guò)fxr的配體定向轉(zhuǎn)錄激活的直接靶標(biāo)(總結(jié)在：m.miyata,j.pharmacol.exp.ther.2005,312,759；g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005,5,289)。

事實(shí)上，fxr似乎是膽汁酸的合成、輸出和再循環(huán)的主要代謝物傳感器和調(diào)節(jié)劑，這暗示使用fxr配體來(lái)誘導(dǎo)膽汁流動(dòng)和將膽汁酸組成改變?yōu)楦H水的組成。隨著開(kāi)發(fā)作為工具化合物的第一個(gè)合成fxr配體gw4064(p.r.maloney等人，j.med.chem.2000,43,2971；t.m.willson等人，med.res.rev.2001、21,513)和半合成人工膽汁酸配體6-α-乙基-cdca，可以分析強(qiáng)力激動(dòng)劑的fxr的超刺激效果。顯示兩種配體在膽管結(jié)扎的動(dòng)物中誘導(dǎo)膽汁流動(dòng)。此外，除了膽汁分泌促進(jìn)作用外，還可以證明肝保護(hù)作用(r.pellicciari等人，j.med.chem.2002,45,3569；y.liu等人，j.clin.invest.2003,112,1678)。這種肝保護(hù)作用進(jìn)一步縮小為抗纖維變性效果，其來(lái)自于基質(zhì)金屬蛋白酶timp-1和2的組織抑制劑的抑制、在肝星狀細(xì)胞中分解基質(zhì)金屬蛋白酶2的膠原沉積物的誘導(dǎo)，和隨后的通過(guò)fxr激動(dòng)劑降低α-膠原mrna和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(tgf-β)mrna，這兩者都是促纖維化因子(s.fiorucci等人，gastroenterology2004,127,1497；s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005,314,584)。此外，在膽管結(jié)扎的動(dòng)物模型中以及在雌激素誘導(dǎo)的膽汁郁積性的動(dòng)物模型中證實(shí)了抗膽汁淤積活性(s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005,313,604)。

遺傳學(xué)研究表明，在遺傳性膽汁淤積癥(進(jìn)行性熟悉的肝內(nèi)膽汁淤積＝pfic,i–iv型)中，作為fic1基因突變的結(jié)果，fxr本身的核定位被減少(在i型pfic中，也稱為byler病)(f.chen等人，gastroenterology2004,126,756；l.alvarez等人，hum.mol.genet.2004,13,2451)，或者編碼mdr-3磷脂輸出泵的fxr靶基因水平降低(在iii型pfic中)。綜合起來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)表明fxr結(jié)合化合物將在慢性膽汁淤積癥如原發(fā)性膽汁性肝硬化(pbc)或原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)的治療方案中顯示出顯著的臨床效用(綜述在：g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005,5,289；g.zollner等人，mol.pharm.2006,3,231；s.y.cai等人，expertopin.ther.targets2006,10,409)。

fxr激活對(duì)膽汁酸代謝和分泌的深刻影響不僅與膽汁淤積綜合征有關(guān)，而且甚至直接用于治療膽結(jié)石形成。膽固醇膽結(jié)石由于積極地從肝細(xì)胞泵出進(jìn)入小管內(nèi)腔的膽固醇的溶解度低而形成。三種主要組分膽汁酸、磷脂和游離膽固醇的含量的相對(duì)百分比決定了混合膠束的形成，并因此決定了游離膽固醇在膽汁中的表觀溶解度。fxr多態(tài)性作為數(shù)量性狀位點(diǎn)被定位，作為膽結(jié)石疾病的一個(gè)因素(h.wittenburg,gastroenterology2003,125,868)。使用合成的fxr工具化合物gw4064，可以證明fxr的激活導(dǎo)致膽固醇飽和指數(shù)(csi)的改善，并直接消除c57l膽石易感小鼠中的膽結(jié)石形成，而在fxr敲除小鼠中的藥物治療顯示對(duì)膽結(jié)石形成無(wú)效果(a.moschetta等人，naturemedicine2004,10,1352)。

這些結(jié)果使fxr成為開(kāi)發(fā)可用于預(yù)防膽固醇膽結(jié)石形成或防止手術(shù)切除或沖擊波碎石術(shù)后膽結(jié)石重新形成的小分子激動(dòng)劑的良好靶標(biāo)(討論于：s.a.doggrell,curr.opin.investig.drugs2006,7,344)。

因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)式(1)的化合物和包含所述化合物的藥物組合物用于預(yù)防和/或治療由不適當(dāng)?shù)哪懼M成引起的梗阻性或慢性炎性障礙，例如膽石癥，也被稱為膽固醇膽結(jié)石。

除了fxr在肝臟中在小分子刺激活化后顯示的強(qiáng)大的肝臟保護(hù)和促膽汁分泌以及抗纖維變性作用外，fxr似乎具有保護(hù)腸道免受腫瘤轉(zhuǎn)化和免于在腸中息肉發(fā)展及其轉(zhuǎn)化為腺癌的作用(s.modica等人，cancerres.2008,68,9589和r.r.maran等人，j.pharmacol.exp.ther.2009,328,469)。類似于腸道中的情況，缺乏fxr導(dǎo)致肝細(xì)胞癌(hcc)形成的高度增加，這是肝癌最突出的形式(i.kim等人，carcinogenesis2007,28,940和f.yang等人，cancerres.2007,67,863)。而功能性fxr防止結(jié)腸腺癌和肝細(xì)胞癌的形成，fxr激活誘導(dǎo)肝切除術(shù)后肝再生(w.huang等人，science2006,312,233)。

與fxr活化相關(guān)的聯(lián)合的肝保護(hù)、抗腫瘤和肝再生作用可以在治療上用于fxr激動(dòng)劑在治療嚴(yán)重肝病中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物和包含所述化合物的藥物組合物用于治療肝臟疾病如hcc、刺激肝臟再生和改善與大部肝切除術(shù)相關(guān)的副作用、與病因無(wú)關(guān)的肝硬化，以及在肝移植或大部肝臟手術(shù)過(guò)程中預(yù)防或治療肝臟缺血。

自從發(fā)現(xiàn)第一種合成的fxr激動(dòng)劑及其對(duì)嚙齒動(dòng)物的施用以來(lái)，很明顯，fxr是血清甘油三酸酯的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑(p.maloney等人，j.med.chem.2000,43,2971；t.willson等人，med.res.rev.2001、21,513)。在過(guò)去六年中，已經(jīng)出版了積累的證據(jù)，合成激動(dòng)劑激活fxr導(dǎo)致血清甘油三酯的顯著降低，主要是以降低的vldl的形式，而且降低總血清膽固醇(h.r.kast等人，mol.endocrinol.2001,15,1720；n.l.urizar等人，science2002,296,1703；g.lambert等人，j.biol.chem.2003,278,2563；m.watanabe等人，j.clin.invest.2004,113,1408；a.figge等人，j.biol.chem.2004,279,2790；s.bilz等人，am.j.physiol.endocrinol.metab.2006,290,e716)。

但血清甘油三酯的降低并不是獨(dú)立的效果。用合成的fxr激動(dòng)劑gw4064處理db/db或ob/ob小鼠導(dǎo)致血清甘油三酯、總膽固醇、游離脂肪酸、酮體如3-oh丁酸酯的顯著和聯(lián)合的降低。此外，fxr激活與肝細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)胰島素信號(hào)通路結(jié)合，導(dǎo)致葡萄糖從肝臟糖原異生的產(chǎn)生減少，但是伴隨肝糖原的增加。胰島素敏感性和葡萄糖耐量受到fxr治療的積極影響(k.r.stayrook等人，endocrinology2005,146,984；y.zhang等人，pnas2006,103,1006；b.cariou等人，j.biol.chem.2006,281,11039；k.ma等人，j.clin.invest.2006,116,1102；d.duran-sandoval等人，biochimie2005,87,93)。最近在用高脂飲食過(guò)量的小鼠中觀察到對(duì)體重減輕的影響(c.lihong等人,americandiabetesassociation(ada)66^th年度科學(xué)會(huì)議,2006年6月,摘要編號(hào)856-p)。這種體重減輕效果可能來(lái)自于fxr的fgf-19(一種已知會(huì)導(dǎo)致體重減輕和運(yùn)動(dòng)表型的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)誘導(dǎo)(j.holt等人，genesdev.2003,17,1581；e.tomlinson等人，endocrinology2002,143,1741)。在近來(lái)的專利申請(qǐng)中，證明了fxr激動(dòng)劑對(duì)減輕體重的作用(wo2004/087076；wo2003/080803)。

總之，fxr激動(dòng)劑的這些藥理作用可以以不同的治療方法開(kāi)發(fā)：fxr結(jié)合化合物被認(rèn)為是治療ii型糖尿病的良好候選物，因?yàn)樗鼈兊囊葝u素致敏、糖原異生和脂質(zhì)降低作用。

在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物和包含所述化合物的藥物組合物用于ii型糖尿病的預(yù)防和/或治療，其可以通過(guò)全身胰島素敏感性和肝臟中的細(xì)胞內(nèi)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)的fxr介導(dǎo)的上調(diào)、增加的外周葡萄糖攝取和代謝、增加的肝臟中的糖原儲(chǔ)存、減少?gòu)母闻K負(fù)荷的糖異生產(chǎn)生的葡萄糖向血清中的輸出來(lái)克服。

在又一實(shí)施方案中，所述化合物和藥物組合物用于預(yù)防和/或治療慢性肝內(nèi)膽汁淤積，例如pbc、psc、進(jìn)行性家族性膽汁淤積(pfic)、酒精誘發(fā)性肝硬化和相關(guān)的膽汁淤積，以及一些形式的肝外膽汁淤積病癥，或者肝纖維化。

本發(fā)明還涉及式(1)的化合物或包含所述化合物的藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療膳食脂肪和脂溶性膳食維生素的吸收減少的胃腸道病癥，其可以通過(guò)增加腸膽汁酸和磷脂的水平來(lái)克服。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物用于預(yù)防和/或治療選自以下的疾?。褐|(zhì)和脂蛋白紊亂如作為臨床表現(xiàn)病癥的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，其可通過(guò)fxr降低總血漿膽固醇、降低血清甘油三酯、增加肝膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸以及增加vldl和其它脂蛋白在肝臟中的清除和代謝轉(zhuǎn)化的有益效果而得到改善。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物和藥物組合物用于預(yù)防和/或治療疾病，其中fxr靶向藥物的降脂、抗膽汁淤積和抗纖維變性聯(lián)合作用可用于治療脂肪肝和相關(guān)綜合征如nash，或者用于治療與酒精誘發(fā)性肝硬化或者與病毒傳播型肝炎相關(guān)的膽汁淤積和纖維變性作用。

結(jié)合降血脂作用，還顯示功能性fxr的喪失導(dǎo)致apoe敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化增加(e.a.hanniman等人，j.lipidres.2005,46,2595)。因此，fxr激動(dòng)劑可能具有作為抗動(dòng)脈粥樣硬化和心臟保護(hù)藥物的臨床應(yīng)用。內(nèi)皮素-1在血管平滑肌細(xì)胞中的下調(diào)也可能有助于這些有益的治療效果(f.he等人，circ.res.2006,98,192)。

本發(fā)明還涉及根據(jù)式(1)的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物，其用于預(yù)防和創(chuàng)傷后治療心血管障礙如急性心肌梗塞、急性中風(fēng)，或者作為慢性阻塞性動(dòng)脈粥樣硬化的終點(diǎn)發(fā)生的血栓形成。

除了控制腸道和結(jié)腸息肉形成外，fxr似乎在乳腺癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)，但在健康乳腺組織中不表達(dá)，并且似乎與er陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中的雌激素受體相互作用(k.e.swales等人，cancerres.2006,66,10120和f.journe等人，breastcancerres.treat.2009,115,523)。

這將使fxr也可以作為治療增殖性疾病(特別是表達(dá)fxr的小分子應(yīng)答形式的轉(zhuǎn)移癌癥形式)的潛在靶標(biāo)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物和藥物組合物用于預(yù)防和/或治療惡性過(guò)增生性障礙，例如不同形式的癌癥，特別是某些形式的乳腺癌、肝癌或結(jié)腸癌，其中fxr配體的干擾將具有有益的影響。

最后，雖然沒(méi)有提供準(zhǔn)確的機(jī)制，但fxr似乎也參與了腸內(nèi)抗菌防御的控制(t.inagaki等人，pnas.2006,103,3920)。然而，從這些公布的數(shù)據(jù)可以得出結(jié)論，fxr激動(dòng)劑的治療可能對(duì)炎癥性腸病(ibd)的治療有一定的有益影響，特別是腸道上部(回腸)部分受影響的那些形式(如回腸克羅恩病)，因?yàn)檫@似乎是fxr控制細(xì)菌生長(zhǎng)的作用點(diǎn)。在ibd中，適應(yīng)性免疫應(yīng)答的脫敏在腸道免疫系統(tǒng)中受到某種程度的損害。細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)可能是建立慢性炎癥反應(yīng)的原因。因此，通過(guò)經(jīng)fxr機(jī)制抑制細(xì)菌生長(zhǎng)可能是預(yù)防急性炎癥發(fā)作的關(guān)鍵機(jī)制。

因此，本發(fā)明還涉及根據(jù)式(1)的化合物或包含所述化合物的藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療與炎性腸病相關(guān)的疾病如克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。fxr介導(dǎo)的腸屏障功能恢復(fù)和非共生細(xì)菌負(fù)荷的減少被認(rèn)為有助于減少細(xì)菌抗原暴露于腸道免疫系統(tǒng)，因此可以減少炎癥反應(yīng)。

本發(fā)明還涉及化合物或者藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療肥胖癥和相關(guān)障礙如代謝綜合征(血脂障礙、糖尿病和異常高的體重指數(shù)的合并病癥)，所述肥胖癥和相關(guān)障礙可以通過(guò)fxr介導(dǎo)的降低血清甘油三酯、血糖和增加的胰島素敏感性以及fxr介導(dǎo)的體重減輕來(lái)克服。

在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物或者藥物組合物可用于預(yù)防和/或治療i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥。這種并發(fā)癥的實(shí)例包括糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病神經(jīng)病變，或者周圍動(dòng)脈閉塞性疾病(paod)。糖尿病的其它臨床并發(fā)癥也被本發(fā)明涵蓋。

此外，還可以通過(guò)施用本發(fā)明的化合物或藥物組合物來(lái)防止和/或治療由器官的慢性脂肪性和纖維性變性導(dǎo)致的病癥和疾病，所述器官的慢性脂肪性和纖維性變性是由于強(qiáng)化的脂質(zhì)并且具體為甘油三酯累積和隨后促纖維化途徑的激活。這種病癥和疾病包括肝臟中的nash和慢性膽汁淤積病癥、腎臟中的腎小球硬化癥和糖尿病腎病、眼中的黃斑變性和糖尿病視網(wǎng)膜病變，以及神經(jīng)變性疾病如腦中的阿爾茨海默病或者周邊神經(jīng)系統(tǒng)中的糖尿病神經(jīng)病變。

在實(shí)際應(yīng)用中，本發(fā)明化合物可以根據(jù)常規(guī)藥物復(fù)合技術(shù)作為活性成分與藥物載體緊密混合。取決于給藥所需的制劑形式，例如口服或腸胃外(包括靜脈內(nèi))，載體可以采用多種形式。在制備用于口服劑型的組合物時(shí)，可以使用任何通常的藥物介質(zhì)，例如在口服液體制劑如懸浮液、酏劑和溶液劑的情況下的水、二醇、油、醇、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等；或在口服固體制劑如粉末劑、硬和軟膠囊劑和片劑的情況下的載體如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、造粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等，其中固體口服制劑是比液體制劑更優(yōu)選的。

由于其易于施用，片劑和膠囊劑代表最有利的口服劑量單位形式，在這種情況下，明顯使用固體藥物載體。如果需要，片劑可以用標(biāo)準(zhǔn)的水性或非水性技術(shù)包衣。這樣的組合物和制劑應(yīng)含有至少0.1％的活性化合物。這些組合物中活性化合物的百分比當(dāng)然可以變化，并且可以方便地在單位重量的約2％至約60％之間。在這種治療有用的組合物中的活性化合物的量使得將獲得有效的劑量?；钚曰衔镆部梢员莾?nèi)給藥，例如作為液滴或噴霧劑。

片劑、丸劑、膠囊劑等也可以含有粘合劑如黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸二鈣；崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；和甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精。當(dāng)劑量單位形式是膠囊劑時(shí)，除了上述類型的材料之外，它可以含有液體載體如脂肪油。

各種其它材料可以作為涂層存在或改變劑量單位的物理形式。例如，片劑可以用蟲(chóng)膠、糖或兩者包衣。除了活性成分之外，糖漿或酏劑還可含有作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、染料和調(diào)味劑如櫻桃味或橙味調(diào)味劑。

由于本發(fā)明化合物主要代表羧酸或其類似的陰離子電子等排物，并且眾所周知，離子藥物化合物的鹽形式可以顯著地影響藥物化合物的生物利用度，所以本發(fā)明化合物也可以作為具有各種抗衡陽(yáng)離子的鹽使用以產(chǎn)生可口服利用的制劑。這些藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子可以是單價(jià)或二價(jià)離子如銨、堿金屬鈉或鉀或者堿土金屬鎂或鈣、某些藥學(xué)上可接受的胺如三(羥甲基)氨基甲烷、乙二胺、二乙胺、哌嗪或其它，或某些陽(yáng)離子氨基酸如賴氨酸或精氨酸。

本發(fā)明的化合物也可以腸胃外給藥。這些活性化合物的溶液或懸浮液可以在與表面活性劑如羥丙基纖維素適當(dāng)混合的水中制備。分散體也可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油中的混合物中制備。在通常的儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以防止微生物的生長(zhǎng)。

適用于可注射用途的藥物形式包括無(wú)菌水溶液或分散體以及用于臨時(shí)制備無(wú)菌可注射溶液或分散體的無(wú)菌粉末。在所有情況下，所述形式必須是無(wú)菌的，并且必須是流體，以至于存在容易注射性。在制造和儲(chǔ)存的條件下必須是穩(wěn)定的，并且必須防止諸如細(xì)菌和真菌等微生物的污染作用。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。

為了向哺乳動(dòng)物，尤其是人類提供有效劑量的本發(fā)明化合物，可使用任何適合的給藥途徑。例如，可以使用口服、直腸、局部、腸胃外、眼睛、肺、鼻等。劑型包括片劑、錠劑、分散劑、混懸劑、溶液劑、膠囊劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、氣霧劑等。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物口服給藥。

使用的活性成分的有效劑量可以根據(jù)所使用的具體化合物、給藥方式、待治療的病癥和所治療病癥的嚴(yán)重程度而變化。這種劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。

當(dāng)治療或預(yù)防本發(fā)明化合物適用的fxr介導(dǎo)的病癥時(shí)，當(dāng)本發(fā)明的化合物以每公斤動(dòng)物體重約0.1毫克至約100毫克的日劑量施用時(shí)，獲得通常令人滿意的結(jié)果，優(yōu)選以單次日劑量給藥，或以每天兩至六次的分劑量給藥，或以緩釋形式給藥。對(duì)于大多數(shù)大型哺乳動(dòng)物，總?cè)談┝繛榧s1.0毫克至約1000毫克，優(yōu)選約1毫克至約50毫克。在70kg成年人的情況下，總?cè)談┝客ǔ榧s7毫克至約350毫克。可以調(diào)整該劑量方案以提供最佳治療反應(yīng)。

本發(fā)明的化合物可以根據(jù)以下方案和實(shí)施例的方法使用合適的材料制備，并且通過(guò)以下具體實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明。此外，通過(guò)利用本文描述的方法，結(jié)合本領(lǐng)域的普通技術(shù)，可以容易地制備本文所要求保護(hù)的本發(fā)明的其它化合物。然而，實(shí)施例中所示的化合物不被解釋為形成被認(rèn)為是本發(fā)明的唯一屬。這些實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明了制備本發(fā)明化合物的細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地理解，以下制備方法的條件和方法的已知變化可用于制備這些化合物。本發(fā)明的化合物通常以其藥學(xué)上可接受的鹽的形式分離，例如上述那些。

對(duì)應(yīng)于分離的鹽的游離胺堿可以通過(guò)以下方法產(chǎn)生：用合適的堿例如碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉和氫氧化鉀的水溶液進(jìn)行中和，并將釋放的游離胺堿萃取到有機(jī)溶劑中，隨后蒸發(fā)。以這種方式分離的游離胺堿可以通過(guò)溶解在有機(jī)溶劑中，然后加入適當(dāng)?shù)乃幔缓笳舭l(fā)、析出或結(jié)晶，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為另一種藥學(xué)上可接受的鹽。對(duì)應(yīng)于分離的鹽的游離羧酸可以通過(guò)用合適的酸如鹽酸、硫酸氫鈉、磷酸二氫鈉的水溶液中和并將釋放的游離羧酸萃取到有機(jī)溶劑中，隨后蒸發(fā)而產(chǎn)生。以這種方式分離的羧酸可以通過(guò)溶解在有機(jī)溶劑中，然后加入適當(dāng)?shù)膲A，隨后蒸發(fā)、析出或結(jié)晶而進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為另一種藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明化合物的制備方法的說(shuō)明如下所示。除非方案中另有說(shuō)明，變量具有與上述相同的含義。下面給出的實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方案。如下所述的合成中使用的合適的原料、結(jié)構(gòu)單元和試劑可從例如sigma-aldrich或acrosorganics購(gòu)得，或者可以通過(guò)文獻(xiàn)中描述的方法常規(guī)制備，例如在以下文獻(xiàn)中："march'sadvancedorganicchemistry:reactions,mechanisms,andstructure"，第五版，johnwiley&sons；或者t.eicher,s.hauptmann"thechemistryofheterocycles；structures,reactions,synthesisandapplication"，第2版wiley-vch2003；fieser等人的“fiesers′reagentsfororganicsynthesis”johnwiley&sons2000。

縮寫(xiě)列表

dmf二甲基甲酰胺

ncsn-氯琥珀酰亞胺

dcm二氯甲烷

thf四氫呋喃

pe石油醚

dmso二甲基亞砜

ibx鄰碘?；郊姿?/p>

dbu1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯

p-tsoh對(duì)甲苯磺酸

tea三乙胺

mscl甲磺酰氯

tfa三氟乙酸

diad偶氮二甲酸二異丙酯

dast(二甲基氨基)三氟化硫

tlc薄層色譜法

mecn乙腈

m-cpba間氯過(guò)氧苯甲酸

sem-cl2-(三甲基硅基)乙氧基甲基氯

tfaa三氟乙酸酐

acn乙腈

tms三甲基硅基

tempo2,2,6,6-四甲基哌啶基氧化物,游離基

pcc吡啶鎓過(guò)鉻酸鹽

hmpa六甲基磷酰胺

dba二亞芐基丙酮

xantphos4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽

edcl1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽

dmap4-二甲基氨基吡啶

通用合成1

實(shí)施例1c:2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈

步驟1：2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-腈(1a)

在微波中，將2-氯吡啶-4-腈(300mg,2.17mmol)溶解在dmf(3ml)中，然后用1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(0.42ml,3.25mmol)和碳酸鉀(600mg,4.33mmol)處理。將小瓶密封并在微波反應(yīng)器中在110℃加熱20分鐘。在冷卻至室溫之后，添加水，并將混合物用etoac萃取兩次，將有機(jī)層用鹽水洗滌4次，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾，然后濃縮。通過(guò)柱色譜法純化(isco25g0-40％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物(310mg,58％收率)。

步驟2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1b)

將2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-腈(310mg,1.26mmol)溶解在thf(4ml)中，添加4mhcl(4ml)，并將反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。添加水，然后將ph用1nnaoh調(diào)節(jié)至8。添加etoac，分離各相。將水相用etoac萃取一次，將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮(186mg,73％收率)。

步驟3,實(shí)施例1c：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1c)

將含有4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(200mg,0.42mmol)的烘箱干燥的反應(yīng)瓶密封，排空并用n2填充三次，然后經(jīng)注射器添加2-methf(3ml)。然后經(jīng)注射器在室溫滴加在thf(0.39ml)中的1.3m異丙基氯化鎂氯化鋰復(fù)合物，并將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加熱至50℃并保持1小時(shí)。添加另外的1.2當(dāng)量i-prmgcl，并且繼續(xù)在50℃加熱2小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，然后經(jīng)注射器緩慢添加至2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(85mg,0.42mmol)在thf(2ml)中的溶液，并使混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物用h2o和etoac淬滅，然后用1nhcl酸化。分離各相，將有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco25ggold硅膠0-100％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.27(d,j＝5.0hz,1h),7.66–7.46(m,4h),7.34(s,1h),6.88(dd,j＝5.0,1.1hz,1h),6.80–6.71(m,2h),5.27(s,1h),4.86(s,2h),4.24(d,j＝12.5hz,2h),3.31–3.20(m,2h),2.48–2.35(m,2h),1.50(d,j＝13.2hz,2h),1.26–1.03(m,5h).)。ms(m+h)：595.05。

實(shí)施例1：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(1)

在燒瓶中，將2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(40mg,0.07mmol)溶解在乙醇(1.5ml)中，用在水(0.67ml)中的4m氫氧化鈉處理，并在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加熱至80℃并保持3小時(shí)。將混合物冷卻，并在真空下除去etoh。將剩余溶液在冰浴中冷卻，用～2ml水處理，并將ph用1mhcl調(diào)節(jié)至～4。將混合物用etoac萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到產(chǎn)物(29mg,70％收率)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.39(s,1h),8.23(d,j＝5.1hz,1h),7.67–7.45(m,4h),7.23(d,j＝1.3hz,1h),6.97(dd,j＝5.1,1.1hz,1h),6.80–6.70(m,2h),5.24(s,1h),4.86(s,2h),4.20(d,j＝12.0hz,2h),3.31–3.20(m,2h),2.47–2.35(m,2h),1.51(d,j＝13.1hz,2h),1.28–1.01(m,5h)。ms(m+h)：614.05。

通用合成2

實(shí)施例2：2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸(2)

步驟1：2-(3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2a)

在配有磁性攪拌子和冷凝器的100ml燒瓶中，添加2-氯-吡啶-4-腈(1500mg,10.8mmol)、dmf(15ml)、3-吡咯烷醇(1.3ml,16.2mmol)和碳酸鉀(2300mg,21.7mmol)。將反應(yīng)加熱至60℃并保持3小時(shí)，然后部分濃縮除去dmf，用etoac和水稀釋，分離，用etoac萃取一次，用鹽水洗滌四次，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后在減壓下濃縮(1770mg,86％收率)。

步驟2：2-(3-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2b)

在配有磁性攪拌子的燒瓶中，將2-(3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(1770mg,9.35mmol)在二氯甲烷(90ml)中的溶液用分成四份的戴斯-馬丁過(guò)碘烷(4760mg,11.23mmol)處理，并將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)用硫代硫酸鈉溶液淬滅，用etoac稀釋并攪拌～15分鐘，然后用水處理，得到澄清溶液。分離各層，并將有機(jī)物先后用50％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)柱色譜法純化(isco40g硅膠,0-100％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物。

步驟3：2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(2c)

在配有磁性攪拌子的干燥反應(yīng)瓶中，在氮?dú)庀?，?-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(430mg,0.74mmol)溶解在2-methf(1.4ml)中。向其滴加在thf(1.5ml,1.9mmol)中的1.3mi-prmgcl-licl復(fù)合物，并將混合物攪拌2.5小時(shí)。將混合物在冰/水浴中冷卻并添加作為在2-methf(0.8ml)中的懸浮液的2-(3-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈。將混合物攪拌2小時(shí)，然后用水淬滅，用etoac稀釋，用1nhcl酸化，然后攪拌15分鐘。分離各層，將有機(jī)物先后用水和鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。使用isco40ggold硅膠0-60％etoac/己烷純化，得到產(chǎn)物(490mg,60％)。

步驟4,實(shí)施例2：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸(2)

在100ml燒瓶中，將2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-腈(430mg,0.739mmol)在乙醇(14ml)中的溶液用在水(7.4ml)中的4m氫氧化鈉處理，并在70℃攪拌2.5小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并在真空下除去etoh。將剩余溶液在冰浴中冷卻，用～2ml水處理，并用1mhcl將ph調(diào)節(jié)至～4。將混合物用etoac萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到產(chǎn)物(421mg,95％收率)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.32(s,1h),8.19(dd,j＝5.1,0.8hz,1h),7.66–7.47(m,4h),6.93(dd,j＝5.2,1.3hz,1h),6.89(d,j＝2.6hz,1h),6.84(s,1h),6.77(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.43(s,1h),4.90(s,2h),3.89–3.75(m,2h),3.65(d,j＝8.9hz,1h),3.58–3.45(m,1h),2.61(t,j＝10.5hz,1h),2.46–2.38(m,1h),2.30–2.15(m,1h),1.25–1.05(m,4h)。ms(m+h)：600.05。

然后對(duì)這種物質(zhì)實(shí)施手性拆分(sfcad-h,40％etoh)，得到單一異構(gòu)體：實(shí)施例2a和2b。

實(shí)施例2a：2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體1

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.30(s,1h),8.20(dd,j＝5.2,0.7hz,1h),7.67–7.46(m,5h),6.95(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.85(s,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.44(s,1h),4.92(s,2h),3.90–3.74(m,2h),3.71–3.65(m,1h),3.62–3.47(m,1h),2.64(q,j＝10.2,9.5hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.24(dd,j＝12.6,6.0hz,1h),1.26–1.03(m,4h)。ms(m+h)：600.12。

實(shí)施例2b：2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體2

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.34(s,1h),8.19(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.65–7.46(m,4h),6.94(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.84(d,j＝1.4hz,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.44(s,1h),4.91(s,2h),3.89–3.76(m,2h),3.75–3.60(m,1h),3.60–3.46(m,1h),2.72–2.55(m,1h),2.50–2.38(m,1h),2.30–2.18(m,1h),1.26–1.07(m,4h)。ms(m+h)：600.07

通用合成3

實(shí)施例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羥基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)

步驟1：2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3a)

向2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(2.6g,15.2mmol)在dmf(12.7ml)中的溶液添加1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(2.3ml,18.3mmol)、k2co3(4.2g,30.5mmol)。將混合物在n2氣氛下在65℃攪拌4小時(shí)。將所得溶液冷卻至室溫，添加h2o，用etoac萃取水溶液，將合并的有機(jī)物經(jīng)na2so4干燥并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco(24g硅膠柱)，使用100％己烷-1:1己烷/etoac的梯度)，得到化合物3a(220mg,5％收率)。

步驟2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3b)

遵循實(shí)施例1/步驟2中所述的操作，化合物3b由2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3a)以定量收率得到。

步驟3：2-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3c)

在經(jīng)n2吹洗的烘箱干燥的反應(yīng)瓶中添加在2-methf(1ml)中的(4-溴-3-氯苯氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(255mg,0.79mmol)。然后將在thf(0.92ml,1.2mmol)中的1.3m異丙基氯化鎂氯化鋰復(fù)合物經(jīng)注射器在室溫滴加，并將混合物攪拌3小時(shí)。緩慢添加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3b)在2-methf(1ml)中的溶液，并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將反應(yīng)用h2o淬滅，用etoac萃取，將有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco(12g硅膠柱)，使用100％己烷-7:3己烷/etoac的梯度)，得到化合物3c(124mg,30％收率)。

步驟4：2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3d)

在室溫向2-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3c)(124mg,0.26mmol)在2-methf(2ml)中的溶液添加在thf(0.3ml,0.29mmol)中的1mtbaf溶液，并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將混合物用水淬滅并用etoac萃取。將有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，并濃縮，得到標(biāo)題化合物(94mg)，其在后續(xù)步驟中直接使用而不經(jīng)進(jìn)一步純化。

步驟5：3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羥基-1-(4-(甲氧基羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)

在室溫將3,5-二氯-4-(4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(100mg,0.31mmol)(如wo2011/020615中所述制備)、2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸甲酯(3d)(125mg,0.34mmol)和k2co3(87mg,0.63mmol)在無(wú)水dmf(1.6ml)中合并。將混合物在氮?dú)庀录訜嶂?5℃并攪拌過(guò)夜。將所得溶液冷卻至室溫，用h2o淬滅并用etoac萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco(4g硅膠柱)，使用100％己烷-100％etoac的梯度)，得到化合物3e(202mg,55％收率)。

步驟6,實(shí)施例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羥基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)

在室溫向3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羥基-1-(4-(甲氧基羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)(111mg,0.18mmol)在thf(1.4ml)和h2o(0.2ml)中的溶液添加lioh·h2o(15mg,0.36mmol)。在攪拌16小時(shí)之后，添加h2o和二氯甲烷。添加1nhcl水溶液，將混合物酸化至ph＝3～4，然后將其用二氯甲烷萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。將固體用二氯甲烷研磨并干燥，得到化合物3(114mg,57％收率)。¹hnmr(300mhz,d6-dmso)δ13.34(s,1h),8.72(s,2h),8.24(d,j＝5.1hz,1h),7.66(d,j＝8.7hz,1h),7.24(s,1h),6.98(dd,j＝5.1,1.1hz,1h),6.90–6.77(m,2h),5.24(s,1h),4.95(s,2h),4.22(brd,j＝12.3hz,2h),3.45-3.26(m,2h),2.49–2.35(m,3h),1.55(brd,j＝13.1hz,2h),1.26–1.03(m,4h)。ms(esi+)m/z633.0(m+h)。

通用合成4

步驟1：4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯

向配有磁性攪拌棒和氮?dú)馊ǖ膱A底燒瓶添加4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(0.5g,1.06mmol)和thf(19ml)。將混合物在丙酮/液n2浴中冷卻至-78℃。滴加n-buli(1.6m己烷溶液，0.86ml,1.37mmol)，并將所得混合物在此溫度攪拌30分鐘。滴加在thf(5.3ml)中的4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg,1.06mmol)，并將反應(yīng)攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)淬滅，并溫?zé)嶂潦覝?。添加更多乙酸乙?170ml)，并將混合物用水(20mlx2)、鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。使殘留物經(jīng)過(guò)硅膠柱，得到希望的產(chǎn)物(478mg)。

步驟2：4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽

向配有磁性攪拌棒的圓底燒瓶添加4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(558mg,0.94mmol)和二氯甲烷(56ml)。添加hcl/二噁烷(4n,9.4ml,38mmol)，然后將混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。真空除去揮發(fā)物，得到產(chǎn)物(406mg)。

實(shí)施例4：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-4-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例2所述的操作合成，用降托品(2000mg,15.7mmol)替代作為起始材料。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.22(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.67–7.44(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.73(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.57(d,j＝2.6hz,1h),5.18(s,1h),4.80(s,2h),4.58(s,2h),2.66(dd,j＝14.2,4.0hz,2h),2.46–2.31(m,3h),1.94(d,j＝5.4hz,2h),1.45(d,j＝14.0hz,2h),1.20–0.98(m,4h)。ms(m+h)：640.00。

實(shí)施例5：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-4-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例4所述的操作使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧虾铣伞?sup>1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.22(dd,j＝5.1,0.7hz,1h),7.70–7.41(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5.1,1.3hz,1h),6.78(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.64(d,j＝2.6hz,1h),5.19(s,1h),4.84(s,2h),4.59(s,2h),2.67(dd,j＝14.1,4.0hz,2h),2.47–2.23(m,3h),1.98–1.91(m,2h),1.47(d,j＝14.1hz,2h),1.18–0.99(m,4h)。(m+h)：656.10

實(shí)施例6：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例2所述的操作合成，用2-溴-5-氰基吡啶(1000mg,5.46mmol)替代作為起始材料。

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.38(s,1h),8.65–8.58(m,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.67–7.46(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.50(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.75(s,1h),3.61–3.54(m,1h),2.64(q,j＝10.7,9.9hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.24(d,j＝9.7hz,1h),1.27–1.06(m,4h)。

(m+h)：600.20。然后對(duì)該物質(zhì)實(shí)施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到單一異構(gòu)體：實(shí)施例6a和實(shí)施例6b。

實(shí)施例6a：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體1

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.41(s,1h),8.61(d,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.75–7.42(m,4h),6.90(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.49(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.73(s,1h),3.62–3.52(m,1h),2.73–2.55(m,1h),2.50–2.38(m,1h),2.31–2.18(m,1h),1.25–1.06(m,4h)。(m+h)：600.17

實(shí)施例6b：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體2

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.38(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),7.90(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.67–7.48(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.49(d,j＝8.9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.88–3.69(m,1h),3.57(d,j＝9.2hz,1h),2.64(q,j＝10.3,9.8hz,1h),2.50–2.38(m,1h),2.26(s,1h),1.25–1.08(m,4h)。(m+h)：600.18。

實(shí)施例7：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

步驟1b：5-(3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(2ab)

在配有冷凝器的干燥三頸燒瓶中添加5-溴-3-氰基吡啶(560mg,3.06mmol)、碳酸銫(1994.03mg,6.12mmol)、pd(dba)3)(123.82mg,0.15mmol)，和xantphos(141.65mg,0.24mmol)，然后將燒瓶排空并用n2填充三次。經(jīng)注射器添加3-吡咯烷醇(0.32ml,3.98mmol)在1,4-二噁烷(6ml)中的溶液，并將混合物在100℃(油浴)加熱過(guò)夜。將混合物冷卻，用水和etoac處理，通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，并分離。將水層用鹽水洗滌，將有機(jī)物經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco40g硅膠0-100％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物(310mg,54％)。

步驟2：5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(7)

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例2所述的操作合成，使用可選的步驟1b得到物質(zhì)2ab。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.19(s,1h),8.33(d,j＝1.7hz,1h),8.12(d,j＝2.9hz,1h),7.67–7.46(m,4h),7.27(dd,j＝2.9,1.7hz,1h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.84(d,j＝10.5hz,1h),3.66–3.41(m,3h),2.71–2.53(m,1h),2.51–2.38(m,1h),2.31–2.19(m,1h),1.26–1.06(m,4h)。(m+h)：600.21。然后對(duì)該物質(zhì)實(shí)施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到單一異構(gòu)體：實(shí)施例7a和實(shí)施例7b。

實(shí)施例7a：5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體1

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.31(d,j＝1.5hz,1h),8.10(d,j＝2.8hz,1h),7.70–7.45(m,4h),7.24(s,1h),6.88(d,j＝2.5hz,1h),6.76(dd,j＝8.6,2.7hz,1h),5.47(s,1h),4.89(s,2h),3.81(d,j＝10.5hz,1h),3.63–3.38(m,3h),2.69–2.55(m,1h),2.45–2.37(m,1h),2.29–2.16(m,1h),1.43–0.96(m,4h)。(m+h)：600.22。

實(shí)施例7b：5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體2

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.31(d,j＝1.5hz,1h),8.10(d,j＝2.8hz,1h),7.64–7.45(m,4h),7.28–7.20(m,1h),6.88(d,j＝2.6hz,1h),6.76(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.47(s,1h),4.89(s,2h),3.81(d,j＝10.5hz,1h),3.63–3.38(m,3h),2.68–2.55(m,1h),2.50–2.35(m,1h),2.29–2.16(m,1h),1.23–0.96(m,4h)。(m+h)：600.22。

實(shí)施例8：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例12所述的操作使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧虾铣伞?sup>1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.14(s,1h),8.32(d,j＝1.7hz,1h),8.11(d,j＝2.9hz,1h),7.64–7.22(m,6h),7.20(t,j＝76.5,73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.81(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.49(s,1h),4.95(s,2h),3.83(d,j＝10.5hz,1h),3.69–3.40(m,3h),2.78–2.53(m,1h),2.45–2.31(m,1h),2.31–2.16(m,1h),1.26–0.95(m,4h)。(m+h)：598.31。然后對(duì)該物質(zhì)實(shí)施手性拆分(sfcad-h,30％meoh/氨)，得到單一異構(gòu)體：實(shí)施例8a和實(shí)施例8b。

實(shí)施例8a：5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體1

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.30(s,1h),8.05(s,1h),7.69–7.51(m,2h),7.52–7.41(m,1h),7.40–7.22(m,3h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.48(s,1h),4.95(s,2h),3.82(d,j＝10.4hz,1h),3.64–3.42(m,3h),2.70–2.56(m,1h),2.46–2.31(m,1h),2.28–2.17(m,1h),1.41–0.93(m,4h)。(m+h)：598.33。

實(shí)施例8b：5-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體2

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.31(s,1h),8.07(s,1h),7.63–7.39(m,3h),7.39–7.28(m,2h),7.28–7.22(m,1h),7.20(t,j＝73.2hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.49(s,1h),4.95(s,2h),3.82(d,j＝10.4hz,1h),3.64–3.42(m,3h),2.70–2.56(m,1h),2.46–2.31(m,1h),2.31–2.07(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：598.33。

實(shí)施例9：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例2所述的操作使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧虾铣伞?sup>1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.35(s,1h),8.60(dd,j＝2.4,0.7hz,1h),7.89(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.2hz,0h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.48(d,j＝9.0hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.4hz,1h),3.79–3.36(m,2h),2.68–2.58(m,1h),2.46–2.30(m,1h),2.24(t,j＝1.8hz,1h),2.32–2.15(m,1h),1.24–0.97(m,4h)。(m+h)：598.33。然后對(duì)該物質(zhì)實(shí)施手性拆分(chiralpakad-h；庚烷:ipa)，得到單一異構(gòu)體：實(shí)施例9a和實(shí)施例9b。

實(shí)施例9a：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體1

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.32(s,1h,w),8.59(d,1h),7.88(dd,j＝8.9,2.3hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.7hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.47(d,j＝8.9hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.1hz,1h),3.75–3.68(m,1h),3.60–3.51(m,1h),2.68–2.51(m,1h),2.49–2.30(m,1h),2.31–2.16(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：598.37。

實(shí)施例9b：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸,對(duì)映異構(gòu)體2

¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.33(s,1h,w),8.59(d,j＝2.3hz,1h),7.88(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),7.63–7.41(m,3h),7.39–7.27(m,2h),7.20(t,j＝73.5hz,1h),6.92(d,j＝2.6hz,1h),6.80(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.47(d,j＝8.9hz,1h),5.49(s,1h),4.94(s,2h),3.82(d,j＝11.0hz,1h),3.74–3.68(m,1h),3.61–3.51(m,1h),2.73–2.55(m,1h),2.46–2.30(m,1h),2.32–2.13(m,1h),1.24–1.00(m,4h)。(m+h)：597.96

實(shí)施例10：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例1所述的操作，使用2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-腈(120mg,0.58mmol)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.81(s,1h,w),7.67–7.45(m,5h),7.25(s,1h),6.81–6.72(m,2h),5.29(s,1h),4.86(s,2h),4.26(d,j＝13.0hz,2h),3.54–3.32(m,2h),2.54–2.34(m,2h),1.57(d,j＝13.2hz,2h),1.25–1.03(m,5h)。ms(m+h)：682.03。

實(shí)施例11：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例1所述的操作，使用2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-腈作為起始材料合成。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ7.70–7.43(m,6h),7.26(d,j＝0.7hz,1h),6.87–6.75(m,2h),5.28(s,1h),4.90(s,2h),4.23(d,j＝13.0hz,2h),3.47–3.30(m,2h),2.45–2.30(m,2h),1.56(d,j＝13.2hz,2h),1.25–1.01(m,5h)。ms(m+h)：698.09。

實(shí)施例12：3-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例1所述的操作，使用3,5-二氟苯甲腈作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.07(s,1h),7.70–7.44(m,5h),7.30(dd,j＝2.4,1.3hz,1h),7.03(dt,j＝12.7,2.4hz,1h),6.93(ddd,j＝8.8,2.3,1.1hz,1h),6.88–6.76(m,2h),5.20(s,1h),4.90(s,2h),3.68(d,j＝12.6hz,2h),3.28–3.15(m,2h),2.59–2.48(m,1h),2.38(tt,j＝8.1,5.2hz,1h),1.56(d,j＝13.1hz,2h),1.20–1.01(m,4h)。ms(m+h)：647.16。

實(shí)施例13：3-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例1所述的操作，使用3,5-二氟苯甲腈作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.07(s,1h),7.66–7.44(m,5h),7.30(dd,j＝2.4,1.3hz,1h),7.02(dt,j＝12.6,2.4hz,1h),6.93(ddd,j＝8.9,2.3,1.2hz,1h),6.81–6.70(m,1h),5.19(s,1h),4.87(s,2h),3.67(d,j＝12.0hz,2h),3.22(t,j＝11.9hz,2h),2.50(d,j＝6.1hz,1h),2.46–2.34(m,2h),1.55(d,j＝13.1hz,2h),1.27–1.03(m,5h)。ms(m+h)：631.06

實(shí)施例14：5-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸

步驟1ab：5-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈(1ab)

在配有磁性攪拌子和septum帽的干燥小瓶中添加5-溴-3-氰基吡啶(500mg,2.73mmol)、碳酸銫(1780.38mg,5.46mmol)、pd(dba)3)(110.56mg,0.14mmol)和xantphos(126.47mg,0.22mmol)，并且將所述瓶密封，并排空和用n2填充三次。經(jīng)注射器添加1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(0.46ml,3.55mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的溶液，并將混合物在110℃(油浴)加熱過(guò)夜。將混合物冷卻，然后用水和etoac處理，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，并分離。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco40g硅膠,0-100％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物(605mg,92％)。

步驟2：5-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例1所述的操作合成，使用可選的步驟1ab得到物質(zhì)1ab。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.41(s,1h),8.62(d,j＝2.4hz,1h),7.90(dd,j＝9.0,2.4hz,1h),7.68–7.46(m,4h),6.89(d,j＝9.1hz,1h),6.81–6.72(m,2h),5.29(s,1h),4.87(s,2h),4.34(d,j＝12.7hz,2h),3.40–3.26(m,2h),2.48–2.35(m,3h),1.54(d,j＝13.2hz,2h),1.26–1.04(m,4h)。ms(m+h)：614.12。

實(shí)施例15：4-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯甲酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例14所述的操作，使用4-碘苯甲腈(100mg,0.44mmol)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.19(s,1h),7.75(d,j＝8.9hz,2h),7.67–7.47(m,4h),6.97(d,j＝9.1hz,2h),6.78(s,1h),5.22(s,1h),4.88(s,2h),3.79(d,j＝13.0hz,2h),3.31–3.20(m,3h),2.55(s,0h),2.49–2.35(m,1h),1.54(d,j＝13.1hz,2h),1.26–1.04(m,4h)。ms(m+h)：613.32。

實(shí)施例16：6-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例2所述的操作，使用6-溴吡啶-3-腈(600mg,3.28mmol)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.27(s,1h),8.52(d,j＝2.9hz,1h),8.42(d,j＝1.6hz,1h),7.73–7.47(m,6h),6.82–6.71(m,2h),5.21(s,1h),4.88(s,2h),3.72(d,j＝12.5hz,2h),3.27–3.16(m,3h),2.63–2.51(m,1h),2.49–2.36(m,1h),1.57(d,j＝13.1hz,2h),1.27–1.04(m,4h)。ms(m+h)：614.15。

實(shí)施例17：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-甲酰胺

向?qū)嵤├?(12mg,0.02mmol)在dmf(0.2ml)中的溶液添加0.5m氨/二噁烷(0.2ml,0.098mmol)，然后添加bop(17mg,0.39mmol)和diea(0.01ml,0.06mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用etoac和水處理，分離，并用etoac萃取一次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(iscoc18反相,0-70％水/乙腈/0.1％tfa)，得到希望的產(chǎn)物(5.5mg,46％收率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.34(d,j＝5.1hz,1h),8.23(s,1h),7.85–7.63(m,5h),7.39(s,1h),7.11(d,j＝5.3hz,1h),6.97–6.88(m,2h),5.38(s,1h),5.04(s,2h),4.39(d,j＝12.6hz,2h),3.53–3.36(m,3h),2.65–2.45(m,2h),1.69(d,j＝13.2hz,2h),1.37–1.21(m,4h)。ms(m+h)：613.56。

實(shí)施例18：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲酰胺

向?qū)嵤├?(40mg,0.067mmol)在dmf(0.6ml)中的溶液添加0.5m氨/二噁烷(0.666ml,0.333mmol)，然后添加bop(59mg,0.133mmol)和diea(0.012ml,0.067mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用etoac和水處理，分離，并用etoac萃取一次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(iscoc18反相,0-70％水/乙腈/0.1％tfa)，得到產(chǎn)物(25mg,62％收率)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.31(d,j＝5.2hz,1h),8.22(s,1h),7.84–7.65(m,5h),7.12–7.03(m,2h),7.03–6.90(m,2h),5.61(s,1h),5.08(s,2h),3.97(d,j＝11.2hz,2h),3.91–3.78(m,1h),3.79–3.63(m,1h),2.81(q,j＝10.7,9.5hz,1h),2.64–2.50(m,1h),2.39(dd,j＝12.7,6.5hz,1h),1.44–1.23(m,4h)。ms(m+h)：599.19。

實(shí)施例19：外消旋2-(2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-酰氨基)乙烷-1-磺酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例18所述的操作，使用牛磺酸(12.5mg,0.1mmol)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.28(d,j＝6.2hz,1h),7.84–7.65(m,4h),7.39(s,1h),7.21(d,j＝6.2hz,1h),7.10(d,j＝2.6hz,1h),6.98(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),5.86(s,1h),5.10(s,2h),4.16–4.09(m,2h),4.06–3.91(m,1h),3.96–3.74(m,2h),3.66–3.36(m,2h),2.90–2.76(m,3h),2.57–2.50(m,1h),1.55–1.08(m,5h)。ms(m+h)：707.20。

實(shí)施例20：外消旋(2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲?；?甘氨酸乙酯

向?qū)嵤├?(40mg,0.07mmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液添加甘氨酸乙酯鹽酸鹽(10.22mg,0.07mmol)、edci(11.37mg,0.07mmol)、hobt(9.89mg,0.07mmol)和diea(0.02ml,0.13mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用etoac和水處理，分離，并用etoac萃取一次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco12ggold硅膠,0-100％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物(46mg)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.21(t,j＝5.9hz,1h),8.36(d,j＝5.2hz,1h),7.85–7.66(m,4h),7.13–7.04(m,2h),7.04–6.92(m,2h),5.64(s,1h),5.10(s,2h),4.29(q,j＝7.1hz,2h),4.16(d,j＝5.8hz,2h),4.02(s,2h),3.90–3.84(m,1h),3.81–3.68(m,1h),2.82(t,j＝10.4hz,1h),2.62(dd,j＝8.0,5.1hz,1h),2.41(dd,j＝12.3,6.2hz,1h),1.51–1.23(m,7h)。ms(m+h)：685.33。

實(shí)施例21：外消旋(2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-4-甲?；?甘氨酸

向含有實(shí)施例20(37mg,0.05mmol)和thf(0.3ml)的小瓶添加1m氫氧化鋰(0.16ml,0.16mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。添加etoac和水，并用1mhcl將ph調(diào)節(jié)至～6。分離各相，將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮和在真空下干燥(29mg,82％)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.65(s,1h,w),8.89(t,j＝5.9hz,1h),8.15(d,j＝5.2hz,1h),7.66–7.47(m,5h),6.93–6.86(m,2h),6.82(s,1h),6.78(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.45(s,1h),4.91(s,2h),3.89(d,j＝5.7hz,2h),3.81(d,j＝10.9hz,2h),3.72–3.65(m,1h),3.62–3.47(m,1h),2.70–2.56(m,1h),2.49–2.37(m,1h),2.26–2.15(m,1h),1.20–1.05(m,4h)。ms(m+h)：657.25。

實(shí)施例22f和22g：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)戊基)苯甲酸

步驟1：3-(3-溴苯基)環(huán)戊烷-1-酮(22a)

在n2下，向干燥三頸燒瓶添加1-溴-3-碘苯(0.44ml,2.56mmol)在thf(4ml)中的溶液，然后將混合物在干冰/乙腈浴中冷卻至-40℃。然后滴加在2-methf(1.01ml)中的2.9m異丙基溴化鎂，并將所得混合物在-40℃攪拌1小時(shí)。向單獨(dú)燒瓶添加氯化鋰(21mg,0.49mmol)并放置在真空下，然后用噴燈灼燒。在冷卻至室溫后，添加碘化銅(i)(46mg,0.24mmol)，并將燒瓶排空和用n2填充三次。然后經(jīng)注射器依次添加thf(6ml)、氯化三甲基硅烷(0.31ml,2.44mmol)和環(huán)戊-2-烯酮(0.2ml,2.44mmol)，由此形成澄清黃色溶液。然后將所得溶液經(jīng)注射器滴加至第一燒瓶，將反應(yīng)混合物在-40℃再攪拌1小時(shí)，然后用nh4cl水溶液淬滅，用乙醚稀釋，然后用1nhcl酸化至ph1并攪拌0.5小時(shí)，同時(shí)溫?zé)嶂潦覝?。分離各相，將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物通過(guò)快速色譜法純化(isco,40ggold,etoac/己烷)，得到產(chǎn)物。

步驟2：3-(3-溴苯基)-1-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)環(huán)戊烷-1-醇(22b),(22c)

該物質(zhì)遵循通用合成2步驟3中所述的通用操作合成。通過(guò)柱色譜法純化(isco24ggold硅膠0-100％etoac/己烷)，得到兩個(gè)異構(gòu)體：(22b)和(22c)。

步驟3：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)戊基)苯甲腈(22d)

在微波小瓶中添加(22b)(160mg,0.25mmol)、氰化鋅(36mg,0.3mmol)、pd2(dba)3(23mg,0.03mmol)和xantphos(15mg,0.03mmol)。將小瓶密封，然后排空并用n2填充三次，然后添加dmf(10ml)。將反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中在100℃輻射30分鐘。將混合物冷卻至室溫，在減壓下濃縮除去大部分dmf，然后用etoac和水稀釋，并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。分離各相，將有機(jī)層用鹽水洗滌三次，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮。通過(guò)色譜法純化(isco12ggold硅膠,0-70％etoac/己烷)，得到產(chǎn)物(22d)(66mg,45％收率)。

步驟4,實(shí)施例22f：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)戊基)苯甲酸(22f)

該化合物根據(jù)通用合成2步驟4中所述的操作，使用(22d)(55mg,0.095mmol)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),7.92(t,j＝1.8hz,1h),7.74(dt,j＝7.6,1.4hz,1h),7.65–7.47(m,5h),7.40(t,j＝7.7hz,1h),6.85(d,j＝2.6hz,1h),6.74(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),5.15(s,1h),4.88(s,2h),3.52–3.38(m,1h),2.83–2.71(m,1h),2.49–2.30(m,1h),2.14–1.75(m,3h),1.36–1.04(m,4h),0.89–0.75(m,2h)。ms(m+h)：580.14。

實(shí)施例22g,3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)戊基)苯甲酸(22g)

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例22f所示的操作，使用(22c)作為起始材料合成。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.90(s,1h),7.86(t,1h),7.76(dt,j＝7.6,1.4hz,1h),7.67–7.48(m,5h),7.41(t,j＝7.6hz,2h),6.85(d,j＝2.6hz,1h),6.74(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.13(s,1h),4.88(s,2h),3.63–3.56(m,1h),2.47–2.36(m,2h),2.29(dd,j＝8.3,4.3hz,1h),2.12–1.98(m,2h),1.93–1.77(m,1h),1.27–1.02(m,5h)。ms(m+h)：580.21。

實(shí)施例23：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)噻唑-5-羧酸

實(shí)施例23根據(jù)通用操作2中所述的操作制備，以提供標(biāo)題化合物(105mg,86％收率)¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.31(s,1h),8.32(s,1h),7.32–7.65(m,5h),7.10(t,j＝1.1hz,1h),6.91(dd,j＝5,1.2hz,1h),6.73(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),6.57(d,j＝2.6hz,1h),5.22(s,1h),4.80(s,2h),4.58(s,2h),2.66(dd,j＝14.2,4.0hz,2h),2.46–2.32(m,3h),1.94(d,j＝5.4hz,2h),1.45(d,j＝14.0hz,2h),1.20–0.98(m,4h)；(m+h)：620.2。

實(shí)施例24：2-(4-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

步驟1：4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(24a)

遵循實(shí)施例3/步驟5中所述的操作，化合物24a通過(guò)合并4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(如wo2013/007387中所述制備)和4-溴-3-甲基苯酚以91％收率得到。

步驟2：2-(4-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(24b)

將n-buli(1.6m己烷溶液，0.18ml,0.29mmol)緩慢添加至4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(24a)(100mg,0.22mmol)在thf(4ml)中的冷卻(-78℃)溶液。在10分鐘之后，添加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(44mg,0.22mmol)在thf(1.1ml)中的溶液。在另外20分鐘之后，將反應(yīng)混合物用h2o淬滅，用etoac萃取，將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮。殘留物通過(guò)色譜法純化(isco(4g硅膠柱)，使用100％己烷-2:1己烷/etoac的梯度)，得到化合物24b(130mg,43％收率)。

步驟3,實(shí)施例24：2-(4-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(24)

遵循實(shí)施例1/步驟4中所述的操作，實(shí)施例24由2-(4-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(24b)以81％收率得到。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.37(d,j＝5.3hz,1h),7.83–7.64(m,3h),7.47(s,1h),7.39–7.29(m,1h),7.17(d,j＝5.4hz,1h),6.71(dd,j＝4.6,2.1hz,2h),4.97(s,2h),4.33(d,j＝12.7hz,2h),3.67–3.52(m,2h),2.60(s,3h),2.59–2.40(m,1h),2.05(s,4h),1.3601.24(m,4h)。ms(esi+)m/z596.1(m+h)。

實(shí)施例25：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(25a)

遵循實(shí)施例3/步驟5中所述的操作，化合物25a通過(guò)組合4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑(如wo2011/020615中所述制備)和2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以74％收率得到。

步驟2,實(shí)施例25：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(25)

遵循實(shí)施例1/步驟4中所述的操作，實(shí)施例25由2-(4-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以81％收率得到。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.36(s,1h),8.80(s,1h),8.24(d,j＝5.1hz,1h),7.64(d,j＝8.6hz,1h),7.24(s,1h),6.98(dd,j＝5.0,1.0hz,1h),6.81–6.69(m,2h),5.25(s,1h),4.96(s,2h),4.22(d,j＝12.7hz,2h),3.37-3.21(m,2h),2.52-2.40(m,2h),1.54(d,j＝13.1hz,2h),1.22-109(m,4h)。ms(esi+)m/z616.9(m+h)。

實(shí)施例26：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸

步驟1：2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈(26a)

遵循實(shí)施例1/步驟1中所述的操作，化合物26a通過(guò)組合2-氯吡啶-3-腈與1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷以94％收率得到。

步驟2：2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26b)

遵循實(shí)施例1/步驟2中所述的操作，化合物26b由2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)吡啶-3-腈以85％收率得到。

步驟3：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26c)

遵循實(shí)施例1/步驟3中所述的操作，化合物26c由2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-腈(26b)以61％收率得到。

步驟4,實(shí)施例26：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-3-羧酸(26)

將2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基-哌啶-1-基)吡啶-3-腈(100mg,0.17mmol)、在水(0.29ml)中的10m氫氧化鈉和乙醇(0.8ml)在微波小瓶中合并，并在微波反應(yīng)器中在120℃加熱15分鐘。冷卻混合物，并用1mhcl水溶液將ph調(diào)節(jié)至5。將所得混合物過(guò)濾，并將不溶的固體用水和et2o洗滌，并真空干燥，得到實(shí)施例26(23mg,22％)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.24(dd,j＝4.8,2.0hz,1h),7.98(s,1h),7.77(dd,j＝7.4,2.0hz,1h),7.68–7.48(m,6h),6.94–6.72(m,3h),5.14(s,1h),4.89(s,3h),3.57(d,j＝12.6hz,2h),3.37–3.20(m,1h),2.69–2.55(m,2h),2.50-2.40(m,1h),1.53(d,j＝12.9hz,2h),1.27–1.00(m,4h)。ms(esi+)m/z615.2(m+h)。

實(shí)施例27：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

步驟1：1-疊氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a)

在0℃將濃鹽酸(7.9ml)添加至2-(三氟甲氧基)苯胺(1.1ml,7.9mmol)在etoac(26ml)中的溶液。在10分鐘之后，歷時(shí)5分鐘緩慢添加亞硝酸鈉(1.6g,23.7mmol)溶解在水(4.6ml)中的溶液。將混合物攪拌30分鐘，然后歷時(shí)5分鐘緩慢地用疊氮化鈉(1.5g,23.7mmol)在水(5.3ml)中的溶液處理。將反應(yīng)攪拌1小時(shí)，然后用磷酸鹽緩沖液(ph7.4,50ml)處理。將混合物用etoac萃取，將有機(jī)物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮，得到化合物27a。

步驟2：(4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)

將1-疊氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a,2.0g,9.8mmol)和3-環(huán)丙基丙-2-炔-1-醇(1.2ml,9.8mmol)在甲苯(20ml)中的溶液在110℃在氮?dú)鈿夥障聰嚢?。?6h之后，將溶液冷卻至室溫，并添加水和etoac。將混合物分配，將有機(jī)物用etoac萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮。殘留物通過(guò)色譜法純化(isco,24g硅膠柱,使用100％己烷-100％etoac的梯度)，得到化合物27b(230mg,8％收率)，其為極性較小的異構(gòu)體。h1和h2與h3的noe關(guān)聯(lián)證實(shí)了化合物27b的結(jié)構(gòu)。

步驟4：5-(氯甲基)-4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑(27c)

在室溫向(4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)(52mg,0.17mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液添加亞硫酰氯(0.038μl,0.52mmol)。將混合物加熱至回流并保持15分鐘，冷卻至室溫，然后真空濃縮。添加另外的二氯甲烷(5ml)，并將混合物再次濃縮。將該工藝重復(fù)第三次以除去過(guò)量亞硫酰氯。粗殘留物用于后續(xù)步驟中而不進(jìn)行任何進(jìn)一步純化。

步驟5：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(27d)

遵循實(shí)施例3/步驟5中所述的操作，化合物27d通過(guò)組合2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈和2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈以75％收率得到。

步驟6,實(shí)施例27：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸(27)

遵循實(shí)施例1/步驟4中所述的操作，實(shí)施例27由2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(27d)以62％收率得到。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.35(s,1h),8.22(d,j＝5.0hz,1h),7.77–7.51(m,5h),7.23(s,1h),6.97(d,j＝5.0hz,1h),6.86–6.74(m,2h),5.24(s,1h),5.12(s,2h),4.20(d,j＝12.7hz,2h),3.24(s,1h),2.42(d,j＝9.9hz,2h),1.97(s,1h),1.52(d,j＝13.2hz,2h),1.16(t,j＝7.1hz,1h),1.05–0.85(m,4h)。ms(esi+)m/z616.9(m+h)。

實(shí)施例28：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸

步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-腈

向配有磁性攪拌棒的密封管添加4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽(通用合成4，步驟2)(100mg,0.19mmol)、2-氯苯并[d]噻唑-6-腈(54.1mg,0.23mmol)、碳酸鉀(234mg,3.8mmol)和dmf(2ml)。將所述管密封，并將混合物在80℃加熱40分鐘。添加水(20ml)，并將所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，將合并的有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(37mg,30％收率)。

2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸

向配有磁性攪拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-腈(37mg,0.06mmol)、etoh(0.6ml)和30％naoh(0.36ml,2.73mmol)。密封所述管，并將混合物在80℃加熱過(guò)夜。在將ph用4nhcl調(diào)節(jié)至～4之后，添加乙酸乙酯(200ml)。將混合物用水(10mlx2)、鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(7.1mg,19％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.36(d,j＝1.6hz,1h),7.96(d,j＝11.2hz,1h),7.85(dd,j＝11.6z,j＝2.6hz,1h),7.64(m,1h),7.46(m,1h),7.23(m,1h),6.95(dd,j＝10.4hz,j＝2.2hz,1h),6.86(m,1h),6.72(m,1h),4.89(m,2h),4.02(dm,j＝13.2hz,2h),2.43(m,1h),1.70(m,2h),1.09-1.23(m,6h)ppm；msm/z670.19[m+h]⁺。

實(shí)施例29：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-羧酸

步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-腈

向配有磁性攪拌棒的密封管添加4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽(通用合成4步驟2)(95mg,0.18mmol)、2-氯-6-甲氧基吡啶-4-腈(36.2mg,0.22mmol)、碳酸鉀(222mg,3.6mmol)和dmf(2ml)。密封所述管，并將混合物在80℃加熱過(guò)夜。添加水(20ml)，將所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，將合并的有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(97mg,86％收率)。

步驟2：2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-羧酸(實(shí)施例29)

向配有磁性攪拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基吡啶-4-腈(90mg,0.14mmol)、etoh(2.0ml)、30％naoh(0.92ml,6.9mmol)。密封所述管，并將混合物在80℃加熱6小時(shí)。在將ph用4nhcl調(diào)節(jié)至～4之后，添加乙酸乙酯(200ml)。將混合物用水(10mlx2)、鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(4.6mg,5％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.96(dm,j＝11.2hz,1h),7.61(m,2h),7.22(m,1h),6.94(m,1h),6.69-6.84(m,2h),6.37(s,1h),5.76(s,1h),4.88(m,2h),4.21(m,2h),3.81(s,3h),2.44(m,1h),1.56(m,2h),1.12-1.23(m,6h)ppm；msm/z644.13[m+h]⁺。

實(shí)施例30：1-(4-(1h-四唑-5-基)吡啶-2-基)-4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇

向配有磁性攪拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(實(shí)施例1c,40mg,0.07mmol)、疊氮化鈉(56.7mg,0.87mmol)、三乙胺鹽酸鹽(277mg,2.01mmol)和甲苯(2ml)。將所述管密封并在115℃加熱8小時(shí)。出現(xiàn)一些析出。將析出物過(guò)濾并用乙酸乙酯(5mlx4)洗滌，將收集的可溶相用更多乙酸乙酯(180ml)處理，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(3.8mg,9％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21(d,j＝6.4hz,1h),7.97(d,j＝12.4hz,1h),7.63(m,1h),7.60(m,1h),7.43(m,1h),7.19(m,2h),6.91(d,j＝9.6hz,1h),6.85(m,1h),6.69(m,1h),5.57(s,1h),4.79-4.90(m,2h),4.25(dm,j＝12.1hz,2h),2.42(m,1h),1.57(m,2h),1.11-1.24(m,6h)ppm；msm/z637.91[m+h]⁺。

實(shí)施例31：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

步驟1：5-(氯甲基)-4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑

向配有磁性攪拌棒的圓底燒瓶添加(4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲醇(200mg,0.71mmol)、dcm(3.5ml)。在添加亞硫酰氯(588mg,4.94mmol)后，將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物真空濃縮，得到粗產(chǎn)物(212.9mg)，其直接用于后續(xù)步驟中。

步驟2：5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑

向配有磁性攪拌棒的圓底燒瓶添加5-(氯甲基)-4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑(212.9mg,0.71mmol)、4-溴-3-氯苯酚(189.8mg,0.92mmol)、碳酸鉀(617.3mg,4.47mmol)、nai(183.6,1.23mmol)和dmf(4.0ml)。將混合物在60℃加熱3.5小時(shí)。添加水(20ml)，并將所得混合物用etoac(50mlx3)萃取，將合并的有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。硅膠柱色譜法得到希望的產(chǎn)物(388mg)。

步驟3：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈

向配有磁性攪拌棒和氮?dú)馊ǖ膱A底燒瓶添加5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑(100mg,0.21mmol)和thf(3.9ml)。將混合物在丙酮/液n2浴中冷卻至-78℃。滴加n-buli(1.6m己烷溶液，0.17ml,0.28mmol)，并將所得混合物在此溫度攪拌30分鐘。滴加2-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-4-腈(1b,42.6mg,0.21mmol)在thf(1.0ml)中的溶液。30分鐘后，將反應(yīng)混合物用水(10ml)和乙酸乙酯(30ml)淬滅，并溫?zé)嶂潦覝亍Ｌ砑痈嘁宜嵋阴?170ml)，將混合物用水(20mlx2)、鹽水(20ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。使殘留物經(jīng)過(guò)硅膠柱，得到希望的產(chǎn)物(14mg,11％收率)。

步驟4,實(shí)施例31：2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

向配有磁性攪拌棒的密封管添加2-(4-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-腈(14mg,0.02mmol)、etoh(0.6ml)和30％naoh(0.15ml,1.13mmol)。密封所述管，并將混合物在80℃加熱1小時(shí)。在將混合物的ph用4nhcl調(diào)節(jié)至～4之后，出現(xiàn)一些析出。將析出物過(guò)濾并用冷水(1mlx3)洗滌和在真空下干燥，得到希望的產(chǎn)物(2.4mg,17％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.4(寬單峰,1h),8.24(d,j＝6.0hz,1h),7.95(d,j＝11.6hz,1h),7.65(d,j＝11.6hz,1h),7.42(s,1h),7.26(s,1h),7.22(m,1h),6.96(m,2h),6.86(s,1h),6.71(d,j＝11.2hz,1h),5.61(s,1h),5.00(m,1h),4.85(m,1h),4.23(d,j＝12.4hz,2h),3.16(s,2h),1.86(m,1h),1.52(m,2h),1.22(s,1h),0.91(m,2h),0.63(m,2h)ppm；msm/z613.3[m+h]⁺。

實(shí)施例32：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基哌啶-1-基)吡啶-4-羧酸

實(shí)施例32根據(jù)通用操作2中所述的操作制備，以提供外消旋標(biāo)題化合物(18mg,35％)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)δ13.28(s,1h),8.25–8.48(m,1h),7.80(m,1h),7.44–7.68(m,4h),6.91(d,j＝2.6hz,1h),6.79(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.51(d,j＝9hz,1h),5.50(s,1h),4.92(s,2h),3.83(d,j＝11.3hz,1h),3.75(s,1h),3.51–3.58(m,1h),2.64(q,j＝10.7,9.9hz,1h),2.20–2.38(m,2h),2.24(d,j＝9.1hz,2h),1.27–1.06(m,4h)；(m+h)：614.3。

實(shí)施例33：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

步驟1：2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(33a)

在0℃向2-(3-(2,6-二氯苯基)-4-(羥基甲基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(6.8g,226mmol)在二氯甲烷(120ml)中的溶液添加socl2(17.2ml,237mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，用飽和naco3水溶液淬滅并用etoac(3x150ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，濃縮并通過(guò)柱色譜法純化(pe/etoac＝30:1)，得到2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇33a。¹h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ7.47-7.37(m,3h),4.51(s,2h),2.43(s,1h),1.75(s,6h)。

步驟2：4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑(33b)

向2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(33a,2.80g,9.1mmol)在二氯甲烷(80ml)中的溶液添加dast(1.5ml,11.4mmol)。將混合物在0℃攪拌1.5小時(shí)，用飽和nahco3水溶液淬滅并用etoac(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，濃縮并通過(guò)柱色譜法純化(pe/etoac＝30:1)，得到4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑33b。¹h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ7.47-7.37(m,3h),4.43(s,2h),1.87(d,j＝22.2hz,6h)。ms(esi+)m/z321.9(m+h)。

步驟3：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(33c)

在室溫向6-(3-(2-氯-4-羥基苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(100mg,0.32mmol)和4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑(33b,112mg,0.35mmol)在dmf(10ml)中的溶液添加k2co3(48mg,0.35mmol)。將混合物在70℃攪拌過(guò)夜，用水(30ml)淬滅并用etoac(3x50ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(100ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥并真空濃縮，得到粗6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈33c(191mg)ms(esi+)m/z600.9(m+h)。

步驟4,實(shí)施例33：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(33)

在室溫向6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-腈(33c,191mg,0.32mmol)在etoh(10ml)和水(5ml)中的溶液添加koh(179mg,3.2mmol)。將反應(yīng)在回流下攪拌過(guò)夜，真空濃縮并用1nhcl酸化至ph＝6，過(guò)濾并通過(guò)制備性hplc純化，得到外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸33(34mg,17％)。¹hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.69(d,j＝1.8hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,8.7hz,1h),7.56-7.45(m,4h),6.77(d,j＝2.4hz,1h),6.71(dd,j＝2.6,9.0hz,1h),6.53(d,j＝9.0hz,1h),4.99(s,2h),4.04-3.95(m,2h),3.79-3.70(m,2h),2.85-2.77(m,1h),2.37-2.31(m,1h),1.88(d,j＝22.2hz,6h)。ms(esi+)m/z620.1(m+h)。

實(shí)施例34：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-羥基丙-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例33所述的操作，使用2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇33a作為起始材料合成。¹hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,9.0hz,1h),7.55-7.44(m,4h),6.78(d,j＝2.4hz,1h),6.71(dd,j＝2.4,9.0hz,1h),6.55(d,j＝9.0hz,1h),5.14(s,2h),4.06-3.94(m,2h),3.78-3.70(m,2h),2.85-2.77(m,1h),2.37-2.31(m,1h),1.69(s,6h)。ms(esi+)m/z618.0(m+h)。

實(shí)施例35：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-環(huán)丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例33所述的操作，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧虾铣伞?sup>1hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.05(dd,j＝2.1,9.0hz,1h),7.66-7.57(m,4h),6.91(d,j＝2.4hz,1h),6.81(dd,j＝2.7,9.0hz,1h),6.51(d,j＝8.7hz,1h),5.16(s,2h),4.04-3.94(m,2h),3.77-3.69(m,2h),2.87-2.76(m,1h),2.36-2.30(m,1h),2.15-2.09(m,1h),1.11-1.05(m,4h)。ms(esi+)m/z600.0(m+h)。

實(shí)施例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸

步驟1：2-(叔-丁氧基)-n-羥基亞氨代乙酰氯(36a)

在0℃向2-(叔-丁氧基)乙醛肟(24.1g,184mmol；如wo2009/005998中所述制備)在dmf(600ml)中的溶液添加n-氯琥珀酰亞胺(23.7g,184mmol)。將混合物攪拌1小時(shí)，倒入et2o(800ml)中并用鹽水(450ml)洗滌。有機(jī)層經(jīng)mgso4干燥并濃縮，得到粗2-(叔-丁氧基)-n-羥基亞氨代乙酰氯36a，其在后續(xù)步驟中直接使用。

步驟2：3-(叔-丁氧基甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-4-羧酸乙酯(36b)

在0℃向3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸乙酯(31.6g,203mmol)在thf(600ml)中的溶液添加naoch3(0.5m,10.9g,203mmol)在meoh中的溶液。在攪拌5分鐘之后，滴加2-(叔-丁氧基)-n-羥基亞氨代乙酰氯(36a,27.9g,169mmol)在thf(200ml)中的溶液。將混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜，倒入et2o(800ml)中，用鹽水(450ml)洗滌并濃縮，得到粗3-(叔-丁氧基甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-4-羧酸乙酯36b，其在后續(xù)步驟中直接使用。

步驟3：5-環(huán)丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36c)

在室溫向3-(叔-丁氧基甲基)-5-環(huán)丙基異噁唑-4-羧酸乙酯(36b,38.4g,144mmol)在二氯甲烷(600ml)中的溶液添加tfa(100ml)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，濃縮并用nahco3水溶液調(diào)節(jié)至堿性ph。將混合物用etoac(3x300ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(400ml)洗滌，經(jīng)mgso4干燥，濃縮并通過(guò)柱色譜法純化(pe/etoac＝10:1)，得到5-環(huán)丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯36c。¹hnmr(300mhz,dmso-d6)：δ4.64(s,2h),4.26(q,j＝7.2hz,2h),2.79-2.70(m,1h),1.29(t,j＝7.2hz,3h),1.23-1.13(m,4h)。

步驟4：5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36d)

在0℃向5-環(huán)丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36c,16.1g,76.3mmol)、2,6-二甲基苯酚(9.3g,76.3mmol)和pph3(20g,76.3mmol)在甲苯(500ml)中的溶液添加diad(15.4g,76.3mmol)。將混合物在90℃攪拌2小時(shí)，冷卻，濃縮并通過(guò)柱色譜法純化(pe/etoac＝15:1)，得到5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯36d。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6)：δ7.03(d,j＝7.8,hz,2h),6.96-6.87(m,1h),5.03(s,2h),4.25(q,j＝7.2hz,2h),2.82-2.76(m,1h),2.18(s,6h),2.14(s,3h),1.28-1.17(m,4h)。

步驟5：(5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇(36e)

在0℃向lialh4(2.9g,77.6mmol)在thf(250ml)中的溶液添加5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36d,16.3g,51.7mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用水(100ml)稀釋并用etoac(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(200ml)洗滌，經(jīng)mgso4干燥，濃縮并通過(guò)柱色譜法純化(pe/etoac＝8:1)，得到(5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇36e。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6)：δ7.04(d,j＝7.5,hz,2h),6.97-6.92(m,1h),5.07(brs,1h),4.85(s,2h),4.46(s,2h),2.30-2.26(m,1h),2.22(s,6h),1.10-0.96(m,4h)。ms(esi+)m/z256.1(m–h2o+h)。

步驟6,實(shí)施例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(36)

該化合物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例33所述的操作，使用(5-環(huán)丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇36e作為起始材料合成。¹hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.69(d,j＝1.5hz,1h),8.05(dd,j＝1.5,6.9hz,1h),7.66(d,j＝6.6hz,1h),7.12(d,j＝1.8hz,1h),6.99-6.89(m,4h),6.56(d,j＝6.9hz,1h),5.06(s,2h),4.91(s,2h),4.14-4.00(m,2h),3.79-3.71(m,2h),2.88-2.81(m,1h),2.43-2.39(m,1h),2.28-2.24(1h),2.18(s,6h),1.16-1.09(m,4h)。ms(esi+)m/z589.7(m+h)。

實(shí)施例37：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-(2,6-二氯苯基)-1-異丙基-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(35)

該類似物根據(jù)對(duì)于實(shí)施例33所述的操作，使用(4-(2,6-二氯苯基)-1-異丙基-1h-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(如wo2011/020615中所述制備)作為起始材料合成。¹hnmr(cd3od,300mhz)：δ8.68(d,j＝2.1hz,1h),8.04(dd,j＝2.1,8.7hz,1h),7.60-7.43(m,4h),6.88(d,j＝2.4hz,1h),6.80(dd,j＝2.4,8.7hz,1h),6.55(d,j＝9.0hz,1h),5.19(s,2h),5.00-4.92(m,1h),4.01(brs,2h),3.81-3.70(m,2h),2.89-2.77(m,1h),2.37-2.30(m,1h),1.70(d,j＝6.9hz,6h)。ms(esi+)m/z601.6(m+h)。

實(shí)施例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(36)

步驟1：5-環(huán)丙基噁唑-4-羧酸甲酯(38a)

在5℃向2-異氰基乙酸甲酯(72.7g,729mmol)和dbu(111g,729mmol)在thf(1l)中的溶液逐份添加環(huán)丙烷羧酸酐(112g,729mmol)在thf(100ml)中的溶液。將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，濃縮并通過(guò)快速色譜法純化(pe/etoac＝5:1)，得到5-環(huán)丙基噁唑-4-羧酸甲酯38a。¹h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ1.04-1.18(m,4h),2.74-2.79(m,1h),3.91(s,3h),7.60(s,1h)。

步驟2：5-環(huán)丙基-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38b)

將5-環(huán)丙基噁唑-4-羧酸甲酯(36a,36.4g,218mmol)和tsoh·h2o(82.9g,436mmol)在meoh(600ml)中的溶液加熱至回流過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫并真空濃縮。將殘留物用et2o研磨并過(guò)濾，得到粗2-氨基-3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸甲酯(62.8g,191mmol)，將其溶解在thf(1.5l)和tea(77.2g,764mmol)中。然后在–50℃將三光氣(19.9g,67mmol)添加至混合物，歷時(shí)1小時(shí)。將溶液用et2o(500ml)稀釋并添加飽和nh4cl水溶液(300ml)。分離水相，并用et2o(3x1l)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(500ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，濃縮并通過(guò)快速色譜法純化(pe/etoac＝5:1)，得到5-環(huán)丙基-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯38b。¹h-nmr(cdcl3,300mhz)：δ0.99-1.11(m,4h),2.41-2.50(m,1h),3.84(s,3h),8.57(s,1h)。

步驟3：甲磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c)

在0℃向2-(2,6-二氯苯基)乙醇(37.3g,195mmol)和tea(32.7g,235mmol)在dcm(700ml)中的溶液滴加mscl(26.9g,235mmol)。在添加之后，將溶液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用水(200ml)稀釋并用dcm(3x400ml)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾，濃縮并通過(guò)快速色譜法純化(pe/etoac＝5:1)，得到甲磺酸2,6-二氯苯乙酯38c。¹h-nmr(300mhz,cdcl3)：δ2.95(s,3h),3.43(t,j＝7.5hz,2h),4.41(t,j＝7.5hz,2h),7.12-7.17(m,1h),7.31(d,j＝8.4hz,2h)。

步驟4：5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38d)

在0℃在氮?dú)庀拢?-環(huán)丙基-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38b,23.5g,129mmol)在dmf(800ml)中的溶液添加nah(5.7g,142mmol；60％，在礦物油中)。將混合物攪拌15分鐘，然后在0℃滴加甲磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c,41.5g,154mmol)在dmf(400ml)中的溶液。在添加之后，將混合物在100℃攪拌過(guò)夜，冷卻，用水(1500ml)稀釋并用etoac(3x700ml)萃取。將合并的有機(jī)層用水(2x200ml)和鹽水(300ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過(guò)濾并真空濃縮。將殘留物用pe/etoac(5:1)洗滌，得到5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯38d。¹h-nmr(300mhz,cdcl3)：δ0.97-1.08(m,4h),2.44-2.49(m,1h),3.31(t,j＝4.8hz,2h)。3.73(s,3h),4.26(t,j＝4.8hz,2h),7.08-7.12(m,1h),7.26-7.28(m,2h)。

步驟5：5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3h)-酮(38e)

在0℃在氮?dú)庀?，?-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38d,13.9g,39mmol)在thf(400ml)中的溶液添加lialh4(16.3ml,39mmol)在thf中的溶液。在添加之后，將溶液在0℃攪拌30分鐘，相繼用h2o(2ml)、1mnaoh(2ml)和h2o(6ml)稀釋，過(guò)濾并真空濃縮。將殘留物用pe/etoac(2:1)洗滌，得到5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3h)-酮38e。¹h-nmr(cd3od,300mhz)：δ0.73-0.77(m,2h),0.83-0.88(m,2h),1.75-1.79(m,1h),3.30-3.38(m,2h),3.95(t,j＝6.6hz,2h)。4.10(s,2h),7.20-7.25(m,1h),7.37(d,j＝8.1hz,2h)，羥基質(zhì)子未解析。lc/ms(esi)：m/z328.0(m+h)⁺。

步驟6：(預(yù)示實(shí)施例)4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮(38f)

如果如上面對(duì)于實(shí)施例33步驟1所述類似地處理5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3h)-酮38e，那么將會(huì)得到4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮。

步驟7：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯(36g)

如果如上所述類似地處理4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3h)-酮38f和6-(3-(2-氯-4-羥基苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯，那么將會(huì)得到6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯38g。

步驟8,實(shí)施例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸(38)

如果如上所述類似地處理6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸甲酯38g，那么將會(huì)得到6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-氧代-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯烷-1-基)吡啶-3-羧酸38。

實(shí)施例39：5-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1h-吡唑-3-羧酸(39)

步驟1：(z)-2-羥基-4-氧代-4-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)丁-2-烯酸乙酯(39a)

在-78℃向1-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)乙酮(4.0g,21.6mmol)在無(wú)水thf(100ml)中的懸浮液滴加t-buli(25ml,1.3m,32.4mmol)。然后將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀贁嚢?小時(shí)，用飽和nh4cl水溶液淬滅。將混合物用etoac(100mlx2)萃取，將有機(jī)層用h2o(80ml)和鹽水(80ml)洗滌，用na2so4干燥，過(guò)濾，濃縮并將殘留物通過(guò)硅膠柱純化(pe:etoac＝5:1至2:1)，得到標(biāo)題化合物(4.6g)。

步驟2：1-異丙基-5-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39b)

在室溫向中間體39a(2.0g,7.0mmol)、異丙基肼一鹽酸鹽(1.0g,9.1mmol)和吡啶(3ml)在thf(40ml)中的懸浮液逐份添加lawesson試劑(5.7g,14mmol)。將所得混合物加熱至60℃并攪拌16小時(shí)。然后添加etoac(50ml)，并將混合物用飽和nahco3(50mx2)、hcl水溶液(1m,50ml)和鹽水(50ml)洗滌。將有機(jī)相用na2so4干燥，過(guò)濾，濃縮并將殘留物通過(guò)硅膠柱純化(pe:ea＝5:1至2:1)，得到標(biāo)題化合物(0.7g)。

步驟3：1-異丙基-5-(4-氧代哌啶-1-基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39c)

將中間體39b(0.70g,2.3mmol,粗品)在thf(10ml)和h2so4(10％,10ml)中的懸浮液攪拌16小時(shí)。將混合物用etoac(50ml)稀釋，用飽和nahco3(50mlx2)、hcl水溶液(1m,50ml)和鹽水(50ml)洗滌。將有機(jī)相用na2so4干燥，過(guò)濾，濃縮并將殘留物通過(guò)硅膠柱純化(pe:ea＝5:1至2:1)，得到標(biāo)題化合物.(0.61g)。

步驟4：5-(4-(4-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39d)

在室溫在n2下向圓底燒瓶添加licl(265mg,6.3mmol)、無(wú)水thf(10ml)和i-prmgcl(1.9ml,2.0m,3.8mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后滴加(4-溴-3-氯苯氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.1g,3.2mol)在無(wú)水thf(2ml)中的溶液，并在室溫再繼續(xù)攪拌1小時(shí)。然后，在n2下將上面的反應(yīng)混合物添加至中間體39c(0.8g,2.9mmol)在無(wú)水thf(10ml)中的溶液中，并將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用h2o(20ml)淬滅，用etoac(30mlx3)萃取。將有機(jī)層用鹽水(20ml)洗滌，用na2so4干燥，過(guò)濾并通過(guò)柱色譜法在硅膠上純化(ea/pe＝1/20)，得到標(biāo)題化合物(350mg)。

步驟5：5-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39e)

在室溫向39d(0.3g,0.67mmol)在thf(5ml)中的懸浮液添加tbaf(277mg,1.01mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。然后將混合物用水(20ml)淬滅，用etoac(20mlx3)萃取。將有機(jī)相用鹽水(20ml)洗滌，用na2so4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(0.23g)，其在后續(xù)步驟中直接使用而不經(jīng)進(jìn)一步純化。

步驟6：5-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1h-吡唑-3-羧酸乙酯(39f)

在0℃向中間體39e(230mg,0.56mol)、(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(158mg,0.56mol)和pph3(239mg,1.1mmol)在甲苯(10ml)中的懸浮液滴加diad(226mg,1.1mmol)。將所得混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用h2o稀釋，用etoac(20mlx3)萃取并將有機(jī)層濃縮至干。殘留物通過(guò)制備性tlc純化(etoac/pe＝1/1)，得到標(biāo)題化合物(220mg)。

步驟7,實(shí)施例39：5-(4-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1h-吡唑-3-羧酸(39)

將中間體39f(180mg,0.267mmol)在meoh(10ml)和naoh水溶液(10％,10ml)中的懸浮液在30℃攪拌4小時(shí)。將混合物在減壓下濃縮，添加hcl(1m)直至ph＝2～3，將所得析出物過(guò)濾并在真空下干燥，得到實(shí)施例39(100mg)。¹h-nmr(400mhz,cd3cl)：δppm7.43-7.39(m,3h),7.36-7.31(m,1h),6.83(d,j＝2.0hz,1h),6.72(dd,j＝8.8hz,2.0hz,1h),6.51(s,1h),4.81(s,2h),4.71-4.65(m,1h),3.29-3.25(m,2h),2.98-2.93(m,2h),2.2.45-2.37(m,2h),2.17-2.05(m,3h),1.47(d,j＝6.0hz,6h),1.32-1.25(m,2h),1.18-1.12(m,2h)。ms-esi：m/z645.3/647.3[m+h]⁺，667.3/669.3[m+na]⁺。

測(cè)試

fret活性測(cè)試

測(cè)定配體介導(dǎo)的輔因子肽相互作用以定量配體與核受體fxr的結(jié)合如下進(jìn)行：人fxrα配體結(jié)合域的制備：人fxrαlbd在大腸桿菌菌株bl21(de3)中表達(dá)為n-末端gst標(biāo)記的融合蛋白。將編碼fxr配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的dna克隆到載體pdest15(invitrogen)中。表達(dá)受iptg誘導(dǎo)型t7啟動(dòng)子的控制。配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸邊界是數(shù)據(jù)庫(kù)條目nm_005123(refseq)的氨基酸187-472。fxr-lbd的表達(dá)和純化：將轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株的過(guò)夜預(yù)培養(yǎng)物在lb-氨芐青霉素培養(yǎng)基中以1:20稀釋，并在30℃下生長(zhǎng)至od600＝0.4-0.6的光密度。然后通過(guò)加入0.5mmiptg誘導(dǎo)基因表達(dá)。將細(xì)胞在30℃，180rpm下另外培育6小時(shí)。通過(guò)離心(7000×g，7分鐘，室溫)收集細(xì)胞。每升原始細(xì)胞培養(yǎng)物中，將細(xì)胞重新懸浮于10ml裂解緩沖液(50mm葡萄糖、50mmtrisph7.9、1mmedta和4mg/ml溶菌酶)中，并在冰上放置30分鐘。然后將細(xì)胞進(jìn)行超聲處理，并通過(guò)離心(22000×g，30分鐘，4℃)除去細(xì)胞碎片。每10ml上清液加入0.5ml預(yù)洗的谷胱甘肽4b瓊脂糖漿(qiagen)，懸浮液在4℃下緩慢旋轉(zhuǎn)1小時(shí)。通過(guò)離心(2000×g，15秒，4℃)沉淀谷胱甘肽4b瓊脂糖珠，并在洗滌緩沖液(25mmtris、50mmkcl、4mmmgcl2和1mnacl)中洗滌兩次。基于每升原始培養(yǎng)物，將沉淀重懸于3ml洗脫緩沖液中(洗脫緩沖液：20mmtris、60mmkcl、5mmmgcl2和80mm谷胱甘肽，其在即將使用前作為粉末加入)。將懸浮液在4℃下旋轉(zhuǎn)15分鐘，珠粒沉淀并用與第一次相比一半體積的洗脫緩沖液再次洗脫。合并洗脫液，在含有60mmkcl、5mmmgcl2以及1mm二硫蘇糖醇和10％(v/v)甘油的20mmhepes緩沖液(ph7.5)中透析過(guò)夜。蛋白質(zhì)通過(guò)sds-page進(jìn)行分析。

該方法測(cè)量推定配體調(diào)節(jié)純化的細(xì)菌表達(dá)的fxr配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(lbd)與基于src-1殘基676-700(lcd2,676-700)的合成生物素化肽之間的相互作用的能力。所用肽的序列是b-cpsshsslterhkilhrllqegsps-cooh，其中n-末端被生物素化(b)。使用載體pdest15，fxr的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(lbd)在bl-21細(xì)胞中表達(dá)為帶有g(shù)st的融合蛋白。通過(guò)超聲裂解細(xì)胞，根據(jù)制造商的說(shuō)明，融合蛋白通過(guò)谷胱甘肽瓊脂糖(pharmacia)純化。為了篩選化合物對(duì)fxr-肽相互作用的影響，應(yīng)用了perkinelmerlance技術(shù)。該方法依賴于從供體到與感興趣的結(jié)合配偶體連接的受體熒光體的結(jié)合依賴性能量轉(zhuǎn)移。為了便于處理和減少來(lái)自化合物熒光的背景，lance技術(shù)利用通用熒光團(tuán)標(biāo)簽，并且在384孔板中，在tris-基緩沖液(20mmtris-hclph7.5；60mmkcl，5mmmgcl2；35ng/μlbsa)中，以25μl的終體積進(jìn)行時(shí)間分辨檢測(cè)分析，其含有20-60ng/孔重組表達(dá)的與gst融合的fxr-lbd，200-600nmn-末端生物素化的肽(代表src1氨基酸676-700)，200ng/孔抗生蛋白鏈菌素-xlapc綴合物(prozyme)和6-10ng/孔euw1024-antigst(perkinelmer)。樣品的dmso含量保持在1％。在產(chǎn)生測(cè)定混合物并稀釋潛在fxr調(diào)節(jié)配體之后，將測(cè)定在室溫下在黑色384孔的fia板(greiner)中在黑暗中平衡1小時(shí)。lance信號(hào)由perkinelmervictor2vtmmultilabel計(jì)數(shù)器檢測(cè)。通過(guò)繪制在665和615nm的發(fā)射光之間的比率來(lái)顯示結(jié)果。在沒(méi)有添加配體的情況下觀察到fxr-肽形成的基礎(chǔ)水平。促進(jìn)復(fù)合物形成的配體誘導(dǎo)時(shí)間分辨熒光信號(hào)的濃度依賴性增加。預(yù)期與單體fxr和fxr-肽復(fù)合物同樣良好結(jié)合的化合物不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)變化，而預(yù)期優(yōu)先結(jié)合單體受體的配體將會(huì)誘導(dǎo)觀察到的信號(hào)的濃度依賴性降低。

為了評(píng)估化合物的激動(dòng)潛力，對(duì)于下表1中所列的實(shí)施例化合物測(cè)定了ec50值(fretec50)。

哺乳動(dòng)物單雜交(m1h)測(cè)試

測(cè)定配體介導(dǎo)的gal4啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的反式激活以量化fxr的配體結(jié)合介導(dǎo)的激活如下進(jìn)行：在cmv啟動(dòng)子控制下，將編碼fxr配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的cdna部分克隆到載體pcmv-bd(stratagene)中，作為與酵母gal4dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域的融合物。配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸邊界是數(shù)據(jù)庫(kù)條目nm_005123(refseq)的氨基酸187-472。使用質(zhì)粒pfr-luc(stratagene)作為報(bào)告質(zhì)粒，其含有具有五個(gè)串聯(lián)重復(fù)的酵母gal4結(jié)合位點(diǎn)的合成啟動(dòng)子，驅(qū)動(dòng)作為報(bào)告基因的北美螢火蟲(chóng)(美國(guó)螢火蟲(chóng))熒光素酶基因的表達(dá)。為了提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒prl-cmv(promega)。prl-cmv含有組成型cmv啟動(dòng)子，從而控制海腎螢光素酶的表達(dá)。所有g(shù)al4報(bào)告基因測(cè)定在生長(zhǎng)在mem中的hek293細(xì)胞(得自dsmz,braunschweig,germany)中在37℃在5％co2中進(jìn)行，所述mem具有l(wèi)-谷氨酰胺和補(bǔ)充有10％胎牛血清、0.1mm非必需氨基酸、1mm丙酮酸鈉和100單位青霉素/抗生蛋白鏈菌素/ml的earle平衡鹽溶液。培養(yǎng)基和補(bǔ)充物從invitrogen獲得。對(duì)于該測(cè)定，將5x10⁵細(xì)胞/孔在96孔板中在每孔100μlmem中涂板，在37℃在5％co2中培育，所述mem不含酚紅和l-谷氨酰胺但含有補(bǔ)充有10％木炭/葡聚糖處理的fbs(hyclone,southlogan,utah)、0.1mm非必需氨基酸、2mm谷氨酰胺、1mm丙酮酸鈉和100單位青霉素/抗生蛋白鏈菌素/ml的earle平衡鹽溶液。第二天細(xì)胞>90％匯合。除去培養(yǎng)基，并使用20μl/孔的包含上述三種質(zhì)粒的基于optimem-聚乙烯亞胺的轉(zhuǎn)染試劑(optimem，invitrogen；聚乙烯亞胺，aldrichcatno.40,827-7)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在加入轉(zhuǎn)染混合物后2-4小時(shí)，加入與用于涂板細(xì)胞的mem相同組成的mem。然后加入在mem中預(yù)稀釋的化合物儲(chǔ)液(媒介物終濃度不超過(guò)0.1％)。將細(xì)胞孵育另外16小時(shí)，然后使用雙光熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)(dyer等人，anal.biochem.2000,282,158-161)在相同的細(xì)胞提取物中依次測(cè)量螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶活性。所有實(shí)驗(yàn)一式三份進(jìn)行。

為了評(píng)估實(shí)施例化合物的fxr激動(dòng)效力，在下表1中列出的m1h測(cè)定中測(cè)定效力(m1hec50)。

表1

序列表

<110>吉利德科學(xué)公司

christiangege

<120>新的fxr(nr1h4)調(diào)節(jié)化合物

<130>pct98221kg030pau

<140>還未指定

<141>2014-12-17

<150>ep14004260.7

<151>2014-12-17

<160>1

<170>patentin版本3.5

<210>1

<211>25

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>基于src-1殘基676-700(lcd2,676-700)的合成生物素化肽

<400>1

cysproserserhisserserleuthrgluarghislysileleuhis

151015

argleuleuglngluglyserproser

2025