本發(fā)明描述了新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)、一種含有它們的藥物組合物、一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為環(huán)核苷酸合成抑制劑的方法、一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為camp和cgmp合成抑制劑的方法以及它們?cè)陬A(yù)防性和/或治愈性治療腹瀉、結(jié)腸炎和腸易激綜合征中的用途。
背景技術(shù)：
：：根據(jù)聯(lián)合國兒童基金會(huì)(unitednationschildren'sfund，unicef)和世界衛(wèi)生組織(who)，腹瀉疾病是五歲以下兒童中死亡的第二主要原因和營(yíng)養(yǎng)不良的主要原因。可以通過安全飲水和足夠的公共衛(wèi)生和個(gè)人衛(wèi)生防止顯著比例的腹瀉疾病。腹瀉以排便頻率與正常排便相比增加或糞便形成減少為特征。雖然排便頻率的變化和糞便的疏松性可以彼此獨(dú)立地變動(dòng)，但是變化經(jīng)常同時(shí)出現(xiàn)。在大多數(shù)情況下，腹瀉體征和癥狀通常持續(xù)幾天。但是有時(shí)腹瀉可以持續(xù)數(shù)周。在這些情況下，腹瀉可能是嚴(yán)重疾病(如炎癥性腸病)或嚴(yán)重程度較小疾病(如腸易激綜合征)的體征。腹瀉可以是由寄生蟲引起的傳染性細(xì)菌疾病或病毒性疾病。腹瀉也可以是由食物中毒、食品添加劑、食物過敏、吸收不良綜合征(如谷蛋白或乳糖不耐受)、抗生素治療、腸疾病(克羅恩氏病(crohn'sdisease)、潰瘍性結(jié)腸炎)等引起的非傳染性腹瀉。常見治療是給予流體(fluids)以防止脫水并且繼續(xù)進(jìn)食，同時(shí)針對(duì)基本病因施用藥物。如果是由細(xì)菌引起的傳染病，引起腹瀉的大腸桿菌(escherichiacoli)(一種革蘭氏陰性菌)的致病機(jī)理可能包括分泌熱穩(wěn)定毒素(sta)。因此，本發(fā)明人努力開發(fā)環(huán)核苷酸合成的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物抑制劑，該環(huán)核苷酸合成是由大腸桿菌的穩(wěn)定毒素(sta)引起的。當(dāng)sta與腸上皮細(xì)胞膜受體、c型鳥苷酰環(huán)化酶(gc-c)結(jié)合時(shí)，sta引起腹瀉。這激活該酶以轉(zhuǎn)化鳥苷三磷酸(gtp)成環(huán)鳥苷3',5'-單磷酸(cyclicguanosine3',5'-monophosphate，cgmp)，造成cgmp胞內(nèi)水平驟增。這轉(zhuǎn)而誘導(dǎo)cgmp-依賴性蛋白激酶和氯離子通道(囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(cftr))激活。cftr的激活觸發(fā)氯離子流入腸管腔及水和鈉離子積累，因此造成腹瀉。國際公開號(hào)wo2008/008704描述了環(huán)核苷酸合成抑制劑及其治療多種疾病的用途。另一個(gè)類別的camp和cgmp合成抑制劑和環(huán)核苷酸合成抑制劑在tanifum[e.a.tanifum等人，“作為穩(wěn)定的素毒(sta)誘導(dǎo)的cgmp合成的抑制劑的新的吡啶并嘧啶衍生物(novelpyridopyrimidinederivativesasinhibitorsofstabletoxina(sta)inducedcgmpsynthesis)”。生物有機(jī)化學(xué)與醫(yī)藥化學(xué)通訊(bioorganic&medicinalchemistryletters)，2009，19:3067-3071]的出版物中描述。依據(jù)這份出版物，鑒定的最佳化合物之一是具有以下結(jié)構(gòu)形式的化合物24(fpipp)：還根據(jù)tanifum[e.a.tanifum等人，“作為穩(wěn)定的素毒(sta)誘導(dǎo)的cgmp合成的抑制劑的新的吡啶并嘧啶衍生物”。生物有機(jī)化學(xué)與醫(yī)藥化學(xué)通訊，2009，19:3061-3071]，開發(fā)有效對(duì)抗造成腸內(nèi)流體失衡的生理學(xué)機(jī)制的藥物將是治療藥物寶庫中的有意義補(bǔ)充?；谝陨希景l(fā)明的發(fā)明人開發(fā)了可以用于治療、預(yù)防或改善腹瀉癥狀的新化合物，吡啶并嘧啶的新衍生物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的主要目的是提供結(jié)構(gòu)由通式(i)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)、一種含有它們的藥物組合物、一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為環(huán)核苷酸合成抑制劑的方法、一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為camp和cgmp合成抑制劑的方法及它們?cè)陬A(yù)防性和/或治愈性治療腹瀉、結(jié)腸炎和腸易激綜合征中的用途。在一些方面，本發(fā)明提供包含有效量所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)作為有效成分和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)抑制環(huán)核苷酸合成的用途。另外，本發(fā)明的目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)之一抑制camp和cgmp合成的用途。本發(fā)明的目的還是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)之一在預(yù)防性和/或治愈性治療腹瀉、結(jié)腸炎和腸易激綜合征中的用途。附圖說明圖1：化合物ii、iv、vi、viii和x對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響圖2：化合物i、iii、v和xii對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響圖3：化合物vii對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響圖4：化合物ix對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響圖5：化合物xi對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響具體實(shí)施方式本發(fā)明描述了結(jié)構(gòu)由通式(i)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)，其中：r1選自由c1-6烷基、氨基c1-6烷基、二甲基氨基c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、胍基c1-6烷基和巰基c1-6烷基組成的組；r2選自由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-雙三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基、2,1,3-苯并噻二唑-5-基和取代的芳基組成的組，其中取代基選自由c1-6烷氧基、鹵素、c1-6雜芳烷基或c2-6雜芳烯基組成的組；并且x選自由o、s和se組成的組。如上文所用并且貫穿本申請(qǐng)，除非另外說明，否則以下術(shù)語應(yīng)當(dāng)理解成具有以下含義：術(shù)語“烷基”代表直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基鏈，例如，c1-6烷基可以是甲基、乙基、丙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。術(shù)語“鏈烯基”包括直鏈、支鏈或環(huán)狀鏈的鏈烯基，如，烯丙基、芐基、乙烯基、苯乙烯基、吲哚基等。術(shù)語“酰氨基”表示氨基的任何?；苌铮缫阴０被?、苯甲酰胺基等。術(shù)語“芳基”指衍生自芳環(huán)的任何官能團(tuán)或取代基，例如，苯基、萘基、噻吩基、吲哚基等。術(shù)語“鹵素或鹵代”表示氟、氯、溴或碘原子。術(shù)語“患者”是人類或非人類哺乳動(dòng)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，患者是人類。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者是非人類哺乳動(dòng)物，包括但不限于猴、犬、貓、狒狒、恒河猴、小鼠、大鼠、馬、兔、牛等。如本文所用的術(shù)語“有效量”指新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其藥物組合物的量，所述量在施用至患有疾病的患者時(shí)有效產(chǎn)生想要的治療、改善、抑制或預(yù)防作用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物具有通式(i)表示表示的結(jié)構(gòu)、或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)，其中：r1是選自由甲基、乙基、丙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基組成的組的c1-6烷基；r2選自：由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-雙三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基和2,1,3-苯并噻二唑-5-基組成的組；并且x表示o或s。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物具有通式(i)表示的結(jié)構(gòu)、或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)，其中：r1是甲基或乙基；r2選自：由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-雙三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基和2,1,3-苯并噻二唑-5-基組成的組；并且x是o或s。具體地說，優(yōu)選的化合物是如實(shí)施例中作為單獨(dú)的化合物所描述的通式(i)的化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選的取代基是表1中描述的具體實(shí)施例的那些取代基。表1優(yōu)選的通式(i)化合物是選自由以下化合物組成的組的那些：-化合物i：(5-(4-三氟甲基噻吩)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2',1':5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物ii：5-(4-三氟甲基噻吩)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是-化合物iii：5-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是-化合物iv：5-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-1-乙基-3-甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮-化合物v：5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物vi：5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-1-乙基-3-甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物vii：5-(1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物viii：5-(1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物ix：5-(1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物x：5-(2,1,3-苯并噻二唑-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物xi：5-(2,1,3-苯并噻二唑-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：-化合物xii：5-(2,1,3-苯并噻二唑-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氫-1h-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是：及它們藥學(xué)上可接受的鹽。所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物可以形成也在本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的通式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的例子是與無機(jī)酸如氫氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氟酸、氫溴酸等形成的鹽，與有機(jī)酸如甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、延胡索酸、馬來酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟腦磺酸等形成的鹽，和與堿金屬或堿土金屬如鈉、鉀、鈣等形成的鹽?？梢酝ㄟ^以下一般合成途徑制備根據(jù)本發(fā)明的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物。一般合成途徑材料和方法5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(5-(trifluoromethyl)thiophene-3-carbaldehyde)購自奧羅拉基礎(chǔ)材料(aurorabuildingblocks)，1-乙基-3-甲基脲購自阿克斯基礎(chǔ)材料(akosbuildingblocks)并且全部其他商品已經(jīng)購買自西格瑪奧瑞奇(sigmaaldrich)。全部反應(yīng)均通過tlc(薄層色譜法)追蹤，在含有熒光指示劑的默克(merck)硅凝膠60f254板上實(shí)施并且該板已經(jīng)用紫外線(254nm)可視化。已經(jīng)使用硅膠柱(kieselgel60)進(jìn)行制備性柱色譜純化。溶液已經(jīng)用布奇(büchi)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在低壓力下濃縮。使用buchi熔點(diǎn)b-540儀測(cè)定的熔點(diǎn)未校正并且表示對(duì)重結(jié)晶或色譜純化的材料所獲得的值。已經(jīng)通過api2000應(yīng)用生物系統(tǒng)(appliedbiosystems)質(zhì)譜儀上進(jìn)行的電噴霧電離質(zhì)譜法(esi/ms)評(píng)定中間體和最終化合物的分子量。1h-nmr譜已經(jīng)記錄在瓦里安(varian)mercuryplus400mhz儀上。全部波譜已經(jīng)均在dmso-d6中記錄。當(dāng)適宜時(shí)，以下縮寫用來描述峰型：s(單峰)、bs(寬單峰)、d(二重峰)、dd(雙二重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)。一般步驟合成的一般步驟基于hantzsch和agarwal，二氫吡啶三組分環(huán)化法[a.hantzsc，“醛氨和酮類化合物的縮聚產(chǎn)物(condensationsprodukteausaldehydammoniakundketonartigenverbindungen)”，化學(xué)學(xué)報(bào)(chem.ber.)，1881，14:1637-1638]和[a.agarwal等人，“關(guān)于在與6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶的一步法hantzch合成中異常脫芳基化/烷基化的第一次報(bào)告(firstreportontheabnormaldearylation/alkylationreactioninone-pothantzchsynthesiswith6-amino-1,3-dimethyluracil)”，合成通訊(syntheticcommunications)，2004，34:4447-4461]。具體地說，伯胺(c)(無市售時(shí)合成)(實(shí)施例中描述合成步驟)與醛(b)(無市售時(shí)合成)和1,3-茚二酮(a)在乙酸中的反應(yīng)提供所需的通式(i)化合物。所述的通式(i)新的吡啶并嘧啶衍生物化合物已經(jīng)遵循以下總體方案中描述的一般合成途徑合成?？傮w方案以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出本發(fā)明不受以下實(shí)施例限制。實(shí)施例1：化合物i的制備5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛的合成：遵循賓德爾(binder)先前發(fā)表的步驟獲得化合物5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(5-(trifluoromethyl)thiophene-3-carbaldehyde)[d.binder等人，“噻吩作為生理學(xué)活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)單元(thiophenalsstrukturelementphysiologischaktiversubstanzen)”，藥物文獻(xiàn)(arch.pharm)，(魏因海姆(weinheim))1985，318:243-249]。將20mldibal在正己烷中的20％溶液在30分鐘期間在低于-45℃的溫度在n2氣氛下逐滴添加至3.1g(17.5mmol)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲腈在32.0ml無水醚中的溶液。隨后將混合物在-30℃攪拌45分鐘并且接著添加3次5％h2so4溶液(3.0ml)，并且用二乙醚提取水相。在mgso4上干燥合并的有機(jī)相。將溶劑蒸發(fā)，以獲得作為油的所需化合物，不作進(jìn)一步純化，并且提出esi-ms(mw179.99)：180.8(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.95(s,1h),8.35(s,1h),7.95(s,1h)?；衔飅的合成向圓底燒瓶中的乙酸(15ml)添加(a)1,3-茚二酮(0.56g，3.83mmol)、(b)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(0.697g，3.93mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(0.5g，3.22mmol)。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物i。熔點(diǎn)：265℃esi-ms(mw445.07)：445.9(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.87(s,1h,nh),7.87(d,1h),7.63(s,1h),7.59(d,1h),7.48(t,1h),7.36(m,2h),4.88(s,1h),3.55(s,3h),3.13(s,3h)。方案1實(shí)施例2：化合物ii的制備6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮的合成。遵循胡(hu)先前發(fā)表的方法[s.hu等人，“單胺氧化酶b上8-(取代的苯乙烯-甲酰胺)苯基-黃嘌呤衍生物的設(shè)計(jì)、合成和抑制活性(design,synthesisandinhibitoryactivitiesof8-(substitutedstyrol-formamido)phenyl-xanthinederivativesonmonoamineoxidaseb)”，化學(xué)藥物通報(bào)(chem.pharm.bull.)，2012，60(3)：385-390](適當(dāng)?shù)匦薷?，獲得化合物6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮。向1,3-二甲基硫脲(1.83g，17.57mmol)在乙酸酐(30ml)中的攪拌溶液添加氰基乙酸(1.5g，1.76mmol)，并且將所產(chǎn)生的混合物在70℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物濃縮并且將所產(chǎn)生的油質(zhì)殘余物用h2o(40ml)稀釋并用5nnaoh(15ml)處理。通過過濾法收集如此形成的沉淀物，用冷水洗滌和通過從meoh/h2o重結(jié)晶而純化，以產(chǎn)生6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮。熔點(diǎn)：289℃。esi-ms(mw171.05)：172.1(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ7.01(s,2h,nh2),5.01(s,1h),3.74(s,3h),3.50(s,3h)。化合物ii的合成通過(a)1,3-茚二酮(170mg，1.16mmol)、(b)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(209mg，1.18mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮(166mg，0.97mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物ii。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物ii。熔點(diǎn)：178℃。esi-ms(mw461.05)：461.9(m+h+)；483.9(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.09(s,1h,nh),7.87(bs,1h),7.66(bs,1h),7.60(s,1h),7.49(bs,1h),7.37(m,2h),4.96(s,1h),4.07(s,3h),3.58(s,3h)。方案2實(shí)施例3：化合物iii的制備化合物iii的合成通過(a)1,3-茚二酮(1.11g，7.57mmol)、(b)3-氟-5-三氟甲基苯甲醛(1.46g，7.60mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮(1.08g，6.30mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物iii。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物iii。熔點(diǎn)：313℃esi-ms(mw473.08)：474.1(m+h+)；496.0(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.12(s,1h,nh),8.05(d,1h),7.66(s,1h),7.56(s,1h),7.51(d,1h),7.43(t,1h),7.35(t,1h),7.28(s,1h),4.96(s,1h),4.08(s,3h),3.53(s,3h)。方案3實(shí)施例4：化合物iv的制備6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮的合成。遵循胡(hu)先前發(fā)表的方法[s.hu等人，“單胺氧化酶b上8-(取代的苯乙烯-甲酰胺)苯基-黃嘌呤衍生物的設(shè)計(jì)、合成和抑制活性(design,synthesisandinhibitoryactivitiesof8-(substitutedstyrol-formamido)phenyl-xanthinederivativesonmonoamineoxidaseb)”，化學(xué)藥物通報(bào)(chem.pharm.bull.)，2012，60(3)：385-390](適當(dāng)?shù)匦薷?，獲得化合物6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮。向1-乙基-3-甲基脲(1.36g，13.3mmol)在乙酸酐(30ml)中的攪拌溶液添加氰基乙酸(1.13g，1.33mmol)，并且將所產(chǎn)生的混合物在70℃攪拌過夜。將反應(yīng)混合物濃縮并且將所產(chǎn)生的油質(zhì)殘余物用h2o(40ml)稀釋并用5nnaoh(15ml)處理。通過過濾法收集如此形成的沉淀物，用冷水洗滌和通過從meoh/h2o重結(jié)晶而純化，以產(chǎn)生1.91g6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮。熔點(diǎn)：232℃。esi-ms(mw169.09)：170.1(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ6.76(s,2h,nh2),4.64(s,1h),3.80(q,2h),3.29(s,3h),1.08(t,3h)?；衔飅v的合成通過(a)1,3-茚二酮(970mg，6.64mmol)、(b)3-氟-5-三氟甲基苯甲醛(1.27g，6.61mmol)和(c)6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮(936mg，5.53mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物iv。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物iv。熔點(diǎn)：177℃。esi-ms(mw471.12)：471.9(m+h+)；498.8(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.81(s,1h,nh),7.94(d,1h),7.49(m,3h),7.40(d,1h),7.33(t,1h),7.27(t,1h),4.91(s,1h),4.26(m,2h),3.10(s,3h),1.24(t,3h)。方案4實(shí)施例5：化合物v的制備化合物v的合成通過(a)1,3-茚二酮(503mg，3.44mmol)、(b)3,5-雙三氟甲基苯甲醛(833mg，3.44mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮(490mg，2.86mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物v。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物v。熔點(diǎn)：314℃。esi-ms(mw523.08)：524.0(m+h+)；546.1(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.14(s,1h,nh),8.08(d,1h),7.97(s,2h),7.87(s,1h),7.53(t,1h),7.37(t,1h),7.27(d,1h),5.06(s,1h),4.08(s,3h),3.51(s,3h)。方案5實(shí)施例6：化合物vi的制備化合物vi的合成通過(a)1,3-茚二酮(708mg，4.84mmol)、(b)3,5-雙三氟甲基苯甲醛(1.17g，4.83mmol)和(c)6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮(683mg，4.04mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物vi。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物vi。熔點(diǎn)：166℃。esi-ms(mw521.12)：522.1(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.87(s,1h,nh),7.94(bs,3h),7.88(s,1h),7.50(t,1h),7.37(t,1h),7.30(d,1h),5.03(s,1h),4.32(m,2h),3.09(s,3h),1.24(t,3h)。方案6實(shí)施例7：化合物vii的制備2,3-亞甲二氧基)苯甲醛的合成遵循德沃(deveau)先前發(fā)表的方法獲得化合物2,3-亞甲二氧基)苯甲醛[a.m.deveau、t.l.macdonald“通過在水中與與無配體鈀suzuki交叉偶聯(lián)實(shí)際合成含有3',4'-鄰苯二酚醚基a-環(huán)的聯(lián)芳基秋水仙素(practicalsynthesisofbiarylcolchicinoidscontaining3',4'-catecholether-baseda-ringsviasuzukicross-couplingwithligandlesspalladiuminwater)”，四面體通訊(tetrahedronletters)，2004，45:803-807]。向配備有回流冷凝器的火焰干燥的平底燒瓶依次添加2,3-二羥苯甲醛(1g；7.24mmol)、dmf(干的，30ml)和碳酸銫(1.5eq)。在徹底混合后，借助注射器添加二溴甲烷(1.5eq)。將混合物在110℃加熱2小時(shí)，隨后冷卻至室溫。通過一層硅藻土過濾后，將濾餅用etoac淋洗。將所得到的有機(jī)濾液濃縮，用水稀釋，并且用etoac提取三次。將合并的有機(jī)相用水洗滌，在mgso4上干燥并濃縮，獲得良好產(chǎn)率的粗制油。通過快速色譜和球管(kugelrohr)蒸餾純化粗制黃色油提供了所需的醛，所述的醛在冷卻時(shí)形成無色半透明晶體。熔點(diǎn)：35℃。esi-ms(mw150.03)：151.1(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.35(s,1h),7.51(dd,1h),7.24(dd,1h),7.16(dd,1h),6.36(s,2h)?；衔飗ii的合成通過(a)1,3-茚二酮(1.61g，11.02mmol)、(b)2,3-(亞甲二氧基)苯甲醛(1.66g，11.06mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(1.43g，9.22mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物vii。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物vii。熔點(diǎn)：300℃.esi-ms(mw415.12)：416.0(m+h+)；438.0(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.88(s,1h,nh),7.83(d,1h),7.45(t,1h),7.32(t,1h),7.24(d,1h),6.73(t,1h),6.66(d,2h),5.90(d,2h),4.81(s,1h),3.56(s,3h),3.08(s,3h)。方案7實(shí)施例8：化合物viii的制備化合物viii的合成通過(a)1,3-茚二酮(535mg，3.66mmol)、(b)2,3-(亞甲二氧基)苯甲醛(549mg，3.66mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮(521mg，3.05mmol)反應(yīng)，采用對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物viii。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物viii。熔點(diǎn)：310℃。esi-ms(mw431.09)：432.0(m+h+)；453.9(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.11(s,1h,nh),7.83(d,1h),7.47(t,1h),7.34(t,1h),7.27(d,1h),6.77(bs,1h),6.68(bs,2h),5.93(d,2h),4.88(s,1h),4.08(s,3h),3.53(s,3h)。方案8實(shí)施例9：化合物ix的制備3,4-(亞甲二氧基)苯甲醛的合成遵循波里(poli)先前發(fā)表的方法獲得化合物3,4-(亞甲二氧基)苯甲醛[g.poli、g.gianbastiani，“通過鈀催化的假多米諾環(huán)化的epiisopicropodophyllin硫唑嘌呤類似物(anepiisopicropodophyllinazaanalogueviapalladium-catalyzedpseudo-dominocyclization)”，有機(jī)化學(xué)期刊(j.org.chem.)，2002，67:9456-9459]。向胡椒基醇(10g，65.73mmol)在ch2cl2(250ml)中的溶液按一個(gè)部分添加mno2(49.3g，567.32mmol)。將所產(chǎn)生的深色懸液在室溫?cái)嚢?4小時(shí)，并且隨后經(jīng)硅藻土墊(celitepad)過濾，所述硅藻土墊用ch2cl2洗滌。在真空中移除溶劑并且所產(chǎn)生的粗制晶態(tài)淺黃色固體在不作進(jìn)一步純化的情況下使用，熔點(diǎn)：338℃esi-ms(mw150.03)：151.1(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.80(s,1h),7.40(m,2h),6.92(d,1h),6.07(s,2h)?；衔飅x的合成：通過(a)1,3-茚二酮(203mg，1.39mmol)、(b)3,4-(亞甲二氧基)苯甲醛(209mg，1.39mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(180mg，1.16mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物ix。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物ix。熔點(diǎn)：338℃。esi-ms(mw415.12)：416.0(m+h+)；437.9(m+na+)；453.9(m+k+).1h-nmr(dmso-d6)：δ9.79(s,1h,nh),7.98(d,1h),7.46(t,1h),7.33(t,1h),7.27(d,1h),6.81(s,1h),6.72(bs,2h),5.89(s,2h),4.69(s,1h),3.57(s,3h),3.10(s,3h)。方案9實(shí)施例10：化合物x的制備2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-4-caboxaldehyde)的合成遵循vanelle先前發(fā)表的方法獲得化合物2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-4-caboxaldehyde)[p.vanelle、c.t.llegeols、j.meuche、j.maldonado、m.p.crozet，“一種用于合成新的硝基苯并噻二唑衍生物的創(chuàng)新方式(anoriginalwayforsynthesisofnewnitrobenzothiadiazolederivatives)”，雜環(huán)化合物(heterocycles)，1997，45(5):955-962]。將2-硝基丙烷的鋰鹽(2.48g，27.84mmol)添加至4-溴甲基-2,1,3-苯并噻二唑(5.82g，25.40mmol)在甲醇(60ml)中的溶液。在室溫(大約25℃)攪拌24小時(shí)后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上在降低的壓力下蒸餾去甲醇。將殘余物溶解于二氯甲烷中，并用水洗滌溶劑，在無水硫酸鎂上干燥，在真空下蒸發(fā)。通過從環(huán)己烷重結(jié)晶而純化后，獲得作為黃色固體的2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛。熔點(diǎn)：99℃。esi-ms(mw164.18)：165.2(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.60(s,1h),8.43(d,1h),8.27(d,1h),7.91(t,1h)。化合物x的合成通過(a)1,3-茚二酮(420mg，2.87mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(471mg，2.87mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(359mg，2.31mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物x。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物x。熔點(diǎn)：331℃。esi-ms(mw429.09)：430.1(m+h+)；452.0(m+na+)；467.9(m+k+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.08(s,1h,nh),7.88(d,1h),7.62(d,3h),7.50(t,1h),7.32(t,1h),7.23(d,1h),5.46(s,1h),3.64(s,3h)，3.01(s,3h)。方案10實(shí)施例11：化合物xi的制備2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-5-caboxaldehyde)的合成遵循卡羅爾(carroll)先前發(fā)表的方法獲得化合物2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛[w.a.carroll等人，“合成和結(jié)構(gòu)-一系列新的2,3,5,6,7,9-六氫噻吩并[3,2-b]喹啉-8(4h)-酮1,1-二氧化物katp通道開放劑：(-)-(9s)-9-(3-溴-4-氟苯基)-2,3,5,6,7,9-六氫噻吩并[3,2-b]喹啉-8(4h)-酮1,1-二氧化物(α-278637)的發(fā)現(xiàn)，有效的katp開放劑選擇性抑制自主膀胱收縮(synthesisandstructure-activityrelationshipsofanovelseriesof2,3,5,6,7,9-hexahydrothieno[3,2-b]quinolin-8(4h)-one1,1-dioxidekatpchannelopeners:discoveryof(-)-(9s)-9-(3-bromo-4-fluorophenyl)-2,3,5,6,7,9-hexahydrothieno[3,2-b]quinlin-8(4h)-one1,1-dioxide(α-278637),apotentkatpopenerthatselectivelyinhibitsspontaneousbladdercontractions)”，醫(yī)藥化學(xué)期刊(j.med.chem.)，2004，47:3163-3179]。將chcl3(150ml)中的5-羥甲基苯并-2,1,3-噻二唑(2.6g，16mmol)和mno2(5.6g，64.41mmol)在室溫?cái)嚢?大約25℃)過夜。過濾反應(yīng)混合物并蒸發(fā)濾液。將粗制殘余物進(jìn)行硅膠上色譜(etoac/己烷，7/3，v/v)以提供1.9g2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛。熔點(diǎn)：93℃。esi-ms(mw164.18)：165.2(m+h+)。1h-nmr(dmso-d6)：10.21(s,1h),8.78(d,1h),8.19(d,1h),8.04(s,1h)?；衔飜i的合成通過(a)1,3-茚二酮(468mg，3.20mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(525mg，3.20mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(415mg，2.67mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得化合物xi。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物xi。熔點(diǎn)：358℃。esi-ms(mw429.09)：430.1(m+h+)；452.1(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ9.92(s,1h,nh),7.93(m,3h),7.77(d,1h),7.47(t,1h),7.33(t,1h),7.26(d,1h),4.99(s,1h),3.61(s,3h)，3.08(s,3h)。方案11實(shí)施例12：化合物xii的制備化合物xii的合成：通過(a)1,3-茚二酮(456mg，3.12mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(512mg，3.12mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氫嘧啶-4(1h)-酮(445mg，2.60mmol)反應(yīng)，采用實(shí)施例1中對(duì)化合物i所述的相同方法獲得該化合物。將混合物在氮?dú)夥障禄亓骷訜?小時(shí)。隨后將它冷卻至0℃。過濾所得到的沉淀物并用冷水淋洗以獲得粗產(chǎn)物。在硅膠柱上的純化(ch2cl2/ch3oh，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物xii。熔點(diǎn)：362℃。esi-ms(mw445.07)：446.0(m+h+)；468.0(m+na+)。1h-nmr(dmso-d6)：δ10.14(s,1h,nh),7.96(m,3h),7.80(d,1h),7.48(t,1h),7.34(t,1h),7.27(d,1h),5.04(s,1h),4.11(s,3h),3.51(s,3h)。方案12在一些方面，本發(fā)明還提供藥物組合物，例如，適當(dāng)?shù)膭┬停渲兴鼋M合物包含有效量的結(jié)構(gòu)由通式(i)表示的一種或多種化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽，或它們的混合物(以任何比率)作為有效成分；和藥學(xué)上可接受的賦形劑。根據(jù)本發(fā)明，通過任何適當(dāng)?shù)耐緩绞┯盟幬锝M合物，例如，通過口服、舌下、直腸、陰道、經(jīng)鼻、腹膜內(nèi)或胃腸道外途徑施用，但不限于這些例子。優(yōu)選的途徑是口服。用于口服施用的藥物組合物可以按多樣的藥物形式呈現(xiàn)，如，但不限于：(i)片劑，任選地包衣、可咀嚼、泡騰、多層或可分散片劑；(ii)丸劑；(iii)粉劑，任選地可分散粉劑或泡騰粉劑；(iv)膠囊劑、任選地硬質(zhì)凝膠膠囊劑、軟質(zhì)或淀粉質(zhì)凝膠膠囊劑；(v)糖錠；(vi)顆粒劑，任選地以微粒子、微膠囊、或載體化制劑形式，如脂質(zhì)體；(vii)栓劑；(viii)溶液劑；(ix)糖漿劑；(x)混懸劑；(xi)注射劑；和其他。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物作為環(huán)核苷酸合成的抑制劑使用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物作為camp和cgmp合成的抑制劑使用。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物用于預(yù)防性和/或治愈性治療腹瀉、結(jié)腸炎和腸易激綜合征。根據(jù)本發(fā)明，可以通過現(xiàn)有技術(shù)熟知的方法制備藥物組合物。適當(dāng)?shù)?，雷明頓藥學(xué)大全(remington'spharmaceuticalsciences)或相似信息源可以用來制備根據(jù)本發(fā)明的合適制劑。測(cè)試的化合物實(shí)施例13：在t84細(xì)胞中由毒素sta誘導(dǎo)的刺激鳥苷酰環(huán)化酶-c的方案a)細(xì)胞生長(zhǎng)來自t84系(atccccl-248)的細(xì)胞根據(jù)供應(yīng)商的說明繼代培養(yǎng)。簡(jiǎn)而言之，在使用3ml0.25％胰蛋白酶溶液(w/v)和0.53mmedta溶液洗滌培養(yǎng)瓶(75cm2)以移除痕量血清后，添加相同體積的胰蛋白酶至每個(gè)瓶中，并且在顯微鏡下觀察細(xì)胞直至細(xì)胞層脫離(通常8-10分鐘)。準(zhǔn)備分析平板(12孔板)，此后添加補(bǔ)充有10％胎牛血清和青霉素-鏈霉素(50iu/ml:50μg/ml)的8ml培養(yǎng)基(dmem-f12)后，在2000rpm離心細(xì)胞勻漿5分鐘(在25℃)。借助1ml與真空泵連接的移液管，吸出上清液并將細(xì)胞用培養(yǎng)基重懸(采用必需體積維持比率1:4，即1個(gè)培養(yǎng)瓶衍生4塊12孔板)。在細(xì)胞均勻化后，借助移液管，將2ml細(xì)胞懸液添加至平板的每個(gè)孔。生長(zhǎng)在培養(yǎng)箱中受控條件下(37℃，5％co2氣氛)進(jìn)行直至每個(gè)孔匯合(一般8-10天)。b)方法起初，使用1ml與真空泵連接的移液管吸出培養(yǎng)基，并且使用1ml與真空泵接合的移液管，將細(xì)胞用0.5ml杜爾貝科磷酸鹽緩沖鹽水(dpbs；37℃)洗滌至少3次。依次，將0.5mldpbs在1-甲基(metil)-3-異丁基黃嘌呤(1mm)、二甲基亞砜(0.1％v/v)和測(cè)試化合物存在和/或不存下添加并且在溫箱(37℃，5％co2氣氛)中溫育10分鐘。在溫育期后，細(xì)胞用sta毒素(1μμ，5μl)刺激并在培養(yǎng)箱(37℃，5％co2氣氛)中溫育10分鐘。在刺激期后，使用與真空泵連接的1ml移液管吸出上清液體積，并且在振蕩器型“搖床”(lab-line儀器(lab-lineinstruments)，型號(hào)4625)中恒定攪拌(速度4)下通過添加氫氯酸溶液0.1m(使用移液管，0.3ml)，ph4持續(xù)20分鐘，提取cgmp。在提取期后，將每個(gè)孔的體積離心(15000rpm，5分鐘，25℃)并將一個(gè)等分試樣的上清液(0.3ml)迅速貯存于-20℃的制冷器中以便后續(xù)通過horton等人(1992)開發(fā)和描述的免疫測(cè)定法對(duì)cgmp的含量定量[horton,j.k.、martin,r.c.、kalinka,s.、cushing,a.、kitcher,j.p.、o'sullivan,m.j.、baxendale,p.m.，“用于估計(jì)在生物液體中腺苷3',5'環(huán)單磷酸和鳥苷3',5'環(huán)單磷酸的酶免疫分析法(enzimeimmunoassaysfortheestimationofadenosine3',5'cyclicmonophosphateandguanosine3',5'cyclicmonophosphateinbiologicalfluids)”，免疫方法期刊(jimmunolmethods)1992，155:31-40]。在振蕩器型“搖床”中恒定攪拌下(速度7)通過添加0.5ml0.1m氫氧化鈉溶液，直接消化蛋白質(zhì)沉淀物或“顆粒狀物(pellets)”30分鐘。之后，使用bradford(1976)開發(fā)的方法[m.m.bradford，“一種利用蛋白質(zhì)染色結(jié)合原理定量微克量蛋白質(zhì)的快速和靈敏的的方法(arapidandsensitivemethodforthequantitationofmicrogramquantitiesofproteinutilizingtheprincipleofprotein-dyebinding)，分析生物化學(xué)(analyticalbiochemistry)，1976，72:248-254]，這種蛋白質(zhì)級(jí)分在試驗(yàn)中用來確定蛋白質(zhì)。c)測(cè)試的化合物測(cè)試化合物是表1中描述的i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x、xi和xii。d)結(jié)果表2化合物ii、iv、vi、viii和x對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響(參見圖1)。一種或多種化合物cgmp,pmol/10分鐘/mg抑制％(化合物xsta)基線6.18±0.49-sta(1μm)1044.0±55.42#-fpipp(50μm)53.53±6.22*～94ii(50μm)57.50±3.16*～94iv(50μm)146.80±22.94*～86vi(50μm)22.83±3.30*～97viii(50μm)350.70±35.80*～66x(50μm)668.40±75.46*～36結(jié)果表述為均值±sem。與基線組相比，#p<0.05；與sta組相比，*p<0.05；(anova，接著杜凱氏檢驗(yàn)(tukey'stest))。表3化合物i、iii、v和xii對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響(參見圖2)一種或多種化合物cgmp,pmol/10分鐘/mg抑制％(化合物xsta)基線0.02±0.01-sta(1μm)554.20±49.43#-fpipp(50μm)74.83±13.26*～86i(50μm)210.70±6.11*～62iii(50μm)201.50±44.93*～64v(50μm)215.50±34.57*～62xii(50μm)201.50±23.51*～64結(jié)果表述為均值±sem。與基線組相比，#p<0.05；與sta組相比，*p<0.05；(anova，接著杜凱氏檢驗(yàn))。表4化合物vii對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響(參見圖3)一種或多種化合物cgmp,pmol/10分鐘/mg抑制％(化合物xsta)基線0.25±0.06-sta(1μm)334.60±40.74#-fpipp(50μm)56.25±13.61*～83vii(50μm)297.30±39.06*～12結(jié)果表述為均值±sem。與基線組相比，#p<0.05；與sta組相比，*p<0.05；(anova，接著杜凱氏檢驗(yàn))。表5化合物ix對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響(參見圖4)一種或多種化合物cgmp,pmol/10分鐘/mg抑制％(化合物xsta)基線5.62±0.59-sta(1μm)642.80±11.60#-fpipp(50μm)81.00±14.38*～87ix(50μm)703.50±43.11*-結(jié)果表述為均值±sem。與基線組相比，#p<0.05；與sta組相比，*p<0.05；(anova，接著杜凱氏檢驗(yàn))。表6化合物xi對(duì)t84細(xì)胞中sta(1μm)引起的cgmp積累的影響(參見圖5)一種或多種化合物cgmp,pmol/10分鐘/mg抑制％(化合物xsta)基線0.02±0.01-sta(1μm)575.50±33.01#-fpipp(50μm)74.83±13.26*～86xi(50μm)171.30±31.68*～70結(jié)果表述為均值±sem。與基線組相比，#p<0.05；與sta組相比，*p<0.05；(anova，接著杜凱氏檢驗(yàn))。實(shí)施例14：確定絕對(duì)生物利用率的方案a)動(dòng)物本研究使用年齡2歲至4歲、體重在8kg至12kg之間并且在研究期間保持食物控制且給予自由飲水的雄性比格犬(beagledog)。b)動(dòng)物準(zhǔn)備犬在前爪的分叉部分剃毛，借助70％乙醇潤(rùn)濕的紗布維持現(xiàn)場(chǎng)無菌。插入21g導(dǎo)管(在靜脈內(nèi)施用方案中每個(gè)爪內(nèi)一個(gè)和在口服施用方案中單個(gè)爪)以抵達(dá)頭靜脈。根據(jù)建立的采樣時(shí)間，通過使用3ml注射器取得1.5ml血液，從動(dòng)物采集血液樣品。將樣品轉(zhuǎn)移至肝素化采集管。c)給藥途徑經(jīng)口和靜脈內(nèi)給藥研究化合物。以推注實(shí)施化合物的靜脈內(nèi)給藥，并且經(jīng)過犬的頭靜脈之一。在不同的日期，對(duì)一只犬給藥多個(gè)濃度1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg。將藥物作為膠囊中的粉末按劑量3mg/kg提供口服給藥，所述膠囊均由犬完全攝入。d)采樣時(shí)間對(duì)于靜脈內(nèi)施用，血液樣品(1.5ml)按以下預(yù)定時(shí)間間隔采集：0、0.033、0.083、0.17、0.25、0.33、0.5、1、2、3、4、6、8、12和24小時(shí)。對(duì)于口服給藥，血液樣品(1.5ml)按以下預(yù)定時(shí)間間隔采集：0、0.33、0.67、1、1.5、2、3、4和6、8、12和24小時(shí)。e)測(cè)試的化合物測(cè)試的化合物是表1中描述的ii、iv、vi和xi。f)分析方法肝素化采集管置于離心機(jī)中并在2500轉(zhuǎn)每分鐘下處理10分鐘。分離血漿并置入其他管中。通過液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法(lc-ms/ms)分析血漿。g)結(jié)果表7化合物ii、iv、vi和xi的所得結(jié)果是：對(duì)環(huán)核苷酸抑制所測(cè)試的全部四種化合物均顯示可忽略的絕對(duì)生物利用率。這些結(jié)果顯示了其治療腸道疾病的巨大治療潛力，原因是無絕對(duì)生物利用率大大減少這些化合物展示某種全身毒性的可能性。本發(fā)明的化合物，新的吡啶并嘧啶衍生物化合物，可用于人類醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)中治療患者中的疾病。根據(jù)本發(fā)明，所述化合物可以施用至需要預(yù)防和/或治療某疾病的患者。本發(fā)明還描述一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為環(huán)核苷酸合成抑制劑的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，描述了一種使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作為camp和cgmp合成抑制劑的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)抑制環(huán)核苷酸合成的用途。另外，本發(fā)明的另一個(gè)目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)之一抑制camp和cgmp合成的用途。本發(fā)明的目的還是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它們藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物(以任何比率)之一在預(yù)防性和/或治愈性治療腹瀉、結(jié)腸炎和腸易激綜合征中的用途。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12