αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及作為αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的吡咯烷化合物，包含此類化合物的藥物組合物，和它們?cè)谥委熤?尤其在治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的病癥中)的用途，化合物在制備用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的病癥的藥物中的用途，和治療和預(yù)防人中的需要αvβ6整聯(lián)蛋白的拮抗作用的病癥的方法。
發(fā)明背景
整聯(lián)蛋白超家族蛋白是由α和β亞基構(gòu)成的異源二聚細(xì)胞表面受體。已經(jīng)報(bào)道了至少18種α亞基和8種β亞基，其已經(jīng)表明形成24種不同的α/β異源二聚體。每條鏈包含大細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(對(duì)于β亞基，>640個(gè)氨基酸，對(duì)于α亞基，>940個(gè)氨基酸)，每條鏈具有約20個(gè)氨基酸的跨膜跨越區(qū)域，并且通常每條鏈具有30-50個(gè)氨基酸的短胞質(zhì)尾。不同的整聯(lián)蛋白已經(jīng)顯示參與繁多的細(xì)胞生物學(xué)，包括細(xì)胞粘附至細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞-細(xì)胞相互作用，和對(duì)細(xì)胞遷移、增殖、分化和存活的影響(barczyk等人,cellandtissueresearch,2010,339,269)。
整聯(lián)蛋白受體通過短蛋白-蛋白結(jié)合界面與結(jié)合蛋白相互作用。整聯(lián)蛋白家族可以分為在此類配體中共享相似的結(jié)合識(shí)別基序的亞家族。主要的亞家族是rgd-整聯(lián)蛋白，其識(shí)別在其蛋白序列內(nèi)含有rgd(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)基序的配體。在該亞家族中存在8種整聯(lián)蛋白，即αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、αiibβ3、α5β1、α8β1，其中命名法表明αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8共享共同的αv亞基和不同的β亞基，且αvβ1、α5β1和α8β1共享共同的β1亞基和不同的α亞基。β1亞基已經(jīng)顯示與11種不同的α亞基配對(duì)，其中只有上述列出的3種通常識(shí)別rgd肽基序(humphries等,journalofcellscience,2006,119,3901)。
8種結(jié)合rgd的整聯(lián)蛋白對(duì)不同的含有rgd的配體具有不同的結(jié)合親和力和特異性。配體包括蛋白諸如纖連蛋白、玻連蛋白、骨橋蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β1和β3(tgfβ1和tgfβ3)的潛在相關(guān)肽(lap)。與tgfβ1和tgfβ3的lap結(jié)合的整聯(lián)蛋白已經(jīng)顯示在幾個(gè)系統(tǒng)中能夠激活tgfβ1和tgfβ3生物活性，和隨后的tgfβ-驅(qū)動(dòng)的生物學(xué)(worthington等,trendsinbiochemicalsciences,2011,36,47)。這種配體的多樣性，連同結(jié)合rgd的整聯(lián)蛋白的表達(dá)模式，為疾病干預(yù)產(chǎn)生了多種機(jī)會(huì)。此類疾病包括纖維變性疾病(margadant等人,emboreports,2010,11,97)、炎性病癥、癌癥(desgrosellier等人,naturereviewscancer,2010,10,9)、再狹窄和具有血管生成組分的其它疾病(weis等人,coldspring.harb.perspect.med.2011,1,a006478)。
文獻(xiàn)中已經(jīng)公開了大量的αv整聯(lián)蛋白拮抗劑(goodman等人,trendsinpharmacologicalsciences,2012,33,405)，包括抑制劑抗體、肽和小分子。對(duì)于抗體，包括泛-αv拮抗劑英妥木單抗和abituzumab(gras,drugsofthefuture,2015,40,97)，選擇性αvβ3拮抗劑埃達(dá)珠單抗，和選擇性αvβ6拮抗劑stx-100。西侖吉肽(cilengitide)是抑制αvβ3和αvβ5兩者的環(huán)狀肽拮抗劑，且sb-267268是抑制αvβ3和αvβ5兩者的化合物的實(shí)例(wilkinson-berka等人,invest.ophthalmol.vis.sci.,2006,47,1600)。化合物充當(dāng)αv整聯(lián)蛋白的不同組合的拮抗劑的發(fā)明使得能夠產(chǎn)生且適合于特定疾病適應(yīng)癥的新藥。
肺纖維化代表幾種間質(zhì)性肺病的終末期，包括特發(fā)性間質(zhì)性肺炎，并且其特征在于細(xì)胞外基質(zhì)在肺間質(zhì)中的過度沉積。在特發(fā)性間質(zhì)性肺炎中，特發(fā)性肺纖維化(ipf)代表最常見和最致命的病癥，其在診斷后典型的存活時(shí)間為3至5年。ipf中的纖維化通常是進(jìn)行性的，當(dāng)前藥理學(xué)干預(yù)是難治的，并且不可避免地導(dǎo)致由于功能性肺泡單位的閉塞引起的呼吸衰竭。ipf在美國和歐洲影響約50萬人。
有體外實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物和ipf患者免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)支持上皮細(xì)胞限制性整聯(lián)蛋白αvβ6在tgfβ1的活化中的關(guān)鍵作用。這種整聯(lián)蛋白的表達(dá)在正常上皮組織中較低，并且在損傷的和發(fā)炎的上皮(包括ipf中的活化的上皮)中明顯上調(diào)。因此，靶向這種整聯(lián)蛋白降低了干擾更寬的tgfβ內(nèi)穩(wěn)態(tài)作用的理論可能性。已經(jīng)顯示通過抗體阻斷對(duì)αvβ6整聯(lián)蛋白的部分抑制可預(yù)防肺纖維化而不加重炎癥(horangs等人,partialinhibitionofintegrinαvβ6preventspulmonaryfibrosiswithoutexacerbatinginflammation.amjrespircritcaremed2008177：56-65)。在肺纖維化之外，αvβ6也被認(rèn)為是其他器官(包括肝和腎)的纖維化病的重要啟動(dòng)子(在hendersonnc等人,integrin-mediatedregulationoftgfβinfibrosis,biochimicaetbiophysicaacta–molecularbasisofdisease20131832：891-896中綜述)，其表明αvβ6拮抗劑可有效地治療多器官中的纖維化疾病。
與幾個(gè)結(jié)合rgd的整聯(lián)蛋白可以結(jié)合并激活tgfβ的觀察相一致，最近發(fā)現(xiàn)不同的αv整聯(lián)蛋白涉及纖維化疾病(hendersonnc等人,targetingofαvintegrinidentifiesacoremolecularpathwaythatregulatesfibrosisinseveralorgansnaturemedicine2013vol19,number12：1617-1627；sarrazyv等人,integrinsαvβ5andαvβ3promotelatenttgf-β1activationbyhumancardiacfibroblastcontractioncardiovascres2014102：407-417；minagawas等人,selectivetargetingoftgf-βactivationtotreatfibroinflammatoryairwaydiseasescitranslmed2014vol6,issue241：1-14；reedni等人,theαvβ1integrinplaysacriticalinvivoroleintissuefibrosisscitranslmed2015vol7,issue288：1-8)。因此，針對(duì)結(jié)合rgd的整聯(lián)蛋白家族的特定成員的抑制劑或具有結(jié)合rgd的整聯(lián)蛋白家族內(nèi)的特異性選擇性指紋的抑制劑可有效治療多器官中的纖維化疾病。
已經(jīng)描述了一系列針對(duì)αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8的整聯(lián)蛋白拮抗劑的sar關(guān)系(macdonald,sjf等人.structureactivityrelationshipsofαvintegrinantagonistsforpulmonaryfibrosisbyvariationinarylsubstituents.acsmedchemlett2014,5,1207-1212.19sept2014)。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供αvβ6抑制劑，優(yōu)選具有針對(duì)其它αv整聯(lián)蛋白例如αvβ1、αvβ3、αvβ5或αvβ8的活性。
發(fā)明概述
在本發(fā)明的第一方面，提供了式(i)化合物4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其鹽，更具體地，式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
式(i)化合物和它們的鹽具有αvβ6拮抗劑活性，可用于治療或預(yù)防某些疾病。
術(shù)語αvβ6拮抗劑活性包括文中的αvβ6抑制劑活性。
在本發(fā)明的第二方面，提供了包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
在本發(fā)明的第三方面，提供了用于治療(特別是治療其中需要αvβ6整聯(lián)蛋白受體拮抗劑的疾病或病癥)的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在本發(fā)明的第四方面，提供了在需要的人中治療或預(yù)防需要αvβ6整聯(lián)蛋白受體拮抗劑的疾病或病癥的方法，所述方法包括向需要的人給藥治療有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在本發(fā)明的第五方面，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白受體拮抗劑的疾病或病癥的藥物中的用途。
發(fā)明詳述
在本發(fā)明的第一方面，提供了式(i)化合物4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其鹽，更具體地，式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸的藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物具有式(ia1)：
其為(r)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物具有式(ia2)：
其為(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物具有式(ia3)：
其為(r)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物具有式(ia4)：
其為(s)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物或化合物ia1、ia2、ia3或ia4中的任一個(gè)為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸的藥學(xué)上可接受的鹽。
式(i)化合物既具有堿性胺基又具有羧酸基，因此可形成內(nèi)鹽即兩性離子。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或化合物ia1、ia2、ia3或ia4中的任一個(gè)的兩性離子鹽形式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸或化合物ia1、ia2、ia3或ia4中的任一個(gè)的非兩性離子形式。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括作為母體化合物的式(i)化合物、化合物ia1、ia2、ia3或ia4，其為兩性離子(母體化合物通過其羧酸基團(tuán)內(nèi)部質(zhì)子化，并且通常以兩性離子存在)及其鹽，例如其藥學(xué)上可接受的鹽。
對(duì)于合適鹽的綜述，參見berge等人.,j.pharm.sci.,66：1-19,(1977)。合適的藥學(xué)上可接受的鹽列于phstahlandcgwermuth,editors,handbookofpharmaceuticalsalts；properties,selectionanduse,weinheim/zurich：wiley-vch/vhca,2002。合適的藥學(xué)上可接受的鹽可以包括與無機(jī)酸的酸加成鹽，所述無機(jī)酸諸如，例如鹽酸、氫溴酸、正磷酸、硝酸、磷酸、或硫酸，或與有機(jī)酸的酸加成鹽，所述有機(jī)酸諸如，例如甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、水楊酸、馬來酸、甘油磷酸、酒石酸、苯甲酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯磺酸、萘磺酸諸如2-萘磺酸、己酸或乙酰水楊酸，特別是馬來酸。通常，藥學(xué)上可接受的鹽適當(dāng)時(shí)可以通過使用期望的酸或堿容易地制備。所得鹽可以從溶液中沉淀出來且通過過濾來收集或可以通過蒸發(fā)溶劑來回收。
其它非藥學(xué)上可接受的鹽，例如甲酸鹽、草酸鹽或三氟乙酸鹽可以用于例如分離式(i)化合物，且包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可以通過式(i)化合物與合適的有機(jī)堿(例如三乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、膽堿、精氨酸、賴氨酸或組氨酸)，任選在合適的溶劑中反應(yīng)來形成，以得到堿加成鹽，所述堿加成鹽通常例如通過結(jié)晶和過濾來分離。藥學(xué)上可接受的無機(jī)堿鹽包括銨鹽，堿金屬鹽，諸如鈉和鉀的鹽，堿土金屬鹽，諸如鈣和鎂的鹽，和與有機(jī)堿的鹽，包括伯胺、仲胺和叔胺(諸如異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己胺和n-甲基-d-葡萄糖胺)的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物為母體化合物的形式，例如4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括式(i)化合物的鹽的所有可能的化學(xué)計(jì)量和非化學(xué)計(jì)量形式。
式(i)化合物可以呈晶體或無定形形式。此外，一些式(i)化合物的晶體形式可以作為多晶型體存在，其包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。式(i)化合物的多晶型形式可以使用多種常規(guī)分析技術(shù)表征和區(qū)分，所述分析技術(shù)包括但不限于，x-射線粉末衍射(xrpd)圖譜、紅外(ir)光譜、拉曼光譜、差示掃描量熱(dsc)、熱重分析(tga)和固態(tài)核磁共振(ssnmr)。
式(i)化合物還可以使用噴霧干燥的分散(sdd)方法制備聚合物基質(zhì)中的無定形分子分散體，例如乙酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯，以改善藥物的穩(wěn)定性和溶解性。
式(i)化合物還可以使用液體包封技術(shù)遞送，以改善液體或半固體填充的硬膠囊或軟明膠膠囊形式的性質(zhì)，例如生物利用度和穩(wěn)定性。
應(yīng)當(dāng)理解的是，許多有機(jī)化合物可以與它們?cè)谄渲蟹磻?yīng)或者它們從其中沉淀或結(jié)晶的溶劑形成復(fù)合物。這些復(fù)合物被稱為“溶劑合物”。例如，與水的復(fù)合物被稱為“水合物”。具有高沸點(diǎn)和/或能夠形成氫鍵的溶劑，諸如水、二甲苯、n-甲基吡咯烷酮、甲醇和乙醇可用于形成溶劑合物。用于鑒定溶劑合物的方法包括但不限于nmr和微量分析。應(yīng)當(dāng)理解，結(jié)晶形式任選地可以溶劑化以形成例如藥學(xué)上可接受的溶劑合物，例如水合物，其可以是化學(xué)計(jì)量的水合物以及含有可變量的水的化合物。溶劑合物包括化學(xué)計(jì)量的溶劑合物和非化學(xué)計(jì)量的溶劑合物。式(i)化合物可以以溶劑合物或非溶劑合物形式存在。
本文所述的化合物含有兩個(gè)不對(duì)稱中心，使得可以形成光學(xué)異構(gòu)體，例如非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體。因此，本發(fā)明包括式(i)化合物的異構(gòu)體，無論是作為分離的單一異構(gòu)體(例如基本上不含其它異構(gòu)體)(即純的)或作為混合物。分離的單一異構(gòu)體(例如基本上不含其它異構(gòu)體)(即純的)可以分離，使得存在小于10％，特別是小于約1％，例如小于約0.1％的另一種異構(gòu)體。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，某些非對(duì)映異構(gòu)體的活性可以小于其它非對(duì)映異構(gòu)體，且單一非對(duì)映異構(gòu)體的活性可以低于選擇的限值。
異構(gòu)體的分離可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)(例如，通過分步結(jié)晶、色譜法、hplc或這些技術(shù)的組合)來實(shí)現(xiàn)。
式(i)化合物可以幾種互變異構(gòu)形式之一存在。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明涵蓋式(i)化合物的所有互變異構(gòu)體，無論是作為單一互變異構(gòu)體或其混合物。
從上述應(yīng)當(dāng)理解的是，式(i)化合物及其鹽的溶劑合物、異構(gòu)體和多晶型形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
化合物制備
本發(fā)明的化合物可以通過各種方法(包括標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)法)制備。任何先前定義的變量將繼續(xù)具有先前定義的含義，除非另有說明。下面闡述說明性的一般合成方法，然后在工作實(shí)施例中制備本發(fā)明的具體化合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可以以兩種幾何異構(gòu)體存在的一些中間體化合物的(e)或(z)描述可以包含作為次要組分的另一幾何異構(gòu)體。
結(jié)構(gòu)式(i)化合物可以通過以下方法制備，所述方法涉及首先脫保護(hù)結(jié)構(gòu)式(ii)的化合物，即切割酯基，隨后任選轉(zhuǎn)化為鹽：
其中r2為c1-c6烷基，例如叔丁基、乙基或甲基。或者，r2為手性烷基，例如(-)-薄荷基[(1r,2s,5r)-2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇]。
本發(fā)明的第六個(gè)方面提供了式(ii)的化合物。
結(jié)構(gòu)式(ii)的化合物(其中r2為甲基、乙基、手性烷基如薄荷基或叔丁基)的脫保護(hù)可以通過在惰性溶劑(諸如二氯甲烷、2-甲基-四氫呋喃、四氫呋喃、1,4-二噁烷或環(huán)戊基甲基醚或水)中使用例如鹽酸、氫溴酸、硫酸或三氟乙酸的酸水解來完成。
或者，結(jié)構(gòu)式(ii)的化合物(其中r2為甲基、乙基、手性烷基如薄荷基)的脫保護(hù)可以通過在合適的溶劑(諸如含水溶劑如甲醇水溶液)中使用例如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀的堿水解來完成。
切割酯基團(tuán)之后，所得產(chǎn)物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法轉(zhuǎn)化為所需的鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，兩性離子至鹽酸鹽的轉(zhuǎn)化通過用鹽酸水溶液處理兩性離子在惰性有機(jī)溶劑如乙腈或丙酮中的溶液，濃縮所得鹽溶液并從乙腈中結(jié)晶來實(shí)現(xiàn)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，兩性離子至馬來酸鹽的轉(zhuǎn)化通過用馬來酸的水溶液處理兩性離子的乙腈溶液，將所得溶液加熱至40℃并使其冷卻至5℃以發(fā)生結(jié)晶來實(shí)現(xiàn)。
結(jié)構(gòu)式(ii)的化合物可以由結(jié)構(gòu)式(iii)的化合物通過與結(jié)構(gòu)式(iv)的硼酸化合物反應(yīng)來獲得：
其中r2如上所定義。
或者，可以使用硼酸酯，例如頻哪醇酯，其原位提供母體硼酸。結(jié)構(gòu)式(iv)的化合物可商購獲得，例如購自enaminellc,princetoncorporateplaza,7deerparkdriveste.17-3,monmouthjct.nj(usa)08852,manchesterorganicsorfluorochem。結(jié)構(gòu)式(iii)和(iv)的化合物之間的反應(yīng)可以在合適的催化劑如銠催化劑(例如(1,5-環(huán)辛二烯)氯化銠(i)的二聚體[rh(cod)cl]2)和添加劑如膦配體(例如雙(二苯基膦基)-1,1'-聯(lián)萘(binap))存在下，優(yōu)選在堿如氫氧化鉀水溶液存在下，在升高的溫度例如50-90℃，在水易混溶性溶劑如1,4-二噁烷中進(jìn)行。優(yōu)選反應(yīng)在嚴(yán)格的無氧條件下進(jìn)行，其中反應(yīng)混合物用惰性氣體如氮?dú)獯祾?，并在減壓下抽空，重復(fù)該抽真空和用氮?dú)獯祾呷巍Ｔ摲磻?yīng)生成異構(gòu)體的混合物，通常比例為1:1。產(chǎn)生的異構(gòu)體的混合物可以通過色譜法、hplc或通過結(jié)晶分離。不對(duì)稱合成可以通過在基于銠化合物的催化劑的存在下，包含手性配體2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯(lián)萘(“binap”)的一個(gè)對(duì)映異構(gòu)體來實(shí)現(xiàn)。結(jié)構(gòu)式(iii)的化合物中雙鍵的幾何結(jié)構(gòu)可以是(e)或(e)和(z)異構(gòu)體的混合物，優(yōu)選是純的(e)異構(gòu)體。
式(iii)化合物的一個(gè)對(duì)映異構(gòu)體與式(iv)化合物之間的反應(yīng)產(chǎn)生約1:1比例的兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體，其可通過結(jié)晶、色譜法或hplc分離。優(yōu)選的分離方法是在手性載體如chiralpak或chiralcel柱上的手性hplc。在約10％的添加劑如(r)-(+)-2,2′-雙(二苯基膦基)-1,1′-聯(lián)萘[(r)-binap]的存在下，所形成的非對(duì)映異構(gòu)體的比例可以大幅增加至例如約80:20或更高，其提供作為主要異構(gòu)體的生物學(xué)上更具活性的非對(duì)映異構(gòu)體。
或者，本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇的化合物(iii)與不同手性的r2基團(tuán)、配體、硼酸(iv)、催化劑和溶劑的各種組合或通過篩選大量組合可提供較高比例的非對(duì)映異構(gòu)體。
非對(duì)映異構(gòu)體比例可以通過手性hplc或通過結(jié)晶進(jìn)一步增加至例如大于99:1。
結(jié)構(gòu)式(iii)的化合物可以由結(jié)構(gòu)式(v)的化合物通過下列方法與結(jié)構(gòu)式(vi)的化合物(其中r2如上所定義)反應(yīng)來獲得：
在有機(jī)堿例如n,n-二異丙基乙胺(“dipea”)和合適的基于鈀的催化劑例如pdcl2(dppf)-ch2cl2[1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)二氯甲烷復(fù)合物存在下，在溶劑如二氯甲烷中進(jìn)行。式(v)的化合物可以用作母體化合物，或者在叔胺堿存在下由鹽(例如二鹽酸鹽)原位產(chǎn)生。
結(jié)構(gòu)式(vi)的化合物可以通過本文所述的方法制備。通過說明的方式，結(jié)構(gòu)式(vi)的化合物(其中r2是甲基)與具有(e)幾何結(jié)構(gòu)的雙鍵可以通過以下所示的方法制備：在升高的溫度如50℃，由市售的4-溴巴豆酸甲酯和乙酸鈉或乙酸鉀在乙腈中的溶液開始：
結(jié)構(gòu)式(v)的化合物可以由結(jié)構(gòu)式(vii)的化合物通過例如在惰性溶劑(如乙醇或乙酸乙酯)中，使用沉積在碳上的鈀催化劑的催化氫解來制備：
結(jié)構(gòu)式(vii)的化合物可以由結(jié)構(gòu)式(viii)的化合物通過二酰亞胺還原獲得，例如由苯磺酰肼在堿(例如碳酸鉀)存在下，在合適的溶劑(例如dmf)中，并在升高的溫度(如130℃)進(jìn)行：
結(jié)構(gòu)式(viii)的化合物以幾何異構(gòu)體例如(e)或(z)-形式存在，并且可以作為純異構(gòu)體或作為混合物使用。結(jié)構(gòu)式(viii)的化合物可以由已知可商購獲得的結(jié)構(gòu)式(ix)化合物(例如得自wuxiapptec,288futezhongroad,waigaoquiaofreetrade,shanghai200131,china)開始進(jìn)行制備，所述結(jié)構(gòu)式(ix)化合物可以例如用吡啶中的三氧化硫氧化成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(x)的醛：
然后可以將結(jié)構(gòu)式(x)的化合物(可以不用分離式(x)的化合物)與結(jié)構(gòu)式(xi)的葉立德反應(yīng)：
從而形成以幾何異構(gòu)體(e)和(z)的混合物形式存在的式(viii)化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，存在從醛(x)形成式(viii)化合物的其它方法。幾何異構(gòu)體可以通過色譜法分離或在下一步驟中作為混合物使用。制備結(jié)構(gòu)式(i)化合物的總體方案概述在下面的方案(i)中：
方案(i)
結(jié)構(gòu)式(xi)的葉立德可以由式(xii)的化合物(購自fluorochem)開始，其通過首先與鹽酸反應(yīng)，隨后用碳酸氫鈉中和，然后可以轉(zhuǎn)化為結(jié)構(gòu)式(xiii)的醛：
其可以使用硼氫化鈉還原成相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(xiv)的醇：
(也參見us-a-20040092538中公開的用于制備式(xiv)的醇的途徑)，然后可將其例如使用三溴化磷溴化以制備相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式(xv)的溴化合物：
所述結(jié)構(gòu)式(xv)的溴化合物可以通過在溶劑(例如乙腈)中與三苯基膦反應(yīng)轉(zhuǎn)化為三苯基溴化鏻(xvi)。
結(jié)構(gòu)式(xi)的上述葉立德化合物可以通過使結(jié)構(gòu)式(xvi)的化合物與堿(例如叔丁醇鉀)在惰性溶劑(例如thf)中的溶液的反應(yīng)獲得。結(jié)構(gòu)式(xi)的葉立德可以分離或優(yōu)選原位形成，并且在相同容器中與結(jié)構(gòu)式(x)的醛反應(yīng)，而不預(yù)先分離。
制備結(jié)構(gòu)式(xi)的葉立德的總體方案總結(jié)在如下的方案(ii)中：
方案(ii)
式(ix)的化合物的兩種可商購的對(duì)映異構(gòu)體中的每一個(gè)提供了式(i)化合物的一個(gè)主要的非對(duì)映異構(gòu)體，其比相應(yīng)的次要的非對(duì)映異構(gòu)體更有效。
應(yīng)當(dāng)理解，在上述任何路線中，保護(hù)一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)可能是有利的。保護(hù)基的實(shí)例及其去除的方法可以在t.w.greene‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(3rdedition,j.wileyandsons,1999)中找到。合適的胺保護(hù)基包括?；?例如乙?；?、氨基甲酸酯(例如2',2',2'-三氯乙氧基羰基、芐氧基羰基或叔丁氧基羰基)和芳烷基(例如芐基)，所述胺保護(hù)基可視情況通過水解(例如使用酸如氯化氫的二噁烷溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液)或還原(例如芐基或芐氧基羰基的氫解，或使用鋅的乙酸溶液還原除去2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基)除去。其它合適的胺保護(hù)基包括三氟乙?；?-cocf3)，其可通過堿催化水解除去。
應(yīng)當(dāng)理解，在上述任何途徑中，將各種基團(tuán)和部分引入分子的合成步驟的精確順序可以改變。確保在該方法的一個(gè)階段引入的基團(tuán)或部分不受隨后的轉(zhuǎn)化和反應(yīng)的影響，相應(yīng)地，選擇合成步驟的順序在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍內(nèi)。
式(iii)、(v)至(viii)、(x)、(xi)、(xv)和(xvi)的化合物也被認(rèn)為是新的并因此形成本發(fā)明的另一方面。
式(i)化合物的絕對(duì)構(gòu)型可以按照由已知絕對(duì)構(gòu)型的中間體的獨(dú)立對(duì)映選擇性合成獲得?；蛘?，對(duì)映體純的式(i)化合物可以轉(zhuǎn)化為其絕對(duì)構(gòu)型已知的化合物。在任一情況下，分析型hplc柱上的譜圖數(shù)據(jù)，旋光性和保留時(shí)間的比較可用于確認(rèn)絕對(duì)構(gòu)型。第三種可能的選擇是通過x射線晶體學(xué)確定絕對(duì)構(gòu)型。
使用方法
式(i)化合物及其鹽具有αv整聯(lián)蛋白拮抗劑活性、特別是αvβ6受體活性，因此在治療需要αvβ6拮抗劑的疾病或病癥中具有潛在的用途。
因此本發(fā)明提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療。式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的疾病或病癥。
因此本發(fā)明提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的疾病或病癥。
還提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的疾病或病癥的藥物中的用途。
還提供了在有需要的受試者中治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的疾病或病癥的方法，其包括給藥治療有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
合適地，有需要的受試者是哺乳動(dòng)物，特別是人。
如本文所使用的術(shù)語“有效量”是指將引發(fā)例如研究人員或臨床醫(yī)師尋求的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的藥物或藥劑的量。此外，術(shù)語“治療有效量”是指與沒有接受此量的相應(yīng)受試者相比，導(dǎo)致疾病、病癥或副作用的改進(jìn)的治療、治愈、預(yù)防或減輕，或疾病或病癥的進(jìn)展速率降低的任何量。該術(shù)語在其范圍內(nèi)還包括有效增強(qiáng)正常生理功能的量。
纖維變性疾病涉及修復(fù)或反應(yīng)過程中的器官或組織中過量纖維性結(jié)締組織的形成。αvβ6拮抗劑可用于治療各種此類疾病或病癥，包括依賴于αvβ6整聯(lián)蛋白功能和經(jīng)由αv整聯(lián)蛋白活化轉(zhuǎn)化生長因子β的那些。疾病可以包括但不限于肺纖維化(例如，特發(fā)性肺纖維化、非特異性間質(zhì)性肺炎(nsip)、普通型間質(zhì)性肺炎(uip)、hermansky-pudlak綜合征、進(jìn)行性大塊纖維化(煤礦工人的塵肺病的并發(fā)癥)、結(jié)締組織病相關(guān)的肺纖維化、哮喘和copd中的氣道纖維化、ards相關(guān)的纖維化、急性肺損傷；輻射誘導(dǎo)的纖維化；家族性肺纖維化；肺動(dòng)脈高壓)；腎纖維化(糖尿病腎病、iga腎病、狼瘡性腎炎；局灶節(jié)段性腎小球硬化(fsgs)、移植腎病、自身免疫性腎病、藥物誘導(dǎo)的腎病、高血壓相關(guān)的腎病、腎源性系統(tǒng)纖維化)；肝纖維化(病毒誘導(dǎo)的纖維化(例如，丙型肝炎或乙型肝炎)、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝疾病(包括非酒精性脂肪性肝炎(nash)、先天性肝纖維化、原發(fā)性硬化性膽管炎、藥物誘導(dǎo)的肝炎、肝硬化)；皮膚纖維化(增生性瘢痕、硬皮病、瘢痕疙瘩、皮肌炎、嗜酸性筋膜炎、dupytrens攣縮、ehlers-danlos綜合征、peyronie氏病、營養(yǎng)不良性大皰性表皮松解(epidermolysisbullosadystrophica)、口腔粘膜下纖維化)；眼部纖維化(年齡相關(guān)性黃斑變性(amd)、糖尿病性黃斑水腫、干眼癥、青光眼)、角膜瘢痕、角膜損傷和角膜傷口愈合、預(yù)防小梁切除術(shù)后的濾泡瘢痕；心臟纖維化(充血性心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心內(nèi)膜心肌纖維化、肥大性心肌病(hcm))和其它混雜纖維化病癥(縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜后纖維化、克羅恩病、神經(jīng)纖維瘤病、子宮肌瘤(纖維瘤)、慢性器官移植排斥)。αvβ1、αvβ5或αvβ8整聯(lián)蛋白的額外抑制作用可存在額外的益處。
此外，還可以治療與αvβ6整聯(lián)蛋白相關(guān)的癌前期病變或癌癥(這些可以包括但不限于：子宮內(nèi)膜癌、基底細(xì)胞癌、肝癌、結(jié)腸癌、子宮頸癌、口腔癌、胰腺癌、乳腺和卵巢癌、卡波西肉瘤、巨細(xì)胞腫瘤和與基質(zhì)相關(guān)的癌癥)?？梢缘靡嬗趯?duì)血管生成的影響的病癥也可受益(例如實(shí)體瘤)。
術(shù)語“需要αvβ6拮抗劑的疾病或病癥”意欲包括任何或所有上述疾病狀態(tài)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述需要αvβ6拮抗劑的疾病或病癥為特發(fā)性肺纖維化。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述需要αvβ6拮抗劑的疾病或病癥選自角膜瘢痕，角膜損傷和角膜傷口愈合。
組合物
在治療中使用時(shí)，盡管式(i)化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽可以作為原料化學(xué)品給藥，但其通常作為藥物組合物的活性成分存在。
因此本發(fā)明在另外方面提供了包含式(i)化合物或藥學(xué)上可接受的鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑的藥物組合物。式(i)化合物和藥學(xué)上可接受的鹽如上所述。載體、稀釋劑或賦形劑在與組合物的其它成分相容且對(duì)其接受者無害的意義上必須是可接受的。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，還提供了用于制備藥物組合物的方法，其包括混合物式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。所述藥物組合物可以用于治療本文所述的任何疾病。
進(jìn)一步提供了用于治療需要αvβ6整聯(lián)蛋白拮抗劑的疾病或病癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
進(jìn)一步提供了包含0.01至3000mg式(i)化合物或其藥用鹽和0.1至2g的一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
由于式(i)化合物意欲用于藥物組合物中，容易理解的是，它們各自優(yōu)選以基本上純的形式提供，例如，至少60％純，更合適地至少75％純，優(yōu)選至少85％純，尤其是至少98％純(基于重量的重量％)。
藥物組合物可以每個(gè)單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式呈現(xiàn)。優(yōu)選的單位劑量組合物是含有每日劑量或亞劑量或其適當(dāng)部分的活性成分的組合物。此類單位劑量可以因此一天給藥多于一次。優(yōu)選的單位劑量組合物是含有如上文所述的每日劑量或亞劑量(用于一天給藥多于一次)或其適當(dāng)部分的活性成分的那些組合物。
藥物組合物可以適于通過任何適當(dāng)?shù)耐緩?，例如通過口服(包括口腔或舌下)、直腸，吸入，鼻內(nèi)，局部(包括口腔、舌下或經(jīng)皮)，陰道、眼睛或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或真皮內(nèi))途徑來給藥。此類組合物可以通過藥劑領(lǐng)域中已知的任何方法來制備，例如通過使活性成分與載體或賦形劑結(jié)合在一起。
在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物適于口服給藥。
適于口服給藥的藥物組合物可以呈現(xiàn)為離散的單元，諸如膠囊或片劑；粉末或顆粒劑；水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；可食性泡沫或泡劑(whip)；或者水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。
例如，對(duì)于片劑或膠囊形式的口服給藥，活性藥物成分可以與口服的非毒性的藥學(xué)上可接受的惰性載體(諸如乙醇、甘油、水等)組合。適于引入片劑或膠囊的粉末可以通過將化合物降低至適當(dāng)?shù)募?xì)度(例如通過微粉化)且與類似地制備的藥物載體(諸如可口服的碳水化合物，如例如，淀粉或甘露醇)混合而制備。調(diào)味劑、防腐劑、分散劑和著色劑也可以存在。
膠囊可以通過制備如上所述的粉末混合物且填充形成的膠囊殼而制備。助流劑和潤滑劑(諸如膠體二氧化硅、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇)可以在填充操作之前添加至粉末混合物。也可以添加崩解劑或增溶劑(諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉)以改善攝入膠囊時(shí)的藥物的可利用度。
此外，當(dāng)期望或必要時(shí)，合適的粘合劑、助流劑、潤滑劑、甜味劑、調(diào)味劑、崩解劑和著色劑也可以摻入混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(諸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然和合成的膠(諸如阿拉伯膠、黃芪膠或藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。
在這些劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土、黃原膠等。片劑通過，例如，制備粉末混合物，制粒或壓制，添加潤滑劑和崩解劑且壓制成片而配制。粉末混合物通過混合適當(dāng)?shù)胤鬯榈幕衔锱c如上所述的稀釋劑或基質(zhì)及任選地粘合劑(諸如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解延遲劑(諸如石蠟)、吸收加速劑(諸如季鹽)和/或吸收劑(諸如皂土、高嶺土或磷酸二鈣)而制備。粉末混合物可以通過用粘合劑諸如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠漿(acadiamucilage)或者纖維素物質(zhì)或聚合物的溶液潤濕且強(qiáng)制通過篩網(wǎng)而制粒。作為制粒的替代方式，粉末混合物可以通過壓片機(jī)，因此將未完全成形的小塊破碎成粒。顆粒可以通過添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油的方式被潤滑以防止粘結(jié)到成片模上。潤滑的混合物隨后被壓成片。本發(fā)明的化合物也可以與自由流動(dòng)的惰性載體組合且被直接壓成片而不經(jīng)過制?；虺蓧K步驟?？梢蕴峁┯上x膠的密封層、糖或聚合材料的包衣和蠟的上光包衣組成的透明或不透明的保護(hù)性包衣?？梢詫⑷玖咸砑又吝@些包衣中以區(qū)分不同的單位劑型。
口服液(諸如溶液、糖漿和酏劑)可以被制備成劑量單位形式，使得給定量含有預(yù)定量的化合物。糖漿可以通過將化合物溶解在適當(dāng)調(diào)味的水性溶液中制備，而酏劑通過利用非毒性醇媒介物來制備。懸浮液可以通過將化合物分散于非毒性媒介物中來配制。也可以添加增溶劑和乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、調(diào)味添加劑(諸如薄荷油)或者天然甜味劑或糖精或其它人造甜味劑等。
適當(dāng)時(shí)，用于口服給藥的劑量單位組合物可以是微囊包封的。該制劑也可以通過例如在聚合物、蠟等中包衣或包埋微粒材料而制備以延長或持續(xù)釋放。
本發(fā)明的化合物也可以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的形式(諸如小單層囊泡、大單層囊泡和多層囊泡)來給藥。脂質(zhì)體可由多種磷脂(諸如膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿)形成。
適合經(jīng)皮給藥的藥物組合物可以呈現(xiàn)為離散的貼劑，其目的是保持與接受者的表皮緊密接觸延長的一段時(shí)間。
適合局部給藥的藥物組合物可以配制為軟膏、霜?jiǎng)?、懸浮液、乳液、粉末、溶液、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油。
對(duì)于眼或其他外部組織(例如口和皮膚)的治療，組合物優(yōu)選以局部軟膏劑或乳膏劑的形式給藥。當(dāng)配制為軟膏劑時(shí)，活性成分可以與石蠟基的軟膏基質(zhì)或與水混溶的軟膏基質(zhì)一起使用?？蛇x地，可以使用水包油乳膏基質(zhì)或油包水基質(zhì)將活性成分配制入乳膏劑中。本發(fā)明的化合物可以作為局部滴眼劑給藥。本發(fā)明的化合物可以通過結(jié)膜下、前房內(nèi)或玻璃體內(nèi)途徑給藥，這將需要比每日給藥更長的給藥間隔。
適于局部給藥至眼的藥物組合物包括滴眼劑，其中活性成分溶于或混懸于適合的載體特別是含水溶劑中。給藥至眼的制劑應(yīng)具有眼科上相容的ph和重量摩爾滲透壓濃度?？梢詫⒁环N或多種眼科上可接受的ph調(diào)節(jié)劑和/或緩沖液包括入本發(fā)明的組合物中，其包括酸例如乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和鹽酸；堿例如氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉和乳酸鈉；和緩沖液例如檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉和氯化銨。所包括的這樣的酸、堿和緩沖液的量可以為將組合物的ph保持在眼科上可接受的范圍內(nèi)所需的量。一種或多種眼科上可接受的鹽可以足以使組合物的重量摩爾滲透壓濃度達(dá)到眼科可接受的范圍的量包括在組合物中。這樣的鹽包括具有鈉、鉀或銨陽離子和氯化物、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氫根、硫酸根、硫代硫酸根或亞硫酸氫根陰離子的那些。
眼部遞送設(shè)備可以經(jīng)設(shè)計(jì)用于以多種限定的釋放速率和持續(xù)的劑量動(dòng)力學(xué)和滲透性控制釋放一種或多種治療劑?？梢酝ㄟ^引入具有能夠增強(qiáng)藥物擴(kuò)散、侵蝕、溶解和滲透的聚合物分子量、聚合物結(jié)晶度、共聚物比例、加工條件、表面加工、幾何形狀、賦形劑添加和聚合物涂層的不同選擇和性質(zhì)的生物可降解的/生物可蝕的聚合物(例如聚(乙烯乙烯基)乙酸酯(eva)、超水解的pva)、羥基烷基纖維素(hpc)、甲基纖維素(mc)、羥基丙基甲基纖維素(hpmc)、聚己內(nèi)酯、聚(乙醇)酸、聚(乳)酸、聚酸酐而設(shè)計(jì)聚合物基質(zhì)，從而可以獲得控制釋放。
用于使用眼部設(shè)備進(jìn)行藥物遞送的制劑可以組合適于所示的給藥途徑的一種或多種活性劑和佐劑。例如，活性劑可以與任何藥學(xué)上可接受的賦形劑、乳糖、蔗糖、淀粉粉末、醇酸的纖維素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉鹽和鈣鹽、阿拉伯膠、明膠、海藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷、和/或聚乙烯醇共混，壓片或包囊用于常規(guī)給藥?？蛇x地，化合物可以溶于聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纖維素膠體溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黃蓍膠和/或多種緩沖液中。化合物還可以與具有時(shí)間延遲性質(zhì)的生物可降解的和生物不可降解的聚合物、和載體或稀釋劑混合。生物可降解的組合物的代表性的實(shí)例可以包括白蛋白、明膠、淀粉、纖維素、右旋糖、多糖、聚(d,l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羥基丁酸酯)、聚(烷基碳酸酯)和聚(原酸酯)及其混合物。生物不可降解的聚合物的實(shí)例可以包括eva共聚物，硅橡膠和聚(丙烯酸甲酯)及其混合物。
用于眼部遞送的藥物組合物還包括可原位膠凝的含水組合物。這樣的組合物包含膠凝劑，其濃度足以在與眼或淚液接觸時(shí)促進(jìn)膠凝。適合的膠凝劑包括但不限于熱固化的聚合物。在給藥至眼時(shí)，此處使用的術(shù)語“可原位膠凝”不僅包括與眼接觸或與淚液接觸時(shí)形成凝膠的低粘度的液體，而且還包括更粘的液體例如顯示出大幅增加粘度或凝膠剛性的半流體的和觸變的凝膠。參見例如ludwig(2005)adv.drugdeliv.rev.3；57：1595-639，由于其對(duì)于用于眼部藥物遞送的聚合物的實(shí)例的教導(dǎo)的目的，將其在此處并入本文作為參考。
適合在口中局部給藥的藥物組合物包括糖錠劑、軟錠劑和漱口劑。
適合直腸給藥的藥物組合物可以呈現(xiàn)為栓劑或灌腸劑。
用于經(jīng)鼻或吸入給藥的劑型可以方便地配制為氣溶膠、溶液劑、懸浮劑、凝膠劑或干粉劑。
適合陰道給藥的藥物組合物可以呈現(xiàn)為陰道栓劑、衛(wèi)生棉條、霜?jiǎng)?、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑。
適合腸胃外給藥的藥物組合物包括水性和非水性無菌注射溶液，其可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使組合物與預(yù)期的接受者的血液等滲的溶質(zhì)；和水性和非水性無菌懸浮液，其可以包括懸浮劑和增稠劑。組合物可以呈現(xiàn)于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以在冷凍干燥(凍干)條件下保存，其只需要在臨使用前添加無菌液體載體，例如注射用水。即配注射溶液和懸浮液可以由無菌粉末、顆粒和片劑制備。
適于皮下或肌內(nèi)給藥的藥物組合物包括聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)共聚物以形成含有活性藥物成分的微粒，以提供持續(xù)釋放。
本發(fā)明化合物的治療有效量依賴于許多因素，包括例如受試者的年齡和體重、需要治療的確切的病癥和其嚴(yán)重度、制劑的性質(zhì)和給藥途徑，且最終決定于經(jīng)治醫(yī)師或獸醫(yī)的判斷。在藥物組合物中，用于口服或腸胃外給藥的每個(gè)劑量單位優(yōu)選地含有0.01-3000mg，更優(yōu)選0.1-2000mg本發(fā)明化合物，以兩性離子母體化合物計(jì)算。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的化合物可以每日劑量(對(duì)于成人患者)的式(i)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽給藥，例如每天0.01mg至3000mg或每天0.5mg至1000mg的口服或腸胃外劑量，以兩性離子計(jì)算。該量可以每日單一劑量給予，或者更通常以采用每日許多(諸如二、三、四、五或六次)亞劑量給予，使得每日總劑量是相同的。式(i)化合物的鹽的有效量可以作為化合物本身的有效量的比例而確定。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或與其它治療劑組合使用。因此根據(jù)本發(fā)明的組合治療包括給藥至少一種式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及使用至少一種其它藥學(xué)活性劑。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合治療包括給藥至少一種式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及至少一種其它藥學(xué)活性劑。本發(fā)明的化合物和其它藥物活性劑可以在單一藥物組合物中一起給藥或分開給藥，當(dāng)分開給藥時(shí)，這可以同時(shí)或以任何順序相繼給藥。選擇本發(fā)明的化合物和其它藥學(xué)活性劑的量以及相對(duì)給藥時(shí)機(jī)以獲得預(yù)期的組合療效。
因此，在另一方面，提供了包含本發(fā)明的化合物和至少一種其它藥學(xué)活性劑的組合。
因此，在一個(gè)方面，根據(jù)本發(fā)明的化合物和藥物組合物可以與一種或多種其它治療劑組合使用，或者可包含一種或多種其它治療劑，所述治療劑包括用于過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病，抗纖維化療法和用于呼吸道阻塞疾病的療法，或用于糖尿病眼病的療法，以及用于角膜瘢痕形成、角膜損傷和角膜傷口愈合的療法。
抗過敏療法包括抗原免疫治療(例如蜂毒、花粉、牛奶、花生、cpg基序、膠原、細(xì)胞外基質(zhì)的其它組分的組分或片段，其可作為口服或舌下抗原給藥)、抗組胺藥(例如西替利嗪、氯雷他定、阿伐斯汀、非索非那定(fexofenidine)、撲爾敏)，和皮質(zhì)類固醇(例如丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松、二丙酸倍氯米松、布地奈德、環(huán)索奈德、糠酸莫米松、曲安奈德、氟尼縮松、潑尼松龍、氫化可的松)。
抗炎療法包括nsaid(例如阿司匹林、布洛芬、萘普生)、白細(xì)胞三烯調(diào)節(jié)劑(例如孟魯司特、扎魯司特、普侖司特)和其它抗炎療法(例如inos抑制劑、類胰蛋白酶抑制劑、ikk2抑制劑、p38抑制劑(洛吡莫德、dilmapimod)、彈性蛋白酶抑制劑、β2激動(dòng)劑、dp1拮抗劑、dp2拮抗劑、pi3kδ抑制劑、itk抑制劑、lp(溶血磷脂酸)抑制劑或flap(5-脂氧合酶激活蛋白)抑制劑(例如3-(3-(叔丁基硫基)-1-(4-(6-乙氧基吡啶-3-基)芐基)-5-((5-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-1h-吲哚-2-基)-2,2-二甲基丙酸鈉)；腺苷a2a激動(dòng)劑(例如腺苷和瑞加諾生)、趨化因子拮抗劑(例如ccr3拮抗劑或ccr4拮抗劑)、介質(zhì)釋放抑制劑。
自身免疫性疾病的療法包括dmards(例如甲氨蝶呤、來氟米特、硫唑嘌呤)、生物療法(例如抗-ige、抗-tnf、抗白細(xì)胞介素(例如抗-il-1、抗-il-6、抗-il-12、抗-il-17、抗-il-18))、受體療法(例如依那西普和類似的藥劑)；抗原非特異性免疫療法(例如干擾素或其它細(xì)胞因子/趨化因子、細(xì)胞因子/趨化因子受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子激動(dòng)劑或拮抗劑、tlr激動(dòng)劑和類似的藥劑)。
其它抗纖維化療法可用于組合中，包括tgfβ合成的抑制劑(例如吡非尼酮)，靶向血管內(nèi)皮生長因子(vegf)、血小板衍生的生長因子(pdgf)和成纖維細(xì)胞生長因子(fgf)受體激酶的酪氨酸激酶抑制劑(例如nintedanib(bibf-1120)和甲磺酸伊馬替尼(gleevec))，內(nèi)皮素受體拮抗劑(例如安立生坦或馬西替坦)，抗氧化劑(例如n-乙酰半胱氨酸(nac)；廣譜抗生素(例如磺胺甲基異噁唑，四環(huán)素(鹽酸米諾環(huán)素))，磷酸二酯酶5(pde5)抑制劑(例如西地那非)，抗-αvβx抗體和藥物(例如抗-αvβ6單克隆抗體(例如wo2003100033a2中所述的那些)；英妥木單抗；西侖吉肽)。
阻塞性氣道疾病的療法包括支氣管擴(kuò)張劑，例如短效β2-激動(dòng)劑(例如沙丁胺醇)，長效β2-激動(dòng)劑(例如沙美特羅、福莫特羅和維蘭特羅)，短效毒蕈堿拮抗劑(例如異丙托溴銨)，長效毒蕈堿拮抗劑(例如噻托溴銨，蕪地溴銨)。
在一些實(shí)施方案中，治療還可以包括本發(fā)明的化合物與其它現(xiàn)有治療模式的組合，例如用于治療糖尿病性眼病的現(xiàn)有藥劑，例如抗vegf治療劑例如
在一些實(shí)施方案中，治療還可涉及本發(fā)明的化合物與其它現(xiàn)有治療模式的組合，例如用于治療角膜瘢痕、角膜損傷或角膜傷口愈合的現(xiàn)有藥劑，例如
本發(fā)明的化合物和組合物可以單獨(dú)或與癌癥療法(包括化學(xué)療法、放射療法、靶向藥物、免疫療法和細(xì)胞或基因療法)組合用于治療癌癥。
本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，在合適的情況下，其它治療成分可以以鹽(例如作為堿金屬或胺鹽或作為酸加成鹽)，或前藥，或者作為酯(例如低級(jí)烷基酯)，或作為溶劑合物(例如水合物)的形式使用，以優(yōu)化治療成分的活性和/或穩(wěn)定性和/或物理特性，例如溶解度。還清楚的是，在適當(dāng)?shù)那闆r下，治療成分可以以光學(xué)純的形式使用。
上述組合可方便地以藥物組合物的形式使用，因此包含如上定義的組合以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物代表本發(fā)明的另一方面。這種組合的單個(gè)化合物可以在單獨(dú)或組合的藥物組合物中順序或同時(shí)給藥。優(yōu)選地，單獨(dú)的化合物將在組合的藥物組合物中同時(shí)給藥。已知治療劑的合適劑量將容易被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解。
應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)本發(fā)明的化合物與一種或多種通常通過吸入、靜脈內(nèi)、口服、鼻內(nèi)、眼部局部或其它途徑給藥的其它治療活性劑組合給予時(shí)，所得藥物組合物可通過相同途徑給藥?；蛘?，組合物中的各個(gè)組分可以通過不同的途徑給藥。
現(xiàn)在將僅通過實(shí)施例來闡明本發(fā)明。
縮寫
以下列表提供了本文使用的某些縮寫的定義。應(yīng)當(dāng)理解，該列表不是窮盡的，但是本文以下沒有定義的那些縮寫的含義對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。
ac(乙?；?
bcecf-am(2',7'-雙-(2-羧基乙基)-5-(和-6)-羧基熒光素乙酰氧基甲酯)
beh(乙烯橋接混合技術(shù))
bu(丁基)
cbz(羧基芐基)
chaps(3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸內(nèi)鹽)
chiralcelod-h(涂覆在5μm硅膠上的纖維素三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯))
chiralpakad-h(涂覆在5μm硅膠上的直鏈淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯))
chiralpakid(固定在5μm硅膠上的直鏈淀粉三(3-氯苯基氨基甲酸酯))
chiralpakas(涂覆在5μm硅膠上的直鏈淀粉三((s)-α-甲基芐基氨基甲酸酯))
cdi(羰基二咪唑)
csh(帶電表面混合技術(shù))
cv(柱體積)
dcm(二氯甲烷)
dipea(二異丙基乙胺)
dmf(n,n-二甲基甲酰胺)
dmso(二甲基亞砜)
dsc(差示掃描量熱法)
et(乙基)
etoh(乙醇)
etoac(乙酸乙酯)
h(小時(shí))
hcl(鹽酸)
hepes(4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
lcms(液相色譜-質(zhì)譜法)
mdap(質(zhì)量定向自動(dòng)制備型hplc)
mdck(madin-darby犬腎)
me(甲基)
mecn(乙腈)
meoh(甲醇)
ms(質(zhì)譜)
min分鐘
pdcl2(dppf)-ch2cl2[1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)二氯甲烷復(fù)合物
ph(苯基)
ipr(異丙基)
(r)-binap(r)-(+)-2,2′-雙(二苯基膦基)-1,1′-聯(lián)萘
[rh(cod)cl]2((1,5-環(huán)辛二烯)氯化銠(i)二聚體)
rt(保留時(shí)間)
spe(固相萃取)
tbme(叔丁基甲基醚)
tea(三乙胺)
tfa(三氟乙酸)
tga(熱重分析)
thf(四氫呋喃)
tlc(薄層色譜法)
uplc(超高效液相色譜)
所有提及的鹽水是指氯化鈉的飽和水溶液。
實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)
分析型lcms
分析型lcms在下列系統(tǒng)a、b或c之一上進(jìn)行。
對(duì)所有系統(tǒng)的紫外檢測(cè)是從波長220nm到350nm的平均信號(hào)，使用交替掃描正和負(fù)模式電噴霧電離在質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜。
本文提及的lcms系統(tǒng)a-d的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)如下：
系統(tǒng)a
柱：50mm×2.1mmid,1.7μmacquityuplcbehc18柱
流速：1ml/min.
溫度：40℃
溶劑：a：用氨水溶液調(diào)節(jié)至ph10的10mm碳酸氫銨的水溶液
b：乙腈
系統(tǒng)b
柱：50mm×2.1mmid,1.7μmacquityuplcbehc18柱
流速：1ml/min
溫度：40℃
溶劑：a：0.1％v/v甲酸的水溶液
b：0.1％v/v甲酸的乙腈溶液
系統(tǒng)c
柱：50mm×2.1mmid,1.7μmacquityuplccshc18柱
流速：1ml/min.
溫度：40℃
溶劑：a：用氨水溶液調(diào)節(jié)至ph10的10mm碳酸氫銨的水溶液
b：乙腈
系統(tǒng)d
柱：50mm×2.1mmid,1.7μmacquityuplcbehc18柱
流速：1ml/min
溫度：40℃
溶劑：a：0.1％v/v三氟乙酸的水溶液
b：0.1％v/v三氟乙酸的乙腈溶液
中間體1：7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(化合物xv)
在0℃在氮?dú)庀?，將三溴化?0.565ml，5.99mmol)滴加到(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)甲醇(化合物xiv)(參見us20040092538,第80頁,[0844])(820mg,4.99mmol)在無水乙腈(50ml)中的懸浮液中。加入后，形成深橙色沉淀，其變成淺橙色。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，此時(shí)反應(yīng)完成。將混合物真空濃縮并將殘余物在乙酸乙酯(250ml)和飽和nahco3水溶液(250ml)之間分配。水相用乙酸乙酯(250ml)進(jìn)一步萃取。將合并的有機(jī)溶液通過疏水砂芯，然后真空濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.05g,93％)，為蓬松奶油狀固體：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.95min,es+vem/z227,229(m+h)+.
中間體2：三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(xvi))
將7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(化合物(xv)，中間體1)(1.00g，4.40mmol)的乙腈(98ml)溶液用三苯基膦(1.270g，4.84mmol)處理，將溶液在室溫在氮?dú)庀聰嚢柽^夜。將混合物真空濃縮，得到深奶油色固體，然后用乙醚研磨，得到標(biāo)題化合物(2.139g,99％)，為淡奶油色固體：lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.23min,es+vem/z409(m+h)+.
中間體3：(e,z)3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯.(化合物(viii)
將攪拌下的(+)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(化合物(ix)：可得自wuxiapptec)(260mg，1.03mmol)在dcm(3ml)和dmso(0.3ml)中的溶液在氮?dú)庀掠胐ipea(0.896ml，5.13mmol)處理。冷卻至0-5℃(冰浴)后，用大約5分鐘的時(shí)間分批加入吡啶三氧化硫(327mg，2.05mmol)，以將醇化合物(ix)氧化為相應(yīng)的醛化合物(x)，其未被分離。除去冷卻浴，繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)。同時(shí)，在氮?dú)庀?，用大約5分鐘的時(shí)間，將三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(xvi)，其制備參見中間體2)(553mg,1.13mmol)的無水dcm(10ml)溶液用滴加叔丁醇鉀(1m的thf溶液)(1.232ml,1.232mmol)來處理，生成橙色溶液。繼續(xù)攪拌10分鐘，然后將醛(式(x))溶液一次性加入到葉立德溶液中，將混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用dcm(20ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(na2so4)，然后真空蒸發(fā)。將深棕色殘余物通過20g硅膠spe柱色譜純化，并用0-100％乙酸乙酯-環(huán)己烷的梯度在30分鐘內(nèi)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為兩種幾何異構(gòu)體：
異構(gòu)體1：稻草色膠狀物(123.4mg,31％),lcms(系統(tǒng)a)rt＝1.28min,95％,es+vem/z382(m+h)+，和
異構(gòu)體2：稻草色膠狀物(121.5mg,31％),lcms(系統(tǒng)a)rt＝1.22min,91％,es+vem/z382(m+h)+
總產(chǎn)率＝244.9mg,62.5％。
中間體3的構(gòu)型隨后顯示為(r)，且兩種幾何異構(gòu)體為：(r,e)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯和(r,z)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯。
中間體4：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(化合物(vii))
將(e,z)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(化合物viii,中間體3)(244mg,0.640mmol)(1：1,e：z)的dmf(2ml)溶液用苯磺酰肼(購自alfaaesar)(275mg,1.60mmol)和碳酸鉀(354mg,2.56mmol)處理。將反應(yīng)混合物加熱至130℃保持1小時(shí)，然后冷卻并在dcm和水之間分配。有機(jī)相用水洗滌并通過疏水砂芯干燥。真空蒸發(fā)有機(jī)溶液，殘余的橙色油狀物通過硅膠柱色譜(20g)純化，用0-50％[(3：1etoac-etoh)-etoac]的梯度溶液洗脫20分鐘。合并適當(dāng)?shù)募?jí)分并真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(150mg，61％)，為淺黃色膠狀物：lcms(系統(tǒng)a)rt＝1.24min,90％,es+vem/z384(m+h)+。中間體4的絕對(duì)構(gòu)型隨后顯示為(s)，因此該化合物是(s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯。由中間體3中的(r)到中間體4中的(s)的變化是由于去除雙鍵后優(yōu)先級(jí)的改變。
中間體5：7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(化合物(v))
將攪拌下的3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(化合物(vii)，中間體4)(4.67g，12.2mmol)在含有10％鈀/碳(0.50g)的乙醇(70ml)中的溶液在氫氣氛下攪拌7小時(shí)。lcms顯示去保護(hù)不完全，并加入另外的10％鈀/碳(0.25g)，并將混合物在氫氣氛下攪拌過夜。反應(yīng)混合物以深灰色懸浮液存在，因此加入dcm以溶解該物質(zhì)直到混合物變黑。通過硅藻土墊過濾除去催化劑，真空蒸發(fā)濾液和洗滌液。將殘余物從dcm中蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為橙色油狀物(3.28g)：lcms(系統(tǒng)a)rt＝0.79min,90％,es+vem/z250(m+h)+。隨后確定中間體5的構(gòu)型為(s)，化合物的名稱為(s)-7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶。
中間體6：[7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶,(化合物(v))甲磺酸鹽
該化合物(v)的鹽可以按照上述化合物(v)的純化方法制備和結(jié)晶。
將2-丁醇(5ml)加入到7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(化合物(v))(1.0g，4.0mmol)中，加熱混合物直至完全溶解。將甲磺酸(0.260ml，4.01mmol)加入溫?zé)岬娜芤褐校瑢⒒旌衔镌跀嚢柘录訜嶂?0℃。然后將溶液冷卻至室溫。沒有立即顯現(xiàn)出沉淀，因此將溶液在冰箱(約4℃)中進(jìn)一步冷卻。3天后，觀察到大量固體。通過過濾分離固體，用冷的2-丁醇洗滌，并在真空中進(jìn)一步干燥，得到標(biāo)題化合物(600mg,43％)，為淡黃色固體：lcms(系統(tǒng)a)rt＝0.80min,100％,es+vem/z250(m+h)+；用在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上的分析型手性hplc，rt＝8.41分鐘，99.6％和rt＝12.03分鐘，0.4％，用40％etoh-庚烷(含有0.2％異丙胺)洗脫，流速1ml/min，在235nm檢測(cè)。隨后確定中間體6的構(gòu)型為(s)，且化合物的名稱為(s)-7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶甲磺酸鹽。
中間體7：(e)-4-乙酰氧基丁-2-烯酸甲酯(化合物(vi))
將乙酸鈉(3.5g，42mmol)在mecn(30ml)中的懸浮液用4-溴巴豆酸甲酯(aldrich)(3.33ml，5g，28mmol)處理，將混合物加熱至50℃持續(xù)3天。將混合物用乙醚稀釋，然后過濾。固體用乙醚洗滌，合并的濾液和洗滌液在減壓下蒸發(fā)。蒸發(fā)后，將殘余物在乙醚和水之間分配。有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌，用mgso4干燥，減壓蒸發(fā)，得到淺橙色油狀物。nmr表明為產(chǎn)物和原料的混合物，因此，向殘余油中加入乙酸鈉(3.44g，42mmol)，然后加入mecn(10ml)，將混合物加熱至70℃過周末。將混合物減壓濃縮，將殘余物在乙醚和水之間分配。將有機(jī)溶液用水、鹽水洗滌，干燥(mgso4)并過濾。減壓蒸發(fā)濾液，得到標(biāo)題化合物(3.55g,80％)，為橙色油狀物：nmrδ(cdcl3)6.92(1h,dt,j16,5hz),6.01(1h,dt,j16,2hz),4.72(2h,dd,j5,2hz),3.73(3h,s),2.10(3h,s).
中間體8：(e)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯(化合物(iii))
將(e)-4-乙酰氧基丁-2-烯酸甲酯(化合物(vi)，對(duì)于制備參見中間體7)(127mg,0.802mmol)、7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(化合物(v)，對(duì)于制備參見中間體5)(200mg,0.802mmol)和pdcl2(dppf)-ch2cl2加合物(65.7mg,0.080mmol)在dcm(2ml)中的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。lcms顯示約50％的轉(zhuǎn)化率，加入dipea(0.279ml，1.60mmol)，將溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。lcms顯示幾乎完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。將物質(zhì)直接加載到柱上，通過色譜(20g氨基丙基柱)純化，用0-100％etoac的環(huán)己烷溶液梯度洗脫20分鐘。將合適的級(jí)分合并并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(101.4mg,36％)：lcms(系統(tǒng)a)rt＝1.08min,95％,es+vem/z348(m+h)+。確定中間體8的構(gòu)型為(s)，且化合物的名稱為(s,e)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-3-烯酸甲酯。
中間體9：(e,z)(s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯.(化合物(xxiii))
在氮?dú)庀?，將攪拌下?r)-(-)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯[(-)-化合物(ix)](購自wuxiapptec)(4.18g,16.50mmol)在二氯甲烷(60ml)和dmso(5.86ml,83mmol)中的溶液用dipea(14.41ml,83mmol)處理。在冰浴中冷卻至0-5℃后，用大約5分鐘的時(shí)間分批加入吡啶三氧化硫(5.40g，33.9mmol)。溶液變成淺黃色，繼續(xù)攪拌約0.5小時(shí)，得到黃色溶液。將溶液用稀hcl(50ml)洗滌并干燥(mgso4)。然后加入三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物xvi,中間體2)(8.06g，16.47mmol)和少量dcm(約5ml)，隨后加入環(huán)己烯(3.81ml)，得到淺橙色溶液。將叔丁醇鉀(19.80ml，19.80mmol)滴加到該溶液中，得到奶油色懸浮液。1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用dcm(200ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，干燥(mgso4)，然后真空蒸發(fā)。將暗橙色的油固化過夜，并用乙醚(約30ml)研磨，然后過濾，得到奶油色固體和黃色濾液。真空蒸發(fā)濾液，得到橙色油，將其施加到330g正相硅膠柱上，用環(huán)己烷/乙酸乙酯梯度(0-100％乙酸乙酯，歷經(jīng)50分鐘)洗脫。將級(jí)分16-40真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，其為(e)和(z)幾何異構(gòu)體的混合物(3.953g,63％)，為稻草色的膠狀物：lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.28min,50％和1.34min,46％es+vem/z382(m+h)+。
中間體10：(r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯
在氮?dú)庀?，將攪拌下?e和z)-(s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙烯基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(中間體9)(3.814g,10.00mmol)的dmf(40ml)溶液用碳酸鉀(5.53g,40.0mmol)處理，隨后使用苯磺酰肼(4.38g，25.4mmol)處理，得到黃色液體。將混合物在100℃下加熱1小時(shí)，然后冷卻至室溫并通過硅藻土過濾。真空蒸發(fā)濾液，得到奶油色漿液。將其在水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)之間分配，有機(jī)層進(jìn)一步用水(4×100ml)洗滌，干燥(mgso4)，然后真空蒸發(fā)，得到黃色油狀物(3.261g)。將其在高真空管線上放置過周末(2.982g)。將油狀物溶解在最小量的dmso(約3ml)中，并加載到120g反相柱上，并用10-100％(含有0.1％nh3的乙腈)的10mm碳酸氫銨水溶液的梯度溶液以12cv洗脫。部分真空蒸發(fā)級(jí)分6-9以除去乙腈。將剩余的溶液用水(40ml)和dcm(60ml)稀釋，然后分離。將水層進(jìn)一步用dcm(3×30ml)萃取，合并有機(jī)萃取液，干燥(mgso4)，然后真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(2.145g，56％)，為淡黃色油狀物：lcms(系統(tǒng)c)：rt＝1.25min,es+vem/z384(m+h)+.
中間體11：(r)-7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶
將(r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯(中間體10)(2.334g,6.09mmol)的乙醇(50ml)溶液加入到10％鈀/碳(250mg,0.235mmol)中，將混合物在氫氣氛下攪拌3小時(shí)，此時(shí)加入更多的鈀/碳(107.2mg)。將反應(yīng)攪拌過夜。加入dcm(約30ml)，并在氮?dú)庀聦⒒旌衔锿ㄟ^硅藻土過濾。濾液真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(1.575g)，為黃色油狀物：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.83min,es+vem/z250(m+h)+.
中間體12：(r,e)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯
將(e)-4-乙酰氧基丁-2-烯酸甲酯(中間體7,化合物vi)(0.951g,6.01mmol)、(r)-7-(2-(3-氟吡咯烷-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(中間體11)(1.520g,6.10mmol)、pdcl2(dppf)-ch2cl2加合物(0.242g,0.331mmol)和乙酸鉀(2.083g,21.22mmol)溶于dcm(25ml)中，并將反應(yīng)混合物在氮?dú)庀聰嚢?0小時(shí)，得到橙色液體(2.188g)。使反應(yīng)混合物在dcm(50ml)和水(50ml)之間分配并再次用dcm(50ml)萃取。將合并的有機(jī)相用鹽水(50ml)洗滌，并用mgso4干燥。真空除去溶劑，將殘余物溶于dcm中，并在氨基丙基柱(50g)上使用0-100％乙酸乙酯-環(huán)己烷的梯度溶液，在20分鐘內(nèi)純化。將合適的級(jí)分合并并真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(1.59g,75％)，為黃色油狀物。lcms(系統(tǒng)c)：rt＝1.07min,es+vem/z348(m+h)+.
中間體13.4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸甲酯
將(r,e)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯(中間體12,化合物(r)-iii)(0.8g,2.303mmol)、(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)硼酸(購自manchesterorganics,enamine或combi-blocks)(1.389g,7.09mmol)和(1,5-環(huán)辛二烯)氯化銠(i)二聚體(57mg,0.115mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的懸浮液進(jìn)行脫氣。將(r)-binap(0.173g，0.278mmol)和3.8m氫氧化鉀(1.515ml，5.76mmol)在1,4-二噁烷(3.33ml)中的溶液進(jìn)行脫氣。將后面的溶液加入到前面的溶液中，將混合物在90℃下在氮?dú)庀聰嚢?.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，然后在tbme(50ml)和2m鹽酸(30ml)之間分配。將水相用飽和碳酸氫鈉水溶液堿化，然后使用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。用鹽水洗滌乙酸乙酯萃取物，干燥(mgso4)。真空除去溶劑，將殘余物溶于負(fù)載在氨基丙基柱(50g)上的最小量的dcm中，并用0-50％乙酸乙酯-環(huán)己烷梯度洗脫20分鐘的色譜處理。將合適的級(jí)分合并并真空蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，其為非對(duì)映異構(gòu)體的混合物(0.7g；比例86：14)，為淡黃色油狀物：lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.29min,es+vem/z500(m+h)+.
實(shí)施例的制備
實(shí)施例1：(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸，和
實(shí)施例2：(r)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸
將(s,e)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯(中間體8)(101.4mg,0.292mmol)、3.8mkoh(aq)(0.230ml,0.876mmol)和(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)硼酸(化合物(iv)，得自enaminellc,)(172mg,0.876mmol)溶于1,4-二噁烷(2ml)中，并將溶液脫氣。將[rh(cod)cl]2(7.20mg,0.015mmol)和(r)-binap(21.81mg,0.035mmol)懸浮于1,4-二噁烷(2ml)中并脫氣。然后在氮?dú)庀聦⑶懊娴姆磻?yīng)物溶液加入到后面的催化劑溶液中。將反應(yīng)混合物加熱并攪拌(50℃2小時(shí))。然后將混合物加載到scx柱(10g)(用1cvmeoh，1cvmecn預(yù)處理)上，用10vdmso、4cvmecn洗滌，并用2m的nh3在meoh中的溶液(4cv)洗脫。在減壓下蒸發(fā)堿性級(jí)分。將殘余物在高真空下干燥12小時(shí)，得到(s)-4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸甲酯(化合物(ii))(131.3mg,93％)。
然后將該甲酯，化合物(ii)溶解在thf(2ml)中，并加入1mlioh水溶液(1.459ml，1.459mmol)。將溶液在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。lcms顯示完全水解成羧酸，并加入2mhcl(0.876ml，1.751mmol)，將溶液加載到scx柱(10g)(用1cvmeoh、1cvmecn預(yù)處理)上，用4cvmecn洗滌，并用2m的nh3在meoh中的溶液(4cv)洗脫。在減壓下蒸發(fā)堿性級(jí)分，得到為膠狀物的粗產(chǎn)物(127mg，90％)。分析型手性hplcrt＝9.0min,88％和rt＝13.8min,12％，在chiralceloj-h柱(4.6mmid×25cm)上，用60％etoh(含有0.2％異丙胺)–庚烷洗脫，流速＝1.0ml/min，在215nm處檢測(cè)。式(i)化合物的非對(duì)映異構(gòu)體混合物通過在chiralceloj-h柱(3cm×25cm)上的制備型手性hplc分離，用60％etoh-庚烷洗脫，流速＝30ml/min，在215nm處檢測(cè)，得到兩個(gè)單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例1(78mg,55％)：分析型手性hplcrt＝9.0min,98.7％，在chiralceloj-h柱(4.6mmid×25cm)上，用60％etoh(含有0.2％異丙胺)–庚烷洗脫，流速＝1.0ml/min，在215nm處檢測(cè)；lcms(系統(tǒng)d)rt＝0.52min,100％,es+vem/z486(m+h)+和(系統(tǒng)c)rt＝0.81min,92％,es+vem/z486(m+h)+，1hnmr(cdcl3,600mhz)：δ8.45(brs,1h),7.21(t,j＝7.7hz,1h),7.16(d,j＝7.2hz,1h),6.86-6.73(m,3h),6.31(d,j＝7.2hz,1h),4.12(t,j＝4.4hz,2h),4.08(brs,1h),3.75(td,j＝4.7,0.8hz,2h),3.73-3.68(m,1h),3.47(brs,2h),3.46(d,j＝1.1hz,2h),3.42(brt,j＝5.1hz,2h),3.00-2.85(m,2h),2.82-2.75(m,1h),2.70-2.66(m,1h),2.63-2.57(m,1h),2.73-2.55(m,3h),2.49(q,j＝9.1hz,1h),2.45(dd,j＝11.9,3.7hz,1h),2.23-1.97(m,4h),1.95-1.80(m,3h),[α]d20+51(c＝0.72，在乙醇中)。
確定實(shí)施例1的不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型，發(fā)現(xiàn)化合物為(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(參見下文)。
實(shí)施例2(10mg,7％)：分析型手性hplcrt＝12.5min,>99.5％，在chiralceloj-h柱(4.6mmid×25cm)上，用60％etoh(含有0.2％異丙胺)–庚烷洗脫，流速＝1.0ml/min，在215nm處檢測(cè)；lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.82min,84％,es+vem/z486(m+h)+。[α]d20-28(c＝0.50，在乙醇中)。
確定實(shí)施例2的不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型，發(fā)現(xiàn)化合物具有結(jié)構(gòu)式(r)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸
實(shí)施例3.(r)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸和
實(shí)施例4.(s)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸
向4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸甲酯(中間體13)(100mg,0.200mmol)的甲醇(1ml)溶液中加入氫氧化鈉水溶液(2m,0.500ml)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物使用2m鹽酸酸化至ph為7。將溶液用水(10ml)稀釋，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并干燥(mgso4)。真空除去溶劑，得到略微粘稠的無色玻璃狀物(62mg，64％)：lcms(系統(tǒng)a)rt＝0.8min,es+vem/z486(m+h)+。分析型手性hplcrt＝7.4min,16％和rt＝11.8min,84％，在chiralceloj柱(250mm×4.6mm)上，用60％etoh-庚烷洗脫，流速1ml/min，在215nm處檢測(cè)。通過在chiralceloj-h柱(250mm×30mm)上的制備型手性hplc分離該非對(duì)映異構(gòu)體，用50％etoh的庚烷溶液洗脫，流速30ml/min，得到兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體，為實(shí)施例3和4。
實(shí)施例3(6mg,6％)：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.80min,94％,es+vem/z486(m+h)+；分析型手性hplcrt＝7.2min,>99.5％，在chiralceloj柱(250mm×4.6mm)上，使用60％etoh-庚烷洗脫，流速1ml/min，在215nm處檢測(cè)。(r)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)施例4(33mg,34％)：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.80min,100％,es+vem/z486(m+h)+；分析型手性hplcrt＝11.8min,>99.5％，在chiralceloj柱(250mm×4.6mm)上，用60％etoh-庚烷洗脫，流速1ml/min，在215nm處檢測(cè)。(s)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)施例5(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸馬來酸鹽.
將mecn(100μl)加入到(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(實(shí)施例1)(112.7mg)中，并加熱至60℃。向該溶液中加入馬來酸(固體，
在室溫，將mecn(300μl)加入到(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(實(shí)施例1)(298.54mg)中。向該溶液中加入馬來酸(固體，
實(shí)施例6(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸檸康酸鹽.
將無水乙腈(0.1ml)加入到(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(實(shí)施例1)(505mg,1.04mmol)中，其在室溫溶解。加入檸康酸(28.4mg,0.218mmol)(購自sigma)，并將懸浮液加熱至60℃，得到澄清的黃色溶液，然后冷卻至
生物測(cè)定
細(xì)胞粘附測(cè)定
利用的試劑和方法如[ludbrook等人,biochem.j.2003,369,311和macdonald等人,acsmedchemlett,2014,5,1207-1212，對(duì)于αvβ8測(cè)定]所述，澄清以下幾點(diǎn)。使用以下細(xì)胞系，其中括號(hào)中為配體：k562-α5β1(纖連蛋白)、k562-αvβ3(lap-b1)、k562-αvβ5(玻連蛋白)、k562-αvβ6(lap-b1)、k562-αvβ8(lap-b1)。用于促進(jìn)粘附的二價(jià)陽離子為2mmmgcl2。粘附通過用熒光染料bcecf-am(lifetechnologies)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行定量，其中將3x106個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸浮液與0.33ml/ml的30mmbcecf-am在37℃孵育10分鐘，然后將50μl/孔分配至96-孔測(cè)定板中。在測(cè)定結(jié)束時(shí)，使用50μl/孔的0.5％tritonx-100的h2o溶液裂解粘附的細(xì)胞以釋放熒光。使用
實(shí)施例1在細(xì)胞粘附測(cè)定中的親和力(pic50)為：αvβ6pic50＝7.9；αvβ3pic50＝7.4；αvβ5pic50＝7.4；αvβ8pic50＝7.5；αvβ1pic50＝6.4。
實(shí)施例2在細(xì)胞粘附測(cè)定中的親和力(pic50)為：αvβ6pic50＝6.2；αvβ3pic50＝5.9；αvβ5pic50＝6.6；αvβ8pic50＝5.8。
實(shí)施例3在細(xì)胞粘附測(cè)定中的親和力(pic50)為：αvβ6pic50＝5.4；αvβ3pic50＝5.6；αvβ5pic50＝5.0；αvβ8pic50＝5.3。
實(shí)施例4在細(xì)胞粘附測(cè)定中的親和力(pic50)為：αvβ6pic50＝7.7；αvβ3pic50＝6.3；αvβ5pic50＝6.9；αvβ8pic50＝7.3。
引用的數(shù)字是平均pic50值。
mdck細(xì)胞中的滲透性
在有效的p-糖蛋白抑制劑gf120918存在下，在ph7.4的madin-darby犬腎臟-多藥抗藥性1(mdckii-mdr1)細(xì)胞中測(cè)定實(shí)施例1和實(shí)施例4(均為兩性離子)的被動(dòng)膜通透性。在每次測(cè)試中，將每種化合物一式兩份溫育，濃度為3μm。在該測(cè)定中，實(shí)施例1的被動(dòng)表觀滲透性(papp)為71nm/s(±23nm/s；n＝3次測(cè)試)，實(shí)施例4為17nm/s(n＝2次測(cè)試)。
觀察到雖然兩種非對(duì)映異構(gòu)體實(shí)施例1和實(shí)施例4在αvβ6細(xì)胞粘附測(cè)定中具有相似的體外親和力(實(shí)施例1pic50＝7.9；實(shí)施例4pic50＝7.7)，但是在mdck細(xì)胞中具有不同的滲透性(實(shí)施例1p＝71nm/s和實(shí)施例4p＝17nm/s)。預(yù)期體現(xiàn)為實(shí)施例1在藥代動(dòng)力學(xué)研究中具有比實(shí)施例4更高的體內(nèi)口服利用度。
結(jié)構(gòu)式(i)化合物的絕對(duì)構(gòu)型的鑒定
3-氟吡咯烷不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型的鑒定。
靶分子(ia)的合成分別開始于結(jié)構(gòu)式(ix)的中間體的每個(gè)對(duì)映異構(gòu)體。(ix)的對(duì)映體購自wuxiapptec。(+)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸芐酯提供具有最高親和力的非對(duì)映異構(gòu)體(ia)(實(shí)施例1異構(gòu)體a)。然而，(+)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸芐酯(ix)的絕對(duì)構(gòu)型是未知的，進(jìn)行方案iii中概述的以下實(shí)驗(yàn)以確定其構(gòu)型。
將1-(叔丁氧基羰基)-3-氟吡咯烷-3-甲酸(xvii)[化學(xué)文摘登記號(hào)1001754-59-1](購自wuxiapptec)的外消旋混合物通過下面的方法轉(zhuǎn)化為n-α-甲基芐基酰胺：使酸(xvii)首先與羰基二咪唑(cdi)反應(yīng)，然后與(+)-(r)-α-甲基芐基胺反應(yīng)。這提供了酰胺的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(方案3，化合物xviii和xix)，其通過硅膠色譜分離(p.k.mykhailiuk等人,convenientsynthesisofenantiopure(r)-and(s)-3-fluoro-3-aminomethylpyrrolidines,tetrahedron2014,70,3011-3017)。更大極性的異構(gòu)體的構(gòu)型由mykhailiuk和我們通過x射線衍射研究獨(dú)立地確定，并且顯示為(s)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯[化合物(xviii)](圖1)，因此對(duì)于極性較小的異構(gòu)體為(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯[化合物(xix)]。此外，這提供了用于與通過方案iii中所示的順序獲得的化合物進(jìn)行比較的參考材料。盡管我們對(duì)于極性異構(gòu)體[化合物(xviii)]的x-射線數(shù)據(jù)與mykhailiuk等人報(bào)道的x-射線晶體結(jié)構(gòu)一致，但1hnmr譜與我們所獲得的譜圖不同。兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體[化合物(xviii)和(xix)]的譜圖非常相似；然而，對(duì)于吡咯烷c4質(zhì)子存在小的診斷差異。我們?cè)?.22ppm處觀察到它。mykhailiuk報(bào)道其為2.15ppm。將結(jié)構(gòu)式(ix)化合物的(-)-對(duì)映異構(gòu)體[(-)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸芐基酯](其提供(ia)實(shí)施例2的非對(duì)映異構(gòu)體(異構(gòu)體1))在乙醇中在10％pd/c上氫化以除去cbz保護(hù)基，并將生成的胺(xx)用二碳酸二叔丁基酯保護(hù)，得到(-)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(xxi)。后者用三氯化釕和高碘酸鈉在乙腈-水中氧化。然后按照前述使用cdi和(+)-(r)-α-甲基芐基胺將所得羧酸(xxii)轉(zhuǎn)化為酰胺。將該酰胺與參考酰胺樣品(xviii)和(xix)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)通過nmr波譜、旋光性和手性hplc確定與(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(xix)相同。由于該序列中使用的(ix)的(-)-對(duì)映異構(gòu)體是提供非對(duì)映異構(gòu)體(ia3)和(ia4)(實(shí)施例2)的異構(gòu)體，因此提供(ia1)和(ia2)(實(shí)施例1)的(ix)的(+)-對(duì)映異構(gòu)體在吡咯烷不對(duì)稱中心具有絕對(duì)構(gòu)型(s)。
方案iii.3-氟吡咯烷不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型的鑒定。
芐型不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型的鑒定
實(shí)施例1異構(gòu)體a的芐型不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型通過方案iv中所示的降解實(shí)驗(yàn)獲得。因此，實(shí)施例1異構(gòu)體a在dcm中在室溫用碘甲烷處理過夜，以使吡咯烷氮季銨化，然后加入碳酸鉀，在微波反應(yīng)器中加熱至120℃持續(xù)1小時(shí)，得到(s)-(+)-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二氫呋喃-2(3h)-酮(化合物xxiv)。將該降解產(chǎn)物與真正的(r)-(-)-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二氫呋喃-2(3h)-酮(化合物xxv)進(jìn)行比較，其中化合物xxv通過使用雙(降冰片二烯)銠(i)四氟硼酸鹽作為催化劑和(r)-binap作為手性配體，使用經(jīng)典的hayashi不對(duì)稱反應(yīng)(hayashi,t.tetrahedronasymmetry,1999,10,4047-4056)將(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)硼酸加成到呋喃-2(5h)-酮上來制備，比較顯示為降解產(chǎn)物的對(duì)映異構(gòu)體，從而確定實(shí)施例1異構(gòu)體a在其芐型中心的構(gòu)型為(s)。
方案iv.試劑和條件：i)mei,dcm,室溫,18h；ii)k2co3,120℃,1h；iii)雙(降冰片二烯)銠(i)四氟硼酸鹽和(r)-binap,koh,1,4-二噁烷,100℃,1小時(shí)。
基于上述實(shí)驗(yàn)確定結(jié)構(gòu)式(i)的化合物中每個(gè)不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型，每個(gè)實(shí)施例的絕對(duì)構(gòu)型概括如下：
實(shí)施例1為結(jié)構(gòu)式(ia2)的化合物(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)施例2為結(jié)構(gòu)式(ia1)的化合物(r)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)施例3為結(jié)構(gòu)式(ia3)的化合物(r)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)施例4為結(jié)構(gòu)式(ia4)的化合物(s)-4-((r)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。
實(shí)驗(yàn)
(s)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xviii)和(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xix)。
在室溫，將(±)-1-(叔丁氧基羰基)-3-氟吡咯烷-3-甲酸(化合物xvii)[1001754-59-1](購自wuxiapptec)(3.00g,12.9mmol)的thf(70ml)溶液用固體cdi(2.5g,15.4mmol)處理，并然后將混合物加熱至80℃保持1.5小時(shí)。在該溫度下加入(r)-(+)-α-甲基芐基胺(購自fluka)(1.6g,13.2mmol)，然后將混合物在80℃下再加熱1.5小時(shí)。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用稀hcl、nahco3、鹽水洗滌，干燥(mgso4)，過濾并使其在室溫緩慢蒸發(fā)。當(dāng)沒有固體結(jié)晶析出時(shí)，最后在減壓下濃縮混合物。殘余物通過硅膠柱色譜(2×100g)純化，用0-25％etoac-環(huán)己烷洗脫40分鐘。獲得首先洗脫出來的化合物，為白色泡沫(1.54g,36％)：lcms(系統(tǒng)a)rt＝1.17min,es+vem/z337(m+h)+；1hnmr(500mhz,cdcl3)1.43-1.49(m,9h),1.54(d,j＝7.0hz,3h),2.08-2.19(m,1h),2.37-2.62(m,1h),3.43-3.56(m,1h),3.61-3.93(m,3h),5.14(五重峰,j＝7.1hz,1h),6.71-6.76(m,1h),7.27-7.39(m,5h)含有約10％的極性較大的非對(duì)映異構(gòu)體；[α]d20+61(c＝1.27在meoh中)；分析型手性hplcrt＝7.58min,90％,和rt＝9.53min,10％，在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上，用10％etoh-庚烷洗脫，流速＝1ml/min，在215nm處檢測(cè)。將該樣品的50mg在硅膠柱(20g)上進(jìn)一步純化，用0-25％etoac-環(huán)己烷洗脫20分鐘。在減壓下蒸發(fā)適當(dāng)?shù)募?jí)分，得到(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xix)的分析純樣品(30mg)。lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.16min,es+vem/z337(m+h)+和354(m+nh4)+，且es-vem/z335(m-h)-；[α]d20+63(c＝0.933在meoh中)。
將從柱上洗脫的第二種化合物(極性較大的非對(duì)映異構(gòu)體)(1.2g，28％)從乙醚中結(jié)晶，得到白色結(jié)晶的(s)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xviii)：mp＝113-115℃；lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.16min,es+vem/z337(m+h)+；1hnmr(500mhz,cdcl3)1.43-1.48(m,9h),1.54(d,j＝7.0hz,3h),2.14-2.26(m,1h),2.44-2.70(m,1h),3.46-3.55(m,1h),3.56-3.87(m,3h),5.14(五重峰,j＝7.1hz,1h),6.73(brs,1h),7.27-7.40(m,5h)；[α]d20+73(c＝0.876在meoh中)；分析型手性hplcrt＝9.50min,100％，在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上，用10％etoh-庚烷洗脫，流速＝1ml/min，在215nm處檢測(cè)。該非對(duì)映異構(gòu)體的絕對(duì)構(gòu)型是由x-射線衍射研究確認(rèn)的。
(-)-(r)-(3-氟吡咯烷-3-基)甲醇(化合物xx)
將(-)-n-cbz-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷(化合物(ix)的(-)-異構(gòu)體(購自wuxiapptec))(4.0g,15.8mmol)在乙醇(150ml)中的溶液用10％pd/c(400mg)氫化過夜。通過硅藻土過濾除去催化劑，用乙醇洗滌。在減壓下蒸發(fā)濾液和洗滌液，得到標(biāo)題化合物(2.0g,106％,通過nmr顯示含有一些乙醇)，為黃色油狀物，將其固化成蠟狀固體：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.22min,es+vem/z120(m+h)+和es-vem/z118(m-h)-。產(chǎn)物在吹掃裝置中在氮?dú)庀略?0℃下進(jìn)一步干燥。1hnmr(500mhz,cdcl3)3.82(dd,j＝18.7,12.5hz,1h),3.73(dd,j＝22.0,12.2hz,1h),3.22-3.15(m,1h),3.23-3.14(m,1h),2.99-2.92(m,1h),2.91(dd,j＝29.1,13.2hz,1h),2.66(brs,2h),2.10-1.98(m,1h),1.94-1.81(m,1h)；[α]d20＝-4(c＝1.19在etoh中)。
(-)-(r)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xxi)
將(r)-(3-氟吡咯烷-3-基)甲醇(化合物xx)(1.88g,15.8mmol)在dcm(15ml)和二異丙基乙胺(4.13ml,23.7mmol)中的溶液用二碳酸二叔丁基酯(3.79g,17mmol)處理，并將混合物在20℃下攪拌3小時(shí)。將混合物在2mhcl和dcm之間分配，并在相分離柱中分離。將有機(jī)層減壓濃縮，殘余物通過硅膠柱色譜(70g)純化，用0-50％etoac-環(huán)己烷梯度洗脫40分鐘。通過在硅膠tlc(50％etoac-環(huán)己烷)檢測(cè)級(jí)分，并用kmno4溶液染色。合并適當(dāng)?shù)募?jí)分，減壓蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(2.73g,79％)，為無色油狀物：lcms(系統(tǒng)c)rt＝0.79min,es+vem/z220(m+h)+和439(2m+h)+；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ1.42(s,9h),1.96-2.14(m,2h),3.32-3.41(m,2h),3.42-3.50(m,2h),3.54-3.61(m,1h),3.62-3.69(m,h),4.90(t,j＝5.8hz,1h)；[α]d20＝-28(c＝3.51在chcl3中)。
(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xix)
將(-)-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xxi)(200mg,0.9mmol)在mecn(1ml)和水(1ml)中的溶液用rucl3(9.5mg,0.05mmol)和高碘酸鈉(976mg,4.5mmol)處理，并將混合物在20℃下攪拌16小時(shí)。將混合物用1mhcl(5ml)酸化并在dcm中分配。將水相用dcm再萃取兩次，并在相分離柱中分離各相。將有機(jī)溶液在吹掃裝置中蒸發(fā)，得到(r)-1-(叔丁氧基羰基)-3-氟吡咯烷-3-甲酸(化合物xxii)(125mg,59％)：mses-vem/z232(m-h)-。將酸(125mg，0.54mmol)溶于乙酸乙酯(10ml)中，并用cdi(360mg，2.2mmol)處理，將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后在50℃下加熱0.5小時(shí)。將混合物在吹掃裝置中濃縮，將殘余物溶于thf(6ml)中，并用(r)-(+)-α-甲基芐基胺(200mg,1.9mmol)處理，并在20℃攪拌1.5小時(shí)。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用2mhcl溶液洗滌兩次，隨后用鹽水洗滌。將有機(jī)溶液干燥(mgso4)，減壓蒸發(fā)，得到灰色固體(290mg)。將殘余物溶于meoh-dmso(1:1；3ml)中，并在室溫通過在xselectcshc18柱(150mm×30mm內(nèi)徑5μm填充直徑)上的mdap純化，用30-85％(10mm碳酸氫銨的水溶液(用氨水溶液調(diào)節(jié)至ph為10)-乙腈)梯度洗脫30分鐘，在254nm檢測(cè)，收集rt＝17.4分鐘的峰，es+vem/z337(m+h)+。在45℃下在氮?dú)庀略诖祾哐b置中濃縮級(jí)分，并用etoac萃取殘余的懸浮液。將有機(jī)溶液用2mhcl洗滌兩次，然后用鹽水洗滌，干燥(mgso4)，減壓蒸發(fā)，得到黃色膠狀物(35mg)。在xbridgec18柱(100mm×19mm內(nèi)徑5μm填料直徑)上，通過mdap再次純化膠狀物，在室溫，用(10mm碳酸氫銨的水溶液(用氨水溶液調(diào)節(jié)至ph為10)-乙腈)梯度洗脫25分鐘，在254nm檢測(cè))，收集第一級(jí)分(rt＝10分鐘)。在吹掃裝置中在氮?dú)庀略?5℃下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(16mg,5％)，為無色膠狀物：lcms(系統(tǒng)c)rt＝1.16min,es+vem/z337(m+h)+,354(m+nh4)+；分析型手性hplcrt＝7.58min,97.7％，在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上，用10％etoh-庚烷洗脫，流速＝1ml/min，在215nm處檢測(cè)；[α]d20+63(c＝1.15在meoh中)。1hnmr波譜(500mhz,cdcl3)以及旋光性和手性hplcrt都與(r)-3-氟-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(化合物xix)一樣。
通過降解成(s)-(+)-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二氫呋喃-2(3h)-酮(化合物xxiv)來確定實(shí)施例1的芐型不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型
在室溫，將4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸(實(shí)施例1(200mg,0.412mmol)的dcm(20ml)溶液用碘甲烷(0.400ml,6.40mmol)處理，并攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮以除去過量的碘甲烷，將殘余固體再溶解于dcm(10ml)中，然后加入碳酸鉀(250mg，1.809mmol)。將反應(yīng)混合物在微波反應(yīng)器中加熱至120℃保持1小時(shí)。將溶液過濾并真空濃縮，將殘余油狀物通過硅膠柱色譜(10g)純化，用0-100％tbme的環(huán)己烷溶液梯度洗脫，在220nm處檢測(cè)。將相關(guān)的級(jí)分在真空中濃縮，得到(s)-(+)-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二氫呋喃-2(3h)-酮(化合物xxiv)(80mg,82％)，為無色油狀物：lcms(系統(tǒng)b)rt＝0.80min,100％,es+vem/z237(m+h)+；1hnmr(400mhz,cdcl3)7.34–7.26(m,1h),6.92–6.72(m,3h),4.67(dd,j＝9.0,7.9hz,1h),4.28(dd,j＝9.1,8.1hz,1h),4.20–4.10(m,2h),3.84–3.72(m,3h),3.48(s,3h),2.93(dd,j＝17.5,8.7hz,1h),2.68(dd,j＝17.5,9.0hz,1h)；[α]d22＝+42(c＝1.06的chcl3溶液)；手性hplcrt＝9.72min,100％，在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上，用40％etoh的庚烷溶液洗脫，流速＝1ml/min，在215nm處檢測(cè)。
合成用于與化合物(xxiv)比較的真正的(r)-(-)-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)二氫呋喃-2(3h)-酮(化合物xxv)
向雙(降冰片二烯)銠(i)四氟硼酸鹽(購自aldrich)(37.4mg,0.100mmol)、(r)-binap(125mg,0.200mmol)和(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)硼酸(購自enamine)(980mg,5.00mmol)的1,4-二噁烷(10ml)溶液中加入呋喃-2(5h)-酮(購自alfaaesar)(0.142ml，2.0mmol)和koh水溶液(3.8m，1.053ml，4.00mmol)。將所得溶液在微波反應(yīng)器中加熱至100℃保持1小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻，并在水(20ml)和dcm(20ml)之間分配。分離各層，使有機(jī)層通過疏水砂芯，真空濃縮。將殘余的油通過在kpnh柱色譜(50g)純化，使用0-100％tbme的環(huán)己烷溶液梯度洗脫45分鐘，在220nm處檢測(cè)。將相關(guān)的級(jí)分在真空中濃縮，得到標(biāo)題化合物(101mg,21％)，為無色油狀物：lcms(系統(tǒng)b)rt＝0.80min,100％,es+vem/z237(m+h)+；[α]d23＝-37(c＝1.10，在chcl3中)；手性hplcrt＝11.82min,94％和rt＝9.67min,6％，在chiralpakad柱(250mm×4.6mm)上，用40％etoh的庚烷溶液洗脫，流速＝1ml/min，在215nm處檢測(cè)，表明該標(biāo)題化合物為化合物(xxiv)的對(duì)映異構(gòu)體。
因此：實(shí)施例1為(s)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸
且實(shí)施例2為(r)-4-((s)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)丁酸。