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適配子構(gòu)建體的制作方法

文檔序號:11850003閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種適配子,其包含序列5′-X-ACGUAUACUAU-Y-3′(SEQ ID NO:1),其中X和Y的序列是互補(bǔ)的,從而能夠堿基配對,其中X和Y單獨地包含一段CG配對的核苷酸,所述CG配對的核苷酸足以允許至少一種半簇附著至其上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適配子,其中X和Y單獨地包含至少4個CG配對的核苷酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的適配子,其包含4至15個CG配對的核苷酸。

4.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中所述CG配對的核苷酸構(gòu)成適配子的莖區(qū)。

5.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其是雜交RNA/DNA適配子。

6.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其顯示對CD133約24nM或更低的解離常數(shù)(KD)。

7.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其特異性結(jié)合CD133。

8.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其包含序列5’–CGCGCGCCGCACGUAUACUAUGCGGCGCGCG-3’(SEQ ID NO:2)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的適配子,其基本上由根據(jù)SEQ ID NO:2所示的序列組成。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的適配子,其由根據(jù)SEQ ID NO:2所示的序列組成。

11.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中所述半簇是DNA染色劑或在化療治療中使用的分子。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的適配子,其中所述分子選自阿霉素、亞德里亞霉素、黃連素、原黃素、米托蒽醌、柔毛霉素、沙利度胺、更生霉素、達(dá)諾霉素、放線菌素D、9-氨基吖啶、氨柔比星、安吖啶、蒽環(huán)霉素、小檗因、博來霉素、elliplicine、表柔比星、伊達(dá)比星、methpyrillo、光神霉素、絲裂霉素、絲裂霉素C、米托蒽醌、米托蒽醌、吡柔比星、匹克生瓊、普卡霉素、普羅黃素、靈菌紅素、沙利度胺、voreloxin、戊柔比星、佐柔比星、撲爾敏、prodisiosin、methapyrillino、絲裂霉素、偏端霉素、dantinomycin、偏端霉素、卡波鉑、順鉑和其它鉑衍生物、Hoechst 33258、berenil、DAPI、或溴化乙錠。

13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的適配子,其中所述半簇是阿霉素。

14.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中通過插入進(jìn)行半簇的附著。

15.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其包含一種或多種增加適配子穩(wěn)定性的修飾。

16.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中在環(huán)區(qū)的嘧啶核苷酸堿基(C和/或U)是經(jīng)2’-氟代(2’-F)修飾的。

17.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中3’端偶聯(lián)磷酸基團(tuán)、磷酸酯、或反向的dT(invdT-3’)。

18.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其中5’端偶聯(lián)染料。

19.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其包含序列5’–X-A(2′fC)G(2′-fU)A(2′fU)A(2′fC)(2′fU)A(2′fU)-Y-(inv dT)-3′(SEQ ID NO:4),其中X和Y是互補(bǔ)的,從而能夠堿基配對,其中X和Y單獨地包含一段CG配對的核苷酸,其中C是5-甲基dC,f=2-氟代,以及inv dT=反向的dT,其中X和Y的長度足以允許至少一種半簇附著至其上。

20.根據(jù)前述任一項所述的適配子,其包含序列5’–mCGmCGmCGmCmCGmCA(2′fC)G(2′-fU)A(2′fU)A(2′fC)(2′fU)A(2′fU)GmCGGmCGmCGmCG-(inv dT)-3’(SEQ ID NO:5),其中C=5-甲基dC,f=2-氟代,以及inv dT=反向的dT。

21.一種適配子,其實質(zhì)上具有與包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示序列的適配子相同的結(jié)合CD133的能力。

22.一種適配子,其包含與SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的任一項具有至少95%同一性的序列。

23.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子,其特異性結(jié)合CD133+細(xì)胞。

24.根據(jù)權(quán)利要求24所述的適配子,其中CD133+細(xì)胞是癌癥干細(xì)胞。

25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的適配子,其中所述細(xì)胞在體內(nèi)或體外。

26.根據(jù)權(quán)利要求23至25任一項所述的適配子,其中所述細(xì)胞存在于從受試者獲得的生物樣品中。

27.一種診斷或治療診斷劑,其包含根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的適配子。

28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的治療診斷劑,其是適配子-Dox綴合物。

29.一種方法,其用于鑒定在受試者中、或在從受試者獲得的生物樣品中的表達(dá)CD133的細(xì)胞和/或癌癥干細(xì)胞,所述受試者患有或疑似患有癌癥,所述方法包括將細(xì)胞與根據(jù)權(quán)利要求27或28所述的診斷劑或治療診斷劑接觸。

30.根據(jù)權(quán)利要求1至28任一項所述的適配子,其還偶聯(lián)活性半簇。

31.一種治療有需要的受試者中癌癥的方法,其包括向受試者提供根據(jù)權(quán)利要求1至21任一項所述的適配子、或根據(jù)權(quán)利要求27或28所述的治療診斷劑。

32.如權(quán)利要求1至21任一項所述的適配子或如權(quán)利要求27或28所述的治療診斷劑在制備用于治療受試者中癌癥的藥物中的用途。

33.如權(quán)利要求1至21任一項所述的適配子或如權(quán)利要求27或28所述的治療診斷劑用于治療有需要的受試者中癌癥的用途。

34.一種組合物,其包含治療有效量的如權(quán)利要求1至21任一項所述的適配子、或如權(quán)利要求27或28所述的治療診斷劑,以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。

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