新的抗普萊曬譜星抗體的制作方法
本發(fā)明涉及一種對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星(プレセプシン)測(cè)定有用的抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。
背景技術(shù)：
：眾所周知，CD14分子是一種表達(dá)于單核細(xì)胞的膜表面的糖蛋白，并具有作為L(zhǎng)PS(脂多糖)的受體的功能。CD14分子具有兩種存在形式：表達(dá)于細(xì)胞表面上的膜結(jié)合型CD14(mCD14)和可溶型CD14(sCD14)。作為sCD14，已知分子量約55kDa和約49kDa的sCD14(下面，稱作“高分子量sCD14”)，已報(bào)告了sCD14在敗血癥(SEPSIS)、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等許多疾病的患者血液中顯示出高的值。因此，認(rèn)為這些高分子量sCD14不是疾病特異性標(biāo)記(非專利文獻(xiàn)1～2)。另一方面，報(bào)告了在敗血癥患者中，存在作為一種新的sCD14分子的sCD14-ST(可溶性CD14抗原亞型，也稱作普萊曬譜星)，其在血液中的濃度特征性地上升。所謂sCD14-ST(普萊曬譜星)，其特征在于，在sCD14中，在非還原條件下進(jìn)行的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodiumdodecylsulphate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)中，其遷移至分子量為13±2kDa的位置，并且，保持CD14的N端部。對(duì)sCD14-ST而言，與高分子量sCD14相比，其具有C端側(cè)顯著缺失的氨基酸序列，而與高分子量sCD14不同的是，其不具有LPS結(jié)合能。另外，普萊曬譜星顯示出與高分子量sCD14不同的免疫原性，因而能夠使用抗體來(lái)對(duì)兩者進(jìn)行區(qū)分。在敗血癥患者中，普萊曬譜星在血液中的濃度特異性地升高(專利文獻(xiàn)1)。另外，報(bào)告了：相比于顯示出難以與敗血癥進(jìn)行判別的全身性炎癥反應(yīng)(SIRS)的患者，普萊曬譜星在敗血癥患者血液中顯示出更高的值，認(rèn)為普萊曬譜星是敗血癥的特異性診斷標(biāo)記(非專利文獻(xiàn)3)。已公開了可特異性識(shí)別普萊曬譜星的來(lái)自兔的多克隆抗體(S68抗體)以及來(lái)自大鼠的單克隆抗體(F1146-17-2)(專利文獻(xiàn)1、2)。目前，在普萊曬譜星的測(cè)定中，使用來(lái)自兔的多克隆抗體作為針對(duì)普萊曬譜星的特異性抗體的測(cè)定系統(tǒng)已投入實(shí)際應(yīng)用中，測(cè)定試劑盒已在歐洲和日本的市場(chǎng)上銷售(PATHFAST(R)普萊曬譜星，三菱化學(xué)Medience株式會(huì)社)至今為止，一直在嘗試獲取能實(shí)用化的抗人普萊曬譜星單克隆抗體，但是，還未能獲得具有令人滿意的性能的抗體?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)：專利文獻(xiàn)1：國(guó)際公報(bào)WO2005/108429；專利文獻(xiàn)2：國(guó)際公報(bào)WO2004/044005。非專利文獻(xiàn)1：Hayashi等，InfectionandImmunity，67：417-420,1999年；非專利文獻(xiàn)2：Lawn等，Clinical&ExperimentalImmunology，120：483-487，2000年；非專利文獻(xiàn)3：Yaegashi等，JournalofInfectionandChemotherapy，11：234-238，2005年。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的課題是提供一種新的單克隆抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，它們與普萊曬譜星的反應(yīng)性優(yōu)異、且適用于測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星。另外，本發(fā)明的課題是提供一種單克隆抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，普萊曬譜星的測(cè)定值與S68抗體(WO2004/044005的實(shí)施例1所述的、以S68肽作為給藥抗原并對(duì)兔進(jìn)行免疫而獲得的多克隆抗體)的測(cè)定值之間的相關(guān)性良好。另外，本發(fā)明的課題是，提供一種單克隆抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，使用該抗體測(cè)定的普萊曬譜星測(cè)定值難以受到檢測(cè)體中干擾物質(zhì)(例如，甘油三酯)的影響，即使針對(duì)具有各種背景因素的受試者的檢測(cè)體，也能以良好的精度來(lái)測(cè)定普萊曬譜星。解決課題的方法從使用S68肽對(duì)兔進(jìn)行免疫而獲得的多個(gè)雜交瘤中，經(jīng)過對(duì)S68肽的結(jié)合活性、對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性等多個(gè)篩選工序，獲得了多個(gè)單克隆抗體。構(gòu)建用于普萊曬譜星測(cè)定的ELISA系統(tǒng)，對(duì)與普萊曬譜星的反應(yīng)性進(jìn)行研究，可知：與使用了F1146-17-2(WO2004/044005的實(shí)施例2所述的、使用S68肽對(duì)大鼠進(jìn)行免疫而獲得的單克隆抗體：序列號(hào)42～47)的ELISA系統(tǒng)相比，獲得了與普萊曬譜星的反應(yīng)性提高了約1萬(wàn)倍的抗體。在使用所述各兔單克隆抗體的ELISA系統(tǒng)中，對(duì)多個(gè)敗血癥患者血液中的普萊曬譜星值進(jìn)行測(cè)定，對(duì)與基于使用S68抗體的ELISA系統(tǒng)獲得的測(cè)定值的相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了存在相關(guān)性優(yōu)異的抗體、以及相關(guān)性較差的抗體。進(jìn)一步進(jìn)行探究時(shí)，發(fā)現(xiàn)了檢測(cè)體中的甘油三酯(TG)的干擾與所述差異有關(guān)。在繼續(xù)進(jìn)行研究以獲得與使用S68抗體獲得的普萊曬譜星測(cè)定值的相關(guān)性良好、很難受到檢測(cè)體中TG的干擾、適用于測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星的單克隆抗體時(shí)，發(fā)現(xiàn)：由于抗體識(shí)別的表位不同，所述抗體在性能方面產(chǎn)生差異。即，發(fā)現(xiàn)了：檢測(cè)體中的甘油三酯(也記作TG)的干擾和/或表位與所述差異有關(guān)。另外發(fā)現(xiàn)，具備普萊曬譜星測(cè)定所優(yōu)選的性能的抗體將普萊曬譜星中的由序列號(hào)1表示的氨基酸序列(krvdadadpr：相當(dāng)于序列號(hào)3(人全長(zhǎng)可溶性CD14)的第52位～第61位的區(qū)域：也被稱作P03序列)作為表位。該表位是本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)的新的表位。通過由P03序列構(gòu)成的氨基酸殘基，以所述P03序列作為表位而識(shí)別的抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制。另一方面，通過序列號(hào)35～41的各氨基酸殘基，該抗體與普萊曬譜星的反應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)抑制低于20％。即，通過由序列號(hào)36(相當(dāng)于人全長(zhǎng)可溶性CD14的第49位～第58位：也稱作P02序列)構(gòu)成的氨基酸殘基、由序列號(hào)37(相當(dāng)于人全長(zhǎng)可溶性CD14的第55位～第64位：也稱作P04序列)構(gòu)成的氨基酸殘基、或由序列號(hào)38(相當(dāng)于人全長(zhǎng)可溶性CD14的第58位～第67位：也稱作P05序列)構(gòu)成的氨基酸殘基，該抗體與普萊曬譜星的反應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)抑制低于20％。根據(jù)上述結(jié)果，可知以該P(yáng)03序列作為表位而識(shí)別的抗體對(duì)P03序列的特異性高。同時(shí)，可知在由雜交瘤獲得的抗體中，以普萊曬譜星中的P04序列和P05序列作為表位而識(shí)別的抗體在進(jìn)行普萊曬譜星測(cè)定時(shí)易于受到檢測(cè)體中的TG的干擾等，不適于普萊曬譜星測(cè)定。如此，出乎意料的是，抗體識(shí)別的表位位置的細(xì)微差別會(huì)對(duì)用于測(cè)定普萊曬譜星的抗體的性能產(chǎn)生影響。另外，在P03序列(序列號(hào)1)中的第8位天冬氨酸置換為丙氨酸的氨基酸殘基中，前述抗體與普萊曬譜星的反應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)抑制低于20％。另一方面，可知將P03序列(序列號(hào)1)的第2位至第7位、第9位及第10位中的任意的氨基酸置換為丙氨酸(或甘氨酸)的氨基酸殘基對(duì)前述抗體與普萊曬譜星的反應(yīng)造成50％以上的競(jìng)爭(zhēng)抑制。進(jìn)而，為了制備具有普萊曬譜星測(cè)定所優(yōu)選的性能的抗體，基于以P03序列作為表位而識(shí)別的抗體的序列，對(duì)CDR序列進(jìn)行修飾。另外，使用噬菌體展示法來(lái)制備抗體。以一定的基準(zhǔn)對(duì)所得到的抗體進(jìn)行篩選，從而獲得與由雜交瘤獲得的抗體性能相同或更好的抗體。確認(rèn)了由雜交瘤獲得的、以P03序列作為表位而識(shí)別的抗體以及選擇的變體對(duì)普萊曬譜星的親和性非常高，在用于測(cè)定普萊曬譜星的夾心ELISA體系中難以受到檢測(cè)體中的干擾物質(zhì)(特別是甘油三酯)的影響，與基于S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)之間具有良好的相關(guān)性，并且適用于測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星的抗體。即，本發(fā)明如下所述。1.一種抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其特異性識(shí)別由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位。2.如前述1所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段包括：(i)重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)1：X1X2X3MX4；(ii)VHCDR2：IX5X6X7X8YAX9X10X11X12X13；及(iii)VHCDR3：X14X15X16；以及，(iv)輕鏈可變區(qū)(VL)CDR1：X17X18X19X20X21X22X23X24；(v)VHCDR2：KX25X26X27X28X29S；及(vi)VHCDR3：X30X31X32YX33X34X35X36X37；X1～X37是下述表1～表6中記載的1個(gè)或多個(gè)氨基酸序列。表1表2表3表4表5表63.如前述2所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，X1＝R、S、A、M、P、V、I、D、E、H、T、Q、Y、G、K、N或W。4.如前述1至3中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段包括VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3、以及，VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3；VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3是選自表7中記載的氨基酸序列，VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3是選自表8中記載的氨基酸序列。表7表85.如前述1至4中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段含有VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，以及，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3選自表9-1、表9-2以及表9-3中記載的氨基酸序列。表9-1表9-2表9-36.一種抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其含有：(a)含有由序列號(hào)7的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)97的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2和由序列號(hào)9的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3的VH；以及，含有由序列號(hào)22的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)23的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2和由序列號(hào)24的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3的VL；或者，(b)含有由序列號(hào)7的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)8的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2和由序列號(hào)94的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3的VH；以及，含有由序列號(hào)22的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)23的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2和由序列號(hào)24的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3的VL。7.一種抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其含有：(a)含有由序列號(hào)4的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)5的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2和由序列號(hào)6的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3的VH；以及，含有由序列號(hào)19的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)20的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2和由序列號(hào)21的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3的VL；(b)含有由序列號(hào)7的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)8的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2和由序列號(hào)9的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3的VH；以及，含有由序列號(hào)22的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)23的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2和由序列號(hào)24的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3的VL；或者，(c)含有由序列號(hào)10的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)11的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2和由序列號(hào)12的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3的VH；以及，含有由序列號(hào)25的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)26的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2和由序列號(hào)27的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3的VL。8.如前述1至7中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體或片段以低于10-8M的親和性(KD)與普萊曬譜星結(jié)合。9.如前述1至8中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，為了抑制前述抗體或片段與普萊曬譜星的結(jié)合，在使由序列號(hào)1的序列構(gòu)成的氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制。10.如前述9所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，前述反應(yīng)體系是使用(a)前述抗體或片段以及(b)F1106-13-3抗體或F1031-8-3抗體的夾心ELISA。11.如前述1至10中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，為了抑制前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，借助由序列號(hào)35、36、37、38、39、40或41中任一序列構(gòu)成的氨基酸殘基，前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制率小于20％。12.如前述1至11中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，為了抑制前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，借助由序列號(hào)1中的第8位天冬氨酸置換為丙氨酸的序列構(gòu)成的氨基酸殘基，前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制率小于20％。13.如前述1至12中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，為了抑制前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，借助由下述序列構(gòu)成的氨基酸殘基，前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制，該序列是序列號(hào)1中第2位至第7位、第9位以及第10位中任意氨基酸置換為丙氨酸(或甘氨酸)而成的序列。14.如前述1至13中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體具有與由固定化于固相的序列號(hào)1的序列構(gòu)成的氨基酸殘基的結(jié)合活性。15.如前述1至14中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，其是將序列號(hào)2所述的肽作為給藥抗原而進(jìn)行制備的。16.如前述1至15中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體不與高分子量可溶型CD14特異性地結(jié)合。17.如前述1至16中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，在使用前述抗體對(duì)多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行甘油三酯(TG)的干擾試驗(yàn)時(shí)，檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±20％以下的檢測(cè)體的比率為50％以上。18.如前述1至17中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，在使用前述抗體對(duì)多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)時(shí)，當(dāng)檢測(cè)體中TG濃度為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度的平均值為±20％以下。19.如前述1至18中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，在使用前述抗體對(duì)多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)時(shí)，檢測(cè)體為正常人血清，檢測(cè)體中的TG濃度為10mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±100％以下的檢測(cè)體的比率為50％以上。20.如前述1至19中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，使用前述抗體而獲得的檢測(cè)體中的普萊曬譜星的測(cè)定值與使用S68抗體而獲得的檢測(cè)體中的普萊曬譜星的測(cè)定值的相關(guān)系數(shù)顯示為0.9以上。21.如前述20所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述相關(guān)系數(shù)為0.95以上。22.如前述1至21中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體以低于1.08E-08的親和性(KD值)與rsCD14ST-Fc結(jié)合。23.如前述1至22中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，相比于大鼠來(lái)源的抗普萊曬譜星抗體(F1146-17-2)與普萊曬譜星的結(jié)合活性，由普萊曬譜星濃度比表示的前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合活性升高10000倍以上。24.如前述1至23中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體與固定化于固相的rsCD14ST-Fc的結(jié)合活性(吸光度)是S68抗體與固定化于固相的rsCD14ST-Fc的結(jié)合活性的2倍以上。25.如前述1至24中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗體或片段是單克隆抗體。26.如前述1至25中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其中，前述抗原結(jié)合性抗體片段是選自由Fab、Fab′、F(ab′)2、單鏈抗體(scFv)、二聚體化V區(qū)(二聚抗體)、二硫鍵穩(wěn)定性V區(qū)(dsFv)、sc(Fv)2、含有CDR的多肽、含有重鏈可變區(qū)的多肽以及含有輕鏈可變區(qū)的多肽所組成的組中的抗原結(jié)合性抗體片段。27.一種多核苷酸，其編碼前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。28.一種重組載體，其含有前述27所述的多核苷酸。29.一種轉(zhuǎn)化體，其是將前述28所述的重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中而獲得的。30.如前述29所述的轉(zhuǎn)化體，其中，前述宿主細(xì)胞為CHO細(xì)胞。31.一種抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段的制備方法，其包括培養(yǎng)前述29或30所述的轉(zhuǎn)化體。32.一種普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒，其至少包含前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段。33.一種用于檢測(cè)敗血癥的試劑盒或者用于對(duì)敗血癥的檢測(cè)或診斷進(jìn)行輔助的試劑盒，其至少包含前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或片段。34.如前述32所述的普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒，前述普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒用于選自由敗血癥與全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(systemicinflammatoryresponsesyndrome、SIRS)的判別、敗血癥的嚴(yán)重化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、敗血癥的預(yù)后預(yù)測(cè)(死亡率預(yù)測(cè))、敗血癥的嚴(yán)重度的評(píng)價(jià)、術(shù)后傳染病的檢測(cè)、彌散性血管內(nèi)凝血(disseminatedintravascularcoagulation、DIC)的檢測(cè)、感染性DIC的檢測(cè)、心臟疾病的檢測(cè)、伴隨細(xì)菌感染的呼吸道傳染病的檢測(cè)、炎癥性腸疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎)的檢測(cè)、粒細(xì)胞減少性發(fā)熱(febrileneutropenia、FN)的檢測(cè)、噬血細(xì)胞綜合癥(hemophagocyticsyndrome、HPS)的檢測(cè)以及吞噬細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)所組成的組中的至少一種疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)。35.前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段在普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒中的應(yīng)用。36.一種普萊曬譜星的測(cè)定方法，其至少包括接觸工序，該接觸工序使含普萊曬譜星的檢測(cè)體與前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段進(jìn)行接觸。37.一種敗血癥的檢測(cè)方法、或?qū)⊙Y的檢測(cè)或診斷進(jìn)行輔助的方法，所述方法至少包括下述工序：1)測(cè)定工序，該測(cè)定工序使用前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度進(jìn)行測(cè)定；以及，2)判定工序，該判定工序?qū)⒃?)中獲得的普萊曬譜星濃度與臨界值進(jìn)行比較，判定所述普萊曬譜星濃度是否高于所述臨界值。38.一種疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)方法，該疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)為選自由敗血癥與全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(systemicinflammatoryresponsesyndrome、SIRS)的判別、敗血癥的嚴(yán)重化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、敗血癥的預(yù)后預(yù)測(cè)(死亡率預(yù)測(cè))、敗血癥的嚴(yán)重度的評(píng)價(jià)、術(shù)后傳染病的檢測(cè)、彌散性血管內(nèi)凝血(disseminatedintravascularcoagulation、DIC)的檢測(cè)、感染性DIC的檢測(cè)、心臟疾病的檢測(cè)、伴隨細(xì)菌感染的呼吸道傳染病的檢測(cè)、炎癥性腸疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎)的檢測(cè)、粒細(xì)胞減少性發(fā)熱(febrileneutropenia、FN)的檢測(cè)、噬血細(xì)胞綜合癥(hemophagocyticsyndrome、HPS)的檢測(cè)以及吞噬細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)所組成的組中的至少一種，前述方法至少包括下述工序：1)測(cè)定工序，該測(cè)定工序使用前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度進(jìn)行測(cè)定；以及，2)判定工序，該判定工序?qū)⒂?)獲得的普萊曬譜星濃度與臨界值進(jìn)行比較，判定所述普萊曬譜星濃度是否高于所述臨界值。39.一種抗普萊曬譜星抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的篩選方法，其至少包括下述工序：1)構(gòu)建工序，該構(gòu)建工序使用候選的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段來(lái)構(gòu)建普萊曬譜星測(cè)定系統(tǒng)，以及2)確定工序，該確定工序使用該測(cè)定系統(tǒng)來(lái)確定檢測(cè)體中的TG濃度對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生的影響。40.一種抗普萊曬譜星抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的篩選方法，其至少包括下述工序：1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體或抗原結(jié)合性抗體片段；以及，2)選擇工序，該選擇工序是為了抑制該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使由序列號(hào)1構(gòu)成的氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系中，選擇前述抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制的前述抗體或抗原結(jié)合性抗體片段。41.一種抗普萊曬譜星抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的篩選方法，其至少包括下述工序：1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體或抗原結(jié)合性抗體片段；以及，2)選擇工序，該選擇工序選擇以普萊曬譜星中序列號(hào)1的氨基酸序列作為表位而特異性識(shí)別的前述抗體或抗原結(jié)合性抗體片段。42.一種敗血癥的治療方法，通過使用前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段對(duì)受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星的濃度進(jìn)行測(cè)定，由此對(duì)進(jìn)行了敗血癥檢測(cè)的患者、或者進(jìn)行了敗血癥檢測(cè)或診斷的輔助的患者實(shí)施敗血癥治療。43.一種受試藥的篩選方法，其包括確定工序，該確定工序使用前述1至26中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段來(lái)確定給藥受試藥的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星的濃度。44.rsCD14ST-Fc，其包含序列號(hào)3(人全長(zhǎng)可溶性CD14)的第1位至第64位的序列、以及抗體的重鏈Fc區(qū)。45.如前述44所述的rsCD14ST-Fc，在序列號(hào)3(人全長(zhǎng)可溶性CD14)的第1位至第64位的序列與抗體的重鏈Fc區(qū)之間插入了易于切斷的序列。46.如前述45所述的rsCD14ST-Fc，其中，前述易于切斷的序列是凝血酶識(shí)別序列。47.如前述44至46中任一項(xiàng)所述的rsCD14ST-Fc，其中，前述抗體的重鏈Fc區(qū)是人源IgG1抗體重鏈Fc區(qū)。48.一種rsCD14ST-Fc的制備方法，其包括培養(yǎng)工序：將包含序列號(hào)3(人全長(zhǎng)可溶性CD14)的第1位至第64位的序列以及抗體的重鏈Fc區(qū)的序列的載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，并培養(yǎng)該宿主細(xì)胞。49.一種rsCD14-ST的制備方法，其包括將前述48所述的rsCDST-Fc的Fc區(qū)切斷的工序。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，通過提供與普萊曬譜星的反應(yīng)性優(yōu)異、且適于對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星進(jìn)行測(cè)定的抗體及其抗原結(jié)合性抗體片段，能提高普萊曬譜星測(cè)定的質(zhì)量和精度。能夠提供對(duì)普萊曬譜星的親和性高的抗體，由此，該抗體能適用于對(duì)正常人水平的微量的普萊曬譜星進(jìn)行定量，并能提高靈敏度。另外，能夠提供難以受到檢測(cè)體中干擾物質(zhì)的影響的抗體，由此，夾心ELISA系統(tǒng)的測(cè)定值會(huì)難以受到血清樣品的個(gè)體差異(受試者的背景因素)的影響，從而能進(jìn)行高精度測(cè)定。在夾心ELISA系統(tǒng)中，能進(jìn)行高特異性測(cè)定，即，僅與普萊曬譜星特異性地結(jié)合、而不與人血液中存在的高分子量sCD14特異性結(jié)合。能提供解決基于多克隆抗體進(jìn)行的普萊曬譜星測(cè)定的課題(確保批次間的均一性、生產(chǎn)難度、成本等)、實(shí)用性優(yōu)異的抗體。即，單克隆抗體具有以下優(yōu)勢(shì)：能夠以低價(jià)、穩(wěn)定且有效的方式來(lái)生產(chǎn)，并且能夠保持抗體的均一品質(zhì)。附圖說(shuō)明圖1是表示使用F1466-26(A)、F1466-5(B)以及F1466-19(C)的抗體來(lái)進(jìn)行的正常人血清的TG干擾試驗(yàn)的結(jié)果的圖。圖2是表示在實(shí)施例8和實(shí)施例12中獲得的各變體的圖。圖2-1是表示在實(shí)施例8和實(shí)施例12中獲得的各變體的圖。其是續(xù)圖2的圖。圖2-2是表示在實(shí)施例8和實(shí)施例12中獲得的各變體的圖。其是續(xù)圖2、圖2-1的圖。具體實(shí)施方式下面，對(duì)發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。1.特異性地識(shí)別由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位的抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段本發(fā)明的第一方式是一種抗普萊曬譜星抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其特異性地識(shí)別作為普萊曬譜星上的新的表位的序列號(hào)1的氨基酸序列。所謂“特異性地識(shí)別由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位”是指，在普萊曬譜星的序列中，抗體將相當(dāng)于序列號(hào)1的氨基酸序列的序列作為表位而進(jìn)行特異性識(shí)別?！翱乖Y(jié)合性抗體片段”是指，在對(duì)由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位進(jìn)行特異性識(shí)別的抗體的部分片段中，具有與原抗體相同的抗原結(jié)合性的片段。“序列的同一性”或“序列的同源性(homology)”是針對(duì)2個(gè)或多于2個(gè)的多核苷酸序列或氨基酸序列之間的關(guān)系而言的，即，是針對(duì)參考序列、以及作為要與參考序列進(jìn)行對(duì)比的對(duì)象序列之間的關(guān)系而言的。為了創(chuàng)建通過序列間的一致而確定的高度的序列相似性，在將序列調(diào)節(jié)至最佳后，通過將對(duì)象序列與參考序列進(jìn)行對(duì)比來(lái)確定序列同一性或同源性。關(guān)于這種調(diào)節(jié)，在每個(gè)位置確定序列同一性。例如，在某個(gè)位置上，當(dāng)核酸或氨基酸相同時(shí)，則認(rèn)為在特定的位置處序列相同。將顯示出這種同一性的位置的總數(shù)除以參考序列的核酸或殘基的總數(shù)，由此，獲得序列同一性％。序列同一性能夠通過公知的方法來(lái)簡(jiǎn)便計(jì)算，對(duì)所述方法沒有特別的限定，但是，這些方法記載在ComputationalMolecularBiology,LeskA.N.,ed.,OxfordUniversityPress,NewYork(1988)；Biocomputing:InformaticsandGenomeProjects,SmithD.W.,ed.,AcademicPress,NewYork(1993)；ComputerAnalysisofSequenceData,PartI,GrifEnA.M.,andGrifEnH.G.,eds.,HumanaPress,NewJersey(1994)；SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeingeG.,AcademicPress(1987)；SequenceAnalysisPrimer,GribskovM.andDevereuxJ.,eds.,M.StocktonPress,NewYork(1991)；和CarilloH.,andLipmanD.,SIAMJ.AppliedMath.,48:1073(1988)等中。確定序列同一性所優(yōu)選的方法是在進(jìn)行試驗(yàn)的序列之間以賦予最大一致的方式設(shè)計(jì)的。序列同一性的確定方法在能公開利用的計(jì)算機(jī)程序中加以系統(tǒng)化，確定所給的序列間的序列同一性。對(duì)這種程序的實(shí)例沒有特別限定，但是，可列舉GCG程序包(Devereuxetal.,Nuc.Ac.Res.,12(1):387(1984)),BLASTP,BLASTNandFASTA(Altschuletal,J.Molec.Biol,215:403-410(1990)).等。NCBI等的BLASTX程序能公開利用。在本發(fā)明中，對(duì)表位的確定方法沒有特別的限定，但是，例如，可通過實(shí)施例6所述的方法進(jìn)行確認(rèn)。本發(fā)明的抗體的特征在于，為了抑制該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使P03肽(由序列號(hào)1表示的氨基酸序列)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)(優(yōu)選利用吸光度)的反應(yīng)體系中，抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制。該反應(yīng)體系優(yōu)選為夾心ELISA系統(tǒng)。更優(yōu)選的是使用(a)本發(fā)明的抗體或片段、以及(b)F1106-13-3抗體或F1031-8-3抗體的夾心ELISA。序列號(hào)1的氨基酸序列相當(dāng)于人全長(zhǎng)可溶性CD14的氨基酸序列(序列號(hào)3)的第52位～第61位。優(yōu)選：對(duì)于本發(fā)明的抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，基于P01肽(由序列號(hào)3的第46位～第55位表示的氨基酸序列)、P02肽(由同一序列的第49位～第58位表示的氨基酸序列)、P05肽(同一序列的第58位～第67位)、P06肽(同一序列的第61位～第70位)、或者P07肽(同一序列的第64位～第73位)、P08肽(同一序列的第67位～第76位)導(dǎo)致的競(jìng)爭(zhēng)抑制小于20％。優(yōu)選：對(duì)于本發(fā)明的抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，基于P04肽(同一序列的第55位～第64位)導(dǎo)致的競(jìng)爭(zhēng)抑制小于20％。另外，作為用于確定表位的其他方法，例如，如實(shí)施例9-(4)所述地，能對(duì)作為目標(biāo)的抗原的部分序列(例如，P03肽)與抗體的結(jié)合活性進(jìn)行觀察。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，提供一種抗普萊曬譜星抗體，其與下述序列結(jié)合：P03序列(序列號(hào)1)中，除第8位天冬氨酸以外的氨基酸序列中的1或多個(gè)被取代的序列。被取代的氨基酸的數(shù)目?jī)?yōu)選2個(gè)氨基酸以內(nèi)，進(jìn)一步優(yōu)選1個(gè)氨基酸。例如，在本發(fā)明的一個(gè)方式中，提供抗普萊曬譜星抗體，該抗普萊曬譜星抗體與P03序列或其具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列相結(jié)合。對(duì)象表位可以是與P03序列具有90％以上、優(yōu)選91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上或100％的同一性的序列。在某個(gè)實(shí)施方式中，對(duì)與P03序列具有90％以上的同一性的序列特異性的抗普萊曬譜星抗體可以是單克隆抗體。本發(fā)明的抗體是特異性識(shí)別普萊曬譜星的抗體。普萊曬譜星(sCD14-ST)是CD14的可溶型片段，并具有下述1)～3)的性質(zhì)。1)在非還原條件下進(jìn)行的SDS-PAGE中，分子量為13±2kDa；2)N末端序列具有序列號(hào)3的第1位～第11位的氨基酸序列；以及，3)與以含有序列號(hào)2的16個(gè)氨基酸殘基的肽作為抗原而制備的抗體特異性結(jié)合。即，在本發(fā)明中，對(duì)于普萊曬譜星而言，只要沒有特別說(shuō)明，即指人普萊曬譜星。另外，在本發(fā)明中，作為普萊曬譜星，不僅可以使用普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品(WO2005/108429的實(shí)施例16所述的rsCD14-ST)，還可以使用rsCD14ST-Fc(實(shí)施例9-(2)所述)等具有普萊曬譜星活性的物質(zhì)。在本發(fā)明中，所謂“對(duì)….特異性識(shí)別的抗體”是指：對(duì)特異性識(shí)別的對(duì)象進(jìn)行免疫識(shí)別的抗體和/或與特異性識(shí)別的對(duì)象顯示出通常的抗原抗體反應(yīng)的抗體。在將特異性識(shí)別的對(duì)象與該抗體的結(jié)合作為親和性來(lái)表示的情況下，通常，平衡解離常數(shù)(KD)小于10-7M。本發(fā)明的抗體僅特異性識(shí)別普萊曬譜星。在存在于人血液的主要的可溶性CD14中，有約55kDa和約49kDa的可溶性CD14(高分子量sCD14)。本發(fā)明的抗體不與高分子量sCD14特異性結(jié)合。對(duì)于高分子量sCD14而言，可以使用由序列號(hào)3的氨基酸序列構(gòu)成的人全長(zhǎng)可溶性CD14，另外，例如，還可以通過正常人體液的3C10抗體親和柱吸附來(lái)制備(參見WO2005/108429實(shí)施例23)。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與普萊曬譜星的反應(yīng)性優(yōu)異，適于對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星進(jìn)行測(cè)定。例如，使用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段來(lái)構(gòu)建夾心ELISA系統(tǒng)，能測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星。對(duì)于本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段而言，與F1146-17-2(WO2004/044005的實(shí)施例2所述的大鼠來(lái)源的單克隆抗體)相比，其在夾心ELISA系統(tǒng)中與普萊曬譜星的反應(yīng)性提高約1萬(wàn)倍(實(shí)施例4)，從而適于對(duì)檢測(cè)體中的微量普萊曬譜星進(jìn)行檢測(cè)。即，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段的特征是，與F1146-17-2相比，以普萊曬譜星的濃度比計(jì)，其與普萊曬譜星的反應(yīng)性提高1萬(wàn)倍以上。對(duì)于敗血癥患者，報(bào)告了普萊曬譜星的血液中濃度特征性地升高，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段優(yōu)選用于對(duì)敗血癥進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段優(yōu)選：如實(shí)施例1所示，在使用本抗體來(lái)構(gòu)建夾心ELISA、對(duì)敗血癥患者檢測(cè)體與正常人檢測(cè)體進(jìn)行測(cè)定時(shí)，在普萊曬譜星測(cè)定值方面觀察到差異的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段優(yōu)選以下抗體：在構(gòu)建測(cè)定系統(tǒng)來(lái)測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星時(shí)，由檢測(cè)體中的干擾物質(zhì)造成的影響不會(huì)產(chǎn)生問題的程度的抗體。在本發(fā)明中，干擾物質(zhì)是指該物質(zhì)的存在有可能對(duì)普萊曬譜星的測(cè)定值產(chǎn)生影響(下面，也稱作干擾)的物質(zhì)，例如，可舉出甘油三酯(Triglycerides：也稱作TG)、膽紅素、血色素、類風(fēng)濕因子、膽固醇等。在本發(fā)明中，用于進(jìn)行抗體評(píng)價(jià)的優(yōu)選干擾物質(zhì)為甘油三酯(TG)。作為干擾試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，能夠?qū)⑾率銎钭鳛榻怆x度(％)來(lái)表示、使用，該偏差是在檢測(cè)體中添加了一定量的干擾物質(zhì)時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值相對(duì)于沒有添加干擾物質(zhì)的同一檢測(cè)體的普萊曬譜星測(cè)定值的偏差。由于添加干擾物質(zhì)而導(dǎo)致的測(cè)定值的解離度如下所示。解離度(％)＝{(添加干擾物質(zhì)后的普萊曬譜星測(cè)定值)-(不添加干擾物質(zhì)的普萊曬譜星測(cè)定值)}/(不添加干擾物質(zhì)的普萊曬譜星測(cè)定值)×100所謂由干擾物質(zhì)造成的影響不會(huì)產(chǎn)生問題的程度能夠通過下述來(lái)表示：例如，在使用多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行的干擾試驗(yàn)中，由添加一定量的干擾物質(zhì)而導(dǎo)致普萊曬譜星測(cè)定值的解離度為±20％以下、更優(yōu)選為±10％以下的檢測(cè)體的比率高。多個(gè)檢測(cè)體中的“檢測(cè)體的比率高”通常是指，多個(gè)檢測(cè)體中的50％以上，優(yōu)選60％以上，更優(yōu)選70％以上，進(jìn)一步優(yōu)選80％以上，特別優(yōu)選90％以上。在TG的干擾試驗(yàn)中，例如，針對(duì)多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行干擾試驗(yàn)，可以將以下設(shè)為一個(gè)指標(biāo)：通過添加TG使檢測(cè)體中的TG濃度成為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±20％以下、更優(yōu)選為±10％以下的檢測(cè)體的比率高。本發(fā)明的抗體的一個(gè)優(yōu)選方式是：在通過使用該抗體的測(cè)定系統(tǒng)來(lái)實(shí)施TG干擾試驗(yàn)時(shí)，當(dāng)檢測(cè)體中的TG濃度設(shè)為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±20％以下、更優(yōu)選為±10％以下的檢測(cè)體的比率高的抗體?；蛘?，例如，可將以下設(shè)為一個(gè)指標(biāo)：通過多個(gè)檢測(cè)體，求出當(dāng)檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度，其解離度的平均值為±20％以下、更優(yōu)選為±10％以下。本發(fā)明的抗體的一個(gè)優(yōu)選方案是：在通過使用該抗體的測(cè)定系統(tǒng)對(duì)多個(gè)檢測(cè)體來(lái)進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)時(shí)，當(dāng)檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度的平均值顯示為±20％以下的抗體，更優(yōu)選解離度的平均值顯示為±10％以下的抗體。根據(jù)美國(guó)血脂異常指南NCEP-ATPIII，TG小于150mg/dL為正常，TG150～200mg/dL為邊界值，TG200～499mg/dL為高值(high)，500mg/dL以上為顯著的高值(veryhigh)。檢測(cè)體中的TG濃度20mg/mL(＝2000mg/dL)，如果參考上述標(biāo)準(zhǔn)，則可認(rèn)為TG濃度處于極高的狀態(tài)。對(duì)于本實(shí)施例中的TG干擾試驗(yàn)而言，在檢測(cè)體的TG濃度為6.7mg/mL、13.3mg/mL、20mg/mL這3點(diǎn)處測(cè)定普萊曬譜星測(cè)定值的解離度。當(dāng)檢測(cè)體的TG濃度為20mg/mL時(shí)，與解離度大的抗體(測(cè)定系)相比，對(duì)于解離度小的抗體而言，當(dāng)檢測(cè)體中TG濃度為6.7mg/mL和13.3mg/mL時(shí)，觀察到解離度為較小的傾向。TG干擾試驗(yàn)可使用正常人血清來(lái)實(shí)施。由于正常人的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度低，因而如果受到TG干擾，測(cè)定值的解離度容易變大。通過本試驗(yàn)，能夠試驗(yàn)是否能以良好的精度來(lái)測(cè)定檢測(cè)體中微量的普萊曬譜星。例如，對(duì)于檢測(cè)體中TG濃度為10mg/mL時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度而言，優(yōu)選±100％以下，更優(yōu)選±70％以下，進(jìn)一步優(yōu)選±50％以下，特別優(yōu)選±20％以下。優(yōu)選與前述試驗(yàn)同樣地使用多個(gè)檢測(cè)體來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。另外，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段可通過比較該抗體由于添加干擾物質(zhì)而導(dǎo)致的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度與S68抗體在相同條件下的解離度來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。在一個(gè)優(yōu)選的方式中，對(duì)于本發(fā)明的抗體與S68抗體而言，該解離度相似。對(duì)于TG干擾試驗(yàn)而言，例如，還可以通過下述方式來(lái)評(píng)價(jià)：在使用本發(fā)明的抗體的測(cè)定系統(tǒng)中，在通過添加TG而將檢測(cè)體中的TG濃度調(diào)節(jié)為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度與S68抗體在相同條件下的解離度的差為20％以下、更優(yōu)選為10％以下的檢測(cè)體的比率高。對(duì)于解離度的差而言，例如，當(dāng)使用本發(fā)明的抗體而獲得的測(cè)定值的解離度為+5％、使用S68抗體而獲得的測(cè)定值的解離度為-10％時(shí)，計(jì)算出解離度的差為15％。在干擾試驗(yàn)中使用的檢測(cè)體能夠使用本發(fā)明的第二方式所述的檢測(cè)體。在進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)時(shí)，檢測(cè)體優(yōu)選血清或血漿。對(duì)于本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段而言，在構(gòu)建測(cè)定系統(tǒng)以對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星進(jìn)行測(cè)定時(shí)，優(yōu)選與使用S68抗體獲得的測(cè)定值相關(guān)性良好的抗體。相關(guān)性良好是指相關(guān)系數(shù)優(yōu)選為0.9以上、更優(yōu)選為0.95以上。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與普萊曬譜星特異性結(jié)合，與普萊曬譜星的親和性(平衡解離常數(shù)，KD值)優(yōu)選小于10-7M，更優(yōu)選小于10-8M，進(jìn)一步優(yōu)選小于10-9M，特別優(yōu)選小于10-10M，最優(yōu)選10-11M以下。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與普萊曬譜星的平衡解離常數(shù)優(yōu)選10-7M～10-14M，更優(yōu)選10-8M～10-13M的范圍。普萊曬譜星可使用rsCD14ST-Fc。對(duì)于親和性(平衡解離常數(shù)、KD值)，例如，能夠使用BIACORE(GE醫(yī)療集團(tuán))進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式之一是，與S68抗體對(duì)普萊曬譜星的親和性相比，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與普萊曬譜星的親和性(KD值)更優(yōu)異。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與rsCD14ST-Fc(普萊曬譜星：實(shí)施例9-(2)所述)的親和性(KD值)優(yōu)選：與S68抗體對(duì)rsCD14ST-Fc的親和性(KD值)1.08E-08相同程度的數(shù)值、或者低于該1.08E-08的數(shù)值，更優(yōu)選S68抗體的KD值的1/2(5.40E-09)以下，進(jìn)一步優(yōu)選S68抗體的KD值的1/10(1.08E-09)以下。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式之一是，與S68抗體相比，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段與普萊曬譜星的結(jié)合活性更優(yōu)異。例如，如實(shí)施例10-(2)所示，可將rsCD14ST-Fc(普萊曬譜星)固定于固相，使其與抗體進(jìn)行反應(yīng)，通過吸光度等來(lái)評(píng)價(jià)抗體與普萊曬譜星的結(jié)合活性。例如，基于實(shí)施例10進(jìn)行試驗(yàn)，在使S68抗體與rsCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度為1時(shí)，使本發(fā)明的抗體與rsCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度比優(yōu)選1以上，更優(yōu)選2以上，進(jìn)一步優(yōu)選4以上，特別優(yōu)選5.5以上。本發(fā)明提供以下任一項(xiàng)所述的抗體。以下是抗普萊曬譜星抗體。由于下述(a)(b)(c)的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段特異性識(shí)別普萊曬譜星上的由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位，因而它們是第一實(shí)施方式中優(yōu)選的實(shí)例。更優(yōu)選(a)或(b)的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。(a)抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其包含VH與VL，所述VH包含由序列號(hào)4的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)5的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2、以及由序列號(hào)6的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3；所述VL包含由序列號(hào)19的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)20的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2、以及由序列號(hào)21的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3。(b)抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其包含VH與VL，所述VH包含由序列號(hào)7的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)8的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2、以及由序列號(hào)9的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3；所述VL包含由序列號(hào)22的氨基酸序列構(gòu)成的VLDR1、由序列號(hào)23的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2、以及由序列號(hào)24的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3。(c)抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段，其包含VH與VL，所述VH包含由序列號(hào)10的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)11的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR2、以及由序列號(hào)12的氨基酸序列構(gòu)成的VHCDR3；所述VL包含由序列號(hào)25的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)26的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR2、以及由序列號(hào)27的氨基酸序列構(gòu)成的VLCDR3。另外，本發(fā)明提供包含圖2～圖2-2所述的CDR序列的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。這些抗體特異性識(shí)別普萊曬譜星上的由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位。更優(yōu)選包含5793、5810、5864、5979、5983、5988、6028的CDR序列的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段。本發(fā)明提供包含以下任一項(xiàng)所述的CDR的多肽。更優(yōu)選(i)(ii)(iv)或(v)的多肽。(i)包含由序列號(hào)4的序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)5的序列構(gòu)成的VHCDR2以及由序列號(hào)6的序列構(gòu)成的VHCDR3的多肽。(ii)包含由序列號(hào)7的序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)8的序列構(gòu)成的VHCDR2以及由序列號(hào)9的序列構(gòu)成的VHCDR3的多肽。(iii)包含由序列號(hào)10的序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)11的序列構(gòu)成的VHCDR2以及由序列號(hào)12的序列構(gòu)成的VHCDR3的多肽。(iv)包含由序列號(hào)19的序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)20的序列構(gòu)成的VLCDR2以及由序列號(hào)21的序列構(gòu)成的VLCDR3的多肽。(v)包含由序列號(hào)22的序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)23的序列構(gòu)成的VLCDR2以及由序列號(hào)24的序列構(gòu)成的VLCDR3的多肽。(vi)包含由序列號(hào)25的序列構(gòu)成的VLCDR1、由序列號(hào)26的序列構(gòu)成的VLCDR2以及由序列號(hào)27的序列構(gòu)成的VLCDR3的多肽。另外，本發(fā)明提供包含由圖2～圖2-2所述的序列構(gòu)成的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3的多肽。另外，本發(fā)明提供包含由圖2～圖2-2所述的序列構(gòu)成的VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3的多肽。更優(yōu)選：包含由序列號(hào)7的序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)8的序列構(gòu)成的VHCDR2以及由序列號(hào)94的序列構(gòu)成的VHCDR3的多肽(5793)，或者包含由序列號(hào)7的序列構(gòu)成的VHCDR1、由序列號(hào)97的序列構(gòu)成的VHCDR2以及由序列號(hào)9的序列構(gòu)成的VHCDR3的多肽(5810)。本發(fā)明提供包含以下任一項(xiàng)記載的可變區(qū)的多肽。更優(yōu)選含有(i)(ii)(iv)或(v)的多肽。(i)包含由序列號(hào)4的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)5的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)6的序列構(gòu)成的CDR3的重鏈可變區(qū)(VH)。(ii)包含由序列號(hào)7的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)8的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)9的序列構(gòu)成的CDR3的VH。(iii)包含由序列號(hào)10的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)11的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)12的序列構(gòu)成的CDR3的VH。(iv)包含由序列號(hào)19的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)20的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)21的序列構(gòu)成的CDR3的輕鏈可變區(qū)(VL)。(v)包含由序列號(hào)22的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)23的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)24的序列構(gòu)成的CDR3的VL。(vi)包含由序列號(hào)25的序列構(gòu)成的CDR1、由序列號(hào)26的序列構(gòu)成的CDR2、由序列號(hào)27的序列構(gòu)成的CDR3的VL。另外，本發(fā)明提供包含下述重鏈可變區(qū)的多肽，該重鏈可變區(qū)包含由圖2～圖2-2所述的序列構(gòu)成的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3。另外，本發(fā)明提供包含下述輕鏈可變區(qū)的多肽，該輕鏈可變區(qū)包含由圖2～圖2-2所述的序列構(gòu)成的VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3。在本發(fā)明中，優(yōu)選前述多肽是具有與普萊曬譜星的結(jié)合活性的抗原結(jié)合物。對(duì)上述的抗體或多肽而言，在CDR序列中，1個(gè)或多個(gè)氨基酸可被置換、缺失、附加和/或插入等(稱作置換等)。對(duì)于其與抗原的結(jié)合活性、普萊曬譜星測(cè)定時(shí)的特征等，優(yōu)選1個(gè)或多個(gè)氨基酸置換等后的抗體或多肽具有與置換等前相同的活性或性能。其中，在具有與置換等前相同活性或性能的、置換等后的抗體或多肽中，包含通過公知的基因工程方法進(jìn)行人工修飾的變異體、以及自然形成的變異體(所謂等位基因變異)。被置換的氨基酸數(shù)目可以是多個(gè)，只要是大于1的數(shù)目，就沒有特別的限定，但是，優(yōu)選每個(gè)CDR中被置換的數(shù)目為3個(gè)氨基酸以內(nèi)，進(jìn)一步優(yōu)選2個(gè)氨基酸以內(nèi)，更優(yōu)選1個(gè)氨基酸。在某個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體或多肽可以具有下述CDR序列：該CDR序列相對(duì)于如上述地由序列號(hào)所特定的CDR的氨基酸序列，顯示出90％以上的同一性。所述同一性可以是92％以上、95％以上、97％以上或99％以上。這種抗體或多肽優(yōu)選具備與具有由序列號(hào)所特定的CDR酸序列的抗體或多肽相同的活性或性能。與CDR進(jìn)行連接的抗體的骨架區(qū)(frameworkregion：FR)選擇CDR可形成良好的抗原結(jié)合部位的骨架區(qū)。對(duì)本發(fā)明中的用于可變區(qū)的FR沒有特別的限定，可以使用任意的FR。根據(jù)需要，為使CDR可形成合適的抗原結(jié)合部位，在FR中，1個(gè)或多個(gè)氨基酸可被置換、缺失、附加和/或插入等。在某個(gè)實(shí)施方式中，F(xiàn)R可以是相對(duì)于由各序列號(hào)所示的氨基酸序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。該同一性可以為85％以上、90％以上、95％以上、97％以上或99％以上。例如，通過對(duì)使用置換了氨基酸的FR的抗體與抗原的結(jié)合活性進(jìn)行測(cè)定、評(píng)價(jià)，可選擇具有所需性質(zhì)的變異FR序列。在本發(fā)明中，抗體的FR區(qū)能夠使用由數(shù)據(jù)庫(kù)(例如，GenBank)等獲得的公知的FR(作為氨基酸序列，例如，可舉出AAO06511.1、AAT02391.1、AAG13973.1、AGT29816.1等，作為堿基序列，例如，可舉出AY596429.1、AY171772.1、KC020056.1、AF294966.1等)、由本發(fā)明獲得的抗體的FR等。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠基于技術(shù)常識(shí)來(lái)選擇理想的FR。在本發(fā)明中，對(duì)于優(yōu)選使用的抗體的FR而言，例如，可舉出序列號(hào)48～84的FR。這些FR是由數(shù)據(jù)庫(kù)等獲得的FR、或者由本發(fā)明獲得的抗體的FR。在本發(fā)明的抗體中，能利用來(lái)源于各種動(dòng)物的FR，但是，特別優(yōu)選來(lái)源于兔的抗體的FR。其中，優(yōu)選序列號(hào)64～84，更優(yōu)選序列號(hào)65或66、序列號(hào)68或69、序列號(hào)71或72、序列號(hào)73、序列號(hào)75或76、序列號(hào)78或79、序列號(hào)81、82或83、序列號(hào)84的FR。在某個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體的可變區(qū)的優(yōu)選例如下。(1)(i)重鏈可變區(qū)，其具有：圖2～圖2-2所述的變體的重鏈CDR序列(例如，抗體5810的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3)，以及，包含序列號(hào)64、序列號(hào)67、序列號(hào)70和序列號(hào)73的序列的FR；(ii)輕鏈可變區(qū)，其具有：圖2～圖2-2所述的變體的輕鏈CDR序列(例如，抗體5810的VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3)，以及，包含序列號(hào)74、序列號(hào)77、序列號(hào)80和序列號(hào)84的序列的FR。(2)(i)重鏈可變區(qū)，其具有：F1466-5、F1466-26或F1466-16的重鏈CDR序列(例如，F(xiàn)1466-26的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3)，以及，包含序列號(hào)64、序列號(hào)67、序列號(hào)70和序列號(hào)73的序列的FR；(ii)輕鏈可變區(qū)，其具有：F1466-5、F1466-26或F1466-16的輕鏈CDR序列(例如，F(xiàn)1466-26的VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3)，以及，包含序列號(hào)74、序列號(hào)77、序列號(hào)80和序列號(hào)84的序列的FR。(3)(i)重鏈可變區(qū)，其具有：圖2～圖2-2所述的變體的重鏈CDR序列(例如，抗體5810的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3)，以及，包含序列號(hào)65(或66)、序列號(hào)68(或69)、序列號(hào)71(或72)和序列號(hào)73的FR；(ii)輕鏈可變區(qū)，其具有：圖2～圖2-2所述的變體的輕鏈CDR序列(例如，抗體5810的VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3)，以及，包含序列號(hào)75(或76)、序列號(hào)78(或79)、序列號(hào)81(或82、或83)和序列號(hào)84的FR。(4)(i)重鏈可變區(qū)，其具有：F1466-5、F1466-26或F1466-16的重鏈CDR序列(例如，F(xiàn)1466-26的VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3)，以及，包含序列號(hào)65(或66)、序列號(hào)68(或69)、序列號(hào)71(或72)和序列號(hào)73的FR；(ii)輕鏈可變區(qū)，其具有：F1466-5、F1466-26或F1466-16的輕鏈CDR序列(例如，F(xiàn)1466-26的VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3)，以及，包含序列號(hào)75(或76)、序列號(hào)78(或79)、序列號(hào)81(或82、或83)和序列號(hào)84的FR。對(duì)可變區(qū)而言，1個(gè)或多個(gè)(例如，5個(gè)氨基酸以內(nèi)，優(yōu)選3個(gè)氨基酸以內(nèi))的氨基酸可被置換、缺失、附加和/或插入。對(duì)于其與抗原的結(jié)合活性、普萊曬譜星測(cè)定時(shí)的特征等，優(yōu)選1個(gè)或多個(gè)氨基酸置換等后的抗體或多肽與置換等前具有相同的活性或性能。在某個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)可變區(qū)是如上所述地由氨基酸序列所特定的情況下，可變區(qū)可具有下述氨基酸序列：相對(duì)于由序列號(hào)所特定的序列具有80％以上的同一性的氨基酸序列。該同一性可為85％以上、90％以上、95％以上、97％以上或99％以上。這種可變區(qū)優(yōu)選具有與通過序列號(hào)所特定的可變區(qū)相同的活性或性能。對(duì)在本發(fā)明的抗體中使用的恒定區(qū)沒有特別的限定，可使用任意的恒定區(qū)。作為在本發(fā)明的抗體中使用的恒定區(qū)的優(yōu)選例，例如，能使用來(lái)源于小鼠、大鼠、兔或人的IgG的恒定區(qū)等。對(duì)于恒定區(qū)，可以在不影響所述抗體與抗原的結(jié)合活性、普萊曬譜星測(cè)定時(shí)的特征等的范圍內(nèi)置換、缺失、附加和/或插入1個(gè)或多個(gè)氨基酸。本發(fā)明的抗體優(yōu)選單克隆抗體，即，優(yōu)選抗普萊曬譜星單克隆抗體。單克隆抗體是單克隆的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞分泌的抗體。與多克隆抗體相比，單克隆抗體具有可獲得具備均一的抗原特異性、高效價(jià)的抗體等效果。理論上，單克隆抗體具有以下優(yōu)勢(shì)：與多克隆抗體相比，抗原測(cè)定所需的抗體重量可以較少。本說(shuō)明書中的“抗體”一詞有時(shí)意指“抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段”。優(yōu)選將序列號(hào)2所示的S68肽作為給藥抗原來(lái)制備本發(fā)明的單克隆抗體。例如，本發(fā)明的單克隆抗體能夠通過下述方式來(lái)獲得：使用S68肽對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，使用免疫動(dòng)物中的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞來(lái)制備雜交瘤，接著選擇單細(xì)胞化的雜交瘤，并對(duì)該雜交瘤進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)上清液進(jìn)行純化而獲得。對(duì)抗體所來(lái)源的動(dòng)物品種沒有特別的限定，但是，可舉出小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、兔等。優(yōu)選兔。即，本發(fā)明抗體優(yōu)選是來(lái)源于兔的抗普萊曬譜星單克隆抗體(也稱作兔抗普萊曬譜星單克隆抗體)。骨髓瘤細(xì)胞能使用公知的各種細(xì)胞。例如，來(lái)源于人的SKO-007、人鼠雜交骨髓瘤SHM-D33、來(lái)源于小鼠的P3、NS-1、P3U1、SP2/0、來(lái)源于大鼠的YB2/0、Y3-Ag1、2、3等。也可使用來(lái)源于兔的永生B淋巴細(xì)胞等。在本發(fā)明中，優(yōu)選：通過融合兔脾細(xì)胞與來(lái)源于兔的永生B淋巴細(xì)胞來(lái)制備兔-兔雜交瘤，或者通過融合兔脾細(xì)胞與來(lái)源于永生小鼠細(xì)胞株的細(xì)胞來(lái)制備兔-鼠雜交瘤。產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合能夠通過公知的方法進(jìn)行，作為融合促進(jìn)劑，例如，能夠使用聚乙二醇(PEG)、仙臺(tái)病毒等。對(duì)于在細(xì)胞融合中使用的培養(yǎng)液而言，例如，能夠使用RPMI1640培養(yǎng)液、MEM培養(yǎng)液等。對(duì)通過融合而形成的雜交瘤進(jìn)行幾天～3周左右的培養(yǎng)，例如，使用含有次黃嘌呤、胸苷以及氨基蝶呤的培養(yǎng)基(HAT培養(yǎng)基)等選擇性培養(yǎng)基，分離未融合的細(xì)胞。通過產(chǎn)生的抗體對(duì)所得到的雜交瘤進(jìn)行進(jìn)一步選擇。根據(jù)公知的有限稀釋法對(duì)所選擇的雜交瘤進(jìn)行單克隆化培養(yǎng)，并確立其為產(chǎn)生抗體的雜交瘤。對(duì)于抗體的純化而言，例如，能夠通過離子交換層析、親和層析(蛋白A柱、蛋白G柱等)、鹽析法、醇沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法、電泳法、離心法、凝膠過濾法等公知的方法進(jìn)行。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段能夠使用本領(lǐng)域技術(shù)人員能使用的基因重組技術(shù)來(lái)進(jìn)行制備。例如，能夠基于所得到的抗普萊曬譜星抗體的序列來(lái)構(gòu)建編碼抗體或其中一部分的多核苷酸，將該多核苷酸導(dǎo)入表達(dá)載體后，在適當(dāng)?shù)乃拗髦羞M(jìn)行表達(dá)。對(duì)于構(gòu)建編碼抗體或其中一部分的多核苷酸而言，例如，能夠從產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤中提取mRNA，并合成cDNA。這些操作能使用市售的試劑盒等來(lái)實(shí)施。另外，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用的基因重組技術(shù)，并基于抗普萊曬譜星抗體的序列，能夠制備對(duì)其中一部分序列進(jìn)行了改變的抗體。能夠制備包含目標(biāo)序列的載體，使其在合適的宿主內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。對(duì)本發(fā)明中使用的載體沒有特別的限定，但是，優(yōu)選適用于抗體基因表達(dá)的載體和/或表達(dá)載體。例如，可舉出含有EF-1α啟動(dòng)子和/或CMV增強(qiáng)子的載體等。作為載體，可以使用來(lái)源于大腸桿菌的質(zhì)粒(例如，pBR322、pBR325、pUC12、pUC13)、來(lái)源于枯草菌的質(zhì)粒(例如，pUB110、pTP5、pC194)、來(lái)源于酵母的質(zhì)粒(例如，pSH19、pSH15)、λ噬菌體等噬菌體、逆轉(zhuǎn)錄病毒、牛痘病毒、桿狀病毒等病毒等。對(duì)于在本發(fā)明中使用的啟動(dòng)子而言，只要其是與基因表達(dá)中使用的宿主相應(yīng)的適當(dāng)?shù)膯?dòng)子，就可以使用任意一種。例如，當(dāng)宿主為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，能夠使用來(lái)自SV40的啟動(dòng)子、逆轉(zhuǎn)錄病毒的啟動(dòng)子、熱休克啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、EF1α啟動(dòng)子等。對(duì)于載體而言，可根據(jù)需要，包含增強(qiáng)子、剪接信號(hào)、poly-A添加信號(hào)、選擇標(biāo)記、SV40復(fù)制起點(diǎn)等。作為選擇標(biāo)記，例如，能夠使用二氫葉酸還原酶基因(dhfr)、甲氨蝶呤(MTX)抗性基因、氨芐青霉素抗性基因等。對(duì)本發(fā)明使用的宿主細(xì)胞沒有特別的限定，但是，例如，可使用細(xì)菌細(xì)胞(大腸菌等)、酵母、兩棲動(dòng)物細(xì)胞(美國(guó)蟾卵母細(xì)胞等)、昆蟲或昆蟲細(xì)胞(sf9等)、動(dòng)物細(xì)胞等。作為動(dòng)物細(xì)胞，例如，可使用COS-1細(xì)胞、COS-7細(xì)胞、CHO細(xì)胞、DHFR基因缺陷型CHO細(xì)胞(dhfr-CHO細(xì)胞)、小鼠3T3細(xì)胞、人HEK293細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞等。對(duì)于將表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞的方法而言，能通過公知的方法來(lái)實(shí)施，例如，可舉出脂轉(zhuǎn)染法、磷酸鈣法、電穿孔藥水法、微注射法等。在將表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞后，使用適合各宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基來(lái)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。例如，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞，能夠使用PMI1640培養(yǎng)基、GIT培養(yǎng)基等動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基，或者能夠使用在這些培養(yǎng)基中加入了FCS等各種添加物的培養(yǎng)基等。通過在培養(yǎng)基中對(duì)所得到的轉(zhuǎn)化細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，能夠在培養(yǎng)上清液中表達(dá)、積累抗體。對(duì)培養(yǎng)上清液中的抗體的純化，可使用前述的方法。另外，能夠通過ELISA等對(duì)抗體的表達(dá)量以及抗原抗體活性進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段可以使用噬菌體展示法來(lái)進(jìn)行制備。基于噬菌體展示法來(lái)獲得抗體，能夠通過本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用的技術(shù)來(lái)實(shí)施(參見CARLOSF.BARBAS等，PhageDisplay：ALaboratoryManual(ColdSpringHarborLaboratoryPress)等)。例如，能夠使用本發(fā)明的實(shí)施例11所述的方法。使用S68肽對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫而獲得脾臟淋巴細(xì)胞，從該脾臟淋巴細(xì)胞中提取基因并將其與噬菌體載體等進(jìn)行連接等，然后可通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。另外，為了制備僅更改特定的CDR(例如，VHCDR3)的序列的變體，也能使用噬菌體展示法。也可使用包含作為模板的抗體的重鏈和輕鏈的質(zhì)粒與特定的引物，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用的技術(shù)來(lái)實(shí)施。例如，能夠使用實(shí)施例12所述的方法。作為本發(fā)明的抗原結(jié)合性抗體片段，可舉出Fab、Fab′、F(ab′)2、單鏈抗體(scFv)、二聚體化V區(qū)(二聚抗體)、二硫鍵穩(wěn)定性V區(qū)(dsFv)、sc(Fv)2、包含CDR的多肽、含重鏈可變區(qū)的多肽以及含輕鏈可變區(qū)的多肽等。任意的抗體片段與識(shí)別由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的表位的本發(fā)明的抗體具有相同的抗原結(jié)合性。這些抗體片段能夠使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用的基因重組技術(shù)等來(lái)制備。Fab是在將IgG通過蛋白質(zhì)分解酶木瓜蛋白酶進(jìn)行處理而獲得的片段中，由H鏈的N末端側(cè)約一半與整個(gè)L鏈通過二硫鍵而結(jié)合的、具有抗原結(jié)合活性的抗體片段。F(ab′)2是在通過蛋白質(zhì)分解酶胃蛋白酶對(duì)IgG進(jìn)行處理而獲得的片段中，F(xiàn)ab通過鉸鏈區(qū)的二硫鍵結(jié)合而成。Fab′是通過對(duì)F(ab′)2中鉸鏈區(qū)的二硫鍵進(jìn)行切斷而獲得的具有抗原結(jié)合活性的抗體片段。Fab′能夠通過對(duì)F(ab′)2進(jìn)行還原劑二硫蘇糖醇處理而獲得。scFv是通過合適的連接肽將1條VH與1條VL連接而形成的多肽，其是具有抗原結(jié)合活性的抗體片段。二聚抗體是scFv形成二聚體、并具有二價(jià)的抗原結(jié)合活性的抗體片段。dsFv是使VH和VL中的各1個(gè)氨基酸殘基置換為半胱氨酸殘基的多肽通過該半胱氨酸殘基間的二硫鍵結(jié)合而成的抗體片段。sc(Fv)2是通過連接子等將2個(gè)VH和2個(gè)VL結(jié)合而形成單鏈的抗原片段。對(duì)于sc(Fv)2而言，例如，能夠通過用連接子將scFv進(jìn)行結(jié)合的方式來(lái)制備。對(duì)于包含CDR的多肽而言，其優(yōu)選的形式如前所述，其是具有抗原結(jié)合活性的片段。能夠使多個(gè)含有CDR的肽直接進(jìn)行結(jié)合、或通過合適的連接子進(jìn)行結(jié)合。含有重鏈可變區(qū)的多肽和含有輕鏈可變區(qū)的多肽如前述所示。在本發(fā)明中，連接子能夠使用可通過基因工程導(dǎo)入的任意的連接肽。本發(fā)明優(yōu)選的連接子為連接肽。對(duì)連接肽的長(zhǎng)度沒有特別的限定，能根據(jù)目的進(jìn)行適當(dāng)選擇，但是，通常為1～100個(gè)氨基酸，優(yōu)選為3～50個(gè)氨基酸，更優(yōu)選為5～20個(gè)氨基酸。在將4個(gè)抗體可變區(qū)進(jìn)行結(jié)合的情況下，通常需要3個(gè)連接子。多個(gè)連接子可以相同，也可以使用不同的連接子。本發(fā)明的抗體中含有嵌合抗體及人源化抗體。嵌合抗體是將2種或多于2種的不同抗體分子中的每一部分進(jìn)行組合而制備的抗體分子。本發(fā)明優(yōu)選的嵌合抗體是具有來(lái)源于本發(fā)明的兔單克隆抗體的可變區(qū)以及其他物種(例如，人)的恒定區(qū)的抗體。人源化抗體是將非人源抗體的CDR移植至人抗體而成。嵌合抗體以及人源化抗體能夠按照常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行制備。本發(fā)明的抗體還包括：在本發(fā)明的氨基酸序列中附加了1個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的抗體。另外，還包括：這些抗體與其他肽或多肽融合而成的融合蛋白質(zhì)。融合蛋白質(zhì)的制備能使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法來(lái)進(jìn)行，例如，能夠?qū)⒕幋a本發(fā)明的抗體的核苷酸與編碼其他肽或多肽的多核苷酸以閱讀窗相一致的方式進(jìn)行連接并導(dǎo)入表達(dá)載體中，使其在宿主中進(jìn)行表達(dá)。對(duì)于在與本發(fā)明的抗體進(jìn)行結(jié)合時(shí)使用的其他肽或多肽而言，沒有特別的限定，但是，例如，可舉出FLAG、由6個(gè)組氨酸(His)殘基構(gòu)成的6×His、聚組氨酸段、流感血凝素(HA)、T7-tag、HSV-tag、GST(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)、免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc區(qū))、β-半乳糖苷酶、麥芽糖結(jié)合蛋白質(zhì)等。2.普萊曬譜星的測(cè)定方法本發(fā)明的第二方式是至少使用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段、對(duì)普萊曬譜星進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定的方法，該方法至少包括接觸工序，該接觸工序使本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段與包含普萊曬譜星的檢測(cè)體進(jìn)行接觸。在本發(fā)明中，“測(cè)定”一詞能夠與“檢測(cè)”、“定量”、“分析”等用語(yǔ)相互變換地使用，意指包含定量的和定性的確定。普萊曬譜星的測(cè)定優(yōu)選在體外進(jìn)行。普萊曬譜星作為用于檢測(cè)敗血癥的標(biāo)記物而眾所周知，因此，該方法還能夠稱為用于檢測(cè)敗血癥的方法，所述方法至少包括使含有普萊曬譜星的檢測(cè)體與本發(fā)明的抗體或抗原親和性抗體片段進(jìn)行接觸的工序。即，還能稱為檢測(cè)敗血癥的方法、或者稱為用于輔助檢測(cè)或診斷敗血癥的方法，所述方法至少包括1)測(cè)定工序：使用本發(fā)明的抗體來(lái)測(cè)定受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度，以及2)判定工序：將在1)中獲得的普萊曬譜星濃度與臨界值進(jìn)行比較，判定普萊曬譜星濃度是否是高于臨界值的值。此時(shí)的臨界值為314～600pg/mL，優(yōu)選400～580pg/mL，更優(yōu)選450～550pg/mL，進(jìn)一步優(yōu)選500pg/mL。在本發(fā)明中，“疾病的檢測(cè)”可以更替為“疾病檢測(cè)的輔助”或“疾病診斷的輔助”來(lái)加以使用。另外，例如，抗體或抗原結(jié)合性抗體片段能夠用于下述疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)，該疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)是選自由敗血癥與全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(systemicinflammatoryresponsesyndrome、SIRS)的判別、敗血癥的嚴(yán)重化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、敗血癥的預(yù)后預(yù)測(cè)(死亡率預(yù)測(cè))、敗血癥的嚴(yán)重度的評(píng)價(jià)、術(shù)后傳染病的檢測(cè)、彌散性血管內(nèi)凝血(disseminatedintravascularcoagulation、DIC)的檢測(cè)、感染性DIC的檢測(cè)、心臟疾病的檢測(cè)、伴隨細(xì)菌感染的呼吸道傳染病的檢測(cè)、炎癥性腸疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎)的檢測(cè)、粒細(xì)胞減少性發(fā)熱(febrileneutropenia、FN)的檢測(cè)、噬血細(xì)胞綜合癥(hemophagocyticsyndrome、HPS)的檢測(cè)以及吞噬細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)所組成的組中的至少一種。術(shù)后傳染病是在手術(shù)后發(fā)病的傳染病的總稱，是指由手術(shù)以及其所需的輔助療法導(dǎo)致的全部傳染病。另外，術(shù)后傳染病包括基于Guidelineforpreventionofsurgicalsiteinfection,1999(CDC)而診斷為術(shù)后傳染病的全部疾病。作為心臟疾病，例如，可舉出急性冠狀動(dòng)脈綜合癥(ACS)、急性心臟衰竭、急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、冠狀動(dòng)脈疾病、心絞痛、心肌梗塞、缺血性腦卒中、出血性腦卒中以及短暫性腦缺血發(fā)作。作為伴隨細(xì)菌感染的呼吸道傳染病，可舉出下呼吸道傳染病或肺炎。下呼吸道傳染病包括急性下呼吸道傳染病和慢性下呼吸道傳染病。急性下呼吸道傳染病包括：急性氣管炎、急性支氣管炎、急性細(xì)支氣管炎，大多是通過上呼吸道的病毒感染波及到下呼吸道而發(fā)病，但有一部分是由細(xì)菌引起的二次感染的繼發(fā)。發(fā)現(xiàn)細(xì)菌二次感染的征兆時(shí)，適合抗生素給藥。慢性下呼吸道傳染病是指，在支氣管擴(kuò)張癥或慢性阻塞性肺病等中，在具有器質(zhì)性障礙的下呼吸道中細(xì)菌的持續(xù)感染成立的病態(tài)，存在持續(xù)感染和急性惡化。發(fā)生下呼吸道的器質(zhì)性障礙的疾病包括：支氣管擴(kuò)張癥、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、彌漫性泛細(xì)支氣管炎、陳舊性肺結(jié)核、塵肺、非結(jié)核性抗酸菌癥、變應(yīng)性支氣管肺曲霉菌病、肺纖維癥、慢性支氣管哮喘等。持續(xù)感染、急性惡化均適合抗生素給藥。肺炎包括社區(qū)獲得性肺炎、院內(nèi)感染性肺炎。優(yōu)選為社區(qū)獲得性肺炎。作為吞噬細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)，可舉出(a)中性粒細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和/或白血球的吞噬作用能的測(cè)定、(b)通過測(cè)定中性粒細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和/或白血球的吞噬作用能來(lái)對(duì)免疫功能進(jìn)行的評(píng)價(jià)、(c)自體細(xì)胞移植或他體細(xì)胞移植時(shí)的移植用細(xì)胞的品質(zhì)評(píng)價(jià)、以及(d)吞噬細(xì)胞的吞噬作用相關(guān)疾病的檢測(cè)等。作為吞噬細(xì)胞的吞噬作用相關(guān)疾病，例如，可舉出自身免疫疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、乳腺炎、痛風(fēng)、腎小球腎炎、潰瘍性結(jié)腸炎、地中海熱、中耳炎、鼻炎、肺炎、結(jié)核、膀胱炎、羊水傳染病以及膿性精液癥。作為在對(duì)吞噬細(xì)胞的吞噬作用相關(guān)疾病進(jìn)行檢測(cè)時(shí)使用的檢測(cè)體，可以使用組織液、淋巴液、關(guān)節(jié)液、乳汁、腦脊髓液、膿、唾液、淚液、粘液、鼻水、痰、尿、腹水、羊水、精液等體液，或者對(duì)鼻腔、支氣管、肺、皮膚、腹腔、各種臟器、關(guān)節(jié)、骨等進(jìn)行洗滌后的洗滌液。作為使用本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段來(lái)對(duì)普萊曬譜星進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定的方法，例如，可舉出酶免疫測(cè)定法(下面，也記作EIA或ELISA)、化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定法(CLEIA)、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)、熒光抗體法(FAT)、熒光酶免疫測(cè)定法(FEIA)、電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ECLIA)、放射免疫測(cè)定法(RIA)、免疫層析法、凝集法、競(jìng)爭(zhēng)法等，但是，并不限于這些方法。在本發(fā)明中，可以使用直接法或間接法。還可以使用使生物素—抗生物素蛋白(鏈霉)復(fù)合體形成以進(jìn)行檢測(cè)的增感方法。EIA是使用酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定法之一，可舉出直接法、間接法等。作為優(yōu)選例，有夾心ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay)。所謂夾心ELISA是指下述方法：使用抗原識(shí)別部位不同的2種以上的抗體，預(yù)先將其中之一的抗體固定化于固相，并使用2種抗體來(lái)夾持要進(jìn)行檢測(cè)的抗原，從而形成抗體-抗原-抗體復(fù)合體，由此來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定法(CLEIA：ChemiluminescentEnzymeImmunoassay)是指如下方法：使檢測(cè)體中的抗原與固定于磁性粒子、磁珠等中的抗體進(jìn)行反應(yīng)后，與酶標(biāo)記抗體進(jìn)行反應(yīng)，并在洗滌(B/F分離)后加入化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行酶反應(yīng)，然后測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。例如，可以使檢測(cè)體中的抗原與結(jié)合了生物素的抗體在液相中進(jìn)行反應(yīng)，并將抗體捕獲于結(jié)合有鏈霉的磁性粒子，洗滌(B/F分離)后，與酶標(biāo)記抗體進(jìn)行反應(yīng)，并進(jìn)行與上述同樣的處理。在使用堿性磷酸酶(ALP)作為標(biāo)記酶時(shí)，對(duì)于化學(xué)發(fā)光底物而言，優(yōu)選使用CDP-StarTM、AMPPD(R)、CSPD(R)。當(dāng)標(biāo)記酶為HRP時(shí)，化學(xué)發(fā)光底物優(yōu)選使用魯米諾(luminol)。對(duì)于檢測(cè)靈敏度而言，通常按照化學(xué)發(fā)光＞熒光＞吸光(呈色)的順序依次遞減，可根據(jù)所需的靈敏度來(lái)選擇測(cè)定法?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA：ChemiluminescentImmunoassay)是如下所述的方法：使固定于磁性粒子等的抗體與檢測(cè)體中的抗原進(jìn)行反應(yīng)后，使由化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記的抗體進(jìn)行反應(yīng)，在洗滌(B/F分離)后測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。標(biāo)記物質(zhì)可使用吖啶酯。熒光酶免疫測(cè)定法(FEIA：FluorescentEnzymeImmunoassay)是一種如下所述的方法：使已固定化的抗體與檢測(cè)體中的抗原進(jìn)行反應(yīng)后，使酶標(biāo)記抗體進(jìn)行反應(yīng)，在洗滌(B/F分離)后添加熒光底物以進(jìn)行酶反應(yīng)，然后測(cè)定熒光強(qiáng)度。在標(biāo)記酶中可使用HRP、ALP等。對(duì)于熒光底物而言，當(dāng)標(biāo)記酶為HRP時(shí)，可優(yōu)選使用Amplex(R)Red等，當(dāng)標(biāo)記酶為ALP時(shí)，可優(yōu)選使用4-MUP(4-甲基傘花基磷酸鹽，4-Methylumbelliphenylphosphate)、AttoPhos(R)等。電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ECLIA：ElectroChemiluminescenceImmunoassay)是一種如下所述的方法：使固定于磁性粒子的抗體以及由電化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記的抗體與檢測(cè)體中的抗原進(jìn)行反應(yīng)后，進(jìn)行洗滌(B/F分離)，并測(cè)定由電能所導(dǎo)致的發(fā)光強(qiáng)度。在標(biāo)記物質(zhì)中可使用釕等。在標(biāo)記物質(zhì)中可使用Ru(bpy)3等，通過由電極帶電所導(dǎo)致的氧化、和由三丙胺(TPA)等導(dǎo)致的還原反應(yīng)，反復(fù)進(jìn)行激發(fā)發(fā)光。放射免疫測(cè)定法((RIA：Radioimmunoassay)是一種使用基于放射性同位素的標(biāo)記體的測(cè)定方法。例如，能夠在使固定于磁珠等的抗體與檢測(cè)體中的抗原進(jìn)行反應(yīng)后，使由放射性同位素(125I等)標(biāo)記的抗體進(jìn)行反應(yīng)，在洗滌(B/F分離)后測(cè)定125I的放射線量。免疫層析法是利用了毛細(xì)管現(xiàn)象的免疫測(cè)定法，所述毛細(xì)管現(xiàn)象是在溶解試劑的同時(shí)，被檢測(cè)體沿試紙條移動(dòng)的現(xiàn)象。檢測(cè)體中的抗原、試紙條上的標(biāo)記抗體及捕獲抗體這3者形成免疫復(fù)合體，并確認(rèn)標(biāo)記物顏色的方法。對(duì)于抗體的標(biāo)記而言，可使用金膠體、酶、熒光物質(zhì)等。在使用酶標(biāo)記抗體時(shí)，在試紙條上設(shè)置酶底物，使其進(jìn)行顯色。滲濾法(flowthroughmethod)是檢測(cè)體中的溶液與作為被檢測(cè)物質(zhì)的抗原一同在作為不溶性載體的膜上形成抗體-抗原-抗體復(fù)合體的方法。此時(shí)，未被固定于膜上的物質(zhì)通常垂直地從膜的表面穿透至背面而除去。凝集法是使檢測(cè)體中的抗原與試劑中的抗體進(jìn)行反應(yīng)，并觀察凝集的方法?？膳e出不使用固相的方法、使用人工制備的粒子作為固相的粒子凝集法(particleagglutination：PA)、在PA中使用膠乳粒子的膠乳凝集法(latexagglutination：LA)等。對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)法而言，例如，能夠使抗體與固相結(jié)合，并使一定量的標(biāo)記抗原與被檢測(cè)試樣同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)，根據(jù)所結(jié)合的標(biāo)記物的量來(lái)測(cè)定試樣中的抗原的量。第一方式所述的本發(fā)明的抗體或片段可優(yōu)選用于上述測(cè)定方法。對(duì)于在普萊曬譜星測(cè)定中使用的檢測(cè)體而言，沒有特別地限定，但是，優(yōu)選水性檢測(cè)體，例如，可舉出血液(全血、血漿、血清等)、尿、組織液、淋巴液、關(guān)節(jié)液、乳汁、腦脊髓液、膿、唾液、淚液、粘液、鼻水、痰、腹水、用水、精液等體液，另外，還可舉出對(duì)鼻腔、支氣管、肺、皮膚、腹腔、各種臟器、關(guān)節(jié)、骨等進(jìn)行洗滌后的洗滌液，或者，細(xì)胞培養(yǎng)上清液，或柱洗脫液等。這些試樣可以保持原樣地用于測(cè)定中，或者使用各種緩沖液等進(jìn)行稀釋或萃取后進(jìn)行濃縮，再用于測(cè)定中。另外，在使用全血檢測(cè)體作為檢測(cè)體的情況下，可在采集全血檢測(cè)體以后72小時(shí)、48小時(shí)內(nèi)、24小時(shí)內(nèi)、12小時(shí)內(nèi)、6小時(shí)內(nèi)、或者4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析。另外，可以通過EDTA采血管或肝素采血管來(lái)采集全血檢測(cè)體。優(yōu)選地，可舉出：通過EDTA采血管來(lái)采集全血檢測(cè)體，并在6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析，或者通過肝素采血管來(lái)采集全血檢測(cè)體并在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析。3.sCD14-ST測(cè)定用試劑盒本發(fā)明的第三方式是一種普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒，其以第一方式的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段為必須的構(gòu)成要素。本發(fā)明的測(cè)定試劑盒優(yōu)選含有用于普萊曬譜星測(cè)定的輔助試劑。作為輔助試劑，例如，可舉出一次抗體、二次抗體、標(biāo)記抗體、標(biāo)記酶、金膠體等標(biāo)記物質(zhì)；顯色底物、熒光底物(Amplex(R)Red，AttoPhos(R)，4-MUP等)、化學(xué)發(fā)光底物(魯米諾，CDP-StarTM，AMPPD(R)，CSPD(R)等)、生物素-鏈霉等特異性結(jié)合物質(zhì)、不溶性載體、阻斷劑、稀釋液、洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等，但是，并不限于上述試劑。根據(jù)第二方式的普萊曬譜星測(cè)定法來(lái)適當(dāng)組合使用。一次抗體優(yōu)選與普萊曬譜星進(jìn)行結(jié)合的抗體，更優(yōu)選對(duì)與本發(fā)明的抗體不同的表位進(jìn)行識(shí)別的抗體。例如，可舉出WO2004/044005的實(shí)施例3所述的F1106-13-3抗體、F1031-8-3抗體等?？梢詫⒈景l(fā)明的抗體或一次抗體作為標(biāo)記抗體。當(dāng)本發(fā)明的抗體和一次抗體都未進(jìn)行標(biāo)記時(shí)，可以使用經(jīng)標(biāo)記的二次抗體。作為不溶性載體，例如，可舉出磁性粒子、磁珠、玻璃、纖維素、硝基纖維素、多孔性合成聚合物、玻璃纖維、聚丙烯酰胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、塑料板、膠乳粒子、無(wú)紡布、濾紙等。對(duì)于抗體的標(biāo)記物而言，優(yōu)選使用辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖酶等酶、金膠體等，但是，并不限于上述標(biāo)記物。例如，在使用HRP的情況下，作為顯色底物，可舉出3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、鄰苯二胺(OPD)等。在使用ALP的情況下，作為顯色底物，可舉出對(duì)硝基苯磷酸鹽(pNPP)等。在使用β-半乳糖酶時(shí)，作為顯色底物，可例舉鄰硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside：ONPD)等。例如，夾心ELISA法用測(cè)定試劑盒可包含本發(fā)明的抗體及一次抗體(任意抗體都可進(jìn)行酶標(biāo)記)、顯色底物、稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等。當(dāng)本發(fā)明的抗體及一次抗體未被標(biāo)記時(shí)，可以包含已被標(biāo)記的二次抗體。例如，化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定法(CLEIA)用測(cè)定試劑盒可包含固定于磁性粒子等的抗體、酶標(biāo)記抗體、化學(xué)發(fā)光底物、稀釋液、洗滌液等。例如，熒光酶免疫測(cè)定法(FEIA)的測(cè)定試劑盒可包含固定于磁性粒子等的抗體、酶標(biāo)記抗體、熒光底物、稀釋液、洗滌液等。例如，電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(ECLIA)的測(cè)定試劑盒可包含生物素化抗體、Ru(bpy)3標(biāo)記抗體、鏈霉親和素包覆的磁性粒子、三丙胺等。免疫層析法的測(cè)定試劑盒是設(shè)置了試樣添加部、試劑部、檢測(cè)部以及吸收部以使添加于試樣添加部的液性檢測(cè)體按上述順序進(jìn)行移動(dòng)的試紙條。例如，能夠使標(biāo)記的第二抗體浸漬于試劑部，并在檢測(cè)部設(shè)置結(jié)合了第一抗體的不溶性載體。對(duì)于試紙條而言，可示例使用多孔性載體等。對(duì)于多孔性載體，例如，可舉出硝基纖維素、纖維素、纖維素衍生物、尼龍、尼龍纖維、玻璃纖維、多孔性合成聚合物等。對(duì)于吸收部而言，可舉出水吸收性材料的海綿等可吸收聚合物、纖維素濾紙、濾紙等。對(duì)于敗血癥患者而言，由于報(bào)告了普萊曬譜星的血液中濃度特征性上升的事實(shí)，因而本發(fā)明的第三方式的普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒可以是敗血癥檢測(cè)用試劑盒，或者是對(duì)敗血癥的檢測(cè)或診斷進(jìn)行輔助的試劑盒。另外，本發(fā)明的第三方式的普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒能夠用作敗血癥的診斷藥或者敗血癥診斷的輔助藥。對(duì)于普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒而言，在以這種檢測(cè)敗血癥等作為目的時(shí)，當(dāng)使用本發(fā)明的抗體測(cè)定的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度比臨界值更高時(shí)，能夠判定受試者可能患有敗血癥，并能夠?qū)z測(cè)或診斷進(jìn)行輔助。此時(shí)，臨界值為314～600pg/mL，優(yōu)選為400～580pg/mL，更優(yōu)選為450～550pg/mL，進(jìn)一步優(yōu)選為500pg/mL。另外，例如，普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒能夠用于下述疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)，該疾病的檢測(cè)或評(píng)價(jià)為選自由敗血癥與全身性炎癥反應(yīng)綜合癥(systemicinflammatoryresponsesyndrome、SIRS)的判別、敗血癥的嚴(yán)重化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、敗血癥的預(yù)后預(yù)測(cè)(死亡率預(yù)測(cè))、敗血癥的嚴(yán)重度的評(píng)價(jià)、術(shù)后傳染病的檢測(cè)、彌散性血管內(nèi)凝血(disseminatedintravascularcoagulation、DIC)的檢測(cè)、感染性DIC的檢測(cè)、心臟疾病的檢測(cè)、伴隨細(xì)菌感染的呼吸道傳染病的檢測(cè)、炎癥性腸疾病(克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎)的檢測(cè)、粒細(xì)胞減少性發(fā)熱(febrileneutropenia、FN)的檢測(cè)、噬血細(xì)胞綜合癥(hemophagocyticsyndrome、HPS)的檢測(cè)以及吞噬細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)所組成的組中的至少一種。普萊曬譜星測(cè)定用試劑盒可以是用于檢測(cè)或評(píng)價(jià)上述至少一種疾病的試劑盒。4.對(duì)第一方式所述的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段進(jìn)行編碼的多核苷酸作為本發(fā)明的第四方式，提供一種編碼本發(fā)明的第一方式的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段的氨基酸序列的多核苷酸或核酸。在該多核苷酸中含有DNA(基因組DNA、cDNA、合成DNA等)和RNA(mRNA等)。多核苷酸可以是單鏈(有義鏈(模板鏈)或反義鏈)或雙鏈。例如，能夠使用市售的試劑盒，從產(chǎn)生本發(fā)明的抗體的雜交瘤提取mRNA來(lái)合成cDNA?？梢酝ㄟ^PCR法等來(lái)對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行擴(kuò)增。在某個(gè)實(shí)施方式中，需要本發(fā)明的抗體相對(duì)于編碼可變區(qū)的重鏈或輕鏈的堿基序列具有至少80％以上的同一性。另外，對(duì)于CDR序列而言，也需要其相對(duì)于編碼抗體的整個(gè)CDR(VHCDR1～3以及VLCDR1～3)的堿基序列具有至少80％以上的同一性。從檢測(cè)靈敏度的觀點(diǎn)出發(fā)，可以為85％以上的同一性、90％以上的同一性、95％以上的同一性、96％以上的同一性、97％以上的同一性、98％以上的同一性或99％以上的同一性。另外，在某個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體還包含下述抗體：由可與編碼可變區(qū)的重鏈或輕鏈的堿基序列的互補(bǔ)鏈在嚴(yán)格條件下進(jìn)行雜交的堿基序列所編碼的抗體。雜交能夠根據(jù)公知的方法或類似的方法來(lái)進(jìn)行，例如，能夠根據(jù)MolecularCloning3rd(J.Sambrooketal.，ColdSpringHarborLab.Press，2001)所述的方法等來(lái)進(jìn)行。所謂嚴(yán)格條件，是指形成特異性雜交、而不形成非特異性雜交的條件。作為通常的嚴(yán)格條件，例如，可舉出：在鉀濃度為約25mM～約50mM、鎂濃度為約1.0mM～約5.0mM中進(jìn)行雜交的條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過改變雜交反應(yīng)、雜交反應(yīng)液的鹽濃度等，能夠容易地選擇這樣的條件。5.包含第四方式所述的多核苷酸的重組載體第五方式是一種載體，該載體中導(dǎo)入了編碼本發(fā)明的抗體或抗體結(jié)合性抗體片段的氨基酸的多核苷酸。載體優(yōu)選適于第一方式所述的抗體基因的表達(dá)的載體和/或表達(dá)載體，其能夠使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用的技術(shù)來(lái)制備。6.產(chǎn)生第一方式所述的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的細(xì)胞作為本發(fā)明的第六方式，提供一種產(chǎn)生本發(fā)明的第一抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段的細(xì)胞。作為這種細(xì)胞的例子，可舉出雜交瘤、轉(zhuǎn)化體、或?qū)肓吮景l(fā)明的抗體的基因的基因重組細(xì)胞等。作為產(chǎn)生抗體的雜交瘤，具體而言，可舉出實(shí)施例1所示的克隆體。對(duì)于轉(zhuǎn)化體而言，例如，其能夠通過在第一方式所述的宿主細(xì)胞(例如，COS-1細(xì)胞、CHO細(xì)胞等)中導(dǎo)入載體來(lái)獲得，所述載體中導(dǎo)入了前述記載的編碼本發(fā)明的抗體或其抗體結(jié)合性抗體片段的氨基酸的多核苷酸。雜交瘤、轉(zhuǎn)化體的制備方法如第一方式所述。7.使用轉(zhuǎn)化體進(jìn)行的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的制備方法本發(fā)明的第七方式是一種抗體或抗原結(jié)合性抗體片段的制備方法，其包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體的工序，所述轉(zhuǎn)化體含有導(dǎo)入了編碼第一方式的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段的核苷酸的載體。在轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)物中，使第一方式的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段生成，從培養(yǎng)物中采集抗體或抗原結(jié)合性抗體片段。詳細(xì)內(nèi)容如第一方式所述。8.抗普萊曬譜星抗體的篩選方法本發(fā)明的第八方式是一種抗體篩選方法，其用于獲得對(duì)測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星有用的抗普萊曬譜星抗體，所述方法至少包括下述工序：1)構(gòu)建工序，該構(gòu)建工序使用候選的抗體來(lái)構(gòu)建普萊曬譜星測(cè)定系統(tǒng)；2)確定工序，該確定工序使用該測(cè)定系統(tǒng)來(lái)確定檢測(cè)體中的TG濃度對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生的影響；即，該方法的特征在于，通過使用抗體的測(cè)定系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行TG的干擾試驗(yàn)。獲取候選的抗體(優(yōu)選抗普萊曬譜星抗體)的方法如本發(fā)明的第一方式或第七方式所述。對(duì)于普萊曬譜星測(cè)定系統(tǒng)而言，只要是可用于測(cè)定檢測(cè)體的普萊曬譜星值的測(cè)定系統(tǒng)即可，沒有特別的限定，但是，例如，可舉出第二方式所述的測(cè)定系統(tǒng)，例如，可使用夾心ELISA等。對(duì)于確定檢測(cè)體中的TG濃度對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生的影響的確定工序而言，例如，可將不添加TG時(shí)的檢測(cè)體的普萊曬譜星測(cè)定值與在同一檢測(cè)體中添加了一定量的TG時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值進(jìn)行比較，根據(jù)兩個(gè)測(cè)定值的解離度來(lái)確定上述影響。例如，作為一個(gè)例子，使用多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)，當(dāng)相對(duì)于不添加TG時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值，檢測(cè)體中的TG濃度調(diào)節(jié)為20mg/mL時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±20％以下、更優(yōu)選顯示為±10％以下的檢測(cè)體的比率高時(shí)，可確認(rèn)檢測(cè)體中的TG對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生的影響小，該抗體很難受到TG干擾，可確定該抗體是對(duì)普萊曬譜星測(cè)定有用的抗體?；蛘撸鳛槠渌u(píng)價(jià)方法，可使用候選的抗體與S68抗體來(lái)進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)，通過比較它們的解離度來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。作為優(yōu)選的方式之一，當(dāng)使用候選的抗體進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度與S68抗體在相同條件下的解離度類似時(shí)，可確定該抗體是對(duì)測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星有用的抗體。例如，作為一個(gè)例子，使用多個(gè)檢測(cè)體進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)，在使用候選的抗體的測(cè)定系統(tǒng)中，根據(jù)通過添加TG而將檢測(cè)體中的TG濃度調(diào)節(jié)為20mg/mL時(shí)的解離度與使用S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)在相同條件下的解離度來(lái)確定解離度的差，當(dāng)解離度的差顯示為20％以下、優(yōu)選10％以下的檢測(cè)體的比率高時(shí)，可確定該抗體是對(duì)測(cè)定檢測(cè)體中的普萊曬譜星有用的抗體。本發(fā)明的篩選方法可任意地包括確定工序，該確定工序確定候選的抗體與S68肽或普萊曬譜星的結(jié)合活性。另外，本發(fā)明的篩選方法可任意地包括比較工序，該比較工序通過使用候選抗體的普萊曬譜星測(cè)定系統(tǒng)對(duì)正常人與敗血癥患者的檢測(cè)體進(jìn)行測(cè)定，并比較測(cè)定值的差。這些可根據(jù)實(shí)施例1中的記載來(lái)實(shí)施。前述篩選方法的優(yōu)選方式之一至少包括下述工序：1)獲取工序，該獲取工序用來(lái)獲取候選的抗普萊曬譜星抗體；以及2)選擇工序，該選擇工序使用該候選的抗體來(lái)構(gòu)建普萊曬譜星測(cè)定系統(tǒng)，選擇在通過添加TG將檢測(cè)體中的TG濃度調(diào)節(jié)為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度顯示為±20％以下的檢測(cè)體的比率為50％以上的前述抗體。在前述方法中，能對(duì)檢測(cè)體中的TG濃度(此處為20mg/mL)、普萊曬譜星測(cè)定值的解離度(此處為±20％)、以及檢測(cè)體比率進(jìn)行適當(dāng)改變。另外，前述2)的工序即使替換成本發(fā)明的第一方式所述的其他TG干擾試驗(yàn)和/或評(píng)價(jià)方法也能實(shí)施。本發(fā)明的第八方式是一種本發(fā)明的抗體的篩選方法，另一優(yōu)選方式至少包括下述工序。1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體；以及，2)選擇工序，該選擇工序選擇下述抗體：該抗體在普萊曬譜星的序列中，以序列號(hào)1的氨基酸序列作為表位而特異性識(shí)別。在前述方法中，在2)的工序中，沒有特別的限定，但是，能夠使用本發(fā)明的第一方式所述的表位確定方法。例如，2)可以是下述工序。2)選擇工序，該選擇工序?yàn)闉榱艘种圃摽贵w與普萊曬譜星的結(jié)合，在使由序列號(hào)1構(gòu)成的氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，選擇該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制的前述抗體。上述表位的確定方法可以任意加入下述3)工序。3)選擇工序，為了抑制該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，選擇下述抗體：借助由序列號(hào)35、36、37、38、39、40、41的序列構(gòu)成的氨基酸殘基中的至少一種，該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制小于20％。另外，在本發(fā)明的第八方式中，另一優(yōu)選的方式是至少包括下述工序的本發(fā)明的抗體的篩選方法。1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體；以及，2)選擇工序，該選擇工序選擇下述抗體：使用所述候選抗體而獲得的檢測(cè)體中的普萊曬譜星測(cè)定值與使用S68抗體而獲得的同一檢測(cè)體中的普萊曬譜星測(cè)定值的相關(guān)系數(shù)為0.9以上的抗體。前述方法能根據(jù)本發(fā)明的第一方式以及實(shí)施例5所述內(nèi)容來(lái)實(shí)施。相關(guān)系數(shù)也能適當(dāng)改變。另外，在本發(fā)明的第八方式中，另一優(yōu)選方式是至少包括下述工序的本發(fā)明的抗體的篩選方法。1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體；以及，2)選擇工序，該選擇工序選擇以小于10-8M的親和性(平衡解離常數(shù)、KD值)與普萊曬譜星結(jié)合的抗體。前述2)的工序可置換為下述工序。2)選擇工序，該選擇工序選擇下述抗體：該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合活性比S68抗體與普萊曬譜星的結(jié)合活性更優(yōu)異。親和性(平衡解離常數(shù)，KD值)、結(jié)合活性的測(cè)定能根據(jù)本發(fā)明的第一方式所述的內(nèi)容來(lái)實(shí)施。結(jié)合活性可通過吸光度比來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。優(yōu)選：在將S68抗體與普萊曬譜星進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度設(shè)為1時(shí)，使本發(fā)明的抗體與普萊曬譜星進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度的比為2以上。上述本發(fā)明的抗體的篩選方法可組合各工序來(lái)實(shí)施。對(duì)于優(yōu)選的組合而言，例如，如下所述。一種至少包括下述工序的抗普萊曬譜星抗體的篩選方法，1)獲取工序，該獲取工序獲取候選的抗普萊曬譜星抗體；2)選擇工序，該選擇工序是為了抑制該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合，在使由序列號(hào)1構(gòu)成的氨基酸殘基進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的反應(yīng)體系(吸光度)中，選擇下述抗體：該抗體與普萊曬譜星的結(jié)合的50％以上受到競(jìng)爭(zhēng)抑制；以及，3)選擇工序，該選擇工序選擇下述抗體：該抗體對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性比S68抗體對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性更優(yōu)異。9.敗血癥患者的治療方法本發(fā)明的第九方式是一種敗血癥患者的治療方法，其使用本發(fā)明的第一方式的抗體或抗原結(jié)合性抗體片段對(duì)實(shí)施了用以輔助檢測(cè)敗血癥的方法的受試者進(jìn)行敗血癥的治療。用于對(duì)敗血癥的檢測(cè)進(jìn)行輔助的方法如本發(fā)明的第二方式所述。對(duì)敗血癥的治療沒有特別的限定，但是，例如，可舉出抗菌藥、類固醇的給藥、升壓藥、輸液、氧給藥、人工呼吸管理、連續(xù)血液透析過濾、血漿置換等。10.受試藥(或治療藥)的篩選方法本發(fā)明的第十方式是一種受試藥(或治療藥)的篩選方法，其包括下述確定工序，該確定工序使用本發(fā)明的第一方式中的抗體或其抗原結(jié)合性抗體片段或第三方式的試劑盒，確定給藥受試藥(或治療藥)的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度。對(duì)于受試藥所要應(yīng)對(duì)的疾病而言，只要是受試者檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度上升的疾病即可，沒有特別的限定。優(yōu)選：將受試藥給藥前與給藥后的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度進(jìn)行比較，確定受試藥給藥后的普萊曬譜星濃度是否相比于給藥前有所下降?；蛘撸梢源_定受試藥給藥后的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度是否降低至正常人水平。即，一種包括下述工序的受試藥的篩選方法。1)確定工序，該確定工序確定給藥受試藥的受試者的檢測(cè)體中的普萊曬譜星濃度。11.rsCD14ST-FcrsCD14ST-Fc具備：包括序列號(hào)3(人全長(zhǎng)可溶性CD14)的第1位至第64位的序列以及抗體重鏈Fc區(qū)的結(jié)構(gòu)。對(duì)于rsCD14ST-Fc的制備而言，例如，如實(shí)施例9-(2)所述，能夠通過將用于表達(dá)rsCD14ST-Fc的瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至如COS-1細(xì)胞那樣的宿主細(xì)胞中，并對(duì)該宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，回收所得到的培養(yǎng)上清液并進(jìn)行純化來(lái)獲得，所述用于表達(dá)rsCD14ST-Fc的瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒具有：人sCD14中第1位至第64位的序列的下游具有凝血酶識(shí)別序列的序列、以及人源IgG1抗體重鏈Fc區(qū)的序列。優(yōu)選在人sCD14中的第1位至第64位的序列與Fc之間插入便于切割的序列，對(duì)于該序列沒有特別的限定，但是，除凝血酶識(shí)別序列以外，例如，還可以使用FactorXa識(shí)別序列、PreScissionProtease識(shí)別序列等。rsCD14ST-Fc不是必須具有便于切割的序列。對(duì)于抗體重鏈Fc區(qū)而言，除來(lái)源于人的IgG1抗體以外，還能使用所有抗體的Fc區(qū)。對(duì)宿主細(xì)胞也沒有特別限定。rsCD14ST-Fc具有以下制造上的優(yōu)勢(shì)：由于rsCD14ST-Fc能通過培養(yǎng)COS-1細(xì)胞等宿主細(xì)胞來(lái)獲得，因而能容易地進(jìn)行表達(dá)，另外，F(xiàn)c可與蛋白質(zhì)A特異性地結(jié)合，能夠使用蛋白質(zhì)A柱進(jìn)行純化，因而也易于純化。在切斷Fc區(qū)后進(jìn)行純化時(shí)，除蛋白質(zhì)A柱以外，還能使用常規(guī)方法進(jìn)行純化，例如，可以使用WO2005/108429的實(shí)施例13所述的方法等進(jìn)行純化。對(duì)于rsCD14ST-Fc，能夠切斷Fc區(qū)而作為rsCD14-ST來(lái)使用，也能夠不切斷Fc區(qū)而保持rsCD14ST-Fc的狀態(tài)來(lái)使用，兩者都與抗普萊曬譜星抗體特異性結(jié)合。對(duì)于在實(shí)施例9-(2)中制備的rsCD14ST-Fc而言，在rsCD14ST與Fc之間插入與制備rsCD14-ST標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)相同的凝血酶序列。使用凝血酶切斷Fc區(qū)而獲得的rsCD14ST具有與rsCD14ST標(biāo)準(zhǔn)品相同的序列，并且具有相同的特性(參見WO2005/108429)。對(duì)于由rsCD14ST-Fc制備rsCD14而言，在切斷Fc區(qū)后，通過蛋白質(zhì)A柱能容易地僅除去Fc，也容易進(jìn)行制備。對(duì)rsCD14ST-Fc的Fc區(qū)的切斷方法，能根據(jù)已插入的易于切斷的序列來(lái)適當(dāng)加以選擇。對(duì)于rsCD14ST-Fc而言，即使不切割Fc區(qū)而保持rsCD14ST-Fc的狀態(tài)也具有rsCD14-ST的活性，因而能用作抗原?，F(xiàn)有的rsCD14-ST標(biāo)準(zhǔn)品通過下述方式獲得：使在人sCD14的第64位與第65位之間插入了凝血酶識(shí)別部位的rsCD14在宿主細(xì)胞中表達(dá)，在凝血酶識(shí)別部位進(jìn)行切斷而獲得。rsCD14結(jié)構(gòu)雖然包含rsCD14-ST，但是，在保持原樣的狀態(tài)下基本上不顯示rsCD14-ST的反應(yīng)性，在切斷并純化后，能獲得rsCD14-ST的活性，從而能加以使用。另一方面，對(duì)于rsCD14ST-Fc而言，即使不切斷Fc區(qū)也能夠與rsCD14-ST同樣地使用，因而能夠削減切斷所耗費(fèi)的工夫勞動(dòng)，從而便于使用。實(shí)施例(實(shí)施例1)以合成肽作為抗原的單克隆抗體的制備1-(1)兔的免疫按照WO2004/044005中實(shí)施例1所述的方法制備給藥抗原，并對(duì)兔進(jìn)行免疫。即，制備在由序列號(hào)2的序列(對(duì)應(yīng)于序列號(hào)3的第53位至第68位的序列)構(gòu)成的肽(下面，記作S68肽)的N末端插入了半胱氨酸的肽。將KLH(PIERCE)與該肽結(jié)合，作為給藥抗原(下面，記作S68肽-KLH)。將S68肽-KLH100μg與等量的弗氏完全佐劑(DIFCO)混合后，在新西蘭白兔(3月齡)的背部皮內(nèi)給藥。分別在2周后、以及2周后再經(jīng)過1周后，將S68肽-KLH100μg與弗氏不完全佐劑(DIFCO)進(jìn)行等量混合，然后在背部皮內(nèi)給藥。進(jìn)而在耳靜脈內(nèi)給藥2次S68肽-KLH20μg。給藥結(jié)束1周后，進(jìn)行耳靜脈采血，按照常規(guī)方法與抗血清分離，使用夾心ELISA確認(rèn)了抗體效價(jià)以及與普萊曬譜星的反應(yīng)性。即，將F1106-13-3固定化于免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341，丹麥能肯公司制)后，進(jìn)行封閉。使用D-PBS(pH7.4)對(duì)兔的各抗血清進(jìn)行稀釋，并制備從×1/1000倍至×1/32000倍的各倍數(shù)的稀釋系列(8點(diǎn))。使用稀釋液(0.1％BSA/D-PBS)對(duì)普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品(WO2005/108429的實(shí)施例16所述的rsCD14-ST)進(jìn)行稀釋，制備3ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。將抗血清稀釋系列添加至微孔板，接著添加3ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。使微孔板進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)，接著使用含有0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水洗滌微孔板5次。接著，添加稀釋了抗兔Igs-HRP(丹科(DAKO)公司、P448)的溶液100μL，在25℃反應(yīng)1小時(shí)。同樣地洗滌微孔板5次，然后，添加四甲基聯(lián)苯胺溶液(TMB，BioFix)，在室溫反應(yīng)10分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀MultiskanJX(雷勃公司(ThermolabSystems))測(cè)定450/650nm處的吸光度。基于吸光度測(cè)定的結(jié)果，選擇抗體效價(jià)高的個(gè)體。在進(jìn)行脾臟采集的4天前，將S68肽-KLH400μg給藥耳靜脈內(nèi)，以無(wú)菌的方式采集脾臟，回收淋巴細(xì)胞。1-(2)細(xì)胞融合及克隆按照美國(guó)專利第7429487號(hào)所述的方法，將2×108淋巴細(xì)胞與來(lái)源于兔的永生B淋巴細(xì)胞融合伴侶1×108細(xì)胞進(jìn)行混合，分2次進(jìn)行細(xì)胞融合。將融合的細(xì)胞接種于96孔板，并按照常規(guī)方法加以培養(yǎng)。針對(duì)所得到的286個(gè)克隆的培養(yǎng)上清液，使用S68肽-BSA確認(rèn)與給藥抗原的結(jié)合活性，選擇已確認(rèn)了結(jié)合活性的72個(gè)克隆體。對(duì)于與給藥抗原的結(jié)合活性已被確認(rèn)的72個(gè)克隆體，通過與1-(1)相同的夾心ELISA系統(tǒng)，確認(rèn)與普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)合活性，選擇結(jié)合活性已確認(rèn)的克隆體。對(duì)于與普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)合活性已確認(rèn)的克隆體，確認(rèn)其對(duì)患者血液中普萊曬譜星的特異性。即，使用稀釋液將3例正常人血清(普美德克斯(ProMedDx)公司)和3例敗血癥患者血清(生物再生(Bioreclamation)公司)稀釋5倍，使用與1-(1)相同的夾心ELISA系統(tǒng)進(jìn)行同樣的測(cè)定。其結(jié)果是，選擇與普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)性良好、且吸光度在正常人檢測(cè)體中不上升、而在敗血癥患者檢測(cè)體中上升的5個(gè)克隆。通過有限稀釋法對(duì)各克隆體進(jìn)行克隆后，分別制備冷凍安瓿。1-(3)基于BIACORE對(duì)結(jié)合方式進(jìn)行分析為了確認(rèn)由選擇的克隆體而得到的各抗體與普萊曬譜星的結(jié)合方式，使用BIACORE3000(生物大分子相互作用分析儀)(GE醫(yī)療集團(tuán))進(jìn)行了分析。按照常規(guī)方法將F1106-13-3抗體固定于CM5芯片(GE醫(yī)療集團(tuán))，在其中添加普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品(1μg/mL)。進(jìn)一步添加稀釋的培養(yǎng)上清液(0.5μg/mL)，繪制傳感圖。顯示出了良好的結(jié)合方式，沒有觀察到任何克隆體與解離相發(fā)生解離。1-(4)兔單克隆抗體的制備使用制備的產(chǎn)生兔抗普萊曬譜星單克隆抗體的雜交瘤來(lái)制備兔單克隆抗體。即，按照常規(guī)方法對(duì)冷凍安瓿進(jìn)行解凍，使用含10％胎牛血清、8％添加物A(艾博抗公司(Abcam))的RPMI1640培養(yǎng)基(西格瑪公司(Sigma))進(jìn)行培養(yǎng)后，回收細(xì)胞并按照CELLine(瑞士因特瑞公司(IntegraBioscience))的方法，使用IS-MAB-CD培養(yǎng)基(歐文公司(Irvine))進(jìn)行培養(yǎng)，回收含有抗體的培養(yǎng)上清液。接著，對(duì)于所得到的培養(yǎng)上清液，使用重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(rmp-ProteinASepharoseFF)(GE醫(yī)療集團(tuán))對(duì)抗體進(jìn)行純化。對(duì)含有純化抗體的溶出液進(jìn)行濃縮，接著進(jìn)行對(duì)D-PBS(PH7.4)的透析。抗體的蛋白濃度是以牛IgG(伯樂公司(BioRad))作為標(biāo)準(zhǔn)品、通過考馬斯藍(lán)染色法(Bradford法)來(lái)求出的。通過SDS-PAGE對(duì)所得到的抗體進(jìn)行分析，確認(rèn)了分子量約150kDa的單一譜帶，另外，也確認(rèn)了通過還原得到的約50kDa的重鏈以及約25kDa的輕鏈。(實(shí)施例2)重組抗體的制備2-(1)兔單克隆抗體的可變區(qū)氨基酸序列的確定和表達(dá)用質(zhì)粒的構(gòu)建使用RNA提取試劑盒(RNeasyMineKit(凱杰(QIAGEN)公司))，從由實(shí)施例1獲得的各雜交瘤中提取總RNA，通過cDNA合成試劑盒(SuperScriptVILOcDNASynthesisKit(英杰公司(Invitrogen))合成單鏈cDNA。以得到的單鏈cDNA為模板，通過基于RabbitIg-PrimerSet(RaderC,etal.JBC2000；275：13668-76，以及，LangI，etal.Gene1996；172：295-8)的PCR對(duì)可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，并按照常規(guī)方法來(lái)確定重鏈和輕鏈的各可變區(qū)的堿基序列。在數(shù)據(jù)庫(kù)上檢索除可變區(qū)以外的序列信息，設(shè)計(jì)5’側(cè)引物及3’側(cè)引物。通過使用這些引物來(lái)進(jìn)行PCR，分別對(duì)重鏈全長(zhǎng)和輕鏈全長(zhǎng)進(jìn)行擴(kuò)增并將其克隆至pTK-2433，所述pTK-2433是哺乳細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)用載體，是具有EF-1α啟動(dòng)子和CMV增強(qiáng)子的pTK-2433。按照常規(guī)方法，確定重鏈全長(zhǎng)和輕鏈全長(zhǎng)的堿基序列、以及由所述序列編碼的氨基酸序列。將抗體的可變區(qū)的CDR部分的氨基酸序列示于表10和表11中。表10表112-(2)瞬時(shí)表達(dá)重組抗體的制備將在前述2-(1)中制備的瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(包含重鏈序列的表達(dá)質(zhì)粒與包含輕鏈序列的表達(dá)質(zhì)粒)進(jìn)行等量混合，并轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞(ATCC：CRL-1650)。即，將轉(zhuǎn)染試劑2μL/mL與質(zhì)粒4μg/mL進(jìn)行混合，將其添加至培養(yǎng)基后，添加COS-1細(xì)胞，在37℃溫度進(jìn)行培養(yǎng)。72小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液，進(jìn)而添加新的培養(yǎng)基。96小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液，混合2次的量后，使用0.22μm的濾膜(Sterivac，密里博公司)進(jìn)行過濾。對(duì)于所得到的培養(yǎng)上清液，按照前述1-(4)所述的方法進(jìn)行純化，并通過SDS-PAGE進(jìn)行分析，確認(rèn)了約150kDa的單一譜帶的重組抗體。2-(3)重組抗體穩(wěn)定表達(dá)用質(zhì)粒的構(gòu)建對(duì)于在前述2-(2)中制備的瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒，使用限制性內(nèi)切酶以切割出編碼重鏈的基因片段以及編碼輕鏈的基因片段，將其組合在具有EF-1α啟動(dòng)子以及小鼠DHFR表達(dá)單元(作為啟動(dòng)子的SV40啟動(dòng)子(不包含增強(qiáng)子區(qū))、來(lái)自SV40的PolyA信號(hào))的質(zhì)粒(pTK-2577；日本特開2007-215546所述)中，制備在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)用質(zhì)粒。(實(shí)施例3)通過CHO細(xì)胞制備抗體3-(1)產(chǎn)生兔單克隆抗體的基因重組抗體的CHO細(xì)胞的制備將在前述2-(3)中構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DHFR基因缺陷的CHO細(xì)胞(CHODXB11)，從而確立產(chǎn)生兔抗體的轉(zhuǎn)化體CHO。即，在轉(zhuǎn)染CHODXB11的當(dāng)天進(jìn)行離心，然后以8×106細(xì)胞/150cm2Roux的濃度植入到燒瓶中，所述CHODXB11是通過包括HTmediaSupplement(50×)Hybri-Max(西格瑪(Sigma)公司制；最終濃度使用1×)及200mML-Glutamine(西格瑪(Sigma)公司；最終濃度使用4mM)的EX-CELL302PFCHO(JRHBioscience)進(jìn)行馴化培養(yǎng)的。使用FuGENE6(普洛麥格(Promega)公司)125μL，基于附在FuGENE6中的方法制備表達(dá)質(zhì)粒12.5μg，導(dǎo)入前述CHODXB11中。在5％CO2、37℃溫度的條件下培養(yǎng)2天后，回收細(xì)胞，使用不含HT、而含4mML-谷氨酰胺的EX-CELL302PFCHO培養(yǎng)基(下面，記作EX-CELL(HT-))進(jìn)行2次洗滌，重懸于EX-CELL(HT-)中。接著，以12500～50000細(xì)胞/孔的濃度再將細(xì)胞接種于96孔板，繼續(xù)在5％CO2、37℃溫度的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，每3天或4天將培養(yǎng)基的一半更換成新的EX-CELL(HT-)。繼續(xù)培養(yǎng)約2周后，將生成了菌落的孔內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的微孔板中。通過將S68肽抗原用于固相的ELISA法，對(duì)CHO細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中的抗體進(jìn)行篩選，選擇5種可產(chǎn)生與S68肽結(jié)合的抗體的CHO細(xì)胞。3-(2)使用甲胺喋呤(Methotrexate)的基因擴(kuò)增對(duì)于由3-(1)獲得的重組抗體表達(dá)用轉(zhuǎn)化體CHO，使用含甲胺喋呤(Methotrexate)(下面，記作MTX)的EX-CELL(HT-)的培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，由此，進(jìn)行基因擴(kuò)增操作，選擇目標(biāo)重組抗體的生產(chǎn)量上升的克隆體。即，將實(shí)施例3-(1)中獲得的轉(zhuǎn)化體懸浮于含30nMMTX的EX-CELL(HT-)培養(yǎng)基，植入96孔板中。每3天或4天將培養(yǎng)基的一半更換為新的含30nMMTX的EX-CELL(HT-)，在5％CO2、37℃溫度的條件下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)直至產(chǎn)生菌落為止。通過EIA法確認(rèn)所得到的菌落的培養(yǎng)上清液中的IgG濃度，選擇生產(chǎn)量增加的克隆體。其結(jié)果是，能夠獲得生產(chǎn)量上升約2至10倍的轉(zhuǎn)化體。此外，使用MTX的濃度增加了3至10倍的培養(yǎng)基對(duì)該進(jìn)行了基因擴(kuò)增的轉(zhuǎn)化體反復(fù)進(jìn)行選擇培養(yǎng)，能夠獲得生產(chǎn)量進(jìn)一步增加的克隆體。3-(3)通過CHO細(xì)胞產(chǎn)生重組抗體將3-(2)中獲得的克隆體以1×105細(xì)胞/mL的濃度植入含30nMMTX的CHO-SFM(HT-)培養(yǎng)基(GIBCO)中，在37℃溫度培養(yǎng)7天。將所得到的培養(yǎng)上清液用于下述純化中。對(duì)于培養(yǎng)上清液，使用蛋白質(zhì)A柱(Prosep-A，密里博公司)對(duì)抗體進(jìn)行純化。通過SDS-PAGE對(duì)純化的重組抗體進(jìn)行分析，確認(rèn)了顯示出與來(lái)源于雜交瘤的抗體相同的分子量的抗體。(實(shí)施例4)使用夾心ELISA系統(tǒng)對(duì)各抗體的反應(yīng)性進(jìn)行評(píng)價(jià)對(duì)于在實(shí)施例2中制備的5種兔單克隆抗體、WO2004/044005的實(shí)施例1所述的S68抗體(使用S68肽對(duì)兔進(jìn)行免疫而獲得的多克隆抗體)以及WO2004/044005的實(shí)施例2所述的F1146-17-2(使用S68肽對(duì)大鼠進(jìn)行免疫而獲得的單克隆抗體)，對(duì)它們與普萊曬譜星的反應(yīng)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。即，使用PBS(pH7.4)將各抗體稀釋至5μg/mL，在免疫檢測(cè)微孔板(Maxisorb，丹麥能肯(NUNC)公司)的各孔中添加50μL。在4℃溫度反應(yīng)一夜，然后使用離子交換水洗滌5次，在各孔中添加200μL的含有0.1％StabilGuard(蘇莫蒂克斯(SurModics,Inc)公司)與0.1％吐溫(Tween)20(和光純藥)的PBS，并進(jìn)行封閉。接著，使用稀釋液將普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至1000ng/mL，接著以3倍公比進(jìn)行稀釋，制備標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋系列。在每孔中添加50μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋系列，在25℃溫度反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，使用含0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水洗滌5次，在各孔中添加50μL的已稀釋至0.25μg/mL的過氧化物酶標(biāo)記F1106-13-3抗體。在25℃溫度反應(yīng)2小時(shí)，然后以同樣的方式洗滌5次，在各孔中添加TMB溶液。在室溫條件下反應(yīng)20分鐘后，使用0.5M硫酸溶液停止反應(yīng)，使用微孔板分光光度計(jì)(分子儀器公司)對(duì)450nm(副波長(zhǎng)650nm)處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。將測(cè)定結(jié)果示于表12中。使用在實(shí)施例2中制備的各兔單克隆抗體的測(cè)定系統(tǒng)與普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)性都很優(yōu)異，并顯示出與使用S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)大致相同的反應(yīng)性。另一方面，對(duì)于使用F1146-17-2的測(cè)定系統(tǒng)而言，其反應(yīng)性低，當(dāng)普萊曬譜星濃度為1000ng/mL時(shí)，吸光度為0.368。對(duì)于該吸光度而言，在使用兔單克隆抗體的測(cè)定系統(tǒng)中，與普萊曬譜星濃度為0.03～0.1ng/mL時(shí)的吸光度大致相同。由此，顯而易見的是，與使用F1146-17-2的測(cè)定系統(tǒng)相比，使用兔單克隆抗體的測(cè)定系統(tǒng)的反應(yīng)性提高了約1萬(wàn)倍。這也顯示了，由于正常人檢測(cè)體的普萊曬譜星濃度通常約為50～300pg/mL，因而在使用F1146-17-2的測(cè)定系統(tǒng)中無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。表12各抗體的反應(yīng)性比較(實(shí)施例5)患者檢測(cè)體的測(cè)定與干擾試驗(yàn)使用在實(shí)施例2中制備的各抗體，通過實(shí)施例4所述的夾心ELISA系統(tǒng)對(duì)30例敗血癥患者檢測(cè)體的血液中普萊曬譜星值進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)該測(cè)定值與通過使用S68抗體的夾心ELISA系統(tǒng)獲得的測(cè)定值的相關(guān)性進(jìn)行分析。其結(jié)果是，在使用各兔單克隆抗體的ELISA系統(tǒng)中，存在與通過使用S68抗體的ELISA系統(tǒng)獲得的測(cè)定值相關(guān)性良好的系統(tǒng)、以及與所述測(cè)定值相關(guān)性差的系統(tǒng)。兔單克隆抗體的F1466-12、F1466-19的相關(guān)系數(shù)與其他相比結(jié)果較差。各抗體的相關(guān)系數(shù)分別是：F1466-12為0.89、F1466-19為0.93、F1466-26為0.98。接著，在使用各兔單克隆抗體、以及S68抗體分別制備的夾心ELISA系統(tǒng)中，對(duì)血液中的干擾物質(zhì)(膽紅素F、膽紅素C、血色素、類風(fēng)濕因子以及甘油三酯)對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生的影響進(jìn)行研究。在添加有一定量普萊曬譜星的健康人血清中，加入梯度性的濃度的各干擾物質(zhì)，對(duì)普萊曬譜星濃度進(jìn)行測(cè)定，以不添加干擾物質(zhì)時(shí)的測(cè)定值為基準(zhǔn)，評(píng)價(jià)各干擾物質(zhì)對(duì)測(cè)定值的影響。其結(jié)果是，無(wú)論在使用哪一種抗體的測(cè)定系統(tǒng)中，膽紅素F、膽紅素C、血色素以及類風(fēng)濕因子造成的干擾都處于不會(huì)產(chǎn)生問題的水平。另一方面，甘油三酯(TG)對(duì)使用一部分抗體的測(cè)定系統(tǒng)產(chǎn)生了影響。TG干擾試驗(yàn)以如下方式進(jìn)行。檢測(cè)體使用添加了一定量的普萊曬譜星的正常人血清。使用脂肪輸液20％((費(fèi)森尤斯(Fresenius))公司)，梯度式地制備稀釋樣本直至檢測(cè)體中的TG濃度成為20mg/mL。該TG濃度不考慮檢測(cè)體的血清中本來(lái)所含的TG。使用檢測(cè)體稀釋液將稀釋樣本稀釋20倍，通過ELISA測(cè)定普萊曬譜星值。針對(duì)多個(gè)檢測(cè)體來(lái)實(shí)施所述TG干擾試驗(yàn)。其結(jié)果是，對(duì)于使用了F1466-12、F1466-19的抗體的測(cè)定系統(tǒng)而言，添加TG可對(duì)普萊曬譜星測(cè)定值產(chǎn)生影響，當(dāng)檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度大于±20％的檢測(cè)體的比率高。另外，檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度通過多個(gè)檢測(cè)體來(lái)求出，針對(duì)各抗體計(jì)算所述解離度的平均值。其結(jié)果是，解離度的平均值顯示為±20％以下的是使用S68抗體、F1466-5以及F1466-26的測(cè)定系統(tǒng)。另一方面，在使用F1466-12、F1466-19以及F1466-16的抗體的測(cè)定系統(tǒng)中，結(jié)果是解離度的平均值大于±20％。進(jìn)而，在使用各兔單克隆抗體的分析系統(tǒng)與使用S68抗體的分析系統(tǒng)之間，對(duì)于由添加TG所導(dǎo)致的普萊曬譜星測(cè)定值的解離度進(jìn)行對(duì)比。由此，在通過添加TG使檢測(cè)體中的TG濃度為20mg/mL時(shí)，無(wú)論是使用F1466-12的測(cè)定系統(tǒng)的解離度與使用S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)的解離度的差、還是使用F1466-19的測(cè)定系統(tǒng)的解離度與使用S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)的解離度的差，顯示出大于20％的差的檢測(cè)體的比率都很高。由此，暗示了TG干擾試驗(yàn)中抗體性能的差異可能會(huì)對(duì)前述相關(guān)分析的結(jié)果產(chǎn)生影響。針對(duì)F1146-17-2也嘗試進(jìn)行了干擾物質(zhì)的試驗(yàn)，但是，由于反應(yīng)性低，未得到數(shù)據(jù)。(實(shí)施例6)抗體的特異性表位分析對(duì)在實(shí)施例2中制備的各兔單克隆抗體以及F1146-17-2(使用S68肽對(duì)大鼠免疫而獲得的單克隆抗體)的表位進(jìn)行分析。合成8種含有在實(shí)施例1中作為給藥抗原的序列號(hào)2的肽序列的部分片段、并且由10個(gè)氨基酸構(gòu)成的肽(參見表13)，通過實(shí)施例4所述的夾心ELISA系統(tǒng)，通過觀察與普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品的競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)來(lái)研究表位序列。即，按照實(shí)施例4所示的方法，制備固定化各抗體的微孔板。接著，在微孔板中添加400pg/mL的普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品、以及表13所示的20μg/mL的合成肽(P01～P08)各25μL進(jìn)行反應(yīng)。作為陰性對(duì)照，使用不添加肽(記作PBS)、以及陰性對(duì)照用肽(記作NC：序列CGDKTTATDIKGKE(序列號(hào)34))。另外，作為陽(yáng)性對(duì)照，使用S68肽。反應(yīng)結(jié)束后，使用TMB使其顯色。一旦合成肽與抗體進(jìn)行反應(yīng)，則普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品與抗體的結(jié)合就會(huì)受到抑制，因此，吸光度下降。以PBS的吸光度為100％，計(jì)算各肽的抑制率。如表14所示，結(jié)果確認(rèn)了僅識(shí)別P03的抗體、識(shí)別從P03至P04的抗體、識(shí)別從P04至P05的抗體。另外，表明了F1146-17-2是識(shí)別從P04至P05的抗體。其結(jié)果表明，獲得了以P03的位置作為表位而識(shí)別的單克隆抗體。在實(shí)施例5中，TG干擾試驗(yàn)結(jié)果差、而且與使用S68抗體的測(cè)定系統(tǒng)的相關(guān)性差的F1466-12、F1466-19，與大鼠單克隆抗體(F1146-17-2)同樣地識(shí)別從P04至P05，而不以P03為表位。其他抗體則以P03作為表位識(shí)別。由此，暗示了：抗體具有適于進(jìn)行普萊曬譜星測(cè)定的性能、以及抗體與識(shí)別的表位的關(guān)聯(lián)性。另外，普萊曬譜星具有高分子量sCD14的C端部顯著缺失的氨基酸序列，推測(cè)所述氨基酸的長(zhǎng)度存在變化。還考慮抗體的特異性差異可能會(huì)對(duì)與實(shí)施例5中使用S68抗體獲得的測(cè)定值的相關(guān)性造成影響。表13表14F1466-5F1466-26F1466-16F1466-12F1466-19F1146-17-2P01------P02------P03++++++---P04--++++++++P05---++++++P06------P07------P08------S68++++++++++++殘留反應(yīng)性(％)-：80％以上；+：50％以上且小于80％；++：小于50％(實(shí)施例7)表位的詳細(xì)分析對(duì)于識(shí)別P03肽的兔單克隆抗體，對(duì)其與分別修改P03肽中每個(gè)氨基酸而成的肽的反應(yīng)性進(jìn)行探究。在P03肽(對(duì)應(yīng)于序列號(hào)1的氨基酸序列、并且對(duì)應(yīng)于由序列號(hào)3的序列的第52位至第61位構(gòu)成的氨基酸序列)中，對(duì)于從第53位至第61位的氨基酸，使用丙氨酸(當(dāng)原氨基酸為丙氨酸時(shí)，使用甘氨酸)分別置換其中的每個(gè)氨基酸來(lái)制備肽(P031～P039肽)，按照實(shí)施例4所述，使用夾心ELISA系統(tǒng)對(duì)P031～P039肽與抗體的反應(yīng)性進(jìn)行了確認(rèn)。其結(jié)果是，在將P03肽中的序列號(hào)3的第59位的天冬氨酸(對(duì)應(yīng)于序列號(hào)1的第8位)置換成丙氨酸時(shí)，其與抗體的結(jié)合活性消失。即使將P03肽中的序列號(hào)3的第53位～第58位(對(duì)應(yīng)于序列號(hào)1的第2位～第7位)、序列號(hào)3的第60位以及第61位(序列號(hào)1的第9位及第10位)的氨基酸置換成丙氨酸(或甘氨酸)，與抗體的結(jié)合活性也得以保持。由上所述，確認(rèn)了對(duì)于以P03肽作為表位而識(shí)別的抗體而言，也以下述肽作為表位而識(shí)別：在P03肽中將序列號(hào)3的第53位～第58位、第60位以及第61位的每個(gè)氨基酸分別置換成丙氨酸(或甘氨酸)而成的肽。(實(shí)施例8)兔來(lái)源的抗普萊曬譜星單克隆抗體的變體的制備基于實(shí)施例1所述的由兔獲得的抗普萊曬譜星單克隆抗體的序列，制備變體。8-(1)CDR序列分析對(duì)實(shí)施例1中獲得的5種抗普萊曬譜星抗體的CDR序列進(jìn)行分析，推測(cè)各抗體的序列中存在對(duì)抗體的活性產(chǎn)生影響的序列、以及不會(huì)對(duì)活性產(chǎn)生影響的序列。其中，作為在實(shí)施例6中表明的以P03(序列號(hào)1)的序列作為表位而識(shí)別的抗體的之一的F1466-26，基于該F1466-26抗體的CDR序列，對(duì)各CDR序列的氨基酸進(jìn)行改變，從而制備變體，并對(duì)變體的活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。制備了約100個(gè)變體。對(duì)于氨基酸的改變而言，能夠進(jìn)行氨基酸的置換、插入或缺失、或者多個(gè)氨基酸序列的置換等。另外，制備包含F(xiàn)1466-26抗體的重鏈全長(zhǎng)與F1466-5抗體的輕鏈全長(zhǎng)的變體，同樣地進(jìn)行評(píng)價(jià)。8-(2)重鏈變體制備用質(zhì)粒的制備重鏈變體用質(zhì)粒以下述方式來(lái)制備。僅示出了質(zhì)粒pTK-5793，但是，其他質(zhì)粒也使用同樣的方法來(lái)構(gòu)建。以在實(shí)施例2中獲得的包含F(xiàn)1466-26的重鏈全長(zhǎng)的重鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5605)為模板，使用一對(duì)引物(rabbitIgG(14-12)-e：3’側(cè)引物以及Aor13HI-rabbitIgV2：5’側(cè)引物)進(jìn)行PCR。進(jìn)而，以所得到的擴(kuò)增片段為模板，使用一對(duì)引物(rabbitIgG(14-12)-e、Aor13HI-rabbitIgV2)進(jìn)行PCR。將所得到的擴(kuò)增片段克隆至質(zhì)粒pT7-Blue，使用限制性內(nèi)切酶Aor13HI制備包含目標(biāo)序列的片段。另外，使用限制性內(nèi)切酶Aor13HI將作為哺乳細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)用載體的pTK-4273(本公司制造)切斷，制備載體片段，所述瞬時(shí)表達(dá)用載體pTK-4273具有EF-1α啟動(dòng)子以及CMV增強(qiáng)子，并且具有包含兔IgG中除H鏈可變區(qū)以外的部位的基因序列。將制備的包含目標(biāo)序列的片段克隆至載體片段中，從而制備pTK-5793。8-(3)輕鏈變體制備用質(zhì)粒的制備輕鏈變體用質(zhì)粒以下述方式進(jìn)行制備。示出了質(zhì)粒pTK-5844，但是，其他質(zhì)粒也使用同樣的方法來(lái)構(gòu)建。以實(shí)施例2中獲得的含有F1466-26的輕鏈全長(zhǎng)的輕鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5608)為模板，使用一對(duì)引物(pEF2ce-28：3’側(cè)引物以及pEF2ce-49：5’側(cè)引物)進(jìn)行PCR。進(jìn)而，以所得到的擴(kuò)增片段為模板，使用一對(duì)引物(pEF2ce-28、pEF2ce-49)進(jìn)行PCR。將所得到的擴(kuò)增片段克隆至質(zhì)粒pT7-Blue，使用限制性內(nèi)切酶BamHI以及XbaI來(lái)制備包含目標(biāo)序列的片段。另外，使用限制性內(nèi)切酶BamHI、XbaI將作為哺乳細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)用載體的pTK-2433(本公司制造)切斷，從而制備載體片段。將制備的包含目標(biāo)序列的片段克隆至載體片段，制備pTK-5844。引物的序列rabbitIgG(14-12)-e：5’GGGGGTCCGGAGGTCGCCTGGTCACGCCTGG3’(序列號(hào)85)Aor13HI-RabbitIgV2：5’GGGTCCGGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCC3’(序列號(hào)86)pEF2ce-28：5’TTCATTCTCAAGCCTCAGAC3’(序列號(hào)87)pEF2ce-49：5’TTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGT3’(序列號(hào)88)8-(4)瞬時(shí)表達(dá)重組抗體的制備下面，示出作為代表例的、使用重鏈變體制備用質(zhì)粒pTK-5793進(jìn)行的抗體的瞬時(shí)表達(dá)的方法。將實(shí)施例8-(2)中制備的重鏈變體制備用質(zhì)粒(pTK-5793)與實(shí)施例8-(3)所述的輕鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5608)等量混合，使用轉(zhuǎn)染試劑(FuGENE(注冊(cè)商標(biāo))6，普洛麥格公司)轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞(ATCC：CRL-1650)。即，將Opti-MEM(注冊(cè)商標(biāo))低血清培養(yǎng)基(ReducedSerumMedium)(美國(guó)生命技術(shù)公司制造)作為稀釋液，制備轉(zhuǎn)染試劑0.96μL/25μL以及質(zhì)粒0.48μg/25μL，將它們混合并添加至培養(yǎng)基后，添加COS-1細(xì)胞，在37℃溫度進(jìn)行培養(yǎng)。72小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液。同樣地，各重鏈變體制備用質(zhì)粒與輕鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5608)混合而使用。各輕鏈變體制備用質(zhì)粒與重鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5605)混合而使用。包含F(xiàn)1466-26抗體的重鏈全長(zhǎng)和F1466-5抗體的輕鏈全長(zhǎng)的變體與包含pTK-5605和F1466-5的輕鏈全長(zhǎng)的輕鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)?；旌隙苽洹?實(shí)施例9)變體的評(píng)價(jià)(1)對(duì)實(shí)施例8中的16種在COS-1細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)而獲得的變體(IgG抗體)進(jìn)行純化，對(duì)各抗體與普萊曬譜星的反應(yīng)性、特異性、親和性(KD值)進(jìn)行評(píng)價(jià)。9-(1)抗體的純化回收在8-(4)中獲得的COS-1細(xì)胞的培養(yǎng)上清液，并使用0.22μm的濾膜(Sterivac，密里博公司)進(jìn)行過濾。使用ProsepvA(密里博公司)對(duì)所得到的培養(yǎng)上清液進(jìn)行純化。對(duì)含有提純物的溶出液進(jìn)行濃縮，接著進(jìn)行對(duì)D-PBS(pH7.4)的透析。蛋白質(zhì)濃度是以IgG(伯樂(BioRaD)公司)作為標(biāo)準(zhǔn)品、通過勞里(Lowry)法來(lái)求出。通過SDS-PAGE對(duì)所得到的抗體進(jìn)行分析，確認(rèn)了約150kDa的單一譜帶的重組抗體。9-(2)瞬時(shí)表達(dá)rsCD14ST-Fc的制備首先，以pTK356H(TB64)(WO2005/108429的實(shí)施例13所述的具有編碼rsCD14的序列的質(zhì)粒)為模板，通過一對(duì)引物(hCD14-a，hCD14-d)與Taq酶(寶生物工程株式會(huì)社)進(jìn)行PCR反應(yīng)。將所得到的擴(kuò)增片段(包含信號(hào)序列的序列號(hào)3的人sCD14的第1位～第64位序列的下游具有凝血酶識(shí)別序列，兩端具有限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn))進(jìn)行TA克隆至pT7Blue載體(密里博公司)，并對(duì)序列進(jìn)行確認(rèn)，將其設(shè)為pTK-3047。接著，將通過限制性內(nèi)切酶EcoRI和BamHI切斷pTK-3047而獲得的片段插入在預(yù)先通過EcoRI和BAmHI切斷pTK-2233(哺乳細(xì)胞用表達(dá)質(zhì)粒，其具有編碼人源IgG1抗體重鏈Fc區(qū)的序列)而制備的載體片段中，將所得到的克隆體設(shè)為pTK-3053。hCD14-a的序列5′-GGGAATTCGCCGCCACCATGGAGCGCGCGTCCTGC-3′(序列號(hào)89)hCD14-d的序列5′-GGGATCCACGCGGAACCAGAGCATACTGCCGCGGG-3′(序列號(hào)90)將用于表達(dá)rsCD14ST-Fc的瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒pTK-3053轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞(ATCC：CRL-1650)。即，將轉(zhuǎn)染試劑2μL/mL與質(zhì)粒4μg/mL進(jìn)行混合，并將其添加至培養(yǎng)基中，然后，添加COS-1細(xì)胞，在37℃溫度進(jìn)行培養(yǎng)。72小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液，進(jìn)而添加新的培養(yǎng)基。96小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液，混合2次的量后，使用0.22μm的濾膜(Sterivac，密里博公司)進(jìn)行過濾。使用ProsepvA(密里博公司)對(duì)所得到的培養(yǎng)上清液進(jìn)行純化。對(duì)含有提純物的溶出液進(jìn)行濃縮，接著進(jìn)行對(duì)D-PBS(pH7.4)的透析。蛋白濃度是以BSA(伯樂(BioRad)公司)作為標(biāo)準(zhǔn)品、使用勞里(Lowry)法求出的。通過SDS-PAGE對(duì)所得到的rsCD14ST-Fc進(jìn)行分析，確認(rèn)了分子量約75kDa的單一譜帶。制備的rsCD14ST-Fc與抗普萊曬譜星抗體的結(jié)合活性通過抗原固定化于固相的ELISA來(lái)進(jìn)行確認(rèn)。9-(3)夾心ELISA的構(gòu)建使用在9-(1)中純化的變體來(lái)構(gòu)建夾心ELISA。即，將各變體固定化于丹麥能肯(Nunc)公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)，并進(jìn)行封閉。接著，添加普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品(0～300pg/mL)，使微孔板在25℃溫度反應(yīng)1小時(shí)，接著使用含0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水將微孔板洗滌5次。接著，在各孔中添加已稀釋的F1106-13-3F(ab′)2-HRP溶液，在25℃溫度反應(yīng)2小時(shí)。同樣地將板洗滌5次，然后，添加TMB溶液，在室溫條件下反應(yīng)20分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。9-(4)特異性的評(píng)價(jià)(1)為了對(duì)在9-(1)中純化的變體的特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)，使用固定有P03肽(在實(shí)施例6中制備，序列號(hào)1)的微孔板來(lái)實(shí)施ELISA。為了進(jìn)行比較，也對(duì)F1466-26進(jìn)行評(píng)價(jià)。即，將BSA、或P03肽-BSA分別固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)，進(jìn)行封閉。根據(jù)在9-(1)中獲得的蛋白濃度的結(jié)果，使用D-PBS進(jìn)行稀釋，制成500ng/mL濃度。在各孔中添加各稀釋液50μL，使微孔板反應(yīng)1小時(shí)，接著，使用含0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水將微孔板洗滌5次。接著，在各孔中添加已稀釋的抗兔Igs-HRP(丹科(DAKO)公司，P448)溶液，在室溫進(jìn)行1小時(shí)的反應(yīng)。同樣地將微孔板洗滌后，添加TMB溶液，在室溫條件下反應(yīng)3-5分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀(分子儀器公司)對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。將結(jié)果與變體中改變的CDR序列一同示于表16～表22中。其結(jié)果可知，變體的87％與P03肽結(jié)合，并暗示了其以P03的位置作為表位識(shí)別。即，暗示了在所得到的變體中，5795、5803、5811、5810、5784、5793、5858、5878、5875、5876、5844、5874以及5684以P03的位置作為表位識(shí)別。9-(5)親和性的評(píng)價(jià)對(duì)變體與普萊曬譜星(使用在9-(2)中制備的rsCD14ST-Fc)、P03肽和S68肽的親和性(KD)進(jìn)行評(píng)價(jià)。另外，對(duì)S68抗體、來(lái)源于大鼠的單克隆抗體(F1146-17-2)以及F1146-26也同樣地進(jìn)行評(píng)價(jià)。親和性的測(cè)定使用BIACORE3000(GE醫(yī)療集團(tuán))進(jìn)行。通過常規(guī)方法將rsCD14ST-Fc、P03-BSA以及S68-BSA分別在CM5芯片(GE醫(yī)療集團(tuán))上固定化，添加各抗體稀釋系列(1.6-1000nM)，測(cè)定對(duì)各抗原的結(jié)合方式。繪制傳感圖，求出結(jié)合速度常數(shù)(Ka)以及解離速度常數(shù)(Kd)，計(jì)算平衡解離常數(shù)(KD)。將S68抗體、來(lái)源于大鼠的單克隆抗體(F1146-17-2)以及F1146-26對(duì)rsCD14ST-Fc的親和性(KD)的測(cè)定結(jié)果示于表15中。其結(jié)果可知，以KD值計(jì)，與S68抗體(KD值為1.08E-08)相比，F(xiàn)1146-26(KD值為1.48E-09)對(duì)普萊曬譜星的親和性高約10倍。另外，與來(lái)源于大鼠的單克隆抗體(F1146-17-2：KD值為1.08E-05)相比，F(xiàn)1146-26對(duì)普萊曬譜星的親和性(KD值)高約10000倍。將各變體對(duì)rsCD14ST-Fc的親和性(KD)的測(cè)定結(jié)果、與改變的CDR序列一同示于表16～表22中。其結(jié)果可知，變體的80％具有與S68抗體同等以上的親和性。由于對(duì)F1146-26的CDR序列進(jìn)行改變，獲得了相比于F1146-26，與普萊曬譜星的親和性(KD值)升高約1000倍的變體(5810)。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方式是，抗體對(duì)普萊曬譜星的親和性相比于S68抗體對(duì)普萊曬譜星的親和性更優(yōu)異，如果使用KD值進(jìn)行比較，作為優(yōu)選的抗體，例如，可舉出F1466-26、變體5795、5803、5810、5784、5793、5858、5844、5684。另外，也優(yōu)選抗體的KD值小于10-8的抗體，可舉出F1466-26、5795、5803、5810、5784、5793、5858、5844、5684。另外，優(yōu)選抗體的KD值是S68抗體的KD值的1/2以下、并且與普萊曬譜星的親和性優(yōu)異的抗體，可舉出F1466-26、5795、5803、5810、5784、5793。顯示出特別優(yōu)異的KD值的抗體是5793(7.3E-10)和5810(6.52E-12)。可知，組合了F1146-26的重鏈全長(zhǎng)以及F1146-5的輕鏈全長(zhǎng)的變體5684保持了P03特異性以及與普萊曬譜星的結(jié)合活性。暗示了由于F1146-26與F1146-5是以相同的P03的位置作為表位而識(shí)別的抗體，因而即使在具有相同特異性的抗體間置換序列，也能保持抗體的活性。如實(shí)施例2所示，認(rèn)為本抗體的特征之處是，以P03作為表位而識(shí)別的F1146-5和F1146-26的重鏈CDR3序列均為GDF，由3個(gè)氨基酸這類的較短的序列構(gòu)成。另外，在變體的5793中，通過改變重鏈CDR3的第3個(gè)氨基酸，觀察到親和性的上升，由此，暗示了重鏈CDR3的第3個(gè)氨基酸可能對(duì)抗體的活性產(chǎn)生影響。表15表16改變區(qū)域重鏈CDR1表17改變區(qū)域重鏈CDR25810是在第2位的I和第3位的N之間插入A。表18改變區(qū)域重鏈CDR3表19改變區(qū)域輕鏈CDR1表20改變區(qū)域輕鏈CDR2表21改變區(qū)域輕鏈CDR35844是在第9位的N和第10位的Y之間插入A。表22改變區(qū)域輕鏈全長(zhǎng)抗體VLP03(OD)rsCD14ST-Fc(KD)F1146-26-0.8221.48E-095684-1.1377.37E-099-(6)特異性的評(píng)價(jià)(2)肽競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)基于實(shí)施例6，基于從P01至P08的肽，對(duì)各變體與普萊曬譜星的反應(yīng)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)試驗(yàn)。試驗(yàn)使用變體固定化于固相的ELISA來(lái)進(jìn)行實(shí)施。即，將變體固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)后，進(jìn)行封閉。在每孔中添加普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品(300pg/mL)25μL。接著添加稀釋的各肽(0.01-10μg/mL)25μL。將微孔板在25℃溫度反應(yīng)1小時(shí)，接著使用含0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水對(duì)板洗滌5次。接著，在各孔中添加50μL的已稀釋的F1106-13-3F(ab′)2-HRP的溶液，在25℃溫度反應(yīng)2小時(shí)。同樣地對(duì)板洗滌5次后，添加TMB溶液，使其在室溫反應(yīng)30-40分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。作為陰性對(duì)照組，不添加肽(記作PBS)，作為陽(yáng)性對(duì)照組，使用S68肽。以PBS的吸光度為100％，對(duì)各肽的抑制率進(jìn)行計(jì)算。其結(jié)果是，如表23所示，確認(rèn)了進(jìn)行試驗(yàn)的全部變體都特異性地識(shí)別P03序列。表235793579558035810581158585874P01-------P02-------P03++++++++++++++P04-------P05-------P06-------P07-------P08-------S68++++++++++++++殘留反應(yīng)率(％)-：80％以上；+：50％以上且小于80％；++：小于50％(實(shí)施例10)變體的評(píng)價(jià)(2)在實(shí)施例8中制備的變體中，針對(duì)在實(shí)施例9中未進(jìn)行評(píng)價(jià)的變體，對(duì)變體與普萊曬譜星的結(jié)合活性以及特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。10-(1)通過ELISA對(duì)抗體濃度進(jìn)行測(cè)定為了確認(rèn)在實(shí)施例8-(4)中獲得的培養(yǎng)上清液中的IgG濃度，使用夾心ELISA對(duì)IgG濃度進(jìn)行了測(cè)定。即，將抗兔抗體(丹科(DAKO)公司，Z196)固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)，然后進(jìn)行封閉。將純化的兔單克隆抗體作為標(biāo)準(zhǔn)品，使用稀釋液(0.1％BSA/D-PBS)進(jìn)行稀釋，制備100-1.56ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。接著，使用稀釋液(0.1％BSA/D-PBS)對(duì)回收的培養(yǎng)上清液進(jìn)行稀釋。在孔中添加培養(yǎng)上清稀釋液或標(biāo)準(zhǔn)品稀釋系列，使微孔板反應(yīng)1小時(shí)，接著使用含有0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水對(duì)微孔板洗滌5次。接著，在各孔中添加已稀釋的抗兔Igs-HRP(丹科(DAKO)公司，P399)溶液，在室溫進(jìn)行1小時(shí)的反應(yīng)。同樣地對(duì)微孔板洗滌5次后，添加四甲基聯(lián)苯胺溶液(TMB，BioFix)，在室溫條件下反應(yīng)10分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀(分子儀器公司)對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。各培養(yǎng)上清液中的抗體濃度使用標(biāo)準(zhǔn)品濃度稀釋系列的校正曲線來(lái)進(jìn)行計(jì)算。10-(2)對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性以及特異性的評(píng)價(jià)為了對(duì)變體與普萊曬譜星的結(jié)合活性以及特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)，使用抗原固定于固相的微孔板來(lái)實(shí)施ELISA。即，將BSA、rsCD14ST-Fc或P03肽-BSA分別固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)，然后進(jìn)行封閉。根據(jù)培養(yǎng)上清液的IgG濃度的結(jié)果，使用D-PBS稀釋培養(yǎng)上清液，制成500ng/mL的濃度(抗體濃度低時(shí)，使用原倍培養(yǎng)上清液)。在每個(gè)孔中添加50μL的各上清稀釋液，使微孔板進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)，接著，使用含有0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水對(duì)板洗滌5次。接著，將已稀釋的抗兔Igs-HRP(丹科(DAKO)公司，P448)溶液添加至各孔中，在室溫條件下反應(yīng)1小時(shí)。同樣地對(duì)板進(jìn)行洗滌，然后，添加TMB溶液，在室溫條件下反應(yīng)3-5分鐘。在反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀(分子儀器公司)對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。在對(duì)與普萊曬譜星的結(jié)合活性進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，為了進(jìn)行比較，也對(duì)S68抗體進(jìn)行評(píng)價(jià)。與普萊曬譜星的結(jié)合活性，是在將S68抗體與sCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度設(shè)為1時(shí)，使用各抗體與rsCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度的比來(lái)表示。將結(jié)果與各變體中改變的序列一同示于表24～表29中。其結(jié)果確認(rèn)了基本上全部的抗體都與P03結(jié)合，并暗示了76％的抗體以P03作為表位而識(shí)別。另外，與S68抗體相比，F(xiàn)1466-26以及大多數(shù)變體具有更優(yōu)異的與普萊曬譜星的結(jié)合活性，以吸光度比計(jì)高約4～5倍。如果與F1466-26對(duì)普萊曬譜星的KD值以及吸光度比進(jìn)行對(duì)比，認(rèn)為這些抗體對(duì)普萊曬譜星的KD值為與實(shí)施例9中測(cè)定的抗體對(duì)普萊曬譜星的優(yōu)選的KD值相同的程度。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方式是：抗體對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性比S68抗體對(duì)普萊曬譜星的結(jié)合活性更優(yōu)異的抗體。例如，在基于本實(shí)施例使用吸光度的情況下，認(rèn)為是顯示出高于S68抗體的吸光度的抗體，優(yōu)選顯示出S68抗體的2倍以上的吸光度的抗體。在所得到的抗體中，顯示出S68抗體的5倍以上的吸光度、并且與普萊曬譜星的結(jié)合活性特別優(yōu)異的抗體是5934、5935、5939、5944、5808、5809、5824、5979，5980、5983、5984、5987、5988、5860、5864、5863。其中，5979、5983、5988、5864顯示出S68抗體的5.5倍以上的吸光度，并且對(duì)普萊曬譜星具有特別優(yōu)異的結(jié)合活性。表24改變區(qū)域重鏈CDR1表25改變區(qū)域重鏈CDR2表26改變區(qū)域重鏈CDR3表27改變區(qū)域輕鏈CDR1表28改變區(qū)域輕鏈CDR2表29改變區(qū)域輕鏈CDR3(實(shí)施例11)以合成肽為抗原并使用噬菌體展示法制備單克隆抗體能使用在實(shí)施例1-(1)中以S68肽-KLH作為給藥抗原對(duì)兔進(jìn)行免疫而回收的來(lái)自脾臟的淋巴細(xì)胞，通過噬菌體展示法來(lái)制備單克隆抗體。11-(1)免疫F(ab)噬菌體抗體文庫(kù)的構(gòu)建能按照CARLOSF.BARBASIII等著PhageDisplayaLaboratoryManual(ColdSpringHarborLaboratoryPress)所述的方法來(lái)進(jìn)行。使用總RNA提取試劑TRIZOLReagent(美國(guó)生命技術(shù)公司)，從實(shí)施例1-(1)回收的淋巴細(xì)胞中提取總RNA，通過“用于RT-PCR的III第一鏈合成系統(tǒng)”(SuperscriptIIIFirst-StrandSynthesisSystemForRT-PCR)(美國(guó)生命技術(shù)公司)來(lái)合成單鏈cDNA。使用BARBARSIII等報(bào)告的兔抗體基因特異性引物，由該cDNA來(lái)制備包含重鏈可變區(qū)的片段和包含輕鏈可變區(qū)的片段。以所得到的兔重鏈可變區(qū)以及人重鏈CH1的擴(kuò)增片段為模板，通過PCR對(duì)兔/人嵌合重鏈片段進(jìn)行擴(kuò)增，以兔輕鏈可變區(qū)(Kappa型或Lambda型)以及人輕鏈恒定區(qū)的擴(kuò)增片段為模板，對(duì)兔/人嵌合輕鏈片段進(jìn)行擴(kuò)增。所得到的所述兔/人嵌合重鏈以及兔/人嵌合輕鏈的片段為模板，最終制備兔/人嵌合Fab片段。接著，使用限制性內(nèi)切酶SacI和SpeI對(duì)作為抗體表達(dá)用噬菌粒的pCDisplay-4(創(chuàng)新-生物基因公司(CREATIVEBIOGENE))進(jìn)行切斷，制備噬菌粒片段。同樣地使用Sacl以及Spel對(duì)兔/人嵌合Fab片段進(jìn)行切斷，在制備的噬菌粒片段中插入cDNA片段，制備噬菌體文庫(kù)表達(dá)用質(zhì)粒。11-(2)噬菌體展示技術(shù)用噬菌體溶液的制備通過常規(guī)方法，使11-(1)制備的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1株(安朗科技公司(AlientTechnologies))，將含有大腸桿菌的溶液接種于添加有氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基的微孔板中。在37℃溫度進(jìn)行培養(yǎng)，然后回收形成的菌落，制備大腸桿菌文庫(kù)。培養(yǎng)該文庫(kù)中的一部分，在該大腸桿菌懸浮液中添加氨芐青霉素(Ampicillin)以及葡萄糖(Glucose)，在37℃溫度震動(dòng)培養(yǎng)1小時(shí)。然后，使輔助噬菌體M13KO7(美國(guó)生命技術(shù)公司)對(duì)其進(jìn)行感染，進(jìn)而繼續(xù)震動(dòng)培養(yǎng)1小時(shí)。通過離心來(lái)收集菌體，并丟棄培養(yǎng)液，然后懸浮于10mL的2×YT培養(yǎng)液中，在37℃溫度進(jìn)行震動(dòng)培養(yǎng)。次日，對(duì)培養(yǎng)上清液進(jìn)行離心，然后，將8mL的上清液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)離心管中，添加2mL的PEG/NaCl溶液并混合，在冰上靜置1小時(shí)后，通過離心分離來(lái)回收沉淀的噬菌體，將其作為噬菌體展示用的噬菌體溶液。11-(3)基于淘選法對(duì)目標(biāo)抗體進(jìn)行選擇通過淘選(panning)法，從11-(2)制備的噬菌體溶液中選擇抗體。淘選通過兩種方法來(lái)實(shí)施。作為第一種方法，基于BARBAS等記載的方法來(lái)實(shí)施。即，在丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)中，將S68-BSA固相化于微孔板后，對(duì)板進(jìn)行封閉。在每孔中添加50μL的含4％脫脂乳和0.2％TritonX-100的D-PBS后，添加11-(2)獲得的噬菌體溶液50μL。使微孔板進(jìn)行1小時(shí)的反應(yīng)，接著，使用含0.1％TritonX-100的D-PBS洗滌微孔板。接著，使用100mM的甘氨酸鹽酸鹽(Glycine-HCl)(pH2.2)進(jìn)行10分鐘溶出，并將回收的溶液使用1M三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)(pH7.4)進(jìn)行中和。將該溶出液與大腸桿菌TG1株進(jìn)行混合，在37℃溫度進(jìn)行反應(yīng)，將與S68肽抗原結(jié)合的噬菌體再次感染TG1株。在培養(yǎng)液中添加氨芐青霉素、M13K07輔助噬菌體，在37℃溫度進(jìn)行反應(yīng)后，回收大腸桿菌，添加培養(yǎng)基以及卡那霉素并培養(yǎng)一夜。通過離心分離，由培養(yǎng)液回收上清液，通過PEG處理來(lái)制備噬菌體液。反復(fù)進(jìn)行3次相同的操作，對(duì)與S68肽結(jié)合的特異性的噬菌體進(jìn)行濃縮。作為第二種方法，使用實(shí)施例12-(2)所述的方法同樣地進(jìn)行3次淘選，濃縮對(duì)普萊曬譜星特異性的噬菌體。11-(4)抗體的結(jié)合活性的測(cè)定以及CDR序列的分析將11-(3)中的使噬菌體感染的TG1培養(yǎng)液接種于含有氨芐青霉素的LB微孔板中，使菌落形成。由各菌落再次制備噬菌體溶液，使用EIA對(duì)反應(yīng)性進(jìn)行確認(rèn)。即，將BSA、S68-BSA、P03-BSA以及sCD14ST-Fc分別固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)，然后進(jìn)行封閉。添加含有4％脫脂乳、0.2％TritonX-100的D-PBS，然后添加回收的噬菌體液。使微孔板進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)，接著使用含0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水對(duì)板洗滌5次。接著，將已稀釋的HRP/Anti-M13單克隆偶聯(lián)物(GE醫(yī)療集團(tuán))溶液添加至各孔中，在室溫進(jìn)行1小時(shí)的反應(yīng)。同樣地對(duì)板洗滌5次，然后添加TMB溶液，在室溫反應(yīng)10-20分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀(Thermomax，MolecularDevices)對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。其結(jié)果確認(rèn)了多個(gè)噬菌體結(jié)合。從這些菌落中分離出噬菌粒，并對(duì)序列進(jìn)行確認(rèn)。通過噬菌體展示法，能獲得與P03以及普萊曬譜星特異性結(jié)合的抗普萊曬譜星抗體，其具有與由雜交瘤法獲得的CDR序列不同的序列。(實(shí)施例12)使用噬菌體展示法制備重鏈CDR3序列的變體由于預(yù)測(cè)了重鏈CDR3序列會(huì)對(duì)抗體的活性產(chǎn)生影響，因而使用噬菌體展示法，制備并評(píng)價(jià)重鏈CDR3序列的變體。12-(1)使用噬菌體展示法制備VH鏈CDR3序列的變體為了制備VHCDR3隨機(jī)突變文庫(kù)，以含有F1466-26的重鏈和輕鏈的質(zhì)粒pTK-5956為模板，使用一對(duì)引物(p-nnk3-2s；5’磷酸化-GGTNNKNNKNNKTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCT-3’：序列號(hào)91，p-nnk3-2a；5’磷酸化-GCCACAAAAATAAGTGGCCGTGTCCTCGGTTGTCGGACTG-3’序列號(hào)92(N表示G、A、T、C中的任一個(gè)，K表示G或T))以及耐熱性DNA聚合酶(寶生物工程株式會(huì)社)進(jìn)行PCR反應(yīng)，使所得到的擴(kuò)增片段通過DNA連接酶進(jìn)行自我結(jié)合。將其轉(zhuǎn)化為大腸桿菌XL1-Blue(安捷倫科技)，在LB/氨芐青霉素(Amplicillin)/四環(huán)素(Tetracycline)瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)，次日，使用2×YT培養(yǎng)液回收生成的菌落。在該大腸桿菌懸浮液中添加氨芐青霉素(Ampicillin)、四環(huán)素(Tetracycline)以及葡萄糖(Glucose)，在37℃溫度進(jìn)行1小時(shí)震動(dòng)培養(yǎng)。然后，使輔助噬菌體M13KO7(美國(guó)生命技術(shù)公司)感染上述大腸桿菌，進(jìn)而繼續(xù)1小時(shí)的震動(dòng)培養(yǎng)。通過離心分離收集菌體，丟棄培養(yǎng)液，然后懸浮于10mL的2×YT培養(yǎng)液中，在32℃溫度進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。次日，對(duì)培養(yǎng)上清液進(jìn)行離心分離，然后，將8mL的上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，并加入2mL的PEG/NaCl溶液進(jìn)行混合，在冰上靜置1小時(shí)后，通過離心分離來(lái)回收沉淀的噬菌體，將其作為VHCDR3隨機(jī)突變文庫(kù)的噬菌體熔液。12-(2)基于淘選法選擇目標(biāo)抗體根據(jù)在12-(1)中制備的文庫(kù)來(lái)實(shí)施淘選，選擇抗體。即，使12-(1)獲得的噬菌體液(2mL)與6μg的sCD14ST-Fc在37℃溫度進(jìn)行反應(yīng)，2小時(shí)后，添加蛋白質(zhì)A樹脂(Prosep-vA、密里博公司)200μL，并進(jìn)行20分鐘的反應(yīng)。使用含0.05％吐溫(Tween)20的PBS洗滌5次，然后在樹脂中添加溶出液(Tris-HCl，甘氨酸(pH2.2))并靜置8分鐘后，回收溶出的噬菌體液，中和溶液。將該回收液與大腸桿菌XL-1Blue培養(yǎng)液進(jìn)行混合，在37℃溫度進(jìn)行反應(yīng)。1小時(shí)后，添加L-谷氨酰胺(L-Glutamine)、氨芐青霉素以及輔助噬菌體M13K07(英杰生命技術(shù)公司(Invitrogen))，在37℃溫度進(jìn)行反應(yīng)。進(jìn)而，1小時(shí)后，將培養(yǎng)基更換為2×YT培養(yǎng)基，培養(yǎng)一夜，回收與rsCD14ST-Fc特異性結(jié)合的噬菌體。反復(fù)進(jìn)行3次上述操作，濃縮目標(biāo)抗體。12-(3)含有普萊曬譜星特異性序列的噬菌體的制備及CDR序列的確定使在12-(2)中最終獲得的噬菌體液再次感染XL-1Blue，將其培養(yǎng)上清液接種于2×YT的平板，從而制備菌落。將該菌落再次與XL-1Blue進(jìn)行培養(yǎng)，添加輔助噬菌體，制備含有單一噬菌體的噬菌體溶液。接著，使用所得到的噬菌體液，通過ELISA對(duì)反應(yīng)性進(jìn)行確認(rèn)。即，在丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)中，將sCD14ST-Fc固相化于微孔板后，進(jìn)行封閉。使用含有4％脫脂乳、0.2％聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)的D-PBS將噬菌體液稀釋2倍，使微孔板中進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)。接著，使用含有0.05％吐溫(Tween)20的生理鹽水將微孔板洗滌5次，并在各孔中添加50μL的已稀釋的HRP/Anti-M13單克隆偶聯(lián)物(GE醫(yī)療集團(tuán))，在室溫進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)。以同樣的方式洗滌微孔板5次后，添加TMB溶液，在室溫進(jìn)行反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束后，使用1M硫酸溶液停止反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀(ThermoMax，分子儀器公司(MolecularDevices))對(duì)450/650nm處的吸光度進(jìn)行測(cè)定。使結(jié)合活性已確認(rèn)的噬菌體液感染大腸桿菌，通過常規(guī)方法來(lái)回收質(zhì)粒，確認(rèn)基因序列。12-(4)IgG抗體的制備從所得到的候選噬菌體回收噬菌粒，制備編碼重鏈可變區(qū)的片段。按照實(shí)施例8所述的方法，制備重鏈變體制備用質(zhì)粒，與含有F1466-26的輕鏈全長(zhǎng)的輕鏈瞬時(shí)表達(dá)用質(zhì)粒(pTK-5608)一同轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞。將COS-1細(xì)胞在37℃溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，72小時(shí)后，回收培養(yǎng)上清液。12-(5)重鏈CDR3序列的變體的評(píng)價(jià)針對(duì)所得到的變體，與實(shí)施例10-(2)進(jìn)行相同的試驗(yàn)，評(píng)價(jià)與普萊曬譜星(rsCD14ST-Fc)的結(jié)合活性以及P03特異性。將其結(jié)果與改變的重鏈CDR3的CDR序列一同示于表30中。其結(jié)果是，對(duì)于重鏈CDR3的3個(gè)氨基酸均被置換的變體6027而言，與其他變體相比，對(duì)普萊曬譜星的反應(yīng)性稍低，但是，與S68抗體相比則具有大致相同的反應(yīng)性。對(duì)于變體6026、6028以及6029而言，雖然2個(gè)氨基酸被置換，但是，其對(duì)普萊曬譜星的反應(yīng)性優(yōu)異。由此，暗示了當(dāng)重鏈CDR3由3個(gè)氨基酸構(gòu)成時(shí)，即使2氨基酸被置換，也能保持抗體的活性。變體6028與普萊曬譜星的結(jié)合活性特別優(yōu)異。表30改變區(qū)域重鏈CDR3(實(shí)施例13)甘油三酯(TG)干擾試驗(yàn)在實(shí)施例5和實(shí)施例6中，暗示了：使用以P04-05作為表位來(lái)識(shí)別的抗體進(jìn)行的普萊曬譜星的測(cè)定容易受到檢測(cè)體中TG的干擾，但是，使用以P03作為表位來(lái)識(shí)別的抗體進(jìn)行的普萊曬譜星的測(cè)定則很難受到TG的干擾。13-(1)使用正常人血清進(jìn)行TG干擾試驗(yàn)(1)為了進(jìn)一步進(jìn)行確認(rèn)，確認(rèn)了正常人檢測(cè)體中TG產(chǎn)生的影響。針對(duì)F1466-26(特異性：P03)、F1466-5(P03)以及F1466-19(P04-05)，使用正常人血清來(lái)實(shí)施TG干擾試驗(yàn)。在正常人檢測(cè)體(8檢測(cè)體)(EDTA血漿，TENECEEBLOODSERVICIES)中添加TG，使其最終濃度為10mg/mL，比較添加前后的普萊曬譜星測(cè)定值。此時(shí)的TG濃度不考慮檢測(cè)體中本來(lái)所含的TG。使用各抗體分別固定化于固相的微孔板，使用實(shí)施例9-(3)所述的夾心ELISA系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。將結(jié)果示于圖1中。其結(jié)果是，對(duì)于以P03作為表位而識(shí)別的抗體即F1466-26和F1466-5而言，在添加TG前后，基本上沒有觀察到測(cè)定值的變動(dòng)，相對(duì)于此，對(duì)于以P04-05作為表位而識(shí)別的抗體即F1466-19而言，測(cè)定值較大程度地受到了添加TG的影響。使用普萊曬譜星測(cè)定值較大程度地受到檢測(cè)體中的TG的影響的抗體進(jìn)行測(cè)定，如F1466-19所示，可以預(yù)測(cè)：本來(lái)顯示出較低值的健康人的測(cè)定值會(huì)顯示出較高的值。在此情況下，正常值與異常值的差異將會(huì)難以產(chǎn)生。因而認(rèn)為這種抗體不適于對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星進(jìn)行測(cè)定。另一方面，確認(rèn)了對(duì)于以P03作為表位識(shí)別的抗體而言，其很難受到檢測(cè)體中的TG的影響，是適用于對(duì)檢測(cè)體中的普萊曬譜星進(jìn)行測(cè)定的抗體。另外，使用該正常人血清進(jìn)行的試驗(yàn)證實(shí)了，在使用以P03作為表位而識(shí)別的抗體的分析系統(tǒng)中，與高分子量sCD14的交叉反應(yīng)不會(huì)產(chǎn)生問題。在正常人血清中，普萊曬譜星為幾百pg/mL，相對(duì)于此，高分子量sCD14為5.6～11.2μg/mL左右(WO2005/108429，實(shí)施例12)，如果該抗體與高分子量sCD14進(jìn)行反應(yīng)，則不能測(cè)定微量的普萊曬譜星。根據(jù)本實(shí)施例，確認(rèn)了在使用以P03作為表位而識(shí)別的抗體的分析系統(tǒng)中，不會(huì)產(chǎn)生抗體與高分子量sCD14的交叉反應(yīng)，并且能進(jìn)行幾百pg/mL左右的微量的普萊曬譜星的測(cè)定(圖1)。13-(2)變體的TG干擾試驗(yàn)(2)對(duì)于新得到的變體，與實(shí)施例5同樣地實(shí)施TG干擾試驗(yàn)，確認(rèn)了檢測(cè)體中的TG的影響。對(duì)變體進(jìn)行純化而使用。即，將變體固定化于丹麥能肯公司制的免疫檢測(cè)微孔板(MAXISORP，C96，430341)后，進(jìn)行封閉。使用稀釋液對(duì)普萊曬譜星標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，制備普萊曬譜星的濃度系列(15.6-500pg/mL)。在3種人檢測(cè)體中添加甘油三酯(脂肪乳，日本費(fèi)森尤斯卡比公司(フレゼニウスカービジャパン))，制成最終濃度6.7mg/mL、13.3mg/mL、20mg/mL。人檢測(cè)體使用敗血癥患者的血清1例、以及在正常人血清中添加了一定量的普萊曬譜星的檢測(cè)體2例。另外，該TG濃度不考慮檢測(cè)體中本來(lái)所含的TG。使用稀釋液將檢測(cè)體稀釋20倍，將未添加TG的樣品或添加了各濃度的TG的檢測(cè)體、或者標(biāo)準(zhǔn)品稀釋系列添加至各孔中。與實(shí)施例9-(3)同樣地使用夾心ELISA系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。在表31中示出：檢測(cè)體中TG濃度為20mg/mL時(shí)，普萊曬譜星測(cè)定值的解離度為±20％以下的檢測(cè)體的比率(％)。其結(jié)果確認(rèn)了，以P03作為表位而識(shí)別的抗體很難受到甘油三酯的影響。表31(實(shí)施例14)具有優(yōu)選性能的變體的列表將在本發(fā)明的實(shí)施例8和12中獲得的、具有優(yōu)選的性能的抗體的CDR序列示于圖2～圖2-2(序列號(hào)93～156)中。在實(shí)施例8和12中制備的抗體數(shù)目的總和為109個(gè)，優(yōu)選的抗體數(shù)目為65個(gè)。將抗體對(duì)普萊曬譜星的親和性(KD值)小于10-8M的抗體評(píng)價(jià)為○、小于10-9M的抗體評(píng)價(jià)為◎。將KD值小于10-7M，但是，具有與S68抗體對(duì)普萊曬譜星的親和性大致相同的親和性的抗體評(píng)價(jià)為△。根據(jù)基于KD值進(jìn)行的評(píng)價(jià)，與普萊曬譜星的結(jié)合活性特別優(yōu)異的抗體是5793和5810。對(duì)于抗體與普萊曬譜星的結(jié)合活性的評(píng)價(jià)而言，使用在將S68抗體與sCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度設(shè)為1時(shí)、各抗體與rsCD14ST-Fc進(jìn)行反應(yīng)時(shí)的吸光度的比來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于抗體而言，吸光度比為4以上的抗體評(píng)價(jià)為○，吸光度比為5.5以上的抗體評(píng)價(jià)為◎。根據(jù)基于吸光度比進(jìn)行的評(píng)價(jià)，與普萊曬譜星的結(jié)合活性特別優(yōu)異的抗體是5864、5979、5983、5988以及6028。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3
相關(guān)技術(shù)
網(wǎng)友詢問留言
已有0條留言
- 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊！
1