本發(fā)明涉及新型合成木聚糖酶和所述木聚糖酶在包括喂養(yǎng)料、麥芽制造及釀造、處理包含阿拉伯聚糖的原料如谷物基材料，例如生產生物燃料或其它發(fā)酵產品，包括生化物質(例如生物基異戊二烯)、和/或小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)應用中的用途，和使用該木聚糖酶的方法、以及包含所述木聚糖酶的組合物(諸如飼料添加劑組合物)。
背景技術：
：多年以來，內切-β-1,4-木聚糖酶(EC3.2.1.8)(本文稱為木聚糖酶)用于修飾源于植物細胞壁材料的復合碳水化合物。本領域公知的是，不同木聚糖酶(源于不同微生物或植物)的功能性極為不同。木聚糖酶是一類將直鏈的多糖β-1,4-木聚糖降解成木寡糖或木糖，由此使半纖維素(植物細胞壁的主要組分之一)分解的酶的命名。基于結構和遺傳學信息，木聚糖酶歸類為不同的糖苷水解酶(GH)家族(Henrissat,(1991)Biochem.J.280,309-316)。最初，所有已知且已被表征的木聚糖酶屬于家族GH10或GH11。其后，進一步的工作鑒定出屬于家族GH5、GH7、GH8和GH43的多種其它類型木聚糖酶(Collins等人(2005)FEMSMicrobiolRev.,29(1),3-23)。迄今為止，GH11家族不同于所有其它GH家族，是唯一僅由木聚糖特異性木聚糖酶組成的家族。GH11木聚糖酶的結構可描述為β-果凍卷結構或全β-鏈夾層折疊結構(Himmel等人1997Appl.Biochem.Biotechnol.63-65,315-325)。GH11酶具有約20kDa的催化域。GH10木聚糖酶具有分子量在32-39kDa范圍內的催化域。GH10木聚糖酶的催化域結構由八倍體β/α圓筒狀組成(Harris等人1996–Acta.Crystallog.Sec.D52,393-401)。三維結構可用于大量的家族GH10酶，首先實現的是淺青紫鏈霉菌(Streptomyceslividans)木聚糖酶A(Derewenda等人，JBiolChem1994年8月19日；269(33)20811-4)、糞肥纖維單胞菌(C.fimi)內切聚糖酶Cex(White等人Biochemistry1994年10月25日；33(42)12546-52)和纖維弧菌(Cellvibriojaponicus)Xyn10A(先前的熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)亞種木聚糖酶A)(Harris等人，Structure1994年11月15日；2(11)1107-16.)。作為異種集團GHA的成員，其具有典型(α/β)8TIM桶折疊，所述(α/β)8TIM桶折疊具有位于β-鏈4(酸/堿基)和7(親核物質)的C末端的兩個關鍵活性位點谷氨酸(Henrissat等人，ProcNatlAcadSciUSA1995年7月18日；92(15)7090-4)。對已被充分表征并且較純的底物進行表征木聚糖酶官能度的全面研究(Kormelink等人，1992Characterisationandmodeofactionofxylanasesandsomeaccessoryenzymes.Ph.D.Thesis,AgriculturalUniversityWageningen,Holland(第175頁，EnglishandDutchsummaries))。這些研究示出不同的木聚糖酶對于取代阿拉伯聚糖(AX)的木糖主鏈有不同的特定要求。一些木聚糖酶需要三個未取代的木糖殘基來水解木糖主鏈。其它木聚糖酶僅需要一個或兩個未取代的木糖殘基。存在這些特異性差異的原因被認為歸因于催化域內的三維結構，其繼而取決于木聚糖酶的初級結構即氨基酸序列。然而，并未記載當木聚糖酶在復雜環(huán)境例如植物材料(諸如在喂養(yǎng)料中)中起作用時，這些不同氨基酸序列翻譯為官能度不同的木聚糖酶。植物材料中(例如小麥中)的木聚糖酶底物傳統(tǒng)上被分為兩種級分：水不可提取的AX(WU-AX)和水可提取的AX(WE-AX)。關于為什么存在兩種不同AX級分，已存在多種解釋。較舊的文獻(D’AppoloniaandMacArthur-(1976,CerealChem.53.711-718)以及Montgomery和Smith(1955,J.Am.Chem.Soc.77.3325-332)描述了WE-AX與WU-AX之間相當高的取代度差異。最高的取代度存在于WE-AX中。這用于解釋為什么某些AX是水可提取的。相較于較低的取代度，較高的取代度使得聚合物可溶，這致使聚合物之間氫鍵合并隨后沉淀。不同木聚糖酶官能度之間的差異被認為是由于木聚糖酶的特異性差異并由此其優(yōu)選WU-AX或WE-AX底物。已報道了得自幾乎100種不同生物體(包括植物、真菌和細菌)的木聚糖酶。木聚糖酶分為若干多于40個家族的糖基水解酶。包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、纖維素酶及其它糖酶的糖基水解酶基于此類特性如氨基酸序列、其三維結構及其催化部位的幾何構型進行分類(Gilkes，等人，1991,Microbiol.Reviews55:303-315)。附圖說明圖1示出本文命名為SynXyn92的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.1)。圖2示出本文命名為SynXyn92的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.2)。圖3示出本文命名為SynXyn85的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.3)。圖4示出本文命名為SynXyn85的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.4)。圖5示出本文命名為SynXyn89的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.5)。圖6示出本文命名為SynXyn89的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.6)。圖7示出本文命名為SynXyn72的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.7)。圖8示出本文命名為SynXyn72的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.8)。圖9示出本文命名為SynXyn80的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.9)。圖10示出本文命名為SynXyn80的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.9)。圖11示出本文命名為SynXyn93的合成木聚糖酶的成熟多肽(SEQIDNo.11)。圖12示出本文命名為SynXyn93的合成木聚糖酶的多核苷酸序列(SEQIDNo.12)。圖13示出了合成木聚糖酶的表達載體的示意圖譜(pTTTpyr2-synXyn_VAR)。圖14示出合成木聚糖酶的成熟多肽序列的比對-使用CLUSTALOmega多重序列比對，采用默認參數設定(矩陣：Gonnet；空位開放罰分：10；空位延伸：0.2)。圖15示出關于合成木聚糖酶SynXyn92在90℃加工溫度下的加工穩(wěn)定性的制粒測試結果。圖16示出相較于陽性對照酶，根據本發(fā)明的合成酶SynXyn93的谷物基材料的粘度降低。這些數據示出SynXyn93酶在預處理步驟(60℃)期間不具有活性，但在液化步驟(85℃)中具有活性。在85℃的液化步驟期間粘度繼續(xù)降低，表明SynXyn93在該升高的溫度下具有顯著的活性。SynXyn93的最終活性比空白低52-55％。圖17示出相較于陽性對照酶，根據本發(fā)明的合成酶SynXyn93的谷物基材料的粘度降低。這些數據證實，SynXyn93相較于陽性對照酶熱穩(wěn)定性增大。SynXyn93示出相較于空白粘度降低54-60％，而陽性對照酶僅為40-41％。SynXyn93的最終粘度低于陽性對照酶。技術實現要素：本發(fā)明一項基本發(fā)現在于，可這樣設計合成木聚糖酶，其除了具有分解(增溶)不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)的能力之外，還具有使其尤其用于例如以下應用的其它特性：喂養(yǎng)料、麥芽制造及釀造、處理含阿拉伯聚糖原料如谷物基材料，例如生產生物燃料或其它發(fā)酵產物，包括生化物質(例如生物基異戊二烯)、和/或小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)。例如，本文提出的合成木聚糖酶令人驚奇地為熱穩(wěn)定的，具有令人驚奇的高回收率，例如在熱處理之后(例如制粒過程期間)的殘留活性，并且耐受胃蛋白酶。在制粒過程期間，將酶(例如包含酶的飼料)在90℃下調節(jié)30秒。在制粒過程期間，酶可配制在基材例如小麥上，并且可配制到預混物例如玉米/大豆飼料混合物(例如61.1％玉米、31.52％HiproSoya48、4.00％大豆油、0.40％碳酸氫鈉、0.25％維生素/礦物質Leghennen、0.20％外消旋甲硫氨酸、1.46％磷酸二鈣、1.16％石灰石)中。木聚糖酶可以按確保實現最終目標劑量例如20000XU/kg飼料的含量包含在內?？赏ㄟ^使配制在基材例如小麥上、配制到飼料混合物(例如10kg玉米/大豆飼料混合物)中并混合的一種或多種酶混合特定時間例如10min來制備預混物?？蓪㈩A混物添加至飼料例如110kg飼料中，并在調節(jié)之前混合特定時間例如10min。在制粒之前，通常在90℃下將包含酶的飼料調節(jié)30秒。包含酶的飼料可經干蒸汽處理以在30秒之后達到90℃的目標溫度。如本文所用，術語“調節(jié)的”或“調節(jié)”意指使飼料/酶混合物混合并經干蒸汽處理以在30秒后達到90℃的目標溫度。在調節(jié)之后，飼料/酶混合物可成型為丸粒。丸粒的形成可通過本領域的技術人員公知的任何常規(guī)方法進行?？赏ㄟ^本文所述制粒方法形成丸粒。本發(fā)明人首次能夠完全表達具有木聚糖酶活性和增強特性的合成多肽。本文提出的合成木聚糖酶為GH10木聚糖酶。具體地，本發(fā)明合成木聚糖酶有效地分解(增溶)得自包括玉米、小麥、DDGS等，特別是小麥(包含小麥基的)產品和玉米(包括玉米基產品)兩者的各種各樣基材的AXinsol。這與先前已知的酶形成對比，先前已知的酶通常在增溶玉米或玉米基基材的AXinsol中處于劣勢，或者在小麥-和玉米基基材兩者中效率不高。此外，本發(fā)明的合成木聚糖酶不僅可尤其有利于分解(增溶)AXinsol，而且還有效地分解(或降解)可溶性聚合物。由于能夠有效地(快速)分解(降解)可溶性聚合物(由溶解AXinsol獲得)，得到了(迅速)降低的粘度或者可溶性聚合物(由溶解AXinsol獲得)不能有助于增大粘度。這后一種作用在一些受權利要求書保護的應用中是必要的。不受理論的束縛，本發(fā)明的合成酶主要釋放對粘度無貢獻的聚合物，因為釋放的聚合物較短。通常，常規(guī)的木聚糖酶可分解AXinsol，但是通常導致混合物的粘度增大。此種增大的粘度在許多應用中很不利。不受理論的束縛，雖然一些常規(guī)木聚糖酶分解AXinsol，但是其導致高分子量的可溶降解產物增加，從而導致混合物的粘度增大。此外或另外，并且還不受理論的束縛，常規(guī)木聚糖酶可分解AXinsol，但是由于其無法足夠快地降解高分子量可溶性產物，所以混合物的粘度并不理想。相比之下，在本發(fā)明的方法和用途下，相較于常規(guī)酶，合成木聚糖酶分解AXinsol而不會增大粘度，和/或同時快速降低粘度。不受理論的束縛，據信本發(fā)明的酶未形成高分子量產物。發(fā)現本發(fā)明的以及如本文所述的酶不僅分解(增溶)得自包括玉米、小麥、DDGS等，特別是小麥(包含小麥基的)產品和玉米(包括玉米基產品)兩者的寬泛基材范圍的不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)，而且還有效地確保粘度沒有升高和/或粘度降低。不受理論的束縛，據信本發(fā)明的酶未形成高分子量產物。因此，本發(fā)明涉及能夠增溶戊聚糖特別是含木聚糖材料，例如阿拉伯聚糖特別是不溶性阿拉伯聚糖的酶。具體地，酶特別有利于增溶廣譜的基材(包括玉米基基材)中的戊聚糖特別是含木聚糖材料，例如阿拉伯聚糖特別是不溶性阿拉伯聚糖。多種用于喂養(yǎng)料來增溶戊聚糖的商業(yè)化木聚糖酶是GH11酶。本領域的技術人員認為，與GH11木聚糖酶相比，GH10木聚糖酶無法如此強效增溶戊聚糖，特別是AXinsol。已令人驚奇地發(fā)現，本文所公開的合成木聚糖酶(GH10木聚糖酶)尤其有利于降解廣譜的基材(包括玉米基基材)中的AXinsol。令人驚奇地，本發(fā)明人發(fā)現，本發(fā)明的合成GH10木聚糖酶在增溶戊聚糖方面的能力優(yōu)于商用GH11木聚糖酶。此外，合成GH10木聚糖酶是熱穩(wěn)定的。本發(fā)明的酶有效地降解得自玉米和玉米基基材的AXinsol的事實是非常有利的，原因是例如相較于其它谷類食物如小麥和黑麥，玉米保留更多不可溶形式的AX。因此，僅僅能夠降解AXinsol的木聚糖酶可示出例如對玉米基食料例如玉米-大豆食料喂養(yǎng)的動物的顯著有益效果。GH10木聚糖酶如此有利于降解谷類食物特別是玉米或玉米基基材中的AXinsol完全出乎意料。本發(fā)明的酶可能能夠有效地(并快速地)降解由AXinsol降解所產生的或存在于谷物基材料中的聚合物和低聚物。這導致了本文提出的合成木聚糖酶出人意料的優(yōu)勢：其尤其有利于在多個應用中保持較低粘度或降低粘度，例如喂養(yǎng)料；麥芽制造及釀造；谷物基產生的葡萄糖，例如用于對生物燃料和/或生化物質(例如生物基異戊二烯)進一步加工；或小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)以例如生產淀粉。值得注意的是，已發(fā)現，本文所測合成酶相較于GH11酶的降解產物平均更短。這意指降解產物不會促成或導致粘度增大?；谶@些發(fā)現，根據本發(fā)明的合成木聚糖酶可用于降解含木聚糖材料，特別是阿拉伯聚糖，特別是AXinsol。此外或另選地，根據本發(fā)明的木聚糖酶可用于降解由AXinsol降解所產生的或(天然)存在于谷物基材料中的可溶性聚合物(例如低聚物)。令人驚奇地，已發(fā)現根據本發(fā)明的變體木聚糖酶可用于降解含木聚糖材料，特別是阿拉伯聚糖，特別是AXinsol，并且用于降解由AXinsol降解所產生的可溶性聚合物(例如低聚物)兩者。此類酶可用于許多行業(yè)，包括喂養(yǎng)料、麥芽制造及釀造、處理含阿拉伯聚糖原料如谷物基材料、小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)、生產淀粉衍生的糖漿、生物燃料生產等。發(fā)明陳述在第一方面，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少87％同一性(適宜地至少89％、適宜地至少90％、適宜地至少92％、適宜地至少94％、適宜地至少98％同一性、適宜地至少100％同一性)的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少87％同一性(適宜地至少89％、適宜地至少90％、適宜地至少92％、適宜地至少94％、適宜地至少98％同一性、適宜地至少100％同一性)的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。在另一個方面，本發(fā)明提供一種分離的包含編碼本發(fā)明多肽的核苷酸序列的多核苷酸(cDNA)。在另一個方面，提供了一種分離的包含與SEQIDNO:2具有至少87％同一性(適宜地至少89％、適宜地至少90％、適宜地至少92％、適宜地至少94％、適宜地至少98％同一性、適宜地至少100％同一性)的多核苷酸的多核苷酸(例如cDNA)；或者一種分離的因遺傳密碼的簡并性而不同于SEQIDNO:2的多核苷酸。本發(fā)明還提供了一種分離的選自下列的多核苷酸(例如cDNA)：SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo.10和SEQIDNo.12，或者一種分離的因遺傳密碼的簡并性而不同于SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo.10和SEQIDNo.12的多核苷酸。在一個方面，本發(fā)明提供一種包含本發(fā)明多核苷酸的核酸構建體，該多核苷酸有效連接至一個或多個指導表達宿主中多肽產生的控制序列。在另一個方面，本發(fā)明提供一種重組表達載體，其包含本發(fā)明的核酸構建體。還提供了一種重組宿主細胞，其包含根據本發(fā)明的多核苷酸、本發(fā)明的核酸構建體、或根據本發(fā)明的載體。本發(fā)明還提供了一種用于產生本發(fā)明的多肽的方法，所述方法包括：(a)在有利于產生多肽的條件下培養(yǎng)包含根據本發(fā)明的核酸構建體的宿主細胞；以及(b)回收多肽。在本發(fā)明的另一方面，還提供了通過本發(fā)明的方法生產的發(fā)酵物。本發(fā)明的又一方面是提供通過本發(fā)明的方法生產的木聚糖酶。本發(fā)明還提供了一種酶組合物，該酶組合物包含：a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，或c)它們的組合。本發(fā)明還提供了一種飼料添加劑組合物，該飼料添加劑組合物包含：a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，或c)它們的組合。在本發(fā)明的又一方面，提供了一種預混物，該預混物包含：a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，c)根據本發(fā)明的酶組合物，d)根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物，或e)它們的組合；以及至少一種維生素和/或至少一種礦物質。本發(fā)明還提供了一種飼料(或喂養(yǎng)料)，其包含：a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，c)根據本發(fā)明的酶組合物，d)根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物，e)根據本發(fā)明的預混物，或f)它們的組合。在另一個方面，提供了一種制備喂養(yǎng)料的方法，所述方法包括：使飼料組分與a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，c)根據本發(fā)明的酶組合物，d)根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物，e)根據本發(fā)明的預混物或f)它們的組合相混合。本發(fā)明還提供了一種用于降解含木聚糖材料中含阿拉伯聚糖材料的方法，所述方法包括使所述含木聚糖材料與a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，c)根據本發(fā)明的酶組合物，d)根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物，e)根據本發(fā)明的預混物或f)它們的組合相混合。在另一個方面，提供了a)根據本發(fā)明的合成木聚糖酶，b)根據本發(fā)明的發(fā)酵物，c)根據本發(fā)明的酶組合物，d)根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物，e)根據本發(fā)明的預混物或f)它們的組合用于使含木聚糖材料中阿拉伯聚糖增溶的用途。具體實施方式除非另有定義，否則本文所用的所有技術和科學術語都具有本公開所屬領域普通技術人員通常理解的含義。Singleton等人，DICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGY(《微生物學和分子生物學詞典》)，第20版，JohnWiley和Sons,NewYork(1994)，以及Hale和Marham，THEHARPERCOLLINSDICTIONARYOFBIOLOGY,HarperPerennial,NY(1991)為本領域技術人員提供本發(fā)明中所用多個術語的一般性詞典。本公開文本并不受本文公開的示例性方法和材料的限制，任何與本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料都可用于本公開文本的實施方案的實施或試驗。數值范圍包括限定該范圍的數字。除非另外指明，否則分別是，任何核酸序列從左到右以5'至3'取向寫出；氨基酸序列從左到右以氨基至羧基取向寫出。本文提供的標題并非對本公開文本的各個方面或實施方案的限制，這些方面或實施方案可通過將說明書作為一個整體來參考而得到。相應地，下面就要定義的術語通過將說明書作為一個整體來參考會得到更完全的定義。氨基酸在本文中用氨基酸名稱、三字母縮寫或單字母縮寫來指代。本文所用的術語“蛋白質”包括蛋白質、多肽和肽。如本文所用，術語“氨基酸序列”與術語“多肽”和/或術語“蛋白質”是同義的。在某些情況下，術語“氨基酸序列”與術語“肽”是同義的。在某些情況下，術語“氨基酸序列”與術語“酶”是同義的。術語“蛋白質”和“多肽”在本文中可互換使用。在本公開和權利要求書中，可使用氨基酸殘基的常規(guī)一字母和三字母代碼。氨基酸的3字母代碼遵照IUPACIUB生物化學命名聯合委員會(JointCommissiononBiochemicalNomenclature,JCBN)的定義。還應當理解，由于遺傳密碼的簡并性，多肽可由不止一種核苷酸序列編碼。術語的其他定義可在整個本說明書中出現。在更詳細地描述示例性的實施方案之前，應理解本公開文本并不限于所描述的具體實施方案，因為這些實施方案當然是可變的。還應理解，本文所用的術語僅出于描述具體的實施方案的目的，并不意在具有限制意義，因為本發(fā)明的范圍將僅受所附權利要求的限定。在提供數值范圍的情況中，應當理解，該范圍的上限和下限之間的每個中間數值(至下限的個位的十分之一，除非上下文另有清楚規(guī)定)也被具體公開。規(guī)定的范圍中的任何規(guī)定值或中間值與該規(guī)定的范圍中的任何其他規(guī)定值或中間值之間的每個較小范圍，被涵蓋在本公開內。這些較小范圍的上限和下限可獨立地被包括或排除在該范圍中，而且其中任一個、沒有一個或兩個界限被包括在較小范圍中的每個范圍也被涵蓋在本公開中，但依據該規(guī)定的范圍中的任何被具體排除的界限而定。在規(guī)定的范圍包括界限中的一個或兩個的情況中，排除這些被包括的界限中的任一個或兩個的范圍，也被包括在本公開中。必須指出，本文和所附權利要求書中用到的名詞既有單數含義也有復數含義，除非上下文另有清楚規(guī)定。因此，例如，提到“酶”則包括多個這種候選物質，而提到“飼料”則包括提到一種或多種飼料以及本領域技術人員知道的它們的等同物，以此類推。本文論述的出版物只是為了它們在本申請的提交日之前的公開內容而提供。本文的任何內容都不能被解釋為承認這些出版物構成本文所附權利要求的現有技術。例如通常作為動物飼料的能量源、作為生物燃料生產的原料、作為麥芽制造及釀造的成分、或作為小麥谷朊蛋白-淀粉分離工藝的原料而使用的原料不斷增加的價格導致了低成本的纖維材料包含在用于這些產業(yè)的起始基材中，特別是在動物飼料中使用低成本的纖維副產品。加入纖維可導致幾種不利影響。例如，在動物飼料中添加纖維可引起抗營養(yǎng)作用。在喂養(yǎng)料中，半纖維素和纖維素(包括不溶性阿拉伯聚糖)形成封裝(或包埋)營養(yǎng)物質如淀粉和蛋白質的物理屏障，從而抵擋(retaining)動物獲取這些營養(yǎng)物質。半纖維素和纖維素(包括不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol))自身也為潛在能量源，原因是其由C5-和C6-糖組成。單C6-糖可被動物用作能量源，而寡C5-糖可通過存在于動物腸道中的微菌群轉化為短鏈脂肪酸(vandenBroek等人，2008MolecularNutrition&FoodResearch,52,146-63)，其短鏈脂肪酸可被動物腸道吸收和消化。營養(yǎng)物質因物理屏障降解而從喂養(yǎng)料釋放取決于木聚糖酶降解不溶性纖維組分(例如不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol))的能力。在第一方面，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少87％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少87％同一性的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。在另一方面，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少89％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少89％同一性的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少90％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少90％同一性的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少94％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少94％同一性的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種分離的具有木聚糖酶活性的多肽，所述分離的多肽選自：(a)包含與SEQIDNO:1具有至少98％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由與SEQIDNO:2具有至少98％同一性的多核苷酸編碼的多肽；或者(c)a)或b)的多肽的片段，其片段具有木聚糖酶活性。根據本發(fā)明的多肽可包含選自下列的氨基酸序列：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種具有木聚糖酶活性的多肽，所述多肽包含與選自下列的一種氨基酸序列具有至少87％同一性的氨基酸序列：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種具有木聚糖酶活性的多肽，所述多肽包含與選自下列的一種氨基酸序列具有至少93％同一性的氨基酸序列：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種具有木聚糖酶活性的多肽，所述多肽包含與選自下列的一種氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個實施方案中，具有木聚糖酶活性的多肽包含選自下列的氨基酸序列：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個具體實施方案中，具有木聚糖酶活性的多肽包含本文示為SEQIDNo.1的氨基酸序列。在另一個實施方案中，根據本發(fā)明的多肽可由選自下列的氨基酸序列組成：SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11。在一個實施方案中，多肽可由這樣的多核苷酸編碼：與SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12具有至少87％同一性；或與因遺傳密碼簡并性而不同于SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12的多核苷酸具有至少87％同一性。在另一個實施方案中，多肽可由這樣的多核苷酸編碼：與SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12具有至少93％同一性；或與因遺傳密碼簡并性而不同于SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12的多核苷酸具有至少93％同一性。在另一個實施方案中，多肽可由這樣的多核苷酸編碼：與SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12具有至少95％同一性；或與因遺傳密碼簡并性而不同于SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12的多核苷酸具有至少95％同一性。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽由選自SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo.10和SEQIDNo.12的多核苷酸；或因遺傳密碼簡并性而不同于SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo10和SEQIDNo.12的多核苷酸編碼。在一個實施方案中，本發(fā)明的多肽由包含本文示為SEQIDNo.2的核苷酸序列的多核苷酸或因遺傳密碼簡并性而不同SEQIDNo.2的多核苷酸編碼。適當地，本文提出的核酸或多核苷酸序列可為基因組DNA、cDNA、合成DNA或RNA。在一個實施方案中，本文提出的核酸或多核苷酸序列可為DNA、更優(yōu)選為cDNA。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種包含本發(fā)明多核苷酸的核酸構建體，該多核苷酸有效連接至一個或多個指導表達宿主中多肽產生的控制序列。還可預期包含本發(fā)明的核酸構建體或本發(fā)明的多核苷酸的重組表達載體；和包含本發(fā)明的核酸構建體或本發(fā)明的多核苷酸的宿主細胞(例如重組宿主細胞)；或根據本發(fā)明的載體。在一個實施方案中，提供了一種用于產生本發(fā)明的多肽的方法，所述方法包括：(a)在有利于產生多肽的條件下培養(yǎng)包含根據本發(fā)明的核酸構建體的宿主細胞；以及(b)回收多肽。可回收如此產生的多肽。如此產生的多肽可作為發(fā)酵物的一部分使用或者可分離和/或純化以產生分離或純化的合成木聚糖酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，回收根據本發(fā)明方法生產的合成木聚糖酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，分離和/或純化根據本發(fā)明方法生產的合成木聚糖酶。在一些實施方案中，可將合成木聚糖酶直接用作發(fā)酵物而無需對酶進行分離和/或純化。本發(fā)明的宿主細胞可選自細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞、絲狀真菌細胞和植物細胞。優(yōu)選地，宿主細胞為細菌或真菌細胞。在一個實施方案中，優(yōu)選地合成木聚糖酶為內切木聚糖酶，例如內切-1,4-β-d-木聚糖酶。內切-1,4-β-d-木聚糖酶的分類號為E.C.3.2.1.8。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽在pH6下于65℃溫育10分鐘之后具有至少40％的木聚糖酶活性的殘留活性。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽在pH6下于65℃溫育10分鐘之后具有至少50％的木聚糖酶活性的殘留活性。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多肽在pH6下于61℃溫育10分鐘之后具有至少80％的木聚糖酶活性的殘留活性。適當地，本發(fā)明的多肽在與含0.2mg/ml胃蛋白酶的緩沖溶液在pH3.5下于40℃的溫度溫育兩小時之后具有至少70％的殘留活性。在一個優(yōu)選的實施方案中，在包含多肽的飼料經干蒸汽處理以在30秒后達到90℃的目標溫度之后，本發(fā)明的多肽具有至少60％的殘留木聚糖酶活性。在一個優(yōu)選的實施方案中，在將包含多肽的飼料于90℃調節(jié)30秒后(例如作為制粒工藝的一部分)，本發(fā)明的多肽具有至少60％的殘留木聚糖酶活性。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據本發(fā)明的合成木聚糖酶具有大于61℃(優(yōu)選大于65℃、優(yōu)選大于69℃、優(yōu)選大于73℃)的Tm值，其中Tm值測為溫育10分鐘后獲得50％殘留活性的溫度。根據本發(fā)明的合成木聚糖酶的熱穩(wěn)定性可采用“用于測量熱穩(wěn)定性的測定”(參見下文)測定。用于測量熱穩(wěn)定性的測定通過以下來測定合成木聚糖酶的熱變性特征：在變化的溫度(例如，分別為61、65、69和73℃)下，在25mMMES緩沖液(pH6.0)中稀釋酶樣品并預溫育10min，并隨后通過實施例2所述的木聚糖酶活性測定測量殘留活性。將未預溫育情況下測得的活性設為100％并相對于其來計算各個溫度下各合成木聚糖酶的殘留活性。由熱變性特征將Tm值計算為獲得50％殘留活性的溫度。用于測量熱穩(wěn)定性的測定的所有細節(jié)可見于實施例2(參見“熱穩(wěn)定性測定”)。各個合成木聚糖酶的殘留活性計算為所測的分別受脅迫(熱處理)和未受脅迫(未熱處理)的酶樣品活性之間的比率：(受脅迫樣品的平均空白活性)/(未受脅迫樣品的平均空白活性)。在一個實施方案中，根據本發(fā)明，如果合成木聚糖酶具有大于65℃的Tm值，則其被視為熱穩(wěn)定的，其中Tm值為溫育10分鐘后獲得50％殘留活性的溫度。該Tm值可根據如本文提出的用于測量熱穩(wěn)定性的測定來測定。在一個實施方案中，根據本發(fā)明，如果合成木聚糖酶具有大于69℃的Tm值，則其被視為熱穩(wěn)定的，其中Tm值為溫育10分鐘后獲得50％殘留活性的溫度。該Tm值可根據如上提出的用于測量熱穩(wěn)定性的測定來測定。在一個實施方案中，根據本發(fā)明，如果合成木聚糖酶具有大于73℃的Tm值，則其被視為熱穩(wěn)定的，其中Tm值為溫育10分鐘后獲得50％殘留活性的溫度。該Tm值可根據如本文提出的用于測量熱穩(wěn)定性的測定來測定。合成木聚糖酶(或包含合成木聚糖酶的組合物)的令人驚奇的技術優(yōu)點在于其顯著有利于承受高至約85℃(適宜地高至約90℃)的熱處理(例如在制粒過程期間)。熱處理可以進行30秒。對于經受此類熱處理意指在加熱到指定溫度之前，添加劑中存在/有活性的酶有至少約40％、適宜地至少50％在其冷卻到室溫后仍存在/有活性。優(yōu)選地，在加熱到指定溫度之前在添加劑中存在和有活性的酶有至少約60％(適宜地至少約70％、適宜地至少約80％)在其冷卻到室溫后仍存在和有活性。術語“熱穩(wěn)定性”是酶在相對較高溫度下抵抗不可逆失活(通常通過變性)的能力。這意指酶在暴露于所確定溫度給定的時間段之后保留指定量的酶活性。存在許多方法來測定熱穩(wěn)定性。作為示例，相較于使酶在更長時間(數日)內穩(wěn)定的溫度，可在更高的溫度下，在無底物條件下將酶樣品溫育規(guī)定的時間段(例如10min或1至30min)。在升高的溫度下溫育之后，在許可溫度例例如30℃(或者25-50℃或甚至至多70℃)下對酶樣品的殘留活性進行測定。相對于未在升高的溫度下溫育的酶樣品，計算殘留活性。熱穩(wěn)定性也可測定為隨溫度變化的酶失活。在無底物條件下，在各個溫度下將此處酶樣品溫育規(guī)定的時間段(例如10min或1至30min)并在溫育之后在許可溫度例如30℃(或者25-70℃或甚至更高)下測定殘留活性。相對于未在升高的溫度下溫育的酶樣品，計算各個溫度下的殘留活性。所得的熱變性特征(溫度相對殘留活性)可用于計算獲得50％殘留活性的溫度。該值定義為Tm值。甚至進一步，熱穩(wěn)定性可測定為隨溫度變化的酶失活。在無底物條件下，在規(guī)定的升高溫度(例如76℃)下將此處酶樣品溫育不同的時間段(例如10秒至30分鐘之間)并在溫育之后在許可溫度例如30℃(或者25-70℃或甚至更高)下測定殘留活性。相對于未在升高的溫度下溫育的酶樣品，計算各個溫度下的殘留活性。所得的失活特征(時間相對殘留活性)可用于計算獲得50％殘留活性的時間。這通常以T1/2表示。這些是如何測定熱穩(wěn)定性的示例。熱穩(wěn)定性也可通過其它方法測定。優(yōu)選地，通過使用如本文提出的“用于測量熱穩(wěn)定性的測定”來估計熱穩(wěn)定性。與熱穩(wěn)定性不同，熱活性為隨溫度變化的酶活性。為了測定熱活性，在底物存在下，可將酶樣品于不同溫度下溫育(測定)由測定限定的時間段。如由測定(例如讀取反映所形成反應產物的量的OD值)所限定，在溫育期間或之后立即獲得酶活性。獲得最高活性的溫度為給定測定條件下的酶的最佳溫度?？上鄬τ谠谧罴褱囟认芦@得的活性計算各個溫度下所得的活性。在給定測定條件下，這將為酶提供溫度特征。在本申請中，熱穩(wěn)定性不同于熱活性。在一些實施方案中，具有木聚糖酶活性的酶，例如本發(fā)明的GH10木聚糖酶(例如經修飾GH10木聚糖酶)或其片段應在約5至6的pH之間具有良好的木聚糖酶活性。優(yōu)選地，具有木聚糖酶活性的酶，例如根據本發(fā)明的GH10木聚糖酶(例如經修飾GH10木聚糖酶)或其片段在約pH4至8之間，適宜地在pH4.6至7之間保留大于70％的最大活性。在一些實施方案中，例如在飼料應用中，具有木聚糖酶活性的酶，例如根據本發(fā)明的GH10木聚糖酶(例如經修飾GH10木聚糖酶)或其片段優(yōu)選地在pH4.9至6之間保留大于70％的最大活性。不受理論的束縛，pH也可對酶效力和功效有重要影響。對于飼料應用，特別是本發(fā)明的木聚糖酶的pH特征有益于在小腸(中性條件下)中的活性。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的多肽或根據本發(fā)明的發(fā)酵物的酶組合物或飼料添加劑組合物。本發(fā)明還提供了一種預混物，該預混物包含本發(fā)明的多肽或根據本發(fā)明的發(fā)酵物、或本發(fā)明的酶組合物、或根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物和/或至少一種礦物質。在一些實施方案中，根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物或根據本發(fā)明的預混物還包含一種或多種選自下列的酶：蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))和/或淀粉酶(包括α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、G4-形成淀粉酶(E.C.3.2.1.60)、β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)和γ-淀粉酶(E.C.3.2.1.3))?？稍谟糜诮到夂揪厶遣牧现泻⒗厶遣牧系姆椒ㄖ惺褂酶鶕景l(fā)明的合成木聚糖酶或包含其的發(fā)酵物、或包含其的酶組合物。適當地，阿拉伯聚糖可為不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)。在一個實施方案中，含木聚糖材料選自下列的一者或多者：飼料或喂養(yǎng)料；飼料組分；谷物基材料；麥芽漿；麥芽汁；麥芽；發(fā)芽大麥；助劑，大麥麥芽漿；和谷類面粉。在一個實施方案中，阿拉伯聚糖被溶解而不會增大反應培養(yǎng)基的粘度。在本發(fā)明的一個實施方案中，飼料或喂養(yǎng)料或飼料組分包括玉米、DDGS(例如cDDGS)、小麥、麥麩或它們的組合或者由這些物質組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，飼料或喂養(yǎng)料為玉米基喂養(yǎng)料。根據本發(fā)明的合成木聚糖酶可與一種或多種選自下列的酶組合使用：內切葡聚糖酶(E.C.3.2.1.4)；纖維二糖水解酶(E.C.3.2.1.91)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、纖維素酶(E.C.3.2.1.74)、地衣多糖酶(E.C.3.2.1.73)、脂酶(E.C.3.1.1.3)、脂質酰基轉移酶(通常歸類為E.C.2.3.1.x)、磷脂酶(E.C.3.1.1.4、E.C.3.1.1.32或E.C.3.1.1.5)、植酸酶(例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.3.8)、淀粉酶、α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、其它木聚糖酶(E.C.3.2.1.8、E.C.3.2.1.32、E.C.3.2.1.37、E.C.3.2.1.72、E.C.3.2.1.136)、葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)、半纖維素酶、蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))、脫支酶、角質酶、酯酶和/或甘露聚糖酶(例如β-甘露聚糖酶(E.C.3.2.1.78))。根據本發(fā)明的合成木聚糖酶可與一種或多種選自下列的酶組合使用：蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))和/或淀粉酶(包括α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、G4-形成淀粉酶(E.C.3.2.1.60)、β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)和γ-淀粉酶(E.C.3.2.1.3))。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的方法和用途包括：對受試者施用根據本發(fā)明的合成木聚糖酶、或根據本發(fā)明的包含合成木聚糖酶的發(fā)酵物、或根據本發(fā)明的包含合成木聚糖酶的酶組合物、或根據本發(fā)明的包含合成木聚糖酶的飼料添加劑組合物、或根據本發(fā)明的包含合成木聚糖酶的預混物或根據本發(fā)明的包含合成木聚糖酶的喂養(yǎng)料。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法或用途為小麥谷朊蛋白-淀粉分離工藝(或其一部分)。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法或用途為生物燃料(例如生物乙醇)或生化物質(例如生物基異戊二烯)生產工藝(或其一部分)。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法或用途為麥芽制造或釀造工藝(或其一部分)。適當地，本發(fā)明構想通過根據本發(fā)明的方法生產發(fā)酵飲料，例如啤酒。優(yōu)選地對本文提出的多肽序列和核酸序列兩者進行分離。本發(fā)明的木聚糖酶優(yōu)選為GH10木聚糖酶。換句話講，木聚糖酶可具有范圍為32-39kDa的分子量并且/或者木聚糖酶的催化域由八倍體β/α圓筒狀結構組成(如在Harris等人1996–Acta.Crystallog.Sec.D52,393-401中提出)。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的木聚糖酶是糖苷水解酶(GH)家族10的木聚糖酶。術語“糖苷水解酶(GH)家族10的”意指所考慮的木聚糖酶被歸入或可被歸入GH家族10。蛋白質相似性搜索(Proteinsimilaritysearches)(例如在http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi？CMD＝Web&PAGE_TYPE＝BlastHome中蛋白質blast)可確定未知序列是否屬于術語GH10木聚糖酶家族成員，特別是GH家族可基于關鍵區(qū)域中的序列同源性分類。此外或另選地，為了確定未知蛋白質序列是否為GH10家族內的木聚糖酶蛋白質，不僅可關于序列相似性/同源性/同一性進行評估，還可關于3D結構類似性進行評估。GH家族的分類通常基于3D折疊。將預測未知蛋白質序列的3D折疊的軟件是HHpred(http://toolkit.tuebingen.mpg.de/hhpred)。這種用于預測蛋白質結構的軟件的效用依賴于采用已知結構用作模板對同源序列進行鑒定。其效果很好，因為結構比一級序列分叉(diverge)的更慢。當相同家族的蛋白質的序列分叉到不能識別的程度時，它們可具有極類似的結構。在實施過程中，可將未知序列粘貼到FASTA格式的軟件中(http://toolkit.tuebingen.mpg.de/hhpred)。進行該操作后，可提交搜索。搜索的輸出將示出具有已知3D結構的序列的列表。為了確認未知序列實際上為GH10木聚糖酶，GH10木聚糖酶可見于具有>90的概率的同系物列表內。并非所有識別為同系物的蛋白質將特征化為GH10木聚糖酶，但是一些將特征化為GH10木聚糖酶。后者蛋白質是這樣的蛋白質：具有已知結構以及將其鑒定為木聚糖酶的生物化學特征。前者無GH10木聚糖酶的生物化學特征。一些參考文獻描述了此種方案，例如J.(2005)HMM-HMMcomparison-Bioinformatics的Proteinhomologydetection,21,951-960(doi:10.1093/bioinformatics/bti125)和J,BiegertA，和LupasAN.(2005)TheHHpredinteractiveserverforproteinhomologydetectionandstructureprediction-NucleicAcidsResearch33,W244--W248(網頁服務器發(fā)布)(doi:10.1093/nar/gki40)。根據Cazy網站(http://www.cazy.org/)，家族10糖苷水解酶可為如下特征：已知活性：內切-1,4-β-木聚糖酶(EC3.2.1.8)；內切-1,3-β-木聚糖酶(EC3.2.1.32)；番茄皂甙酶(tomatinase)(EC3.2.1.-)機制：保留異種集團：GH-A催化劑親核物質/堿基:谷氨酸(實驗)催化劑質子供體:谷氨酸(實驗)3D結構狀況：(β/α)8本發(fā)明的GH10木聚糖酶可具有催化域，分子量在32-39kDa范圍內。本發(fā)明的GH10木聚糖酶的催化域的結構由八倍體β/α圓筒狀組成(Harris等人1996–Acta.Crystallog.Sec.D52,393-401)。三維結構可用于大量的家族GH10酶，首先實現的是淺青紫鏈霉菌(Streptomyceslividans)木聚糖酶A(Derewenda等人，JBiolChem1994年8月19日；269(33)20811-4)、糞肥纖維單胞菌(C.fimi)內切聚糖酶Cex(White等人Biochemistry1994年10月25日；33(42)12546-52)和纖維弧菌(Cellvibriojaponicus)Xyn10A(先前的熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)亞種木聚糖酶A)(Harris等人，Structure1994年11月15日；2(11)1107-16.)。作為異種集團GHA的成員，其具有典型(α/β)8TIM桶折疊，所述(α/β)8TIM桶折疊具有位于β-鏈4(酸/堿基)和7(親核物質)的C末端的兩個關鍵活性位點谷氨酸(Henrissat等人，ProcNatlAcadSciUSA1995年7月18日；92(15)7090-4)。如本文所用，術語“GH10木聚糖酶”意指這樣的多肽：其具有木聚糖酶活性，并且具有具有位于β-鏈4(酸/堿基)和7(親核物質)的C末端的兩個關鍵活性位點谷氨酸的(α/β)8TIM桶折疊。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的合成木聚糖酶能夠降解(或降解)含木聚糖材料，特別是阿拉伯聚糖，特別是不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)。如本文所用，術語“基本上由…組成”意指可存在未指定的組分，如果受權利要求書保護的組合物的特征因而未受到顯著影響的話。術語“由…組成”意指特定成分的比例必須總計為100％。本文所用術語“包含”可在一些實施方案中修改以指基本上由…組成或由…組成(兩者均具有更為受限的含義“包含”)在一個實施方案中，不溶性含阿拉伯聚糖材料不為小麥秸稈。如本文所用的術語“其片段”意指活性片段。換句話講，片段具有木聚糖酶活性。適宜的片段可與片段所來源的全長合成木聚糖酶具有相同的木聚糖酶活性。另選地，與片段所來源的合成木聚糖酶相比，片段可具有改進的活性(例如增強的特異性，特定活性、pH或溫度特征)。此外，片段必須保留合成木聚糖酶(它是其片段)的熱穩(wěn)定性能。在一個實施方案中，片段為片段所來源的合成木聚糖酶的全長的至少60％。在一個實施方案中，片段為片段所來源的合成木聚糖酶的全長的至少75％。在一個實施方案中，片段為片段所來源的合成木聚糖酶的全長的至少85％。在一個實施方案中，片段為片段所來源的合成木聚糖酶的全長的至少95％。在一個實施方案中，片段為片段所來源的合成木聚糖酶的全長的至少98％。在一個實施方案中，片段為一個或多個選自SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9和SEQIDNo.11的序列的片段。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的合成木聚糖酶a)包含本文示為SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9或SEQIDNo.11的氨基酸序列，或者b)包含與本文示為SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9或SEQIDNo.11的氨基酸序列有至少96％、優(yōu)選至少98.5％、優(yōu)選至少99％同一性的氨基酸序列，或者c)包含本文示為SEQIDNo.1、SEQIDNo:3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9或SEQIDNo.11的合成木聚糖酶的全長的至少85％的片段。用途本發(fā)明的合成木聚糖酶可適用于任何一種下列應用：a)動物喂養(yǎng)料中的添加劑；和/或b)動物的飼料補充劑；和/或c)分解谷物基材料(例如其可為全谷物或部分谷物)。分解產物(例如葡萄糖)可用作用于任何發(fā)酵工藝例如生物燃料(例如生物乙醇)生產或其它產品例如生化物質(例如生物基異戊二烯)生產的原料。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及生物燃料(例如生物乙醇)的生產以及增強谷物基材料在生物燃料工業(yè)中的利用；和/或d)谷物(例如小麥)谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)。一種或多種所得產物可為淀粉(例如經純化的淀粉)和/或谷朊蛋白和/或纖維和/或水溶性的(例如水溶性戊聚糖)。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及淀粉和/或谷朊蛋白的生產；和/或e)例如通過分解谷物基材料(例如發(fā)芽大麥)來改良麥芽制造及釀造，和/或f)降解AXsol或AXinsol的分解產物，以確保反應混合物的粘度未增大和/或使粘度降低；和/或g)例如在生物燃料(例如生物乙醇)生產工藝中降解谷物基材料時降低粘度。在一個實施方案中，本發(fā)明的合成木聚糖酶用于喂養(yǎng)料。優(yōu)選地，喂養(yǎng)料包含玉米或為玉米基喂養(yǎng)料。在一個實施方案中，本發(fā)明的合成木聚糖酶用于麥芽制造及釀造。在另一個實施方案中，本發(fā)明的合成木聚糖酶用于小麥谷朊蛋白-淀粉分離。在另一個實施方案中，本發(fā)明的合成木聚糖酶用于分解谷物基材料并可為生物燃料(例如生物乙醇)生產工藝的一部分。優(yōu)點本文提出的新型合成木聚糖酶相較于已知木聚糖酶具有諸多優(yōu)點。此外，本發(fā)明的合成木聚糖酶特別是熱穩(wěn)定性的。這在一些應用中提供了顯著優(yōu)勢。具體地，在飼料應用中，酶可經受熱處理，例如在制粒過程期間。因此，酶需要能夠在此種處理后維持其活性。本發(fā)明的合成木聚糖酶特別是并且出乎意料地是熱穩(wěn)定的。具體地，已發(fā)現本發(fā)明的合成木聚糖酶在制粒工藝之后具有極高的回收率(例如殘留活性)。適當地，合成木聚糖酶具有大于65℃的Tm值，其中Tm值為溫育10分鐘后獲得50％殘留活性的溫度。此外，改善的熱穩(wěn)定性在降解淀粉期間也是極為有利的，該過程在液化期間于升高的溫度下進行(約85-95℃)。熱穩(wěn)定性允許在該步驟期間添加酶。此外或另選地，已發(fā)現合成木聚糖酶意料不到地具有較高的胃蛋白酶耐受性。胃蛋白酶是由動物在消化系統(tǒng)的第一個部分中分泌的消化率蛋白酶。胃蛋白酶可降解蛋白質，這使得蛋白質可用作動物的營養(yǎng)物。外源酶(即添加至飼料中的酶)也是蛋白質，并且如果它們易于受胃蛋白酶降解，則它們會被降解。這在大多數情況下會破壞酶活性。因此，極為有利的是合成木聚糖酶具有胃蛋白酶耐受性。如本文提出的合成木聚糖酶和本發(fā)明的合成木聚糖酶也意料不到地有利于增溶戊聚糖。如本文提出的合成木聚糖酶和本發(fā)明的合成木聚糖酶意料不到地有利于增溶AXinsol。令人驚奇地，已發(fā)現本發(fā)明的合成木聚糖酶尤其有利于降解廣譜基材玉米、小麥、DDGS等，特別是玉米和玉米基基材，特別是小麥(包括小麥基的)產品和玉米(包括玉米基產品)兩者中的含木聚糖材料例如阿拉伯聚糖(例如AXinsol)。這與先前已知的酶形成對比，先前已知的酶通常在增溶玉米或玉米基基材的AXinsol中處于劣勢，或者在小麥-和玉米基基材兩者中效率不高。此外，本發(fā)明的合成木聚糖酶不僅可尤其有利于分解(增溶)AXinsol，而且還有效地分解(或降解)可溶性聚合物。由于能夠有效地(快速)分解(降解)可溶性聚合物(由溶解AXinsol獲得)，得到了降低的粘度。這后一種作用在一些受權利要求書保護的應用中是必要的。通常，常規(guī)的木聚糖酶可分解AXinsol，但是將導致產生的聚合物產物增加，這導致混合物的粘度增大。此種增大的粘度在許多應用中很不利。發(fā)現本發(fā)明的合成木聚糖酶以及如本文所述的合成木聚糖酶不僅分解(溶解)得自包括玉米、小麥、DDGS等，特別是小麥(包含小麥基的)產品和玉米(包括玉米基產品)兩者的寬泛基材范圍的不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)，而且還有效地分解由此溶解的聚合物以確保粘度未升高和/或確保粘度降低。在一些實施方案中，本發(fā)明的以及如本文所述的合成木聚糖酶能夠降解AXsol或AXinsol的分解產物，以確保反應混合物的粘度未增大和/或使粘度降低。具體地，本發(fā)明的合成木聚糖酶特別有效地降解玉米和玉米基基材中的含木聚糖材料，例如阿拉伯聚糖(例如AXinsol)。多種用于喂養(yǎng)料來增溶戊聚糖的商業(yè)化木聚糖酶是GH11酶。本領域的技術人員認為，與GH11木聚糖酶相比，GH10木聚糖酶無法強效增溶戊聚糖，特別是AXinsol。已令人驚奇地發(fā)現，本文所公開的一種或多種合成木聚糖酶(GH10木聚糖酶)特別有利于增溶廣譜基材(包括玉米基基材)中的AXinsol。令人驚奇地，本發(fā)明人發(fā)現本發(fā)明的(以及本文提出的)合成木聚糖酶在增溶戊聚糖方面的能力優(yōu)于商用GH11木聚糖酶。合成木聚糖酶有效地增溶得自玉米和玉米基基材的AXinsol的事實是非常有利的，原因是例如相較于其它谷類食物如小麥和黑麥，玉米保留更多不可溶形式的AX。因此，僅僅能夠降解AXinsol的木聚糖酶可示出例如對玉米-大豆食料喂養(yǎng)的動物的顯著有益效果。GH10木聚糖酶如此有利于增溶谷類食物特別是玉米或玉米基基材中的AXinsol完全出乎意料。本發(fā)明的合成木聚糖酶能夠有效地(快速)降解由AXinsol增溶所產生的或存在于谷物基材料中的聚合物和/或低聚物。這導致了本文提出的合成木聚糖酶出人意料的優(yōu)勢：其尤其有利于在多個應用中保持較低粘度或降低粘度，例如喂養(yǎng)料；麥芽制造及釀造；谷物基產生的葡萄糖，例如用于對生物燃料和/或生化物質(例如生物基異戊二烯)進一步加工；或小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)以例如生產淀粉。本發(fā)明的一個優(yōu)點在于改善了小麥谷朊蛋白-淀粉分離。本發(fā)明的酶尤其有效地增強受試者的性能或改善飼料中原料的消化性和/或改善受試者的飼料效率。含木聚糖材料本發(fā)明的合成木聚糖酶(或包含本發(fā)明的合成木聚糖酶的組合物)可用于降解任何含木聚糖材料。在一個實施方案中，含木聚糖材料為任何包含阿拉伯聚糖的植物材料。在一個實施方案中，含木聚糖材料為任何包含不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)的植物材料。在一個實施方案中，含木聚糖材料為喂養(yǎng)料或飼料組分。在一個實施方案中，含木聚糖材料為谷物基材料(包括全谷物或部分谷物或發(fā)芽谷物，例如發(fā)芽大麥)。當方法涉及生物燃料生產(例如生物乙醇生產)時，則優(yōu)選含木聚糖材料為谷物基材料。在另一個實施方案中，含木聚糖材料可為大麥麥芽或麥芽漿、或發(fā)芽的大麥、或它們的組合。在另一個實施方案中，含木聚糖材料可為谷類面粉(例如小麥、燕麥、黑麥或大麥面粉)。當方法涉及谷朊蛋白-淀粉分離工藝時，優(yōu)選含木聚糖材料為谷類面粉(例如小麥、燕麥、黑麥或大麥面粉)。分解或降解本發(fā)明的或如本文所公開的酶(或包含酶的組合物)可用于分解(降解)AXinsol或AXsol或者AXinsol的降解產物。術語“分解”或“降解”與水解同義。增溶/降解本發(fā)明涉及一種降解含木聚糖材料(優(yōu)選含阿拉伯聚糖材料，優(yōu)選含不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)材料)以產生水溶性戊聚糖(其可為聚合、低聚或單體的)的方法。該方法可在本文描述為戊聚糖增溶或阿拉伯聚糖增溶或AXinsol增溶或AXinsol降解。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種降解(或分解)不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)的方法。這也可稱為不溶性阿拉伯聚糖的增溶和/或戊聚糖的增溶。在本發(fā)明的另一個實施方案中，該方法涉及降解(例如分解)由不溶性阿拉伯聚糖降解所得的聚合物。阿拉伯聚糖(AX)如本文所用，術語“阿拉伯聚糖”(AX)意指由木聚糖主鏈(1,4-連接的木糖單元)與L-阿拉伯呋喃糖(L-阿拉伯糖，為其5-原子環(huán)形式)組成的多糖，該L-阿拉伯呋喃糖在整個鏈上隨機地通過1α→2和/或1α→3鍵與木糖單元連接。阿拉伯聚糖為存在于植物的初生和次生細胞壁兩者中的半纖維素。阿拉伯聚糖可存在于谷物例如小麥、玉米(玉蜀黍)、黑麥和大麥的麩皮中。發(fā)現阿拉伯聚糖(AX)與植物細胞壁密切相關，其中其充當連接植物細胞壁和組織的各種結構單元的膠，從而給予其結構強度和剛度兩者。如本文所用，術語“戊聚糖”是在完全水解下獲得戊糖的任一類碳水化合物。因為木糖和阿拉伯糖(阿拉伯聚糖的組分)均為戊糖，所以阿拉伯聚糖通常歸類為戊聚糖。在幾種最重要的飼料原料(包括小麥和玉米)中，AX為主要的非淀粉多糖(NSP)級分。其在植物性材料內的豐度、位置以及分子結構使得AX對飼料消化性造成嚴重的負面影響，有效地降低了AX所存在的原料的營養(yǎng)價值。這使得AX成為抗營養(yǎng)因素，降低畜產品效率。此外，在例如麥芽制造、釀造、生物燃料制造的過程中，AX可在例如試圖分解植物材料時具有嚴重的負面影響，有效地降低在植物原料中得到的底物量。AX也可保持大量的水(其可稱為其水分保持能力)——這可使得可溶性阿拉伯聚糖導致(高)粘度——這在多種應用中很不利。如本文所用，術語“半纖維素”意指植物細胞壁的多糖組分而非纖維素。如本文所用，術語“半纖維素”可意指通過稀釋的堿性溶液分離的植物細胞壁的多糖。半纖維素占木本植物組織幾乎三分之一的碳水化合物。半纖維素的化學結構由長鏈的多種戊糖、己糖及其對應的糖醛酸組成。半纖維素可存在于水果、植物莖和谷殼中。木聚糖為由具有1β→4鍵的D-木糖單元組成的戊聚糖的示例。水不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)水不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)也稱為水不可提取的阿拉伯聚糖(WU-AX)，占植物材料干物質的較大比例。在小麥中，AXinsol可占干物質的6.3％。在小麥麩和小麥DDGS中，AXinsol可占干物質約20.8％或13.4％(w/w)。在黑麥中，AXinsol可占干物質的5.5％。在玉米中，AXinsol可占干物質的3.5-6％(例如5.1％)。在玉米DDGS中，AXinsol可占干物質的10-20％(例如12.6％)。AXinsol使營養(yǎng)物質截留在飼料中。大量可充分消化的營養(yǎng)物質例如淀粉和蛋白質保持包裹在細胞壁材料簇中或與AX的側鏈連接。這些俘獲的營養(yǎng)物質將不可用于小腸的消化和后續(xù)吸收。水溶性阿拉伯聚糖(AXsol)水溶性阿拉伯聚糖(AXsol)(也稱為水可提取的阿拉伯聚糖(WE-AX))可在生物燃料生產、生化物質生產、碳水化合物處理和/或麥芽制造和/或釀造和/或飼料中引發(fā)一些問題，因為其可由于AXsol的水分保持能力而導致粘度增大。在飼料中，AXsol可具有抗營養(yǎng)作用，特別是在單腹中，因為其可導致腸內容物的粘度顯著增大，這是由于AXsol特別的水分保持能力。增加粘度可影響飼料消化和營養(yǎng)物質使用，因為其可妨礙飼料與消化酶和膽汁鹽適當地混合并且/或者其減緩了營養(yǎng)物質的利用和吸收并且/或者其刺激了后腸中的發(fā)酵。在小麥中，AXsol可占干物質的1.8％。在小麥麩和小麥DDGS中，AXsol可占干物質約1.1％或4.9％(w/w)。在黑麥中，AXsol可占干物質的3.4％。在大麥中，AXsol可占干物質的0.4-0.8％。在玉米中，AXsol可占干物質的0.1-0.4％(例如0.1％)。在玉米DDGS中，AXinsol可占干物質的0.3-2.5％(例如0.4％)。然而，除了存在于植物材料中AXsol的量之外，當木聚糖酶增溶植物材料中的AXinsol時，這可釋放為植物材料的AXsol含量作出貢獻的戊聚糖和/或低聚物。本文所公開的經修飾木聚糖酶的一個顯著優(yōu)點在于其具有增溶AXinsol的能力而不會增大粘度。目前據信未形成高分子量的產物。AXsol的分解可降低粘度。AXsol的分解可釋放營養(yǎng)物質。粘度本發(fā)明可用于確保粘度不會增大和/或用于以任何方法降低粘度，其中AXsol的水分保持能力導致粘度不期望的增大。本發(fā)明涉及確保粘度不會增大并且/或者通過分解(降解)AXsol或通過分解(降解)由增溶AXinsol所產生的聚合物和/或低聚物來降低粘度。不受理論的束縛，由于能夠有效地(快速)分解(降解)由溶解AXinsol獲得的可溶性聚合物(例如低聚物)，可避免粘度不期望的增大并且/或者可獲得降低的粘度。如本文所用，術語“有效地”意指酶能夠降解通過增溶AXinsol形成的聚合物(例如低聚物)，該速度比降解(或增溶)AXinsol更快。降低粘度在如本文提出的許多應用中具有優(yōu)勢。用于生物乙醇工業(yè)的木聚糖酶的一個示例為XylathinTM。用于小麥谷朊蛋白-淀粉分離工業(yè)的木聚糖酶的一個示例為ShearzymeTM。在本發(fā)明的一個實施方案中，本文提出的木聚糖酶為降粘度劑。一般來講，首先將小麥(或其它谷物)干磨以麩皮和胚芽與胚乳分離，所述胚乳被碾磨成面粉。然后通過小麥淀粉分離工藝將該胚乳粉進一步分為幾種商業(yè)價值不同的產物流。主要目的在于產生由15-40μm的較大豆狀顆粒組成的精煉級A-淀粉。第二流B-淀粉由較不純的淀粉顆粒組成，其呈球形并且較小(1-10μm)。(C.C.Maningat,P.A.Seib,S.D.Bassi,K.S.Woo,G.D.Lasater,“Starch”書中的第10章(2009)441-451,Wheatstarch:production,properties,modificationanduses)。分離的小麥淀粉形成關于食品和非食品應用兩者的生產改性淀粉的原料?；钚怨入玫鞍?Vitalgluten)為小麥分離工藝中的第三增值產物。分離的小麥谷朊蛋白的活力由形成面包制作所需的粘彈性網絡的能力確定。在烘焙期間，活性谷朊蛋白包封形成于生面團制備的二氧化碳，并隨后使面包體積增大(AnnevanderBorght,HansGoesaert,WimS.Veraverbeke,JanA.Delcour,JournalofCerealScience41(2005)221-237,Fractionationofwheatandwheatflourintostarchandgluten:overviewofthemainprocessesandthefactorsinvolved.)。其因此通常用于富集用于制作面包的面粉，從而實現改良的面包制品。谷朊蛋白的其它市場包括在素食、肉、魚或禽肉制品中作為添加劑，包括在寵物食品工業(yè)；谷物早餐；或醬油中的那些。由于其熱塑性和良好的成膜性能，谷朊蛋白也用于非食品市場如粘合劑(L.Day,M.A.Augustin,I.L.Batey,C.W.Wrigley,TrendsinFoodScience&Technology17(2006)82-90,Wheat-glutenusesandindustryneeds.)?？墒褂帽疚奶岢龅暮铣赡揪厶敲冈趯⒐阮惷娣?例如小麥、燕麥、黑麥或大麥面粉)分離成淀粉和谷朊蛋白級分的過程中降低粘度(或不增大粘度)并且通過降解妨礙谷朊蛋白凝聚的低聚糖來改善分離。在麥芽制造和/或釀造期間，麥芽制作及釀造中的麥芽汁粘度、和大麥麥芽漿以及大麥麥芽的粘度可導致顯著的缺點。本發(fā)明涉及降低麥芽汁、大麥麥芽漿、大麥麥芽、或它們的組合的粘度(或不增大粘度)。飼料或喂養(yǎng)料本發(fā)明的合成木聚糖酶或飼料添加劑組合物可用作飼料或用于制備飼料。本文所用的術語“飼料(feed)”與“喂養(yǎng)料(feedstuff)”同義。優(yōu)選地，本發(fā)明的含阿拉伯聚糖材料為喂養(yǎng)料，或喂養(yǎng)料的成分、或飼料組分。取決于用途和/或應用模式和/或施用模式，飼料可呈溶液形式或呈固體形式或呈半固體形式。在用作飼料(例如功能飼料)或用于飼料(例如功能飼料)制備時，本發(fā)明的酶或組合物可與如下中的一者或多者結合使用：營養(yǎng)上可接受的載體、營養(yǎng)上可接受的稀釋劑、營養(yǎng)上可接受的賦形劑、營養(yǎng)上可接受的輔劑、營養(yǎng)活性成分。在一優(yōu)選的實施方案中，將本發(fā)明的酶或飼料添加劑組合物與飼料組分混合以形成喂養(yǎng)料。本文所用的術語“飼料組分”意指喂養(yǎng)料的全部或部分。喂養(yǎng)料的部分可意指喂養(yǎng)料的一種成分或喂養(yǎng)料的一種以上(例如2種或3種或4種)成分。在一個實施方案中，術語“飼料組分”涵蓋預混物或預混物成分。優(yōu)選地，飼料可以是草料或其預混物、復合飼料或其預混物。在一個實施方案中，可將根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物與復合飼料、復合飼料組分混合或將其混合至復合飼料的預混物或混合至草料(fodder)、草料組分或草料的預混物中。如本文所用的術語“草料”意指提供給動物(而非動物必須自己覓食)的任何食物。草料涵蓋經切割的植物。術語草料包括青貯飼料、壓制和制丸的飼料、油和混合日糧以及發(fā)芽谷物及豆類。草料可獲自一種或多種選自下列的植物：玉米(玉蜀黍)、苜蓿(紫花苜蓿)、大麥、牛角花、蕓苔屬、Chaumoellier、羽衣甘藍、油菜籽(卡諾拉)、蕪菁甘藍(瑞典甘藍)、蘿卜、三葉草、雜種車軸草、紅三葉草、地三葉草、白三葉草、羊茅草、雀麥草、稷、燕麥、高粱、大豆、樹(對于樹-干草為無頂樹枝條)、小麥和豆類。術語“復合飼料”意指以粗粉、丸粒、球丸(nut)、餅或碎屑形式的商業(yè)飼料。復合飼料可由多種原料和添加劑共混而來。根據目標動物的具體需求配制這些共混物。復合飼料可以是提供所有每日所需營養(yǎng)物質的完全飼料、提供日糧(蛋白質、能量)的一部分的濃縮物或僅提供額外的微量營養(yǎng)物質(例如礦物質和維生素)的補充劑。用于復合飼料中的主要成分是飼料谷物，其包括玉米、小麥、加拿大油菜粗粉、菜籽粉、羽扇豆、大豆、高粱、燕麥和大麥。合適的是，本文所提及的預混物可以是由微量成分構成的組合物，所述微量成分為例如維生素、礦物質、化學防腐劑、抗生素、發(fā)酵產物和其他必需成分。預混物通常是適合于摻和進商業(yè)日糧內的組合物。本發(fā)明的任何喂養(yǎng)料可包含一種或多種選自如下的飼料材料：a)谷類，例如小粒谷物(例如小麥、大麥、黑麥、燕麥、黑小麥以及它們的組合)和/或大粒谷物例如玉蜀黍或高粱；b)得自谷類食物的副產品，例如玉米蛋白粉、濕餅(特別是玉米基濕餅)、干酒糟(DDG)(特別是玉米基干酒糟(cDDG))、含可溶物干酒糟(DDGS)(特別是玉米基含可溶物干酒糟(cDDGS))、麥麩、小麥粗粉、小麥次粉、米糠、稻殼、燕麥殼、棕櫚仁和柑橘渣；c)得自如下來源的蛋白質：例如大豆、向日葵、花生、羽扇豆、豌豆、蠶豆、棉花、卡諾拉、魚粉、干血漿蛋白質、肉和骨粉、馬鈴薯蛋白、乳清、干椰肉、芝麻；d)得自植物和動物來源的油和脂肪；e)礦物質和維生素。在一個實施方案中，喂養(yǎng)料包括玉米、DDGS(例如cDDGS)、小麥、麥麩或它們的組合或者由這些物質組成。在一個實施方案中，飼料組分可為玉米、DDGS(例如cDDGS)、小麥、麥麩或它們的組合。在一個實施方案中，喂養(yǎng)料包括玉米、DDGS(例如cDDGS)或它們的組合或者由這些物質組成。在一個實施方案中，飼料組分可為玉米、DDGS(例如cDDGS)或它們的組合。本發(fā)明的喂養(yǎng)料可含有至少30重量％、至少40重量％、至少50重量％或至少60重量％的玉米和大豆粉或玉米及全脂大豆、或者小麥粉或向日葵粉。本發(fā)明的喂養(yǎng)料可包含約5至約40％玉米DDGS。對于家禽——喂養(yǎng)料平均可包含約7至15％玉米DDGS。對于豬類(豬)——喂養(yǎng)料可包含平均5至40％玉米DDGS。本發(fā)明的喂養(yǎng)料可包含玉米(作為單一谷物)，在這種情況下喂養(yǎng)料可包含約35％至80％玉米。在包含混合谷物例如包含例如玉米和小麥的喂養(yǎng)料中，喂養(yǎng)料可包含至少10％玉米。另外或作為另一選擇，本發(fā)明的喂養(yǎng)料可包含至少一種高纖維飼料材料和/或至少一種高纖維飼料材料的至少一種副產品以提供高纖維喂養(yǎng)料。高纖維飼料材料的示例包括：小麥、大麥、黑麥、燕麥，來自谷類的副產物，例如玉米蛋白粉、玉米麩質飼料、濕餅、干酒糟(DDG)、含可溶物干酒糟(DDGS)、麥麩、小麥粗粉、小麥次粉、米糠、稻殼、燕麥殼、棕櫚仁和柑橘渣。一些蛋白質源也可視為高纖維：獲自例如向日葵、羽扇豆、蠶豆和棉花的蛋白質。在一個實施方案中，本發(fā)明的喂養(yǎng)料包含至少一種高纖維材料和/或至少一種選自下列的高纖維飼料材料的至少一種副產品：例如含可溶物干酒糟(DDGS)——特別是cDDGS、濕餅、干酒糟(DDG)——特別是cDDG、麥麩和小麥。在一個實施方案中，本發(fā)明的喂養(yǎng)料包含至少一種高纖維材料和/或至少一種選自下列的高纖維飼料材料的至少一種副產品：例如含可溶物干酒糟(DDGS)——特別是cDDGS、麥麩和小麥。在本發(fā)明中，飼料可為以下項一者或多者：復合飼料和預混物，包括丸粒、堅果或(牲畜)飼用餅；作物或作物殘茬：玉米、大豆、高粱、燕麥、大麥、干椰子肉、稻草、糠、糖用甜菜廢物；魚粉；肉粉和骨粉；糖蜜；油餅和濾餅；低聚糖；糖漬飼用植物：青貯飼料；海草；種子和谷物，整體地或通過壓碎、碾磨等制備；發(fā)芽谷物及豆類；酵母提取物。在一些實施方案中，本發(fā)明中的術語“飼料”涵蓋寵物食品。寵物食品是旨在由寵物食用的植物或動物材料，例如狗食品或貓食品。寵物食品(例如狗和貓食品)可以干燥形式(例如用于狗的磨碎食物)或濕罐裝形式。貓食品可含有氨基酸?；撬帷Ｔ谝恍嵤┓桨钢?，本發(fā)明中的術語“飼料”涵蓋魚食物。魚食物通常含有使養(yǎng)殖魚保持健康所需的主要營養(yǎng)物質、痕量元素和維生素。魚食物可以是小片、丸?；蚱男问?。壓成丸粒的形式(其中的一些快速沉降)經常用于較大魚或底飼物種。一些魚食物還含有諸如β胡蘿卜素或性激素之類的添加劑，以人工增強觀賞性魚的顏色。在一些實施方案中，本發(fā)明中的術語“飼料”涵蓋鳥食物。鳥食物包括用于喂鳥器中以及用于飼喂寵物鳥的食物。通常，鳥食物由多種種子組成，但也可涵蓋板油(牛或羊脂肪)。如本文所用，術語“接觸”是指將本發(fā)明的酶(或包含酶的組合物)間接或直接施加至產品(例如飼料)中?？墒褂玫氖┘臃椒ǖ氖纠ǖ幌抻冢涸诎暳咸砑觿┙M合物的材料中處理產品、通過將飼料添加劑組合物與產品混合而直接施加、將飼料添加劑組合物噴涂至產品表面上或將產品浸入飼料添加劑組合物的制劑中。在一個實施方案中，優(yōu)選將本發(fā)明的飼料添加劑組合物與產品(例如喂養(yǎng)料)混合。另選地，喂養(yǎng)料的乳液或原始成分中可包括飼料添加劑組合物。對于一些施加而言，重要的是，使組合物在待影響/處理的產品表面上可用或可用于待影響/處理的產品表面。這使得組合物能賦予如下有利特性中的一者或多者：性能益處?？墒┘颖景l(fā)明的合成木聚糖酶(或包含合成木聚糖酶的組合物)以使產品(例如喂養(yǎng)料或喂養(yǎng)料的原始成分)散布、包覆和/或浸漬有控制量的所述酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，使本發(fā)明的酶(或包含酶的組合物)均勻化以產生粉末。在一另選的優(yōu)選實施方案中，將本發(fā)明的酶(或包含酶的組合物)配制成如WO2007/044968(稱作TPT顆粒)或WO1997/016076或WO1992/012645中所述的顆粒，將這些文獻以引用方式并入本文中。在另一優(yōu)選的實施方案中，在將飼料添加劑組合物配制成顆粒時，這些顆粒包含包覆在蛋白質芯上的水合屏障鹽。這種鹽包衣的優(yōu)點在于使耐熱性改善、使保藏穩(wěn)定性改善和保護免受其他原本會不利影響該酶的飼料添加劑的影響。優(yōu)選地，用于鹽包衣的鹽在20℃下具有大于0.25的水活度或大于60％的恒定濕度。優(yōu)選地，鹽包衣包含Na2SO4。制備本發(fā)明的酶(或包含酶的組合物)的方法還可包括將粉末制粒的另外步驟。粉末可以與本領域已知的其他組分進行混合?？善仁狗勰┗虬勰┑幕旌衔锿ㄟ^模具，并將所得的料條切成可變長度的合適丸粒。任選地，制丸步驟可包括在形成丸粒之前進行的蒸汽處理或調理階段?？蓪勰┑幕旌衔镏糜谡{理機中，例如帶蒸汽噴射的混合機。將混合物在調理機中加熱至指定溫度，例如從60℃至100℃，典型的溫度可為70℃、80℃、85℃、90℃或95℃。停留時間可由幾秒變至幾分鐘、甚至幾小時。如5秒鐘、10秒鐘、15秒鐘、30秒鐘、1分鐘、2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘和1小時。應當理解，本發(fā)明的酶(或包含酶的組合物)適于添加至任何適當的飼料材料中。技術人員會認識到，不同的動物要求不同的喂養(yǎng)料，甚至同一種動物也可能要求不同的喂養(yǎng)料，這取決于飼養(yǎng)該動物的目的。任選地，喂養(yǎng)料還可含有額外的礦物質(例如鈣)和/或額外的維生素。優(yōu)選地，喂養(yǎng)料為玉米大豆粉混合物。在一個實施方案中，優(yōu)選地，飼料不是寵物食品。在另一個方面，提供了生產喂養(yǎng)料的方法。喂養(yǎng)料通常在飼料磨機中生產，在磨機中首先將原料研磨成合適的粒度，然后與適當的添加劑混合。喂養(yǎng)料隨后可以作為糊料或粒料制備；后者通常涉及這樣的方法：將溫度升高至目標水平，然后使飼料通過模具以制備出特定大小的粒料。讓丸粒冷卻。隨后，可添加液體添加劑諸如脂肪和酶。喂養(yǎng)料的制備還可涉及額外的步驟，其包括在制丸之前的擠出或膨脹–特別是通過可包括至少使用蒸汽的合適技術來進行。喂養(yǎng)料可為用于單腹動物的喂養(yǎng)料，例如家禽(例如，肉雞、下蛋雞、肉用種雞、火雞、鴨、鵝、水禽)、和豬類(所有年齡類別)、反芻動物例如牛(例如，奶?；蚬?包括牛犢))、馬、綿羊、寵物(例如，狗、貓)或魚(例如，無胃魚、胃魚、淡水魚例如鮭魚、鱈魚、鱒魚和鯉魚如錦鯉魚、海魚如黑鱸、和甲殼類動物例如蝦、貽貝和扇貝)。優(yōu)選地，將喂養(yǎng)料用于家禽。玉米基喂養(yǎng)料在一個優(yōu)選的實施方案中，喂養(yǎng)料可為玉米基喂養(yǎng)料。如本文所用，術語“玉米基喂養(yǎng)料”意指包含玉米(玉蜀黍)或玉米副產物或由這些物質組成的喂養(yǎng)料。優(yōu)選地，玉米基喂養(yǎng)料包含玉米或玉米副產物作為主要成分。例如，玉米基喂養(yǎng)料可包含至少35％玉米或玉米副產物，例如至少40％玉米或玉米副產物、例如至少50％玉米或玉米副產物、例如至少60％玉米或玉米副產物、例如至少70％玉米或玉米副產物、例如至少80％玉米或玉米副產物、例如至少90％玉米或玉米副產物、例如至少100％玉米或玉米副產物。在一些實施方案中，玉米基喂養(yǎng)料可包含玉米或玉米副產物作為次要成分；在該情況下喂養(yǎng)料可補充有玉米或玉米副產物。僅以舉例的方式，喂養(yǎng)料可包含例如補充有玉米或玉米副產物的小麥。當玉米或玉米副產物為喂養(yǎng)料的次要成分時，玉米或玉米副產物為喂養(yǎng)料的至少5％、優(yōu)選至少10％、優(yōu)選至少20％、優(yōu)選至少30％。為了避免歧義，如本文所用術語“玉米(corn)”與玉米(maize)例如玉蜀黍(Zeamays)同義。在一個實施方案中，玉米的副產物可為玉米含可溶物干酒糟(cDDGS)或玉米濕餅或玉米干酒糟(DDG)或玉米蛋白粉或玉米麩質飼料或它們的組合。在一個實施方案中，優(yōu)選地，本發(fā)明的含阿拉伯聚糖材料包括玉米副產物，例如玉米含可溶物干酒糟(cDDGS)或玉米濕餅或玉米干酒糟(DDG)或玉米蛋白粉或玉米麩質飼料或它們的組合。小麥基喂養(yǎng)料在一個優(yōu)選的實施方案中，喂養(yǎng)料可為小麥基喂養(yǎng)料。如本文所用，術語“小麥基喂養(yǎng)料”意指包含小麥或小麥副產物或由這些物質組成的喂養(yǎng)料。優(yōu)選地，小麥基喂養(yǎng)料包含小麥或小麥副產物作為主要成分。例如，小麥基喂養(yǎng)料可包含至少40％小麥或小麥副產物、例如至少60％小麥或小麥副產物、例如至少80％小麥或小麥副產物、例如至少90％小麥或小麥副產物、例如100％小麥或小麥副產物。在一些實施方案中，小麥基喂養(yǎng)料可包含小麥或小麥副產物作為次要成分；在該情況下喂養(yǎng)料可補充有小麥或小麥副產物。僅以舉例的方式，喂養(yǎng)料可包含例如補充有小麥或小麥副產物的小麥。當小麥或小麥副產物為喂養(yǎng)料的次要成分時，小麥或小麥副產物為喂養(yǎng)料的至少5％、優(yōu)選至少10％、優(yōu)選至少20％、優(yōu)選至少30％。在一個實施方案中，小麥副產物可為例如小麥麩皮、小麥麥麩、小麥纖維。麩皮為谷物的堅硬外層并由結合的糊粉與果皮組成。其與胚芽一起為全谷物的主要部分，并且通常在細糧生產中作為研磨的副產物而產生。當從谷物除去麩皮時，谷物喪失部分其營養(yǎng)價值。麩皮存在于任何谷粒中并可由任何谷粒研磨而來，這些谷粒包括稻、玉米(玉蜀黍)、燕麥、大麥和粟。麩皮尤其富含于膳食纖維和必需脂肪酸中并包含顯著量的淀粉、蛋白質、維生素和膳食礦物質。小麥麥麩為小麥麩皮的粗顆粒和細顆粒以及得自“碾磨尾部”的小麥粉頭、麥芽精、面粉和碎屑的細顆粒。小麥麥麩為人類食物和動物飼料的廉價中間副產物。在一個實施方案中，優(yōu)選地，本發(fā)明的含阿拉伯聚糖材料包含小麥麩皮和/或小麥麥麩。濕餅、干酒糟(DDG)和含可溶物干酒糟(DDGS)在通過谷物蒸餾工業(yè)所用的方法從酵母發(fā)酵的谷物或谷物混合物中蒸餾除去乙醇之后，濕餅、干酒糟和含可溶物干酒糟為獲得的產物。將得自蒸餾的釜餾物(例如包含水、谷物剩余物、酵母細胞等)分離為“固體”部分和液體部分。固體部分稱為“濕餅”并且可作為動物飼料原樣使用。液體部分(部分地)蒸發(fā)成漿(可溶性)。當將濕餅干燥時，其為干酒糟(DDG)。當將濕餅與漿(可溶性)一起干燥時，其為含可溶物干酒糟(DDGS)。濕餅可用于乳牛場作業(yè)以及肉牛飼養(yǎng)場。經干燥DDGS可用于牲畜(例如乳牛、牛和豬)飼料和家禽飼料。玉米DDGS是用于乳牛的極佳蛋白質源。玉米蛋白粉在一個方面，玉米副產物可為玉米蛋白粉(CGM)。CGM為玉米研磨工業(yè)的粉末狀副產物。CGM例如在動物飼料中具有實用性。其可用作飼料例如寵物食品、牲畜飼料和家禽飼料的廉價蛋白質源。其特別是氨基酸半胱氨酸的優(yōu)良來源，但是必須與其它蛋白質如賴氨酸相平衡。飼料添加劑組合物本發(fā)明的飼料添加劑組合物和/或包含它們的喂養(yǎng)料可以任何合適的形式使用。本發(fā)明的飼料添加劑組合物可以固體或液體制劑或其另選形式使用。固體制劑的示例包括散劑、糊劑、大丸粒、膠囊劑、丸粒、片劑、粉劑和顆粒劑，其可以是可潤濕的、噴霧干燥的或冷凍干燥的。液體制劑的示例包括但不限于水性、有機或水性-有機溶液劑、混懸劑和乳劑。在一些應用中，可將本發(fā)明的飼料添加劑組合物與飼料混合或施用于飲用水中。在一個方面，本發(fā)明涉及一種制備飼料添加劑組合物的方法，包括使如本文提出的木聚糖酶與飼料可接收載體、稀釋劑或賦形劑混合，并(任選地)封裝。預混物可使喂養(yǎng)料和/或飼料添加劑組合物與至少一種礦物質和/或至少一種維生素混合。由此得到的組合物可在本文稱為預混物。麥芽制造及釀造本發(fā)明的合成木聚糖酶(或包含合成木聚糖酶的組合物)可用于麥芽制造及釀造。大麥谷物包含1.7至4.1％(w/w)水可提取的β-葡聚糖和總共3.6至6.4％(w/w)β-葡聚糖(Anderson,M.A.,Cook,J.A.,&Stone,B.A.,JournaloftheInstituteofBrewing,1978,84,233-239；Henry,J.,JournaloftheScienceofFoodandAgriculture,1985,36,1243)。小麥谷物包含0.1至0.8％(w/w)水可提取的β-葡聚糖和總共0.6至1.4％(w/w)β-葡聚糖(Anderson,M.A.等人(1978)同上)。阿拉伯聚糖(AXsol)和β-葡聚糖的有效水解很重要，因為此類化合物可涉及到制備問題，例如麥芽汁粘度(Ducroo,P.&Frelon,P.G.,ProceedingsoftheEuropeanBreweryConventionCongress,Zurich,1989,445；R.J.&Voragen,A.G.J.,JournaloftheInstituteofBrewing,1993,99,243)以及可濾性和渾濁形成(Coote,N.&Kirsop,B.H.1976.,JournaloftheInstituteofBrewing,1976,82,34；Izawa,M.,Kano,Y.&Kanimura,M.1991.ProceedingsAviemoreConferenceonMalting,brewingandDistillling,1990,427)。本發(fā)明提供一種在麥芽制造及釀造期間水解阿拉伯聚糖(例如AXinsol和AXsol)的方法，其中使小麥粒、大麥?；蛩鼈兊慕M合、或部分小麥和/或大麥粒與本發(fā)明的合成木聚糖酶混合。在一個方面，本發(fā)明可涉及一種作為飲料的食品組合物，包括但不限于包含根據本發(fā)明的合成木聚糖酶的發(fā)酵飲料，例如啤酒和葡萄酒。在另一個方面，本發(fā)明可涉及一種作為飲料的食品組合物，包括但不限于包含根據本發(fā)明的合成木聚糖酶的發(fā)酵飲料，例如啤酒和葡萄酒。在本發(fā)明的語境中，術語“發(fā)酵飲料”意指包括由包括發(fā)酵工藝例如微生物發(fā)酵(例如細菌和/或酵母發(fā)酵)的方法所產生的任何飲料。在本發(fā)明的一個方面，發(fā)酵飲料為啤酒。術語“啤酒”意指包括通過發(fā)酵/釀造含淀粉植物材料而產生的任何發(fā)酵麥芽汁。通常，啤酒由麥芽或作為含淀粉植物材料的輔料、或麥芽與輔料的任何組合產生。如本文所用，術語“麥芽”被理解為任何發(fā)芽的谷類谷粒，如發(fā)芽的大麥或小麥。如本文所用，術語“輔料”是指不是麥芽例如大麥或小麥粉的任何含有淀粉和/或糖的植物材料。作為輔料的示例，可以提及可用作淀粉來源的材料，例如普通玉米糝、精制玉米糝、制啤酒用研磨酵母、稻米、高粱、精制玉米淀粉、大麥、大麥淀粉、去殼大麥、小麥、小麥淀粉、烘培谷類、谷類片、黑麥、燕麥、玉米(玉蜀黍)、馬鈴薯、木薯、木薯粉和糖漿例如玉米糖漿、甘蔗糖漿、轉化糖漿、大麥和/或小麥糖漿等等。如本文所用，術語“麥芽漿”(例如如本文所用，與麥芽制造及釀造相關)是指任何含有淀粉和/或糖的植物材料如谷粉(例如包括壓碎的大麥麥芽、壓碎的大麥)和/或其他輔料或它們的組合的含水漿料，隨后與水混合以分離成麥芽汁和廢糟。如本文所用，術語“麥芽汁”是指在淀粉糖化過程中對谷粉進行提取后未發(fā)酵的液體流出物(run-off)。在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備發(fā)酵飲料例如啤酒的方法，其包括使本發(fā)明的合成木聚糖酶與麥芽或輔料混合。啤酒的示例包括：全麥芽啤酒、根據“純凈法(Reinheitsgebot)”釀造啤酒、愛爾啤酒、IPA、陳貯啤酒、苦啤酒、發(fā)泡酒(次級啤酒)、三級啤酒、干啤、薄啤酒、淡啤酒、低醇啤酒、低熱量啤酒、波特啤酒、黑啤酒、陶特啤酒、麥芽酒、無醇啤酒、無醇麥芽酒等，而且包括另選的谷物和麥芽飲料，例如果味麥芽飲料例如柑橘味(如檸檬-、橙-、酸橙味)，或漿果風味的麥芽飲料、酒調味麥芽飲料例如伏特加-、浪姆酒-、或特奎拉酒-風味的麥芽酒、或咖啡味的麥芽飲料如咖啡味麥芽酒等。谷物基材料的分解(例如用于生物燃料生產)可使用本發(fā)明的或如本文所公開的合成酶(或包含合成酶的組合物)在由例如谷物基材料進行谷物加工期間分解(降解)AXinsol和AXsol。谷物基材料可為全谷物(例如全小麥、大麥、黑麥、黑小麥或玉米?；蛩鼈兊幕旌衔?或部分全谷物、或它們的混合物。在一個實施方案中，可使用本發(fā)明的或如本文所公開的合成酶(或包含合成酶的組合物)來分解(降解)谷物基材料或全谷物中的AXinsol和AXsol。為了避免歧義，全谷物可通過機械方式破碎。谷物基材料可分解或降解為葡萄糖。葡萄糖可隨后用作任何發(fā)酵工藝例如生物燃料(例如生物乙醇)生產和/或生化物質(例如生物基異戊二烯)生產的原料。谷物基材料可為用于生物燃料(例如生物乙醇)生產工藝的原料。現今，大多數燃料乙醇由經研磨、淀粉酶處理(以將淀粉水解為糖)、發(fā)酵以及蒸餾的玉米(玉蜀黍)粒制得。雖然已在降低乙醇生產成本方面取得重大進展，但仍然存在著巨大挑戰(zhàn)。仍然需要改進的技術來降低用于乙醇生產的生物燃料原料的成本。例如，在谷物基乙醇生產中，阿拉伯聚糖的降解可增大淀粉的易獲性。本發(fā)明提供了一種用于分解半纖維素例如阿拉伯聚糖——特別是AXinsol和AXsol的合成木聚糖酶。僅以舉例的方式，在歐洲燃料醇工業(yè)中，小粒谷類如小麥、大麥和黑麥為常見的原材料，而在US中則主要使用玉米。小麥、大麥和黑麥基本上包含淀粉、高含量非淀粉多糖聚合物(NSP)，如纖維素、β-葡聚糖和半纖維素。用于表示不同NSP的比率對于每種飼料是不同的。下表示出相較于一些其它飼料，小麥、大麥和黑麥中不同量的NSP。表1：存在于不同的飼料中的非淀粉多糖(NSP)(gkg-1干物質)1非纖維素多糖：戊聚糖、(阿拉伯)木聚糖及其它半纖維素NSP可賦予谷物麥芽漿較高的粘度。高粘度對乙醇生產有負面影響，因為其將限制可在釀造中使用的固體濃度并且其將降低工藝的能量效率。此外，在整個工藝中存在的殘留半纖維素可導致在換熱器和蒸餾設備中結垢。當麥芽漿冷卻至發(fā)酵溫度(32℃)時，觀察到高粘度的最大影響。這就解釋了為什么需要在冷卻步驟之前于工藝的任何地方降低粘度。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于降解谷物基材料的方法包括使如本文所公開的合成木聚糖酶盡早地在生物燃料(例如生物乙醇)生產工藝中混合，例如優(yōu)選地在工藝開始時谷物基材料混合期間。在工藝的早期階段添加如本文所公開的經修飾木聚糖酶的一個優(yōu)點在于酶打破初始粘度。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于降解谷物基材料的方法包括在液化、糖化、發(fā)酵之前或期間，糖化和發(fā)酵的同時，發(fā)酵之后或它們的組合使如本文所公開的合成木聚糖酶混合。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于降解谷物基材料的方法包括在液化期間(例如混合之后的高溫步驟)使如本文所公開的合成木聚糖酶混合。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明涉及在例如生物燃料(例如生物乙醇)生產工藝中降解谷物基材料時降低粘度。當例如在生物乙醇生產工藝中降解谷物基材料時，使用本文提出的合成木聚糖酶來降低粘度有多種益處；·可在工藝中使用更高水平的干物質麥芽漿·可獲得固體含量更高的最終漿·熱傳遞更好，能量需求更低·蒸發(fā)器結垢減少，從而降低清潔成本·最終乙醇收率增大·DDGS(副產物)質量改善·在釜餾物分離期間(在蒸餾之后)固體和液體部分之間更好的分離。更低的粘度增大分離效率。本發(fā)明的另一個顯著優(yōu)點在于用于生物燃料生產的本文所述合成木聚糖酶還可導致得自該工藝的(副)產物，例如濕餅、干酒糟(DDG)或含可溶物干酒糟(DDGS)得到改善。因此，本發(fā)明的一個優(yōu)點在于，由于濕餅、DDG和DDGS是生物燃料(例如生物乙醇)生產的(副)產物，所以使用本發(fā)明可導致這些(副)產物的質量得到改善。例如，在生物燃料生產過程期間，(副)產物中的阿拉伯聚糖可以已被溶解。谷物(例如小麥)谷朊蛋白-淀粉分離可使用本發(fā)明的或如本文所公開的合成木聚糖酶(或包含合成木聚糖酶的組合物)在小麥淀粉和谷朊蛋白分離期間分解(降解)AXinsol和AXsol。在小麥麩皮和胚乳與胚芽的初始分離之后，分級為淀粉和谷朊蛋白級分的小麥胚乳粉在工業(yè)上得到大規(guī)模應用，以獲得高質量的A淀粉和副產物B淀粉和活性谷朊蛋白。在本發(fā)明中，谷類面粉(例如小麥粉)的降解產物為淀粉(高質量A淀粉)。此外，還產生了副產物B淀粉和活性谷朊蛋白。然后對各個單獨產物進行進一步加工，以補充或改進市場需要的食品特征。存在文獻所述的工業(yè)使用的幾種小麥分離方法。這些工業(yè)工藝主要區(qū)別在于提供給分離設備(離心機、水力旋流器、或篩網)的面粉-水混合物的形式、或初始反應條件如溫度和施加的剪切作用(AbdulvahitSayaslan,Lebensm.-Wiss.U.-Technol37(2004)499-515,Wetmillingofwheatflour:industrialprocessesandsmall-sacaletestmethods)。在用于將谷類面粉(例如小麥粉)分離為淀粉和谷朊蛋白級分的方法中，該方法包括使谷類面粉(例如小麥粉)、水和合成木聚糖酶混合。谷類面粉、水和合成木聚糖酶可同時或順次混合。在一些實施方案中，可使谷類面粉(例如小麥粉)和水在與合成木聚糖酶混合之前先進行混合。一般來講，在約20-45℃溫度下將谷類面粉(例如小麥粉)混合成生面團或面糊(在35至63％干固體之間變化)。然后通過以下步驟進一步加工混合物：1)使混合物靜置一段時間(約30分鐘)，隨后用篩網、離心機或水力旋流器從混合物中洗去淀粉，以從谷朊蛋白中分離淀粉乳，或者2)向混合物施加剪切力，任選地進一步稀釋混合物，然后通過水力旋流器、或2-或3-相沉降式離心機來分離小麥粉。如本文所用，術語“干固體”意指基于干重的漿液的總固體(溶解的和未溶解的)(以％計)。在本發(fā)明的一個實施方案中，受權利要求書保護的方法或用途可包括在約20℃至約45℃溫度下使小麥粉混合的步驟以形成35-63％干固體的生面團或面糊，并從谷朊蛋白中分離淀粉。本發(fā)明的方法可進一步包括：a)使混合物靜置約30分鐘，隨后用篩網、離心機或水力旋流器從混合物中洗去淀粉，以從谷朊蛋白中分離淀粉乳；或者b)向混合物施加剪切力并任選地進一步稀釋混合物，使用水力旋流器、或2-或3-相沉降式離心機來從谷朊蛋白中分離淀粉。本發(fā)明提供了通過在面粉和水的初始混合步驟期間按照用于小麥淀粉分離的上述各種方法適當地添加如本文提出的合成木聚糖酶來改善淀粉和谷朊蛋白的分離。分離通過在初始混合步驟期間添加合成木聚糖酶得到改善，這是因為粘度降低以及干擾谷朊蛋白顆粒的AXsol和/或AXinsol被水解。通過降解這些多糖和低聚糖，谷朊蛋白附聚增強，從而改善了谷朊蛋白收率(S.A.Frederix,C.M.Courtin,J.A.Delcour,J.CerealSci.40(2004)41-49,Substrateselectivityandinhibitorsensitivityaffectxylanasefunctionalityinwheatflourgluten-starchseparation)。本發(fā)明的一個優(yōu)點在于導致較高的A淀粉收率和/或更優(yōu)質量的谷朊蛋白(例如更優(yōu)質量的活性谷朊蛋白)。本發(fā)明的一個優(yōu)點在于改善了小麥谷朊蛋白-淀粉分離。評估谷朊蛋白質量的一個方式是通過監(jiān)測谷朊蛋白附聚。當通過捏合生面團或混合面糊來施用一定量的級分時，谷朊蛋白顆粒趨于附聚為較大顆粒，形成聚合物網絡，稱為“活性谷朊蛋白”?？蓪ⅰ盎钚怨入玫鞍住碧砑拥绞称分幸愿纳票嚎局破返奶匦?，例如生面團強度、儲存壽命和面包體積(L.Day,M.A.Augustin,I.L.BateyandC.W.Wrigley；Wheat-glutenusesandindustryneeds；TrendsinFoodScience&Technology17(2006)82-90)。在烘焙工業(yè)中，采用Glutomatic通過ICC標準分析No.155(AACC38-12)來測定小麥面中谷朊蛋白的質量和量。在該設備中，由與少量2％NaCl溶液(4.2-4.8ml)混合的小麥粉(10.0克)形成生面團。在20秒的混合步驟之后，生面團不斷被捏合，同時采用在室溫(約22℃)下在約70ml/分鐘的流速下通過混合杯泵送的2％NaCl溶液洗滌5分鐘。在該洗滌步驟期間，收集含有淀粉的洗滌水并且谷朊蛋白顆粒在Glutomatic篩架內形成谷朊蛋白團塊。谷朊蛋白的質量通過評估谷朊蛋白附聚來測定。這通過在包含小篩網的專用離心機中離心谷朊蛋白團塊進行。對通過該篩網的谷朊蛋白顆粒(較小谷朊蛋白)進行稱重并對谷朊蛋白總量進行稱重。谷朊蛋白指數計算為(總濕谷朊蛋白-較小的濕谷朊蛋白)/總濕谷朊蛋白。谷朊蛋白附聚提高越大，小谷朊蛋白級分將越小，并且谷朊蛋白指數值越高。理論最大值為100％的高谷朊蛋白指數表明高質量的谷朊蛋白團塊。對谷朊蛋白的量進行定量的另一個值為干谷朊蛋白收率(％)。該值通過用總干谷朊蛋白克數除以用于實驗的干面粉總量來計算?；厥盏母晒入玫鞍自蕉?，分離就越好。該工業(yè)測定目前適于模擬用于工業(yè)的生面團分離工藝。劑量優(yōu)選地，合成木聚糖酶以約500XU/kg至約16,000XU/kg含木聚糖材料(例如喂養(yǎng)料)、更優(yōu)選約750XU/kg飼料至約8000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、優(yōu)選約1500XU/kg飼料至約3000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、優(yōu)選約2000XU/kg飼料至約2500XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、并甚至更優(yōu)選約1000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)至約4000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)的范圍存在于含木聚糖材料(例如飼料)中。在一個實施方案中，合成木聚糖酶以多于約500XU/kg含木聚糖材料(例如喂養(yǎng)料)、適宜地多于約600XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約700XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約800XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約900XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約1000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約2000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約2500XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地多于約3000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)存在于含木聚糖材料(例如飼料)中。在一個實施方案中，合成木聚糖酶以約2000XU/kg至約2500XU/kg的濃度存在于含木聚糖材料(例如喂養(yǎng)料)中。在一個實施方案中，合成木聚糖酶以少于約16,000XU/kg含木聚糖材料(例如喂養(yǎng)料)、適宜地少于約8000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地少于約7000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地少于約6000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地少于約500XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)、適宜地少于約4000XU/kg含木聚糖材料(例如飼料)存在于含木聚糖材料(例如飼料)中。優(yōu)選地，合成木聚糖酶可以以約100XU/g至約320,000XU/g組合物，更優(yōu)選約300XU/g組合物至約160,000XU/g組合物，并甚至更優(yōu)選約500XU/g組合物至約50,000XU/g組合物，并甚至更優(yōu)選約500XU/g組合物至約40,000XU/g組合物的范圍存在于飼料添加劑組合物中。在一個實施方案中，合成木聚糖酶以超過約100XU/g組合物、適宜地超過約200XU/g組合物、適宜地超過約300XU/g組合物、適宜地超過約400XU/g組合物、適宜地超過約500XU/g組合物存在于飼料添加劑組合物中。在一個實施方案中，合成木聚糖酶以低于約320,000XU/g組合物、適宜地低于約160,000XU/g組合物、適宜地低于約50,000XU/g組合物、適宜地低于約40,000XU/g組合物、適宜地低于約30000XU/g組合物存在于飼料添加劑組合物中。木聚糖酶活性可以以在pH5.0下用AZCL-阿拉伯聚糖(天青精-交聯的小麥阿拉伯木聚糖，Xylazyme片劑，Megazyme)作為底物測得的木聚糖酶單位(XU)表示。由內切-(1-4)-β-D-木聚糖酶(木聚糖酶)水解產生水溶性染色片段，并且釋放這些的速度(在590nm處吸光度增大)可與酶活性正相關。在標準反應條件(40℃、McIlvaine緩沖液中5分鐘反應時間、pH5.0)下，相對于酶標準品(Danisco木聚糖酶，購自DaniscoAnimalNutrition)來測定木聚糖酶單位(XU)。標準酶的木聚糖酶活性測定為在pH5.3和50℃下每分鐘從燕麥-斯佩爾特小麥-木聚糖底物釋放的還原糖端基的量。還原糖端基與3,5-二硝基水楊酸反應并且反應產物的形成可測為在540nm處吸光度的增大。酶活性相對于木糖標準曲線(還原糖當量)進行定量。一個木聚糖酶單位(XU)為在5.3和50℃下每分鐘釋放0.5μmol還原糖當量的標準酶的量。在一個實施方案中，合適地，使用上述E.C.分類對酶進行分類，并且E.C.分類指示在本文所教導的測定法中進行測試以測定1XU時具有該活性的酶。優(yōu)選地，在小麥淀粉分離工藝的混合步驟中，合成木聚糖酶以約0.01kg/MTDS生面團或面糊至約0.60kg/MTDS、更優(yōu)選約0.05kg/MTDS至約0.45kg/MTDS生面團或面糊，并甚至更優(yōu)選約0.10kg/MTDS至約0.25kg/MTDS生面團或面糊的范圍存在于生面團或面糊中。在一些實施方案中(特別是小麥淀粉分離實施方案中)，合成木聚糖酶的用量可在約0.019g蛋白質/MTDS小麥粉(其等同于0.019mg/kgDS)至約119g蛋白質/MTDS小麥粉(其等同于119mg/kgDS)的范圍內——其中DS意指干固體含量并且MT意指公噸。在一些實施方案中(特別是小麥淀粉分離實施方案中)，合成木聚糖酶的用量可為約1.19g蛋白質/MTDS小麥粉(其等同于約1.19mg/kgDS)——其中DS意指干固體含量并且MT意指公噸。在一些實施方案中(特別是小麥淀粉分離實施方案中)，合成木聚糖酶的用量可在約9至約120000單位/kg小麥粉，適宜地約500-2400單位/kg小麥粉，適宜地約900-1200單位/kg小麥粉的范圍內(其中1單位定義為在下文提出的樺木測定條件下，每分鐘需要產生1微摩爾木糖還原糖等效物的酶量)。樺木測定采用得自樺木的1％木聚糖(Sigma95588)或得自小麥粉的1％阿拉伯聚糖(MegazymeP-WAXYM)作為底物來測定酶的木聚糖酶活性。在50℃下，測定在50mM檸檬酸鈉(pH5.3)、0.005％吐溫-80緩沖液中進行10分鐘。釋放的還原糖通過與3,5-二硝基水楊酸反應并測量540nm處的吸光度來定量。酶活性相對于木糖標準曲線來定量。在該測定中，一個木聚糖酶單位(XU)定義為在測定條件下每分鐘產生1微摩爾的木糖還原糖當量所需的酶量。在一些實施方案中(特別是降解谷物基材料中)，合成木聚糖酶的用量可在約0.29g蛋白質/MTDS小麥(其等同于0.29mg/kgDS)至約0290/g蛋白質/MTDS小麥(其等同于290mg/kgDS)的范圍內。在一些實施方案中(特別是降解谷物基材料中)，木聚糖酶的用量可為2.9g/蛋白質/MTDS小麥(其等同于2.9mg/kgDS)。在一些實施方案中(特別是降解谷物基材料中)，木聚糖酶的用量可在約22至約285000單位/kg，適宜地約1100至約5700單位/kg，適宜地約2200至約2850單位/kg的范圍內(其中1單位定義為在上文提出的樺木測定條件下，每分鐘需要產生1微摩爾木糖還原糖等效物的酶量)。根據本發(fā)明的合成酶和/或包含合成酶的組合物可設計用于一次給予或設計用于每日使用(例如飼喂)。待用于本發(fā)明的合成酶和/或包含合成酶的組合物的最佳量將取決于待處理的產品和/或產品與組合物的接觸方法和/或其預期用途。用于組合物中的合成酶的量應為足以有效的量。用于組合物的合成酶的量應為足夠量，以有效地且足夠保持有效地例如改善飼喂含有該組合物的飼料產品的動物的性能。該有效的時間長度應延伸最多至至少利用該產品(例如飼料添加劑組合物或含有其的飼料)的時間。制劑在一個實施方案中，可將合成酶配制為液體、干粉或顆粒。干粉或顆?？赏ㄟ^本領域技術人員已知的手段，例如，在頂噴式流化床包覆器中、在Wurster型底噴式流化床(buttomsprayWurster)中或通過轉鼓制粒(例如高剪切制粒)、擠出、衣鍋包衣或在微成分混合器中制備。對于一些實施方案而言，可包覆(例如囊封)合成酶。在一個實施方案中，包衣保護合成木聚糖酶免受熱影響并且可視為防熱劑。在一個實施方案中，將飼料添加劑組合物配制成干粉或顆粒，如WO2007/044968(稱為TPT顆粒)或WO1997/016076或WO1992/012645中所述(將參考文獻中的每一者以引用方式并入本文中)。在一個實施方案中，可將飼料添加劑組合物配制成用于飼料組合物的顆粒，其包括：芯活性劑；和至少一個包衣，在選自如下中的一種或多種的條件后，顆粒的活性劑保留至少50％活性、至少60％活性、至少70％活性、至少80％活性：a)飼料制丸工藝，b)蒸汽加熱的飼料預處理工藝，c)儲存，d)作為未經制丸混合物中的成分儲存，和e)作為包含至少一種選自如下的化合物的飼料基礎混合物或飼料預混物中的成分儲存：痕量礦物質、有機酸、還原糖、維生素、氯化膽堿以及產生酸性或堿性飼料基礎混合物或飼料預混物的化合物。關于顆粒，至少一個包衣可包含構成顆粒的至少55w/w％的水分水合材料；和/或至少一個包衣可包括兩個包衣。該兩個包衣可為水分水合包衣和水分屏障包衣。在一些實施方案中，水分水合包衣可為顆粒的25w/w％至60w/w％之間并且水分屏障包衣可為顆粒的2w/w％至15w/w％之間。水分水合包衣可選自無機鹽、蔗糖、淀粉和麥芽糖糊精而水分屏障包衣可選自聚合物、樹膠、乳清和淀粉。顆粒可使用飼料制丸工藝制備并且飼料預處理工藝可在70℃至95℃之間進行最多數分鐘，例如85℃至95℃之間。在一個實施方案中，可將飼料添加劑組合物配制成用于動物飼料的顆粒，其包括：芯；活性劑，在儲存之后及在該顆粒作為一種成分的蒸汽加熱制粒工藝之后，顆粒的活性劑保留至少80％活性；水分屏障包衣；和水分水合包衣，其為顆粒的至少25％w/w，該顆粒在蒸蒸汽加熱制粒工藝之前具有小于0.5的水活性。顆粒可具有選自聚合物和樹膠的水分屏障包衣并且水分水合材料可為無機鹽。水分水合包衣可為顆粒的25w/w％至45w/w％之間并且水分屏障包衣可為顆粒的2w/w％至10w/w％之間。顆?？墒褂谜羝訜嶂仆韫に囍苽洌摴に嚳稍?5℃至95℃之間進行最多數分鐘。在一些實施方案中，可用稀釋劑(例如淀粉粉末、石灰石或諸如此類)稀釋酶。在一個實施方案中，合成酶或包含合成酶的組合物處于適于食用的液體制劑中，優(yōu)選地，該液體食用物含有如下中的一者或多者：緩沖劑、鹽、山梨醇和/或甘油。在另一個實施方案中，可通過將一種或多種酶施加(例如噴涂)于載體基材(例如碾碎的小麥)上來配制合成酶或包含合成酶的組合物。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的合成酶或包含合成酶的組合物可配制為預混物。僅舉個例子，該預混物可包含一種或多種飼料組分，例如一種或多種礦物質和/或一種或多種維生素。在一個實施方案中，可將用于本發(fā)明的合成酶與至少一種選自如下中的至少一者的生理學上可接受的載體一起配制：麥芽糖糊精、石灰石(碳酸鈣)、環(huán)糊精、小麥或小麥組分、蔗糖、淀粉、Na2SO4、滑石粉、PVA、山梨醇、苯甲酸鹽、山梨酸鹽、甘油、蔗糖、丙二醇、1,3-丙二醇、葡萄糖、對羥基苯甲酸酯、氯化鈉、檸檬酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、鈣、偏亞硫酸氫鹽、甲酸鹽以及它們的混合物。封裝在一個實施方案中，對根據本發(fā)明的合成酶和/或包含其的組合物(例如飼料添加劑組合物)和/或預混物和/或飼料或喂養(yǎng)料進行包裝。在一個優(yōu)選的實施方案中，將飼料添加劑組合物和/或預混物和/或飼料或喂養(yǎng)料包裝于袋(例如紙袋)中。在一另選的實施方案中，可將飼料添加劑組合物和/或預混物和/或飼料或喂養(yǎng)料密封在容器中?？墒褂萌魏魏线m的容器。形式本發(fā)明的合成酶或包含合成酶的組合物(例如飼料添加劑組合物)及其他組分和/或包含它們的喂養(yǎng)料可以任何合適的形式使用。本發(fā)明的合成酶或包含合成酶的組合物(例如飼料添加劑組合物)可以固體或液體制劑或其另選形式使用。固體制劑的示例包括散劑、糊劑、大丸劑、膠囊劑、丸劑、片劑、丸劑、膠囊劑、胚珠、溶液或懸液、粉劑和顆粒劑，其可以是可潤濕的、噴霧干燥的或冷凍干燥的。液體制劑的示例包括但不限于水性、有機或水性-有機溶液劑、混懸劑和乳劑。包含合成酶的組合物可含有矯味劑或著色劑，用于即刻釋放、延遲釋放、調節(jié)釋放、持續(xù)釋放、脈沖釋放或受控釋放的應用。以舉例的方式，如果本發(fā)明的組合物以固體例如粒料形式使用，則其還可包含一種或多種：賦形劑，例如微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣和甘氨酸；崩解劑，例如淀粉(優(yōu)選玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸鈉、交聯羧甲基纖維素鈉和某些復合硅酸鹽；制粒粘合劑，例如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯樹膠；還可以包括潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸、山崳酸甘油酯和滑石粉。用于制備這些形式的營養(yǎng)上可接受的載體的示例包括(例如)水、鹽溶液、醇、有機硅(silicone)、蠟、石油凝膠、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂質體、糖、明膠、乳糖、直鏈淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、表面活性劑、硅酸、粘性石蠟、香水油、脂肪酸甘油單酯和脂肪酸甘油二酯、石油醚(petroethral)脂肪酸酯、羥甲基-纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等等。用于這些形式的優(yōu)選賦形劑包括乳糖(lactose)、淀粉、纖維素、乳糖(milksugar)或高分子量聚乙二醇。對于水性混懸劑和/或酏劑而言，可將本發(fā)明的組合物與各種甜味劑或矯味劑、著色物質或染料、與乳化劑和/或助懸劑以及與稀釋劑(例如水、丙二醇和甘油)以及它們的組合進行組合。受試者如本文所用，術語“受試者”意指待施用或已施用根據本發(fā)明的合成木聚糖酶或根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物或包含所述根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物的喂養(yǎng)料的動物。本文所用的術語“受試者”意指動物。在一個實施方案中，受試者是哺乳動物、鳥、魚或甲殼類動物，包括(例如)家畜或馴養(yǎng)動物(例如寵物)。在一個實施方案中，“受試者”是家畜。如本文所用的術語“家畜”是指任何農場動物。優(yōu)選地，家畜是以下項的一者或多者：反芻動物例如牛(例如，奶?；蚬?包括牛犢))、單胃動物例如家禽(包括仔雞、雛雞和火雞)、豬(包括仔豬)、鳥、水生動物例如魚、無胃魚、胃魚、淡水魚例如鮭魚、鱈魚、鱒魚和鯉魚如錦鯉、海魚例如黑鱸、和甲殼類動物(例如蝦、貽貝和扇貝)、馬(包括賽馬)、綿羊(包括羔羊)。在另一個實施方案中，“受試者”是馴養(yǎng)動物或寵物或維持于動物園環(huán)境中的動物。本文所用的術語“馴養(yǎng)動物或寵物或維持于動物園環(huán)境中的動物”是指任何相關動物，包括犬科動物(例如狗)、貓科動物(例如貓)、嚙齒類動物(例如豚鼠、大鼠、小鼠)、鳥、魚(包括淡水魚和海魚)和馬。性能本文所用的“動物性能”可通過動物的飼料效率和/或增重和/或通過飼料轉化率和/或通過飼料中的營養(yǎng)物質的消化率(例如氨基酸消化率)和/或飼料中的可消化能或代謝能和/或通過氮保留量和/或通過動物避免壞死性腸炎的負面影響的能力和/或通過受試者的免疫應答來測定。優(yōu)選地，“動物性能”通過飼料效率和/或動物的增重和/或飼料轉化率來測定。所謂“改善的動物性能”，其意指與不包含本發(fā)明的飼料添加劑組合物的飼料相比，由于使用所述飼料添加劑組合物，受試者中的飼料效率增加和/或增重增加和/或飼料轉化率降低和/或飼料中的營養(yǎng)物質或能量的消化率改善和/或氮保留量改善和/或免疫應答改善。優(yōu)選地，所謂“改善的動物性能”，其意指飼料效率增加和/或增重增加和/或飼料轉化率降低。如本文所用，術語“飼料效率”是指在一段時間期間不限量飼喂動物或對其飼喂指定量的飼料時每單位飼料的增加的體量。所謂“增加的飼料效率”，其意指與在不存在根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物的情況下飼喂的動物相比，在飼料中使用所述飼料添加劑組合物導致每單位攝入飼料的增重增加。飼料轉化率(FCR)本文所用的術語“飼料轉化率”是指飼喂給動物以使動物重量增加規(guī)定量的飼料量。改善的飼料轉化率意指較低的飼料轉化率。所謂“較低的飼料轉化率”或“改善的飼料轉化率”，其意指在飼料中使用飼料添加劑組合物導致動物體重增加指定量時所需飼喂給動物的飼料量低于在該飼料不包含所述飼料添加劑組合物時使動物體重增加相同量時所需的飼料量。營養(yǎng)物質消化率本文所用的營養(yǎng)物質消化率意指從胃腸道或胃腸道的指定區(qū)段(例如小腸)消失的營養(yǎng)物質的分數。營養(yǎng)物質消化率可測量為所施用給受試者的與受試者糞便中所出來的之間的差值、或所施用給受試者的與所保留在胃腸道指定區(qū)段(例如回腸)上的消化物中的之間的差值。如本文所用營養(yǎng)物質消化率可借助于在一段時間期間排泄物的總集測量為所攝取的營養(yǎng)物質與所排泄的營養(yǎng)物質之間的差值；或者采用不被動物吸收的惰性標記，并允許研究者計算在整個胃腸道或一段胃腸道中消失的營養(yǎng)物質的量。這種惰性標記可以是二氧化鈦、氧化鉻或酸不溶性灰分。消化率可表示為營養(yǎng)物質在飼料中的百分比，或表示為可消化的營養(yǎng)物質的質量單位/飼料中的營養(yǎng)物質的質量單位。本文所用的營養(yǎng)物質消化率涵蓋淀粉消化率、脂肪消化率、蛋白質消化率和氨基酸消化率。本文所用的能量消化率意指所消耗的飼料總能量減去糞便的總能量，或所消耗的飼料總能量減去動物胃腸道指定區(qū)段(例如回腸)上的剩余消化物的總能量。本文所用的代謝能是指表觀代謝能，且意指所消耗的飼料總能量減去糞便、尿和消化的氣體產物中含有的總能量。能量消化率和代謝能可測量為總能量的攝取與糞便中排泄的或胃腸道指定區(qū)段中存在的消化物中的總能量之間的差值，其使用與測量營養(yǎng)物質的消化率相同的方法，針對氮排泄進行適當校正以計算飼料的代謝能。與其他組分的組合本發(fā)明的合成木聚糖酶可與其他的組分組合使用。在一個實施方案中，本發(fā)明的合成木聚糖酶可與益生菌或直接飼喂微生物(DFM)例如直接飼喂細菌結合使用。本發(fā)明的組合包括本發(fā)明的合成木聚糖酶或包含該合成木聚糖酶的組合物例如飼料添加劑組合物，以及適于人或動物食用且能夠為食用者提供醫(yī)學或生理學益處的另一組分。在一個實施方案中，“另一種組分”可為一種或多種另外的酶(例如另外的飼料酶或麥芽制造及釀造酶、或谷物加工酶或小麥谷朊蛋白-淀粉分離酶)。用于本發(fā)明中的合適的額外酶可為選自如下的酶中的一者或多者：內切葡聚糖酶(E.C.3.2.1.4)；纖維二糖水解酶(E.C.3.2.1.91)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、纖維素酶(E.C.3.2.1.74)、地衣多糖酶(E.C.3.2.1.73)、脂酶(E.C.3.1.1.3)、脂質?；D移酶(通常歸類為E.C.2.3.1.x)、磷脂酶(E.C.3.1.1.4、E.C.3.1.1.32或E.C.3.1.1.5)、植酸酶(例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.3.8)、淀粉酶、α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、其它木聚糖酶(E.C.3.2.1.8、E.C.3.2.1.32、E.C.3.2.1.37、E.C.3.2.1.72、E.C.3.2.1.136)、葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)、半纖維素酶、蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))、脫支酶、角質酶、酯酶和/或甘露聚糖酶(例如β-甘露聚糖酶(E.C.3.2.1.78))。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為一種或多種選自以的酶：淀粉酶(包括α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、G4-形成淀粉酶(E.C.3.2.1.60)、β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)和γ-淀粉酶(E.C.3.2.1.3))；和/或蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))和/或植酸酶(例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.38))。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為淀粉酶(例如α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1))和蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62))的組合。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為β-葡聚糖酶，例如內切-1,3(4)-β-木聚糖酶(E.C.3.2.1.6)。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為植酸酶(例如，例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.38)。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為甘露聚糖酶(例如β-甘露聚糖酶(E.C.3.2.1.78))。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為脂酶(E.C.3.1.1.3)、脂質?；D移酶(通常歸類為E.C.2.3.1.x)、或磷脂酶(E.C.3.1.1.4、E.C.3.1.1.32或E.C.3.1.1.5)、適宜的脂酶(E.C.3.1.1.3)。在一個實施方案中(特別是用于飼料應用)，其它組分可為蛋白酶(例如枯草桿菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢桿菌溶素(E.C.3.4.24.28)或堿性絲氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))。在一個實施方案中，附加組分可為穩(wěn)定劑或乳化劑或粘合劑或載體或賦形劑或稀釋劑或崩解劑。本文所用的術語“穩(wěn)定劑”定義為保持產品(例如飼料產品)免于隨時間推移而變化的成分或成分的組合。本文所用的術語“乳化劑”是指防止乳液分離的成分(例如飼料成分)。乳液是兩種不混溶的物質，一種以小滴存在，包含于另一者中。乳液可以由水包油構成，其中小滴或分散相為油而連續(xù)相為水；或由油包水構成，其中水變成分散相而連續(xù)相為油。也可通過使用乳化劑使泡沫(其是液包氣)和混懸液(其為液固混懸液)穩(wěn)定。本文所用的術語“粘合劑”是指經通過物理或化學反應將產品結合在一起的成分(例如飼料成分)。例如，在“膠凝”期間，水被吸收，從而提供結合效果。然而，粘合劑可吸收其他液體(例如油)，從而將其保持在產品中。在本發(fā)明上下文中，粘合劑將通常用于固體或低水分產品(例如烘焙產品：甜點、甜甜圈、面包等等)中。制粒粘合劑的示例包括如下中的一種或多者：聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、麥芽糖、明膠和阿拉伯膠?！拜d體”意指適于施用酶的材料且包括本領域已知的任何該材料，例如任何液體、凝膠、溶劑、液體稀釋劑、穩(wěn)定劑等等，其為無毒的并且并不以有害方式與組合物的任何組分相互作用。本發(fā)明提供用于制備組合物(例如飼料添加劑組合物)的方法，包含將本發(fā)明的酶與至少一種選自如下中的至少一者的生理學上可接受的載體混合：麥芽糖糊精、石灰石(碳酸鈣)、環(huán)糊精、小麥或小麥組分、蔗糖、淀粉、Na2SO4、滑石粉、PVA、山梨醇、苯甲酸鹽、山梨酸鹽、甘油、蔗糖、丙二醇、1,3-丙二醇、葡萄糖、對羥基苯甲酸酯、氯化鈉、檸檬酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、鈣、偏亞硫酸氫鹽、甲酸鹽以及它們的混合物。賦形劑的示例包括如下中的一種或多者：微晶纖維素和其他纖維素、乳糖(lactose)、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣、甘氨酸、淀粉、乳糖(milksugar)和高分子量聚乙二醇。崩解劑的示例包括如下中的一種或多者：淀粉(優(yōu)選玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸鈉、交聯羧甲基纖維素鈉和某些復合硅酸鹽。稀釋劑的示例包括如下中的一種或多者：水、乙醇、丙二醇和甘油以及它們的組合。其他的組分可同時(例如當它們混合在一起時或者甚至當它們通過不同的途徑遞送時)或者依序(例如它們可通過不同的途徑遞送)用于本發(fā)明的木聚糖酶。優(yōu)選地，在將本發(fā)明的飼料添加劑組合物與另一組分混合時，DFM保持為活的。在一個實施方案中，優(yōu)選地，根據本發(fā)明的飼料添加劑組合物不包含鉻或有機鉻。在一個實施方案中，優(yōu)選地，根據本發(fā)明的飼料添加劑不含有葡聚糖酶。在一個實施方案中，優(yōu)選地，根據本發(fā)明的飼料添加劑不含有山梨酸。分離的在一個方面，優(yōu)選根據本發(fā)明的氨基酸序列、或核酸、或酶為分離的形式。術語“分離的”意指序列或酶或核酸至少實質上不含所述序列、酶或核酸在自然界中天然與之相關聯或在自然界中存在的至少一種其他組分。本發(fā)明的序列、酶或核酸可以實質上不含所述物質原本與之相關聯的一種或多種污染物的形式提供。因此，例如，其可基本上不含一種或多種潛在污染性的多肽和/或核酸分子。純化的在一個方面，優(yōu)選地根據本發(fā)明的序列、酶、或核酸為純化的形式。術語“純化的”意指給定組分以高水平存在。理想的是該組分為組合物中存在的主要組分。優(yōu)選地，其以至少約90％、或至少約95％或至少約98％的水平存在，所述水平是相對于所考慮總組合物以干重/干重計來測定的。核苷酸序列本發(fā)明的范圍涵蓋編碼具有本文所限定的特定性質的蛋白質的核苷酸序列。本文所用的術語“核苷酸序列”指寡核苷酸序列或多核苷酸序列，以及其變體、同源物、片段和衍生物(諸如其部分)。核苷酸序列可為基因組起源的或者合成或重組起源的，其可以是雙鏈的或單鏈的而無論是代表有義鏈還是反義鏈。與本發(fā)明有關的術語“核苷酸序列”包括基因組DNA、cDNA、合成DNA和RNA。優(yōu)選地，其意指DNA，更優(yōu)選地，意指編碼本發(fā)明的cDNA序列。在一個實施方案中，術語“核苷酸序列”是指cDNA。在一個優(yōu)選的實施方案中，當與本發(fā)明的范圍本身有關以及當為本發(fā)明的范圍本身所涵蓋時，核苷酸序列不包括處于其天然環(huán)境中時或其連接至其也存在于其/它們的天然環(huán)境中的天然結合的序列時的根據本發(fā)明的天然核苷酸序列。為了易于指代，我們應該稱該優(yōu)選的實施方案為“非天然核苷酸序列”。就這一點而言，術語“天然核苷酸序列”意指處于其天然環(huán)境中并且在有效連接至其天然與之相關聯的整個啟動子時的整個核苷酸序列，該啟動子也處于其天然環(huán)境中。然而，本發(fā)明的范圍所涵蓋的氨基酸序列可在核苷酸序列在其天然生物體中表達后分離和/或純化。優(yōu)選地，然而，本發(fā)明的范圍所涵蓋的氨基酸序列可由核苷酸序列在其天然生物體中表達，但其中該核苷酸序列不處于在該生物體中其與之天然結合的啟動子的控制之下。通常，由本發(fā)明的范圍所涵蓋的核苷酸序列使用重組DNA技術制備(即重組DNA)。然而，在本發(fā)明的另選實施方案中，核苷酸序列可用本領域所熟知的化學方法整體或分部分地合成(參見CaruthersMH等人，(1980)NucAcidsResSympSer215-23和HornT等人，(1980)NucAcidsResSympSer225-232)。核苷酸序列的制備編碼具有如本文所限定的特定性質的蛋白質或適于修飾的蛋白質的核苷酸序列可從產生所述蛋白質的任何細胞或生物體鑒別和/或分離和/或純化。多種方法是核苷酸序列鑒別和/或分離和/或純化領域所熟知的。舉個例子，一旦已鑒別和/或分離和/或純化合適的序列后即可使用PCR擴增技術來制備更多條序列。舉另一個例子，可用來自產生酶的生物體的染色體DNA或信使RNA構建基因組DNA和/或cDNA文庫。如果該酶的氨基酸序列是已知的話，可合成標記寡核苷酸探針并用于從由生物體制備的基因組文庫鑒別酶編碼克隆。另選地，可將含有與另一已知酶基因同源的序列的標記寡核苷酸探針用于鑒別酶編碼克隆。在后一種情況下，使用較低嚴格性的雜交和洗滌條件。另選地，酶編碼克隆可通過這樣來鑒別：將基因組DNA的片段插入表達載體(如質粒)中，用所得的基因組DNA文庫轉化酶陰性細菌，然后將轉化細菌接種于含有酶底物(即阿拉伯聚糖)的瓊脂板上，從而使得表達該酶的克隆能被鑒別。在另一個另選方案中，編碼該酶的核苷酸序列可以通過已確立的標準方法合成制備，例如由BeucageS.L.等人，(1981)TetrahedronLetters22，第1859-1869頁所述的亞磷酰胺方法，或Matthes等人，(1984)EMBOJ.3，第801-805頁所述的方法。在亞磷酰胺方法中，合成寡核苷酸，例如在自動DNA合成儀中，將其純化、復性、連接并克隆入適當的載體中。核苷酸序列可以為混合的基因組起源和合成起源、混合的合成起源和cDNA起源或混合的基因組起源和cDNA起源，根據標準技術通過連接合成起源、基因組起源或cDNA起源的片段制備(視情況而定)。每一連接的片段對應于整個核苷酸序列的各個部分。DNA序列還可使用特定引物通過聚合酶鏈反應(PCR)制備，例如如US4,683,202或SaikiRK等人，(Science(1988)239，第487-491頁)中所述。氨基酸序列本發(fā)明的范圍還涵蓋具有如本文所限定的特定性質的酶的氨基酸序列。如本文所用，術語“氨基酸序列”與術語“多肽”和/或術語“蛋白質”是同義的。在某些情況下，術語“氨基酸序列”與術語“肽”是同義的。在某些情況下，術語“氨基酸序列”與術語“酶”是同義的。氨基酸序列可從合適的來源制備/分離，或者其可通過合成制備或者其可通過利用重組DNA技術制備。優(yōu)選地，當與本發(fā)明的本身范圍有關或當由本發(fā)明的本身范圍所涵蓋時，氨基酸序列不是天然的酶。就這一點而言，術語“天然的酶”意指處于其天然環(huán)境中并且在其已由其天然核苷酸序列表達時的整個酶。序列同一性或序列同源性本發(fā)明還涵蓋與具有本文所限定的特定性質的多肽的氨基酸序列具有一定程度的序列同一性或序列同源性的序列或編碼這種多肽的任何核苷酸序列(下文稱為“同源序列”)的用途。在此，術語“同源物”意指與主題氨基酸序列和主題核苷酸序列具有一定同源性的實體。在此，術語“同源性”可等同于“同一性”。該同源氨基酸序列和/或核苷酸序列應該提供和/或編碼保留該酶的功能活性和/或增強該酶的活性的多肽。在本說明書的語境中，在一些實施方案同源序列意指包括這樣的氨基酸或核苷酸序列，其可與主題序列有至少97.7％同一性、優(yōu)選至少98或99％同一性。在一些實施方案中，同源序列意指包括這樣的氨基酸或核苷酸序列，其可與主題序列有至少85％同一性、優(yōu)選至少90或95％同一性。通常，同源物將包含與例如主題氨基酸序列相同的活性位點等等。盡管同源性也可以根據相似性(即氨基酸殘基具有類似的化學性質/功能)來考慮，但在本發(fā)明的語境中優(yōu)選根據序列同一性來表示同源性。在一個實施方案中，同源序列意指包括這樣的氨基酸序列或核苷酸序列，其與主題序列相比有一個或數個添加、缺失和/或取代。在本說明書的語境中，“主題序列”是指根據本發(fā)明的核苷酸序列或多肽/氨基酸序列。優(yōu)選地，使用SEQIDNo.1在序列對比中作為主題序列對關于多肽序列的序列同一性百分比進行測定。在一個實施方案中，多肽主題序列選自SEQIDNo.1、SEQIDNo.3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9或SEQIDNo.11。優(yōu)選地，使用SEQIDNo.2在序列對比中作為主題序列對關于核苷酸序列的序列同一性百分比進行測定。在一個實施方案中，核苷酸序列的主題序列可選自SEQIDNo.2、SEQIDNo.4、SEQIDNo.6、SEQIDNo.8、SEQIDNo.10或SEQIDNo.12?！坝H本核酸”或“親本氨基酸”分別意指編碼或譯碼親本多肽的核酸序列或氨基酸序列。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及本文示出其氨基酸序列的蛋白質或通過在親本蛋白質的氨基酸序列中取代、刪除或添加一個或數個氨基酸例如2、3、4、5、6、7、8、9個氨基酸，或更多個氨基酸例如10個或多于10個氨基酸而衍生自該(親本)蛋白質并具有親本蛋白質活性的蛋白質。合適地，氨基酸序列的同一性程度是在至少20個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少30個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少40個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少50個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少60個連續(xù)氨基酸上，優(yōu)選在至少100個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少200個連續(xù)氨基酸上測定。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及編碼本文示出其氨基酸序列的蛋白質或編碼通過在親本蛋白質的氨基酸序列中取代、刪除或添加一個或數個氨基酸例如2、3、4、5、6、7、8、9個氨基酸，或更多個氨基酸例如10個或多于10個氨基酸而衍生自該(親本)蛋白質并具有親本蛋白質活性的蛋白質的核酸序列(或基因)。在本說明書的語境中，在一個實施方案同源序列或外源序列意指包括這樣的核苷酸序列，其可與編碼本發(fā)明多肽的核苷酸序列(主題序列)有至少97.7％同一性，優(yōu)選至少98或99％同一性。在另一個實施方案中，同源序列意指包括這樣的核苷酸序列，其可與編碼本發(fā)明多肽的核苷酸序列(主題序列)有至少85％同一性，優(yōu)選至少90或95％同一性。通常，同源物將包含與主題序列相同的編碼活性位點等的序列。盡管同源性也可以根據相似性(即氨基酸殘基具有類似的化學性質/功能)來考慮，但在本發(fā)明的語境中優(yōu)選根據序列同一性來表示同源性。同源性比較可通過眼，或更通常地，借助于容易獲得的序列比較程序來進行。這些市售的計算機程序可計算兩條或更多條序列之間的同源性百分數或同一性百分數。同源性百分數或同一性百分數可在連續(xù)的序列上計算，即將一條序列與另一條序列進行比對，并將一條序列中的每個氨基酸與另一條序列中的相應氨基酸直接比較，一次一個殘基。這稱為“無空位(ungapped)”比對。通常，這種不產生空位的比對僅在相對短數目的殘基范圍內進行。盡管這是十分簡單和可靠的方法，但其未考慮到，例如在原本相同的一對序列中，一個插入或缺失將引起后面的氨基酸殘基不再對齊，從而在進行全局比對時可能導致同源性百分數或同一性百分數大為降低。因此，大多數序列比較方法被設計產生最佳的比對，該最佳比對考慮可能的插入和缺失，從而不會不當地減損整體同源性分數。這通過在序列比對中插入“空位”以試圖使局部同源性最大化來實現。然而，這些更復雜的方法給比對中出現的每一個空位賦給“空位罰分”使得對于同樣數目的相同氨基酸，具有盡可能少空位的序列比對(反映兩條比較序列之間相關性較高)將獲得比具有許多空位的序列比對更高的分數。通常使用“仿射空位成本(Affinegapcost)”，其對空位的存在征收相對較高的成本，對空位中每一個后續(xù)的殘基征收較少的罰分。這是最通常使用的空位評分系統(tǒng)。高的空位罰分將當然會產生具有較少空位的最佳比對結果。大多數比對程序允許修改空位罰分。然而，當用這種軟件進行序列比較時優(yōu)選使用默認值。最大同源性百分數或同一性百分數的計算因而首先需要在考慮空位罰分的情況下產生最佳比對。進行這種比對的合適計算機程序是VectorNTI(英杰公司(InvitrogenCorp.))。可進行序列比較的軟件的示例包括但不限于例如：BLAST軟件包(參見Ausubel等人，1999，ShortProtocolsinMolecularBiology，第4版，第18章))、BLAST2(參見FEMSMicrobiolLett1999174(2):247-50；FEMSMicrobiolLett1999177(1):187-8和tatiana@ncbi.nlm.nih.gov)、FASTA(Altschul等人，1990J.Mol.Biol.403-410)和AlignX。至少BLAST、BLAST2和FASTA可用于離線和在線搜索(參見Ausubel等人，1999年，第7-58頁至7-60頁)，例如GenomeQuest搜索工具(www.genomequest.com)。盡管最終的同源性百分數或同一性百分數也可按同一性來度量，但比對過程本身通常不是基于要么全有要么全無(all-or-nothing)的成對比較。相反，通常使用標度化相似性評分矩陣，該矩陣基于化學相似性或進化距離向每一成對比較賦予分值。常用的這種矩陣的一個示例是BLOSUM62矩陣-BLAST程序包的默認矩陣。VectorNTI程序通常使用公用默認值或定制的符號比較表(如果提供的話)(更多細節(jié)請參見用戶手冊)。對于一些應用而言，優(yōu)選的是使用VectorNTI軟件包的各默認值。另選地，同源性百分數可用VectorNTI(InvitrogenCorp.)中的多比對特征來計算，該特征基于類似于CLUSTAL(HigginsDG&SharpPM(1988)，Gene73(1),237-244)。一旦該軟件產生了最佳比對，則有可能計算同源性百分數，優(yōu)選序列同一性百分數。該軟件通常進行這種計算作為序列比較的一部分，并產生數值結果。當測定序列同一性時應該使用空位罰分(GapPenalties)，然后優(yōu)選地將如下參數用于成對比對：在一個實施方案中，可使用采用上面限定的空位罰分和空位延伸組的CLUSTAL。適宜地，關于核苷酸序列或蛋白質序列的同一性程度是在至少20個連續(xù)核苷酸/氨基酸上，優(yōu)選在至少30個連續(xù)核苷酸/氨基酸上，優(yōu)選在至少40個連續(xù)核苷酸/氨基酸上，優(yōu)選在至少50個連續(xù)核苷酸/氨基酸上，優(yōu)選在至少60個連續(xù)核苷酸/氨基酸上，優(yōu)選在至少100個連續(xù)核苷酸/氨基酸上測定。適宜地，關于核苷酸序列的同一性程度是在至少100個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少200個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少300個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少400個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少500個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少600個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少700個連續(xù)核苷酸上，優(yōu)選在至少800個連續(xù)核苷酸上測定。適宜地，關于核苷酸序列的同一性程度可在本文提出的整個序列上測定。適宜地，關于核苷酸序列的同一性程度可在本文提出為SEQIDNo.2或SEQIDNo.4或SEQIDNo.6或SEQIDNo.8或SEQIDNo.10或SEQIDNo.12的整個序列上測定。適宜地，關于核苷酸序列的同一性程度可在如本文提出為SEQIDNo.2的整個序列上測定。合適地，關于蛋白質(氨基酸)序列的同一性程度是在至少100個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少200個連續(xù)氨基酸上、優(yōu)選在至少300個連續(xù)氨基酸上測定。合適地，關于氨基酸或蛋白質序列的同一性程度可在本文提出的整個序列上測定。適宜地，關于氨基酸或蛋白質序列的同一性程度可在本文提出為成熟序列例如SEQIDNo.1、SEQIDNo.3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9或SEQIDNo.11的整個序列上測定。適宜地，關于氨基酸或蛋白質序列的同一性程度可在本文提出為SEQIDNo.1的整個序列上測定。在本說明書的語境中，術語“查詢序列”意指與主題序列比對以證實其是否落在本發(fā)明的范圍內的同源序列或外源序列。因此，此類查詢序列可例如為現有技術序列或第三方序列。在一個優(yōu)選的實施方案中，通過全局比對程序對序列進行比對，并且序列同一性通過由程序識別出精確匹配的數量，再將該數量除以主題序列的長度而計算得到。在一個實施方案中，查詢序列和主題序列之間的序列同一性程度通過如下步驟確定：1)通過任何合適的比對程序，使用默認計分矩陣和默認空位罰分，將所述兩個序列進行對比，2)識別精確匹配的數量，其中精確匹配是比對程序已于比對過程中在兩個受比對序列中的給定位置上識別出相同的氨基酸或核苷酸的情況，以及3)將精確匹配的數量除以主題序列的長度。在另一個優(yōu)選的實施方案中，全局比對程序選自CLUSTAL和BLAST(優(yōu)選BLAST)，并且序列同一性通過由程序識別出精確匹配的數量，再將該數量除以主題序列的長度而計算得到。序列還可以具有氨基酸殘基的缺失、插入或置換，所述缺失、插入或置換導致功能等同的物質?？梢曰跉埢臉O性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/或兩親性質的相似性進行有意的氨基酸置換。例如，帶負電的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電的氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；以及具有類似親水性值的含不帶電的極性頭部基團的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸?？梢岳绺鶕卤磉M行保守置換。第二列中同一區(qū)組內的氨基酸，優(yōu)選第三列中同一行內的氨基酸可以彼此置換：本發(fā)明還涵蓋可能出現的同源置換(在本文中，置換和取代都用來指現有的氨基酸殘基與另選的殘基的交換)，即對等置換，如堿性對堿性，酸性對酸性，極性對極性等。非同源置換也可能出現，即從一類殘基置換成另一類殘基，或另選地涉及到加入非天然氨基酸，如鳥氨酸(下文稱為Z)、二氨基丁酸鳥氨酸(下文稱為B)、正亮氨酸鳥氨酸(下文稱為O)、吡啶丙氨酸、噻吩丙氨酸、萘丙氨酸和苯甘氨酸。還可以用非天然氨基酸進行置換，包括：α*和α-二取代的*氨基酸、N-烷基氨基酸*、乳酸*、天然氨基酸的鹵化物衍生物(如三氟酪氨酸*、對Cl-苯丙氨酸*、對Br-苯丙氨酸*、對I-苯丙氨酸*)、L-烯丙基-甘氨酸*、β-丙氨酸*、L-α-氨基丁酸*、L-γ-氨基丁酸*、L-α-氨基異丁酸*、L-ε-氨基己酸#、7-氨基庚酸*、L-甲硫氨酸砜#*、L-正亮氨酸*、L-正纈氨酸*、對硝基-L-苯丙氨酸*、L-羥脯氨酸#、L-硫代脯氨酸*、苯丙氨酸(Phe)的甲基衍生物(如4-甲基-Phe*、五甲基-Phe*)、L-Phe(4-氨基)#、L-Tyr(甲基)*、L-Phe(4-異丙基)*、L-Tic(1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸)*、L-二氨基丙酸#和L-Phe(4-芐基)*。為了上面論述的目的(與同源性或非同源性置換相關)，符號*用于指衍生物的疏水性質，而#用于指衍生物的親水性質，#*指兩親特性。變體氨基酸序列可包括可在序列的任何兩個氨基酸殘基之間插入的合適的間隔基團，這些間隔基團除了氨基酸間隔物如甘氨酸或或β-丙氨酸殘基外還包括烷基基團如甲基、乙基丙基基團。變異的另外的形式(涉及存在類肽(peptoid)形式的一個或多個氨基酸殘基)將是本領域技術人員十分了解的。為了避免疑惑，“類肽”用于指其中α-碳取代基處于殘基的氮原子而不是α-碳上的變體氨基酸殘基。用于制備類肽形式的肽的方法是本領域已知的，例如SimonRJ等人，PNAS(1992)89(20),9367-9371和HorwellDC,TrendsBiotechnol.(1995)13(4),132-134。在一個實施方案中，用于本發(fā)明的木聚糖酶可包含示為SEQIDNo.1、SEQIDNo.3、SEQIDNo.5、SEQIDNo.7或SEQIDNo.9或SEQIDNo.11的多肽序列以及保守取代的至少一個氨基酸。適當地，可存在至少2個保守取代，例如至少3個或至少4個或至少5個。適當地，可存在少于15個保守取代，例如少于12個、少于10個、或少于8個或少于5個。用于本發(fā)明的核苷酸序列可在它們中包括合成的或修飾的核苷酸。對寡核苷酸作出的多種不同類型的修飾是本領域已知的。這包括甲基膦酸酯和硫代磷酸酯主鏈和/或在分子的3'和/或5'端添加吖啶或多聚賴氨酸鏈。出于本發(fā)明的目的，應當理解本文所描述的核苷酸序列可以通過本領域可用的任何方法修飾。可進行這種修飾以便增強本發(fā)明的核苷酸序列的體內活性或壽命。本發(fā)明還涵蓋與本文給出的序列或其任何衍生物、片段或衍生物互補的核苷酸序列的用途。如果序列與其片段互補，則該序列可用作探針來鑒別其他生物體中的相似編碼序列等等。不與本發(fā)明的序列100％同源但屬于本發(fā)明的范圍之內的多核苷酸可以多種方式獲得。本文描述的序列的其他變體可例如通過用探針探測(probing)從一系列個體(例如來自不同種群的個體)制備的DNA文庫來獲得。此外，可獲得其他同源物并且這種同源物及其片段一般將能夠選擇性雜交至本文所列序列中所示的序列。這種序列可通過這樣獲得：從其他動物物種制備cDNA文庫或基因組DNA文庫，在中等至高嚴格性條件下用包含隨附的序列表中的序列中的任一條的全部或部分的探針，探測這些文庫。類似的考慮用來獲得本發(fā)明的多肽或核苷酸序列的物種同源物和等位基因變體。變體和株系/物種同源物還可用簡并PCR獲得，簡并PCR將使用被設計來靶向變體和同源物內這樣的序列的引物，所述序列編碼本發(fā)明序列內的保守氨基酸序列。保守序列可例如通過比對來自數種變體/同源物的氨基酸序列來預測。序列比對可以用本領域已知的計算機軟件來進行。例如，廣泛使用GCGWisconsinPileUp程序。簡并PCR中使用的引物將含有一個或多個簡并位置，并將在比用于以單序列引物從已知序列克隆序列的那些嚴格性條件低的嚴格性條件下使用。另選地，這種多核苷酸可通過對已表征的序列進行定點誘變來獲得。在例如需要沉默密碼子序列改變來優(yōu)化多核苷酸序列在其中表達的特定宿主細胞的密碼子偏好的情形中，這可能是有用的。其他序列改變可能是期望的以便引入限制性酶識別位點，或以改變多核苷酸編碼的多肽的性質或功能。本發(fā)明的多核苷酸(核苷酸序列)可用于產生引物(例如PCR引物)、另選的擴增反應的引物、探針(例如用放射性或非放射性標記通過常規(guī)手段標記上顯示標記(revealinglabel)的探針)，或者可將多核苷酸克隆進載體中。這種引物、探針和其他片段的長度將為至少15個，優(yōu)選至少20個，例如至少25、30或40個核苷酸，并且也為本文所用的術語本發(fā)明多核苷酸所涵蓋。根據本發(fā)明的多核苷酸如DNA多核苷酸和探針可重組產生、合成產生或通過本領域技術人員可用的任何手段產生。它們還可以通過標準技術克隆。通常，引物將通過合成手段產生，涉及所需的核酸序列的逐步制備，一次一個核苷酸。利用自動化技術完成該工藝的技術是本領域輕易獲得的。較長的多核苷酸通常將用重組手段產生，例如用PCR(聚合酶鏈反應)克隆技術。引物可被設計為含有合適的限制性酶識別位點，使得可將擴增的DNA克隆進合適的克隆載體中。氨基酸編號在本發(fā)明中，可采用用于本發(fā)明的木聚糖酶中氨基酸殘基位置的特定編號。通過將樣品木聚糖酶的氨基酸序列與本發(fā)明的木聚糖酶(具體地為SEQIDNo.1)進行比對，可以將編號分配給所述樣品木聚糖酶中的氨基酸殘基位置，其對應于本發(fā)明的SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列的氨基酸殘基位置或編號。雜交本發(fā)明還涵蓋與本發(fā)明的核酸序列互補的序列或能夠雜交至本發(fā)明的序列或雜交至與本發(fā)明序列互補的序列的序列。本文所用的術語“雜交”應包括“一條核酸鏈與互補鏈通過堿基配對接合的過程”以及在聚合酶鏈反應(PCR)技術中所進行的擴增過程。本發(fā)明還涵蓋能雜交至與本文給出的序列互補的序列的核苷酸序列或其任何片段或衍生物的用途。術語“變體”還涵蓋與能夠雜交至本文給出的核苷酸序列的序列互補的序列。優(yōu)選地，術語“變體”涵蓋與這樣的序列互補的序列：所述序列能夠在嚴格條件(例如50℃和0.2xSSC{1xSSC＝0.15MNaCl，0.015M檸檬酸鈉pH7.0})下與本文給出的核苷酸序列雜交。更優(yōu)選地，術語“變體”涵蓋與這樣的序列互補的序列：所述序列能夠在高度嚴格條件(例如65℃和0.1xSSC{1xSSC＝0.15MNaCl,0.015M檸檬酸鈉pH7.0})下與本文給出的核苷酸序列雜交。本發(fā)明還涉及可雜交至本發(fā)明的核苷酸序列(包括本文給出的那些序列的互補序列)的核苷酸序列。本發(fā)明還涉及這樣的核苷酸序列，該核苷酸序列與可雜交至本發(fā)明的核苷酸序列(包括本文給出的那些序列的互補序列)的序列互補。優(yōu)選地，雜交在本文提出的整個序列上進行分析。酶的表達可將用于本發(fā)明的核苷酸序列摻入重組體復制型載體中。該載體可用于在相容宿主細胞中和/或從相容宿主細胞復制和表達核苷酸序列(以蛋白質/酶形式)。可用控制序列，例如控制序列控制表達。由宿主重組細胞通過表達核苷酸序列產生的蛋白質可被分泌或者可包含在細胞內，這取決于所使用的序列和/或載體。編碼序列可被設計具有信號序列，該信號序列引導編碼該物質的序列穿過特定的原核或真核細胞膜分泌。表達載體術語“表達載體”意指能夠在體內或體外進行表達的構建體。優(yōu)選地，將表達載體摻入合適的宿主生物體的基因組中。術語“摻入”優(yōu)選涵蓋穩(wěn)定的摻入基因組中。本發(fā)明的核苷酸序列可存在于載體中，在該載體中該核苷酸序列有效連接至調控序列，該調控序列能夠提供由合適的宿主生物體表達該核苷酸序列。可將用于本發(fā)明的載體轉化進如下文所述的合適宿主細胞中以提供本發(fā)明的多肽的表達。載體(例如質粒、粘?；蚴删w載體)的選擇將通常取決于待將其引入的宿主細胞。用于本發(fā)明的載體可含有一種或多種可選標記基因-如賦予抗生素抗性，例如氨芐青霉素、卡那霉素、氯霉素或四環(huán)素抗性的基因。另選地，該選擇可通過共轉化來完成(如WO91/17243中所描述的)。載體可在體外用于例如產生RNA，或用于轉染、轉化、轉導或感染宿主細胞。因而，在進一步的實施方案中，本發(fā)明提供通過如下步驟制備本發(fā)明的核苷酸序列的方法：將本發(fā)明的核苷酸序列引入復制型載體內，將該載體引入相容的宿主細胞內，并在引起該載體復制的條件下培養(yǎng)該宿主細胞。該載體可另外包含使得該載體能在所考慮的宿主細胞中復制的核苷酸序列。這種序列的示例為質粒pUC19、pACYC177、pUB110、pE194、pAMB1和pIJ702的復制起始區(qū)。調控序列在一些應用中，用于本發(fā)明的核苷酸序列有效連接至調控序列，該調控序列能夠提供核苷酸序列的表達，例如通過所選擇的宿主細胞表達。舉個例子，本發(fā)明涵蓋包含有效連接至這樣一種調控序列的本發(fā)明核苷酸序列的載體，即該載體是表達載體。術語“有效連接”是指“鄰接”，其中所描述的各組分處于使得它們能以其預期的方式發(fā)揮功能的關系。調控序列“有效連接”至編碼序列是以使得該編碼序列的表達能在與該控制序列相容的條件下實現的方式連接。術語“調控序列”包括啟動子和增強子以及其他表達調節(jié)信號。術語“啟動子”是以本領域的標準意義使用，例如RNA聚合酶結合位點。編碼本發(fā)明的酶的核苷酸序列的增強表達也可以通過選擇異源調控區(qū)(例如，啟動子、分泌引導區(qū)和終止子區(qū))來實現。優(yōu)選地，根據本發(fā)明的核苷酸序列有效連接至至少一個啟動子。其他啟動子還可用于引導本發(fā)明的多肽的表達。適用于引導核苷酸序列在細菌、真菌或酵母宿主中轉錄的啟動子的示例是本領域所熟知的。啟動子可額外包括用于確?；蛴糜谠黾釉诤线m宿主中的表達的特征物。例如，所述特征物可以是保守區(qū)，例如Pribnow盒或TATA盒。構建體術語“構建體”(其與諸如“結合物”、“盒”和“雜交體”之類的術語同義)包括直接或間接連接至啟動子的用于根據本發(fā)明的用途的核苷酸序列。間接連接的示例是在啟動子和本發(fā)明的核苷酸序列中間提供合適的間隔基團如內含子序列，例如Sh1-內含子或ADH內含子。與本發(fā)明相關的術語“融合的”同樣如此，其包括直接或間接連接。在一些情況下，該術語不涵蓋這樣的編碼蛋白質的核苷酸序列的天然組合：其通常與野生型基因啟動子相關聯并且當它們二者均處于其天然環(huán)境中時。該構建體可甚至還含有或表達標記，該標記使得能對該遺傳構建體進行選擇。對于某些應用，優(yōu)選的是，本發(fā)明的構建體至少包含有效連接至啟動子的本發(fā)明的核苷酸序列。宿主細胞與本發(fā)明有關的術語“宿主細胞”包括包含所述核苷酸序列或上述表達載體并用于重組產生具有本文所限定的特定性質的蛋白質的任何細胞。在一個實施方案中，生物體是表達宿主。因而，本發(fā)明的另一個實施方案提供用表達本發(fā)明的蛋白質的核苷酸序列轉化或轉染的宿主細胞。細胞將選擇為與所述載體相容，并且可以例如是原核(例如細菌)、真菌或酵母細胞。合適的細菌宿主生物體的示例是革蘭氏陽性或革蘭氏陰性菌物種。在一個實施方案中，本文提出的木聚糖酶表達于表達宿主里氏木霉(Trichodermareesei)中。在一些實施方案中，本文提出的木聚糖酶的表達宿主可為以下真菌表達宿主中的一種或多種：鐮刀菌種(如尖孢鐮孢菌)；曲霉屬(Aspergillus)物種(例如黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(A.oryzae)、構巢曲霉(A.nidulans)、或泡盛曲霉(A.awamori))或木霉屬(Trichoderma)物種(例如里氏木霉)。在一些實施方案中，表達宿主可為以下細菌表達宿主中的一種或多種：鏈霉菌屬(Streptomyces)物種或芽孢桿菌屬(Bacillus)物種(例如枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)或地衣芽孢桿菌(B.licheniformis))。合適宿主細胞例如酵母和真菌宿主細胞的使用可提供翻譯后修飾(例如豆蔻?；?、糖基化、截短、脂化以及酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸的磷酸化)，可能需要這些用于給本發(fā)明的重組表達產物賦予最佳的生物學活性。生物體與本發(fā)明有關的術語“生物體”包括任何生物體，其可包含編碼根據本發(fā)明的多肽的核苷酸序列和/或由其獲得的產物，并且/或者其中啟動子可允許在存在于該生物體中時根據本發(fā)明的核苷酸序列表達。在一個實施方案中，生物體是表達宿主。合適的生物體可以包括原核生物、真菌、酵母或植物。與本發(fā)明有關的術語“轉基因生物體”包括任何生物體，其包含編碼根據本發(fā)明的多肽的核苷酸序列和/或由其獲得的產物，并且/或者其中啟動子可允許根據本發(fā)明的核苷酸序列在該生物體內表達。優(yōu)選地，所述核苷酸序列摻入生物體的基因組中。術語“轉基因生物體”不涵蓋處于其天然環(huán)境中且當它們處于它們的天然啟動子(也處于其天然環(huán)境中)的控制之下時的天然核苷酸編碼序列。因而，本發(fā)明的轉基因生物體包括包含如下中的任一種或如下的組合的生物體：編碼根據本發(fā)明的多肽的核苷酸序列、根據本發(fā)明的構建體、根據本發(fā)明的載體、根據本發(fā)明的質粒、根據本發(fā)明的細胞、根據本發(fā)明的組織或它們的產物。例如，轉基因生物體可還包含處于異源啟動子的控制下的編碼本發(fā)明的多肽的核苷酸序列。宿主細胞/生物體的轉化如較早指出的，宿主生物體可以是原核或真核生物體。適宜的原核宿主的示例包括大腸桿菌(E.coli)、鏈霉菌屬(Streptomyces)物種和芽孢桿菌屬物種例如枯草芽孢桿菌。有關原核生物宿主的轉化的教導在本領域的文獻中有充分記載，例如參見Sambrook等人(MolecularCloning:ALaboratoryManual，第2版，1989,ColdSpringHarborLaboratoryPress)。如果使用原核生物宿主，則該核苷酸序列可能需要適當地進行修飾后再進行轉化，例如通過去除內含子來進行修飾?？捎帽绢I域已知的多種方法轉化絲狀真菌細胞，例如涉及原生質體形成和原生質體轉化以及隨后的以已知的方式再生細胞壁的方法。使用曲霉菌作為宿主微生物在EP0238023中進行了描述。原核、真菌和酵母的轉化對本領域的技術人員而言是公知的。宿主生物體可以是真菌例如霉菌。合適的這種宿主的示例包括屬于以下各屬的任何成員：木霉屬(Trichoderma)(例如里氏木霉)、嗜熱真菌屬(Thermomyces)、枝頂孢屬(Acremonium)、鐮孢屬(Fusarium)、曲霉菌屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)、毛霉屬(Mucor)、鏈孢霉屬(Neurospora)等。在一個實施方案中，宿主生物體可以是真菌。在一個優(yōu)選的實施方案中，宿主生物體屬于木霉屬例如里氏木霉。培養(yǎng)和生產用本發(fā)明的核苷酸序列轉化的宿主細胞可在有利于產生所編碼的多肽并且有利于從細胞和/或培養(yǎng)基回收所述多肽的條件下培養(yǎng)。用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基可以是適合于培養(yǎng)所考慮的宿主細胞和獲得所述多肽的表達的任何常規(guī)培養(yǎng)基。由重組細胞產生的蛋白質可展示在細胞的表面。蛋白質可從宿主細胞分泌并且可方便地用熟知的工序從培養(yǎng)基回收。分泌通常，期望蛋白質從表達宿主分泌進培養(yǎng)基中，從培養(yǎng)基可更容易回收蛋白質。根據本發(fā)明，可根據所需的表達宿主選擇分泌引導序列。雜交體信號序列也可用于本發(fā)明的該方面。大規(guī)模應用在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，氨基酸序列用于大規(guī)模應用。優(yōu)選地，在培養(yǎng)宿主生物體后氨基酸序列以1g/升至約100g/升總細胞培養(yǎng)物體積的量生產。適當地，在培養(yǎng)宿主生物體后氨基酸序列可以以30g/升至約90g/升總細胞培養(yǎng)物體積的量生產。一般的重組DNA方法技術除非另外指明，否則本發(fā)明采用常規(guī)的化學、分子生物學、微生物學、重組DNA和免疫技術，這些技術均在本領域普通技術人員的能力之內。這些技術在文獻中進行了解釋。參見例如J.Sambrook,E.F.Fritsch和T.Maniatis,1989,MolecularCloning:ALaboratoryManual，第2版，第1-3冊，ColdSpringHarborLaboratoryPress；Ausubel,F.M.等人(1995和定期增刊；CurrentProtocolsinMolecularBiology，第9、13和16章，JohnWiley&Sons,NewYork,N.Y.)；B.Roe,J.Crabtree，和A.Kahn,1996,DNAIsolationandSequencing:EssentialTechniques,JohnWiley&Sons；M.J.Gait(編輯),1984,OligonucleotideSynthesis:APracticalApproach,IrlPress；以及D.M.J.Lilley和J.E.Dahlberg,1992,MethodsofEnzymology:DNAStructurePartA:SynthesisandPhysicalAnalysisofDNAMethodsinEnzymology,AcademicPress。這些一般性文本中的每一個以引用方式并入本文。測定活性測定在牛血清白蛋白(BSA)存在下，測定木聚糖酶對于小麥WE-AX(水可提取的阿拉伯聚糖)的木聚糖酶活性。當對可溶性阿拉伯聚糖呈活性的木聚糖酶在底物中水解β1-4-鍵時，還原性端基的量增大。通過熱和堿性條件，還原性端基與無色PAHBAH(4-對-羥基苯甲酸酰肼)反應，由此被PAHBAH氧化并在410nm處測定吸光度(Lever,1972.AnalyticalBiochemistry47,273-279)。緩沖液與試劑：100mM醋酸鈉(NaAc)，pH5.0，0.10％BSA；將9.6g三水合醋酸鈉溶解于800ml去離子水中，并用濃乙酸將pH調節(jié)至5.0。隨后，用去離子水補加至1000ml。將1.0gBSA(SigmaAldrich，A7906)溶解于1000ml100mMNaAc(pH5.0)中。WE-AX，阿拉伯聚糖底物0.5％，pH5.0：將0.5g水溶性小麥阿拉伯聚糖(Megazyme，43厘沲的高粘度，P-WAXYH)用5ml96％乙醇潤濕，并添加95ml100mMNaAc(pH5.0)。在攪拌的同時將溶液加熱至沸騰，隨后在攪拌的同時冷卻至室溫(RT)。PAHBAH工作液：制備三種溶液：1)0.5M氫氧化鈉(NaOH)：500ml去離子水中10.0g氫氧化鈉；2)0.5MHCl：500ml去離子水中20.8ml37％HCl；3)5％PAHBAH原液；將25.0gPAHBAH(4-羥基苯甲酰肼，SigmaH9882)溶解于500ml0.5MHCl中。使溶液避光保護并儲存于4℃下。在臨用前，通過用0.5MNaOH稀釋PAHBAH原液五次來制備PAHBAH工作液。程序：采用Biomek分配機械手(BeckmanCoulter,USA)在MTP(測定貯備板和測定板；96孔透明聚苯乙烯微孔板，Corning,Cat.no.9017；PCR板；VWR,Eu.目錄號211-0297；讀取板；KiskerBiotech,Cat.No.G080-F)中制備所有稀釋液。1.在測定貯備板中用147μl100mMNaAc(pH5.0)、0.1％BSA緩沖液稀釋3μl酶樣品(濃度范圍為40-65μg/ml)。2.使得自測定貯備板的25μl樣品與測定板中的150μlWE-AX底物混合。3.在30℃和1150rpm下溫育測定板并在iEMS搖動器(ThermoScientific)中搖動15分鐘。4.在溫育結束后，使得自測定板的45.4μl反應混合物與PCR板中的135μlPAHBAH工作液混合。5.在95℃下使PCR板在PCR儀(Tetrad2，peltier熱循環(huán)儀，Bio-Rad)中溫育5分鐘并隨后冷卻至20℃10秒。6.將100μl樣品轉移至讀板中并且在微板讀板器(MolecularDevices)上于410nm處讀取板。所有合成木聚糖酶的活性計算為三次平行測定的平均值減去包含100mMNaAc(pH5.0)、0.1％BSA緩沖液且無酶的空白。熱穩(wěn)定性測定緩沖液與試劑：1％Tween80：用9mlMES緩沖液(pH6.0)溶解1gTween80(SigmaP-8074)，隨后用MES緩沖液(pH6)將其再稀釋10次。25mMMES緩沖液(pH6.0)，0.00125％Tween80：25mMMES緩沖液(pH6.0)：將4.88gMES(2-(N-嗎啉)-乙磺酸)溶解于800ml去離子水中，并用NaOH將pH調節(jié)至6.0。添加1.25ml1％Tween80，之后添加去離子水至1000ml。程序：在升高的溫度下，通過在25mMMES緩沖液、0.00125％Tween80(pH6.0)中溫育蛋白質濃度為約1μg/ml(范圍：0.8-1.3μg/ml)的合成木聚糖酶10分鐘來測定合成木聚糖酶的熱穩(wěn)定性。如在活性測定中所述(步驟2-6)，在溫育結束之后測定經熱處理的合成木聚糖酶的殘留活性。各個合成木聚糖酶的殘留活性計算為三次平行測定的平均值減去包括25mMMES緩沖液、0.00125％Tween80(pH6.0)而不加酶的空白。殘留活性計算為所測經熱處理樣品的活性與所測未在升高的溫度下溫育的相同樣品的活性之間的比率。胃蛋白酶耐受性測定在緩沖溶液中pH3.5下于40℃測試合成木聚糖酶耐受胃蛋白酶降解的能力。通過在40℃和1150rpm下，在iEMS搖動器(Thermoscientific)中使合成木聚糖酶在包含0.2g/l胃蛋白酶的100mM甘氨酸緩沖液(pH3.5)中溫育2小時來測定合成木聚糖酶耐受胃蛋白酶降解的能力。如在活性測定中所述(步驟2-6)，在溫育結束后測定合成木聚糖酶的殘留活性。緩沖液與試劑：100mM甘氨酸緩沖液，pH3.5：將7.52g甘氨酸溶解于800ml去離子水中，并用HCl將pH調節(jié)至pH3.5。隨后，用去離子水補加至1000ml。0.2mg/ml胃蛋白酶溶液：將0.2g胃蛋白酶(Sigma，P-7000)溶解于1000ml100mM甘氨酸緩沖液(pH3.5)中。各個合成木聚糖酶殘留活性計算為三次平行測定的平均值減去包含0.2mg/ml胃蛋白酶溶液而無酶的空白。各個合成木聚糖酶的殘留活性計算為所測經胃蛋白酶處理的樣品活性與在活性測定中用未經處理樣品所測的活性之間的比率。增溶測定緩沖液與試劑：100mMMES緩沖液，pH6.0：將19.52gMES(2-(N-嗎啉)-乙磺酸)溶解于800ml去離子水中，并用NaOH將pH調節(jié)至6.0。隨后，用去離子水補加至1000ml。玉米DDGS底物溶液，10％：通過在600rpm下攪拌15min使粒度<212μm的cDDGS在100mMMES緩沖液(pH6.0)中水化。在剛終止攪拌之后，如果存在由cDDGS中酸殘留物所引起的pH下降，則對pH進行調節(jié)。將190μl/孔cDDGS底物轉移到底物板中，使其在-20℃下儲存?zhèn)溆?。程序：采用Biomek分配機械手(BeckmanCoulter,USA)在MTP(底物板和收集板；96孔透明聚苯乙烯微孔板，Corning,Cat.no.9017；過濾板；0.2μmPVDF膜，Corning，目錄號3504；半深孔板：薄型1.2ml方形存儲板，目錄號AB-1127，ThermoScientific)中制備所有稀釋液。1.將10μl酶樣品(150μg/ml的表觀濃度)添加至預制底物板中。2.在40℃下在iEMS中溫育240分鐘；3.使得自經溫育底物板的170μl樣品轉移到過濾板中。4.將過濾板置于收集板的頂部，并在1666xg下離心10min。5.在進一步分析之前，使收集板儲存于-20℃。6.用半深孔板中的900μl超純水稀釋得自收集板的100μl，并且使其在轉移至Skalar裝置之前在搖床上混合2分鐘。戊聚糖的定量根據Rouau&Surget(1994,CarbohydratePolymers,24,123-132)所述的方法使用連續(xù)流動注入裝置(SKALAR系統(tǒng))來測定引入溶液的C5糖(戊糖)總量。用CH3COOH和HCl的混合物處理上清液以將多糖水解為單糖。添加間苯三酚(1,3,5-三羥基苯)以與單戊糖和單己糖反應，從而形成有色復合物。通過測量550nm與510nm(作為基準波長)處的吸光度，用木糖標準曲線(50-400μg木糖/ml)計算溶液中的戊糖濃度。不同于戊糖-間苯三酚復合物，己糖-間苯三酚復合物的吸光度在這些波長下是恒定的。將葡萄糖(0.3％)添加至間苯三酚溶液中以創(chuàng)建恒定葡萄糖信號并進一步確保無己糖的干涉作用。結果可表示為性能指數(PI)，其計算為在分別添加和不添加合成木聚糖酶的情況下溫育cDDGS之后值之間的比率：(在用合成木聚糖酶溫育后溶液中C5-糖總量)/(在不存在酶情況下溫育后溶液中C5-糖總量)。制粒工藝以及在包含多肽的飼料于90℃調節(jié)30秒之后(例如作為制粒工藝的一部分)殘留的木聚糖酶活性的測定在制粒過程期間，酶可配制在基材例如小麥上，并且可配制到預混物例如玉米/大豆飼料混合物(例如61.1％玉米、31.52％HiproSoya48、4.00％大豆油、0.40％碳酸氫鈉、0.25％維生素/礦物質Leghennen、0.20％外消旋甲硫氨酸、1.46％磷酸二鈣、1.16％石灰石)中。木聚糖酶可以按確保實現最終目標劑量例如20000XU/kg飼料的含量包含在內?？赏ㄟ^使配制在基材例如小麥上、配制到飼料混合物(粗粉)例如10kg玉米/大豆飼料混合物中并混合特定時間例如10min的一種或多種酶混合來制備預混物?？蓪㈩A混物添加至飼料例如110kg飼料中，并在調節(jié)之前混合特定時間例如10min。在制粒之前，通常在90℃下將包含酶的飼料調節(jié)30秒。如本文所用，術語“調節(jié)的”或“調節(jié)”意指使飼料/酶混合物混合并經干蒸汽處理以在30秒后達到90℃的目標溫度。可通過將飼料/酶混合物置于混合器例如階式混合器(例如KAHL混合器，長度130cm，直徑30cm，速度155rpm)中進行調節(jié)。就300kg/h而言，停留時間為約30秒，計算如下：容量：300kg/h-83.3g/秒。所測階式混合器中的填充物：2500g。階式混合器中的停留時間：2500g：83.3g/秒。＝30秒。安裝在階式混合器側面的可為帶有一個水排出器和蒸汽可從其引至粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物中的3個蒸汽閥的歧管。該系統(tǒng)中的蒸汽可以由高壓鍋爐提供，例如DanStoker鍋爐(最大容量400kg蒸汽/h)。測試可在2ato過壓下進行并且可經由控制蒸汽加至階式混合器的減壓閥引導蒸汽。歧管上的三個閥門可用于微調期望的粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物溫度。通過加入1％蒸汽，粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物溫度增加14℃。在調節(jié)之后，飼料/酶混合物可成型為丸粒。丸?？稍诰哂心＞叩腟imonHeesen壓丸機中形成。容量設定為300kg/小時并與計量螺桿相適應。在階式混合器中通過蒸汽將粗粉/預混物加熱至65至95℃的目標溫度。蒸汽量可通過減壓閥和歧管進行調控。對于各個溫度水平，在8-10min制粒后，樣品首先在建立操作時獲取。壓丸機可為帶有7.5kW電機的SimonHeesen，labor型(單輥)。模具內徑：173mm，壓力輥高度：50mm，壓力輥直徑：140mm。壓丸機：500rpm以及標稱容量：300kg/h?？稍趬和柚螳@取樣品。例如在帶有打孔底部的分區(qū)冷卻箱中對其進行冷卻，通風器：1500m3空氣/h。在用得自小麥的天青精交聯的阿拉伯聚糖作為底物分析樣品中的木聚糖酶活性之前，用Perten實驗室磨機研磨包含木聚糖酶的飼料混合物(粗粉)和所得飼料丸粒。使5.0g的研磨樣品與50mlMcIlvaine緩沖液(pH5.0)混合，并在磁力攪拌器上攪拌10min。使提取物過濾后通過玻璃纖維過濾器。使100μl提取物與400μlMcIlvaine緩沖液(pH5.0)混合并在50℃下平衡2min。添加60mgXylazyme片劑(Megazyme，Ireland)以引發(fā)反應并使樣品在50℃下溫育60分鐘，然后通過添加5ml的2％三(羥甲基)-氨基甲烷(Sigma,T-1503)終止反應。用渦旋混合溶液，使其靜置5分鐘，然后在再次混合后于3500rpm下離心10分鐘。在590nm處測定上清液的吸光度。一式兩份測定各個樣品。使用根據空白(無酶)粗粉和90℃飼料得到的木聚糖酶標準曲線對木聚糖酶活性進行定量。包含木聚糖酶的粗粉樣品的活性設為100％并且相對于其來計算90℃條件下的飼料丸粒中合成木聚糖酶的殘留活性?，F在將僅以舉例的方式，參照如下附圖和實施例來描述本發(fā)明。實施例實施例1—合成木聚糖酶的產生質粒構建經由從頭基因合成(GeneArtGmbH,Germany)產生示為SEQIDNo.2、4、6、8、10和12的編碼合成木聚糖酶的基因。然后廠商經由Gateway重組技術(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)將合成木聚糖酶克隆到目的載體pTTT-pyr2中。所得的表達合成木聚糖酶的質粒pTTTpyr2-synXyn_VAR(圖13)在大腸桿菌DH5a菌株中進行擴增，純化，測序，獨立排列在96MTP中并用于如進一步描述的真菌轉化。表達載體包含允許目標基因的強誘導型表達的里氏木霉cbhI啟動子和終止子區(qū)，使得轉化體在基本培養(yǎng)基(具有乙酰胺且無尿苷)上生長的構巢曲霉amdS和里氏木霉pyr2選擇性標記物。質粒由于里氏木霉衍生的端粒區(qū)而自主維持于真菌細胞中。復制質粒的使用導致轉化的頻率增大并避開了在整合性真菌轉化中觀察到的基因座依賴性表達問題。真菌菌株、生長培養(yǎng)基和轉化使用PEG-原生質體方法使表達質粒(5-10μl)轉化到缺失主要纖維素酶和木聚糖酶2的里氏木霉菌株中(Δcbh1Δcbh2Δegl1Δegl2Δegl3Δegl4Δegl5Δegl6Δbgl1Δman1Δxyn2Prdiv:iRNAxyn1xyn3:amdSpyr2-)。內源性木聚糖酶1和3背景的另外下調通過以下來進一步實現：將干擾iRNA靶盒引入宿主菌株基因組以關閉xyn1和xyn3同時表達。所有高通量轉化使用Biomek機械手(BeckmanCoulter,USA)在24孔MTP形式中機器人式進行。根據預先確定的布局排列的96孔MTP中的具有合成木聚糖酶的質粒得自廠商。包含約1μg的DNA和5×106原生質體(總體積為50μl)的轉化混合物用200μl的25％PEG溶液處理，用1倍體積的1.2M山梨醇/10mMTris、pH7.5/10mMCaCl2溶液稀釋，使其自動化重新布置到24孔MTP中并與包含1M山梨醇和10mMNH4Cl的1ml的3％瓊脂糖基本培養(yǎng)基混合。在轉化體生長之后，合并各個孔的孢子并在具有包含乙酰胺的MM的新鮮24孔MTP上修補(repatched)以用于額外的選擇性壓力。在形成孢子后，收獲得到孢子并將其用于接種24孔MTP形式或搖瓶中的液體培養(yǎng)物，生產培養(yǎng)基如下：37g/L葡萄糖、1g/L槐糖、9g/L酪蛋白氨基酸、10g/L(NH4)2SO4、5g/LKH2PO4、1g/LCaCl2x2H2O、1g/LMgSO4×7H2O、33g/L1,4-哌嗪雙(丙磺酸)、pH5.5、2.5ml/L的400X里氏木霉痕量元素(175g/L檸檬酸、200g/LFeSO4×7H2O、16g/LZnSO4×7H2O、3.2g/LCuSO4×5H2O、1.4g/LMnSO4×H2O、0.8g/L硼酸)。添加1ml的生產培養(yǎng)基以在24孔MTP中產生合成木聚糖酶。對于搖瓶，體積按比例增大。在200rpm搖動下，將板在28℃和80％濕度下培養(yǎng)6天。通過在2500rpm下離心10分鐘收獲得到細胞，并采用Millipore真空系統(tǒng)使其過濾通過MilliporeMultiscreen過濾板。培養(yǎng)上層清液通過真空過濾收獲得到并用于測定其性能以及表達水平。通過采用MESSDS電泳緩沖液(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)在Novex10％Bis-Tris凝膠上進行PAGE電泳來測定整個液體培養(yǎng)基樣品的蛋白質特征。用SimplyBlueSafeStain(美國加利福尼亞州卡爾斯巴德的英杰公司)顯影多肽帶。對于較大規(guī)模生產，發(fā)酵在6升的耐高壓持續(xù)攪拌反應器中進行。用孢子接種搖瓶并在搖動下于28℃溫育3天，搖瓶培養(yǎng)基如下：5g/L(NH4)2SO4、4.5g/LKH2PO4、1g/LMgSO4×7H2O、14.4g/L檸檬酸×1H2O、1g/LCaCl2×2H2O、27.5g/L葡萄糖、1滴消泡劑(EROLDF6000K)。用NaOH(2M)將pH調節(jié)至5.5并在122℃下將培養(yǎng)基高壓消毒20分鐘。在冷卻后，添加2.5ml/L的400X里氏木霉痕量元素(175g/L檸檬酸、200g/LFeSO4×7H2O、16g/LZnSO4×7H2O、3.2g/LCuSO4×5H2O、1.4g/LMnSO4×H2O、0.8g/L硼酸)。使用得自搖瓶的細胞來接種包含以下生物反應器培養(yǎng)基的生物反應器：4.7g/LKH2PO4、1g/LMgSO4×7H2O、4.3g/L(NH4)2SO4、45g/L葡萄糖、0.7g/LCaCl2×2H2O、0.3g/L消泡劑(EROLDF6000K)、2.5ml/L的400X里氏木霉痕量元素(175g/L檸檬酸、200g/LFeSO4×7H2O、16g/LZnSO4×7H2O、3.2g/LCuSO4×5H2O、1.4g/LMnSO4×H2O、0.8g/L硼酸)。將溫度控制于34℃；通過添加20％氫氧化銨來連續(xù)控制pH。通過改變攪動速度來使溶解的氧氣控制為最低40％飽和度。測定廢氣二氧化碳和氧氣含量。當初始葡萄糖耗盡時，開始葡萄糖/槐糖的定量給料。與此同時，降低溫度至并控制于28℃，增大pH至并控制于4.5。在140小時后，終止發(fā)酵。從罐中除去發(fā)酵液，并通過過濾移除細胞。在分離細胞后，通過超濾來濃縮濾液。最后，將濃縮物無菌過濾并用于制粒穩(wěn)定性研究。實施例2——合成木聚糖酶性能除了生物效力優(yōu)良之外(例如對動物性能有積極效果)，用于商業(yè)應用例如飼料應用的新木聚糖酶產品還需要具有優(yōu)良的產品特征，包括加工穩(wěn)定性。已鑒定出合成多肽具有木聚糖酶活性。發(fā)現合成多肽有熱穩(wěn)定性。已發(fā)現合成木聚糖酶在經歷制粒工藝之后具有較高的回收率(殘留活性)。合成木聚糖酶能夠降解DDGS(例如玉米DDGS-并由此增溶玉米)的WU-AX(水不可提取的阿拉伯聚糖)。此外，發(fā)現合成多肽對胃蛋白酶降解有抗性。飼料中合成木聚糖酶的目的在于通過使更多的不溶性纖維消化并進入溶液來使喂養(yǎng)料的能量利用率最大化，由此使得更多的營養(yǎng)物質可用并因此產生更多的可發(fā)酵非淀粉多糖(NSP)。除了較高的生物效力之外(例如對動物性能有積極效果)，本文提出的新木聚糖酶產品還具有優(yōu)良的產品特征，包括熱穩(wěn)定性、針對熱處理的穩(wěn)定性(例如制粒)和/或胃蛋白酶抗性。在一系列測試中對合成木聚糖酶進行測試，詳情見下文材料和方法部分。材料和方法歸一化基于活性對合成木聚糖酶進行歸一化。分別使粗制樣品稀釋20和130倍，并且采用活性測定以及具有以下濃度的商用木聚糖酶標準曲線來測定活性：0、10、20、30、40、50、60和70μg/ml。用25mM乙酸鈉、250mMNaCl(pH4.0)稀釋樣品。采用20倍稀釋液對表觀濃度小于1000μg/ml的樣品進行定量，同時采用130倍稀釋液對剩余樣品進行定量。隨后，在孔體積為210μl的微滴定板(MTP)(規(guī)格化板)中用25mM乙酸鈉、250mMNaCl(pH4.0)將合成木聚糖酶粗制樣品稀釋至150μg/ml的表觀濃度。用107μl25mM乙酸鈉、250mMNaCl(pH4.0)將53μl的歸一化樣品稀釋至50μg/ml的表觀濃度。定量使用CriterionGel系統(tǒng)對規(guī)格化板中的樣品進行定量。在加入酶后，使Laemmli樣品緩沖液(Bio-rad#161-0737)與二硫蘇糖醇(DTT)(Bio-rad#161-0611)和MilliQ水混合至50％Laemmli樣品緩沖液和50mMDTT的最終濃度。使70μlLaemmli樣品緩沖液混合物與得自規(guī)格化板的10μl樣品充分混合，與由被25mM乙酸鈉、250mMNaCl(pH4.0)稀釋至下列濃度的純化商用木聚糖酶制定的標準曲線相平行：120、160、200、240、280和320μg/ml。除了各個合成木聚糖酶的色氨酸數量與Mw的比率之外，表1還給出了分子量(Mw)、色氨酸數量。通過校正商業(yè)木聚糖酶的表觀濃度來計算各個木聚糖酶的濃度，這通過乘以商業(yè)木聚糖酶的色氨酸數量與Mw的比率除以合成木聚糖酶的色氨酸數量與Mw的比率來實現。規(guī)格化板中所有合成木聚糖酶樣品的濃度測定為120-200μg/ml的范圍。MW#W#W/MWSynXyn723259370.02147SynXyn803310370.02114SynXyn853292970.02125SynXyn893285470.02130SynXyn923289470.02128SynXyn933289470.02128商用木聚糖酶3325480.02406表1各個合成木聚糖酶的Mw和色氨酸數量與Mw的比率活性測定在牛血清白蛋白(BSA)存在下，測定木聚糖酶對于小麥WE-AX(水可提取的阿拉伯聚糖)的合成木聚糖酶活性。當對阿拉伯聚糖呈活性的木聚糖酶在底物中水解β1-4-鍵時，還原性端基的量增大。通過熱和堿性條件，還原性端基與無色PAHBAH(4-對-羥基苯甲酸酰肼)反應，由此被PAHBAH氧化并在410nm處測定吸光度(Lever,1972,AnalyticalBiochemistry,47,273-279)。緩沖液與試劑：100mM醋酸鈉(NaAc)，pH5.0，0.10％BSA；將9.6g三水合醋酸鈉溶解于800ml去離子水中，并用濃乙酸將pH調節(jié)至5.0。隨后，用去離子水補加至1000ml。將1.0gBSA(SigmaAldrich，A7906)溶解于1000ml100mMNaAc(pH5.0)。WE-AX，阿拉伯聚糖底物0.5％，pH5.0：將0.5g水溶性小麥阿拉伯聚糖(Megazyme，43厘沲的高粘度，P-WAXYH)用5ml96％乙醇潤濕，并添加100ml100mMNaAc(pH5.0)。在攪拌下將溶液加熱至沸騰，隨后在攪拌下冷卻至室溫(RT)。PAHBAH工作液：制備三種溶液：1)0.5M氫氧化鈉(NaOH)：500ml去離子水中10.0g氫氧化鈉；2)0.5MHCl：500ml去離子水中20.8ml37％HCl；3)5％PAHBAH原液；將25.0gPAHBAH(4-羥基苯甲酰肼，SigmaH9882)溶解于500ml0.5MHCl中。溶液避光保護并儲存于4℃。在臨用前，通過用0.5MNaOH稀釋PAHBAH原液五次來制備PAHBAH工作液。程序：采用Biomek分配機械手(BeckmanCoulter,USA)在MTP(測定貯備板和測定板；96孔透明聚苯乙烯微孔板，Corning,Cat.no.9017；PCR板；VWR,Eu.目錄號211-0297；讀取板；KiskerBiotech,Cat.No.G080-F)中制備所有稀釋液。1.在測定貯備板中用147μl100mMNaAc(pH5.0)、0.1％BSA緩沖液稀釋3μl酶樣品(濃度范圍為40-65μg/ml)。2.使得自測定貯備板的25μl樣品與測定板中的150μlWE-AX底物混合。3.在30℃和1150rpm下溫育測定板并在iEMS搖動器(ThermoScientific)中搖動15分鐘。4.在溫育結束后，使得自測定板的45.4μl反應混合物與PCR板中的135μlPAHBAH工作液混合。5.在95℃下使PCR板在PCR儀(Tetrad2，peltier熱循環(huán)儀，Bio-Rad)中溫育5分鐘并隨后冷卻至20℃10秒。6.將100μl樣品轉移至讀板中并且在微板讀板器(MolecularDevices)上于410nm處讀取板。所有合成木聚糖酶的活性計算為三次平行測定的平均值減去包含100mMNaAc(pH5.0)、0.1％BSA緩沖液且無酶的空白。熱穩(wěn)定性測定緩沖液與試劑：1％Tween80：用9mlMES緩沖液(pH6.0)溶解1gTween80(SigmaP-8074)，隨后用MES緩沖液(pH6)將其再稀釋10次。25mMMES緩沖液(pH6.0)，0.00125％Tween80：25mMMES緩沖液(pH6.0)：將4.88gMES(2-(N-嗎啉)-乙磺酸)溶解于800ml去離子水中，并用NaOH將pH調節(jié)至6.0。添加1.25ml1％Tween80，之后添加去離子水至1000ml。程序：在升高的溫度下通過在25mMMES緩沖液、0.00125％Tween80(pH6.0)中溫育蛋白質濃度為約1μg/ml(范圍：0.8-1.3μg/ml)的合成木聚糖酶10分鐘來測定合成木聚糖酶的熱穩(wěn)定性。如在活性測定中所述(步驟2-6)，在溫育結束之后測定經熱處理的合成木聚糖酶的殘留活性。各個合成木聚糖酶活性計算為三次平行測定的平均值減去包括25mMMES緩沖液、0.00125％Tween80(pH6.0)而不加酶的空白。殘留活性計算為所測經熱處理樣品的活性與所測未在升高的溫度下溫育的相同樣品的活性之間的比率。胃蛋白酶耐受性測定在緩沖溶液中pH3.5下于40℃測試合成木聚糖酶耐受胃蛋白酶降解的能力。通過在40℃和1150rpm下，在iEMS搖動器(Thermoscientific)中使合成木聚糖酶在包含0.2g/l胃蛋白酶的100mM甘氨酸緩沖液(pH3.5)中溫育2小時來測定合成木聚糖酶耐受胃蛋白酶降解的能力。如在活性測定中所述(步驟2-6)，在溫育結束后測定合成木聚糖酶的殘留活性。緩沖液與試劑：100mM甘氨酸緩沖液，pH3.5：將7.52g甘氨酸溶解于800ml去離子水中，并用HCl將pH調節(jié)至pH3.5。隨后，用去離子水補加至1000ml。0.2mg/ml胃蛋白酶溶液：將0.2g胃蛋白酶(Sigma，P-7000)溶解于1000ml100mM甘氨酸緩沖液(pH3.5)中。各個合成木聚糖酶的活性計算為三次平行測定的平均值減去包含0.2mg/ml胃蛋白酶溶液而無酶的空白。各個合成木聚糖酶的殘留活性計算為所測經胃蛋白酶處理的樣品活性與在活性測定中用未經處理樣品所測的活性之間的比率。增溶測定緩沖液與試劑：100mMMES緩沖液，pH6.0：將19.52gMES(2-(N-嗎啉)-乙磺酸)溶解于800ml去離子水中，并用NaOH將pH調節(jié)至6.0。隨后，用去離子水補加至1000ml。玉米DDGS底物溶液，10％：通過在600rpm下攪拌15min使粒度<212μm的cDDGS在100mMMES緩沖液(pH6.0)中水化。在剛終止攪拌之后，由于cDDGS中的酸殘留物導致pH下降，所以對pH進行調節(jié)。將190μl/孔cDDGS底物轉移到底物板中，使其在-20℃下儲存?zhèn)溆?。程序：采用Biomek分配機械手(BeckmanCoulter,USA)在MTP(底物板和收集板；96孔透明聚苯乙烯微孔板，Corning,Cat.no.9017；過濾板；0.2μmPVDF膜，Corning，目錄號3504；半深孔板：薄型1.2ml方形存儲板，目錄號AB-1127，ThermoScientific)中制備所有稀釋液。1.將10μl酶樣品(150μg/ml的表觀濃度)添加至預制底物板中。2.在40℃下在iEMS中溫育240分鐘；3.使得自經溫育底物板的170μl樣品轉移到過濾板中。4.將過濾板置于收集板的頂部，并在1666xg下離心10min。5.在進一步分析之前，使收集板儲存于-20℃。6.用半深孔板中的900μl超純水稀釋得自收集板的100μl，并且使其在轉移至Skalar裝置之前在搖床上混合2分鐘。戊聚糖的定量根據Rouau&Surget(1994,CarbohydratePolymers,24,123-132)所述的方法使用連續(xù)流動注入裝置(SKALAR系統(tǒng))來測定引入溶液的C5糖(戊糖)總量。用CH3COOH和HCl的混合物處理上清液以將多糖水解為單糖。添加間苯三酚(1,3,5-三羥基苯)以與單戊糖和單己糖反應，從而形成有色復合物。通過測量550nm與510nm(作為基準波長)處的吸光度，用木糖標準曲線(50-400μg木糖/ml)計算溶液中的戊糖濃度。不同于戊糖-間苯三酚復合物，己糖-間苯三酚復合物的吸光度在這些波長下是恒定的。將葡萄糖(0.3％)添加至間苯三酚溶液中以創(chuàng)建恒定葡萄糖信號并進一步確保無己糖的干涉作用。結果表示為性能指數(PI)，其計算為在分別添加和不添加合成木聚糖酶的情況下溫育cDDGS之后值之間的比率：(在用合成木聚糖酶溫育后溶液中C5-糖總量)/(在不存在酶情況下溫育后溶液中C5-糖總量)。制粒穩(wěn)定性在TechnologicalInstitute(Kolding,Denmark)進行實地制粒試驗。各個木聚糖酶可配制在小麥上并混入玉米/大豆飼料混合物(61.1％玉米、31.52％HiproSoya48、4.00％大豆油、0.40％碳酸氫鈉、0.25％維生素/礦物質Leghennen、0.20％外消旋甲硫氨酸、1.46％磷酸二鈣、1.16％石灰石)中。木聚糖酶以達到20000XU/kg飼料的最終目標而包含在內。通過使配制在小麥上的木聚糖酶混入10kg玉米/大豆飼料混合物中并混合10分鐘來制備預混物。然后在調節(jié)之前將預混物添加至110kg飼料中并混合10分鐘。在制粒之前，在90℃下將包含酶的飼料調節(jié)30秒。如本文所用，術語“調節(jié)”意指使飼料/酶混合物混合并經干蒸汽處理以在30秒后達到90℃的目標溫度。通過將飼料/酶混合物置于階式混合器(即KAHL混合器，長度130cm，直徑30cm，速度155rpm)中進行調節(jié)。就300kg/h而言，停留時間為約30秒，計算如下：容量：300kg/h-83.3g/秒。所測階式混合器中的填充物：2500g。階式混合器中的停留時間：2500g：83.3g/秒。＝30秒。安裝在階式混合器側面的為帶有一個水排出器和蒸汽從其引至粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物中的3個蒸汽閥的歧管。該系統(tǒng)中的蒸汽由高壓DanStoker鍋爐(最大容量400kg蒸汽/h)提供。測試在2ato過壓下進行并且可經由控制蒸汽加至階式混合器的減壓閥引導蒸汽。歧管上的三個閥門可用于微調期望的粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物溫度。通過加入1％蒸汽，粗粉(例如飼料混合物)或飼料/酶混合物溫度增加14℃。在調節(jié)之后，飼料/酶混合物成型為丸粒。丸粒在具有模具的SimonHeesen壓丸機中形成。容量設定為300kg/小時并與計量螺桿相適應。在階式混合器中通過蒸汽將粗粉加熱至65至95℃的目標溫度。蒸汽量通過減壓閥和歧管進行調控。對于各個溫度水平，在8-10min制粒后，樣品首先在建立操作時獲取。壓丸機為帶有7.5kW電機的SimonHeesen，labor型(單輥)。模具內徑：173mm，壓力輥高度：50mm，壓力輥直徑：140mm。壓丸機：500rpm以及標稱容量：300kg/h。在壓丸之后獲取樣品。例如在帶有打孔底部的分區(qū)冷卻箱中對其進行冷卻，通風器：1500m3空氣/h。在用得自小麥的天青精交聯的阿拉伯聚糖作為底物分析樣品中的木聚糖酶活性之前，用Perten實驗室磨機研磨包含木聚糖酶的飼料混合物(粗粉)和所得飼料丸粒。使5.0g的研磨樣品與50mlMcIlvaine緩沖液(pH5.0)混合，并在磁力攪拌器上攪拌10min。使提取物過濾后通過玻璃纖維過濾器。使100μl提取物與400μlMcIlvaine緩沖液(pH5.0)混合并在50℃下平衡2min。添加60mgXylazyme片劑(Megazyme，Ireland)以引發(fā)反應并使樣品在50℃下溫育60分鐘，然后通過添加5ml的2％Tris(Sigma,T-1503)終止反應。用渦旋混合溶液，使其靜置5分鐘，然后在再次混合后于3500rpm下離心10分鐘。在590nm處測定上清液的吸光度。一式兩份測定各個樣品。使用根據空白(無酶)麥芽漿和90℃飼料得到的標準曲線對木聚糖酶活性進行定量。在McIlvaine緩沖液(pH5.0)中提取小麥配制的SynXyn92木聚糖酶10分鐘，以獲得160U/ml的濃度。使提取物過濾通過玻璃纖維過濾器，此后將0、200、400、600、800和1000μl提取物添加至5.0g的研磨空白麥芽漿樣品和90℃飼料中。如以上提取方法中所述，測定這些標準樣品的木聚糖酶活性。包含木聚糖酶的粗粉樣品的活性設為100％并且相對于其來計算90℃條件下的飼料丸粒中合成木聚糖酶的殘留活性。結果本文提出的合成木聚糖酶有利于體外降解得自cDDGS的WU-AX(水不可提取的阿拉伯聚糖)，在pH5下具有可接受的特定活性，是熱穩(wěn)定的并在pH3.5下抗胃蛋白酶降解(在2小時溫育之后具有至少70％的殘留活性)。就本文命名為synXyn92的合成酶而言，測定飼料加工穩(wěn)定性，并且認為飼料加工穩(wěn)定性較高(在90℃處理具有至少80％的殘留活性)。表2：本文列出合成木聚糖酶在所選擇的溫度(61℃、65℃或71℃)下溫育10分鐘后的殘留活性，在胃蛋白酶存在下溫育2h后的殘留活性和戊聚糖增溶PI。認為PI大于1.5的合成木聚糖酶能夠降解得自cDDGS的WU-AX。表3示出成對比對的序列同一性(表示為百分比)。使用Indonesia軟件組計算同一性百分比，其也用于編制序列對比。通過將最短多肽的相同氨基酸的數目除以氨基酸數目來計算同一性百分比。在DanishTechnologicalInstitute用標準程序來測定加工穩(wěn)定性(飼料?；€(wěn)定性的形式)，并且描述于材料和方法部分中的制粒穩(wěn)定性。SynXyn92在制粒后的殘留活性為84％。在制粒之后，80％的回收率被視為是完全回收。當在活性測定中測試時，本文命名為SynXyn92、SynXyn85、SynXyn89、SynXyn72、SynXyn80和SynXyn93的合成序列也給出了肯定應答。當在活性測定中提及的條件下分析時，導致OD(410nm)>0.7的多肽被視為具有木聚糖酶活性。實施例3——小麥粘度降低與主要使用玉米的US相對比，在歐洲燃料醇工業(yè)中，小粒谷類如小麥、大麥和黑麥為常見的原材料。這些小粒谷類基本上包含淀粉、高含量非淀粉多糖聚合物(NSP)，如纖維素、β-葡聚糖和半纖維素。用于表示不同NSP的比率對于每種飼料是不同的。表1示出相較于一些其它飼料，小麥、大麥和黑麥中不同量的NSP。表1：存在于不同的飼料中的非淀粉多糖(gkg-1干物質)1,21BachKnudsen，K.E.，1997.Carbohydrateandlignincontentsofplantmaterialsusedinanimalfeeding.Anim.FeedSci.Technol.,67(4):319-3382Englyst,H.N.,Anderson,V.和Cummings,J.H.,1983.Starchandnon-starchpolysaccharidesinsomecerealfoods.J.Sci.FoodAgric.,34:1434–1440.3非纖維素多糖：戊聚糖、(阿拉伯)木聚糖及其它半纖維素NSP賦予谷物麥芽漿較高的粘度。高粘度對乙醇生產有負面影響，因為其將限制可在釀造中使用的固體濃度并且其將降低工藝的能量效率。此外，在整個工藝中存在的殘留半纖維素可導致在換熱器和蒸餾設備中結垢。當麥芽漿冷卻至發(fā)酵溫度(32℃)時，觀察到高粘度的最大影響。這就解釋了為什么需要在冷卻步驟之前于工藝的任何地方降低粘度。根據所用方法，酶需要在60℃和/或85℃下工作。可在乙醇生產工藝的不同階段：混合和/或糖化/發(fā)酵中添加降粘度酶。優(yōu)選地，在混合中添加酶以打破初始粘度。在乙醇生產工藝中使用降粘度酶有多種益處；·可在工藝中使用更高的干物質麥芽漿·可獲得固體含量更高的最終漿·熱傳遞更好，能量需求更低·蒸發(fā)器結垢減少，從而降低清潔成本·最終乙醇收率增大·DDGS的質量改善方法使用得自PertenInstruments的快速粘度分析儀(RVA4500)來測定小麥麥芽漿的粘度特征。根據以下方案來制備該小麥麥芽漿：如下制備60克的30％DS(“原樣”34.65％)小麥漿液(同時在兩個RVA上運行)：-稱取20.80克的小麥-在100ml玻璃燒杯中，稱取39.20克的自來水并添加137μl4NH2SO4-將小麥添加至水中并采用頂置式攪拌器在最大速度(約500rpm)下攪拌5分鐘-將25.0克的漿液轉移到RVA杯中，添加稀釋50倍的酶并使RVA開始運行(檢查起始pH是否為約5.3)-在RVA運行結束時檢查pH(5.6-5.7)在各個實驗中(25克漿液)，木聚糖酶用量為25μg蛋白質(每8.66g“原樣”小麥)，對應于2.9μg蛋白質/g原樣”小麥。CL用量為0.15kg/MT“原樣”小麥(2.2AAU/g“原樣”或2.6AAU/gDS)。在RVA中模擬標準小麥液化。在60℃下進行20分鐘預處理，之后在85℃下進行30分鐘液化步驟。在預處理和液化之后，使?jié){液冷卻至32℃以測定發(fā)酵條件下的粘度。液化pH保持在5.3-5.7之間。在該實驗中，SynXyn93的性能相較于已知木聚糖酶具有粘度降低的特性(陽性對照)。數據示于圖16中。這些數據示出SynXyn93酶在預處理步驟(60℃)期間不具有活性，但在液化步驟(85℃)中具有活性。在85℃的液化步驟期間粘度繼續(xù)降低，表明SynXyn93在該升高的溫度下具有顯著的活性。SynXyn93的最終活性比空白低52-55％。進行后續(xù)實驗，其中在液化溫度(85℃)下而非在工藝開始時添加木聚糖酶。這樣做可表明SynXyn93的熱穩(wěn)定性得到改善。對于這些運行，使用具有注入孔的特定心軸，使得能夠在RVA運行期間添加酶。當達到液化溫度(85℃)時(22分鐘處理時間)使心軸停止1分鐘并添加木聚糖酶。注入孔用50μl軟化水沖洗并在23分鐘處理時間時使心軸再次開始旋轉。在這些運行中，在工藝開始時添加CL。*在預處理中未添加木聚糖酶，因此預期值與空白相同數據示于圖17中。這些數據證實，SynXyn93相較于陽性對照酶熱穩(wěn)定性增大。SynXyn93示出相較于空白粘度降低54-60％，而陽性對照酶僅為40-41％。對于SynXyn93，當在工藝開始或85℃添加時，性能并無差異。另一方面，當在85℃而非在工藝開始添加時，陽性對照酶顯著受到影響：粘度降低(相比于空白)由63％降至41％。因此在這種情況下，SynXyn93的最終粘度低于陽性對照酶。上面說明書中提及的所有出版物均以引用的方式并入本文。對本領域的技術人員將顯而易見的是，可在不背離本發(fā)明的范圍和實質的條件下對所描述的本發(fā)明方法和系統(tǒng)作出各種修改和變型。盡管本發(fā)明已結合特定的優(yōu)選實施方案進行了說明，但應該理解受權利要求書保護的本發(fā)明不應該不當地受限于這些特定的實施方案。實際上，生物化學和生物技術或相關領域的技術人員顯而易見的對所描述的本發(fā)明實施方式的各種修改旨在落入如下權利要求書的范圍內。當前第1頁1 2 3