專利名稱：：抗il-17抗體的制作方法抗IL-17抗體發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是抗人IL-17的單克隆抗體領(lǐng)域。本發(fā)明涉及中和性抗IL-17單克隆抗體，其以高親和力結(jié)合到IL-17非線性或構(gòu)象抗原表位上，該抗原表位含有氨基酸DGNVDYH。本發(fā)明抗體可以為嵌合、人源化或人抗體、抗體的免疫連接物或其抗原結(jié)合段，并用作治療自身免疫、炎性、細(xì)胞增殖和發(fā)育病癥的藥物。發(fā)明背景細(xì)胞因子的IL-17家族目前包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F。所有IL-17家族成員具有4個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基，其參與鏈內(nèi)二硫鍵的形成并具有兩個(gè)或更多半胱氨酸殘基，所述殘基參與鏈間二硫鍵的形成。所述IL-17家族的成員與任何其它已知的細(xì)胞因子沒(méi)有序列相似性。然而，在松鼠猴皰滲病毒的可讀框13中發(fā)現(xiàn)了IL-17A的病毒同源物(Yao,Z.等人，Immunity,3:811,1995)并且其與人IL-17A有72%的氨基酸殘基同一性。已經(jīng)報(bào)道了IL-17家族成員的許多功能，其主要參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。白細(xì)胞介素17(IL-17,也被稱作IL-17A)是20-30kD的同源二聚體糖蛋白，其主要由活化的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生并作為促炎細(xì)胞因子起作用。當(dāng)特定的IL-17家族成員被簡(jiǎn)單稱作"IL-17"時(shí)，應(yīng)理解涉及的家族成員為IL-17A。IL-17由活化的T細(xì)胞在炎性位點(diǎn)分泌，而不在體循環(huán)中分泌。IL-17結(jié)合到稱為IL-17R的I型跨膜受體上，該IL-17R為大的廣泛表達(dá)的蛋白質(zhì)，與其它已知的細(xì)胞因子受體沒(méi)有顯著的序列相似性。IL-17具有多種生物學(xué)特性，包括上調(diào)黏著分子并從多種細(xì)胞類型包括滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)大量炎性細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生。同樣，IL-17通過(guò)誘導(dǎo)趨化因子的釋放誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞募集到炎性位點(diǎn)上，刺激前列腺素和金屬蛋白酶的產(chǎn)生，并抑制蛋白聚糖的合成。此外，IL-17在造血祖細(xì)胞的成熟中起重要作用。已表明IL-17在不同的器官和組織包括肺、關(guān)節(jié)軟骨、骨、腦、造血細(xì)胞、腎、皮膚和腸中具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。對(duì)于IL-17生物活性的綜述見(jiàn)例如Kolls和Linden,Immunity21:467-476，2004，或Fossiez等人Int.Rev.Immunol.16:541,1998。IL-17(即，IL-17A)的增加水平已經(jīng)與若干狀況、疾病或病癥有關(guān)，所述狀況、疾病或病癥包括呼吸道炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")、骨關(guān)節(jié)炎、骨侵蝕、腹膜內(nèi)膿腫與粘連、炎性腸病("IBD")、同種異體移植排斥、牛皮癉、某些類型的癌、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化和多發(fā)性硬化("MS")(綜述見(jiàn)Witkowski等人，Cell.Mol.LifeSci.61:567-579，2004)。IL-17和IL-17R在RA患者的滑膜組織中上調(diào)。通過(guò)結(jié)合IL-17特異性抗體或可溶性受體到IL-17上阻斷IL-17的生物活性減少了多種動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型中的炎癥和骨侵蝕(見(jiàn)例如Lubberts等人，Arthritis&Rheumatism,50:650-659，2004)。此外，IL-17對(duì)膠原基質(zhì)分解和炎癥及關(guān)節(jié)損傷具有IL-ip獨(dú)立的效應(yīng)，而IL-17與TNF-a協(xié)同擴(kuò)大炎癥。因此，假設(shè)它在炎性位點(diǎn)集中分布，IL-17呈現(xiàn)為治療RA和其它炎性或自身免疫疾病的新靶標(biāo)，其比靶定促炎細(xì)胞因子如TNF-a的體循環(huán)的藥物有潛在地更高安全性。當(dāng)前FDA批準(zhǔn)的結(jié)合并中和TNF-a的生物產(chǎn)品(ENBREL、REMICADE⑧和HUMIRA⑧抗體)已在降低RA病征和癥狀中和在RA患者亞群中減緩疾病的進(jìn)展中顯示出有效性。然而，不是所有的RA患者對(duì)用這些生物產(chǎn)品抑制TNF-a的生物活性的反應(yīng)相同。此外，IL-17mRNA在多發(fā)性硬化損傷中并在MS患者血液和腦脊液中的單核細(xì)胞中，尤其是在臨床惡化期間增加。因此，需要拮抗或中和IL-17活性的組合物來(lái)治療病癥、疾病或狀況，其中IL-17生物活性的存在引起或促進(jìn)不想要的病理學(xué)效應(yīng)或其中IL-17生物活性的降低促進(jìn)希望的療效，所述5病癥、疾病或狀況包括炎性疾病、細(xì)胞增殖和發(fā)育疾病及自身免疫疾病如RA、MS和IBD。需要中和性抗IL-17抗體，其特異地結(jié)合人類來(lái)源的IL-17及非人類哺乳動(dòng)物的IL-17，從而允許所述抗體用于臨床前和臨床體內(nèi)研究。此外，需要以高親和力和/或低解離速率(offrate)結(jié)合IL-17的IL-17特異性抗體，從而允許有效治療劑量降至最低，導(dǎo)致該抗體的給藥頻率低于使用以較低親和力(即較高的KD)和/或更快的解離速率結(jié)合IL-17的抗體的給藥頻率。高親和力的IL-17特異性抗體也是想要的，因?yàn)樗梢栽试S所述抗體經(jīng)皮下而不是經(jīng)靜脈內(nèi)對(duì)患者施用。為了產(chǎn)生最小有效治療劑量的治療性抗IL-17抗體，在IL-17生物活性測(cè)定中也需要低ICso值的IL-17特異性抗體。也希望提供對(duì)IL-17特異的抗體，其中由接受抗體的患者誘發(fā)的對(duì)所述抗體的免疫應(yīng)答降至最低。本發(fā)明滿足這些需要并提供相關(guān)的益處。發(fā)明概述本發(fā)明的抗體為嵌合的、人源化的、或完全人的抗IL-17單克隆抗體，和其抗原結(jié)合部分，其結(jié)合含有IL-17氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:276)的非線性表位并拮抗或中和至少一種與IL-17或其部分相關(guān)的體外或體內(nèi)生物活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體在例如此處實(shí)施例6A描述的體外IL-8報(bào)道子測(cè)定中具有小于或等于約1nM、卯0pM、800pM、700pM、600pM、560pM或500pM的ICso或在例如此處實(shí)施例6B描述的體外GROa報(bào)道子測(cè)定中具有小于或等于560pM的IC50。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的特征在于對(duì)人IL-17具有強(qiáng)結(jié)合親和力(KD),即低于約7pM、6.5pM、6.0pM、5.5pM、5.0pM、4.5pM或4.0pM?；蛘?，本發(fā)明抗體的特征在于對(duì)人IL-17的Kd不高于約7pM、6.5pM、6.0pM、5.5pM、5.0pM、4.5pM或優(yōu)選地不高于約4.0pM。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體進(jìn)一步通過(guò)對(duì)人IL-17的koff速率低于2x10-5s"進(jìn)行表征。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17抗體的特征在于以高于背景的水平特異性結(jié)合人IL-17及獼猴IL-17而不結(jié)合小鼠或大鼠IL-17。此外，本發(fā)明抗IL-17抗體結(jié)合人IL-17(即IL-17A),但不結(jié)合人IL-17B、C、D、E或F。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體含有輕鏈可變區(qū)("LCVR")多肽，該多肽含有3個(gè)CDR序列，其共同存在于下文表3中列出的Fab中并且存在于本發(fā)明抗體中與表3列出的Fab中相同的CDR位置上。優(yōu)選地，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體包含LCVR多肽，該多肽具有選自SEQIDNO:178-243的氨基酸序列。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體含有重鏈可變區(qū)("HCVR，，)多肽，該多肽含有3個(gè)CDR，其共同存在于下文表2中列出的Fab中并且存在于本發(fā)明抗體中與表2列出的Fab中相同的CDR位置上。優(yōu)選地，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體包含HCVR多肽，該多肽具有選自SEQIDNO:56-121的氨基餅列。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體包含LCVR多肽，該多肽含有3個(gè)CDR，其共同存在于表3中列出的Fab中并且其存在于本發(fā)明抗體與表3列出的Fab中相同的CDR位置上，并還包含HCVR多肽，該多肽含有3個(gè)CDR序列，其共同存在于表2中列出的Fab中并且其存在于本發(fā)明抗體中與表2列出的Fab中相同的CDR位置上。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體的6個(gè)CDR，或其功能片段共同存在于下文表1中列出的Fab中并存在于本發(fā)明抗體中與表l列出的Fab中相同的CDR位置上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體包含(i)LCVR多肽，具有選自SEQIDNO:178-243的氨基酸序列和(ii)HCVR多肽，具有選自SEQIDNO:56-121的氨基酸序列。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，包含LCVR多肽(具有選自SEQIDNO:178-243的氨基酸序列)的本發(fā)明抗體還包含選自SEQIDNO:56-121的HCVR多肽，其存在于表1中列出的Fab中，該表1中包含所述抗體中存在的特定的LCVR。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明單克隆抗體是能與竟?fàn)幙贵w竟?fàn)幗Y(jié)合到人IL-17或人IL-17的部分上的一種，其中所述竟?fàn)幙贵w包含具有SEQIDNO:241和118氨基酸序列的兩個(gè)多肽。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗單克隆抗體的LCVR包含1、2或3個(gè)肽，優(yōu)選3個(gè)肽，選自具有如(a)SEQIDNO:122-149;(b)SEQIDNO:150-167，和(c)SEQIDNO:168-177中顯示序列的肽(即對(duì)含有3個(gè)所述肽的抗體而言，一個(gè)肽來(lái)自(a)、一個(gè)肽來(lái)自(b)且一個(gè)肽來(lái)自(c))。具有SEQIDNO:122-149中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明抗體中時(shí)，在CDRL1處。具有SEQIDNO:150-167中顯示的序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明的抗體中時(shí)，在CDRL2處。具有SEQIDNO:150-167中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明的抗體中時(shí)，在CDRL3處。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的HCVR包含1、2或3個(gè)肽，優(yōu)選3個(gè)肽，選自具有如(a)SEQIDNO:11-28;(b)SEQIDNO:29-32，和(c)SEQIDNO:33-55和261中顯示序列的肽(即對(duì)含有3個(gè)所述肽的抗體而言，一個(gè)肽來(lái)自(a)、一個(gè)肽來(lái)自(b)且一個(gè)肽來(lái)自(c))。具有SEQIDNO:11-28中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH1處。具有SEQIDNO:29-32中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH2處。具有SEQIDNO:33-55和261中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH3處。本發(fā)明還提供包含6個(gè)肽的抗IL-17單克隆抗體，該6個(gè)肽選自具有如(a)SEQIDNO:122-149、(b)SEQIDNO:150-167、(c)SEQIDNO:168畫(huà)177、(d)SEQIDNO:11-28、(e)SEQIDNO:29-32和(f)SEQIDNO:33-55和261中顯示序列的肽(即一個(gè)肽來(lái)自(a-f)中的每一個(gè))；優(yōu)選地，所述6個(gè)肽共同存在于此處表1列出的Fab中。具有SEQIDNO:122-149中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明抗體中時(shí)，在CDRL1處。具有SEQIDNO:150-167中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明抗體中時(shí)，在CDRL2處。具有SEQIDNO:150-167中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于本發(fā)明抗體中時(shí)，在CDRL3處。具有SEQIDNO:11-28中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH1處。具有SEQIDNO:29-32中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH2處。具有SEQIDNO:33-55和261中顯示序列的肽，當(dāng)其存在于所述抗體中時(shí)，在CDRH3處。本發(fā)明還提供包含6個(gè)肽的抗IL-17單克隆抗體，該6肽具有如在SEQIDNO:247、248、249、244、245和246中顯示的序列。具有SEQIDNO:247中顯示序列的肽在CDRLl處。具有SEQIDNO:248中顯示序列的肽在CDRL2處。具有SEQIDNO:249中顯示序列的肽在CDRL3處。具有SEQIDNO:244中顯示序列的肽在CDRH1處。具有SEQIDNO:245中顯示序列的肽在CDRH2處。具有SEQIDNO:246中顯示序列的肽在CDRH3處。本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體可包含或由完整的抗體(即全長(zhǎng))、基本上完整的抗體或其抗原結(jié)合部分，例如Fab片段、F(ab')2片段或單鏈Fv片段組成。此外，本發(fā)明抗體可用可檢測(cè)到的標(biāo)記物標(biāo)記、固定在固相上和/或與異源化合物，例如酶、毒素或聚乙二醇分子綴合。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的方法，該方法包括在適合本發(fā)明單克隆抗體表達(dá)的條件下維持本發(fā)明的宿主細(xì)胞(即已經(jīng)被表達(dá)本發(fā)明抗體的本發(fā)明載體(或多個(gè)載體)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或感染的宿主細(xì)^J，由此表達(dá)此類抗體。所述方法還包括步驟從細(xì)胞或優(yōu)選從生長(zhǎng)該細(xì)胞的培養(yǎng)基中分離本發(fā)明單克隆抗體?？紤]本發(fā)明單克隆抗體的診斷用途。在一診斷應(yīng)用中，本發(fā)明提供測(cè)定樣品中IL-17蛋白質(zhì)水平的方法，該方法包括在結(jié)合條件下將待檢測(cè)的樣品暴露于本發(fā)明抗IL-17抗體中并檢測(cè)所述抗體對(duì)樣品的特異性結(jié)合。本發(fā)明抗IL-17抗體可用于通過(guò)比較試驗(yàn)樣品值和標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)試驗(yàn)樣品中IL-17的水平，該標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)結(jié)合所述抗體到含已知量IL-17的樣品上產(chǎn)生。本發(fā)明還提供試劑盒，該試劑盒包含本發(fā)明抗體和，優(yōu)選地使用所述抗體檢測(cè)樣品中IL-17蛋白質(zhì)的說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明提供組合物，優(yōu)選藥物組合物，其包含本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體。本發(fā)明藥物組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。在所述藥物組合物中，本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體為唯一的活9性成分。優(yōu)選地，藥物組合物包含本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的均一的或基本上均一的群體。用于治療用途的組合物為生理上相容的、無(wú)菌的且可被凍干并任選地由適當(dāng)?shù)南♂寗┕┙o。本發(fā)明提供在需要其的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人類中抑制至少一種IL-17的生物活性的方法，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物施用治療有效量或IL-17中和量的本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體。本發(fā)明還提供通過(guò)中和或拮抗IL-17的生物活性，例如由IL-17結(jié)合到其受體上引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制來(lái)治療疾病或病癥的方法，其包括對(duì)需要此類治療或預(yù)防的患者(例如人)施用治療有效量的IL-17中和量的本發(fā)明單克隆抗體。本發(fā)明體現(xiàn)了本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體用于制備藥物，該藥物用于對(duì)哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人施用，用于治療例如自身免疫疾病或炎性疾病或細(xì)胞增歹直疾病。本發(fā)明還體現(xiàn)了制成品，其包括包裝材料和包含在所述包裝材料內(nèi)的本發(fā)明抗體，其中包裝材料包含包裝插頁(yè)，其指出所述抗體特異性中和IL-17活性或降低存在于系統(tǒng)中的功能性IL-17的水平。本發(fā)明還提供編碼本發(fā)明抗體或其輕鏈或重鏈的分離的核酸分子；包含所述核酸的載體(或多種載體)，任選地所述核酸有效連接到調(diào)控序列，該調(diào)控序列可以被用所述栽體轉(zhuǎn)化過(guò)的宿主細(xì)胞識(shí)別；包含那個(gè)載體的宿主細(xì)胞；產(chǎn)生本發(fā)明抗體的方法，該方法包括培養(yǎng)宿主細(xì)胞以便于表達(dá)核酸并任選地，從宿主細(xì)胞培養(yǎng)基中回收抗體。本發(fā)明還提供編碼獼猴IL-17(SEQIDNO:253)或兔(SEQIDNO:251)的分離的核酸分子；猴或兔核酸編碼的IL-17蛋白質(zhì)(分別為SEQIDNO:10或9);包含所述核酸分子的載體；包含所述載體的宿主細(xì)胞；和產(chǎn)生獼猴IL-17或兔IL-17的方法。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示的是人IL-17家族成員蛋白質(zhì)(IL-17、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F)的氨基紗列比對(duì)。圖2顯示的是來(lái)自人、兔、大鼠、獼猴和鼠類的IL-17的氨基酸序列比對(duì)。發(fā)明詳述本發(fā)明給出嵌合的、人源化的或完全人的抗IL-17單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，其能夠在體外和/或在體內(nèi)中和或拮抗至少一種IL-17的活性。優(yōu)選地，本發(fā)明的此類抗體進(jìn)一步特征在于，在例如體外IL-8報(bào)道子測(cè)定或GROot報(bào)道子測(cè)定(見(jiàn)，例如實(shí)施例6)中具有低于約600或560pM的ICso和/或優(yōu)選地對(duì)IL-17具有低于4pM的強(qiáng)結(jié)合親和力。本發(fā)明抗體進(jìn)一步特征在于它們特異性結(jié)合人和獼猴IL-17(分別是(SEQIDNO:1和10)但不結(jié)合鼠或兔IL-17(分別SEQIDNO:7和8)。本發(fā)明單克隆抗體結(jié)合的抗原表位是人(和猴)IL-17的非線性表位且包含IL-17的殘基DGNVDYH(SEQIDNO:276)。當(dāng)它在全長(zhǎng)IL-17背景中時(shí)，本發(fā)明抗體與肽DGNVDYH接觸。定義也稱作"IL-17"或"IL-17A"的"白細(xì)胞介素17"是20-30kD的糖基化同源二聚體蛋白質(zhì)。人IL-17基因編碼155個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，其具有19個(gè)氨基酸信號(hào)序列和136個(gè)氨基酸成熟區(qū)段。人IL-17與小鼠和大鼠的氨基酸IL-17序列有62.5%和58%的氨基#列同一性，分別如圖2中顯示。人IL-17同獼猴IL-17有97.4%的氨基,列同一性。全長(zhǎng)抗體當(dāng)它天然存在時(shí)是含有四條肽鏈的免疫球蛋白分子，兩條重(H)鏈(全長(zhǎng)時(shí)約50_70kDa)和兩條輕(L)鏈(全長(zhǎng)時(shí)約25kDa)通過(guò)二硫鍵互相連接。每條鏈的氨基末端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的約100-110或更多個(gè)氨基酸的可變區(qū)。每條鏈的羧基末端部分定義為主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。輕鏈分為k或X并且其特征在于特定的恒定區(qū)。每條輕鏈包含N末端輕鏈可變區(qū)(此處為"LCVR")和包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域CL的輕鏈恒定區(qū)。重鏈分為Y、ji、a、8或￡,并定義抗體的同種型分別為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE并且這些中的若干可進(jìn)一步分成亞類(同種型)例如，IgG!、IgG2、IgG3、IgG4、IgA,和IgA2。每條重鏈類型特征在于具有特定的恒定區(qū)。每條重鏈包含N末端重鏈可變區(qū)(此處為"HCVR")和重鏈恒定區(qū)。IgG、IgD和IgA的重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2和CH3);并且IgM和IgE的重鏈恒定區(qū)包含四個(gè)結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2、CH3和CH4)。HCVR和LCVR區(qū)可進(jìn)一步分成高變區(qū)，稱為互補(bǔ)性決定區(qū)("CDR"),其中分散有更保守區(qū)域的所稱作的構(gòu)架區(qū)("FR")。每個(gè)HCVR和LCVR由三個(gè)CDR和四個(gè)FR組成，從氨基末端到羧基末端按以下順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。對(duì)于本發(fā)明全長(zhǎng)抗體，輕鏈優(yōu)選包含F(xiàn)R4下游的具有SEQIDNO:277中顯示序列的多肽。對(duì)于本發(fā)明全長(zhǎng)抗體，重鏈優(yōu)選包含F(xiàn)R4下游的具有SEQIDNO:278中顯示序列的多肽。此處重鏈的3個(gè)CDR稱作"CDRH1、CDRH2和CDRH3"且輕鏈的3個(gè)CDR稱作"CDRL1、CDRL2和CDRL3"。CDR包含與抗原形成特異性相互作用的大多數(shù)殘基。HCVR和LCVR區(qū)內(nèi)CDR氨基酸殘基的編號(hào)和位置是根據(jù)公知的Kabat編號(hào)慣例。如此處所用，術(shù)語(yǔ)"抗體"，涉及本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體(或簡(jiǎn)單地"本發(fā)明抗體")時(shí)，指的是單克隆抗體。如此處所用的"單克隆抗體"指嚙齒類抗體，優(yōu)選鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體，除非此處另有說(shuō)明。本發(fā)明單克隆抗體可使用例如本領(lǐng)域熟知的雜交瘤技術(shù)及重組技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、合成或重組技術(shù)或本領(lǐng)域已知的此類技術(shù)的組合產(chǎn)生。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"不限于通過(guò)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體。"單克隆抗體，，指的是來(lái)自單拷貝或克隆，包括例如，真核的、原核的或噬菌體克隆的抗體，并不是來(lái)源于產(chǎn)生它的方法。"單克隆抗體"可以是完整的抗體(包含完整的或全長(zhǎng)的Fc區(qū))、基本上完整的抗體、或包含抗原結(jié)合部分的抗體部分或片段，例如鼠抗體或嵌合的、人源化的或人抗體的Fab片段、Fab，片段或F(ab，)2片段。Fab片段含有輕鏈的可變和恒定結(jié)構(gòu)域及重鏈的可變結(jié)構(gòu)域和第一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(CHI)。"F(ab，)2，，抗體片段包含一對(duì)Fab片段，其通常在它們的羧基末端附近通過(guò)它們之間的鉸鏈半胱氨酸共價(jià)連接?？贵w片段的其它化學(xué)偶聯(lián)也為本領(lǐng)域已知。每個(gè)輕重鏈對(duì)的可變區(qū)形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。因此，完整的IgG抗體有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。除在雙功能或雙特異性抗體中，抗體的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)是相同的。如此處所用，"抗原結(jié)合部分"或"抗原結(jié)合區(qū)域"或"抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，，可互換地指抗體分子的部分，其含有氨基酸殘基，該氨基酸殘基與抗原相互作用并賦予抗體對(duì)抗原的特異性和親和力。該抗體部分包括維持抗原結(jié)合殘基的適當(dāng)構(gòu)象所必需的"構(gòu)架"氨基酸殘基。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合區(qū)的CDR完全或基本上為鼠來(lái)源，任選地某些氨基酸殘基被改變，例如，用不同的氨基酸殘基替代(見(jiàn)例如表2和3)來(lái)優(yōu)化抗體的特定性質(zhì)，例如KD、koff、IC5o。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體的構(gòu)架區(qū)為人來(lái)源或基本上人來(lái)源(至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%人來(lái)源)。優(yōu)選地本發(fā)明抗體的構(gòu)架區(qū)具有以下序列SEQIDNO:262(HCVRFR1)、263(HCVRFR2)、264(HCVRFR3)、265(HCVRFR4)、266(LCVRFR1)、267(LCVRFR2)、268(LCVRFR3)、269(LCVRFR4)并遵循Kabat編號(hào)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明IL-17抗體的抗原結(jié)合區(qū)可來(lái)自其它非人類物種，包括但不局限于兔、大鼠或倉(cāng)鼠?；蛘?，抗原結(jié)合區(qū)可來(lái)自人類序列。此外，如此處所用的"單克隆抗體，，可以是單鏈Fv片段，其可通過(guò)用接頭序列連接編碼LCVR的DNA和編碼HCVR的DNA產(chǎn)生(見(jiàn)Pluckthun，ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,巻113，Rosenburg和Mooreeds.，Springer-Verlag，NewYork,pp269-315，1994)。應(yīng)理解不管片段是否特異，此處所用的術(shù)語(yǔ)"抗體"包括此類片段及單鏈形式。只要蛋白質(zhì)保留特異地或優(yōu)先地結(jié)合它的預(yù)期耙標(biāo)(即表位或抗原)的能力，它就包含在術(shù)語(yǔ)"抗體，，中?？贵w可以被或不被糖基化并仍然在本發(fā)明的范圍內(nèi)。"單克隆抗體"群指均一的或基本上均一的抗體群(即在群中至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%,更優(yōu)選至少約97%或98%或最優(yōu)選至少99%的抗體將在ELISA測(cè)定中竟?fàn)幭嗤目乖虮砦唬蚋鼉?yōu)選地所述抗體氨基酸序列相同)?？贵w可以被或不被糖基化并仍然在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如果它們具有相同的氨基酸序列，單克隆抗體可以是均一的，雖然它們可能在翻譯后修飾例如糖基化模式上不同。"變異的，，抗體此處指氨基酸序列不同于"親本"抗體氨基酸序列的分子，該不同是由親本抗體序列的一個(gè)或更多氨基酸殘基的插入、缺失和/或替代引起。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，變異抗體包含親本抗體CDR區(qū)中至少一個(gè)氨基酸的(例如，從1到約10,并優(yōu)選2、3、4、5、6、7或8個(gè))插入、缺失和/或替代。關(guān)于變異抗體序列的同一性或同源性此處定義為在比對(duì)序列并引入空位(如果需要的話)實(shí)現(xiàn)最大百分比的序列同一性后，在變異抗體序列中與親本抗體殘基相同的氨基酸殘基的百分比。變異抗體保留結(jié)合抗原，或優(yōu)選地，結(jié)合親本抗體結(jié)合的表位的能力，并優(yōu)選具有至少一種優(yōu)于親本抗體的性質(zhì)或生物活性。例如，變異抗體比親本抗體優(yōu)選具有更強(qiáng)的結(jié)合親和力，更慢的解離速率，更低的ICso或抑制抗原生物活性的增強(qiáng)的能力。此處特別重要的變異抗體是當(dāng)與親本抗體相比時(shí)，在性質(zhì)或生物活性上顯示出至少約2倍、優(yōu)選至少約5倍、10倍或20倍增強(qiáng)的一種。此處"親本"抗體是用于制備變異抗體的氨基酸序列編碼的抗體。所述親本抗體可具有鼠類來(lái)源的構(gòu)架序列，但優(yōu)選地構(gòu)架序列完全是或基本上是人來(lái)源的。親本抗體可以是鼠的、嵌合的、人源化或人的抗體。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合"指這樣的情況，在該情況下特異結(jié)合對(duì)中的一個(gè)成員不顯著結(jié)合到除了它的特異結(jié)合配偶體之外的分子上。所述術(shù)語(yǔ)在例如本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)υS多抗原攜帶的特定表位特異的情況也適用，在該情況下攜帶抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性抗體將能夠結(jié)合到多種攜帶表位的抗原上。因此本發(fā)明的單克隆抗體特異性結(jié)合人IL-17(即IL-17A)，而它不特異性結(jié)合人IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F。此外，本發(fā)明的單克隆抗體特異性結(jié)合人IL-17和獼猴IL-17,但不特異性結(jié)合大鼠IL-17或小鼠IL-17。此外，本發(fā)明的單克隆抗體特異性結(jié)合含有氨基酸DGNDYH的非線性的或構(gòu)象的人IL-17表位，但不結(jié)合不含氨基酸DGNDYH的人IL-17表位。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"優(yōu)先結(jié)合"指這樣的情況，在該情況下通過(guò)本領(lǐng)域可得到的沖支術(shù)-例如竟?fàn)嶦LISA或利用BIACORE或KINEXA測(cè)定的KD測(cè)量法測(cè)定，抗體對(duì)特定抗原結(jié)合比它對(duì)不同抗原的結(jié)合高至少約20%，優(yōu)選至少約50%、2倍、20倍、50倍或100倍。抗體可相對(duì)于相同抗原內(nèi)的不同表位優(yōu)先結(jié)合抗原內(nèi)的一個(gè)表位。因此，本發(fā)明抗體相對(duì)于兔IL-17優(yōu)先結(jié)合人IL-17。術(shù)語(yǔ)"表位"指分子的一部分，其能夠在一個(gè)或更多個(gè)抗體的抗原結(jié)合區(qū)被抗體識(shí)別并結(jié)合。表位通常由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)如氨基酸或糖側(cè)鏈構(gòu)成并具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征及特定的電荷特征。"抑制表位，，和/或"中和表位"旨在表示表位，其當(dāng)處于完整的抗原分子背景中時(shí)和被對(duì)表位特異的抗體結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致體內(nèi)或體外或含有該分子的生物體內(nèi)的分子生物活性的喪失或降低。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"表位"進(jìn)一步指多肽的部分，該部分在動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，例如小鼠或人中具有抗原和/或免疫原性的活性。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"抗原表位"定義為多肽的一部分，抗體可特異性結(jié)合到該多肽部分上，如通過(guò)本領(lǐng)域熟知的任何方法，例如常規(guī)的免疫測(cè)定法確定?？乖砦徊恍枰仨毷敲庖咴缘?，但可以是免疫原性的。如此處所用的"免疫原性的表位"定義為多肽的一部分，其引起動(dòng)物中的抗體反應(yīng)，如通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法確定。"非線性表位，，或"構(gòu)象表位"包含在抗原蛋白質(zhì)內(nèi)的非連續(xù)多肽(或氨基酸)，其中對(duì)表位特異的抗體結(jié)合到該抗原蛋白質(zhì)上。關(guān)于本發(fā)明抗體，短語(yǔ)"生物性質(zhì)，，或"生物特征"，或術(shù)語(yǔ)"活性，，或"生物活性，，此處可互換使用并包括但不局限于表位/抗原親和力和特異性、在體內(nèi)或體外中和或拮抗IL-17活性的能力、IC50、抗體的體內(nèi)穩(wěn)定性和抗體的免疫原性質(zhì)。本領(lǐng)域^^知的抗體的其它可鑒定的生物學(xué)性質(zhì)或特征包括，例如，交叉反應(yīng)性(即通常與靶定肽的非人同源物，或與其它蛋白質(zhì)或組織的交叉反應(yīng)性)，和保持哺乳動(dòng)物細(xì)胞中蛋白質(zhì)高表達(dá)水平的能力?？墒褂帽绢I(lǐng)域公知的技術(shù)觀察、測(cè)定或評(píng)估前面提及的性質(zhì)或特征，所述技術(shù)包括但不局限于ELISA、竟?fàn)幮訣LISA、BIACORE或KINEXA表面等離子體共振分析、不受限制的體外或體內(nèi)中和測(cè)定、受體結(jié)合、細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生和/或分泌、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和不同來(lái)源(包括人類、靈長(zhǎng)類或任何其它來(lái)源)的組織切片的免疫組織化學(xué)。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"抑制，，或"中和，，對(duì)于本發(fā)明抗體的活性，表示基本上拮抗、阻止、防止、抑制、減緩、破壞、消除或逆轉(zhuǎn)例如正被抑制的進(jìn)程或嚴(yán)重性，包括但不局限于生物活性(例如IL-17的活性)或性質(zhì)，疾病或狀況的能力。由本發(fā)明抗體結(jié)合IL-17引起的IL-17活性的抑制或中和優(yōu)選為至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高。術(shù)語(yǔ)"分離的"用于核酸或蛋白質(zhì)(例如抗體)時(shí)，指核酸分子或蛋白質(zhì)，其從至少一種污染物中鑒定和分離出來(lái)，在其天然來(lái)源中它通常與該污染物結(jié)合在一起。優(yōu)選地，"分離的抗體"是基本上沒(méi)有其它具有不同抗原特異性抗體的抗體(例如，本發(fā)明藥物組合物包含分離的抗體，其特異性結(jié)合IL-17并且基本上不包含特異性結(jié)合除IL-17外的抗原的抗體)。術(shù)語(yǔ)"Kabat編號(hào)"和"Kabat標(biāo)記"在此處可互換使用。本領(lǐng)域公知的這些術(shù)語(yǔ)涉及編號(hào)氨基酸殘基的體系，這些氨基酸殘基比抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)中的其它氨基酸殘基更易變(即，高變的)(Kabat等人，Ann.NYAcad.Sci.190:382-93(1971);Kabat等人，S叫uencesofProteinsofImmunologicalInterest，第五版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH出版物編號(hào)91-3242(1991))。當(dāng)它與其它多核苷酸處于功能關(guān)系時(shí)，多核苷酸"有效連接，，到另一多核苷酸上。例如，如果它影響所述序列的轉(zhuǎn)錄，將啟動(dòng)子或增強(qiáng)子有效連接到編碼序列上。當(dāng)編碼它們的多核苷酸被有效連接，優(yōu)選它們處于相同的可讀框中時(shí)，肽被"有效連接，，到另一肽上。此處互換使用的術(shù)語(yǔ)"個(gè)體"、"受試者"和"患者"指哺乳動(dòng)物，包括但不局限于鼠、猿、人、哺乳類家畜、哺乳類運(yùn)動(dòng)用動(dòng)物(sportanimals)和哺乳類寵物；優(yōu)選地所述術(shù)語(yǔ)指人。在某些實(shí)施方案中，受試者，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人的進(jìn)一步特征在于患有將從IL-17降低的生物活性受益的疾病或病癥或狀況。術(shù)語(yǔ)"載體"包括核酸分子，其能夠運(yùn)輸它連接的另一核酸，包括但不局限于質(zhì)粒和病毒載體。某些栽體能夠在其被引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制，而其它載體可在引入宿主細(xì)胞時(shí)整合到宿主細(xì)胞的基因組中，并因此與所述宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)有效連接到它們的基因的表達(dá)。此類載體此處稱作"重組表達(dá)載體"(或簡(jiǎn)單地"表達(dá)載體，，)并且典型載體為本領(lǐng)域熟知。如此處所用，表述"細(xì)胞"、"宿主細(xì)胞"、"細(xì)胞系"和"細(xì)胞培養(yǎng)物"可互換使用并包括個(gè)體細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，其接受本發(fā)明任何分離的多核苷酸或含有編碼HCVR、LCVR或本發(fā)明單克隆抗體的序列的任何重組載體。宿主細(xì)胞包括單個(gè)宿主細(xì)胞的后代，并且由于天然的、偶然的或故意的突變和/或改變，該后代不必與最初的親代細(xì)胞完全相同(在形態(tài)或在總DNA組成上)。宿主細(xì)胞包括用表達(dá)本發(fā)明單克隆抗體或其輕鏈或重鏈的重組載體或多核苷酸轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或感染的細(xì)胞。穩(wěn)定整合到宿主染色體中或者不整合到宿主染色體中的包含本發(fā)明重組載體的宿主細(xì)胞，也可被稱作"重組宿主細(xì)胞"。用于本發(fā)明的優(yōu)選的宿主細(xì)胞是CHO細(xì)胞(例如，ATCCCRL-9096)、■細(xì)胞、SP2/0細(xì)胞、COS細(xì)胞(ATCC例如，CRL-1650,CRL-1651)和HeLa(ATCCCCL-2)。用于本發(fā)明的額外的宿主細(xì)胞包括植物細(xì)胞、酵母細(xì)胞、其它哺乳動(dòng)物細(xì)胞和原核細(xì)胞?？贵w表征本發(fā)明涉及分離的單克隆抗體,其以高親和力特異性結(jié)合人IL-17(即，IL-17A)。本發(fā)明抗體優(yōu)選為嵌合、人源化或人抗體或其抗原結(jié)合部分。此外，本發(fā)明抗體在體內(nèi)和/或在體外中和或拮抗至少一種IL-17的生物活性。本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體(包括其抗原結(jié)合部分)特異性結(jié)合到IL-17上允許所述抗體用作IL-17相關(guān)疾病和病癥，即從IL-17生物活性的抑制中受益的狀況、疾病或病癥的治療劑。17本發(fā)明抗體結(jié)合的抗原IL-17表位是非線性表位，其包含氨基酸ADGNVDYHMN(SEQIDNO:266)，更優(yōu)選人IL-17的氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:267)。與它們結(jié)合小鼠IL-17或大鼠IL-17相比，結(jié)合所述表位的抗體特異地并優(yōu)先地結(jié)合人IL-17和獼猴IL-17。本發(fā)明單克隆抗體與人IL-17結(jié)合比它與小鼠IL-17或大鼠IL-17的結(jié)合至少高5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍(例如，更高的親和力或更高的特異性)；更優(yōu)選地比它與小鼠IL-17或大鼠IL-17的結(jié)合至少高150、200、250、300、350、400、450、500、550或600倍；甚至更優(yōu)選地它在高于背景水平的水平上不結(jié)合小鼠IL-17或大鼠IL-17,該水平例如由ELISA測(cè)定、竟?fàn)嶦LISA測(cè)定或BIACORE或KINEXA測(cè)定中的Ko值確定。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抗IL-17單克隆抗體，其對(duì)人IL-17具有強(qiáng)結(jié)合親和力，即以低于約7pM、6.5pM或6pM，優(yōu)選低于約5.5pM、5pM或4.5pM并且最優(yōu)選低于約4pM的對(duì)人IL-17的結(jié)合親和力(KD)結(jié)合人IL-17或其含有DGNVDYH(SEQIDNO:267)的部分[即，抗體接觸所述DGNVDYH多肽]。或者，本發(fā)明抗體特征在于對(duì)人IL-17的KD不高于約7pM、6.5pM或6pM，優(yōu)選不高于約5.5pM、5pM或4.5pM并且最優(yōu)選不高于4pM?？贵w親和力可由下文中實(shí)施例描述的測(cè)定或由本領(lǐng)域可得到的其它方法測(cè)定。優(yōu)選地，具有上述強(qiáng)結(jié)合親和力的本發(fā)明抗IL-17抗體也結(jié)合非線性人IL-17表位，該表位包含氨基酸ADGNVDYHMN(SEQIDNO:266),更優(yōu)選氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:267),其中所述抗體與所述多肽DGNVDYH接觸。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體具有對(duì)人IL-17低于5xl(T5、4xl(T5、3xl0-5或2xl0-5s"的解離速率(koff)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體特征在于如上述的具有對(duì)人IL-17的強(qiáng)結(jié)合親和力(Kd低于約7pM或6pM，優(yōu)選低于約5pM或4.5pM并最優(yōu)選低于約4pM)，也具有對(duì)人IL-174氐于5xl(T5、4xl(T5、3xl0'5或2xl(r5s"的解離速率(koff)并且甚至更優(yōu)選也結(jié)合非線性人IL-17表位，其含有氨基酸ADGNVDYHMN(SEQIDNO:266),更優(yōu)選地含有人IL-17的氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:267)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體在例如體外IL-8報(bào)道子測(cè)定中具有低于lnM、900pM、800pM、700pM、650pM、600pM、560pM、550pM或500pM的IC別或GROoc報(bào)道子測(cè)定中低于約560pM的IC50(見(jiàn)實(shí)施例6)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的特征在于具有如上所述的對(duì)人IL-17的強(qiáng)結(jié)合親和力(Kd低于約7pM或6pM，優(yōu)選地低于約5pM或4.5pM并最優(yōu)選地低于約4pM)并也具有在例如體外IL-8報(bào)道子測(cè)定中低于lnM、卯OpM、800pM、700pM、650pM、600pM、560pM、550pM或500pM的ICso或GROot報(bào)道子測(cè)定中低于約560pM的IC50,并且甚至更優(yōu)選地也具有對(duì)人IL-17低于5xl(T5、4xl(T5、3xl(T5或2x10—5s"的解離速率(koff)，并甚至更優(yōu)選地也結(jié)合非線性的人IL-17表位，其含有人il-17的氨基酸dgnvdyh(SEQidno:267)，其中所述抗體接觸DGNVDYH多肽。本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施方案是含有輕鏈氨基酸序列(由SEQIDNO:279組成)和重鏈氨基酸序列(由SEQIDNO:280組成)的抗IL-17抗體。優(yōu)選地該抗體包含兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈。優(yōu)選地，具有如SEQIDNO:279中顯示氨基^列的輕鏈由含有如SEQIDNO:281(包括信號(hào)序列)或SEQIDNO:283(不包含信號(hào)序列)中顯示序列的核酸編碼。優(yōu)選地，具有如SEQIDNO:280中顯示氨基酸序列的重鏈由含有如SEQIDNO:282(包括信號(hào)序列)或SEQIDNO:284(不包含信號(hào)序列)中顯示序列的核酸編碼。單克隆抗體("mAbs")可使用本領(lǐng)域普遍已知的雜交瘤方法制備(見(jiàn)例如，Kohler等人，Nature,256:495，1975)或通過(guò)重組DNA方法進(jìn)行制備(例如，如在美國(guó)專利號(hào)4，816，567)。通常，可通過(guò)將合適的無(wú)限增殖細(xì)胞系(例如，骨髓瘤細(xì)胞系如SP2/0)與經(jīng)免疫動(dòng)物的抗體產(chǎn)生細(xì)胞融合來(lái)產(chǎn)生雜交瘤。從用目的抗原免疫過(guò)的動(dòng)物中獲得產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，優(yōu)選脾或淋巴結(jié)的那些細(xì)胞?？墒褂眠x擇性培養(yǎng)條件分離融合細(xì)胞(雜交瘤)并通過(guò)有限稀釋進(jìn)行克隆。測(cè)定雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中針對(duì)抗原的單克隆抗體的產(chǎn)生。優(yōu)選地，由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的mAb的結(jié)合特異性通過(guò)免疫沉淀作用或通過(guò)體外結(jié)合測(cè)定，如放射免疫測(cè)定或ELISA來(lái)檢測(cè)?？赏ㄟ^(guò)合適的測(cè)定來(lái)選擇產(chǎn)生具有想要的結(jié)合性質(zhì)的抗體的細(xì)胞。用于此類分離和篩選的方法為本領(lǐng)域所熟知。可使用其它產(chǎn)生或分離本發(fā)明抗體，包括人抗體或人工抗體的合適的方法，包括，例如，從文庫(kù)中選擇重組抗體(例如，單鏈Fv或Fab)的方法，或依賴轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，小鼠)的免疫的方法，其中該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物能夠產(chǎn)生人抗體的所有組成成分(見(jiàn)例如，Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.美國(guó)，90:2551-2555，1993;Jakobovits等人，Nature,362:255-258,1993;美國(guó)專利號(hào)5,545,806和5,545,807)。含有來(lái)自不同物種的部分的單鏈抗體，和嵌合、人源化或靈長(zhǎng)類源化(CDR嫁接的)抗體及嵌合或CDR嫁接的單鏈抗體等等，也包含在本發(fā)明和術(shù)語(yǔ)"抗體"中。這些抗體的多個(gè)部分可用化學(xué)法通過(guò)常規(guī)技術(shù)合成連接在一起，或可使用遺傳工程技術(shù)制備成相鄰的蛋白質(zhì)。例如，可表達(dá)編碼嵌合或人源化鏈的核酸產(chǎn)生相鄰的蛋白質(zhì)。見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)4,816,567;歐洲專利號(hào)125,023Bl;美國(guó)專利號(hào)4，816，397;歐洲專利號(hào)120,694Bl;WO86/01533;歐洲專利號(hào)194,276Bl;美國(guó)專利號(hào)5，225，539;歐洲專利號(hào)239,400Bl和美國(guó)專利號(hào)5,585,089和5,698,762。此外，也可產(chǎn)生抗體的功能片段(即，抗原結(jié)合片段)，包括嵌合、人源化、靈長(zhǎng)類源化或單鏈抗體的片段，并且包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選的功能片段保留對(duì)應(yīng)全長(zhǎng)抗體的抗原結(jié)合功能。特別優(yōu)選的功能片段保留抑制哺乳動(dòng)物成熟IL-17,優(yōu)選人IL-17的一種或更多種功能或生物活性特征，如結(jié)合活性、信號(hào)活性、和/或細(xì)胞反應(yīng)的刺激或抑制的能力。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，功能片段可抑制成熟IL-17與它的受體的相互作用和/或可抑制一種和更多受體介導(dǎo)的功能。能夠結(jié)合人IL-17的抗體部分包括，但不局限于Fv、Fab、Fab，和F(ab，)2片段，并包括在本發(fā)明中。此類片段可通過(guò)酶剪切或通過(guò)重組技術(shù)產(chǎn)生。例如，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶剪切完整的抗體可分別產(chǎn)生Fab或F(ab，)2片段。木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為"Fab"片段，每一個(gè)具有單個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。所述Fab片段也包含輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域和重鏈的笫一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(CH1)。胃蛋白酶處理產(chǎn)生F(ab')2片段，其具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)并且仍然能夠交聯(lián)抗原。"Fv"是最小的抗體片段，其包含完整的抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)。該區(qū)域由一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域緊密、非共價(jià)連接的二聚體組成。它處于該構(gòu)型，其每一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的三個(gè)CDR相互作用以限定Vh-Vl二聚體表面上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。所述6個(gè)CDR共同賦予對(duì)抗體的抗原結(jié)合特異性。當(dāng)在宿主細(xì)胞中共表達(dá)時(shí)，為了克服Fv中非共價(jià)連接的HCVR和LCVR結(jié)構(gòu)域解離的趨勢(shì)，可構(gòu)建單鏈Fv片段(scFv)，其中柔韌并足夠長(zhǎng)的多肽連接HCVR的C末端到LCVR的N末端或者LCVR的C末端到HCVR的N末端。通常所用的接頭是15殘基(Gly4Ser)3肽。關(guān)于sFv的綜述見(jiàn)Pluckthun，在ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,巻113，Rosenburg和Mooreeds.，Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)。^f吏用抗體基因也可產(chǎn)生多種截短形式的抗體，在該抗體基因中天然終止位點(diǎn)上游已經(jīng)引入了一個(gè)或更多個(gè)終止密碼子。例如，可設(shè)計(jì)編碼F(ab，)2重鏈部分的嵌合基因以包括編碼CH,結(jié)構(gòu)域和重鏈鉸鏈區(qū)的DNA序列。使用富集技術(shù)如噬菌體展示(MatthewsDJ和WellsJA.Science.260:1113-7,1993)、核糖體展示(Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:14130-5，1998)、細(xì)菌展示(SamuelsonP.等人，JournalofBiotechnology.96:129-54，2002)或酵母展示(KiekeM.C.等人，ProteinEngineering,10:1303-10，1997)從文庫(kù)中選擇抗體片段已證明是經(jīng)典雜交瘤技術(shù)的成功的備選方案(綜述LittleM.等人，ImmunologyToday,21:364-70，2000)。變異抗體針對(duì)IL-17產(chǎn)生的鼠單克隆抗體或人抗體(例如在轉(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生的)可以是親本抗體?？墒褂帽绢I(lǐng)域可得到的方法，例如PCR誘變進(jìn)一步改變親本抗體來(lái)產(chǎn)生抗體的嵌合或人源化形式，或抗體的其它變異形式。此類嵌合的、人源化的、或其它變異的抗體可作為親本抗體用于進(jìn)一步的變異或誘變。本發(fā)明親本抗體可以在例如CDR結(jié)構(gòu)域內(nèi)(見(jiàn)，例如，表2和3)被誘變來(lái)產(chǎn)生變異抗體，可篩選其目的性質(zhì)的存在，例如，結(jié)合親和力(更低的KD)、IC5。、特異性、優(yōu)先結(jié)合等等。優(yōu)選地，變異抗體中目的性質(zhì)是相對(duì)于親本抗體中性質(zhì)的改善。優(yōu)選氨基酸替代變異抗體，并且親本抗體分子的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基被去除且在它的位置上插入不同的殘基。用于替代誘變的最感興趣的位點(diǎn)是一個(gè)或更多個(gè)CDR區(qū)，但是也考慮FR改變。優(yōu)選保守的氨基酸替代；雖然，為了更多實(shí)質(zhì)改變，可引入非保守氨基酸改變并用獲得的抗體篩選目的性質(zhì)。產(chǎn)生親本抗體的替代變體的便利方法是使用噬菌體展示的親和力成熟。簡(jiǎn)單而言，編碼親本抗體的多核苷酸分子在一個(gè)或更多個(gè)CDR區(qū)內(nèi)突變，在每個(gè)希望實(shí)現(xiàn)替代的氨基酸殘基上產(chǎn)生所有可能的氨基酸替代。因此產(chǎn)生的抗體變體顯示為來(lái)自絲狀噬菌體顆粒的單價(jià)型，其作為與包裝在每個(gè)顆粒內(nèi)的M13的基因11I產(chǎn)物的融合。然后篩選喧菌體展示的變異抗體的生物活性(例如，結(jié)合親和力、特異性、IC5o)。為了鑒定用于修飾的候選CDR區(qū)位點(diǎn)，可進(jìn)行丙氨酸掃描誘變來(lái)鑒定顯著促進(jìn)抗原結(jié)合的CDR區(qū)殘基?；蛘撸虼送?，分析抗原-抗體復(fù)合體的晶體結(jié)構(gòu)以鑒定抗體與IL-17之間的接觸點(diǎn)是有益的。根據(jù)此處詳盡說(shuō)明的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)，此類接觸殘基和鄰近殘基是用于替代的候選者?；蛘?，或此外，可在編碼至少一個(gè)CDR的一個(gè)或更多個(gè)多核苷酸分子上進(jìn)行隨機(jī)誘變或點(diǎn)誘變。當(dāng)CDR被有效連接到可變區(qū)內(nèi)的構(gòu)架區(qū)或當(dāng)CDR不依賴其它可變區(qū)序列時(shí)，可在一個(gè)或更多個(gè)位置上進(jìn)行誘變，并然后使用重組DNA技術(shù)將發(fā)生改變的CDR返回到可變區(qū)。一旦產(chǎn)生了此類變異抗體，可對(duì)該組變體目的性質(zhì)或活性進(jìn)行篩選，并可選擇在一個(gè)或更多相關(guān)測(cè)定中具有優(yōu)良性質(zhì)的抗體用于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。不參與維持本發(fā)明抗IL-17抗體的正確構(gòu)象的任何半胱氨酸殘基通常被絲氨酸替代來(lái)提高分子的氧化穩(wěn)定性并阻止異常交聯(lián)。相反地，可將半胱氨酸鍵加入到抗體中來(lái)提高它的穩(wěn)定性(尤其是其中抗體是抗體片段如Fv片段)?？贵w氨基酸變異的另一類型改變抗體最初的糖基化類型。改變意思是缺失一個(gè)或更多在抗體中發(fā)現(xiàn)的碳水化合物部分，和/或添加一個(gè)或更多在親本抗體中不存在的糖基化位點(diǎn)?？贵w的糖基化通常是N-連接或O-連接的。N-連接指的是碳水化合物部分附著到天冬酰胺殘基的側(cè)鏈。三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸和天冬酰胺-X-蘇氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是碳水化合物部分酶促附著到天冬酰胺側(cè)鏈上的識(shí)別序列。因此，在多肽中任一這些三肽序列的存在產(chǎn)生潛在的糖基化位點(diǎn)。O-連接糖基化指的是糖N乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一種附著到羥基氨基酸上，最常見(jiàn)的是絲氨酸或蘇氨酸，雖然也可使用5-羥基脯氨酸或5-羥基賴氨酸。通過(guò)改變氨基酸序列方便地完成向抗體添加糖基化位點(diǎn)，這樣它包含一個(gè)或更多上述三肽序列(對(duì)于N-連接糖基化位點(diǎn))。也可通過(guò)向原始抗體的序列中添加或替換一個(gè)或更多絲氨酸或蘇氨酸殘基來(lái)完成改變(對(duì)于O-連接糖基化位點(diǎn))。序列本發(fā)明優(yōu)選的單克隆抗體包含LCVR(含有具有選自SEQIDNO:178-243的序列的肽)和/或HCVR(含有具有選自SEQIDNO:56-121的序列的肽)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體包含LCVR，該LCVR含有具有選自SEQIDNO:178-243的序列的肽，并還包含HCVR,該HCVR含有具有選自SEQIDNO:56-121的序列的肽，其中在本發(fā)明抗體中存在的HCVR和LCVR共同存在于表1中列出的Fab中。例如，含有LCVR多肽的本發(fā)明抗體(該LCVR多肽具有SEQIDNO:178的氨基酸序列)優(yōu)選地還包含HCVR多肽，該HCVR多肽含有選自SEQIDNO:56、60、68-93和95的氨基財(cái)歹'j。此夕卜，含有LCVR多肽的本發(fā)明抗體(該LCVR多肽具有SEQIDNO:241的氨基酸序列)優(yōu)選地還含有HCVR多肽，該HCVR多肽含有選自SEQIDNO:118和106的氨基酸序列。技術(shù)人員將理解本發(fā)明抗體不局限于如此處表1中列出的HCVR和LCVR的特定序列，也包括這些序列的變體，當(dāng)這些變體存在于本發(fā)明抗IL-17的抗體中時(shí)，保留或提高親本抗體的抗原結(jié)合能力和至少一種其它功能性質(zhì)，例如表位特異性、與親本抗體竟?fàn)幗Y(jié)合IL-17的能力、ICso和/或結(jié)合人IL-17的Kd或koff值。此外，本發(fā)明單克隆抗體是通過(guò)竟?fàn)巻慰寺】贵w竟?fàn)幮砸种平Y(jié)合人IL-17(或其含有DGNVDYH的部分)的一種，其中所述竟?fàn)幮詥慰寺】贵w包含兩個(gè)多肽，所述多肽具有SEQIDNO:241(LCVR)和118(HCVR)中顯示的氨基酸序列?？贵w間的此類竟?fàn)幮砸种瓶赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域的測(cè)定法，例如竟?fàn)嶦LISA測(cè)定法來(lái)測(cè)定。優(yōu)選地，與上面定義的竟?fàn)幙贵w竟?fàn)幍谋景l(fā)明抗體的進(jìn)一步特征在于特異性結(jié)合人IL-17,但不結(jié)合人IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E或IL-17F。此外，所述抗體進(jìn)一步特征在于在高于背景的水平上特異性結(jié)合人IL-17和獼猴IL-17，但不結(jié)合大鼠IL-17或小鼠IL-17。更優(yōu)選地，與含有SEQIDNO:241和118中顯示的氨基酸序列的竟?fàn)幙贵w竟?fàn)幗Y(jié)合人IL-17的本發(fā)明抗體的進(jìn)一步特征在于結(jié)合含有氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:276)的人IL-17非線性表位。甚至更優(yōu)選地，與含有SEQIDNO:241和118中顯示的氨基酸序列的竟?fàn)幙贵w竟?fàn)幗Y(jié)合人IL-17的本發(fā)明抗體的進(jìn)一步特征在于具有對(duì)人IL-17低于約7pM、6.5pM或6pM，優(yōu)選地低于約5.5pM、5pM或4.5pM并最優(yōu)選地低于約4pM的KD，和/或其特征在于優(yōu)選在體外IL-8報(bào)道子測(cè)定中，ICs。低于700pM、650pM、600pM、560pM、550pM或500pM，或在體夕卜GROa報(bào)道子測(cè)定中ICso低于約560pM,和/或具有對(duì)人IL-17低于5xl(T5、4xl(T5、SxlO-sJllxlirSs-1的解離速率(koff)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17抗體具有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中重鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的CDR區(qū)CDRH1(SEQIDNO:244)、CDRH2(SEQIDNO:245)和CDRH3(SEQIDNO:246);和/或其中輕鏈可變區(qū)包含具有以下氨基酸序列的CDR區(qū)CDRLl(SEQIDNO:247)、CDRL2(SEQIDNO:248)和CDRL3(SEQIDNO:249)。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體的六個(gè)CDR共同存在于此處表1列出的Fab中。甚至更優(yōu)選地，所述重鏈CDR在下面構(gòu)架序列中具有SEQIDNO:262的FR1、具有SEQIDNO:263的FR2、具有SEQIDNO:264的FR3和具有SEQIDNO:265的FR4,并且所述輕鏈CDR在下面構(gòu)架序列中具有SEQIDNO:266的FR1、具有SEQIDNO:267的FR2、具有SEQIDNO:268的FR3和具有SEQIDNO:269的FR4，其中從氨基末端的順序是FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。進(jìn)一步考慮本發(fā)明抗IL-17抗體包含HCVR，該HCVR含有CDRH1和/或CDRH2和/或CDRH3,CDRH1含有選自SEQIDNO:11-28的序列，CDRH2含有選自SEQIDNO:29-32的序列，CDRH3含有選自SEQIDNO:33-55和261的序列。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17抗體包含LCVR,該HCVR含有CDRLl和/或CDRL2和/或CDRL3，CDRLl含有選自SEQIDNO:122-149的序列，CDRL2含有選自SEQIDNO:150-167的序列，CDRL3含有選自SEQIDNO:168-177的序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17抗體包含HCVR,該HCVR含有CDRHl和/或CDRH2和/或CDRH3，CDRH1含有選自SEQIDNO:11-28的序列，CDRH2含有選自SEQIDNO:29-32的序列，CDRH3含有選自SEQIDNO:33-55和261的序列，并還包含LCVR，該HCVR含有CDRLl和/或CDRL2和/或CDRL3，CDRLl含有選自SEQIDNO:122-149的序列，CDRL2含有選自SEQIDNO:150-167的序列，CDRL3含有選自SEQIDNO:168-177的序列。包含本發(fā)明CDR的組合物通常是抗體重鏈或輕鏈序列或其實(shí)質(zhì)部分，其中CDR定位在與Kabat編號(hào)一致的位置上。每條鏈(重鏈和輕鏈)的三個(gè)CDR區(qū)在構(gòu)架區(qū)內(nèi)提供為相鄰序列，由以下通式表示FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。當(dāng)與CDR以描述的順序排列為相鄰序列時(shí)，重鏈或輕鏈FR1、FR2、FR3和FR4組合形成抗體的完整構(gòu)架區(qū)。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體的構(gòu)架區(qū)是人來(lái)源或基本上人來(lái)源(即高于約80、82、85、87、90、92、95、97%)。人類中用于治療用途的人源化抗體中，構(gòu)架序列優(yōu)選為完全或基本上人類來(lái)源。優(yōu)選地，本發(fā)明人源化、人或嵌合抗體的輕鏈構(gòu)架區(qū)包含具有SEQIDNO:266的FR1、具有SEQIDNO:267的FR2、具有SEQIDNO:268的FR3和具有SEQIDNO:269的FR4。優(yōu)選地，本發(fā)明人源化、人或嵌合抗體的重鏈構(gòu)架區(qū)包含具有SEQIDNO:262的FR1、具有SEQIDNO:263的FR2、具有SEQIDNO:264的FR3和具有SEQIDNO:265的FR4。例如，如此處在表1、2和3中描述的本發(fā)明抗體126的LCVR的優(yōu)選實(shí)施方案包含(多肽順序從N末端開(kāi)始)具有SEQIDNO:266的FR1、具有SEQIDNO:131的CDR1、具有SEQIDNO:267的FR2、具有SEQIDNO:167的CDR2、具有SEQIDNO:268的FR3、具有SEQIDNO:168的CDR3和具有SEQIDNO:269的FR4。有效連接到人k恒定區(qū)的完整LCVR序列如顯示于SEQIDNO:274中。此外，本發(fā)明抗體126的HCVR的優(yōu)選實(shí)施方案包含(多肽順序從N末端開(kāi)始)具有SEQIDNO:262的FR1、具有SEQIDNO:26的CDR1、具有SEQIDNO:262的FR2、具有SEQIDNO:30的CDR2、具有SEQIDNO:264的FR3、具有SEQIDNO:52的CDR3和具有SEQIDNO:265的FR4。有效連接到人IgG4Fc區(qū)上的完整HCVR序列如在SEQIDNO:273中顯示。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗IL-17抗體(其中全部或部分的可變區(qū)被如此處SEQIDNO顯示的特定序列限定(見(jiàn)，例如，表l-3))的進(jìn)一步特征在于是嵌合、人源化和完全的人抗體或其抗原結(jié)合部分，其拮抗或中和體內(nèi)和體外至少一種人IL-17的活性。本發(fā)明IL-17抗體(其中全部和部分的可變區(qū)被如此處SEQIDNO顯示的特定序列限定)的進(jìn)一步特征在于特異性結(jié)合人IL-17，但不結(jié)合人IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E或IL-17F。此外，所述抗體進(jìn)一步特征在于在高于背景的水平上特異性結(jié)合人IL-17和獼猴IL-17,但不結(jié)合大鼠IL-17或小鼠IL-17。更優(yōu)選地，此類抗體進(jìn)一步特征在于結(jié)合含氨基酸DGNVDYH(SEQIDNO:276)的人IL-17非線性表位，其中所述抗體與具有SEQIDNO:276的多肽接觸。甚至更優(yōu)選地，此類抗體進(jìn)一步特征在于具有對(duì)人IL-17低于約7pM、6.5pM和6pM，優(yōu)選低于約5.5pM、5pM和4.5pM并最優(yōu)選低于約4pM的KD，和/或特征在于優(yōu)選在體外IL-8報(bào)道子測(cè)定中ICS0低于700pM、650pM、600pM、560pM、550pM或500pM,或在體外GROoc報(bào)道子測(cè)定中ICs。低于約560pM,和/或具有對(duì)人IL-17低于5xl(T5、4xl0-5、3xlO-5或2xl(T5s"的解離速率(k^)。抗體表達(dá)本發(fā)明也涉及細(xì)胞系，其表達(dá)本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體或其部分?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)完成產(chǎn)生本發(fā)明單克隆抗體的細(xì)胞系的產(chǎn)生和分離。優(yōu)選的細(xì)胞系包括COS、CHO、SP2/0、NSO和酵母(可從保藏單位如ATCC,美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)，Manassas,VA獲得)。很多種宿主表達(dá)系統(tǒng)可用于表達(dá)本發(fā)明抗體，包括原核和真核表達(dá)系統(tǒng)(如酵母、桿狀病毒、植物、哺乳動(dòng)物和其它動(dòng)物細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，和雜交瘤細(xì)胞)，及噬菌體展示表達(dá)系統(tǒng)。合適的細(xì)菌表達(dá)載體的實(shí)例是pl)C119并且合適的真核表達(dá)栽體是具有減弱的dhfr選擇系統(tǒng)的修飾過(guò)的pcDNA3.1載體。本領(lǐng)域也已知并在此處也考慮其它抗體表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明抗體可通過(guò)免疫球蛋白輕鏈和重鏈基因在宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)來(lái)制備。為重組表達(dá)抗體，將宿主細(xì)胞用一個(gè)或更多攜帶編碼抗體免疫球蛋白輕鏈和/或重鏈DNA片段的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染或等等，于是輕鏈和/或重鏈在宿主細(xì)胞中表達(dá)。重鏈和輕鏈可從不同的啟動(dòng)子獨(dú)立表達(dá)，它們?cè)谝粋€(gè)載體中被有效連接到所述啟動(dòng)子上或，或者，重鏈和輕鏈可從不同的啟動(dòng)子獨(dú)立表達(dá)，它們?cè)趦蓚€(gè)載體中被有效連接到所述啟動(dòng)子上-一個(gè)表達(dá)重鏈且一個(gè)表達(dá)輕鏈。任選地，重鏈和輕鏈可在不同的宿主細(xì)胞中表達(dá)。優(yōu)選地，重組抗體分泌到培養(yǎng)宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基中，可從該培養(yǎng)基中回收或純化所述抗體。標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA方法學(xué)用于獲得抗體重鏈和輕鏈基因、整合這些基因到重組載體中并將載體引入到宿主細(xì)胞中。此類標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA方法學(xué)例如在Sambrook，F(xiàn)ritsch和Maniatis(Eds.)，MolecularCloning;ALaboratoryManual，第二版，ColdSpringHarbor,N.Y.，1989;Ausubel等人(Eds.)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates,1989中有描述?？赏ㄟ^(guò)有效連接編碼HCVR的DNA到編碼重鏈恒定區(qū)(CHl、CH2和CH3)的另一DNA分子上將編碼HCVR區(qū)的分離的DNA轉(zhuǎn)變?yōu)槿L(zhǎng)的重鏈基因。人重鏈恒定區(qū)基因的序列為本領(lǐng)域已知。見(jiàn)，例如，Kabat等人,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242(1991)。包括這些區(qū)的DNA片段可例如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增獲得。重鏈恒定區(qū)可以是任何類型(例如IgG、IgA、IgE、IgM或IgD)，任何種類(例如IgG"IgG2、IgG3和IgGj或亞類恒定區(qū)和如在Kabat(上文)中描述的其任何異型變體?；蛘?，抗原結(jié)合部分可以是Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段、Fd或單鏈Fv片段(scFv)。對(duì)于Fab片段重鏈基因，編碼HCVR的DNA可有效連接到編碼僅僅重鏈CHI恒定區(qū)的另一DNA分子上?？赏ㄟ^(guò)有效連接編碼LCVR的DNA到編碼輕鏈恒定區(qū)CL的另一DNA分子上將編碼LCVR區(qū)的分離的DNA轉(zhuǎn)變?yōu)槿L(zhǎng)的輕鏈基因(及Fab輕鏈基因)。人輕鏈恒定區(qū)基因的序列為本領(lǐng)域已知。見(jiàn)，例如Kabat，上文。包括這些區(qū)的DNA片段可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增獲得。輕鏈恒定區(qū)可以是k或k恒定區(qū)。為產(chǎn)生scFv基因，將編碼HCVR和LCVR的DNA片段有效連接到編碼柔性接頭，例如編碼氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段上，使得所述HCVR和LCVR序列可表達(dá)為具有通過(guò)柔性接頭連接的HCVR和LCVR區(qū)的相鄰單鏈蛋白質(zhì)。見(jiàn)，例如，Bird等人，Science242:423-6,1988;Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83，1988;McCafferty等人，Nature348:552-4，1990。28在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供載體，優(yōu)選(但不局限于)質(zhì)粒、重組表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體或含有編碼本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的多核苷酸的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體?；蛘撸景l(fā)明載體包含編碼LCVR的多核苷酸和/或編碼本發(fā)明HCVR的多核苷酸。當(dāng)LCVR和HCVR的編碼序列存在于同一個(gè)載體上時(shí)，它們可從有效連接的各自的啟動(dòng)子獨(dú)立轉(zhuǎn)錄。如果編碼LCVR和HCVR的序列存在于同一個(gè)載體上并從它們有效連接的啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，LCVR可以是HCVR的5，或LCVR是HCVR的3，，此外，載體中的LCVR和HCVR編碼區(qū)可通過(guò)任何大小或含量的接頭序列分開(kāi)，優(yōu)選地當(dāng)存在時(shí)，此類接頭為編碼內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的多核苷酸。為表達(dá)本發(fā)明抗體，將如上述獲得的編碼部分或全長(zhǎng)輕鏈和/或重鏈的DNA插入表達(dá)載體中，使得所述基因被有效連接到轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列上。選擇表達(dá)載體和表達(dá)控制序列與所用的表達(dá)宿主細(xì)胞相容?？贵w輕鏈基因和抗體重鏈基因可插入到單獨(dú)的載體中，或更通常地，兩個(gè)基因插入到同一個(gè)表達(dá)載體中。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法將抗體基因插入表達(dá)載體中。此外，重組表達(dá)載體可編碼信號(hào)肽，其促進(jìn)抗IL-17單克隆抗體輕鏈和/或重鏈從宿主細(xì)胞中的分泌。可將抗IL-17單克隆抗體輕鏈和/或重鏈基因克隆到載體中，使得信號(hào)肽可被符合讀框地有效連接到抗體鏈基因的氨基末端。所述信號(hào)肽可以是免疫球蛋白信號(hào)肽或異源信號(hào)肽。除了抗體的重鏈和/或輕鏈基因，本發(fā)明重組表達(dá)載體攜帶調(diào)節(jié)序列，其控制抗體鏈基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)。術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)序列"旨在包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和其它表達(dá)控制元件(例如聚腺苷酸化信號(hào))，如需要，其控制抗體鏈基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯。表達(dá)載體的設(shè)計(jì)，包括調(diào)節(jié)序列的選擇可能依賴此類因素，如待轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇、希望得到的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。對(duì)于哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)優(yōu)選的調(diào)節(jié)序列包括病毒元件，其指導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平的蛋白質(zhì)表達(dá)，如來(lái)自巨細(xì)胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動(dòng)子(AdMLP))和多瘤病毒的啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子。除了抗體的重鏈和/或輕鏈基因和調(diào)節(jié)序列，本發(fā)明重組表達(dá)載體可攜帶額外序列，如調(diào)節(jié)栽體在宿主細(xì)胞中的復(fù)制的序列(例如，復(fù)制起點(diǎn))和一個(gè)或更多選擇標(biāo)記基因。選擇標(biāo)記基因便于已經(jīng)引入載體的宿主細(xì)胞的選擇。例如，通常所述選擇標(biāo)記基因賦予已經(jīng)引入載體的宿主細(xì)胞對(duì)藥物，如G418、潮霉素或氨曱喋呤的抗性。優(yōu)選的選擇標(biāo)記基因包括二氫葉酸還原酶(dhfr)基因(用于具有氨甲喋呤選擇/擴(kuò)增的dhfr負(fù)型宿主細(xì)胞)、neo基因(用于G418選擇)和用于GS陰性細(xì)胞系(如NS0)選擇/擴(kuò)增的谷氨酰胺合成酶(GS)。對(duì)于輕鏈和/或重鏈的表達(dá)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如電穿孔、磷酸鉤沉淀、DEAE葡聚糖轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染等等將編碼重鏈和/或輕鏈的表達(dá)載體引入宿主細(xì)胞中。雖然在原核或真核宿主細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明抗體在理論上是可能的，但優(yōu)選真核細(xì)胞，并且最優(yōu)選哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，因?yàn)榇祟惣?xì)胞更可能裝配和分泌正確折疊并具免疫活性的抗體。表達(dá)本發(fā)明重組抗體的優(yōu)選的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO細(xì)胞)[包括在Urlaub和Chasin，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20,1980中描述的dhfr負(fù)型CHO細(xì)胞，具有例如在Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.159:601-21，1982中描述的DHFR選擇標(biāo)記1、NSO骨髓瘤細(xì)胞、COS細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞。當(dāng)把編碼抗體基因的重組表達(dá)載體引入哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞內(nèi)時(shí)，通過(guò)培養(yǎng)宿主細(xì)胞一段時(shí)間(足夠允許抗體在宿主細(xì)胞中的表達(dá)，或更優(yōu)選地，允許抗體分泌到培養(yǎng)基中，在該培養(yǎng)基中宿主細(xì)胞在本領(lǐng)域已知的合適的條件下生長(zhǎng))來(lái)產(chǎn)生抗體?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)的純化方法從宿主細(xì)胞和/或培養(yǎng)基中回收抗體。通過(guò)常規(guī)技術(shù)，宿主細(xì)胞也可用于產(chǎn)生完整抗體的部分或片段，例如，F(xiàn)ab片段或scFv分子。技術(shù)人員應(yīng)理解上面方法的變型是在本發(fā)明范圍內(nèi)的。例如，希望用編碼本發(fā)明抗體輕鏈或重鏈的DNA轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。重組DNA技術(shù)也可用于去除編碼輕鏈或重鏈或輕鏈和重鏈的某些或全部的DNA,該輕鏈或重鏈對(duì)結(jié)合IL-17不是必需的。從此類截短的DNA分子表達(dá)的分子也包含在本發(fā)明抗體中。本發(fā)明提供含有本發(fā)明核酸分子的宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，本發(fā)明宿主細(xì)胞包含一個(gè)或更多載體或構(gòu)建體，其包含本發(fā)明核酸分子。本發(fā)明宿主細(xì)胞是已經(jīng)引入了本發(fā)明載體的細(xì)胞，所述載體包含編碼本發(fā)明抗體LCVR的多核苷酸和/或編碼本發(fā)明HCVR的多核苷酸。本發(fā)明也提供已經(jīng)引入了本發(fā)明兩個(gè)載體的宿主細(xì)胞；一個(gè)載體包含編碼本發(fā)明抗體LCVR的多核苷酸且一個(gè)載體包含編碼存在于本發(fā)明抗體中的HCVR的多核苷酸，并且每個(gè)載體被有效連接到啟動(dòng)子序列上。宿主細(xì)胞類型包括哺乳動(dòng)物、細(xì)菌、植物和酵母細(xì)胞。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞、SP2/0細(xì)胞、NS0細(xì)胞、酵母細(xì)胞或任何優(yōu)選細(xì)胞類型的衍生物或后代。在用于本發(fā)明抗體的重組表達(dá)的優(yōu)選系統(tǒng)中，通過(guò)例如磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染作用將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈的重組表達(dá)載體引入dhfr負(fù)型CHO細(xì)胞中。在重組表達(dá)栽體內(nèi)，抗體的重鏈和輕鏈基因均被有效連接到增強(qiáng)子/啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件上(例如，來(lái)自SV40、CMV、腺病毒等等，如CMV增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件或SV40增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件)來(lái)驅(qū)動(dòng)高水平的基因轉(zhuǎn)錄。重組表達(dá)載體也攜帶dhfr基因，其使用氨甲喋呤選擇/擴(kuò)增允許選擇已經(jīng)用載體轉(zhuǎn)染了的CHO細(xì)胞。培養(yǎng)所選的轉(zhuǎn)化體宿主細(xì)胞，允許抗體重鏈和輕鏈的表達(dá)，并且從培養(yǎng)基中回收完整抗體。使用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)制備重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、選擇轉(zhuǎn)化體、培養(yǎng)宿主細(xì)胞并從培養(yǎng)基中回收抗體。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分可在動(dòng)物(例如，小鼠)中表達(dá)，其為人免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物(見(jiàn)，例如，Taylor等人，NucleicAcidsRes.20:6287-95，1992)。一旦表達(dá)，本發(fā)明的完整抗體、它們的二聚體、單個(gè)輕鏈和重鏈或其它免疫球蛋白形式可根據(jù)本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行純化，所述方法包括硫酸銨沉淀、離子交換、親和、反相、疏水性相互作用柱層析、凝膠電泳等等。優(yōu)選至少約卯％、92%、94%或96%均一性，并最優(yōu)選98至99%或更高均一性的基本上純的免疫球蛋白用于藥物用途。一旦部分純化或純化至希望的均一性，肽就可治療性或預(yù)防性地使用，如此處所述。嵌合抗體如此處所用，術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體，，包括單價(jià)、二價(jià)或多價(jià)免疫球蛋白。單31價(jià)嵌合抗體是二聚體，其由嵌合重鏈通過(guò)二硫鍵與嵌合輕鏈連接形成。二價(jià)嵌合抗體是四聚體，其由兩個(gè)重鏈-輕鏈二聚體通過(guò)至少一個(gè)二硫鍵連接形成?？贵w的嵌合重鏈包含來(lái)自對(duì)IL-17特異的非人類抗體重鏈的抗原結(jié)合區(qū)，其有效連接到至少人，或基本上人(或不同于抗原結(jié)合區(qū)的來(lái)源物種)的部分、重鏈恒定區(qū)如CH1或CH2，或優(yōu)選地連接到全長(zhǎng)重鏈恒定區(qū)。用于人類的抗體的嵌合輕鏈包含抗原結(jié)合區(qū)，該抗原結(jié)合區(qū)完全或基本上來(lái)自對(duì)IL-17特異的非人類抗體的輕鏈，有效連接到至少人，或基本上人(或不同于抗原結(jié)合區(qū)的來(lái)源物種)的部分、輕鏈恒定區(qū)(CL)，或優(yōu)選地連接到全長(zhǎng)輕鏈恒定區(qū)。也可根據(jù)已知的方法步驟適當(dāng)連接各自的多肽鏈來(lái)制備具有相同或不同可變區(qū)結(jié)合特異性的嵌合重鏈和輕鏈的抗體、片段或衍生物。利用該方法，表達(dá)嵌合重鏈的宿主與表達(dá)嵌合輕鏈的宿主分開(kāi)培養(yǎng)，并分別回收免疫球蛋白鏈，并然后連接?；蛘?，可共同培養(yǎng)宿主并且允許所述鏈在培養(yǎng)基中自發(fā)連接，接著回收裝配好的免疫球蛋白或片段。用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法為本領(lǐng)域已知(見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)6,284,471;5,807,715;4,816,567和4,816,397)。人源化抗體優(yōu)選地，用于治療目的的本發(fā)明抗體應(yīng)該具有來(lái)自哺乳動(dòng)物的構(gòu)架和恒定區(qū)序列(在這個(gè)意義上，它存在于抗體中)，在所述哺乳動(dòng)物中它將用作治療劑來(lái)降低哺乳動(dòng)物將對(duì)治療性抗體引起免疫反應(yīng)的可能性。人源化抗體具有特別的重要性，因?yàn)樗鼈儽徽J(rèn)為對(duì)治療應(yīng)用有價(jià)值并避免人抗小鼠抗體反應(yīng)，該反應(yīng)在嚙齒動(dòng)物抗體中常見(jiàn)。此外，在人源化抗體中抗體的效應(yīng)部分為人類來(lái)源，所以它可以與人免疫系統(tǒng)的其它部分更好的相互作用(例如，通過(guò)依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒性或依賴抗體的細(xì)胞毒性更有效地破壞靶細(xì)胞)。并且，注射的人源化抗體具有比例如鼠抗體更像天然發(fā)生的人抗體的半衰期，因此允許施用更小并更低頻率的劑量。如此處所用的術(shù)語(yǔ)"人源化抗體，，指含有不同來(lái)源的抗體的部分的抗體，其中至少一部分是人類來(lái)源。例如，人源化抗體可包含來(lái)自具有必要特異性的非人類來(lái)源如小鼠的抗體的部分，和來(lái)自人類來(lái)源的抗體，該抗體通過(guò)傳統(tǒng)技術(shù)(例如，合成的)化學(xué)連接在一起或使用遺傳工程技術(shù)制備為相鄰的多肽。優(yōu)選地，"人源化抗體"具有CDR，其源自(或基本上源自)非人類抗體(優(yōu)選小鼠單克隆抗體)，而構(gòu)架和恒定區(qū)，在它存在的意義上，(或其顯著或基本部分，即至少約90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)是由核酸序列信息編碼的，該核酸序列信息出現(xiàn)在人類種系免疫J求蛋白區(qū)(見(jiàn)，例長(zhǎng)口,theInternationalImMunoGeneTicsDatabase)或其重組或突變形式中，無(wú)論所述抗體是否在人類細(xì)胞中產(chǎn)生?；瘉?lái)產(chǎn)生想要的性質(zhì)，例如，特異性、親和力和/或優(yōu)先結(jié)合。當(dāng)與親本CDR比較時(shí)，改變的或優(yōu)化的CDR可具有氨基酸替換、添加和/或缺失，在六個(gè)CDR結(jié)構(gòu)域內(nèi)優(yōu)選共計(jì)約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸替換、添加和/或缺失。例如，在表2和3中下面劃線的和粗體印刷的CDR的氨基酸位置是如在表2和3的Fab1中顯示的CDR已經(jīng)改變的位置?；蛘呤箢惪贵w2321可以為親本抗體用于與本發(fā)明抗體的CDR比較。非人類(例如，鼠類)抗體的人源化形式包括完整的抗體、基本上完整的抗體、含有抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體部分或含有Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2或單鏈Fv片段的抗體部分。人源化抗體優(yōu)選包含來(lái)自非人類免疫球蛋白的最小序列。人源化抗體也可包含在受體抗體中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)、在輸入CDR或構(gòu)架序列中也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)的殘基。通常，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個(gè)，且通常兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中在CDR區(qū)中所有的或基本上所有的氨基酸對(duì)應(yīng)于那些非人類免疫球蛋白，并且在FR區(qū)中所有的或基本上所有的氨基酸是人類免疫球蛋白共有序列的那些氨基酸。人源化抗體最理想地也包舍免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的至少部分，其通常是人類免疫球蛋白的恒定區(qū)(Fc)部分。[Jones等人，Nature,321:522-525，1986;Riechmann等人，Nature,332:323-329，1988;和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2:593-596，1992.。可使用本領(lǐng)域常規(guī)使用的方法對(duì)人源化抗體進(jìn)行體外誘變(或當(dāng)使用人類Ig序列轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物時(shí)，使用體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，并且因此人源化重組抗體的HCVR和LCVR區(qū)的構(gòu)架區(qū)氨基酸序列是這樣的序列，其當(dāng)來(lái)源于與那些人類種系HCVR和LCVR序列相關(guān)的序列時(shí)，在體內(nèi)可以不天然存在于人類抗體種系所有組成成分中。考慮人源化重組抗體的HCVR和LCVR構(gòu)架區(qū)的此類氨基酸序列與人類種系序列至少卯％、92%、94%、95%、96%、98%或最優(yōu)選至少99%同一。優(yōu)選地，維持或影響組合位點(diǎn)結(jié)構(gòu)的親本抗體的這些構(gòu)架殘基(例如鼠類抗體或人源化抗體通常起源的抗體)將被保留。這些殘基可例如通過(guò)親本抗體或Fab片段的X射線晶體學(xué)來(lái)鑒定，由此鑒定抗原結(jié)合位點(diǎn)的三維結(jié)構(gòu)。將抗體人源化的一個(gè)策略是選擇具有與親本抗體構(gòu)架最高同源性的人類種系序列作為構(gòu)架來(lái)接受供體CDR。這種種系方法基于與最佳擬合策略相同的原理，但是在數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索僅僅種系序列。，本發(fā)明人源化抗體可包含或來(lái)自人類種系輕鏈構(gòu)架。在特定的實(shí)施方案中，輕鏈種系序列選自人VK序列，該序列包括，但不局限于A1、AIO、All、A14、A17、A18、A19、A2、A20、A23、A26、A27、A3、A30、A5、A7、B2、B3、Ll、LIO、Lll、L12、L14、L15、L16、L18、L19、L2、L20、L22、L23、L24、L25、L4/18a、L5、L6、L8、L9、Ol、Oll、012、014、018、02、04和08。在一些實(shí)施方案中，該輕鏈人類種系構(gòu)架選自Vl-ll、Vl畫(huà)13、Vl曙16、Vl-17、Vl-18、Vl畫(huà)19、Vl-2、Vl畫(huà)20、Vl-22、Vl-3、Vl-4、Vl-5、Vl-7、Vl-9、V2-l、V2畫(huà)11、V2-13、V2-14、V2誦15、V2-17、V2國(guó)19、V2-6、V2-7、V2-8、V3國(guó)2、V3-3、V3畫(huà)4、V4-l、V4畫(huà)2、V4隱3、V4-4、V4畫(huà)6、V5誦l、V5-2、V5-4和V5畫(huà)6。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明人源化抗體可包含或來(lái)自人類種系重鏈構(gòu)架。在特定的實(shí)施方案中，該重鏈人類種系構(gòu)架選自VH1-18、VHl-2、VHl-24、VHl-3、VHl-45、VHl-46、VH1畫(huà)58、VH1畫(huà)69、VHl-8、H2-26、VH2-5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3畫(huà)15、VH3-16、VH3-20、VH3畫(huà)21、VH3曙23、VH3-30、VH3-33、VH3國(guó)35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3畫(huà)53、VH3-64、VH3-66、VH3畫(huà)7、VH3畫(huà)72、VH3-73、VH3國(guó)74、VH3-9、VH4畫(huà)28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4畫(huà)4、VH4-59、VH4-61、VH5畫(huà)51、VH6-1和VH7-81。見(jiàn)PCTWO2005/005604對(duì)不同種系序列的描述。在特定實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)包含構(gòu)架區(qū)或至少構(gòu)架區(qū)的部分(例如，含有2或3個(gè)亞區(qū)，如FR2和FR3)。在一些實(shí)施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4是完全人類的。在其它實(shí)施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4是完全人類的。在一些實(shí)施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4是種系序歹ll(例如，人類種系)或包含人類特定構(gòu)架的共有序列。在其它實(shí)施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4是種系序列(例如，人類種系)或包含人類特定構(gòu)架的共有序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，全部構(gòu)架區(qū)是人類構(gòu)架區(qū)。通常，人源化抗體可通過(guò)獲得編碼抗體的HCVR和LCVR的核*列，鑒定在所述HCVR和LCVR中的CDR(非人類)，并嫁接該CDR編碼核酸序列到選擇的人類構(gòu)架編碼核酸序列上來(lái)產(chǎn)生，其中編碼的抗體是例如鼠類抗體或雜交瘤制備的抗體，其結(jié)合本發(fā)明的IL-17表位。任選地，為了在嫁接CDR區(qū)到構(gòu)架區(qū)之前用不同的氨基酸替換CDR中的一個(gè)或更多氨基酸，可通過(guò)隨機(jī)誘變或在特定位置誘變來(lái)優(yōu)化CDR區(qū)?；蛘撸瑓^(qū)。優(yōu)選地，選擇人類構(gòu)架氨基酸序列，使得得到的抗體更適合在人類體內(nèi)施用。這可以在例如含有此類人類構(gòu)架序列的抗體的前期使用的基礎(chǔ)上來(lái)確定。優(yōu)選地，人類構(gòu)架序列不僅僅自身是顯著免疫原性的?；蛘?，待人源化的抗體的構(gòu)架氨基酸序列可與將用于CDR嫁接的已知的人類構(gòu)架序列的那些相比，并基于它們含有的與親本抗體，例如結(jié)合IL-17的鼠類抗體(例如，含有具有SEQIDNO:270的HCVR并進(jìn)一步含有具有SEQIDNO:271的LCVR的抗體)序列高度相似的序列進(jìn)行選擇。已經(jīng)分離了許多人類構(gòu)架序列并且它們序列在本領(lǐng)域已有報(bào)道。這加強(qiáng)了得到的CDR嫁接的人源化抗體將基本上保留抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)并因此保留親本抗體結(jié)合親和力的可能性，其中該人源化抗體含有親本(例如，鼠類)的CDR或嫁接到所選人類構(gòu)架(并可能也包括人類恒定區(qū))的親本抗體的優(yōu)化CDR。為了保留抗原結(jié)合親和力的顯著程度，所選的人類構(gòu)架區(qū)將優(yōu)選為那些期望適合體內(nèi)施用的，即沒(méi)有免疫原性的那些構(gòu)架區(qū)。在任一方法中，獲得編碼優(yōu)選鼠類抗IL-17抗體的HCVR和LCVR區(qū)的DNA序列。克隆編碼免疫球蛋白的核酸序列的方法為本領(lǐng)域已知。此類方法可例如包括使用合適的引物通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增待克隆的免疫球蛋白編碼序列。適合于擴(kuò)增免疫球蛋白核酸序列及特異性鼠類HCVR和LCVR序列的引物在文獻(xiàn)中已有報(bào)道。在已克隆了此類免疫球蛋白編碼序列后，它們將通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法測(cè)序。在CDR編碼序列嫁接到所選的人類構(gòu)架編碼序列上后，然后表達(dá)編碼"人源化，，可變重鏈和可變輕鏈序列的得到的DNA序列來(lái)產(chǎn)生結(jié)合IL-17的人源化Fv或人源化抗體。人源化HCVR和LCVR可表達(dá)為整個(gè)抗IL-17抗體分子的一部分，即與人恒定結(jié)構(gòu)域序列的融合蛋白，其中已經(jīng)從市售文庫(kù)中或已經(jīng)通過(guò)使用例如獲得DNA序列的上述方法之一獲得了人恒定結(jié)構(gòu)域序列的編碼DNA序列，或該編碼DNA序列為本領(lǐng)域已知。然而，也可在沒(méi)有恒定序列存在下表達(dá)HCVR和LCVR序列來(lái)產(chǎn)生人源化抗IL-17Fv。然而，因?yàn)榈玫降娜嗽椿笽L-17抗體可能具有人類效應(yīng)功能，所以潛在希望將人恒定序列融合到可變區(qū)上。合成編碼已知序列蛋白質(zhì)的DNA的方法為本領(lǐng)域熟知。使用此類方法，合成編碼主題人源化HCVR和LCVR序列(有或沒(méi)有恒定區(qū))的DNA序列，并然后在適合重組抗體表達(dá)的載體系統(tǒng)中表達(dá)。這可以在任何載體系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)，該載體系統(tǒng)提供將作為主題人源化HCVR和LCVR序列，所述序列將作為與人恒定結(jié)構(gòu)域序列的融合蛋白表達(dá)并結(jié)合以產(chǎn)生功能(抗原結(jié)合)抗體或抗體片段。人恒定結(jié)構(gòu)域序列為本領(lǐng)域已知，并在文獻(xiàn)中已有報(bào)道。優(yōu)選的人恒定輕鏈序列包括k和X恒定輕鏈序列。優(yōu)選的人恒定重鏈序列包括人IgGj、AIgG2、人IgGs、人lgG4(分別見(jiàn)，例如，SEQIDNO:257-260)和其突變形式，該形式提供改變的效應(yīng)功能，例如，增強(qiáng)的體內(nèi)半衰期、減少的Fc受體結(jié)合、改變的脫酰胺作用鐠等等。如果存在，人類構(gòu)架區(qū)優(yōu)選來(lái)自人抗體可變區(qū)，該可變區(qū)與抗原結(jié)合區(qū)供體(即親本抗體)的類似或等價(jià)區(qū)具有序列相似性。人源化抗體的人類來(lái)源部分的構(gòu)架區(qū)的其它來(lái)源包括人可變共有序列(見(jiàn)，例如，Kettleborough，C.A.等人ProteinEngineering4:773-783(1991);Carter等人，WO94/04679)。例如，用于獲得非人類部分的抗體序列或可變區(qū)序列可以與在Kabat等人SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第五版，NIH,U.S.GovernmentPrintingOffice(1991)中描述的人類序列相比。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，人源化抗體鏈的構(gòu)架區(qū)來(lái)自人類可變區(qū)，其與非人類供體可變區(qū)具有至少約60%的總的序列同一性，優(yōu)選至少約70%、80%或90%的總的序列同一性，并更優(yōu)選至少約85%的總的序列同一性。人類部分也可來(lái)自人類抗體，當(dāng)與非人類供體的等價(jià)部分(例如，F(xiàn)R)相比時(shí)，其在使用的特定部分中(例如，F(xiàn)R)具有至少約65%的序列同一性，并優(yōu)選至少約70%的序列同一性。進(jìn)一步描述可以使用的涉及人源化小鼠抗體的方法的參考文獻(xiàn)是例如，Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:2869，1991;美國(guó)專利號(hào)5,693,761;美國(guó)專利號(hào)4,816,397;美國(guó)專利號(hào)5,225,539;如在Levitt,M.，J.Mol.Biol.168:595-620，1983中描述的計(jì)算機(jī)程序ABMOD和ENCAD;人源化可基本上遵循Winter和同事(Jones等人，Nature,321:522-525，1986;Riechmann等人，Nature,332:323-327，1988;Verhoeyen等人，Science,239:1534-1536，1988)的方法進(jìn)行。人抗體作為人源化的選擇，可產(chǎn)生人抗體。可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)產(chǎn)生人抗體，包括噬菌體展示文庫(kù)(Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol"227:381，1991;Marks等人，J.Mol.Biol"222:581，1991)。也可得到Cole等人和Boerner等人的技術(shù)用于人單克隆抗體的制備(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，p.77(1985)和Boerner等人，J.Immunol"147:86-95，1991)。類似地，可通過(guò)將人免疫球蛋白基因座引入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，例如內(nèi)源免疫球蛋白基因已被部分或全部滅活的小鼠中制備人抗體。用例如用含有本發(fā)明免疫原性表位的抗原進(jìn)行免疫時(shí)，獲得人抗體產(chǎn)品全部的所有組成成分，其在各方面與在人類中看到的十分相似，包括基因重排、裝配和抗體所有組成成分。該方法例如在美國(guó)專利號(hào)5，545，807;5,545,806;5,569,825;5,589,369;5,591,669;5,625,126;5,633,425;5,661,016和在以下科學(xué)出版物Marks等人，BioTechnology10:779-783,1992;Lonberg等人，Nature368:856-859，1994;Morrison,Nature368:812-13，1994;Fishwild等人，NatureBiotechnology14:845-51，1996;Neuberger，NatureBiotechnology14:826(1996);Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)和Jobkobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:2551，1993中有描述。將人免疫球蛋白基因引入小鼠，因此產(chǎn)生能夠利用具有人類序列的抗體響應(yīng)抗原的轉(zhuǎn)基因小鼠，其也在Bruggemann等人(Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA86:6709-6713，1989)中有描述。存在若千策略用于哺乳動(dòng)物的產(chǎn)生，該哺乳動(dòng)物產(chǎn)生人抗體。特別是，存在"小基因座"(minilocus)方法，其中通過(guò)來(lái)自Ig基因座的片段(例如，個(gè)別基因)的包括(見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)5，545，807、5,545,806、5，625，825、5,625,126、5,633,425、5，661，016、5,770,429、5,789,650和5,814,318、5,612,205、5,721,367、5,789,215)、Ig基因座的大的和大量種系片段的YAC引入(見(jiàn)Mendez等人NatureGenetics15:146-156，1997;Green和JakobovitsJ.Exp.Med.188:483-495，1998),和通過(guò)使用微細(xì)胞融合引入全部或基本上全部的基因座(見(jiàn)歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P0843961Al)模擬內(nèi)源Ig基因座。當(dāng)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可得到的方法，任何能夠用具有人序列的抗體響應(yīng)免疫的轉(zhuǎn)基因小鼠可用于產(chǎn)生本發(fā)明抗IL-17抗體，例如當(dāng)用含有本發(fā)明免疫原性表^f立對(duì)此類小鼠進(jìn)行免疫時(shí)。用途本發(fā)明抗體可用于如此處描述的治療、預(yù)防、診斷和研究應(yīng)用。本發(fā)明抗體可用于診斷與人IL-17的表勤目關(guān)的病癥或疾病。以類似的方式，本發(fā)明抗體可在監(jiān)測(cè)受試者中IL-17水平的測(cè)定中使用，其中檢測(cè)該受試者的IL-17相關(guān)的狀況。研究應(yīng)用包括利用本發(fā)明抗體和標(biāo)記來(lái)檢測(cè)樣品，例如人體液或細(xì)胞或組織提取物中IL-17的方法。本發(fā)明抗體可在被修飾或不被修飾下使用，并通過(guò)可檢測(cè)部分的共價(jià)或非共價(jià)附著進(jìn)行標(biāo)記。可檢測(cè)部分可以是能夠直接或間接產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)的任何一種。例如，可檢測(cè)部分可以是》文射性同位素，例如311、"C、32P、"S或1251、熒光或致化學(xué)發(fā)光化合物，如異硫氰酸熒光素、羅丹明或螢光素；或酶，如堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或辣根過(guò)氧化物酶?？墒褂糜糜诜謩e結(jié)合抗體到可檢測(cè)部分上的本領(lǐng)域已知的任何方法，包括Hunter等人，Nature144:945，1962;David等人，Biochemistry13:1014，1974;Pain等人，J.Immunol.Meth.40:219,1981;和Nygren，J.Histochem.和Cytochem.30:407，1982描述的那些方法。用于測(cè)定IL-17的多種常規(guī)方案，包括例如ELISAs、RIAs和FACS為本領(lǐng)域已知并為診斷改變的或異常的IL-17表達(dá)水平提供基礎(chǔ)。使用任何領(lǐng)域已知的技術(shù)，通過(guò)在適合形成抗原抗體復(fù)合體的條件下組合含有IL-17多肽的樣品與例如抗體來(lái)確定正常的或標(biāo)準(zhǔn)的表達(dá)值。用可檢測(cè)的物質(zhì)直接或間接標(biāo)記抗體以便于結(jié)合或未結(jié)合抗體的檢測(cè)。合適的可檢測(cè)的物質(zhì)包括多種酶、輔基、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)和》文射性物質(zhì)。合適的酶的實(shí)例包括辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合體的實(shí)例包括鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光物質(zhì)的實(shí)例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪基胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光物質(zhì)的實(shí)例包括魯米諾；放射性物質(zhì)的實(shí)例包括1251、131I、"S或311。(見(jiàn)，例如，Zola，MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,CRCPress,Inc.(1987))?？赏ㄟ^(guò)多種方法，例如光度法對(duì)形成的標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合體的量進(jìn)行定量。然后將樣品中表達(dá)的IL-17多肽的量與標(biāo)準(zhǔn)值比較。為方便起見(jiàn)，本發(fā)明抗體可提供在試劑盒中，含有預(yù)定量的試劑的包裝組合及進(jìn)行診斷測(cè)定的說(shuō)明書(shū)。用酶標(biāo)記抗體時(shí)，試劑盒中將包括底物和酶需要的輔因子(例如，提供可檢測(cè)生色團(tuán)或熒光團(tuán)的底物前體)。此外，可包括其它添加劑如穩(wěn)定劑、緩沖液(例如，封閉緩沖液或裂解緩沖液)等等。多種試劑的相對(duì)量可廣泛變化來(lái)提供試劑溶液中的濃度，其基本上優(yōu)化測(cè)定的靈敏度。尤其是，試劑可以干粉提供，通常為凍千的，包括賦形劑，其在溶解時(shí)將提供具有合適濃度的試劑溶液?？贵w的治療用途IL-17是由激活的T細(xì)胞在炎癥位點(diǎn)而不是體循環(huán)中分泌的促炎細(xì)胞因子；它在健康人的血清或組織中不易被檢測(cè)到。IL-17上調(diào)黏著分子，誘導(dǎo)大量炎性細(xì)胞因子和趨化因子從多種細(xì)胞類型包括滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞中產(chǎn)生，因此誘導(dǎo)噬中性粒細(xì)胞募集到炎癥位點(diǎn)，刺激前列腺素和金屬蛋白酶的產(chǎn)生，并抑制蛋白聚糖的合成。此外，IL-17在造血祖細(xì)胞的成熟過(guò)程中起重要作用。IL-17在不同的器官和組織包括肺、關(guān)節(jié)軟骨、骨、腦、造血細(xì)胞、腎、皮膚和腸內(nèi)具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。IL-17同IL-17B、C和E有15-27%的氨基酸同源性，并與IL-17D和F有44-50%的氨基酸同源性。IL-17以低親和力(約1nM)結(jié)合到IL-17受體上，而其它IL-17家族成員不結(jié)合到IL-17受體上。已經(jīng)將IL-17(即，IL-17A)的增長(zhǎng)水平與若干疾病聯(lián)系起來(lái)，所述疾病包括呼吸道炎癥、RA、骨關(guān)節(jié)炎、骨侵蝕、腹腔內(nèi)膿腫與粘連、IBD、同種異體移植排斥、牛皮褲、一些類型的癌、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化和MS。IL-17和IL-17R在RA患者的滑液組織中都上調(diào)。IL-17通過(guò)依賴IL-l-p和TNF-a和不依賴IL-l-p和TNF-a的途徑在RA發(fā)病機(jī)理中發(fā)揮作用。IL-17刺激其它細(xì)胞因子和趨化因子，例如TNF-a、IL-1卩、IL-6、IL-8和Gro-a的分泌。IL-17直接促進(jìn)RA中的疾病ii^。向小鼠膝內(nèi)注射IL-17可不依賴IL-ip活性地促進(jìn)關(guān)節(jié)破損(Ann.Rheum.Dis.59:529-32，2000)。抗IL-ip抗體對(duì)IL-17誘導(dǎo)的炎癥和關(guān)節(jié)損傷沒(méi)有影響(J.Immunol.167:1004-1013,2001)。在SCW誘導(dǎo)的鼠關(guān)節(jié)炎模型中，IL-17在野生型和IL-lj5敲除和TNF-a敲除小鼠中誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和蛋白聚糖耗盡。IL-17敲除小鼠在無(wú)抗原刺激時(shí)在表型上是正常的，但是在用II型膠原免疫后關(guān)節(jié)炎顯著減輕(J.Immunol.171:6173-6177,2003)。多發(fā)性硬化("MS")是自身免疫疾病，其特征在于圍繞軸突的髓鞘受到損傷的中樞神經(jīng)系統(tǒng)("CNS")炎癥。MS的標(biāo)志是T細(xì)胞浸潤(rùn)到CNS中。在美國(guó)MS侵襲超過(guò)350,000人且在全世界侵襲2，500，000人。有許多形式并且最常見(jiàn)的是復(fù)發(fā)/緩解型疾病("RRMS")，緊接著是繼發(fā)進(jìn)行性階段。目前的治療由卩干擾素(AVONEX、BETASERON和REBIF)組成，該3干擾素將復(fù)發(fā)/惡化率降低31%-34%，但可以產(chǎn)生流感樣癥狀和/或中和抗體的合成(例如，接受AVONEX的患者中約15%在18個(gè)月內(nèi)產(chǎn)生中和抗體)。因?yàn)镃NS免疫抑制的考慮，隨后從市場(chǎng)上去除了由FDA批準(zhǔn)用于RRMS的TYSABRI。在MS的治療中仍然還有未滿足的醫(yī)學(xué)需要。IL-17mRNA在MS損傷且在血液的單核細(xì)胞(MNC)和來(lái)自MS患者的腦脊液中增加。相比于緩解過(guò)程，在MS臨床惡化的過(guò)程中檢測(cè)到表達(dá)較高數(shù)目的IL-17mRNA的血液MNC(MultipleSclerosis,5:101-104,1999)。此外，實(shí)驗(yàn)自身免疫性腦脊髓炎("EAE")——MS的臨床前動(dòng)物模型在IL-17敲除小鼠中被顯著抑制。因此，包含本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的藥物組合物可用于疾病的治療或預(yù)防，其中IL-17的存在引起或促進(jìn)不想要的病理學(xué)效應(yīng)，或IL-17活性的降低在哺乳動(dòng)物，優(yōu)選在人類中具有治療益處，該疾病包括但不局限于呼吸道炎癥、哮喘、RA、骨關(guān)節(jié)炎、骨侵蝕、腹腔內(nèi)膿腫和粘連、IBD、同種異體移植排斥、牛皮癬、一些類型的癌、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化和MS，及其它炎性病癥、狀態(tài)、疾病或狀態(tài)包括但不局限于全身性紅斑狼瘡、對(duì)變應(yīng)原暴露的反映、幽門螺旋桿菌相關(guān)胃炎、支氣管哮喘和同種異體移植排斥(例如，腎臟的)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和狼瘡性腎炎。此處考慮本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體用于治療或預(yù)防至少一種前面提及的病癥中的用途，在前面提及的病癥中IL-17活性是有害的或其有利于生物活性的IL-17的水平降低。此外，考慮本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體在制備用于治療至少一種上面提及的病癥的藥物中的用途。如此處所用的，屬于"治療"等等指獲得希望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效部分或完全治療疾病和/或疾病的副作用方面可以是治療性的。如此處所用，"治療，，包括施用本發(fā)明化合物用于治療哺乳動(dòng)物，尤其是人類中疾病或狀況，并包括(a)在受試者中預(yù)防疾病，該受試者可能對(duì)該疾病易感但還沒(méi)有診斷患有該疾病；(b)抑制疾病，即阻止它的發(fā)展；和(c)減輕疾病，即引起疾病或病癥的消退或減輕癥狀或其并發(fā)癥?？烧{(diào)整劑量方案以提供最佳希望的反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防反應(yīng))。例如，可施用單次推注，隨時(shí)間推移可施用若干分次劑量，或根據(jù)治療情況的緊急按比例減少或增加藥物組合物本發(fā)明抗體可摻入到適合對(duì)受試者施用的藥物組合物中(見(jiàn)，例如，實(shí)施例14)。本發(fā)明化合物可單獨(dú)或與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑組合，以單劑量或多劑量施用。設(shè)計(jì)用于施用的藥物組合物以適合于所選擇的施用方式，且適當(dāng)時(shí)使用藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體和/或賦形劑，如分散劑、緩沖劑、表面活性劑、防腐劑、增溶劑、等滲劑、穩(wěn)定劑等等(見(jiàn)，例如，此處的實(shí)施例14)。根據(jù)常規(guī)技術(shù)如在例如Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy,19版，Gennaro，Ed，，MackPublishingCo.,Easton，PA1995(其提供從業(yè)醫(yī)生通常已知的配制技術(shù)的概要)中的技術(shù)設(shè)計(jì)所述組合物。可使用標(biāo)準(zhǔn)給藥技術(shù)對(duì)有風(fēng)險(xiǎn)或呈現(xiàn)如此處描述的病理的受試者施用含本發(fā)明抗IL-17單克隆抗體的藥物組合物，所述給藥技術(shù)包括口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、經(jīng)肺、經(jīng)皮膚、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、含服、舌下或栓劑給藥。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選為"治療有效量"或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明抗體。"治療有效量，，指在必要的劑量和時(shí)間內(nèi)有效實(shí)現(xiàn)希望的治療結(jié)果的量?？贵w的治療有效量可根據(jù)因素如疾病狀態(tài)、個(gè)體年齡、性別和體重、及抗體或抗體部分在個(gè)體中《)起希望的反應(yīng)的能力而變化。治療有效量也是治42療有益效果超過(guò)抗體的任何有毒或有害效果的量。"預(yù)防有效量"指在必要的劑量和時(shí)間內(nèi)有效達(dá)到希望預(yù)防效果的量。通常，由于預(yù)防劑量在疾病前或在疾病較早階段用于受試者，預(yù)防有效量將比治療有效量少。治療有效量或預(yù)防有效量為至少最小劑量，但是低于毒性劑量的活性劑，其為向受試者賦予治療益處必需的。用另一種方式陳述，本發(fā)明抗體的治療有效量是在哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類中降低1L-17生物活性(例如結(jié)合到IL17R)的量，其中IL-17的存在引起或促進(jìn)不想要的病理學(xué)效應(yīng)或IL-17水平的降低導(dǎo)致哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類中有益的治療效果。本發(fā)明抗體的給藥途徑可以是口服、腸胃外、通過(guò)吸入或局部的。優(yōu)選地，本發(fā)明抗體可以摻入進(jìn)適合腸胃外施用的藥物組合物中。如此處所用的術(shù)語(yǔ)腸胃外包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、直腸、陰道或腹膜內(nèi)給藥。優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)或皮下注射的周圍全身遞送。用于此類注射的合適的載體是本領(lǐng)域已知的。藥物組合物通常在生產(chǎn)條件下和在提供的容器包括例如，密封的小瓶或注射器中保存的條件下必須是無(wú)菌且穩(wěn)定的。因此，藥物組合物在完成制備后可以進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾，或另外制成微生物學(xué)上可接受的。用于靜脈內(nèi)灌注的典型組合物具有250-1000ml流體體積，如無(wú)菌林格液、生理鹽水、葡萄糖溶液和Hank's液，并具有治療有效劑量(例如，1至100mg/ml，或更高)的抗體濃度。劑量可根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重程度而變化。如醫(yī)學(xué)領(lǐng)域熟知的，任何一個(gè)受試者需要的劑量依賴許多因素，包括患者的大小、體表面積、年齡、待施用的特定化合物、性別、給藥時(shí)間和途徑、一般健康和同時(shí)施用的其它藥物。典型劑量可以在例如0.001至1000嗎的范圍內(nèi)；然而，預(yù)想低于或高于該典型范圍的劑量，尤其考慮前面提及的因素。日腸胃外劑量方案可以從每天約0.1|ug/kg至約100mg/kg總體重，優(yōu)選從約0.3|ug/kg至約10mg/kg且更優(yōu)選從約1|ag/kg至1mg/kg，甚至更優(yōu)選從約0.5至10mg/kg體重。可通過(guò)定期評(píng)估來(lái)監(jiān)控進(jìn)程。對(duì)于在幾天或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)重復(fù)給藥，根據(jù)情況，重復(fù)治療直至產(chǎn)生對(duì)疾病癥狀想要的抑制。然而，其它劑量方案也有用并且不由此被排除在外。根據(jù)醫(yī)生希望實(shí)現(xiàn)的藥物動(dòng)力學(xué)衰變的模式，可通過(guò)抗體的單次推注給藥、多次推注給藥或連續(xù)灌注給藥來(lái)遞送想要的劑量。這些建議的抗體的量需要大量的治療學(xué)判斷。選擇適當(dāng)劑量和時(shí)序安排的關(guān)鍵因素是獲得的結(jié)果。在該上下文中考慮的因素包括治療的特定疾病、治療的特定的哺乳動(dòng)物、個(gè)別患者的臨床情況、疾病的起因、抗體遞送的位點(diǎn)、抗體的特定類型、給藥方法、給藥的時(shí)序安排和醫(yī)生已知的其它因素?？梢员鶅龌騼龈杀景l(fā)明的治療劑用于貯藏并在使用之前在合適的無(wú)菌載體中進(jìn)行重構(gòu)。凍干和重構(gòu)可導(dǎo)致不同程度的抗體活性損失。必須調(diào)整劑量用于補(bǔ)償。通常，優(yōu)選6至8的pH。制成品在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，提供了制成品，其包含用于治療或預(yù)防上面描述的疾病或狀況的材料。制成品包括容器和標(biāo)簽。合適的容器包括，例如，瓶子、小瓶、注射器和試管。容器可由許多種材料如玻璃或塑料制成。容器容納本發(fā)明抗體的組合物，其對(duì)疾病或狀況的預(yù)防或治療有效，并具有無(wú)菌入口(例如，所述容器可以是靜脈輸液袋或小瓶，其具有可被皮下注射針頭刺穿的瓶塞)。組合物中的活性劑是本發(fā)明抗IL-17抗體。容器上的標(biāo)簽或與該容器伴隨的標(biāo)簽表明所述組合物用于治療選擇的疾病。制成品可還包括第二個(gè)容器,其含有藥學(xué)上可接受的緩沖液，如磷酸鹽緩沖鹽水、林格液和葡萄糖溶液。它可進(jìn)一步包括從商業(yè)和用戶觀點(diǎn)上想要的其它材料，包括其它緩沖液、稀釋劑、過(guò)濾器、針頭、注射器和有使用說(shuō)明的包裝說(shuō)明書(shū)。提供下面實(shí)施例僅僅用于闡述目的，且不旨在在任何方面限制本發(fā)明的范圍。表lSEQID號(hào)<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>表2重鏈CDR比對(duì)SEQSeqS叫Fab#CDRlIDNo.CDR2IDNo.CDR3IDNo1GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNORFKG29YDYATGTGAY332GYSFTDY麗N11V旨NYG丁TDYN,KG29YDY，G丁GeY343GYSFTDYNMN11V證NYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY334GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY35GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY366GYSFTDYNMN11■PNYGTTDYNGRFKG29YDYATGTGAY377GYSFTDYNMN11V諸NYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY338GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY389GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYgTGTGgY3910GYSFTDYNMNnVINPNYGTTDYNORFKG29YDYATGTGgY37UGYSFTDYNMN11VrNPNYGTTDYNqRFKG29YDYATGTGAY3812gysftdy"n訓(xùn)11v旨nygttdynqrfkg29ydyatgtgj;y4013GYSFTDYNMN11V證NYGTTDYN,KG29YDY￡TGTG￡Y4114GYSFTDY麗N11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY￡TGTG￡Y4215GYSFTDYNMN11V證NYGTTDYN(5RFKG29YDYXTGTGgY4316GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYHTGTGgY3917GYSFTDYNMN1VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTG^3818GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY§TGTG￡Y4419GYSFTDYNMNnV證NYGTTDYN(5RFKG29YDYATGTGAY3320GYSFTDYNMN12V證NYGTTDYN(5RFKG29YDYATGTGAY3321GYSFTDYNMN13VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3322GYSFTDYNMN14V諸NYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3323GYSFgDYN廳15VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3324GYSFT，NMN16VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3325GYSFTDYNMN17VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3326GYSFTDY雨g18VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3327GYSFTDYNJN19VINPNYGTTDYN<5RFKG29YDYATGTGAY3328GYSF￡DYNMN20VINPNYGTTDYNORFKG29YDYATGTGAY3329GYSFTDYNMN21VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3330GYgFTDY麗N22VINPNYGTTDYN(5RFKG29YDYATGTGAY3331GY￡FTDYNMN23VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3332GYSFTD￡NMN24V證NYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY3333GYSFTDYNMN11VINPMYGTTDYNQRFKG30YDYATGTGAY3334GYSFTDYNMN11VINPAYGTTDYNQRFKG31YDYATGTGAY3335GYSFTDYNMN11VINPgYGTTDYNQRFKG32YDYATGTGAY3336GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY，GTGAY3537GYSFTDYNMN11V證NYGTTDYNQRFKG29YDY§TGTGAY4538GYSFTDYNMN11V賺NYGTTDYN(3RFKG29YDM丁GTGAY26139GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNGRPKG29YDYATGTGAY4740GYSFTDYNMN11V證NYGTTDYNQRFKG29YDYgTGTGAY4841GYSFTDYNMN11VINPNYGTTDYNORFKG29YDYATGTGAY4942GYSF丁DY菌N1143GYSFTDYNMN144GYSFTDYNMN1145GYSFTDYN畫(huà)1146GYSFTDYNMN1147GYSFTDYNMN1148GYSFTDYNMN1149GYSFTDYNMN1150GYSFTDYNMN1151GYSFTDYNMN1152GYSFTDYNMN1153GYSFTDYNMN1154GYSFTDYNMN1155GYSFTDYNMN1156GYSFTDYNMN1157GYSFTDYNMNU58GYSFTDYNMN1159GYSFTDYNMN1160GYSFTDYNMN1161GYSFTDYNMN1162GYSFTDYNMN1163GYSFTDYNMN1164GYSFTDYNMN1165GYSFTDYNMN1166GYSFTDYNMN167GYSFTDYNMN1168GYSFTDYNMN1169GYSFTDYNMN1170GYSFTDYNMN1171GYSFTDYHLG2572GYSFTDYHIH2673GYSFTDYHIH2674GYSFTDYHIH2675GYSFTDYHIH2676GYSFTDYHIH2678GYSFTDYHIH2679GYSFTDYgM§2780GYSFTDYHIH2682GYSFTDYHIH2684GYSFTDYHIH2685GYSFTDYHIH2686GYSFTDYHIH2687GYSFTDYHIH2688GYSFTDYHLG2589GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYN(3RFKGVINPNYGTTDYNGRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGV鮮NYGTTDYN(5RFKGVINPNYGTTDYNGRFKGVINPNYGTTDYNQRPKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNqRFKGVINPNYGTTDYNGRFKGVINPNYGTTDYNGRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDY^QRFKGV歸NYGTTDYNGRFKGV證NYGTTDYN(5RFKGV歸NYGTTDYN(5RFKGVINPNYGTTDYN(3RFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKG■PNYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYN(5RFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNCJRFKGV歸NYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTOYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGT丁DYNQRFKGVINPNYGTTDYNCJRFKGV證NYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNGRFKGVINPNYGTTDYNQRFKGVINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATgTGAY5029YDYAfGTGAY5129YDY￡TGTGYY5229YDYXTGTGYY5329YD￡ATGTGAY5429YDYATG丁GAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDYATGTGAY3329YDY￡TGTGAY4629YDY￡TGTGAY4629YDY狂TGTGYY5529YDYgTG丁GAY4829YDYfTGTGAY4629YDY￡TGTGAY4629YDYATGTGAY4729YDY￡TGTGAY4629YDYgTGTGAY4829YDYATGTGAY4729YDY￡TGTGYY5229YDY!TGTGAY4729YDY￡TGTGAY4629YDY￡TGTGAY4629YDY￡TGTGAY4629YDY￡TGTGYY52VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY狂TGTGAY4892GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNC^RFKG29YDYgTGTGAY4893GYSFTDY廷Mg27V證NYGTTDYNQRFKG29YDYgTGTGAY4894GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY￡TGTGAY4695GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYXTGTGAY4796GYSFTDYHIH26菌PgYGTTDYNQRFKG32YDY￡TGTGAY4697GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYHTGTGAY4898GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY!TGTGAY4799GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY￡TGTGAY46100GYSFTDYHIH26VINPgYGTTDYNQRFKG32YDYATGTGAY330GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYfTGTGAY46102GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYN(3RFKG29YDY￡TGTGAY46103GYSFTDYHIH26V證gYGTTDYNQRFKG32YDY￡TGTGAY46104GYSFTDYHIH26VINPgYGTTDYNQRFKG32YDYfTGTGAY46105GYSFTDYHIH26VINPgYGTTDYNQRFKG32YDYXTGTGAY47106GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYrrGTGAY4707GYSFTDY肌G25V證gYGTTDYNQRFKG32YDY狂TGTGAY48賜GYSFTDYKLG25VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYATGTGAY47109GYSFTDYgMS27，PgYGTTDYNQRFKG32YDY￡TGTGAY46110GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY￡TGTGYY52111GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNGRFKG29YDY￡TGTGAY46112GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYN(5RFKG29YDYH丁GTGAY48113GYSFTDY狂MS27，PNYGTTDYNQRFKG29YDY!TGTGAY4714GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDY!TGTGAY47li5GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYX丁GTGAY47116GYSFTDYJiM§27VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYXTGTGVY47117GYSFTDYHIS28V證EYGTTDYNQRFKG32YDYX丁GTGYY53118GYSFTDYHIH26VINPMYGTTDYNQRFKG30YDYXJGTGYY53119GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNGRFKG29YDY￡TGTGYY52120GYSFTDYHIS28VINPMYGTTDYNqRFKG30YDY￡TGTGAY46121GYSFTDYHIS28V歸gYGTTDYN(5RFKG32YDY￡TGTGAY46122GYSFTDYHIH26V證MYGTTDYNQRFKG30YDYX丁GTGYY53123GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYXTGTGYY53124GYSFTDY麗N11VINPMYGTTDYNQRFKG30YDYXTGTG^Y53125GYSFTDYHIH26V證gYGTTDYN(5RFKG32YDY￡TGTGYY52126GYSFTDYHIH26VINPMYGTTDYNQRFKG30YDY￡TGTGYY52127GYSFTDYHIH26VINPNYGTTDYNQRFKG29YDYX丁GTGAY47128GYSFTDYgMg27V證歐GTTDYNQRFKG30YDYX丁GTGAY47129GYSFTDYHIH26V證MYGTTDYNqRFKG30YDY￡TGTGXY52130GYSFTDYgM§27VINPMYGTTDYNQRFKG30YDYATGTGAY47131GYSFTDYHIH26VINP￡YGTTDYNQRFKG32YDY￡TGTGYY52132GYSFTDYgM§27VINPMYGTTDYNQRFKG30YDY￡TGTGYY52共有序列SEQIDNO:244SEQIDNO:245SEQIDNO:246X,是H或GX3是S、H或PX5是G、R、T、N或PX6是D或WX7是Y或FX8是N或HX9是M、T、L或IXl0是N、G、H或SVINPX5YGTTDYNQRPKGX5是N、A、M或EYDX3X4X5X6TGX9YX3是Y、A或PX4是Y、F、H、S、W、L或AX5是T或PX6是G或SX9是A、G、L、V或丁表3輕鏈CDR比對(duì)<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>30rssqslvhsrgntylh122kvsnrfs150sqsth:lpft16831RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHIiPFT1SS32RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRE"S150SQSTHJGPFT16833RSSQSLVHSRGNTYIjH122KVSNRFS150SQSTHIiPFT16834RSSQSLiVHSRGlSITYIiH122KVSNRFS150sqsth:lpe"t16835rssqsla/hsrgntylh122kvsnrfs150sqsth:lpft1s836RSSQSLVHSRGNTYIJi122KVSMRFS150SQSTHLPFT16837RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHLPFT16838rssqs:lvhsrgntylh122kvsnrfs150SQSTHIjPFT16839RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHIjPFT16840rssqsia/hsrgntylh122kvsnrfs150sqsth:lpft16841RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSmLPFT16842RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHLPFT16843RSSQSIiVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHLPFT16844rssqslvhsrgntylh122kvsnrfs150sqsthlpft16845RSSGSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHJLPFT16846RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS15016847RSSgSIiVHSRGNTYLH125KVSNRFS150sqsth:lp:ft16848RSs5s^VIiSRGNTY;LH126KVSNRE"S150SQSTHIiPE"T16849SQSUVHSRGNTYLH127kvsnrfs150SQSTHIjPFT16850SSSIjVHSRGNTYIjH128KVSNRFS150SQSTHLPFT16851rss^sljjhsrgntykh129kvsnrfs150sqst肌pft1S852RSSQSLVHSRGNTYLH130KVSNRFS15016853RSSgSI^HSRGNTYLH131KVSNRFS150SQSTHIiPFT16854RSg石S:LVHSRGNTYLH132KVSNRFS150SQST肌PFT16855rs3qslvhsrgnt|;lh133kvsnrfs150sqsthlpft16856RSSQSLVHJJRGKfl^LH134KVSNRFS150SQSTHIiPFT16857rssqslvh5:rg5tylh135KVSNRFS150SQSTHliPFT16858RSSQSLVHgRG^TYLH136KVSNRFS150sqsth:lpft16859RSSQSIiVH^RGNTY^a137KVSNRFS15016860RSSQSLVHSRGNTY互H138KVSNRFS150SQSTHIjPFT16861rssqs:lvhsrgnty呈h139kvsnrfs150sqsth:lpft16862RSSQSI)VH^RGNTyIJH140KVSNRFS150SQSTHIiPFT16863RSSQSLVHik5NTY|;H133KVSNRFS150SQSTHLPFT16864rssqslvhsrgnt^Eh141kvsnrfs150SQSTHIuPFT16865RSSQSLVHSRGN^IjH142KVSNRFS150SQSTKLPFT1S866RSSQSIiVHSRG^YLH143KVSNRFS150SQSTHLPFT16867RSSQSLVHJ;RGiiTYLH144KVSNRFS150SQSTHLPFT1S868rssqslvh3rgntylh122kvsnrf工167sqsth;lpft16869RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRE^150SQ^THIiPFT17670RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS15017771rss^slvhsrgnt|;lh145kvsnrfs150sqst^lpft16872RSSgsIjVHSRGNT^IjH125KVSNRFS150SQSTKLPFT16873RSS^SLgHSRGNTfLH146kvsnrfs150sqsth:lpft16874rssqslvhsrgntylh133kvsnrfs150sgsthlpft16875RSSQSIiVHSRGNT7iLH122kvsnrfs150sqsth:lpft16876RSSQSLVHSRGNT￡Lfi133KVSNRFS150SQSTHLPFT16878RSSQSLVHSRGNTYLH122KVSNRFS150SQSTHLPFT16879rssqsi^srgntylh129kvsnrfs150sqsth:lpft16880RSSQSLVHSRGNTYLH129KVSNRFS150SQSTHIjPFT16882RSSQSI^HSRGNT￡LH133KVSNRFS150SQSTHIiPFT16884RSSQSLVHSRGNTYLH133KVSNRFS150SQSTHLPFT16885RSSgSLVHSRGNT^LH125KVSNRFS150SQSTHLPFT16886RSSQSLVHSRGNTYLH125KVSNRFS150SQSTHIiPFT16887RSS5SLKHSRGNT￡LH147KVSNRFS150SQSTHLPFT16888RSSQSL^HSRGNT互LH133KVS服FS150SQSTKLPFT16889RSSQSKRHSRGNT^HRSSQSLVHSRGNTYLH130KVSNRFS150SQSTHIjPFT16891129KVSNRFS15016892RSSQSLVHSRGNTYLH147KVSNRFS150SQSTHIjPFT1685293RSSQSI^SRGNTYIiH129KVS服FS150SQSmLPFT16894rssqsl^hsrgnti;lh133kvsnrfs150sqsthlpft16895rssqsl^hsrgnt^lh130KVSNRFg152sqsthlpft16896RSSgSI^HSRGNTYIiH125kv^nrf5153SQSimPFT16897RSsgSLVHSRGNTfLH145154SQSTHIiPFT16898rss^slvhsrgnt互lh133kvs5rfs150sqsthlpft16899RSSQSIiVHSRGNT互LH133KVSNRFS150SQSTHLPFT168100RSSgSLVHSRGNTLH125KVSN^FS155SQSTHLPFT168101rss石slvhsrgnti;lh133156sqsth:lpft168102148kv至nrfs157sqsthlpft168103RSS^SLgHSRGNT^lh130158sqsth:lpft168104rssgsl^hsrgnti;lh145kvs工5fs159SQSTHIiPFT168105rss^sl^hsrgnt^lh130KVsirfs150sqsth工pft169106rssqsl7hsrgnti;lh133kv^nrfs160sqsthSpft168107rssqsl^hsrgnt7lh130kv互nrfs161169108rssqsi^7hsrgnti;lh133kvnrf^162sqsth^pft169109rssqsl^hsrgnt7lh130kvs服-163sqsthZpft168110rss5Sl7hsrgnty:lh131kvsnrF工164sqsthspft169111rss石sl^HSRGNTi;iiH146kvsnr^165sqsthZpft168112rssgslVhsrgnt7lh125166sqsth:lpft168113rss^slvhsrgwti;lh133kvnrfs150sqsthlpft168114rssqsl^hsrgnt^lh129kvs工rfs159sqsthlpft168115rssqsl7hsrgnti;lh133kvs^rf王167sqstklpft168116RSSQSL^SHSgGNT^LH149kvsnrfJ167SQSTfflLPFT168117rssgsl7hs5gntylh125kvsnrf互167sqsth:lpft168118rss3slvhsrgnti;lh133kvsnrf工167sqsth;lpft168119rssqs:lvhsrgnt7;lh122kvsnrf工167sqsth;lpft168120rssqslvhsrgntylh122kvsnrf藍(lán)167sqsth;pft169121rssqsli^hsrgnti;ijH147kvsnrf王167sqsth至pft169122rssqsl7hsrgnt7:lh122kvsnrf王167sqsthZpft168123RSSgSLVHSRGNTYLH125KVSNRF互167SQSTHLPFT168124rss^silvhsrgntylh131kvsnrf工167sqst肌pft168125RSS石SIiVHSRGNTYIiH122150SQSTHLPFT168126RSSgS:LVHSRGNTYLH131KVSNRF;167SQSTHLPFT168127RSSgsLVHSRGNTYIiH131kvsnrf工167SQSTHIiPFT168128RSs5SL^iSRGNTYLH129kvsnrf7167SQSTH工PFT169129RSS5SI^HSRGNTYLH125KVSNRF工167SQSTHiiPFT168130rss^sl^hsrgntylh129167SQSTHLPFT168131rssgs:l7hsrgntyxh125kvsnrf"f167sqsthlpft168132rss^s:lvhsrgisity:lh125167SQSTHLiPFT168共有序列SE(5IDNO:247X1SX3X4SX6X7HX9X10GX12X13X14X15HXi是R或VX3是S或HX4是Q、K、R或AX6是V或Lx7是r、v或kSEQIDNO:248X1VX3X4RX6X7X3是K或IX3是S、A、D、T、R、H或PX4是N、V或TX5是R、I或NX6是F、1或N或SEQIDNO:249X,QX3X4X5X6PFTX,是S或NX3是S或丁X4是T、L或MX5是H或SX6是L、I、V、E或Y實(shí)施例實(shí)施例lELISAI:抗體結(jié)合到多種物種的IL-17用于測(cè)定抗體結(jié)合IL-17的典型ELISA測(cè)定4吏用密封的Costar3366《效量滴定板，其每孔用50nl含1.0ng/ml人IL-17(R&DSystems,#317-IL/CF)的碳酸鹽包被緩沖液(50mM碳酸鈉，pH9.0)在4°C包被過(guò)夜?；蛘撸褂眯∈?、大鼠、兔或獼猴IL-17。人IL-22(R&DSystems)用作對(duì)照抗原。兔和獼猴IL-17不能通過(guò)商業(yè)途徑得到并因此需要根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法利用圖2中提供的多種物種IL-17的氨基^f列(SeqIDNO:9和10)進(jìn)行克隆和表達(dá)，或人工合成。在SEQIDNO:250-254中顯示了編碼多種物種IL-17的示例性核苷酸序列。隨后通過(guò)加入100nl封閉緩沖液(Pierce#37515)封閉平板。將平板在37。C溫育1小時(shí)，然后在洗涂緩沖液(PBSpH7.4和0.05%Tween)中洗滌三次。然后，向每孔中加入50nl樣品抗體或?qū)φ湛贵w(在PBSpH7.4中稀釋至多種濃度，例如，2、0.4、0.08、0.016、0.0032和0jig/ml)并將平板在37。C進(jìn)一步溫育1小時(shí)。用洗滌緩沖液洗滌所述平板三次，然后向每孔加入50pi綴合的抗人k-堿性磷酸酶(在PBSpH7.4中稀釋至1:1000)。將試樣在37。C溫育1小時(shí)。然后根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)通過(guò)在二乙醇胺底物緩沖液中溶解來(lái)新鮮制備對(duì)硝基苯磷酸二鈉鹽(PNPP，Pierce#37620)并向每孔中加入50pl。允許顯色反應(yīng)在室溫下繼續(xù)進(jìn)行約10分鐘，然后使用任何適當(dāng)?shù)腅LISA平板讀出器在405nm吸收處測(cè)定顏色信號(hào)。結(jié)合的程度與顏色信號(hào)的產(chǎn)生成比例。本發(fā)明抗體在如此處描述的ELISA測(cè)定中結(jié)合人IL-17,但不結(jié)合大鼠或小鼠IL-17。假設(shè)實(shí)施例4的Biacore數(shù)據(jù)表明本發(fā)明抗體結(jié)合人和猴或IL-17,預(yù)期本發(fā)明抗體也表明在如此處描述的ELISA測(cè)定中可結(jié)合到猴IL-17上。實(shí)施例2ELISAII:抗體結(jié)合到IL-17家族的蛋白質(zhì)員(例如，IL-17A、IL-17B、IL-17C，、IL-17D、IL-17E或IL-17F)還是人IL-22(陰性對(duì)照)。在典型測(cè)定中，將ELISA平板孔(NuncImmunoMaxisorp)用100jd(IX包被緩沖液中0.5jig/ml(BioFx))IL-17家族成員蛋白質(zhì)(R&DSystems)包被，密封并在4°C溫育過(guò)夜。通過(guò)輕輕彈打去除孔中的溶液并加入封閉緩沖液(200^含1.5%BSA的PBS)。在室溫下將平板在旋轉(zhuǎn)搖床上溫育30分鐘。然后將100nl待檢測(cè)的抗體以多種濃度(例如，2、0.4、0.08、0.016、0.0032和0jig/ml)加入到每孔中。將平板再次溫育過(guò)夜(4°C),隨后在旋轉(zhuǎn)搖床上加溫(室溫下60分鐘)。然后用緩沖液(IXIsh緩沖液，BioFX)將每一個(gè)板孔洗滌5次。洗滌之后，加入適當(dāng)?shù)氖惺鄣木Y合HRP的二級(jí)抗體(在含1.5%BSA的PBS中為1:2000，100jil/孔)。將平板在4t轉(zhuǎn)搖床上重新溫育(室溫下60分鐘)，然后如上面描述用緩沖液洗滌(5X)。通過(guò)加入TMB(100jd/孔)直至飽和(約3-5分鐘)來(lái)進(jìn)行比色信號(hào)顯色，然后加入終止溶液(IOOnl/孔，BioFX)來(lái)結(jié)束進(jìn)一步的顯色。使用任何適當(dāng)?shù)腅LISA平板讀出器在450nm吸收處測(cè)定顏色信號(hào)。結(jié)合的程度與顏色信號(hào)的產(chǎn)生成比例。本發(fā)明抗體(例如，在表l中描述的Fabl03、104、118、121、126和131)特異地結(jié)合人IL-17(即,IL-17A)，但是，在相似的條件下，在高于背景水平上不結(jié)合人IL-17B、人IL-17C、人IL-17D、人IL-17E、人IL-17F、鼠IL-17或人IL國(guó)22。實(shí)施例3用于克隆IL-17的細(xì)胞的分離和激活A(yù).大鼠脾細(xì)胞使用無(wú)菌鑷子和剪刀，取出經(jīng)C02吸入處死的大鼠的脾并將所述脾放入含5mlRPMI1640培養(yǎng)基+10%胎牛血清和青霉素/鏈霉素(培養(yǎng)基溶液)的管中。將管中的內(nèi)含物倒入IOcm培養(yǎng)皿中并從脾中去除脂肪。使用一對(duì)完全磨砂、預(yù)先高壓滅菌的顯微鏡載波片將脾溫和勻漿。使用培養(yǎng)液從載波片上洗掉細(xì)胞，吸取幾次并用細(xì)胞濾過(guò)器(FisherScientific)過(guò)濾細(xì)胞。用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并在80ml中重懸它們至2x107細(xì)胞/ml的終濃度。向T150燒瓶中加入細(xì)胞溶液，加入伴刀豆凝集素A至3ftg/ml的終濃度并在37。C溫育約15小時(shí)。收集細(xì)胞，用PBS洗滌，在干水上水凍細(xì)月包沉淀并立即進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的RNA分離程序。B.獼猴和兔外周血單核細(xì)胞(PBMC)將來(lái)自獼猴的約7ml全血或來(lái)自新西蘭白兔的10ml全血裝進(jìn)BDVacutainerTMCPTTMSystem中用于從全血中分離單核細(xì)胞。在水平吊桶式轉(zhuǎn)頭中以1500x重力將CPT細(xì)胞制備管離心20分鐘。在界面收集淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，用培養(yǎng)液洗滌兩次，進(jìn)行計(jì)數(shù)并在培養(yǎng)液中重懸至106細(xì)胞/ml的終濃度。加入伴刀豆凝集素A至3ng/ml的終濃度并在37。C溫育約15小時(shí)。收集細(xì)胞，用PBS洗滌，在干冰上冰凍細(xì)胞片狀沉淀并立即進(jìn)^f亍標(biāo)準(zhǔn)的RNA提取程序。實(shí)施例4測(cè)定結(jié)合動(dòng)力學(xué)常數(shù)使用BIACORE⑧2000儀器測(cè)定抗原-抗體結(jié)合動(dòng)力學(xué)和親和力。所述儀器利用表面等離子體共振的光學(xué)特性來(lái)檢測(cè)葡聚糖生物傳感器基質(zhì)中相互作用分子的蛋白質(zhì)濃度的改變。除非指出，從BIACORE⑧AB購(gòu)買所有的試劑和材料。所有的測(cè)量在25。C下進(jìn)行。在HBS-EP緩沖液中重懸樣品至2jig/ml的終濃度(150mM氯化鈉，3mMEDTA，0.005%(w/v)表面活性劑P-20和10mMHEPES,pH7.4)。使用胺偶聯(lián)試劑盒將A蛋白以500反應(yīng)單位的水平固定在CM4傳感器芯片的流動(dòng)室1至4上。使用多重分析循環(huán)評(píng)估結(jié)合。每一循環(huán)在50nl/分鐘的流速下進(jìn)行并由以下步驟組成以2jig/ml注射約20fil抗體組合物，旨在捕獲100-200個(gè)反應(yīng)單位，注射250jil人IL-17、獼猴IL-17、新西蘭白兔IL-17、大鼠56IL-17或小鼠IL-17(以10nM開(kāi)始并且每一個(gè)循環(huán)使用兩倍連續(xù)稀釋)，隨后解離20分鐘，并使用30jil10mM鹽酸甘氨酸pH1.5進(jìn)行再生。使用BIAevaluatkm軟件中的"l:l質(zhì)量轉(zhuǎn)移"結(jié)合模型來(lái)估計(jì)每一個(gè)循環(huán)的結(jié)合和解離速率。具有IgG4Fc區(qū)的全長(zhǎng)mAb103、104、118、121、126和131(見(jiàn)表1)顯示以低于5pM的KD、低于2xlCrY1的K。ff和至少5x106]VrV1的K。n的高親和力結(jié)合到人IL-17和猴IL-17上。在這些變體mAb中Ko和koff被改善(即較低的KD，較低的koff)，優(yōu)于含有鼠可變區(qū)[SeqIDNo:261(2321的VH)、262(2321的VL)、人IgG4重鏈恒定區(qū)(SEQIDNO:260)和k輕鏈恒定區(qū)(SEQIDNO:272)的Fab2321mAb(例如Fab103和104的親本Fab)。本發(fā)明抗體顯示不高于背景水平地結(jié)合到小鼠IL-17或大鼠IL-17上；在高達(dá)200nM小鼠IL-17時(shí)檢測(cè)不到結(jié)合并且在高達(dá)1大鼠IL-17時(shí)檢測(cè)不到結(jié)合。在上面描述的相同條件下，檢測(cè)全長(zhǎng)mAb103、104、121和126用于結(jié)合獼猴IL-17和兔IL-17;對(duì)兔IL-17的結(jié)合是微弱且雙相性的，而對(duì)猴IL-17的結(jié)合與對(duì)人的結(jié)合相似。當(dāng)在該測(cè)定中檢測(cè)時(shí)，本發(fā)明的一些mab的比值(數(shù)值報(bào)道為平均值土平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤)列于下面表4中?？紤]IgG4的Fc區(qū)之外的Fc區(qū)將不會(huì)顯著影響K。和koff。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>結(jié)合是雙相的并且用異源配體結(jié)合模型擬合的數(shù)據(jù)產(chǎn)生兩種親和力。實(shí)施例5IL-17受體/抗IL-17抗體結(jié)合竟?fàn)幯芯吭搶?shí)施例表明本發(fā)明抗體與IL-17受體竟?fàn)幗Y(jié)合到IL-17上。使用IL-17受體Fc融合蛋白(R&D#177-IR)進(jìn)行BIACORE結(jié)合研究。為表明IL-17受體Fc融合蛋白結(jié)合人IL-17,在BIACORE結(jié)合緩沖液(HBS-EP)+1mg/mlBSA中于25。C，在BIACORE2000儀器上進(jìn)行BIACORE測(cè)定。CM4芯片與約600反應(yīng)單位的A蛋白一起使用，該A蛋白固定在芯片的流動(dòng)室1、2和3上。約100反應(yīng)單位的IL-17受體Fc融合蛋白在芯片的流動(dòng)室2上被捕獲。人IL-17然后以600nM到9.4nM的濃度暴露于流動(dòng)室1和2。在人IL-17的每250pi注射后，通過(guò)緩沖液流經(jīng)芯片允許復(fù)合體解離約12分鐘。在解離結(jié)束時(shí)，100mM甘氨酸pH1.5的20nl注射用于在下一循環(huán)結(jié)合開(kāi)始前再生芯片。流動(dòng)室1用作參考流動(dòng)室。使用BIAevaluation版本3.2軟件中的"Bivalentanalyte，，模型擬合數(shù)據(jù)。結(jié)果表明該相互作用具有1.06x105M-V1的結(jié)合速率(on誦rate)、20.3s"的快速解離速率(off-rate)和1.63x10-4s"的慢速解離速率。因此，該相互作用具有1.5nM和0.19mM的Ko或結(jié)合親和力，其比本發(fā)明抗體對(duì)人IL-17的結(jié)合親和力弱的多。竟?fàn)帉?shí)驗(yàn)的結(jié)合也在HBS-EP+1mg/mlBSA中25°C下，在具有CM4芯片的BIACORE2000儀器上進(jìn)行測(cè)量。約1000反應(yīng)單位的本發(fā)明抗體固定在芯片的流動(dòng)室2、3和4上；流動(dòng)室l為空白。使用50pl/ml的流速，將25nl500nM的人IL-17注射到所有四個(gè)流動(dòng)室，在芯片表面形成抗體:抗原復(fù)合體。在注射完成和復(fù)合體形成后，將250nl500nM人IL-17受體Fc融合蛋白注射到所有四個(gè)流動(dòng)室。在該注射結(jié)束時(shí)，使用100mM甘氨酸pH1.5的25nl注射再生芯片。然后注射250nl緩沖液而非IL-17受體Fc融合蛋白重復(fù)相同的結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在抗體:抗原復(fù)合體上受體注射的結(jié)合譜和在抗體:抗原復(fù)合體上緩沖液對(duì)照注射的結(jié)合i瞽相同。這表明一旦IL-17的受體被本發(fā)明抗體結(jié)合后，沒(méi)有可利用的結(jié)合位點(diǎn)供二聚IL-17結(jié)合它的受體。該結(jié)果也表明一旦復(fù)合體形成，受體就不能"拉動(dòng)"IL-17遠(yuǎn)離任何抗體。這些抗體可抑制人IL-17結(jié)合到它的受體上，因此中和人IL-17的生物活性。實(shí)施例6A體外IL-8報(bào)道子測(cè)定為檢測(cè)本發(fā)明抗體中和或拮抗IL-17生物活性的能力，可利用此處描述的IL-8報(bào)道子測(cè)定。該方法也可用于確定本發(fā)明Fab或mAb在基于細(xì)胞的測(cè)定中的潛能。人HS27細(xì)胞系(ATCC#CRL-1634)應(yīng)答IL-17而分泌IL-8。通過(guò)中和性抗IL-17抗體來(lái)抑制IL-17i秀導(dǎo)的IL-8的分泌(見(jiàn)，例如，/J附柳.155:5483-5486，1995或O^Ame9:794-800，1997)。因此，如果在沒(méi)有中和性抗IL-17抗體存在下向HS27細(xì)胞中加入足夠的IL-17，IL-17誘導(dǎo)的IL-8分泌應(yīng)該不受限制的進(jìn)行。HS27細(xì)胞維持在測(cè)定培養(yǎng)基中:缺少酚紅的DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基(Invitrogen#31053-028)，其具有10%胎牛血清、4mML谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉、青霉素G(100U/500ml)和鏈霉素(100照/500ml)。細(xì)胞在T150燒瓶中生長(zhǎng)直至它們?cè)跍y(cè)定日達(dá)到約80-90。/。的匯合。人IL-17(R&DSystems,#317-IL-050)在不含Ca"和Mg2+的無(wú)菌PBS中重構(gòu)，水凍儲(chǔ)藏，使用前新鮮解凍，并在測(cè)定培養(yǎng)基中稀釋至200ng/ml。將稀釋的IL-17的50nl等分試樣加入到96孔平底組織培養(yǎng)板(Falcon#35-3072)的每一個(gè)孔中，外面的孔保持空白。一式兩份的孔用于只有培養(yǎng)基的對(duì)照(100nl/孔)和只有IL-17的對(duì)照(100nl/孔)。試驗(yàn)以一式兩份或一式三份進(jìn)行。將無(wú)菌全長(zhǎng)mAb蛋白質(zhì)在測(cè)定培養(yǎng)基中稀釋至24照/ml的最大濃度。在單獨(dú)的測(cè)定平板上進(jìn)行連續(xù)稀釋(通常1:5)并將多種稀釋度的50jilFab樣品加入到含IL-17的孔中，然后在37°C溫育1小時(shí)。單獨(dú)測(cè)定培養(yǎng)基用作陰性對(duì)照。向含有Fab+IL-17(或?qū)φ?的平板的每一個(gè)孔中加入HS27細(xì)胞(通常在100jil測(cè)定培養(yǎng)基中約20,000個(gè)細(xì)胞)并在37°C溫育約48小時(shí)。在500倍重力下將96孔板離心5分鐘后收集培養(yǎng)基上清液并在測(cè)定培養(yǎng)基中稀釋1:15或1:10。根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)，除用測(cè)定培養(yǎng)基替換標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑且底物體積為100nI/孔(R&DSystems,ELISAD-8000C或R&DDuoSetELISA#DY208hIL-8)夕卜，使用市售ELISA試劑盒檢測(cè)上清液中IL-8的量來(lái)測(cè)定IL-17中和作用的水平。在微量培養(yǎng)板讀出器上進(jìn)行ELISA測(cè)量(450nm)。使用4參數(shù)邏輯擬合(logisticfit)獲得校正曲線，使用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)從校正曲線確定IL-8值(pg/ml)。使用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)獲得ICso值。當(dāng)在描述的測(cè)定中檢測(cè)時(shí)(2-4次重復(fù))，本發(fā)明全長(zhǎng)mab103、104、121和126(具有l(wèi)gG4Fc區(qū))具有450與500pM范圍內(nèi)的平均IC5。(基于每個(gè)mAb150kD的估計(jì)分子量)，所有測(cè)量數(shù)值的范圍為365到618pM。60實(shí)施例6B體外GROa才艮道子測(cè)定為檢測(cè)本發(fā)明抗體中和或拮抗IL-17生物活性的能力，可利用以下基于細(xì)胞的測(cè)定。IL-17可刺激上皮細(xì)胞和其它細(xì)胞分泌GROa。在該測(cè)定中檢測(cè)本發(fā)明抗體中和IL-17誘導(dǎo)的從人結(jié)腸直腸腺癌上皮細(xì)胞系HT-29中分泌GROa的能力。為檢測(cè)人IL-17是否劑量依賴性地從HT-29細(xì)胞中誘導(dǎo)GROa的分泌，在測(cè)定/培養(yǎng)基(McCoy's5A(Invitrogen);10%FBS(Invitrogen);青霉素G(100U/500ml);和鏈霉素(100ng/500ml))中稀釋(至4.5pg/ml;3X最高試驗(yàn)濃度)重組L-17(R&DSystems#317-IL-050/CF;在不含Ca2+和Mg2+的無(wú)菌DulbeccoPBS(D-PBS)中重構(gòu))。在測(cè)定培養(yǎng)基中進(jìn)一步連續(xù)稀釋IL-17(1:5)。將多種濃度的IL-17(0.096ng/ml-1，500ng/ml;3.0pM-46,875pM)分配到組織培養(yǎng)物處理的96孔板的內(nèi)孔中(每孔50pi)。將測(cè)定培養(yǎng)基(50分配到3個(gè)孔中用于"僅僅培養(yǎng)基"處理。試驗(yàn)一式三份進(jìn)行(每次處理3個(gè)孔)。在加入HT-29細(xì)胞前，將測(cè)定培養(yǎng)基中含有IL-17的平板在3"C、5%C02下溫育約60-卯分鐘。為評(píng)估本發(fā)明抗體，例如，具有IgG4Fc區(qū)的mAb126，使用從HT-29細(xì)胞產(chǎn)生約70%的最大GROa分泌的IL-17濃度(60ng/ml)。在測(cè)定/培養(yǎng)基中稀釋重組人IL-17(R&DSystems)(至240ng/ml;4X工作濃度)。將稀釋的IL-17分配到組織培養(yǎng)物處理的96孔板(BectonDickinsonFalcon#35-3072)的60個(gè)單獨(dú)的內(nèi)孔中。將測(cè)定培養(yǎng)基(50|il)分配到3個(gè)孔中用于"僅僅培養(yǎng)基"處理。待檢測(cè)的本發(fā)明抗體的劑量范圍通常是2.56-40,000pM。在單獨(dú)的稀釋板中，在測(cè)定培養(yǎng)基中將本發(fā)明抗體和對(duì)照抗體(無(wú)菌，在1XPBS中，pH7.4)稀釋至160,000pM。在測(cè)定培養(yǎng)基中進(jìn)一步連續(xù)稀釋本發(fā)明抗體和對(duì)照抗體(1:5)。然后向含有IL-17的孔中加入每種試驗(yàn)濃度的待檢測(cè)的本發(fā)明抗體(50|Lil)。試驗(yàn)通常一式三份進(jìn)行。僅測(cè)定培養(yǎng)基(50|Lil)用作"只有培養(yǎng)基，，和"只有IL-17，，對(duì)照。在加入HT-29細(xì)胞前，將含有IL-17和本發(fā)明抗體混合物的平板在3"C、5%C02下溫育60-90分鐘。HT-29細(xì)胞(人結(jié)腸直腸腺癌上皮細(xì)胞，ATCC#HTB-38)。HT-29在組織培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)直至它們?cè)跍y(cè)定當(dāng)天達(dá)到50-80%匯合。在測(cè)定當(dāng)天，用HBSS(Cambrex#CC-5024)沖洗細(xì)胞并用胰蛋白酶十EDTA從培養(yǎng)瓶中脫離細(xì)胞。用完全測(cè)定培養(yǎng)基將胰蛋白酶滅活。然后在室溫下將HT-29細(xì)胞于500Xg離心5分鐘。然后在測(cè)定培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞沉淀并將20,000HT-29細(xì)胞(在100|il中)加入96孔板的每一個(gè)處理孔中。向未用的每一個(gè)邊緣孔中加入等體積的D-PBS來(lái)減少由蒸發(fā)引起的邊緣效應(yīng)。將96孔板置于組織培養(yǎng)培養(yǎng)箱(37。C，5%C02)中約48小時(shí)。在測(cè)定結(jié)束時(shí)，將平板離心(室溫下，500Xg進(jìn)行5分鐘)，并轉(zhuǎn)移細(xì)胞培養(yǎng)基至聚丙烯96孔板中。根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)，除了rf吏用測(cè)定培養(yǎng)基作為標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑，使用來(lái)自BioFX實(shí)驗(yàn)室的1XELISA洗滌緩沖液，使用每孔50iul的樣品和標(biāo)準(zhǔn)體積，使用來(lái)自BioFX實(shí)驗(yàn)室的底物(HRP底物，#TMBW-1000-01)，和使用來(lái)自BioFX實(shí)驗(yàn)室的終止溶液(弁LSTP-lOOO-OlX每孔100pi)夕卜，利用GROa夾層ELISA(R+DSystemsDuoSet#DY275)測(cè)量GROa的水平。在ELISA反應(yīng)結(jié)束時(shí)，在微量滴定板讀出器上450nm處對(duì)平板進(jìn)行讀數(shù)。通過(guò)進(jìn)行4參數(shù)邏輯擬合獲得GROa的校正曲線。從校正曲線獲得樣品的GROa值(濃度pg/ml)。當(dāng)用IL-17以依賴劑量的方式進(jìn)行刺激時(shí)，人結(jié)腸直腸腺癌上皮細(xì)胞系HT-29分泌GROa(表5)。對(duì)照人IgG4不引起IL-17誘導(dǎo)的GROa分泌的減少。這些結(jié)果(表6)表明使用描述的條件，mAb126能在體外完全中和人IL-17誘導(dǎo)的GROa從HT-29細(xì)胞的分泌。在該測(cè)定中mAb126的IC50值為約560pM。表5人IL-17(ng/ml)AVGGROa(pg/ml)STDEV1,500.002,420.4311.8300.002，047.5509.960.001，556,0209.012.00960.024.92.40502.512.30.48297.96.30.10205.84.80149.216.7縮寫(xiě):AVG-平均；STDEV-標(biāo)準(zhǔn)差。表6mAb126IgG4陰性對(duì)照抗體conc.，pMAVGSTDEVAVGSTDEVGROa，GROa，pg/mlpg/ml40,000.0123.81.41,297.329.48,000.0134.16.41,419.9133.41,600.0151,39.51，370.4114.7320.01,170.656.01,388.654.164.01,340.859.11,380.436.012.81,362.021.11,346.281.62.561,280.956.11，243,4118.3O(只有IL-17)1,201.466.1只有培養(yǎng)基117.210.0縮寫(xiě)conc.-濃度；AVG-平均；STDEV-標(biāo)準(zhǔn)差。實(shí)施例7hlL-17的體內(nèi)中和人IL-17能結(jié)合并刺激小鼠IL-17受體，導(dǎo)致小鼠KC(CXCL1)趨化因子的提高和隨后的分泌。進(jìn)行時(shí)間和劑量變化實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定人IL-17的最佳劑量和小鼠KC誘導(dǎo)的最佳時(shí)間。這些實(shí)驗(yàn)表明人IL-17的150照/kg劑量和IL-17給藥后2小時(shí)的時(shí)間引起小鼠血清中KC的最高水平。本發(fā)明的全長(zhǎng)抗體(例如，具有有效連接到人IgG4Fc，SEQIDNO:260[或SEQIDNO:278的HCVR和有效連接到人k恒定區(qū)，SEQIDNO:263[或SEQIDNO:277的LCVR的Fab126或Fab121)以1，10，100和1000pg/kg,在人IL-17的皮下注射前1小時(shí)對(duì)小鼠靜脈內(nèi)施用。在人IL-17給藥2小時(shí)后，處死小鼠并使用市售試劑盒，根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(KCQuantikine，R&D)通過(guò)ELISA來(lái)測(cè)定KC的水平。同種型匹配的抗體用作陰性對(duì)照?？贵w阻斷了人IL-17刺激小鼠IL-17受體的能力，以導(dǎo)致劑量依賴的方式抑制小鼠KC的升高。與無(wú)效應(yīng)的對(duì)照抗體相比，Mabl26(含有Fabl26的全長(zhǎng)抗體)在描述的條件下以20ng/小鼠的劑量降低平均KC水平至約1/4。與對(duì)照抗體相比，Mabl21在描述的條件下以20ng/小鼠的劑量降低平均KC水平至約1/3。實(shí)施例8表位作圖兩種抗IL-17抗體(Fab126和Fab104)用于確定親本鼠Fab(2321，SEQIDNO:261和262)的人源化和優(yōu)化不改變由親本人源化和優(yōu)化引起的Fab的表位結(jié)合能力。人源化的、優(yōu)化的Fab同親本鼠Fab—樣結(jié)合相同的表位，如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)竟?fàn)嶦LISA或通過(guò)H-D交換和表位作圖的質(zhì)譜分析來(lái)確定(見(jiàn)，例如，Hoofnagle,A.，等人，AfW/ic^foMo/.250:283-298，2004;Hoofnagle,A.，等人，Zev.5/0/7/13;s.Bio附o/.5^7/d，32:1-25，2003;Baerga-Ortiz，A.，等人，尸尸ote/"Sd.11:1300-8,2002)。因此，將期望來(lái)自相同親本Fab的本發(fā)明Fabl-132結(jié)合相同的表位。使用H-D交換和質(zhì)鐠測(cè)定(H/DXMS)對(duì)表位作圖，確定在本發(fā)明抗體結(jié)合的非連續(xù)表位中包括人IL-17(SEQIDNO:1)的80到89之間的氨基酸[ADGNVDYHMN(SEQIDNO:266)?；诓煌锓N間IL-17的序列差異的比較和結(jié)合能力，DGNVDYH(SEQIDNO:267)是包含在本發(fā)明抗體結(jié)合的非連續(xù)表位中的基本序列。在完整IL-17序列的背景中改變SEQIDNO:267的氨基酸序列，導(dǎo)致檢測(cè)不到本發(fā)明抗體結(jié)合到改變的IL-17上。本發(fā)明抗體在高于對(duì)照抗體水平上不結(jié)合大鼠或小鼠IL-17。H/DXMS測(cè)定用于鑒定本發(fā)明抗體結(jié)合的IL-17的區(qū)域。酰胺氫交換率的速率依賴于胺基氫的結(jié)構(gòu)和溶劑可及性。游離的IL-17或IL-17:抗體復(fù)合體在水中與重水(d20)混合允許酰胺質(zhì)子通過(guò)氘進(jìn)行交換。參與蛋白質(zhì)結(jié)合的這些主鏈酰胺基團(tuán)受到保護(hù)而不進(jìn)行交換并保持質(zhì)子化。然后通過(guò)胃蛋白酶的蛋白水解，與LC和電噴射離子化質(zhì)語(yǔ)法結(jié)合鑒定這些區(qū)域。使用IMAC柱從GS-CHO細(xì)胞表達(dá)并純化含有C末端His和Flag標(biāo)記的人IL-17(IL-17-Flis)。將IL-17-Flis溶液的兩個(gè)10ng等分試樣(7.7Hi)轉(zhuǎn)移至2Microcon中，并且向Microcon力口入100jigiriAb104或mAb126(IL-17/Mab的摩爾比=1/2)。將20^ig的IL-17-Flis溶液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)Microcon中且不加入抗體。然后向每個(gè)Microcon中加入lxPBS緩沖液，至終體積180fil并且在14，000g下離心14分鐘。然后將150mllxPBS緩沖液加入到每一個(gè)Microcon中并在14，000g下離心14分鐘。這些步驟對(duì)保證游離抗原和抗原:抗體復(fù)合體處于相同緩沖液條件下是必要的。收集蛋白質(zhì)部分并用lxPBS調(diào)整終體積至50nl(復(fù)合體)或80nl(只有IL-17-Flis)。將6微升IL-17-Flis或IL-17-Flis和mAb復(fù)合體的復(fù)合體轉(zhuǎn)移至^敖塑料瓶中，并向其中加入14^1100%D20，導(dǎo)致樣品中具有70%D20。將溶液在室溫下溫育10分鐘。通過(guò)加入20jil1。/。甲酸溶液和2fil2mg/ml胃蛋白酶溶液立即淬滅交換并進(jìn)行消化，并在室溫下溫育30秒或在0。C溫育10分鐘。立即將消化液手動(dòng)注射到柱上。Waters2795HPLC和MicromassLTCPremier用于所有的測(cè)定。將來(lái)自HPLC泵的HPLC流連接到金屬管(約lml)、手動(dòng)注射器、ZorbaxC18柱(2.1x50mm)上，在這些設(shè)置下流動(dòng)(柱溫度:0。C;流動(dòng)相C:含0.15V。甲酸的水，D:含0.12%甲酸的CAN;流動(dòng)時(shí)間23分鐘)。用98%A(0.15%甲酸水溶液)和2%8(含0.12。/。甲酸的乙腈溶液)以0.2ml/分鐘的流速平衡柱子。在0.5分鐘內(nèi)從2%到10%B進(jìn)行梯度洗脫，然后在14.5分鐘內(nèi)到40%B，然后停留2分鐘后在1分鐘內(nèi)到90%B，并然后在1分鐘內(nèi)返回2%B。通過(guò)在這些i殳置(離子模式:正離子；質(zhì)量掃描范圍:300-2000;樣品錐電壓:80;去溶劑化氣流速(L/Hr):700;去溶劑化溫度:300。C)操作質(zhì)語(yǔ)儀來(lái)分析來(lái)自HPLC的樣品。在整個(gè)測(cè)定中將金屬管、注射器環(huán)和柱浸入在冰水中。在用或不用檢測(cè)的抗IL-17mAb進(jìn)行H/D交換后獲得IL-17的每一個(gè)消化肽的質(zhì)鐠。對(duì)于小肽，基于它的同位素離子和強(qiáng)度計(jì)算每一個(gè)肽的平均質(zhì)量。對(duì)于較大的肽，在內(nèi)校準(zhǔn)后從去褶合的質(zhì)譜獲得平均質(zhì)量。當(dāng)抗體與IL-17形成復(fù)合體時(shí)，IL-17的結(jié)合區(qū)(表位)受到保護(hù)而不接觸溶劑。與只有IL-17的那些相比，這導(dǎo)致較慢的酰胺氫交換率。通過(guò)比較氖交換后來(lái)自游離的和來(lái)自復(fù)合體的肽的質(zhì)量，通過(guò)復(fù)合體形成保護(hù)的肽應(yīng)該不同于游離IL-17中的對(duì)應(yīng)的肽。下面的表7列出了通過(guò)H/DXMS獲得的IL-17的消化肽的質(zhì)量差異。這些消化肽覆蓋IL-17-Flis的全序列。如表中數(shù)據(jù)表明，復(fù)合體和它自身之間IL-17-Flis肽的質(zhì)量差異對(duì)于檢測(cè)的兩種抗體是相似的，即它們結(jié)合相同的表位。在消化肽24-87+117-133(即IL-17的氨基酸24到87和117到133)(這兩個(gè)肽通過(guò)二硫鍵連接)和66-87+117-134處發(fā)現(xiàn)主要的質(zhì)量差異，提示在這些區(qū)內(nèi)的殘基參與結(jié)合。因?yàn)槟切┫氖执?，需要其它酶消化?lái)限制參與結(jié)合的特定的氨基酸殘基。除該數(shù)據(jù)外，本發(fā)明抗體不結(jié)合到IL-17家族的其它成員上(IL-17B、C、D、E和F)并且它們也不結(jié)合到小鼠或大鼠IL-17上。這些數(shù)據(jù)和序列比較和IL-17同源結(jié)構(gòu)模型的檢測(cè)一起提示殘基80-89包含在本發(fā)明抗體結(jié)合的IL-17的非線性表位中。表7IL畫(huà)17-Flis+mAb104IL-17-Flis+mAb126消化肽Ave(n=3)SDAve(n=3)SD1-23+98-116-0.360.61-0.780.5924-43-0.790.13-0.440.6527-42-0.560.17-0.560.3824-65-1.320.54-1.170.1954to65-0.170.37-0.530.2524-87+117-133-3.600.38-4.090.2966-87+117-134*-1.94-2.3866<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>注意:S質(zhì)量通過(guò)只從IL-17-Flis和抗體復(fù)合體的對(duì)應(yīng)的肽平均質(zhì)量中減去IL-17-Flis的消化肽平均質(zhì)量得到。*該數(shù)據(jù)來(lái)自在0。C消化10分鐘(n=l)。所有其它來(lái)自室溫消化0.5分鐘。實(shí)施例9癌癥組織中IL-17的表達(dá)多種人非癌性和癌性細(xì)胞裂解物用于檢測(cè)IL-17蛋白質(zhì)的存在。將組織(大約50-100mg小塊)在干冰上速凍，在冰上解凍并在含有陶瓷裂解珠(Qbiogene#6913-050;在2.0ml管中含1.4mm陶瓷珠)的管中350jdTPER緩沖液(Pierce#78510)中裂解，該TPER緩沖液中包括蛋白酶抑制劑(Pierce#78410)和磚酸酶抑制劑。將管在冰上放置5-10分鐘，然后在4。C下以13，000xg離心IO分鐘并將材料轉(zhuǎn)移至新管中除去殘?jiān)?。如描述的再次離心并轉(zhuǎn)移至新管。使用標(biāo)準(zhǔn)BSA方法檢測(cè)蛋白質(zhì)的濃度。使用市售IL-17ELISA試劑盒，根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(R&D#DY317，使用來(lái)自BioFX實(shí)驗(yàn)室的洗滌緩沖液、底物溶液和終止溶液)分析樣品IL-17。將IL-17水平對(duì)總蛋白質(zhì)濃度歸一化。與正常結(jié)腸組織(檢測(cè)了63個(gè)樣品)相比，癌性結(jié)腸組織(檢測(cè)了60個(gè)樣品)中的IL-17水平增加了2倍到3倍。與正常腎組織(檢測(cè)了21個(gè)樣品)相比，在癌性腎組織(檢測(cè)了21個(gè)樣品)中IL-17水平增加了平均3倍到4倍。與正常前列腺組織(檢測(cè)了7個(gè)樣品)相比，在癌性前列腺組織(檢測(cè)了44個(gè)樣品)中IL-17水平增加了。IL-17水平在其它檢測(cè)的肺瘤組織(包括乳腺、頸、肺、喉、甲狀腺、舌、卵巢和腦)中沒(méi)有升高。實(shí)施例10小膠質(zhì)細(xì)胞的IL-17激活I(lǐng)L-17誘導(dǎo)鼠腦小M^t細(xì)胞系(BV-2)分泌IFN和IL-12p70。在聚D-賴氨酸包被的組織培養(yǎng)瓶上培養(yǎng)BV-2鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系[從Scios獲得，經(jīng)初分離它們(E.BIasi等人，/./附柳m朋/。w19卯，27:229-237)的ElisabetaBlasi(MicrobiologyUniversityofPerugia，意大利)許可，直至在37。C,5%C02下高葡萄糖DMEM(Invitrogen#31053-028)和2mML-谷氨酰胺(Invitrogen/GIBCO#25030-081)、10%FBS(熱滅活；Invitrogen/GIBCO#10082-147)、1mM丙酮酸鈉(Invitrogen/GIBCO#11360-070)、100ng/mlNormocin(InvivoGen)中不高于60%的匯合。在測(cè)定的第0天，沖洗(不含Ca2+和Mg2+的Dulbecco的PBS;Invitrogen)、脫附(0.25%胰蛋白酶+EDTA)BV-2細(xì)胞，隨后胰蛋白酶滅活，然后離心(500Xg5分鐘，室溫)。重懸得到的細(xì)胞沉淀至7，000細(xì)胞/100pl培養(yǎng)基的細(xì)胞密度。將100nl細(xì)胞懸浮液分配至聚D-賴氨酸包被的組織培養(yǎng)物處理的96孔板的60個(gè)單獨(dú)的內(nèi)部孔中。用IL-17處理前如描述的將平板溫育約48小時(shí)。在測(cè)定的第2天，在聚丙烯平板用培養(yǎng)基稀釋重組的小鼠IL-17(mIL-17)(無(wú)載體；R&DSystems)(該重組小鼠IL-17在不含Ca"和Mg2+的無(wú)菌Dulbecco的PBS中重構(gòu))至1.5ng/ml(最高試驗(yàn)濃度)。小鼠IL-n在聚丙烯平板上進(jìn)一步進(jìn)行連續(xù)稀釋。陽(yáng)性對(duì)照是在培養(yǎng)基中稀釋至1jig/ml(最高試驗(yàn)濃度)的LPS。測(cè)定培養(yǎng)基用作陰性對(duì)照。在添加處理(isoni/孔)前，從細(xì)胞中溫和吸出培養(yǎng)基。試驗(yàn)以一式三份進(jìn)行(每次處理3個(gè)孔)。分別重復(fù)的平板在37。C，5%C02下溫育24小時(shí)或48小時(shí)。在測(cè)定的第3天和第4天，將平板離心(500Xg5分鐘，室溫)，然后將細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至聚丙烯96孔板中，其為密封且水凍的(-80。C)。將培養(yǎng)基樣品解凍并根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(除了黑色壁的聚碳酸酯過(guò)濾平板(Millipore)代替試劑盒中包括的過(guò)濾平板)，用鼠22-plexmultiplex試劑盒(Linco)檢測(cè)細(xì)胞因子和趨化因子的水平。在Luminex⑧裝置(每珠床S0粒珠子，低RP1獲得設(shè)置)上對(duì)熒光進(jìn)行讀數(shù)。數(shù)據(jù)顯示在下面表8中。使用4或5參數(shù)邏輯擬合獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定IFNy和IL-12p70的值(pg/ml)。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>實(shí)施例11過(guò)敏性腸疾病的DSS誘導(dǎo)模型IBD是慢性炎性疾病，其包括克隆病和潰瘍性結(jié)腸炎。IL-17蛋白質(zhì)水平在來(lái)自潰瘍性結(jié)腸炎和克隆病患者的血清和結(jié)腸組織中顯著升高。然而，IL-17在來(lái)自正常個(gè)體或患傳染性結(jié)腸炎或局部缺血性結(jié)腸炎患者的血清中沒(méi)有檢測(cè)到。DSS(葡聚糖硫酸鈉)模型是過(guò)敏性腸疾病(IBD)最古老且最具代表性的臨床前模型之一。在DSS模型中(見(jiàn)，例如，F(xiàn)AS"五必/ow""/.2004;18:1550-1552)，急性和慢性炎性損傷均被誘導(dǎo)。小鼠具有高度均一的損傷，體重減輕和結(jié)腸長(zhǎng)度減少。在各小鼠中關(guān)于時(shí)間過(guò)程和嚴(yán)重程度是可以重現(xiàn)的。對(duì)于疾病誘導(dǎo)，小鼠接受飲用水中的5%DSS30-40Kd7天。在約第8天觀察到疾病活性指數(shù)(DAI)，包括潛血檢測(cè)陽(yáng)性或直腸出血、稀糞和體重減輕(5-8%)。每天監(jiān)測(cè)小鼠的體重持續(xù)2周。從約第12天到約第15天處死小鼠。相對(duì)于未處理的結(jié)腸，IL-17蛋白質(zhì)在DSS處理的結(jié)腸中顯著增加。用IL-17抗體處理可降低疾病活性指數(shù)。實(shí)施例12多發(fā)性硬化的EAE模型EAE是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的CD4+T介導(dǎo)的脫髓鞘病，其作為人類MS的模型。EAE發(fā)展的致病機(jī)理包括抗原特異的T細(xì)胞的激活和Thl的分化，隨后T細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)CNS中。IL-17促進(jìn)多發(fā)性硬化(MS)的病理。人類患者的MS損傷的微陣列分析已經(jīng)顯示了IL-17的增加(Lock等人Nat.Med.8:500-508，2002)。血液和腦脊液中表達(dá)IL-17mRNA的單核細(xì)胞(MNC)在MS患者中數(shù)量顯著提高，并且相比于緩解過(guò)程，在MS臨床惡化的過(guò)程中檢測(cè)到更多數(shù)量的表達(dá)IL-17mRNA的血液MNC(Matusevicius等人MultipleSclerosis.5:1-1-104，1999)。EAE在IL-17敲除小鼠中被顯著抑制(Nakae等人，丄/附附朋.171:6173-6177)。此處描述的實(shí)施例表明IL-17蛋白質(zhì)在EAE小鼠的脊髓中增加且用抗鼠IL-17抗體進(jìn)行的處理降低活性EAE模型中的EAE分?jǐn)?shù)。對(duì)于疾病誘導(dǎo)，用(i)200pi5mg/ml的百日咳毒素(PT)和完全弗氏佐劑(CFA)或(ii)PT、CFA和300jig/200pi的MOG35-55(在含5mg/ml熱滅活結(jié)核分枝70桿菌的CFA中乳化的髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白)在第0天經(jīng)皮下免疫8-9周齡的雌性C57BL/6小鼠。在第2天，再次用PT處理小鼠。在整個(gè)麻痹水平的研究中對(duì)小鼠打分。在接受MOG的組中期望疾病。在第1、7和15天對(duì)小鼠施用大鼠抗小鼠IL-17單克隆IgG!抗體或同種型對(duì)照抗體(BDBiosciences的大鼠抗小鼠IL-17抗體)。當(dāng)臨床得分達(dá)到1-3(在0-4標(biāo)度上)時(shí)，處死接受MOG的小鼠；這是下面表9中研究1的第14-31天之間和下面表10中研究2的第14-16天之間。疾病的臨床病征在約第10天發(fā)生。各動(dòng)物根據(jù)臨床CNS疾病嚴(yán)重性由至少2名記錄員獨(dú)立地進(jìn)行主觀地打分，他們對(duì)處理組的身份不知情。等級(jí)0是正常的；等級(jí)l是完全軟弱無(wú)力的尾巴(limptail);等級(jí)2是單側(cè)部分后肢虛弱；等級(jí)3是完全后肢麻痹；且等級(jí)4是垂死的。(見(jiàn)/.五a;/7.AfW.194:873-881，2001)。將對(duì)照小鼠與MOG處理的小鼠在同一天處死。在處死的時(shí)候分離脊髓并快速冷凍用于通過(guò)ELISA進(jìn)行IL-17蛋白質(zhì)分析。當(dāng)與同種型對(duì)照組相比時(shí)，IL-17抗體處理組具有顯著較低的疾病分?jǐn)?shù)。在1ml(下面表9中研究1)或0.4ml(下面表7中研究2)TPER蛋白質(zhì)提取試劑(Pierce#78510)與完全蛋白酶抑制劑(RocheAppliedScience#11697498)中，在含有陶資珠(裂解基質(zhì)D，QBiogene#6913050)的2ml管中和FastPrep裝置(Bio101)5,5刻度處進(jìn)行30秒來(lái)制^^種全脊髓的裂解物。裂解后，將樣品離心(微量離心機(jī)中以14,000rpm進(jìn)行5分鐘)來(lái)去除殘?jiān)⑸锨逡恨D(zhuǎn)移至新的微量離心管中。用BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒(Pierce#23225),使用制造商的微量滴定板方案來(lái)測(cè)定每種細(xì)胞裂解物中的總蛋白質(zhì)濃度。將裂解物冰凍并在-80。C保存。裂解物在水上解凍后，通過(guò)離心使其澄清，根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(R&DQuantikine#M1700)通過(guò)ELISA在未稀釋的樣品中測(cè)定小鼠IL-17水平。使用4參數(shù)邏輯擬合獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定IL-17的值。將IL-17水平對(duì)每個(gè)樣品中蛋白質(zhì)濃度歸一化并在下面表9和10中表示為pglL-17/ml每一種裂解物中的總蛋白質(zhì)。如在表中的數(shù)據(jù)表明，在EAE小鼠中檢測(cè)到IL-17的升高的水平。表9研究l<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>所有IL-17ELISA值在ELISA的檢測(cè)范圍內(nèi)，為一式兩份的平均值表IO研咒2<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>所有IL-17ELISA值在ELISA的檢測(cè)范圍內(nèi)，為一式兩份的平均值實(shí)施例13膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)是廣泛用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")的嚙齒類動(dòng)物模型并具有與人RA相同的組織病理學(xué)特征。通過(guò)免疫并用II型膠原的乳劑加強(qiáng)在DBA/1小鼠中誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎是多關(guān)節(jié)炎病，其特征在于小關(guān)節(jié)的炎癥和軟骨及骨的進(jìn)行性侵蝕(Trentham，D等人,/.Er/;.臉A146:857-858，1977)。目前，Lubberts等人(<S版謂加/雄，50:650-659，2004;引入本文)表明在鼠CIA的起始階段或在較晚階段施用的多克隆兔抗鼠IL-17抗體改善了關(guān)節(jié)炎的臨床病征。在CIA模型中，經(jīng)腹膜內(nèi)一次注射大鼠抗小鼠IL-17IgG2amAb(8mg/kgR&D，MAB421克隆50104.11)的小鼠比用16mg/kg對(duì)照大鼠IgG2a注射的小鼠顯示明顯較低的臨床分?jǐn)?shù)。急性期反應(yīng)物——C反應(yīng)蛋白(CRP)是RA患者中疾病活性的公認(rèn)指數(shù)。與CRP類似，鼠的血清淀粉狀蛋白(SAP)在鼠CIA模型中用作疾病指標(biāo)(Bliven，M.等人，^W/in'riscSW/^M/m他附，29:1131-1138，1986)。在用8mg/kg的抗鼠IL-17處理的動(dòng)物中，SAP水平顯著低于用對(duì)照抗體處理的那些動(dòng)物中的SAP水平。此外，臨床分?jǐn)?shù)的降低和SAP值與用作陽(yáng)性對(duì)照的抗小鼠IL-ip組(8mg/kg)的相當(dāng)。最后，與用對(duì)照抗體處理的小鼠相比，存在滑液炎癥(8mg/kg抗體)和骨吸收(16mg/kg抗體)的顯著減少?？稍贑IA模型中使用抗鼠IL-17抗體(例如，以0.1、1和8mg/kg)進(jìn)行劑量反應(yīng)研究。大鼠的抗小鼠IL-17抗體的臨床分?jǐn)?shù)顯示了劑量反應(yīng)性的趨勢(shì)?？墒褂帽景l(fā)明抗體在作為RA的模型的獼猴中進(jìn)行類似的測(cè)定。實(shí)施例14抗IL-17mAb的純化使用標(biāo)準(zhǔn)方法將表達(dá)本發(fā)明mAb的栽體穩(wěn)定整合到合適的宿主細(xì)胞中(例如，CHODG44(dhfr-)細(xì)胞(Chasin)或NSO細(xì)胞)并使用A蛋白親和柱進(jìn)行純化。簡(jiǎn)單而言，將澄清的條件培養(yǎng)基應(yīng)用到已經(jīng)用PBS(pH7.4)平衡過(guò)的5mlHiTraprA蛋白瓊脂糖FF柱(AmershamBiosciences)上。用5倍柱體積的平衡緩沖液以110cm/小時(shí)的流速洗滌柱子來(lái)洗掉非特異性結(jié)合組分。使用線性pH梯度(0.1M磷酸鈉緩沖液pH6.8至0.1M檸檬酸鈉緩沖液pH2.5)洗脫結(jié)合的抗體。收集洗脫液中主要的蛋白質(zhì)峰并用1MTris緩沖液(pH8.5)調(diào)整它的pH值至中性。使用10KVivaspin膜(Vivasciences)濃縮蛋白質(zhì)庫(kù)至1-2mg/ml并在4。C保存前無(wú)菌過(guò)濾(0.45,)。對(duì)于本發(fā)明mAb的大量制備，經(jīng)過(guò)三個(gè)順序?qū)游鲋?A蛋白，陰離子73交換，疏水作用層析)對(duì)無(wú)細(xì)胞濃縮物進(jìn)行純化。如通過(guò)分析大小排阻層析評(píng)估，經(jīng)這些層析步驟后mAb的純度大于99。/。。根據(jù)抗體濃度將mAb交換進(jìn)入如下列出的緩沖液中?；瘜W(xué)穩(wěn)定性結(jié)果表明優(yōu)選的pH在6.0和7.0之間(包括6.0和7.0);雖然對(duì)于20mg/ml的制備物，pH可在5.5和7.0之間(包括5.5和7.0，例如5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6,6、6.7、6.8、6.9或7.0)。對(duì)于凍干的產(chǎn)物，優(yōu)選卯-30mM(90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35或30mM或在30和卯mM之間的任何值)的氯化鈉濃度，而對(duì)于液體制劑(例如，經(jīng)皮下施用)，優(yōu)選100-150mM(100、110、120、130、140或150mM或在100和150mM之間的任何值)的氯化鈉濃度。然后將產(chǎn)物濃縮至約IO、20或25mg/ml(或者更高，30、40、50、60、70、80、卯、100、110、120、130、140、50mg/ml或更高)的終濃度并進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。過(guò)濾后的產(chǎn)物可立即在-70。C冰凍或凍干。對(duì)于穩(wěn)定凍干的制劑，抗體對(duì)凍干保護(hù)劑(lyoprotectant)(例如，蔗糖或海藻糖)1:2的最小重量比是必需的，但是液體制劑不需要。此外，加入0.02%表面活性劑(w/v)，即，聚山梨酯80用于溶液配制和溶液凍干。施用前，將凍干的物質(zhì)在注射用無(wú)菌水或無(wú)菌0,9%氯化鈉中重懸浮。表11mAb濃度緩沖液邁NaCl(mM)10mg/ml10mM檸檬酸鹽(鈉)6.030，50-15020mg/ml10mM檸檬酸鹽5.550-15020mg/ml10mM檸檬酸鹽6.050-15020mg/ml10mM檸檬酸鹽6.550-15020mg/ml10mM檸檬酸鹽7.050-15020mg/ml10mM組氨酸6.5150>50mg/ml10mM檸檬酸鹽5.550-150>50mg/ml10mM檸檬酸鹽6,050-150>50mg/ml10mM檸檬酸鹽6.550-150>50mg/ml10mM組氨酸6.5150實(shí)施例15體內(nèi)抗體的半衰期在雄性獼猴中經(jīng)靜脈內(nèi)或皮下給藥后確定本發(fā)明抗體(例如，mAb126和Ul[分別具有Fab126或121的IgG4Fc區(qū))的血清藥物動(dòng)力學(xué)。使用標(biāo)準(zhǔn)的抗原捕獲ELISA測(cè)定法來(lái)測(cè)定血清中抗體的濃度，在該測(cè)定中用人IL-17包被平板并使用抗IgG4二級(jí)抗體檢測(cè)結(jié)合的血清抗體。經(jīng)lmg/kg靜脈內(nèi)給藥后，mAbl26以6.5天的平均半衰期被清除，并且mAb121以約11天的平均半衰期被清除。經(jīng)lmg/kg皮下給藥后，mAb126具有10.3天的平均清除半衰期，并且mAb121具有13天的平均清除半衰期。實(shí)施例16腫瘤異種移植模型為建立肺瘤異種移植才莫型，其中利用該才莫型檢測(cè)本發(fā)明抗IL-17抗體的抗腫瘤活性，用Matrigel混合5百萬(wàn)HCT116結(jié)腸直腸癌細(xì)胞并經(jīng)皮下注射進(jìn)56周齡雌性無(wú)胸腺(nu/nu)小鼠(CharlesRiverlaboratories,Wilmington.MA)的左側(cè)腹中。每7天用對(duì)照抗體(例如，人IgG4和小鼠IgGl)、4mg/kg抗人IL-17、8mg/kg抗小鼠IL-17或4mg/kg抗人IL-17和8mg/kg抗小鼠IL-17的組合通過(guò)皮下注射處理小鼠4周。一級(jí)抗體施用在移植細(xì)胞前一天開(kāi)始。用測(cè)徑器每周兩次對(duì)肺瘤進(jìn)行測(cè)量且每周兩次監(jiān)測(cè)體重。在第34天從每只小鼠中收集血漿并根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(R&DSystem)使用KCELISA試劑盒測(cè)定KC水平。與對(duì)照IgG注射的小鼠相比，經(jīng)抗人IL-17抗體和抗小鼠IL-17抗體的組合處理的小鼠具有顯著減小的腫瘤體積。此外，用抗人IL-17抗體和抗小鼠IL-17抗體共同處理的小鼠具有顯著降低的血漿KC。用4mg/kg抗人IL-17抗體或8mg/kg抗小鼠IL-17抗體處理的小鼠在腫瘤體積和血漿KC水平上沒(méi)有顯示出顯著的降低。數(shù)據(jù)顯示在此處表12和13中。為了測(cè)定腫瘤中的IL-17水平，如在實(shí)施例9中描述的大量制備來(lái)自小鼠異種移植模型的腫瘤。對(duì)于蛋白質(zhì)測(cè)定，在聚丙烯96孔稀釋平板中用TPER+lXHalt以1:10稀釋腫瘤裂解物。通過(guò)使用CoomassiePlusProteinAssay(Pierce#23236)的微量滴定板方案測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。用TPER+Halt稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)(人IL-17DuoSetELISA，R+DSystems,Cat.#DY317;小鼠IL-17ELISA，R+DSystem,Cat.#421)使用來(lái)自R&DSystem的人和小鼠IL-17ELISA試劑盒來(lái)測(cè)定IL-17蛋白質(zhì)的水平。與H460肺腫瘤異種移植模型相比，在來(lái)自HCT116和HT29結(jié)腸腫瘤異種移植模型的腫瘤中人和小鼠IL-17增加了。表12腫瘤體積時(shí)間，天數(shù)(HCT-116細(xì)胞移才直后)大鼠IgGl+人IgG4同種型對(duì)照(平均值+Z-SE)抗小鼠IL-17+抗人IL-17(平均值+ASE)8101.4+/-6.791.5+/畫(huà)9.414149.2+/-9.2123.9+/畫(huà)16.217162.1+/-12.4134.6+/-14.720177.7+/-17.1152.8+/-18.724279.2+/畫(huà)22.8222.4+/畫(huà)35.428323.3+/-22.5244.6+/畫(huà)32.831405.8+/-33.4275.1+/-36.634537.7+/-50.7339.8+/-46.3使用LogVol，AR方法計(jì)算腫瘤體積表13移植后35天血漿中的KC趨化因子水平(n=10)組KC值的范圍，pg/mlKC的平均值，pg/ml(+/-SE)大鼠IgGl+人76.3—168.4112.5+/-10.0IgG4同種型對(duì)照抗小鼠IL-17+抗人1755.6—110.584.7+/-5.7平均KC差異百分比(抗IL-17組與同種型對(duì)照組比較)-24.7%權(quán)利要求1.抗IL-17單克隆抗體，其特異結(jié)合人IL-17和獼猴IL-17。2.抗IL-17單克隆抗體，其中所述抗體以低于7.0pM的Kd結(jié)合人IL畫(huà)17。3.權(quán)利要求2的抗體，其中所述抗體進(jìn)一步具有低于5xl(TSs"的解離速率常數(shù)或koff速率。4.權(quán)利要求l-3任何一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體特異結(jié)合人IL-17的非線性表位，其中所述表位包含具有SEQIDNO:276的多肽。5.權(quán)利要求1至4任何一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體具有低于lnM的IC50。6.抗IL-17單克隆抗體，其中所述抗體與含有兩個(gè)多肽的抗IL-17抗體竟?fàn)幗Y(jié)合人IL-17,所述兩個(gè)多肽具有在SEQIDNO:241和SEQIDNO:118中顯示的氨基餅列。7.包含重鏈可變區(qū)(HCVR)的抗IL-17單克隆抗體，所述重鏈可變區(qū)包含具有選自SEQIDNO:56-121的氨基酸序列的多肽。8.包含輕鏈可變區(qū)(LCVR)的抗IL-17單克隆抗體，所述輕鏈可變區(qū)包含具有選自178-243的氨基^列的多肽。9.權(quán)利要求l-7任何一項(xiàng)的抗體，其還包含LCVR,所述LCVR包含具有選自178-243的氨基酸序列的多肽。10.抗IL-17抗體，其包含具有SEQIDNO:247的CDRL1多肽、具有SEQIDNO:248的CDRL2多肽、具有SEQIDNO:249的CDRL3多肽、具有SEQIDNO:244的CDRHl多肽、具有SEQIDNO:245的CDRH2多肽和具有SEQIDNO:246的CDRH3多肽。11.權(quán)利要求1至10任何一項(xiàng)的單克隆抗體，其中所述抗體為嵌合、人源化或完全人的抗體或其抗原結(jié)合部分。12.權(quán)利要求l至ll任何一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體為全長(zhǎng)抗體、基本上完整的抗體、Fab片段、F(ab，)2片段或單鏈Fv片段。13，權(quán)利要求l至ll任何一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體還包含選自IgG!、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM和IgD的重鏈恒定區(qū)。14.包含權(quán)利要求1至13任何一項(xiàng)的抗體的組合物。15.權(quán)利要求14的組合物，其還包含藥學(xué)上可接受的載體。16.權(quán)利要求1至13任何一項(xiàng)的抗體，其用作藥物。17.治療有效量的權(quán)利要求1至13任何一項(xiàng)的抗體在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療選自呼吸道炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨侵蝕、腹膜內(nèi)膿腫和粘連、炎性腸病、同種異體移植排斥、牛皮癬、癌癥、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化、多發(fā)性硬化和哞喘的一種或多種疾病。全文摘要鑒定了抗IL-17抗體，其特征在于對(duì)人具有高親和力和低解離速率。本發(fā)明抗體可以是嵌合、人源化或完全的人抗體、抗體的免疫連接物或其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明抗體可特別用于治療自身免疫、炎性、細(xì)胞增殖和發(fā)育疾病。文檔編號(hào)C07K16/24GK101326195SQ200680046605公開(kāi)日2008年12月17日申請(qǐng)日期2006年12月5日優(yōu)先權(quán)日2005年12月13日發(fā)明者A·G·維爾納,B·艾倫,C-K·喬,J·W·泰特羅爾特,J·盧,K·額,玲劉,黃立華申請(qǐng)人:伊萊利利公司