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一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法與流程

文檔序號(hào):12644519閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于:(a)挑選大鼠,按照大鼠的體重,用不同的方式和劑量腹腔注射兩種誘導(dǎo)劑以確定最佳誘導(dǎo)方法;(b)處死大鼠,在無菌條件下,除去肝中殘血,取出肝臟;(c)在無菌條件下,按一定的肝濕重比加入預(yù)冷的儲(chǔ)存緩沖液中,充分剪碎,在冰浴中勻漿;(d)將勻漿好的組織液低速離心,收集上清和沉淀,并將上清高速離心收集上清,即首次獲得大鼠肝S9;(e)將收集的沉淀,按一定的比重加入預(yù)冷的儲(chǔ)存緩沖液,在無菌和冰浴條件下充分研磨并在不同條件下超聲破碎細(xì)胞,將其在高速離心收集上清,即再次獲得大鼠肝S9;(f)BCA法和CO還原法檢測(cè)不同條件下大鼠肝S9蛋白以及酶含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的大鼠為SD雄性大鼠,體重為230±20g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的兩種誘導(dǎo)劑為苯巴比妥鈉(溶于PBS)和β-奈黃酮(溶于玉米油),所述的最佳誘導(dǎo)方法為第1d大鼠腹腔注射劑量為30mg/kg的苯巴比妥鈉和劑量為40mg/kg的β-萘黃酮,第2d注射劑量為80mg/kg的β-萘黃酮,第3d注射劑量為60mg/kg的苯巴比妥鈉,第4d注射劑量為80mg/kg的β-萘黃酮,第5d注射苯巴比妥鈉60mg/kg。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的步驟b中除去肝中殘血是將事先冰浴的肝素液經(jīng)肝門靜脈灌洗除去殘血,所述的肝素液為10mM PBS(0.15M KCl,pH 7.4),20%肝素(2500U/mL)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的步驟c中按一定的肝濕重比加入預(yù)冷的儲(chǔ)存緩沖液,其比例為 1∶2-4,所述的儲(chǔ)存緩沖液為0.15M KCl(pH7.4)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的步驟d中勻漿好的組織液低速離心,其離心速度為1500rpm/min,時(shí)間5min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導(dǎo)及制備方法,其特征在于,所述的步驟e中按一定比重加入預(yù)冷的儲(chǔ)存緩沖液,其比例為1∶2,所述的在不同冰浴超聲條件下破碎細(xì)胞,其超聲條件分別為34w/50w/65w超聲功率下,超聲10s,間隔5s的條件下,超聲20次。

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