1.一種高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體，其核苷酸序列如SEQ ID No 64所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體，其特征在于，所述多位點(diǎn)突變體編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID No 65所示。
3.如權(quán)利要求1所述的L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)DNA分子重排
通過基因合成方法合成來源于淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌的L-谷氨酸氧化酶基因，以合成的L-谷氨酸氧化酶基因?yàn)槟０?，擴(kuò)增L-谷氨酸氧化酶基因，回收1974bp的基因片段，以DNase I進(jìn)行不完全酶解，并回收小片段；
再，對(duì)回收的酶解片段進(jìn)行無(wú)引物PCR擴(kuò)增，然后以無(wú)引物PCR產(chǎn)物為模板，SDLG1、SDLG49為引物擴(kuò)增重排L-谷氨酸氧化酶基因片段，并回收1974bp基因片段；
2)高比活L-谷氨酸氧化酶基因高通量篩選
將回收的重排L-谷氨酸氧化酶基因片段經(jīng)BamHI和Sac I雙酶切后，構(gòu)建入原核表達(dá)載體pG251啟動(dòng)子和t1t2終止子之間，電擊法轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株DH5α獲得突變體表達(dá)文庫(kù)，而后進(jìn)行質(zhì)粒提??；將提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，涂板于含有氨芐青霉素抗生素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得抗性轉(zhuǎn)化子；
以40個(gè)抗性轉(zhuǎn)化菌落為一個(gè)單元，挑入40孔細(xì)菌培養(yǎng)板；利用溶菌酶破碎細(xì)胞，加入酶測(cè)定液，挑取顯黃色的加樣孔，對(duì)該加樣孔中的40個(gè)單菌進(jìn)行再一輪的篩選，并對(duì)篩選出的突變單菌進(jìn)行比活以及對(duì)谷氨酸底物的專一性測(cè)定，從中挑選5個(gè)比活性高且對(duì)谷氨酸底物專一的突變體；
對(duì)上述5個(gè)突變基因進(jìn)行DNA序列分析，顯示其氨基酸突變有9個(gè)位點(diǎn)即D32A，H54P，Y144F，G155D，T166K，T319K，A362V，S567F，K600R；
3)多位點(diǎn)突變
以L-谷氨酸氧化酶基因?yàn)槟０妫瑢⑸鲜?個(gè)位點(diǎn)同時(shí)突變即D32A，H54P，Y144F，G155D，T166K，T319K，A362V，S567F，K600R，獲得所述高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體的制備方法，其 特征在于，步驟(3)中，以氨基酸突變3個(gè)位點(diǎn)：D32A、Y144F、K600R的L-谷氨酸氧化酶基因?yàn)槟０?，將其氨基酸?4、155、166、319、362、567位進(jìn)行突變，完成9個(gè)位點(diǎn)同時(shí)突變即D32A，H54P，Y144F，G155D，T166K，T319K，A362V，S567F，K600R，獲得所述高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體；所述突變所用引物如下：
H54P突變引物：
54Z：GCCGCCTCGGCCCCACCCCCCA
54F：TGGGGGGTGG GGCCGAGGCG GC
G155D突變引物：
155Z：TGGGCCCCTCCACCGGCAGCGAC
155F:GTCGCTGCCG GTGGAGGGGC CCA
T166K突變引物：
166Z：CGTACCCCCGGTGACGTACAAC
166F：GTTGTACGTC ACCGGGGGTACG
T319R突變引物：
319Z：CGCAGCGACATCAACCCCAAG
319F:CTTGGGGTTGATGTCGCTGCG
A362V突變引物：
362Z：ACGACCCCAGCCGCGACGTC
362F：GACGTCGCGG CTGGGGTCGT
S569F突變引物：
569Z：GACGCCGCGCGCTGGGACTTG
569F:CAAGTCCCAG CGCGCGGCGTC。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的高比活L-谷氨酸氧化酶基因多位點(diǎn)突變體在檢測(cè)食物中L-谷氨酸含量的應(yīng)用。