本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是本發(fā)明涉及新型具有抗炎活性的7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酰-2-氨基甲基嘧啶(9a-g)的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

炎癥是一種保護(hù)性的防御反應(yīng)，也是導(dǎo)致許多重要的人類疾病的共同通路，并參與人體感染、腫瘤、心腦血管疾病、阿爾茨海默氏病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病、過敏性疾病、精神病等其他重要疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。在臨床上，抗炎藥物排在常用藥物第二位，僅次于抗感染藥，典型的反應(yīng)是紅、腫、熱、痛以及功能障礙等。

非甾體類抗炎藥(NSAIDS)和選擇性環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑是用于治療急性或慢性炎癥疾病的傳統(tǒng)藥物，但是研究發(fā)現(xiàn)NSAIDS可誘發(fā)嚴(yán)重的胃腸道不良反應(yīng)，包括胃腸道出血和誘發(fā)潰瘍，而選擇性COX-2抑制劑可增加患者出現(xiàn)心肌梗死，心臟猝死和腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)。因此，開發(fā)新的高效、低毒、的抗炎藥物一直是新藥研究的重要課題之一，而環(huán)氧合酶和脂氧合酶COX/5-LOX雙重抑制劑更是研究的重點(diǎn)。

香豆素(Coumarin)是一類具有苯并α吡喃酮母核的天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，同時(shí)也是COX/5-LOX雙重抑制劑。文獻(xiàn)中曾公開報(bào)道過香豆素在10μmol/kg劑量下顯示良好的抗炎活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明披露一種通式(I)的化合物：

其中在通式(I)中AA選自Ala，Leu，Val，Met，Phe，Tyr或者Asp(OBzl)。

本發(fā)明得到的香豆素衍生物分別是：

9a：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9b：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰亮氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9c：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰纈氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9d：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰蛋氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9e：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰苯丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9f：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰酪氨酰-2-氨基甲基嘧啶

9g：7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰天冬氨酰芐酯-2-氨基甲基嘧啶

本發(fā)明還涉及通式(I)的制備方法，該方法包括以下步驟：

將2，4-二羥基苯甲醛在哌啶催化下與丙二酸二乙酯縮合生成7-羥基香豆素-3-羧酸乙酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-羧酸乙酯在濃鹽酸作用下生成7-羥基香豆素-3-羧酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-羧酸與β-氨基酸-OBzl偶聯(lián)得到7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸芐酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸芐酯在鈀碳的催化下氫解生成7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸與L-氨基酸芐酯偶聯(lián)得到7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酸芐酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酸芐酯在鈀碳的催化下氫解生成7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酸與2-氨基甲基嘧啶偶聯(lián)得到7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酰-2-氨基甲基嘧啶，

將叔丁氧酰氨基酸與2-氨基甲基嘧啶偶聯(lián)得到叔丁氧酰氨酰-2-氨基甲基嘧啶，

得到的所述叔丁氧酰氨酰-2-氨基甲基嘧啶在HCl/EtOAc(4N)溶液中生成N-氨酰-2-氨基甲基嘧啶，

將N-氨酰-2-氨基甲基嘧啶與7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸偶聯(lián)得到7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰氨基酰-2-氨基甲基嘧啶。

本發(fā)明還進(jìn)一步涉及運(yùn)用二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳朵腫脹模型評價(jià)它們的抗炎作用。因而本發(fā)明公開了新型2-氨基甲基嘧啶和氨基酸修飾的7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙酸作為抗炎藥物的臨床應(yīng)用前景。

通過本發(fā)明的進(jìn)一步研究，本發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，以7-香豆素作為先導(dǎo)化合物，以β-氨基丙酸修飾后的7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酸為母核，以氨基酸為連接臂，與另一個(gè)具有較強(qiáng)抗炎活性的COX-2抑制劑2-氨基甲基嘧啶拼合在一起，不僅可以減少臨床上現(xiàn)有化合物的毒副作用，同時(shí)可以改善先導(dǎo)化合物香豆素以及2-氨基甲基嘧啶在有機(jī)溶劑和水溶液中溶解性不好的缺點(diǎn)，提高了化合物的生物利用度，極大地降低化合物的口服劑量，增強(qiáng)化合物的的抗炎活性。通過這種修飾，獲得具有更好抗炎活性的化合物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1表示7-香豆素-3-甲酰-β-丙酸的合成路線，其中，i)哌啶，乙二酸二乙酯；ii)濃鹽酸，H₂O；iii)β-氨基丙酸-OBzl，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)1-羥基苯并三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF；iv)5％Pd，H₂，甲醇。

圖2表示通式(I)香豆素衍生物(9a-g)的合成路線，其中，v)Boc-AA-OH，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，1-羥基苯并三唑 (HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF；vi)4N HCl/EtOAc；vii)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，1-羥基苯并三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。

實(shí)施例1制備7-羥基香豆素-3-甲酸乙酯(2)

在90℃溫度下，稱取2，4-二羥基苯甲醛(0.500g，3.60mmol)和量取丙二酸二乙酯(0.70ml，4.00mmol)置于100ml茄瓶中，溶解在95％乙醇(20ml)中，此時(shí)溶液顏色為紅棕色透明液體；再加入哌啶(0.40ml，4.00mmol)，溶液表面泛綠色光，開始回流，反應(yīng)約6h后，溶液變?yōu)樯钭厣?。冷卻至室溫，減壓濃縮至紅色粘稠狀，乙醇重結(jié)晶，過濾得到化合物3(0.758g，3.24mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為90％。ESI-MS m/z 233(M-1)。

實(shí)施例2制備7-羥基香豆素-3-羧酸(3)

在90℃溫度下，稱取化合物3(2.00g，8.55mmol)溶解在水(20ml)中，加入濃鹽酸(6ml)后，回流8h。將反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，水洗，得到化合物4(1.32g，6.41mmol)，性狀為淡紅色固體，產(chǎn)率為75％。ESI-MS m/z 205(M-1)。

實(shí)施例3制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙酸芐酯(4)

稱取3(1.00g，4.85mmol)置于100ml茄瓶中，冰浴冷卻條件下加入四氫呋喃(30ml)，依次加入N-羥基苯并三唑(HOBt)(0.720g，5.33mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(1.02g，5.33mmol)，反應(yīng)30分鐘。加入用四氫呋喃(20ml)溶解的化合物Tos·β-氨基丙酸-OBzl(1.87g，5.33mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.60ml)調(diào)pH值至8。反應(yīng)全程進(jìn)行TLC檢測，約8小時(shí)反應(yīng)完全。過濾，減壓濃縮至干，加入乙酸乙酯(100ml)使殘余物溶解，將溶液加入到250ml的分液漏斗中，依次使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)、5％硫酸氫鉀水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)，將得到的三種水溶液再使用乙酸乙酯分別進(jìn)行反萃取，合并各次的乙酸乙酯層，加入無水Na₂SO₄干燥約30分鐘，過濾，將濾液減壓濃縮至干，使用硅膠柱層析對殘余物進(jìn)行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)，得到中 間體化合物4(1.07g，2.93mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為55％。ESI-MS m/z 364(M-1)。

實(shí)施例4制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙酸(5)

在50ml茄瓶中加入4(1.29g，3.29mmol)，加入甲醇(20ml)溶解，再加入Pd/C(5％)(65mg)，抽真空后通入H₂進(jìn)行室溫下反應(yīng)過夜，經(jīng)TLC板監(jiān)測，反應(yīng)完全。過濾，減壓濃縮至干，得到化合物5(620mg，2.24mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為68％。ESI-MS m/z 276(M-1)。

實(shí)施例5制備叔丁氧酰丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7a)

稱取Boc-A-OH(300mg，3.03mmol)置于100ml茄瓶中，加入四氫呋喃(40ml)溶解，冰浴下依次加入N-羥基苯并三唑(HOBt)(405g，3.03mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(573mg，3.03mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.50ml)調(diào)節(jié)PH為8，反應(yīng)30分鐘。稱取2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(401mg，2.50mmol)置于小燒杯中，加入四氫呋喃(10ml)溶解，同時(shí)滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.20ml)調(diào)節(jié)PH為8。將小燒杯中的溶液加入茄瓶中，室溫反應(yīng)，經(jīng)TLC監(jiān)測反應(yīng)，約10小時(shí)反應(yīng)完全。將反應(yīng)液減壓濃縮至干，加入50ml乙酸乙酯進(jìn)行萃取，依次使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)、5％硫酸氫鉀水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)，將得到的三種水溶液再使用乙酸乙酯反萃取，合并各次的乙酸乙酯層，加入無水Na₂SO₄干燥約30分鐘，過濾，將濾液減壓濃縮至干，使用硅膠柱層析對殘余物進(jìn)行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)，得到化合物7a(560mg，2.00mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為＝72％。ESI-MS m/z 281(M+1)。

實(shí)施例6制備叔丁氧酰亮氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7b)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-L-OH(500mg，2.16mmol)，HOBt(292mg，2.16mmol)和EDC·HCl(413g，2.16mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(287mg，1.97mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7b(460mg，1.43mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為70％。ESI-MS m/z 323(M+1)。

實(shí)施例7制備叔丁氧酰纈氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7c)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-V-OH(500mg，2.30mmol)，HOBt(311mg，2.30mmol)和EDC·HCl(440mg，2.30mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(305mg，2.09 mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7c(487mg，1.58mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為75％。ESI-MS m/z 309(M+1)。

實(shí)施例8制備叔丁氧酰蛋氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7d)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-M-OH(500mg，2.01mmol)，HOBt(270mg，2.00mmol)和EDC·HCl(382mg，2.00mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(266mg，1.83mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7d(440mg，1.29mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為70％。ESI-MS m/z 341(M+1)。

實(shí)施例9制備叔丁氧酰苯丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7e)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-F-OH(500mg，1.89mmol)，HOBt(255mg，1.88mmol)和EDC·HCl(360mg，1.88mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(250mg，1.72mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7e(320mg，0.90mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為52％。ESI-MS m/z 357(M+1)。

實(shí)施例10制備叔丁氧酰酪氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7f)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-Y-OH(500mg，1.78mmol)，HOBt(240mg，1.78mmol)和EDC·HCl(340mg，1.78mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(236mg，1.62mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7f(379mg，1.02mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為62％。ESI-MS m/z 373(M+1)。

實(shí)施例11制備叔丁氧酰芐酯天冬氨酰-2-氨基甲基嘧啶(7g)

按照實(shí)施例5的操作，將Boc-D(OBzl)-OH(500mg，1.55mmol)，HOBt(209mg，1.55mmol)和EDC·HCl(296mg，1.55mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(205mg，1.41mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7g(380mg，0.92mmol)，性狀為無色油狀物，產(chǎn)率為65％。ESI-MS m/z 415(M+1)。

實(shí)施例12制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9a)

在100ml茄瓶中加入7a(742mg，2.65mmol)，加入4N HCl/EA(30ml)，冰浴下反應(yīng)，TLC監(jiān)測，反應(yīng)約3小時(shí)完全。減壓抽干溶劑，得到化合物8a(286mg，1.59mmol)，將其溶解于四氫呋喃(40ml)中，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.30ml)調(diào)節(jié)PH為8。稱取5(400mg，1.44mmol)溶解于四氫呋喃(30ml)中，冰浴下依次加入N-羥基苯并三唑(HOBt)(215mg，1.59mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(303mg，1.59mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.30ml)調(diào)節(jié)PH為8，反應(yīng)30分鐘。將小燒杯中的溶液加入茄瓶中，室溫反應(yīng)，經(jīng) TLC監(jiān)測反應(yīng)，約8h反應(yīng)完全。將反應(yīng)液減壓濃縮至干，使用硅膠柱層析對殘余物進(jìn)行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)，得到目標(biāo)化合物9a(334mg，0.76mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝53％。Mp 252.6-254.4℃；[α]_D²⁵＝-12.1(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3287，2875，1700，1633，1567，1526，1439，1410，1365，1317，1216，1138，795，639cm^-1；ESI-MS(m/e)438[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.05(s，1H，O-H)，8.81(t，J＝6.0Hz，1H，N-H)，8.78(s，1H，CH)，8.73(d，J＝5.1Hz，2H，CH，CH)，8.35(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.19(d，J＝7.8Hz，1H，N-H)，7.80(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.35(t，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.60(d，J＝5.7Hz，2H，CH₂)，4.41(m，1H，CH)，3.56-3.49(m，2H，CH₂)，2.43(t，J＝6.6Hz，2H，CH₂)，1.24(d，J＝6.9Hz，3H，CH₃)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 172.81，170.80，167.13，164.07，161.89，161.34，157.75(2C)，156.71，148.50，132.44，120.21，114.76，113.99，111.55，102.23，48.48，45.20，35.97，35.30，18.73。

實(shí)施例13制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰亮氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9b)

按照實(shí)施例12的操作，7b(708mg，2.20mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8b(292mg，1.32mmol)，與HOBt(195mg，1.45mmol)，EDC·HCl(276mg，1.45mmol)和5(400mg，1.44mmol)縮合得到9b(221mg，0.46mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝35％。Mp 215.3-216.8℃；[α]_D²⁵＝-24.4(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3296，2959，1700，1635，1566，1530，1437，1416，1366，1321，1214，1144，794，637cm^-1；ESI-MS(m/e)480[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.09(s，1H，O-H)，8.80(m，2H，N-H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.38(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.13(d，J＝8.4Hz，1H，N-H)，7.82(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.35(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.42(m，3H，CH₂，CH)，3.53(m，2H，CH₂)，2.42(m，2H，CH₂)，1.64-1.39(m，3H，CH₂，CH)，0.82(t，J＝6.0Hz，6H，CH₃，CH₃)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 172.61，170.93，167.16，164.14，161.88，161.33，157.71(2C)，156.73，148.48，132.43，120.19，114.80，113.95，111.57，102.24，51.33，45.27，41.35，36.08，35.40，24.65，23.49，21.98。

實(shí)施例14制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰纈氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9c)

按照實(shí)施例12的操作，7c(611mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8c(248mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9c(243mg，0.52mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝48％。Mp 249.6-251.3℃；[α]_D²⁵＝-10.2(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3290，2968，1702，1636，1568，1527，1453，1370，1218，1142，794，639cm^-1；ESI-MS(m/e)466[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.07(s，1H，O-H)，8.83(t，J＝ 5.7Hz，1H，N-H)，8.79(s，1H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.46(t，J＝5.4Hz，1H，N-H)，7.99(d，J＝9.0Hz，1H，N-H)，7.82(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.79(d，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，4.46(t，J＝5.4Hz，2H，CH₂)，4.30(m，1H，CH)，3.52(m，2H，CH₂)，2.46(m，2H，CH₂)，2.01(m，2H，CH₂)，0.86(t，J＝6.9Hz，6H，CH₃，CH₃)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 171.59，171.08，167.25，164.09，161.85，161.33，157.71(2C)，156.72，148.52，132.45，120.21，114.77，113.96，111.55，102.24，58.01，45.30，36.11，35.30，30.94，19.71，18.44。

實(shí)施例15制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰蛋氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9d)

按照實(shí)施例12的操作，7d(440mg，1.33mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8d(183mg，0.80mmol)，與HOBt(107mg，0.80mmol)，EDC·HCl(152mg，0.80mmol)和5(200mg，0.72mmol)縮合得到9d(155mg，0.31mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝43％。Mp 219.0-221.2℃；[α]_D²⁵＝-11.9(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3279，2914，1694，1636，1515，1532，1450，1372，1219，1144，794，639cm^-1；ESI-MS(m/e)498[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.06(s，1H，O-H)，8.81(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.78(s，1H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.43(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.20(d，J＝8.1Hz，1H，N-H)，7.81(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.55-4.38(m，3H，CH₂，CH)，3.53(m，2H，CH₂)，2.47(m，2H，CH₂)，2.00(s，3H，CH₃)，1.97-1.78(m，2H，CH₂)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 171.72，171.15，167.13，164.08，161.91，161.34，157.72(2C)，156.73，148.48，132.43，120.22，114.77，114.01，111.56，102.24，52.27，45.25，36.04，35.39，32.41，30.06，15.06。

實(shí)施例16制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰苯丙氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9e)

按照實(shí)施例12的操作，7e(706mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8e(305mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9e(319mg，0.62mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝57％。Mp 194.3-195.7℃；[α]_D²⁵＝-11.3(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3270，2917，1694，1639，1614，1544，1452，1416，1375，1225，1149，1118，850，794，640cm^-1；ESI-MS(m/e)514[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.04(s，1H，O-H)，8.76-8.71(m，4H，N-H，CH，CH，CH)，8.52(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.23(d，J＝8.7Hz，1H，N-H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.37(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，7.26-7.17(m，4H，Ar-H)，7.08(m，1H，Ar-H)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.79(d，J＝2.4Hz，1H，Ar-H)，4.63(m，1H，CH)，4.48(d，J＝6.0Hz，2H，CH₂)，3.42(m，2H，CH₂)，3.18-2.73(m，2H，CH₂)，2.35(m，2H，CH₂)；¹³C-NMR(75 MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 171.76，170.90，167.09，164.07，161.84，161.25，157.76(2C)，156.72，148.43，138.51，132.43，129.59(2C)，128.38(2C)，126.49，120.24，114.76，114.03，111.55，102.23，54.26，45.33，38.08，35.93，35.29。

實(shí)施例17制各7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰酪氨酰-2-氨基甲基嘧啶(9f)

按照實(shí)施例12的操作，7f(738mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8f(324mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9f(244mg，0.46mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝43％。Mp257.8-259.4℃；[α]_D²⁵＝-11.2(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3285，2982，1702，1625，1543，1516，1442，1419，1370，1267，1216，1149，966，794，636cm^-1；ESI-MS(m/e)530[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.04(s，1H，O-H)，9.11(s，1H，O-H)，8.77(m，2H，N-H，CH)，8.74(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.46(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.16(d，J＝8.4Hz，1H，N-H)，7.80(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，6.87(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.59(d，J＝8.1Hz，2H，Ar-H)，4.54(m，1H，CH)，4.54(m，1H，CH)，4.47(d，J＝5.7Hz，2H，CH₂)，3.43(m，2H，CH₂)，3.43(m，2H，CH₂)，3.00-2.94(m，2H，CH₂)，2.35(m，2H，CH₂)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 171.87，170.87，167.10，164.04，161.87，161.29，157.75(2C)，156.73，156.13，148.46，132.43，130.51(2C)，128.51，120.23，115.25(2C)，114.73，114.01，111.56，102.24，54.64，45.30，37.32，35.97，35.31。

實(shí)施例18制備7-羥基香豆素-3-甲酰-β-丙氨酰天冬氨酰芐酯-2-氨基甲基嘧啶(9g)

按照實(shí)施例12的操作，7g(821mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8g(374mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9g(241mg，0.42mmol)，性狀為淡黃色固體，產(chǎn)率為＝39％。Mp 213.7-215.5℃；[α]_D²⁵＝-16.1(c＝0.10，CH₃OH)；IR(KBr)：3287，2942，1706，1647，1616，1570，1525，1425，1367，1326，1217，1178，1137，822，793，637cm^-1；ESI-MS(m/e)530[M-H]^-；ESI-MS(m/e)572[M-H]^-；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 11.08(s，1H，O-H)，8.82(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.76(s，1H，CH)，8.72(d，J＝5.1Hz，2H，CH，CH)，8.41(d，J＝8.1Hz，1H，N-H)，8.34(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，7.79(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.37-7.28(m，6H，Ar-H，CH)，6.87(dd，J₁＝8.7Hz，J₂＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.77(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，5.06(s，2H，CH₂)，4.82(m，1H，CH)，4.45(t，J＝6.0Hz，2H，CH₂)，3.60-3.50(m，2H，CH₂)，2.91-2.59(m，2H，CH₂)，2.44(m，2H，CH₂)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)：δ/ppm 171.28，170.85，170.52，166.84，164.07，161.96，161.30，157.72(2C)，156.71， 148.41，136.52，132.40，128.79(2C)，128.35，128.23(2C)，120.19，114.77，114.07，111.04，102.24，66.06，49.72，45.37，36.72，36.00，35.48。

實(shí)驗(yàn)例1抗炎作用實(shí)驗(yàn)

1)實(shí)驗(yàn)方法

18-22g ICR雄性小鼠隨機(jī)分為空白對照組，阿司匹林陽性藥組，受試化合物給藥組，小鼠使用前靜息1天，操作間保持室內(nèi)溫度22℃，每組小鼠12只。一次性給藥30分鐘后往小白鼠的左耳外廓涂二甲苯(0.03mL)，2小時(shí)后將小鼠用乙醚麻醉之后頸椎脫臼處死。將小鼠的左，右耳剪下，用直徑7mm的打孔器在兩耳的相同位置，取圓形耳片，分別稱重，求出兩圓耳片的重量差作為腫脹度。腫脹度＝左耳圓片重量-右耳圓片重量，抑制率(％)＝(空白組腫脹度-受試化合物腫脹度)/空白組腫脹度。

2)給藥方法和劑量

給藥方式為灌胃給藥。空白對照：0.5％的CMC，給藥劑量為0.2mL/20g；陽性對照：阿司匹林，給藥劑量為1.11mmol/kg；受試化合物的給藥劑量為1umol/kg和0.1umol/kg.

3)統(tǒng)計(jì)方法

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用t檢驗(yàn)和方差分析，腫脹度以表示。

4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果列入表1。

由表1可以看出，給藥劑量在1μmol/kg時(shí)，受試化合物除9a，9g外，其余6個(gè)目標(biāo)化合物都有顯著的抗炎活性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)；給藥劑量在0.1μmol/kg時(shí)，9e和9f仍有顯著的抗炎活性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)，與文獻(xiàn)報(bào)道中的母核香豆素在10μmol/kg下的抗炎活性(抑制率為30.2％)相當(dāng)，說明化合物9e和9f的有效劑量低達(dá)0.1μmol/kg，這個(gè)有效劑量比文獻(xiàn)中曾經(jīng)公開的母核香豆素的有效劑量10μmol/kg低100倍。

表1二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳朵炎癥抑制活性

n＝12。

a)與空白組(CMC)相比，P＜0.05；

b)與空白組(CMC)相比，P＞0.05。