本發(fā)明涉及生物化學檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物及其制備方法和應用。

背景技術(shù)：

隨著國家經(jīng)濟的快速發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，個人身體健康的實時監(jiān)測、疾病的預防和治療逐漸成為人們更加關(guān)注的民生問題。相對于傳統(tǒng)的體外化學檢驗的延遲性和放射線在線檢測的危害性，熒光在線顯像技術(shù)以其高效、綠色、實時性強的優(yōu)勢漸漸走入人們的視野，被廣泛應用于細胞免疫學、微生物學、分子生物學、遺傳學、神經(jīng)生物學、病理學、腫瘤學、臨床檢驗學、醫(yī)學、植物學等方面的科研和民生等領(lǐng)域。

熒光顯像技術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)就是熒光物質(zhì)作為標記探針(或染色劑)的選擇。理想的探針分子通過物理或化學作用，特異性吸附在特定的細胞和組織上，在低能量光學輻照下實現(xiàn)二維或三維的成像，通過與熒光顏色、強度和分布情況來判斷細胞或組織的健康情況。與普通的化學染色相比，熒光染色的靈敏度要高出100-1000倍，而且通過適當?shù)墓δ苄揎椉纯蓪崿F(xiàn)對活體的在線分析。

脂滴是細胞內(nèi)中性脂的主要貯存場所，廣泛存在于細菌、酵母、植物、昆蟲以及動物細胞中。脂滴的大小差別很大，直徑從40nm至100um不等。在醫(yī)療、健康領(lǐng)域，脂滴一直被認為是一種類似于糖原的顆粒，只是用來貯存能量，當細胞需要能量時，用來供給能量，是一個“惰性”的細胞內(nèi)含物，因而脂滴在很長一段時間內(nèi)并未受到人們的重視。但是，最新的研究表明，脂滴并非細胞內(nèi)一個簡單的能量貯存器，而是一個復雜、活動旺盛、動態(tài) 變化的多功能細胞器。脂滴能夠沿著細胞骨架運動，并與其它細胞器相互作用，可能在脂類代謝與存儲、膜轉(zhuǎn)運、蛋白降解，以及信號傳導過程中起著重要的作用。另外，研究還表明，多種代謝性疾病，如肥胖、脂肪肝、心血管疾病及糖尿病、中性脂貯存性疾病和Niemann Pick C疾病，往往都伴隨著脂質(zhì)貯存的異常。因此，關(guān)于脂滴的生物學研究日益受到人們的重視。

除了在健康領(lǐng)域的應用外，高脂滴含量低等植物的篩選在解決能源危機領(lǐng)域，逐步受到關(guān)注。在大部分海洋生物，如數(shù)億萬計的藻類體內(nèi)也含有大量的脂滴結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)與應用類似于“石油”，如果將其進行規(guī)?；鲞x育，將很容易地、快速地實現(xiàn)將自然界的無機能源轉(zhuǎn)化為有機產(chǎn)物，這在解決日益鄰近的能源危機上具有極其重要的意義。如何篩選出脂滴含量較高的藻類進行培育，也是目前相關(guān)研究人員更加關(guān)注的問題。

分子熒光探針，作為人類較為成熟研究微觀世界的有效工具，也逐步被應用在細胞細胞脂滴的結(jié)構(gòu)與生理過程研究。利用暗場下，探針分子對細胞亞結(jié)構(gòu)的特異性的識別能力和熒光性質(zhì)，直觀地觀測到各種生理活動和過程中脂滴形貌、運動和分解等過程。

從結(jié)構(gòu)上分析，脂滴由磷脂單分子層及中性脂構(gòu)成的疏水核心構(gòu)成，并且表面分布有很多蛋白。相對于細胞內(nèi)大部分親水的環(huán)境而言，脂滴是相對較為疏水的油性區(qū)域，所以，很多脂溶性的熒光探針都可以對細胞脂滴進行標記和研究。但是，此類探針必須滿足三個基本條件，才能成為與目前成熟的脂滴研究相比較。第一，該類熒光探針是否可以自由出入細胞：雖然納米級別的包覆技術(shù)減少了對探針結(jié)構(gòu)的選擇性，但是大規(guī)模應用下的成本升高也是個值得關(guān)注的問題，所以，自身能夠進出的細胞的探針結(jié)構(gòu)顯得更具優(yōu)勢；第二，熒光探針的選擇性：并不是所有脂溶性探針都可以對脂滴進行識別，這可能與脂滴核心外有一層單層磷脂分子及各種蛋白結(jié)構(gòu)有關(guān)；第三，熒光探針的開關(guān)比調(diào)節(jié)：大部分性能優(yōu)異的熒光探針都是采用“點亮”對脂滴客體進行標記的，而脂滴處的有機探針富集通常會造成熒光強度的衰減，從而很難實現(xiàn)高分辨的成像。其中，第三點成為困擾該 類探針發(fā)展的主要問題。

2001年，唐本忠院士基于其發(fā)現(xiàn)的1-甲基-1,2,3,4,5-五苯基噻咯(MPPS)在乙腈溶液中不發(fā)光，而在聚集后而產(chǎn)生強烈的熒光的“反常”現(xiàn)象，提出“聚集誘導發(fā)光(AIE)”的新觀念，通過“分子內(nèi)旋轉(zhuǎn)受限(RIR)”的工作機理是很好的解釋了這種現(xiàn)象產(chǎn)生的，而且已得到諸多實驗結(jié)果和理論計算的支持，發(fā)展了一個貼有“中國牌”的、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的材料和理論體系。AIE類材料解決了傳統(tǒng)的芳香環(huán)熒光生色團在水溶性溶劑中聚集猝滅熒光問題，在生理緩沖溶液或水介質(zhì)中能夠?qū)崿F(xiàn)高亮度的熒光成像和示蹤，與背景中的不發(fā)光或弱發(fā)光單分子實現(xiàn)高分辨率的區(qū)分，很好的定位在目標生物大分子。這種AIE熒光探針的“點亮(light-up)”模式為高靈敏度、對比度的生物研究提供了可能，在生物學、醫(yī)學等領(lǐng)域具有劃時代的意義?；谶@類分子的設(shè)計理念，大量的“脂滴型”熒光分子探針被制備和發(fā)展起來，并表現(xiàn)的一定商用潛質(zhì)。但是，這些探針都有一個顯著的不足，就是在脂滴中的熒光行為(熒光主峰位或發(fā)光顏色)與探針在固態(tài)下的情況存在明顯差異，熒光位移很大。因為很難估計發(fā)光顏色的變化幅度，就會導致此類結(jié)構(gòu)很難對復雜的體系和過程進行熒光染色及標記，無法滿足生物體系中更高的要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物及其制備方法和應用，解決現(xiàn)有技術(shù)中在脂滴中的熒光行為(熒光主峰位或發(fā)光顏色)與探針在固態(tài)下的情況存在明顯差異、熒光位移很大的問題。

本發(fā)明解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物，其結(jié)構(gòu)通式如下：

其中Ar表示芳香基團或其衍生結(jié)構(gòu)，取代基R₁～R₈分別選自氫、烷基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12。

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，所述取代基R₁～R₈分別均為氫，Ar結(jié)構(gòu)為苯環(huán)或苯環(huán)衍生物，其優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)式為：

其中，A₁～A₄分別選自氫、烷基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12。

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，所述取代基R₁～R₈分別均為氫，Ar結(jié)構(gòu)為萘環(huán)、蒽環(huán)、菲環(huán)或萘環(huán)、蒽環(huán)、菲環(huán)的衍生物，其優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)式為：

其中，B₁～B₈分別選自氫、烷基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12。

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，所述取代基R₁～R₈分別均為氫，Ar結(jié)構(gòu)為呋喃、噻吩、吡咯、吡啶、吡喃、喹啉、吲哚、咔唑、苯胺基或嘧啶基，或者Ar結(jié)構(gòu)為呋喃、噻吩、吡咯、吡啶、吡喃、喹啉、吲哚、咔唑、苯胺基或嘧啶基的衍生物，其優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)為：

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，所述取代基R₁～R₈分別均為氫，Ar結(jié)構(gòu)為苯基乙烯結(jié)構(gòu)或苯基乙烯結(jié)構(gòu)的衍生物，其優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu) 為：

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，Ar結(jié)構(gòu)為苯環(huán)結(jié)構(gòu)或苯環(huán)衍生物，所述取代基R₁～R₈中至少一取代基選自烷基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12；

其優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)為：

在本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物中，Ar結(jié)構(gòu)為苯基乙烯結(jié)構(gòu)或苯基乙烯結(jié)構(gòu)的衍生物，所述取代基R₁～R₈中至少一取代基選自烷基、羥基、 烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12；

上述化合物結(jié)構(gòu)式中，其中R₁～R₈、A₁～A₈、B₁～B₈以及R的優(yōu)選結(jié)構(gòu)可以為下圖中所示29種中的一種或氫原子：

-CH₃、

本發(fā)明還提供一種芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物的制備方法，包括如下步 驟：

A、將芴酮或芴酮衍生物與水合肼在第一反應溶劑中加熱至20℃～150℃，反應1小時～24小時，然后冷卻至室溫，去除溶劑后析出晶體或粉末，進行重結(jié)晶后得到中間體聯(lián)肼；其中優(yōu)選加熱至45℃～90℃，反應6小時～12小時，重結(jié)晶所用溶劑優(yōu)選四氫呋喃、乙醇、甲苯、DMF等，最優(yōu)選為乙醇；

B、將中間體聯(lián)肼與對應的芳基水楊醛結(jié)構(gòu)化合物在第二反應溶劑中加熱至20℃～150℃，反應1小時～24小時，然后冷卻至室溫，去除溶劑后析出晶體或粉末，通過柱層析或重結(jié)晶得到芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物；其中優(yōu)選加熱至30℃～90℃，反應6小時～12小時，重結(jié)晶所用溶劑優(yōu)選四氫呋喃、乙醇、甲苯、DMF等，最優(yōu)選為乙醇。

在本發(fā)明的制備方法中，在步驟A中的第一反應溶劑和步驟B中的第二反應溶劑選自甲醇、乙醇、乙酸、四氫呋喃、甲苯、苯、氯仿、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的任意一種溶劑或任意幾種形成的混合溶劑；第一反應溶劑和第二反應溶劑分別優(yōu)選為乙醇或乙醇與其它溶劑形成的混合溶劑。

本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物可以作為制備細胞內(nèi)特異性脂滴染色的熒光探針的應用，該熒光探針主要應用于在體內(nèi)、體外及海洋中低等生物脂肪含量的測定方面以及用于病理和藥物療效研究等方面。

實施本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物及其制備方法和應用，具有以下有益效果：該類化合物可以自由進出細胞并特異性的在細胞內(nèi)脂滴處富集，由原來的無熒光變?yōu)閺娏覠晒?，同時在分子內(nèi)激發(fā)態(tài)質(zhì)子轉(zhuǎn)移機制(ESIPT)的作用下，展現(xiàn)了較大的斯托克斯位移，表現(xiàn)為黃色、橙紅或紅色熒光，同生物體外的固態(tài)熒光相比，基本沒有位移，可以準確的判斷探針定域位置，從而實現(xiàn)對細胞脂滴結(jié)構(gòu)、行為和生理過程的監(jiān)測，在生物、醫(yī)療、健康和能源領(lǐng)域，具有極其廣闊的應用前景。

具體為：

(1)選擇聯(lián)肼結(jié)構(gòu)作為共軛橋聯(lián)基元，一方面利用單雙鍵交替的形式保持探針分子的共軛程度，另一方面N原子的孤對電子具有較小的空間位阻，使其能夠在一定程度上自由轉(zhuǎn)動從調(diào)節(jié)空間體積，保證其能容易直接透過細胞膜，對細胞內(nèi)亞結(jié)構(gòu)進行選擇；

(2)外圍的共軛結(jié)構(gòu)中引入芴基的五元環(huán)結(jié)構(gòu)，使其吸電子能力增加，拓展光譜向波長更長的方向移動，以便應用于活體檢測；

(3)在聯(lián)肼兩端引入酚羥基結(jié)構(gòu)，與N的孤對電子形成ESIPT態(tài)(激發(fā)態(tài)下分子內(nèi)的質(zhì)子轉(zhuǎn)移)，有效的增加斯托克斯位移，防止分子的自吸收現(xiàn)象，并賦予分子顯著的AIE性能；酚羥基的水溶性也能夠顯著調(diào)節(jié)分子的脂水分配系數(shù)，從而增加探針直接透過細胞的幾率；

(4)由于分子獨特的剛性結(jié)構(gòu)導致熒光探針在脂滴內(nèi)的熒光情況與固體相似，便于在復雜體系內(nèi)實現(xiàn)指認和定量分析。

附圖說明

圖1A為芴基水楊醛聯(lián)肼(FAS)在不同溶劑中的溶劑化效應和聚集誘導發(fā)光效應；

圖1B為FAS在不同含水量的四氫呋喃溶液中的溶劑化效應和聚集誘導發(fā)光效應；

圖2A為FAS細胞染色的明場照片；

圖2B為FAS細胞染色的熒光照片；

圖3為FAS在Hela細胞中熒光染色中濃度優(yōu)化實驗照片；

圖4為FAS在Hela細胞中熒光染色中指定濃度下的時間優(yōu)化實驗照片。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例，對本發(fā)明的芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物及其制 備方法和應用作進一步說明：

本發(fā)明提供一種芴基水楊醛聯(lián)肼類衍生物，其結(jié)構(gòu)通式如下：

其中Ar表示芳香基團或其衍生結(jié)構(gòu)，取代基R₁～R₈分別選自氫、烷基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氨基、巰基、鹵素原子、苯基、甲苯基、萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡喃基、喹啉基、吲哚基、羧酸或羧酸衍生物、咔唑基或苯胺基中的一種，烷基和烷氧基的碳原子數(shù)分別為1～12。

具體合成過程：

(1)

將芴酮結(jié)構(gòu)制備得到帶有取代基結(jié)構(gòu)的芴酮衍生物。

(2)

將芴酮或步驟(1)的產(chǎn)物芴酮衍生物采用適當?shù)娜軇┖蜏囟戎苽渲匾? 的中間體產(chǎn)物芴基聯(lián)肼。

具體操作：將適量的芴酮或芴酮衍生物與水合肼在第一反應溶劑中加熱至適當溫度，反應一段時間后冷卻至室溫，去除掉大部分溶劑后析出晶體或粉末，重結(jié)晶后即得到中間體聯(lián)肼，產(chǎn)率>90％，純度>95％。其中，第一反應溶劑優(yōu)選選自甲醇、乙醇、乙酸、四氫呋喃、甲苯、苯、氯仿、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的一種或幾種形成的混合溶劑，最優(yōu)選乙醇及其與其它溶劑的混合體系；加熱至的適當溫度優(yōu)選20℃至150℃，其中最優(yōu)選為45℃至90℃；反應時間優(yōu)選1小時至24小時，其中最優(yōu)選6小時至12小時；重結(jié)晶所用溶劑優(yōu)選四氫呋喃、乙醇、甲苯、DMF等，最優(yōu)選乙醇。

(3)

將步驟(2)中得到的中間體聯(lián)肼，即芴基水合肼，與對應的芳基水楊醛結(jié)構(gòu)反應制備目標化合物。

具體操作：將適量的中間體聯(lián)肼與對應的芳基水楊醛結(jié)構(gòu)在第二反應溶劑中加熱至適當溫度，反應一段時間后冷卻至室溫，處理掉大部分溶劑后析出晶體或粉末，柱層析或重結(jié)晶后即得到目標產(chǎn)物。其中，第二反應溶劑優(yōu)選選自甲醇、乙醇、乙酸、四氫呋喃、甲苯、苯、氯仿、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的一種或幾種形成的混合溶劑，最優(yōu)選乙醇及其與其它溶劑的混合體系；加熱至的適當溫度優(yōu)選20℃至150℃，其中最優(yōu)選為30℃至90℃；反應時間優(yōu)選1小時至24小時，其中最優(yōu)選6小時至12小時； 重結(jié)晶所用溶劑優(yōu)選四氫呋喃、乙醇、甲苯、DMF等，最優(yōu)選乙醇。

實施例1：芴基水楊醛聯(lián)肼的合成(FAS)

將10g芴酮與20ml水合肼(85％)在100ml下回流4h，冷卻后有大量針狀固體析出，過濾后用乙醇重結(jié)晶2次，得到淡黃色針裝晶體，純度99％，產(chǎn)率95％；取2g水合肼晶體與2ml水楊醛在20ml乙醇中回流4h，冷卻后得到淡黃色針裝晶體，過濾后，用75％的乙醇溶液清洗，得到FAS結(jié)構(gòu)，產(chǎn)率99％。MALDI-TOF(m/z):[M+]calcd.C₂₀H₁₄N₂O,298.34；found,299.34.Anal Calc.for C₂₀H₁₄N₂O:C,80.52；H,4.73；N,9.39；O,5.36.Found:C,80.62；H,4.71；N,9.19；O,5.36。

實施例2：FAS衍生物的合成(1)

取500mg水合肼晶體與等摩爾的間羥基水楊醛(或間溴代水楊醛)衍生物在10ml乙醇中60℃反應4h，冷卻后得到淡黃色晶體，過濾后，用75％的乙醇溶液清洗，得到產(chǎn)品層析得到對應的FAS衍生結(jié)構(gòu)，產(chǎn)率>90％。

m-FAS-OH：MALDI-TOF(m/z):[M+]calcd.C₂₀H₁₄N₂O₂,314.34；found,315.24.Anal Calc.for C₂₀H₁₄N₂O₂:C,76.42；H,4.49；N,8.91；O,10.18.Found:C,75.32；H,4.48；N,8.35；O,10.09。

p-FAS-Br：MALDI-TOF(m/z):[M+]calcd.C₂₀H₁₃BrN₂O,377.23；found,299.34.Anal Calc.for C₂₀H₁₃BrN₂O:C,63.68；H,3.47；Br,21.18；N,7.43；O,4.24.Found:C,63.58；H,3.40；N,7.42；O,4.19。

實施例3：FAS衍生物的合成(2)

取500mg水合肼晶體與等摩爾的N,N-二乙基氨基水楊醛在10ml乙醇中60℃反應4h，冷卻后得到紅色油狀物，過濾后，用75％的乙醇溶液清洗，得到產(chǎn)品層析得到對應的FAS衍生結(jié)構(gòu)，產(chǎn)率為85％。

p-FAS-N22：MALDI-TOF(m/z):[M+]calcd.C₂₄H₂₃N₃O:369.18；found,370.66；Anal Calc.for C₂₄H₂₃N₃O:C,78.02；H,6.27；N,11.37；O,4.33.found,C,77.93；H,6.10；N,11.25；O,4.45。

實施例4：芴基-四苯乙烯類水楊醛聯(lián)肼的制備(TPE-FAS)

采用Sizuki偶聯(lián)得到四苯乙烯基水楊醛衍生物結(jié)構(gòu)后，取500mg水合肼晶體與之在10ml乙醇中60℃反應4h，冷卻后得到淡黃色粉末，過濾后，用75％的乙醇溶液清洗，得到產(chǎn)品層析得到對應的FAS衍生結(jié)構(gòu)，產(chǎn)率為85％。

m-TPE-FAS:MALDI-TOF(m/z):[M+]calcd.C₄₀H₂₈N₂O:552.22；found,553.28；Anal Calc.for C₄₀H₂₈N₂O:C,86.93；H,5.11；N,5.07；O,2.89；found,C,86.87；H,5.01；N,5.08；O,2.79。

實施例5：芴基水楊醛聯(lián)肼FAS的光學性質(zhì)及其在在脂滴染色方面的 應用

(a)FAS的基本光學性質(zhì)：如圖1A所示為FAS在不同極性下的熒光光譜，隨著極性的變化，F(xiàn)AS的醇式發(fā)射(450nm附近)和酮式發(fā)射(600nm附近)的比例發(fā)生明顯變化，為典型的ESIPT發(fā)射。而對于ESIPT分子，聚集態(tài)多為酮式發(fā)射，所以我們檢測了該處的聚集發(fā)光現(xiàn)象。如圖1B所示，向FAS的四氫呋喃溶劑中(溶解單分子態(tài))不斷加入一定比例的水，F(xiàn)AS由于溶解度問題慢慢聚集成納米顆粒，熒光強度明顯增強(600nm附近)，稱其為AIE性質(zhì)。FAS具有明顯的ESIPT和AIE性質(zhì)，具有熒光探針的潛質(zhì)。

(b)細胞染色實驗：將FAS以一定濃度溶液DMSO溶液后滴入細胞培養(yǎng)液中，選擇Hela細胞作為研究對象，培養(yǎng)一段時間后采用熒光顯微鏡對其極性觀察，發(fā)現(xiàn)FAS可以順利的透過細胞壁，并定向的在細胞脂滴處富集，從而顯示出橘紅色熒光(600nm附近)。

圖2A為Hela細胞在明場中的照片，其中馕包狀為細胞的脂滴結(jié)構(gòu)；圖2B為染色后的細胞在330nm-385nm激發(fā)光的暗場下的熒光照片，二者對比顯示，F(xiàn)AS能夠特異性的對細胞脂滴進行染色，而且其熒光峰位與固態(tài)熒光光譜無明顯差異。說明FAS可以不經(jīng)任何修飾直接進入細胞實現(xiàn)靶向熒光染色，并未表現(xiàn)出明顯的熒光偏移，AIE和ESIPT現(xiàn)象得到了很好的利用。

(c)脂滴染色實驗條件的優(yōu)化：如圖3和圖4所示，我們對染色濃度和時間進行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)FAS濃度在7.5μM，染色時間為30min時，細胞熒光脂滴成像的效果最好。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)

應當理解的是，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，所有改進或變換都屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍之內(nèi)。