專利名稱：一種嵌段高分子及其合成方法和納米顆粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種嵌段高分子及其合成方法和納米顆粒的制備方法。
背景技術(shù)：
SiRNA是一段21 — 25個(gè)堿基對(duì)的RNA分子，發(fā)現(xiàn)于單細(xì)胞生物抵御病毒侵襲的機(jī)制。單細(xì)胞生物針對(duì)入侵病毒的mRNA序列合成出一段與之互補(bǔ)的siRNA，主動(dòng)結(jié)合mRNA,從而阻斷病毒的復(fù)制。這種與病原體基因一一對(duì)應(yīng)的干擾策略如果用來開發(fā)治療人類疾病的藥物，將從根本上改變目前傳統(tǒng)的新藥發(fā)現(xiàn)模式，帶來藥物治療技術(shù)的革命。siRNA因其獨(dú)特的靶點(diǎn)特異性、結(jié)構(gòu)可設(shè)計(jì)性和代謝安全性，成為科學(xué)界普遍看好的下一代革命性新藥的第一候選。然而，至目前為止，一個(gè)高效的體內(nèi)輸送載體的缺乏，卻導(dǎo)致siRNA 的成藥性受到了 限制(Castanotto, D. & Rossi, J. J. The promises and pitf·allsof RNA-interference-based therapeutics. Nature 457,426-433(2009). ) 而目前用于核酸物質(zhì)輸送的載體多集中在以下幾類(1)物理導(dǎo)入物理導(dǎo)入法是最先應(yīng)用的基因?qū)敕椒?，即采用電穿孔或粒子轟擊技術(shù)等，將目的基因直接輸送至體內(nèi)或靶位的方法。這些方法無需使用基因載體，但是轉(zhuǎn)染效率普遍很低、操作復(fù)雜，對(duì)組織的損傷也比較大。(2)病毒載體目前對(duì)于病毒載體研究較多的是慢病毒載體、腺病毒載體，病毒載體雖然有較高的體外轉(zhuǎn)染活性，然而，其免疫原性與易導(dǎo)致突變的缺點(diǎn)為體內(nèi)輸送帶來了巨大的安全隱患。(3)非病毒載體非病毒載體的優(yōu)勢(shì)主要在于，在保證預(yù)期的轉(zhuǎn)染活性的條件下，可以大大降低病毒載體所帯來的免疫原性與諸多炎癥反應(yīng)，其一般為以下幾種載體設(shè)計(jì)(a)陽離子脂質(zhì)體；(b)聚陽離子基因載體。而目前研究更多的主要集中于聚陽離子基因載體與陽離子脂質(zhì)體的修飾，使之適用于基因物質(zhì)的靶向輸送。陽離子脂質(zhì)體具有較高的體內(nèi)外轉(zhuǎn)染活性，然而，由于表面的正電荷影響其體內(nèi)的正常分布，同時(shí)，由于選用陽離子脂質(zhì)，免疫原性與炎癥反應(yīng)在動(dòng)物試驗(yàn)中也成為不可避免的缺點(diǎn)之一(Gao, K. & Huang, L. Nonviral methods for siRNA delivery. Molecular pharmaceutics
6,651-658(2008).)。聚陽離子基因載體目前發(fā)展已經(jīng)較為成熟，在諸多文獻(xiàn)中已有詳盡的報(bào)道。此外，在基因輸送載體中，較為成功的實(shí)例CALAND0 Pharmaceuticals公司采用的R0NDEL 技木，以與陽離子基因載體連接的環(huán)糊精、十二金剛烷為載體材料，以轉(zhuǎn)鐵蛋白為靶向基團(tuán)對(duì)基因物質(zhì)進(jìn)行包裹遞送，以系統(tǒng)給藥治療實(shí)體瘤，目前正在臨床I期試驗(yàn)中。然而，在結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)中難以保證靶向基團(tuán)在結(jié)構(gòu)的表面，而環(huán)糊精可以減低毒性，但是此結(jié)構(gòu)增多會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性，存在ー個(gè)毒性與轉(zhuǎn)染活性的自身設(shè)計(jì)矛盾，同吋，其連接難以在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)無毒化降解(Davis, M. E. The first targeted delivery of siRNA in humansvia a self-assembling, cyclodextrin polymer-based nanoparticle:from concept toclinic. Molecular pharmaceutics 6，659-668(2009) X用于治療的核酸藥物載體須以盡可能簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)完成以下五個(gè)步驟:A)核酸的凝聚、B)核酸對(duì)病變細(xì)胞的靶向、C)核酸的內(nèi)吞逃逸、D)核酸在病變細(xì)胞漿的釋放以及E)載體自身的無毒化代謝。現(xiàn)有技術(shù)中，運(yùn)用人體內(nèi)源性単體和安全性已知的藥物代謝物構(gòu)建的pH響應(yīng)性可降解聚陽離子以及其簡(jiǎn)單的結(jié)構(gòu)高效實(shí)現(xiàn)了上述步驟中的A、C、D、E0但是面對(duì)病變細(xì)胞的多樣性(步驟B)，其通用性卻大為折扣。Polyplex顆粒表面膜的自組裝是ー項(xiàng)尚未妥善解決的難題。中性磷脂沒有吸附于Polyplex表面的化學(xué)驅(qū)動(dòng)力。Huang等人1990年代中葉報(bào)道的單價(jià)負(fù)電荷磷脂構(gòu)建的Lipopolyplex (LPD 一 II)表面膜的物理穩(wěn)定性欠佳。其最近報(bào)道的兩價(jià)負(fù)電荷磷脂構(gòu)建的Lipopolyplex雖然大幅改善了表面膜物理穩(wěn)定性，外表面過多的負(fù)電荷可能影響納米顆粒對(duì)于病變細(xì)胞的附著。同樣，很多研究提出聚陽離子載體與PEG共價(jià)連接可使得聚陽離子基因納米顆粒表面正電荷有效屏蔽，然而，共價(jià)連接PEG后，對(duì)基因的復(fù)合能力卻明顯受到影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種嵌段高分子，以解決現(xiàn)有技術(shù)中的Polyplex顆粒表面膜的外表面存在過多的正電荷從而影響Polyplex顆粒對(duì)于病變細(xì)胞的附著，且靶·向效果差的技術(shù)性問題。本發(fā)明的第二目的在于提供一種嵌段高分子的合成方法。本發(fā)明的第三目的在于提供ー種納米顆粒的制備方法。本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種嵌段高分子，包括依次連接的第一嵌段、第二嵌段和第三嵌段，所述第一嵌段和所述第三嵌段為親水嵌段，所述第二嵌段為疏水嵌段。優(yōu)選地，所述第一嵌段可選自PEG或PE0。優(yōu)選地，所述第二嵌段可選自聚乳酸(PLA)、聚こ交酯(PGA)、聚こ交酷-丙交酯共聚物(PLGA)或聚己內(nèi)酯(PCL)的ー種。 優(yōu)選地，所述第三嵌段選自能提供負(fù)電荷的分子或通過化學(xué)反應(yīng)可與能提供負(fù)電荷的分子共價(jià)連接的化合物。優(yōu)選地，所述通過化學(xué)反應(yīng)可與能提供負(fù)電荷的分子共價(jià)連接的化合物包括多羥基分子，所述多羥基分子可選自甘油、こニ醇、果糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖或木糖醇的ー種。優(yōu)選地，所述能提供負(fù)電荷的分子包括多羧基化合物，所述多羧基化合物可選自蘋果酸或檸檬酸。優(yōu)選地，還包括靶向基團(tuán)或熒光分子，所述靶向基團(tuán)或所述熒光分子與所述第一嵌段連接。優(yōu)選地，所述靶向基團(tuán)可選自蛋白、多肽、抗體或小分子靶向基團(tuán)的ー種或幾種。優(yōu)選地，所述蛋白可選自轉(zhuǎn)鐵蛋白或去唾液酸糖蛋白；所述多肽可選自RGD或胰島素；所述小分子靶向基團(tuán)可選自葉酸、生物素或半乳糖的ー種。優(yōu)選地，所述熒光分子可選自羅丹明、FITC、NBD、cy5. 5或FAM的ー種。一種嵌段高分子的合成方法，包括以下步驟I)以PEG為引發(fā)劑，在Sn(Oct)2的催化下，在8(Tl40°C條件下于無水甲苯中引發(fā)開環(huán)聚合，加入己內(nèi)酷，反應(yīng)進(jìn)行6 24h，合成PEG-PCL嵌段；2)以草酰氯為連接劑，先將所述步驟I)中合成的PEG-PCL嵌段溶于無水ニ氯甲烷中，再將PEG-PCL嵌段溶液緩慢逐滴加至草酰氯中，滴加溫度為冰浴，滴加完成后恢復(fù)至室溫，2^12h后抽除溶劑及過量的草酰氯，獲得中間產(chǎn)物羥基端經(jīng)過酰氯活化的PEG-PCL，而后將中間產(chǎn)物溶解于無水ニ氯甲烷，再將中間產(chǎn)物溶液逐滴加入由DMF溶解的大量麥芽三糖中，滴加溫度為冰浴，滴加完成后恢復(fù)至室溫，2 12h后減壓抽除溶劑，用截留分子量為1000 10000的透析袋透析除去麥芽三糖，透析時(shí)間為12 48h，預(yù)凍，凍干得到PEG-PCL-MaItotriose 嵌段高分子。ー種納米顆粒的制備方法，包括以下步驟I)將聚陽離子高分子溶于超純水或無RNase酶水配制成 聚陽離子溶液，將核酸藥物溶解于超純水或者無RNase酶水配制成核酸溶液；2)將所述聚陽離子溶液加入到所述核酸溶液中，反復(fù)吹打均勻，室溫下孵育，得到polyplexes ；3)將上述的嵌段高分子溶解于超純水或無RNase酶水中配制成嵌段高分子溶液，將所述嵌段高分子溶液緩慢加入至所述步驟2)制備的polyplexes顆粒中，吹打均勻，靜置，使其充分包裹，即可制得由嵌段高分子包裹的納米顆粒。優(yōu)選地，所述核酸藥物為DNA或RNA。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的嵌段高分子可以有效的屏蔽聚陽離子基因復(fù)合物顆粒等陽離子顆粒表面的電荷，排除陽離子顆粒在體內(nèi)循環(huán)的障礙，提高體內(nèi)循環(huán)效率，同吋，還可接枝靶向基團(tuán)，實(shí)現(xiàn)體內(nèi)病變細(xì)胞靶向，并有效提高靶向效果。


圖I為本發(fā)明的嵌段高分子結(jié)構(gòu)及合成方法示意圖；圖2為本發(fā)明的嵌段高分子的核磁譜圖；圖3為本發(fā)明的嵌段高分子的核磁譜圖；圖4為本發(fā)明的納米顆粒的制備示意圖；圖5為本發(fā)明的納米顆粒的制備示意圖；圖6為本發(fā)明的納米顆粒的熒光共定位法結(jié)構(gòu)驗(yàn)證的示意圖；圖7為本發(fā)明的納米顆粒粒徑與Zeta電位變化圖(其中ABC指未經(jīng)羧化的嵌段高分子，ABCH指末端經(jīng)過羧化的嵌段高分子)；圖8為本發(fā)明的嵌段高分子的細(xì)胞毒性檢測(cè)示意圖；圖9為本發(fā)明的納米顆粒的體內(nèi)毒性與循環(huán)結(jié)果示意圖；圖10為本發(fā)明的嵌段高分子的腫瘤靶向性效果示意圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程。但所舉實(shí)施例并非用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明對(duì)嵌段高分子與polyplexes所形成的納米顆粒的理化性質(zhì)表征方法包括透射電子顯微鏡、動(dòng)態(tài)光散射和zeta點(diǎn)位測(cè)試。按本方案制備的納米顆粒的細(xì)胞攝取、基因轉(zhuǎn)染和小動(dòng)物活體成像觀察選用的DNA為綠色熒光蛋白質(zhì)粒；相關(guān)的毒性試驗(yàn)選用的細(xì)胞是H印G2細(xì)胞、Hela細(xì)胞、BRL-3A細(xì)胞與SMMC-7721細(xì)胞；體內(nèi)分布選用的動(dòng)物是BALB/c 裸鼠。實(shí)施例I嵌段高分子PEG-PCL-maltotriose-COOH的合成方法嵌段高分子PEG-PCL-maltotriose-COOH的合成路線如圖I所示。整個(gè)反應(yīng)在無水無氧的環(huán)境中進(jìn)行，取一定量的PEG、聚己內(nèi)酷、辛酸亞錫至三頸瓶中，加入現(xiàn)制的無水甲苯，于120°C下攪拌反應(yīng)24小吋，反應(yīng)完成后加入こ醚沉淀，而后加入ニ氯甲烷溶解，再用こ醚沉淀，反復(fù)三次，得到PEG-PCL嵌段高分子。而后將PEG-PCL溶解于ニ氯甲烷中，加入過量草酰氯于反應(yīng)瓶中，在無水無氧冰浴的條件下將PEG-PCL溶液逐滴加入到反應(yīng)瓶中，滴加完成后恢復(fù) 至室溫，攪拌，12h后減壓抽除剰余的草酰氯，而后加入ニ氯甲烷溶解末端經(jīng)過酰氯活化的PEG-PCL，冰浴下將末端經(jīng)過酰氯活化的PEG-PCL溶液逐滴緩慢的加入過量的麥芽三糖中(溶于少量DMF),反應(yīng)在無水無氧的條件下進(jìn)行，滴加完成后恢復(fù)到室溫，12h后減壓抽除溶剤，于截留分子量7000的透析袋中，透析24小時(shí)除去未反應(yīng)的麥芽三糖。預(yù)凍，而后于凍干機(jī)中凍干得到白色粉末。將制得的白色粉末溶解于無水ニ氯甲烷中，加入到過量的草酰氯中，在冰浴中緩慢滴加，滴加完成后恢復(fù)至室溫，攪拌反應(yīng)，結(jié)束后減壓除去過量草酰氯，而后加水水解，于截留分子量為3500的截留離心管中離心除去少量小分子片段，凍干得到終產(chǎn)品。其1H-NMR圖譜如圖2、3所示在1H-NMR圖譜(DMS0_d6 400MHz):其峰歸屬見圖2、圖3，其中，化學(xué)位移在4-6區(qū)間為麥芽三糖羥基氫的峰，而糖環(huán)上的骨架氫的峰在化學(xué)位移3-4之間，被高分子的峰所掩蓋，所以以麥芽三糖的羥基峰作為合成結(jié)果的判定。經(jīng)過羧化的嵌段高分子麥芽三糖的羥基峰部分消失或減弱，指示部分羥基被羧基取代。實(shí)施例2納米顆粒的制備取一定量的聚陽離子高分子(以PEI為例)與質(zhì)粒DNA，由于考察納米顆粒結(jié)構(gòu)與電荷屏蔽情況，故選用質(zhì)量比I : 5 (pDNA:PEI)制備成polyplexes樣品，而后加入嵌段高分子，充分復(fù)合。具體步驟見圖4、5。實(shí)施例3納米顆粒的表征按照上述的制備方法制備的納米顆粒，通熒光共定位對(duì)其進(jìn)行表征，具體做法如下，將PEI與FITC通過共價(jià)鍵連接，并同時(shí)用nile red標(biāo)記嵌段高分子的疏水PCL嵌段，將制備的熒光顆粒固定在PVA水凝膠中，并通過反復(fù)“冷凍-室溫”循環(huán)進(jìn)行交聯(lián)固化，限制顆粒在水平面上的ニ維運(yùn)動(dòng)。觀察結(jié)果見圖6，紅色(nile red)和綠色(FITC)在相同位置出現(xiàn)并重合，驗(yàn)證了納米顆粒的形成。實(shí)施例4納米顆粒的粒徑與表面電位的表征通過粒徑與電位的測(cè)定對(duì)納米顆粒結(jié)果進(jìn)行表征，電位的變化，經(jīng)過包裹后電位在OmV左右，同時(shí)，未經(jīng)過羧化的高分子電位沒有明顯降低，由此可以直觀證明本發(fā)明的嵌段高分子材料可以屏蔽電荷，并且粒徑分布比較均勻，結(jié)果見圖7。實(shí)施例5嵌段高分子的細(xì)胞毒性的考察采用MTT法測(cè)定細(xì)胞毒性，選用IfepG2、HeLa、BRL-3A、SMMC-7721細(xì)胞考察細(xì)胞毒性，以8000個(gè)/孔的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)96孔細(xì)胞板，置于37°C 5%細(xì)胞培養(yǎng)箱里培養(yǎng)過夜。配制l、2、3、4、6、8mg/mL的系列不同濃度的嵌段高分子溶液，每孔加入100 y L，稀釋介質(zhì)是DMEM高糖培養(yǎng)基(無血清無酚紅)，從培養(yǎng)箱中取出96孔細(xì)胞板，吸去培養(yǎng)液，每孔用100 y L磷酸鹽緩沖溶液沖洗一次，再棄去磷酸鹽緩沖溶液，將不同濃度的嵌段高分子溶液依次加入到細(xì)胞板中，平行測(cè)定6個(gè)孔。置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里培養(yǎng)4小吋。然后，吸去培養(yǎng)液，每孔用100 u L磷酸鹽緩沖溶液沖洗一次，再棄去磷酸鹽緩沖溶液，每孔加入100 U LDMEM高糖培養(yǎng)基(無血清無酚紅)和25 u LMTT溶液(5mg/mL)，繼續(xù)于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。6小時(shí)之后，吸去培養(yǎng)液，每孔加入IOOy L ニ甲基亞砜，放置充分溶甲贊，采用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定樣品在570nm和630nm處的吸光度值(以630nm處為對(duì)照)。經(jīng)過測(cè)試可知，嵌段高分子材料毒性較低，在微克級(jí)基本無毒，結(jié)果見圖8。實(shí)施例6體內(nèi)循環(huán)考察按照前述方法制備的納米顆粒，分別將polyplexes與經(jīng)過包裹后的納米顆粒經(jīng)小鼠尾靜脈注射，單劑量給予lmg/kg體重的pDNA質(zhì)粒的復(fù)合物，其復(fù)合比例與方法同前所述，將嵌段高分子用突光染料rhodamine共價(jià)連接標(biāo)記,經(jīng)過尾靜脈注射后,polyplexes組的小鼠均發(fā)生急性死亡，而對(duì)于注射經(jīng)過所設(shè)計(jì)的嵌段高分子包裹后的納米顆粒的小鼠生·命體征平穩(wěn)，經(jīng)過24小時(shí)候，頸椎脫白處死小鼠，分別取心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行冰凍切片觀察，以注射等體積生理鹽水組為空白對(duì)照，經(jīng)過熒光顯微鏡觀察，可以看到在肝、脾、肺處均出現(xiàn)了部分顆粒的聚集，結(jié)果見圖9，證明經(jīng)過包裹后，polyplexes表面電荷得到了有效的中和，實(shí)現(xiàn)了體內(nèi)循環(huán)。實(shí)施例7嵌段高分子的腫瘤靶向考察選擇生物素為靶向基團(tuán)與嵌段高分子進(jìn)行共價(jià)連接，考察其腫瘤靶向性，將5周齡的BALB/c裸鼠在SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)一周，而后以SMMC-7721細(xì)胞進(jìn)行皮下腫瘤接種，待腫瘤長(zhǎng)至200mm3后，單劑量注射pDNA的基因復(fù)合物，劑量lmg/kg體重，制備方法與比例同前，分別制備無靶向基團(tuán)連接的嵌段高分子包裹的納米顆粒與以生物素為靶向基團(tuán)的高分子包裹的基因顆粒，并以rhodamine共價(jià)連接的熒光嵌段高分子進(jìn)行熒光體內(nèi)示蹤，以同體積的生理鹽水組為空白對(duì)照，進(jìn)行腫瘤靶向性考察。經(jīng)小鼠尾靜脈注射給藥，分別于給藥后4h、12h、24h觀察小鼠腫瘤部分熒光量的蓄積，考察所制備的顆粒在腫瘤組織的靶向效果，經(jīng)過靶向基團(tuán)連接后的基因顆粒在腫瘤部位的蓄積量明顯高于未經(jīng)連接組，具體結(jié)果見圖10。以上公開的僅為本申請(qǐng)的幾個(gè)具體實(shí)施例，但本申請(qǐng)并非局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員能思之的變化，都應(yīng)落在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種嵌段高分子，其特征在于，包括依次連接的第一嵌段、第二嵌段和第三嵌段，所述第一嵌段和所述第三嵌段為親水嵌段，所述第二嵌段為疏水嵌段。
2.如權(quán)利要求I所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述第一嵌段可選自PEG或PEO。
3.如權(quán)利要求I所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述第二嵌段可選自聚乳酸(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)或聚己內(nèi)酯(PCL)的一種。
4.如權(quán)利要求I所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述第三嵌段選自能提供負(fù)電荷的分子或通過化學(xué)反應(yīng)可與能提供負(fù)電荷的分子共價(jià)連接的化合物。
5.如權(quán)利要求4所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述通過化學(xué)反應(yīng)可與能提供負(fù)電荷的分子共價(jià)連接的化合物包括多羥基分子，所述多羥基分子可選自甘油、乙二醇、果糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖或木糖醇的一種。
6.如權(quán)利要求4所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述能提供負(fù)電荷的分子包括多羧基化合物，所述多羧基化合物可選自蘋果酸或檸檬酸。
7.如權(quán)利要求I所述的一種嵌段高分子，其特征在于，還包括靶向基團(tuán)或熒光分子，所述靶向基團(tuán)或所述熒光分子與所述第一嵌段連接。
8.如權(quán)利要求7所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述靶向基團(tuán)可選自蛋白、多肽、抗體或小分子靶向基團(tuán)的一種或幾種。
9.如權(quán)利要求8所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述蛋白可選自轉(zhuǎn)鐵蛋白或去唾液酸糖蛋白；所述多肽可選自RGD或胰島素；所述小分子靶向基團(tuán)可選自葉酸、生物素或半乳糖的一種。
10.如權(quán)利要求7所述的一種嵌段高分子，其特征在于，所述熒光分子可選自羅丹明、FITC、NBD、cy5. 5 或 FAM 的一種。
11.一種嵌段高分子的合成方法，其特征在于，包括以下步驟 1)以PEG為引發(fā)劑，在Sn(Oct)2的催化下，在8(T14(TC條件下于無水甲苯中引發(fā)開環(huán)聚合，加入己內(nèi)酯，反應(yīng)進(jìn)行6 24h，合成PEG-PCL嵌段； 2)以草酰氯為連接劑，先將所述步驟I)中合成的PEG-PCL嵌段溶于無水二氯甲烷中，再將PEG-PCL嵌段溶液緩慢逐滴加至草酰氯中，滴加溫度為冰浴，滴加完成后恢復(fù)至室溫，2 12h后抽除溶劑及過量的草酰氯，獲得中間產(chǎn)物羥基端經(jīng)過酰氯活化的PEG-PCL，而后將中間產(chǎn)物溶解于無水二氯甲烷，再將中間產(chǎn)物溶液逐滴加入由DMF溶解的大量麥芽三糖中，滴加溫度為冰浴，滴加完成后恢復(fù)至室溫，2^12h后減壓抽除溶劑，用截留分子量為100(T10000的透析袋透析除去麥芽三糖，透析時(shí)間為12 48h，預(yù)凍，凍干得到PEG-PCL-MaItotriose 嵌段高分子。
12.—種納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將聚陽離子高分子溶于超純水或無RNase酶水配制成聚陽離子溶液，將核酸藥物溶解于超純水或者無RNase酶水配制成核酸溶液； 2)將所述聚陽離子溶液加入到所述核酸溶液中，反復(fù)吹打均勻，室溫下孵育，得到polyplexes ； 3)將如權(quán)利要求I所述的嵌段高分子溶解于超純水或無RNase酶水中配制成嵌段高分子溶液，將所述嵌段高分子溶液緩慢加入至所述步驟2)制備的polyplexes顆粒中，吹打均勻，靜置，使其充分包裹，即可制得由嵌段高分子包裹的納米顆粒。
13.如權(quán)利要求12所述的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述核酸藥物為DNA或RNA。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種嵌段高分子及其合成方法和納米顆粒的制備方法。本發(fā)明的嵌段高分子，包括依次連接的第一嵌段、第二嵌段和第三嵌段，所述第一嵌段和所述第三嵌段為親水嵌段，所述第二嵌段為疏水嵌段。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的嵌段高分子可以有效的屏蔽聚陽離子基因復(fù)合物顆粒等陽離子顆粒表面的電荷，排除陽離子顆粒在體內(nèi)循環(huán)的障礙，提高體內(nèi)循環(huán)效率，同時(shí)，還可接枝靶向基團(tuán)，實(shí)現(xiàn)體內(nèi)病變細(xì)胞靶向，并有效提高靶向效果。
文檔編號(hào)C08G63/91GK102786675SQ20121016328
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月23日
發(fā)明者吳飛, 張奇昕, 葛雪梅, 袁偉恩, 許丹, 金拓 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)