技術特征：
1.一種測序靶多核苷酸的方法，包括：(a)使靶多核苷酸與跨膜孔和phi29DNA聚合酶接觸，使得該酶在該靶多核苷酸與該孔的相互作用期間控制該靶多核苷酸移動通過該孔；和(b)測量在相互作用期間通過孔的電流，藉此確定所述靶多核苷酸的序列，其中步驟(a)和(b)利用在所述phi29DNA聚合酶結合于所述靶多核苷酸時施加的跨越所述孔的電壓來實施，其中步驟(a)和(b)進一步用聚合酶實施：(I)在不存在游離核苷酸且不存在酶輔因子的條件下實施，從而使所述聚合酶隨著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔；或(II)在不存在游離核苷酸而存在酶輔因子的條件下實施，從而使所述聚合酶隨著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔；或(III)在存在游離核苷酸和酶輔因子的條件下實施，使得所述聚合酶逆著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔。2.權利要求1的方法，其還包括：(a)提高所施加的跨越所述孔的電壓，以增加所述DNA聚合酶的活性速率；或(b)添加封閉寡聚體的步驟，該封閉寡聚體在引物-模板連接點處結合，由此在被捕獲在納米孔上時所述寡聚體被剝離。3.權利要求1的方法，其中：(a)所述多核苷酸的至少一部分是雙鏈的；或(b)所述DNA聚合酶耐受至少0.6M的單價鹽。4.權利要求1的方法，其中該孔是跨膜蛋白孔或固態(tài)孔。5.權利要求4的方法，其中：該跨膜蛋白孔選自：溶血素、殺白細胞素、恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)孔蛋白A(MspA)、外膜孔蛋白F(OmpF)、外膜孔蛋白G(OmpG)、外膜磷脂酶A、奈瑟氏菌屬(Neisseria)自主轉運體脂蛋白(NalP)和WZA。6.一種用于確定樣品中多核苷酸的核苷酸序列的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括：電源、陽極、陰極，順室、反室，其中順室和反室被薄膜分開，該薄膜具有納米孔，導電溶劑，Phi29DNA聚合酶，包含雙鏈體區(qū)段和至少一個無堿基核苷酸種類的多核苷酸，多種dNTP分子；和金屬離子輔因子。7.權利要求6的系統(tǒng)，其中：a)該系統(tǒng)進一步具有至少一個種類的ddNTP分子；或b)在所述多種dNTP分子中，一種dNTP分子的濃度比其它dNTP分子的濃度低至少兩個數(shù)量級；或c)所述導電溶劑是水性溶劑。8.權利要求6的系統(tǒng)，其還包括在引物-模板連接點處結合所述多核苷酸且經(jīng)修飾以提高通量的封閉寡聚體。9.一種用于確定樣品中多核苷酸的核苷酸序列的方法，該方法包括如下步驟：(a)提供兩個分開而相鄰的包含液體介質的室，位于所述兩個室之間的界面，該界面具有開孔，開孔具有這樣的尺寸，使得一次僅允許一條多核苷酸鏈從通道的順側向通道的反側順次逐個單體地通過；(b)提供Phi29聚合酶；(c)提供樣品中的多核苷酸，其中該多核苷酸的一部分是雙鏈且一部分是單鏈；(d)將該多核苷酸引入兩個室之一內；將該酶引入同一室內；(e)讓該持續(xù)性DNA修飾酶與該多核苷酸結合；(f)在兩個室之間施加電勢差，藉此產(chǎn)生第一極性，該第一極性導致所述多核苷酸的單鏈部分轉位通過所述開孔到達反側，所述多核苷酸包含雙鏈體區(qū)段和至少一個無堿基插入物；(g)將該酶引入同一室內，讓該酶與該多核苷酸結合；(h)測量通過通道的電流，藉此檢測該多核苷酸中的核苷酸堿基；(i)第一次降低所述電勢差；(j)讓所述多核苷酸的單鏈部分轉位通過該開孔；測量電流的變化，(k)然后增加所述電勢差；(l)測量通過通道的電流，藉此檢測位于該開孔的特定核苷酸堿基；和(m)重復任一所述步驟，藉此確定所述多核苷酸的核苷酸序列。10.權利要求9的方法，其中該方法進一步具有：a)添加至少一個種類的ddNTP分子的步驟；或b)添加封閉寡聚體的步驟，該封閉寡聚體在引物-模板連接點處結合，由此在被捕獲在納米孔上時所述寡聚體被剝離。11.權利要求1的方法，其中在不存在游離核苷酸且不存在酶輔因子的條件下用Phi29DNA聚合酶實施步驟(a)和(b)，從而使所述Phi29DNA聚合酶隨著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔，所述方法進一步包括：(c)降低施加的跨越所述孔的電壓，從而使所述Phi29DNA聚合酶沿著與步驟(a)和(b)相反的方向移動所述靶多核苷酸通過所述孔，且所述靶多核苷酸中的核苷酸與所述孔相互作用；和(d)測量在每次相互作用期間通過所述孔的電流，藉此校讀在步驟(b)中獲得的所述靶多核苷酸的序列，其中步驟(c)和(d)也借助施加的跨越所述孔的電壓來實施。12.權利要求1的方法，其中在不存在游離核苷酸而存在酶輔因子的條件下用Phi29DNA聚合酶實施步驟(a)和(b)，從而使所述Phi29DNA聚合酶隨著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔，任選地該方法進一步包括：(c)添加游離核苷酸，使得所述Phi29DNA聚合酶以與步驟(a)和(b)相反的方向移動所述靶多核苷酸通過所述孔，且所述靶多核苷酸中的核苷酸與所述孔相互作用；和(d)測量在每次相互作用期間通過所述孔的電流，藉此校讀在步驟(b)中獲得的所述靶多核苷酸的序列，其中步驟(c)和(d)也借助施加的跨越所述孔的電壓來實施。13.權利要求1的方法，其中在存在游離核苷酸和酶輔因子的條件下用Phi29DNA聚合酶實施步驟(a)和(b)，使得所述Phi29DNA聚合酶逆著施加的電壓所產(chǎn)生的電場移動所述靶多核苷酸通過所述孔，該方法進一步包括：(c)除去所述游離核苷酸，從而使所述Phi29DNA聚合酶以與步驟(a)和(b)中相反的方向移動所述靶多核苷酸通過所述孔，且所述靶多核苷酸中的核苷酸與所述孔相互作用；和(d)測量在每次相互作用期間通過所述孔的電流，藉此校讀在步驟(b)中獲得的所述靶多核苷酸的序列，其中步驟(c)和(d)也借助施加的跨越所述孔的電壓來實施。14.權利要求4的方法，其中所述跨膜蛋白由8個如SEQIDNO:2所示的相同亞基構成。15.權利要求4的方法，其中所述跨膜蛋白是由7個如SEQIDNO:2所示的相同亞基構成的α-溶血素。