專利名稱：3－烷氧基吡啶－2－酰胺酯,它們的制備及藥用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及3-烷氧基吡啶-2-酰胺酯，它們的制備及用于抑制膠原蛋白的生物合成和作為藥物用于治療纖維變性疾病。
抑制脯氨酰羥化酶和賴氨酰羥化酶的化合物可以通過影響膠原蛋白特有的羥化反應(yīng)高度選擇性地抑制膠原蛋白的生物合成。在這個(gè)生物合成方法中，蛋白鍵合的脯氨酸或賴氨酸被脯氨酰-或賴氨酰羥化酶羥基化。如果這個(gè)反應(yīng)被抑制劑所抑制，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生功能喪失的，欠羥基化的膠原蛋白分子，只有很少量的這種分子能被細(xì)胞釋放到細(xì)胞外間隙。欠羥基化的膠原蛋白還無法與膠原蛋白的基質(zhì)整合而且容易發(fā)生蛋白降解反應(yīng)。這些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞外沉積的總的膠原蛋白的數(shù)量減少。
因此，脯氨酰羥化酶的抑制劑對于治療某些疾病是一種比較合適的物質(zhì)，在這些疾病中沉積的膠原蛋白對臨床表現(xiàn)起決定性的作用。這些疾病包括，肺，肝臟和皮膚的纖維化(燒傷，損傷和外科手術(shù)后的硬皮病和瘢痕)和動(dòng)脈粥樣硬化。
眾所周知，吡啶-2,4-和-2,5-二羧酸可以有效地抑制脯氨酰羥化酶(K.Majamaa等，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.).138(1984)239-245)。然而，在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，這些化合物只有在很高濃度的條件下才有抑制活性(Tschank,G.等，生物化學(xué)雜志.238(1987)625-633)。
專利EP-A-0 590 520和DE-A-42 38 506和EP-A-0 562512中報(bào)道的前藥吡啶-2,4(5)-二羧酸酯也已為大家所熟知。
藥物化學(xué)雜志.1992,35,2652-2658(Cunliffe等)和EP-A-0457 163中報(bào)道的N-草酰甘氨酸是脯氨酰-4-羥化酶的抑制劑。
此外，有機(jī)化學(xué)雜志.31,636-638(1966)中報(bào)道了3-羥基吡啶-2-羧酸(甘氨酸乙酯)酰胺。
因此我們的目標(biāo)是提供特征為在體內(nèi)和/或體外，尤其是當(dāng)它們?nèi)砗?或局部應(yīng)用時(shí)具有非常高的活性的化合物。
令人驚訝的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)分子式Ⅰ所示的3-烷氧基吡啶-2-酰胺酯是膠原蛋白生物合成的強(qiáng)抑制劑。本發(fā)明中的化合物是從EP-A-0650 960中報(bào)道的化合物中挑選出來的。與此歐洲專利申請中提到的化合物相比較，它們的特點(diǎn)是在體內(nèi)和體外，尤其是在全身和/或局部應(yīng)用時(shí)對纖維變性疾病有非常高的活性。這些疾病包括，例如，肺，肝，腎，心臟，眼和皮膚的纖維化和動(dòng)脈粥樣硬化。
分子式Ⅰ所示的化合物在很多不同種類的細(xì)胞中(如正常人皮膚纖維細(xì)胞，大鼠肝臟中的初級儲(chǔ)脂細(xì)胞，大鼠肝臟上皮細(xì)胞和顱蓋的器官培養(yǎng))都表現(xiàn)為對膠原蛋白生物合成的強(qiáng)列抑制。
它們尤其適用于作為膠原蛋白生物合成的抑制劑，作為抗纖維化的活性化合物來進(jìn)行局部應(yīng)用，以及局部應(yīng)用于由于結(jié)締組織(膠原蛋白)的增多引起的疾病。因此，分子式Ⅰ所示的化合物適用于，例如，局部用于防止/減少術(shù)后人體產(chǎn)生的瘢痕以及局部用于治療術(shù)后的眼部疾病，如青光眼術(shù)后的處理和放射或化療引起的纖維樣變性，尤其是應(yīng)用于肺部。
本發(fā)明涉及的化合物是分子式Ⅰ所示的相應(yīng)羧酸的酯類前藥，其中B為羧基。
分子式Ⅰ所示的化合物在活體內(nèi)(體內(nèi)實(shí)驗(yàn))和細(xì)胞培養(yǎng)(體外實(shí)驗(yàn))中裂解給出B為羧基的分子式Ⅰ所示的化合物或它的鹽。
在用分子式Ⅰ所示的化合物給藥之后，在體內(nèi)和體外都可以觀察到它們可以抑制膠原蛋白的生物合成，形成了B為羧基的分子式Ⅰ所示的化合物或它的鹽。這些化合物抑制脯氨酰-4-羥化酶并因此抑制了膠原蛋白的生物合成。
本發(fā)明涉及的化合物的結(jié)構(gòu)如分子式(Ⅰ)所示
其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C6)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為醇GOH的殘基，包括具有生理活性的鹽。
優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C6)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀(C1-C20)-烷基，或者為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀(C2-C20)-鏈烯基，及相應(yīng)的(C2-C20)-炔基，相應(yīng)的(C4-C20)-烯炔基或視黃基，其中各基團(tuán)可包含一個(gè)或多個(gè)多價(jià)鍵，或者為苯烷基，上述基團(tuán)優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)如下取代基羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，羧基，(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(C5-C8)-環(huán)烯基，(C1-C12)-烷氧基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基，苯基-(C1-C4)-烷氧基，(C1-C8)-羥烷基，(C1-C12)-烷基羰氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰氧基，苯甲酸基，苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的鹽。
此外，還優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C4)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基-(C1-C8)-烷基，支鏈或非支鏈的(C2-C18)-鏈烯基，例如，牦牛兒基，法呢基或視黃基，或相應(yīng)的(C2-C18)-炔基，芐基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，
上述基團(tuán)可包括一個(gè)如下取代基羥基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C6)-烷基羰氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰氧基，苯甲酸基或苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的鹽。
特優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C4)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基-(C1-C4)-烷基，支鏈或非支鏈的(C2-C18)-鏈烯基，芐基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，包括具有生理活性的鹽。
此外，特優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的(C1-C18)-烷基或(C2-C8)-鏈烯基，包括具有生理活性的鹽。
此外，特別優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的(C1-C18)-烷基或(C2-C18)-鏈烯基，包括具有生理活性的鹽。
特別地，優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)B為-CO2G，其中G為線性的(C1-C18)-烷基，包括具有生理活性的鹽。
最優(yōu)選分子式Ⅰ所示的化合物，其中G為線性的(C1-C16)-烷基，包括具有生理活性的鹽。
本發(fā)明還包括分子式Ⅰ所示的化合物的鹽。
吡啶環(huán)上的N原子可以與酸性試劑成鹽。
所用的試劑有，例如，甲苯磺酸，甲磺酸，鹽酸，硫酸，磷酸和含有酸性基團(tuán)的藥物。
本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的鹽用于抑制膠原蛋白的生物合成，尤其用于不同種類的細(xì)胞。
本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的鹽用于在體內(nèi)和體外抑制脯氨酰-4-羥化酶。
此外，本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的鹽用于肺，肝，腎，心臟，眼和皮膚的纖維化疾病?；衔镆部蓱?yīng)用于動(dòng)脈粥樣硬化。在此可使用全身和/或局部用藥。
本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的鹽特別適用于局部用藥，尤其是作為膠原蛋白生物合成的抑制劑，作為抗纖維化的活性化合物來進(jìn)行應(yīng)用，以及應(yīng)用于由于結(jié)締組織(膠原蛋白)的增多引起的疾病。包括用于防止/減少術(shù)后人體產(chǎn)生的瘢痕以及用于眼部手術(shù)的術(shù)后處理，如青光眼術(shù)后的處理和放射或化療引起的纖維變性，尤其是應(yīng)用于肺部。
最后，本發(fā)明涉及分子式Ⅰ所示的化合物的藥用。
本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物特別適用于局部用于皮膚，肺和眼部的纖維樣變性，特別用于青光眼的術(shù)后處理。
本發(fā)明還涉及分子式Ⅰ所示的化合物的制備方法。
分子式Ⅰ所示的化合物，其中A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代而B為CO2G，按如下方法制備ⅰ1.)分子式Ⅱ(R5=H)所示的吡啶-2-羧酸與分子式Ⅲ所示的氨基酯或它的鹽反應(yīng)得到分子式Ⅰ所示的酰胺酯；或者ⅰ2.)分子式Ⅱ(R5=C1-C16-烷基)所示的吡啶-2-羧酸酯在氨解條件下反應(yīng)得到分子式Ⅰ所示的化合物；或者ⅱ)分子式Ⅳ所示的化合物用醇GOH酯化，或者ⅲ)分子式Ⅴ所示的化合物用R4X烷基化，其中X為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素，甲磺?；?，苯磺?；?。
流程

圖1
比較適用的形成酰胺的方法(反應(yīng)ⅰ1)是羰基活化方法和大家熟知的肽化學(xué)中縮合反應(yīng)。
活化羧酸的試劑可選用本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的試劑，如亞硫酰氯，草酰氯，三甲基乙酰氯，氯甲酸酯衍生物或N,N’-羰基二咪唑。制成后分子式Ⅱ所示化合物的活化衍生物立即與分子式Ⅲ所示的酰胺衍生物反應(yīng)。
合適的縮合劑有，例如，N,N’-二環(huán)己基碳化二亞胺/N-羥基-1H-苯并三唑和N-乙基嗎啉的混合物。
合適的溶劑有，二氯甲烷，四氯化碳，乙酸丁酯，乙酸乙酯，甲苯，四氫呋喃，二甲氧基乙烷，1,4-二氧六環(huán)，乙腈，N,N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺，二甲基亞砜，硝基甲烷和/或吡啶。
本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物具有重要的藥理學(xué)性質(zhì)并且特別表現(xiàn)出抗纖維化活性。
可以通過如下動(dòng)物模型檢測抗纖維化活性Unemori,E.N.等，皮膚學(xué)研究雜志(J.Invest.Dermatol.),101:280-5,1993中報(bào)道的皮下植入的滲透性微泵周圍結(jié)締組織囊的形成，Boyle,E.,Mangan,F.R.,Br.J.Ep.Pathnol.61:351-60,1980中報(bào)道的皮下植入的“棉球”或聚乙烯海綿球的膠原蛋白含量；以及Ward,H.E.等，研究(Res.),136,15-21,1993,和Santana,A.等，美國呼吸學(xué)細(xì)胞分子生物學(xué)雜志(Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.)13:34-44,1995中報(bào)道的放射或化學(xué)引起的纖維樣變性后肺的膠原蛋白含量。
細(xì)胞培養(yǎng)中抑制脯氨酰-4-羥化酶正常人皮膚纖維細(xì)胞(NHDF)，大鼠肝臟上皮細(xì)胞(文獻(xiàn)1)和肝臟儲(chǔ)脂細(xì)胞(文獻(xiàn)2)可作為檢測化合物的細(xì)胞模型。檢測時(shí)，在抑制劑存在的條件下培養(yǎng)細(xì)胞。同時(shí)，將其間新合成的膠原蛋白用4-3H-L-脯氨酸和14C-脯氨酸來代謝標(biāo)記。被檢測的物質(zhì)對膠原蛋白羥化程度的影響可以按Chojkier等人提出的方法檢測(文獻(xiàn)3)。對照物質(zhì)選用2,2’-二吡啶。(1．:Schrode,W.,Mecke,D.,Gebhard,R.1990.在門靜脈周肝細(xì)胞內(nèi)通過與肝上皮細(xì)胞系聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)谷氨酰胺合成酶。歐洲細(xì)胞生物雜志.53:35-41,2．:Blomhoff,R.,Berg T.1990.分離和培養(yǎng)大鼠肝臟星狀細(xì)胞.Methods Enzymol.190:59-71和3．:Chojkier,M.Peterkofsky,B.,Bateman,J.1980.一種新的通過測量膠原蛋白酶消化方法中[4-3H]∶[14C]脯氨酸比例的變化來檢測脯氨酸羥基化程度的方法。生物化學(xué)分析.108:385-393)。
生物化學(xué)雜志(1994)300,525-300中介紹的在體外(雞胚胎顱蓋)抑制脯氨酰-4-羥化酶的方法1．代謝標(biāo)記從15天大小的雞胚胎上剝下顱蓋并在37℃用Hank′s平衡鹽溶液最低必要介質(zhì)伊格爾(HMEM,BioWhittaker,Walkersville,MD,USA)洗3分鐘。4個(gè)顱蓋分別在玻璃器皿中用1.5mlHMEM在37℃孵育2.5小時(shí)并加入2mM谷氨酰胺和1μCi[U-14C]脯氨酸和不同濃度的抑制劑。將樣品池放入冰中以中止孵育。移出介質(zhì)后用1ml雙蒸水快速洗滌顱蓋。然后用3ml0.5M乙酸和18μg苯甲磺酰氟處理并萃取16個(gè)小時(shí)。萃取液在4℃用0.5M乙酸滲析除去游離的[U-14C]脯氨酸然后等分并冷凍干燥。
2．羥基脯氨酸-分析1份冷干后的樣品溶于2ml 6N的鹽酸中在105℃水解24小時(shí)。蒸除鹽酸。殘余物再懸浮于300μl雙蒸水中，轉(zhuǎn)移至Eppendorf容器中再次干燥。殘余的氫氯化物加入到60μl乙醇/水/三乙胺2∶2∶1(v∶v∶v)溶液中并再次干燥進(jìn)行中和。氨基酸于室溫下在乙醇/三乙胺/苯異硫氰酸酯/水7∶1∶1∶1(v∶v∶v∶v)溶液中衍生化20分鐘后再次干燥。用高效液相色譜進(jìn)行分析，樣品溶于150μl磷酸鹽緩沖液(5mM磷酸氫二鈉，pH7.4/乙腈95∶5(v∶v)中并在10000g離心5分鐘。取50μl用于分析。高效液相色譜使用碳18反相柱Ultrasphere ODS3μm 4.6nim×7.5cm(Beckman)，在50℃下選用如下分級系統(tǒng)時(shí)間緩沖液A緩沖液B0分鐘 100％0-9分鐘 100-90％ 0-10％9-11分鐘90-0％ 10-100％11-12分鐘 0％100％12-14分鐘 0-100％100％14-19分鐘 100％溶液A:70mM乙酸鈉pH6.14/0.1％乙腈溶液B乙腈/甲醇/水45∶15∶40(v∶v∶v)3．SDS-聚丙烯酰胺-凝膠電泳從1.中得到的1份冷干的樣品溶于10mM三羥甲基氨基甲烷/鹽酸，pH8/1mM EDTA/1％SDS和5％巰基乙醇，95℃變性5分鐘，用于SDS聚丙烯酰胺-凝膠電泳。線性梯度膠(5-15％)電泳。在甲醇/冰醋酸/水3∶1∶6(v∶v∶v)中固定后干燥，然后在Kodak X-Omat膠片于-70℃曝光。
如下表所示，通過在大鼠肝細(xì)胞中進(jìn)行的抑制脯氨酰-4-羥化酶(膠原蛋白生物合成)的對照實(shí)驗(yàn)可以看出本發(fā)明涉及的化合物與EP-A-0650 960報(bào)道的化合物相比具有顯著的優(yōu)點(diǎn)表1
<p>表2
表3
對照實(shí)驗(yàn)表明該選擇本發(fā)明的本發(fā)明涉及的化合物與EP-A-0650 960報(bào)道的化合物相比，在相當(dāng)?shù)偷臐舛认?≤10μM，依實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?都顯示出高抑制率(-50％)。
化學(xué)式Ⅰ的化合物可用作制藥制劑形式的藥物，該制劑含有式Ⅰ的化合物及任選的制藥相容的載體?；衔锟捎米髦委焺?，例如，以制藥制劑的形式，將這些化合物與藥用，有機(jī)或無機(jī)賦形劑如，水，阿拉伯樹膠，明膠，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，滑石，菜油，聚二醇，凡士林等等，制成可適用于腸胃，透皮或腸外給藥，或吸入給藥的混合物。
為此，可以口服給藥，劑量為0.1至25毫克/公斤/天，優(yōu)選1至5毫克/公斤/天，或腸外給藥，劑量為0.01至5毫克/公斤/天，優(yōu)選0.01至2.5毫克/公斤/天，特優(yōu)選0.5至1.0毫克/公斤/天。在病情嚴(yán)重時(shí)，可加大劑量。然而，在許多病例中，低劑量已足夠了。這些數(shù)據(jù)以成人近似體重75公斤為基準(zhǔn)。
有機(jī)化學(xué)雜志.36,2002(1971)E.V.Brown,M.B.Shambhu報(bào)道了3-甲氧基吡啶-2-羧酸。(參見分子式Ⅱ；R1-R3=H,R4=Me,R5=H)。
此外，斯堪的納維亞化學(xué)學(xué)報(bào)(Acta Chem.Scand.)23,1791(1969)中報(bào)道了3-甲氧基吡啶-2-羧酸甲酯(參見分子式Ⅱ,R5=CH3)。
在下述的實(shí)施例中用作起始原料的3-甲氧基吡啶-2-羧酸是由4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶制得，而4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶由麥芽酚制得(參見EP-A-0 208 452和EP-A-0 304732)。
在下述的實(shí)施例中，本發(fā)明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物命名為取代的吡啶-2-羧酸(甘氨酰酯)酰胺。
這種命名可以理解為取代的吡啶-2-羧酸N-((烷氧羰基)甲基)酰胺。
按取代的N-(吡啶基-2-羰基)甘氨酸進(jìn)行分類更為可行。實(shí)施例1N-(((1-丁氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺a)3-甲氧基吡啶-2-羧酸鹽酸鹽a1.)4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶-1-氧化物11.2克(80.5毫摩爾)3-甲氧基-2-甲基-4(1H)-吡啶酮在100毫升氧氯化磷中加熱回流10小時(shí)。隨后將混合物濃縮，每次取2毫升與30毫升甲苯混合并再次濃縮，殘余物溶于150毫升水中，用碳酸鉀調(diào)pH至11后用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用水洗，干燥后除去溶劑。得到淺棕色油狀物(9克)，在二氯甲烷中用間氯過氧苯甲酸在標(biāo)準(zhǔn)條件下處理，得到8克產(chǎn)物，熔點(diǎn)88-89℃(從石油醚中)。a2.)4-氯-2-羥甲基-3-甲氧基吡啶30克(173毫摩爾)4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶N-氧化物溶于100毫升冰醋酸中，在攪拌下于80℃逐滴加入到150毫升醋酐中，混合物在110℃攪拌2小時(shí)后冷至80℃，逐滴加入200毫升甲醇，混合物加熱至沸，15分鐘后冷卻，減壓濃縮，殘余物溶于甲醇中注入到300毫升1.5N的氫氧化鈉甲醇溶液中，在20℃攪拌30分鐘后減壓濃縮，殘余物溶于水后用二氯甲烷萃取三次，有機(jī)相干燥后濃縮，殘余物用石油醚結(jié)晶。得到23克產(chǎn)品，熔點(diǎn)64至66℃。a3.)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸在20℃將52.2克(0.3摩爾)上述醇加入到24克氫氧化鉀溶于900毫升水的溶液中，于50至60℃下將70克(0.44摩爾)高錳酸鉀分步地加入到此混合物中，直至顏色褪去。在50℃攪拌1小時(shí)后，將混合物熱抽濾，濾餅用熱水洗滌三次，濾液減壓濃縮至300毫升，冷卻后用濃鹽酸調(diào)至pH1。抽濾并干燥得到50克產(chǎn)品，熔點(diǎn)121℃(不分解)。a4.)29克(0.15摩爾)上述4-氯吡啶羧酸在500毫升甲醇/四氫呋喃(1∶1)中在氫化裝置內(nèi)用Pd/C(10％)氫化。吸收3.1升氫氣后，抽濾除去催化劑，濾液濃縮后用乙酸乙酯處理結(jié)晶狀殘余物，抽濾后干燥，得29克產(chǎn)品，熔點(diǎn)170℃(分解)。b)3.8克(20毫摩爾)3-甲氧基吡啶-2-羧酸鹽酸鹽懸浮于500毫升無水二氯甲烷中，于20℃攪拌下加入6.1克(20毫摩爾)甘氨酸1-丁酯甲苯磺酸酯(由甘氨酸，1-丁醇，對甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)，然后加入7.5毫升(60毫摩爾)N-乙基嗎啉，3克(22.5毫摩爾)1-羥基-1H-苯并三唑和8.5克(20毫摩爾)N-環(huán)己基-N’-(2-嗎啉乙基)碳化二亞胺甲基對甲苯磺酸酯(CMC)，在20℃攪拌24小時(shí)。抽濾除去不溶物，濾液依次用碳酸氫鈉水溶液，1N鹽酸和水萃取。有機(jī)相干燥后減壓濃縮，殘余的油狀物研磨結(jié)晶，得到1.76克無色的目的物。熔點(diǎn)60至62℃。實(shí)施例2N-(((1-辛氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺2.5克(13毫摩爾)3-甲氧基吡啶-2-羧酸鹽酸鹽，5.5毫升(45毫摩爾)N-乙基嗎啉，2克(15毫摩爾)1-羥基-1H-苯并三唑，4.7克(13毫摩爾)甘氨酸辛酯甲苯磺酸酯(由甘氨酸，1-辛醇，對甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)，和6.3克(15毫摩爾)CMC(參看實(shí)施例1)在350無水二氯甲烷中攪拌48小時(shí)。在按實(shí)施例1)中所述的操作處理完畢后，粗產(chǎn)品用硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷(在洗脫方法中加入達(dá)2.5％的甲醇)。得到3.6克無色油狀目的物，1H-NMR(CDCl3):δ=4.26(雙峰，CH2-甘氨酸)。實(shí)施例3N-(((1-十二烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺如實(shí)施例1中所述的方法，2.8克(15毫摩爾)3-甲氧基吡啶-2-羧酸鹽酸鹽，在400毫升無水二氯甲烷中于20℃與6.2克(15毫摩爾)甘氨酸1-十二烷基酯甲苯磺酸酯(由38克(0.5摩爾)甘氨酸，93.2克(0.5摩爾)1-十二醇和115克(0.6摩爾)對甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得；140克產(chǎn)品用乙醚結(jié)晶，熔點(diǎn)約106℃,80℃熔結(jié))，8.2毫升(60毫摩爾)N-乙基嗎啉，2克(15毫摩爾)1-羥基-1H-苯并三唑和6.3克(15毫摩爾)CMC攪拌24小時(shí)。由于發(fā)生強(qiáng)烈的乳化，攪拌后，與實(shí)施例1)類似，減壓蒸除二氯甲烷后殘余物溶于乙醚。有機(jī)相用硫酸鎂干燥后減壓濃縮，得到的4.7克的黃色的油用硅膠柱層析分離，洗脫劑為乙酸乙酯。得到的4.克淺黃色的油放置兩天后用玻璃釘研磨結(jié)晶。分離得到3.6克無色目的化合物，熔點(diǎn)47至49℃。實(shí)施例4N-(((1-戊氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例5N-(((1-己氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例6N-(((1-庚氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例7N-(((1-壬氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例8N-(((1-癸氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例9N-(((1-十四烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例10N-(((1-十八烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例11N-(((1-丙氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例12N-(((2-丙氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例13N-(((1-十三烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例14N-(((1-十六烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺5.7克(30毫摩爾)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸和14.2克(30毫摩爾)甘氨酸十六烷基酯甲苯磺酸酯(熔點(diǎn)約90℃，由甘氨酸，1-十六烷醇，對甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)在300毫升二氯甲烷中按照實(shí)施例1)中的方法與7.7(60毫摩爾)N-乙基嗎啉，4.5克(33毫摩爾)1-羥基-1H-苯并三唑和12.8克(30毫摩爾)N-環(huán)己基-N’-(2-嗎啉乙基)碳化二亞胺甲基對甲苯磺酸酯(CMC)混合并攪拌24小時(shí)。抽濾除去不溶物，濾液用碳酸氫鈉水溶液，水和鹽酸萃取，有機(jī)相濃縮后殘余物(14克)溶于500毫升四氫呋喃/甲醇(1∶1)，與Pd/C(10％)混合后在氫化器中進(jìn)行氫化。
氫化完結(jié)，抽濾除去催化劑，濾液濃縮，殘余物用硅膠層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯。將適當(dāng)?shù)慕M分濃縮，殘余物用二異丙醚結(jié)晶。得到2.1克無色的目的物，熔點(diǎn)63至65℃。實(shí)施例15N-(((乙氧羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺鹽酸鹽a)N-(((乙氧羰基)甲基)-4-氯-3-甲氧基吡啶-2-酰胺4.7克(25毫摩爾)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸懸浮于200毫升無水二氯甲烷中，于20℃在攪拌下接連與3.5克(25毫摩爾)甘氨酸乙酯鹽酸鹽，6.4毫升(50毫摩爾)N-乙基嗎啉，3.8克(28毫摩爾)1-羥基-(1H)-苯并三唑和5.15克(25毫摩爾)N,N’-二環(huán)己基碳化二亞胺混合并在20℃攪拌20小時(shí)。抽濾除去不溶物，有機(jī)相與飽和碳酸鈉水溶液振搖，干燥后減壓濃縮，殘余物(6克油)用硅膠層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯。得到5.4克油狀產(chǎn)品。b)將上述化合物用Pd/C(10％)在氫化器中氫化得到目的物，熔點(diǎn)141至142℃(產(chǎn)生氣體，從乙醚中)。實(shí)施例16N-(((2-壬氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺外消旋體2.5克(10毫摩爾)N-(羧甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺鹽酸鹽(熔點(diǎn)157℃，產(chǎn)生氣體)懸浮于100毫升無水四氫呋喃中并與1.6毫升(12毫摩爾)三乙胺混合，然后在攪拌下逐滴加入2.4克三甲基乙酰氯溶于少量四氫呋喃的溶液(溫度升至35-40℃)。30分鐘后，混合物減壓濃縮，紅色的殘余物溶于100毫升無水四氫呋喃中與1.6毫升三乙胺混合，將混合物在20℃加入到2-壬醇鈉的2-壬醇溶液(由30毫升2-壬醇和0.8克(20毫摩爾)氫化鈉制得)。1小時(shí)后，混合物減壓濃縮，殘余物與二氯甲烷混合，用2N氯化銨水溶液萃取，有機(jī)相干燥后減壓濃縮，殘余物(9克)用硅膠層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯。得到1.1克無色油狀目的化合物，1H-NMR(DMSO):δ=3.95(雙峰，CH2-甘氨酸)。實(shí)施例17N-(((4-庚氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺
2.5克(10毫摩升)N-(羧甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺鹽酸鹽按實(shí)施例16的方法處理后在20℃加入到140毫升4-庚醇鈉的4-庚醇溶液(由140毫升4-庚醇和0.6克(25毫摩爾)鈉在超聲儀中制得)。30分鐘后，混合物在70至80℃加熱1小時(shí)，冷卻后減壓濃縮，殘余物溶于水，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相減壓濃縮并用油泵干燥。油狀粗產(chǎn)品在約15小時(shí)后結(jié)晶，熔點(diǎn)75-78℃。實(shí)施例18N-(((3-戊氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例19N-(((1-(順式-9-十八烯基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例20N-(((1-(反式-3-己烯基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例21N-(((1-(3-甲丁基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺實(shí)施例22N-((甲氧羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺
權(quán)利要求
1．分子式Ⅰ所示的化合物
其中R1,R2和R3為H，R4為(C1-C6)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為醇GOH的基團(tuán)，包括具有生理活性的鹽。
2．如權(quán)利要求1中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C6)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀(C1-C20)-烷基，或者為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀(C2-C20)-鏈烯基，及相應(yīng)的(C2-C20)-炔基，相應(yīng)的(C4-C20)-烯炔基或視黃基，其中基團(tuán)可包含一個(gè)或多個(gè)多價(jià)鍵，或者為苯烷基，上述基團(tuán)優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)如下取代基羥基，鹵素，氰基，三氟甲基，羧基，(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基，(C5-C8)-環(huán)烯基，(C1-C12)-烷氧基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基，苯基-(C1-C4)-烷氧基，(C1-C8)-羥烷基，(C1-C12)-烷基羰氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰氧基，苯甲酸基，苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的鹽。
3．如權(quán)利要求1或2中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C4)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基-(C1-C8)-烷基，支鏈或非支鏈的(C2-C18)-鏈烯基，例如，牦牛兒基，法呢基或視黃基，或相應(yīng)的(C2-C18)-炔基，芐基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，上述基團(tuán)可包括如下取代基羥基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C6)-烷基羰氧基，(C3-C8)-環(huán)烷基羰氧基，苯甲酸基或苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的鹽。
4．如權(quán)利要求1至3中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為(C1-C4)-烷基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的或環(huán)狀脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-環(huán)烷基-(C1-C4)-烷基，支鏈或非支鏈的(C2-C18)-鏈烯基，芐基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，包括具有生理活性的鹽。
5．如權(quán)利要求1至4中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基替代，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的(C1-C18)-烷基或(C2-C8)-鏈烯基，包括具有生理活性的鹽。
6．如權(quán)利要求1至5中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)，而B為-CO2G，其中G為支鏈或非支鏈的(C1-C18)-烷基或(C2-C18)-鏈烯基，包括具有生理活性的鹽。
7．如權(quán)利要求1至6中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3為H,R4為甲基，A為-CH2-基團(tuán)B為-CO2G，其中G為線性的(C1-C18)-烷基，包括具有生理活性的鹽。
8．一種用于制備如權(quán)利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物的方法，其中A為-CH2-基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子可以被甲基取代，而B為CO2G，此方法包括ⅰ1.)分子式Ⅱ(R5=H)所示的吡啶-2-羧酸與分子式Ⅲ所示的氨基酯或它的鹽反應(yīng)得到分子式Ⅰ所示的酰胺酯；或者ⅰ2.)分子式Ⅱ(R5=(C1-C16-烷基)所示的吡啶-2-羧酸酯在氨解條件下反應(yīng)得到分子式Ⅰ所示的化合物；或者
ⅱ)分子式Ⅳ所示的化合物用醇GOH酯化，或者
ⅲ)分子式Ⅴ所示的化合物用R4X烷基化，其中X為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素，甲磺酸基，苯磺?；?br> 9．如權(quán)利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于在體內(nèi)抑制脯氨酰-4-羥化酶。
10．如權(quán)利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于抑制膠原蛋白的生物合成。
11．如權(quán)利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于防止/減少在人體器官疾病(纖維變性疾病)中結(jié)締組織(膠原蛋白)的沉積。
12．如權(quán)利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于纖維變性疾病。
13．如權(quán)利要求12中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于肺部，肝臟，腎，心臟，眼部和皮膚的纖維變性疾病和動(dòng)脈粥樣硬化。
14．如權(quán)利要求12和13中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于局部和/或全身。
15．如權(quán)利要求14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于防止/減少術(shù)后人體產(chǎn)生的瘢痕。
16．如權(quán)利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于皮膚結(jié)締組織增生(纖維樣變性)的病例中。
17．如權(quán)利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于(吸入)肺部結(jié)締組織增生(纖維樣變性)的病例中。
18．如權(quán)利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于眼部結(jié)締組織增生(纖維樣變性)的病例中。
19．如權(quán)利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于青光眼術(shù)后的眼部處理。
20．如權(quán)利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于放射或化療引起的纖維樣變性，尤其是應(yīng)用于肺部纖維樣變性。
21．一種包含一種或多種如權(quán)利要求1至8中所述的分子式Ⅰ所示的化合物的藥物。
22．化合物在抑制脯氨酰-4-羥化酶和纖維變性疾病中的應(yīng)用。
全文摘要
如分子式(Ⅰ)所示的3－烷氧基吡啶－2－酰胺酯,其中R
文檔編號C07D213/00GK1216981SQ96180274
公開日1999年5月19日 申請日期1996年4月30日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月30日
發(fā)明者K·維德曼, K－H·巴林哈斯, G·特斯查克, M·比克爾 申請人:赫徹斯特股份公司