專(zhuān)利名稱(chēng)：?jiǎn)苇h(huán)雜芳基化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一族新的炔類(lèi)雜芳基化合物及其在治療癌癥、骨病、代謝疾病和炎性疾病和其它疾病中的用途。


發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明化合物的概述 本發(fā)明化合物具有廣泛有用的生物學(xué)和藥理學(xué)活性，從而涉及這些化合物在藥物組合物中的用途和治療下述疾病的方法代謝疾病、骨病(例如骨質(zhì)疏松癥、佩吉特病等)、炎癥(包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其它炎性疾病)和癌癥(包括實(shí)體瘤和白血病，尤其是那些由一個(gè)或多個(gè)激酶如Src或kdr介導(dǎo)的，或由激酶例如Abl及其突變體失調(diào)介導(dǎo)的癌癥)，包括晚期病例和對(duì)一種或多種其它治療抵抗或耐受的病例。
包括式I的化合物、其互變異構(gòu)體、單個(gè)異構(gòu)體、異構(gòu)體的混合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物
式I 其中 環(huán)T代表5-元單環(huán)雜芳基環(huán)，其包含1-3個(gè)選自O(shè)、N、S的雜原子并任選地被1-3個(gè)Rt基團(tuán)取代； 環(huán)A代表5-或6-元芳基或雜芳基環(huán)并且其任選地被1-4個(gè)Ra基團(tuán)取代； 環(huán)B代表5-或6-元芳基或雜芳基環(huán)并且其任選地被1-5個(gè)Rb基團(tuán)取代； L1選自NR1C(O)和C(O)NR1； 在每種情況下，Ra、Rb和Rt獨(dú)立地選自鹵素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR4)(YR4)、-Si(R4)3、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y獨(dú)立地是化學(xué)鍵、-O-、-S-或-NR3-； R1、R2和R3獨(dú)立地選自H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基； 或者，NR2R3基團(tuán)可以是5-或6-元飽和的、部分飽和的或不飽和的環(huán)，其可任選地被取代并且其含有0-2個(gè)選自N、O和S(O)r的其它雜原子； 在每種情況下，R4獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基； 前述的各個(gè)烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被取代； m是0、1、2、3或4； n是0、1、2或3； p是0、1、2、3、4或5；和 r是0、1或2。
除非另有說(shuō)明，下面進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明并例舉了前述的定義，并且這些定義適用于后面所有的情況。
2.特征類(lèi)型的化合物及其一般用途 在本發(fā)明化合物中，環(huán)T在1個(gè)至3個(gè)環(huán)原子(其可以是碳和/或雜原子)上任選地被獨(dú)立地選自Rt的基團(tuán)取代。例如，環(huán)T可選自，但不限于下述類(lèi)型
其中n是0、1、2或3。應(yīng)理解取代基Rt的總數(shù)不超過(guò)正?？捎玫幕蟽r(jià)。因此，例如當(dāng)環(huán)T是吡咯環(huán)時(shí)，其可任選地被1至3個(gè)取代基取代(即n是0、1、2或3)，然而當(dāng)環(huán)T是吡唑或咪唑時(shí)，其可任選地被最多2個(gè)取代基取代(即n是0、1或2)。還應(yīng)理解除非另有說(shuō)明，當(dāng)環(huán)T未被取代時(shí)，則存在氫原子以滿(mǎn)足所需的化合價(jià)。
上述化合物的示例包括其中環(huán)T是如下的化合物
如同在本發(fā)明的所有化合物中，對(duì)于前述的化合物種類(lèi)和小類(lèi)，環(huán)A和環(huán)B如前述部分1中所定義。
取代的環(huán)A的示例為
環(huán)B代表如前述部分1中所定義的5或6-元芳基或雜芳基環(huán)。
取代的環(huán)B的示例為
特別有意義的是如上述部分1中所述的另一類(lèi)式I的化合物，其中Rb取代基中之一是5-或6-元環(huán)(環(huán)C)，該環(huán)可以是雜芳基或雜環(huán)基，其包含碳原子和1-3個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N、和S(O)r的雜原子，環(huán)C在碳或雜原子上任選地被1至5個(gè)取代基Rc取代。
該類(lèi)表示為式II化合物、其互變異構(gòu)體、單個(gè)異構(gòu)體、異構(gòu)體的混合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物
其中前述定義的變量如n、m、A、B、T、L1、R1、Rt、Ra和Rb如上面部分1中所定義；并且 在每種情況下，Rc選自鹵素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-Si(R4)3、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR4)(YR4)、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y、r、R2、R3和R4如前面部分1中所定義；t是0、1、2、3或4和v是0、1、2、3、4或5。
任選地被1-5個(gè)Rc基團(tuán)取代的環(huán)C體系的示例包括但不限于下述類(lèi)型
其中v和Rc如上所定義并且取代基Rc的總數(shù)不超過(guò)正常的化合價(jià)。
該類(lèi)具體的非限制性示例包括下述化合物
其中說(shuō)明了多種示例的-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]-[環(huán)C]部分。
有意義的化合物還包括式II化合物，其中環(huán)C是未取代或被一個(gè)或多個(gè)Rc基團(tuán)取代的雜芳基環(huán)。目前特別有意義的是其中環(huán)C是咪唑環(huán)的這一小類(lèi)化合物。更有意義的是其中環(huán)C具有單個(gè)低級(jí)烷基(如甲基)Rc基團(tuán)的這一小類(lèi)化合物。
本發(fā)明的另一特征涉及如部分1中所述的式I化合物，其中Rb取代基之一是-[L2]-[環(huán)D]。該類(lèi)由式III表示
其中變量如n、m、環(huán)T、環(huán)A、環(huán)B、L1、R1、Rt、Ra和Rb如前面部分1中所定義， L2選自(CH2)z、O(CH2)x、NR3(CH2)x、S(CH2)x和(CH2)xNR3C(O)(CH2)x，并且所述連接基團(tuán)L2可以以任一方向連接； 環(huán)D代表包含碳原子和1-3個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N和S(O)r的雜原子的5-或6-元雜環(huán)或雜芳基環(huán)，并且環(huán)D在碳或雜原子上任選地被1-5個(gè)Rd基團(tuán)取代； 在每種情況下，Rd獨(dú)立地選自鹵素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-Si(R4)3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR2)(YR2)、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y、r、R2、R3和R4如前面部分1中所定義； w是0、1、3、4或5； x是0、1、2或3； z是1、2、3或4；和 t是0、1、2、3或4。
式III化合物中-[環(huán)B]-[L2]-[環(huán)D]部分的非限制性示例包括

該類(lèi)具體的非限制性示例包括下述化合物
有意義的化合物還包括式III化合物，其中環(huán)D是雜環(huán)，例如哌嗪環(huán)，其在氮上任選地被Rd取代和L2是-CH2。目前特別有意義的是其中Rd是取代或未取代的低級(jí)烷基(即，1-6個(gè)碳的烷基)的這一小類(lèi)化合物。
其它有意義的化合物還包括式III化合物，其中環(huán)D是雜芳基環(huán)，其未取代或被一個(gè)或多個(gè)Rd基團(tuán)取代。
用于本發(fā)明的特別有意義的是其中環(huán)A和B是芳基的式II和III化合物。
其它有意義的化合物是式II和III化合物，其中環(huán)T任選地被一個(gè)或多個(gè)Rt基團(tuán)取代，Rt選自鹵素、低級(jí)烷基、烷氧基、氨基、-NH-烷基、-C(O)NH2、-C(O)O-烷基、-C(O)NH-烷基、-NHC(O)-烷基、-NHC(O)-雜環(huán)、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(O)NH-(CH2)x雜環(huán)、-NHC(NH)-烷基、-NHC(NH)NH2、-NHC(NH)O-烷基、-NH(CH2)x-雜芳基、-NH(CH2)x-雜環(huán)、-NH(CH2)x-芳基或-(CH2)xC(O)NH2，其中x是0-3的整數(shù)，且烷基包括直鏈(即未分支的或無(wú)環(huán)的)、支鏈和環(huán)狀的烷基并且被任選取代，和其中芳基、雜芳基、雜環(huán)基環(huán)任選地被取代。
該小類(lèi)非限制性示例包括式II和III化合物，其中環(huán)T是下述之一
目前有意義的小類(lèi)包括式IIa、IIb、IIc、IIIa、IIIb、IIIc化合物
式IIa 式IIb
式IIc式IIIa
式IIIb 式IIIc 其中前述定義的變量如Ra、Rb、Rc、Rd和Rt、n、m、和t如前述如部分1中定義，并且其中(Rd)0-1代表0-1個(gè)Rd基團(tuán)。當(dāng)環(huán)D未取代時(shí)，對(duì)于專(zhuān)業(yè)人員顯而易見(jiàn)的是氫原子代替所述的Rd基團(tuán)以滿(mǎn)足所需的化合價(jià)。取代基Rt、Rc和Rd的數(shù)量不超過(guò)正常的化合價(jià)。
特別有意義的是式II和III小類(lèi)化合物，其中環(huán)T是任選被一個(gè)或多個(gè)Rt取代的咪唑。特別有意義的化合物是其中Rt不存在或Rt獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的化合物鹵素、低級(jí)烷基、烷氧基、氨基、-NH-烷基、-C(O)NH2、-C(O)NH-烷基、-NHC(O)-烷基、-NHC(O)NH-烷基、-NHC(NH)-烷基、-NHC(O)CH2N(烷基)2、-NHC(NH)NH2或(CH2)C(O)NH2，其中烷基包括直鏈(即未分支的或無(wú)環(huán)的)、支鏈和環(huán)狀的烷基并且被任選取代。
該小類(lèi)非限制性示例是其中取代的環(huán)T是如下基團(tuán)的化合物
特別有意義的一類(lèi)化合物包括式IIa、IIb、和IIc化合物，其中m是1，t是1，v是1，Rt獨(dú)立地不存在或Rt選自-C(O)NH2、-C(O)NH烷基、NH2、和低級(jí)烷基，如-CH3；Ra是低級(jí)烷基，如-CH3；Rb是異丙基或CF3和Rc不存在或是甲基。
有意義的另一小類(lèi)化合物包括式IIIa、IIIb、和IIIc化合物，其中m是1，t是1，Rt獨(dú)立地不存在或選自-C(O)NH2、-C(O)NH烷基、NH2、和低級(jí)烷基，如-CH3；Ra是低級(jí)烷基，如-CH3；Rb是異丙基或CF3和Rd是甲基或CH2CH2OH。
尤其關(guān)注的本發(fā)明的化合物包括具有一種或多種下述特征的化合物 ·分子量小于1000，優(yōu)選小于750，更優(yōu)選小于600質(zhì)量單位(不包括任何溶劑化或共結(jié)晶物質(zhì)的重量，當(dāng)為鹽時(shí)不包括任何反離子的重量)；或 ·對(duì)抗野生型或突變(尤其是臨床相關(guān)的變異)的激酶的抑制活性，所述激酶尤其為Src家族激酶，如Src、Yes、Lyn或Lck；VEGF-R如VEGF-R1(Flt-1)、VEGF-R2(kdr)或VEGF-R3；PDGF-R；Abl激酶或其它所關(guān)注的激酶，所述抑制活性為IC50值為1μM或更小(使用任何科學(xué)上可接受的激酶抑制試驗(yàn)測(cè)定)，優(yōu)選的IC50值為500nM或更好(better)，且最佳IC50值為250nM或更好；或 ·對(duì)抗給定激酶的抑制活性，IC50值至少低于對(duì)其它關(guān)注激酶的IC50值的1/100；或 ·對(duì)抗Src和kdr的抑制活性，對(duì)每個(gè)激酶的IC50值為1μM或更好；或 ·對(duì)體外保持的癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性或生長(zhǎng)的抑制作用，或在動(dòng)物研究中使用科學(xué)上可接受的癌細(xì)胞異種移植模型的細(xì)胞毒性或生長(zhǎng)抑制作用(尤其優(yōu)選抑制培養(yǎng)的K562細(xì)胞增殖的本發(fā)明的化合物，通過(guò)比較研究測(cè)定，所述化合物的作用至少與格列衛(wèi)(Gleevec)相同，優(yōu)選為格列衛(wèi)的至少兩倍，且更優(yōu)選為格列衛(wèi)的至少10倍)。
本發(fā)明也提供了組合物，其包含至少一種本發(fā)明的化合物或其鹽、水合物或其它溶劑合物，和至少一種藥學(xué)可接受的賦形劑或添加劑?？梢韵蛩枋苤委熣呓o藥所述組合物以抑制癌癥的生長(zhǎng)、發(fā)展和/或轉(zhuǎn)移，所述癌癥包括實(shí)體瘤(如，乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、CNS和頭頸癌等)和多種形式的白血病，包括對(duì)其它治療抵抗(包括對(duì)格列衛(wèi)或其它激酶抑制劑抵抗)的白血病和其它癌癥，所述組合物通常用于治療和預(yù)防由一種或多種激酶介導(dǎo)的疾病或不希望的病癥，所述激酶被本發(fā)明的化合物抑制。
本發(fā)明的癌癥治療方法涉及向所需要的人或動(dòng)物給藥(作為單一療法或與一種或多種其它抗癌藥物、一種或多種改善副作用的藥物、放療等組合)治療有效量的本發(fā)明的化合物以抑制、減慢或逆轉(zhuǎn)受治療者中癌癥的生長(zhǎng)、發(fā)展或擴(kuò)散，所述癌癥包括實(shí)體瘤或其它形式的癌癥，如白血病。所述給藥構(gòu)成治療或預(yù)防由一種或多種激酶介導(dǎo)的疾病的方法，所述激酶被本發(fā)明所公開(kāi)的化合物或其藥學(xué)可接受衍生物中的一種抑制。“給藥”本發(fā)明的化合物包括向受治療者給予本文所述種類(lèi)的化物，或其前藥或其它藥學(xué)可接受的衍生物，使用如本文所述的任何合適的制劑或給藥途徑。一般每月給藥所述化合物一次或多次，通常每周一次或多次，例如每天、隔天、5天/周等?，F(xiàn)在尤其關(guān)注的是口服給藥和靜脈給藥。
本文所用的詞語(yǔ)“藥學(xué)可接受的衍生物”表示所述化合物的任何藥學(xué)可接受的鹽、酯、或該酯的鹽、或任何其它加成產(chǎn)物或衍生物，當(dāng)將其向病人給藥后能夠提供(直接或間接)本文所述的其他形式化合物，或其代謝產(chǎn)物或殘余物(MW>300)。因此藥學(xué)可接受的衍生物包括前藥。前藥為化合物的衍生物通常具有明顯降低的藥理學(xué)活性，前藥含有其它在體內(nèi)易于除去的部分而產(chǎn)生作為藥理學(xué)活性物質(zhì)的母體分子。前藥的實(shí)例為在體內(nèi)裂解產(chǎn)生所關(guān)注化合物的酯。多種化合物的前藥，和使母體化合物衍生以產(chǎn)生前藥的材料和方法是已知的，且適用于本發(fā)明。
尤其感優(yōu)選的母體化合物的衍生物和前藥是那些當(dāng)向哺乳動(dòng)物給藥時(shí)能夠相對(duì)于母體化合物增加化合物的生物利用度的衍生物和前藥(如通過(guò)口服后增加進(jìn)入血液的吸收度)或那些相對(duì)于母體化合物增加向所關(guān)注的生物學(xué)隔室的遞送(例如腦或淋巴系統(tǒng))。優(yōu)選的前藥包括相對(duì)于母體化合物具有增加的水溶性或通過(guò)腸道膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性物質(zhì)的本發(fā)明組合物的衍生物。
本發(fā)明的一個(gè)重要方面為治療有需要的受治療者癌癥的方法，該方法包括向受治療者給藥治療有效量的含有本發(fā)明化合物的組合物?？梢杂纱酥委煹母鞣N癌癥在本文的其它地方描述，且還包括所提到的或已變成對(duì)其它抗癌藥物抵抗的癌癥，所述其它抗癌藥物如格列衛(wèi)、易瑞沙、特羅凱或本文所述的其它藥物中的一種。治療可以與一種或多種其它癌癥療法組合，所述其它療法包括手術(shù)、放療(如γ-輻射、中子束放療、電子束放療、質(zhì)子療法、近距離放射療法、和全身放射性同位素等)、內(nèi)分泌療法、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(如干擾素類(lèi)、白介素、和腫瘤壞死因子(TNF))、過(guò)熱療法、冷凍療法、減弱任何不良作用的藥物(如止吐藥)、和其它癌癥化療藥物。其它藥物可以使用制劑給藥，給藥途徑和給藥方案與本發(fā)明的化合物相同或不同。
所述其它藥物包括但不限于一種或多種下述藥物抗癌烷化劑或嵌入試劑(如氮芥、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、美法侖、和異環(huán)磷酰胺)；抗代謝藥(如甲氨蝶呤)；嘌呤拮抗劑或嘧啶拮抗劑(如6-巰嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、和吉西他濱)；紡錘體抑制劑(如長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、和紫杉醇)；鬼臼毒素(如依托泊苷、伊立替康、托泊替康)；抗生素(如多柔比星、博萊霉素、和絲裂霉素)；亞硝基脲類(lèi)(如卡莫司汀、洛莫司汀)；無(wú)機(jī)離子(如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑或oxiplatin)；酶(如天冬酰胺酶)；激素(如他莫昔芬、亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)；mTOR抑制劑(如西羅莫司(雷帕霉素)、Temsirolimus(CCI779)、依維莫司(RAD001)、AP23573或公開(kāi)于美國(guó)專(zhuān)利7,091,213中的其它化合物)；蛋白酶體抑制劑(如萬(wàn)珂、其它蛋白酶體抑制劑(參見(jiàn)例如WO02/096933)，或其它NF-kB抑制劑，包括例如IkK抑制劑)；其它激酶抑制劑(如Src、BRC/Abl、kdr、flt3、aurora-2、糖原合成酶激酶3(“GSK-3”)、EGF-R激酶(如易瑞沙、特羅凱等)、VEGF-R激酶、PDGF-R激酶等的抑制劑)；抗體、可溶性受體或抵抗癌癥中涉及的受體或激素的其它受體拮抗劑(包括受體如EGFR、ErbB2、VEGFR、PDGFR和IGF-R；和藥物如赫賽汀、阿瓦斯丁、愛(ài)必妥等)；等等。為了更全面說(shuō)明最新的癌癥療法，參見(jiàn)http://www.nci.nih.gov/，F(xiàn)DA批準(zhǔn)的腫瘤學(xué)藥物的列表在http://www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm，和The Merck Manual，第17版1999，全部?jī)?nèi)容在此引用作為參考。其它治療藥物的實(shí)例如本文其它地方所述，且包括別嘌醇、alemtuzmab、六甲密胺、氨磷汀、nastrozole、對(duì)抗前列腺特異性膜抗原的抗體(如MLN-591、MLN591RL和MLN2704)、三氧化二砷、貝沙羅汀、博萊霉素、白消安、卡培他濱、Gliadel Wafer、塞來(lái)考昔、苯丁酸氮芥、順鉑-腎上腺素凝膠、克拉曲濱、阿糖胞苷脂質(zhì)體、柔紅霉素脂質(zhì)體、柔紅霉素、紅比霉素、右雷佐生、多西紫杉醇、多柔比星、Elliott′sB溶液、表柔比星、磷雌氮芥、磷酸依托泊苷、依托泊苷、依西美坦、氟達(dá)拉濱、5-FU、氟維司群、吉西他濱、吉姆單抗-奧佐米星、醋酸戈舍瑞林、羥基脲、伊達(dá)比星、伊達(dá)比星、去甲氧柔紅霉素、異環(huán)磷酰胺、甲磺酸伊馬替尼、伊立替康(或其它拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括抗體如MLN576(XR11576))、來(lái)曲唑、亞葉酸鈣、亞葉酸鈣左旋咪唑、脂質(zhì)體柔紅霉素、美法侖、L-PAM、美司鈉、甲氨蝶呤、甲氧沙林、絲裂霉素C、米托蒽醌、MLN518或MLN608(或其它flt-3受體酪氨酸激酶、PDFG-R或c-kit的抑制劑)、itoxantrone、紫杉醇、培加酶、噴他司丁、卟吩姆鈉、利妥昔單抗

、滑石、他莫昔芬、temozolamide、替尼泊昔、VM-26、托泊替康、托瑞米芬、2C4(或干擾HER2-介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的其它抗體)、維甲酸、ATRA、戊柔比星、長(zhǎng)春瑞濱、或氨羥二磷酸二鈉、唑來(lái)二磷酸二鈉或其它二磷酸鹽。
本發(fā)明還包括任何式I、II、III、IIa、IIb、IIc、IIIa、IIIb、IIIc化合物或任何其它本發(fā)明的化合物的制劑。
本發(fā)明也包括本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物在制備用于治療急性或慢性癌癥(包括白血病和實(shí)體瘤，原發(fā)的或轉(zhuǎn)移的，包括本文其它地方所述的癌癥且包括對(duì)一種或多種其它治療抵抗或耐受的癌癥)的藥物中的用途。本發(fā)明的化合物用于制備抗癌藥物。本發(fā)明的化合物也用于制備用于通過(guò)抑制一種或多種激酶(如Src、kdr、abl等)緩解或預(yù)防病癥的藥物。
可用本發(fā)明的化合物治療的其它病癥包括代謝疾病、炎性疾病和骨質(zhì)疏松癥及其它骨病癥。在這些病例中，本發(fā)明的化合物可以用作單一療法或與對(duì)于該病癥的其它藥物，如在骨質(zhì)疏松癥或其它骨相關(guān)的疾病中的二膦酸鹽組合給藥。
本發(fā)明還包括含本發(fā)明化合物的組合物，該組合物包括任何所述類(lèi)型或亞類(lèi)的化合物，包括上述任何化學(xué)式的化合物等，優(yōu)選所述化合物的量為治療有效量，和至少一種藥學(xué)可接受的載體、佐劑或稀釋劑。
本發(fā)明的化合物也用作表征各種激酶的標(biāo)準(zhǔn)物和試劑，所述激酶尤其為但不限于kdr和Src家族的激酶，且本發(fā)明的化合物也用于研究這些激酶在生物學(xué)和病理學(xué)現(xiàn)象中的作用；用于研究通過(guò)這些激酶介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)到途徑，以比較評(píng)估新的激酶抑制劑；且用于研究細(xì)胞系和動(dòng)物模型中的多種癌癥。
3.定義 讀這篇文件時(shí)，除另有說(shuō)明，都使用下述信息和定義。而且，除另有說(shuō)明，所有出現(xiàn)的官能團(tuán)都是獨(dú)立地被選擇的，有時(shí)通過(guò)使用斜杠標(biāo)記或涂上底色提醒讀者，以簡(jiǎn)單表示兩次出現(xiàn)可以相同或不同(例如R、R’、R”，或Y、Y’、Y”等)。
術(shù)語(yǔ)“烷基”是指包括直鏈(即非支鏈或非環(huán)狀)、支鏈、環(huán)狀或多環(huán)非芳香烴基，其任選被一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)取代。除非另有說(shuō)明，“烷基”包含1-8個(gè)，且優(yōu)選1-6個(gè)碳原子。C1-6烷基是指包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基。低級(jí)烷基是指含1-6個(gè)碳原子的烷基。烷基的實(shí)例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丁基、戊基、異戊基、叔戊基、環(huán)戊基、己基、異己基、環(huán)己基等。烷基可以被取代或未被取代。示例性的取代烷基包括，但不限于，氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羥基甲基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、芐基、取代的芐基、苯乙基、取代的苯乙基等。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示烷基的亞類(lèi)，其中烷基如上述定義，通過(guò)氧橋連接所示數(shù)量的碳。例如，“烷氧基”是指基團(tuán)-O-烷基，其中所述烷基含有1-8個(gè)碳原子，其可以是直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)。“烷氧基”的實(shí)例包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基、s-戊氧基等。
“鹵代烷基”包括支鏈和直鏈的飽和烴，該烴具有一個(gè)或多個(gè)被鹵素取代的碳。鹵代烷基的實(shí)例包括，但不限于，三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基等。
術(shù)語(yǔ)“烯基”是指包括直鏈、支鏈或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烴鏈，該烴鏈在鏈或環(huán)的任何穩(wěn)定的位點(diǎn)具有一個(gè)或多個(gè)不飽和的碳-碳鍵。除非另有說(shuō)明，“烯基”一般具有2-8個(gè)，通常2-6個(gè)碳原子。例如，“烯基”可以指丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基、己-5-烯基、2，3-二甲基丁-2-烯基等。而且，烯基可以被取代或未被取代。
術(shù)語(yǔ)＂炔基＂包括直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)的烴鏈，該烴鏈在鏈的任何穩(wěn)定位點(diǎn)具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵。除非另有說(shuō)明，“炔基”具有2-8，優(yōu)選2-6個(gè)碳。“炔基”的實(shí)例包括，但不限于丙-2-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、己-2-炔基、己-5-炔基等。而且，炔基可以被取代或未被取代。
環(huán)烷基為烷基的亞類(lèi)，且包括任何穩(wěn)定的3-13個(gè)碳原子的環(huán)狀或多環(huán)烴基，任何碳原子都是飽和的。這些環(huán)烷基的實(shí)例包括，但不限于，環(huán)丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二環(huán)辛烷、[4.4.0]二環(huán)癸烷等，當(dāng)作為其它烷基部分時(shí)可以任選被取代。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”可以與術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)基”互換使用。
環(huán)烯基為烯基的亞類(lèi)，且包括任何穩(wěn)定的環(huán)狀或多環(huán)烴基，該烴基具有3-13個(gè)碳原子，優(yōu)選5-8個(gè)碳原子，該烴基在環(huán)的任何位點(diǎn)含有一個(gè)或多個(gè)不飽和的碳-碳雙鍵。這些環(huán)烯基的實(shí)例包括，但不限于，環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基等。
環(huán)炔基為炔基的亞類(lèi)，且包括任何穩(wěn)定的5-13個(gè)碳原子的環(huán)狀或多環(huán)烴基，該烴基在環(huán)的任何位點(diǎn)含有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵。當(dāng)作為其它烯基和炔基部分時(shí)，環(huán)烯基和環(huán)炔基可任選被取代。
本文所用的＂雜環(huán)＂、＂雜環(huán)基＂或＂雜環(huán)的(heterocyclic)＂是指具有5-14個(gè)，優(yōu)選5-10個(gè)環(huán)原子的非芳香環(huán)體系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳，優(yōu)選1-4個(gè)環(huán)碳被如N、O或S的雜原子替代。雜環(huán)基非限制性實(shí)例包括3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代)-2-氧代-苯并咪唑-3-基、2-四氫呋喃基、3-四氫呋喃基、2-四氫噻吩基、3-四氫噻吩基、2-嗎啉基、3-嗎啉基、4-嗎啉基、2-硫嗎啉基、3-硫嗎啉基、4-硫嗎啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、偶氮環(huán)戊烯基(diazolonyl)、N-取代的偶氮環(huán)戊烯基、1-苯并吡咯烷酮(1-phthalimidinyl)、苯并噁烷基(benzoxanyl)、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧雜環(huán)戊基、苯并硫雜環(huán)戊基(benzothiolanyl)和苯并噻烷基(benzothianyl)。如本文所述的術(shù)語(yǔ)＂雜環(huán)的＂或＂雜環(huán)基＂的范圍內(nèi)也包括下述基團(tuán)，其中非芳香含雜原子的環(huán)稠合到一個(gè)或多個(gè)芳香或非芳香環(huán)上，如在二氫吲哚基、色滿(mǎn)基、菲啶基或四氫喹啉基中，其中連接基團(tuán)或連接點(diǎn)在非芳香含雜原子的環(huán)上。術(shù)語(yǔ)＂雜環(huán)＂、＂雜環(huán)基＂或＂雜環(huán)的＂無(wú)論飽和或部分飽和也涉及任選被取代的環(huán)。
單獨(dú)使用或作為較大基團(tuán)(如＂芳烷基＂、＂芳烷氧基＂或＂芳氧基-烷基＂中)一部分使用的術(shù)語(yǔ)＂芳基＂是指具有6-14個(gè)環(huán)原子的芳香環(huán)基團(tuán)，如苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。＂芳基＂環(huán)可含有一個(gè)或多個(gè)取代基。術(shù)語(yǔ)“芳基”可與術(shù)語(yǔ)＂芳基環(huán)＂互換使用。＂芳基＂也包括稠合的多環(huán)芳香環(huán)體系，其中芳香環(huán)稠合到一個(gè)或多個(gè)環(huán)上。有用的芳基環(huán)基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括苯基、羥基苯基、鹵代苯基、烷氧基苯基、二烷氧基苯基、三烷氧基苯基、亞烷基二氧基苯基、萘基、菲基、蒽基、菲并(phenanthro)等，以及1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。本文所用的術(shù)語(yǔ)＂芳基＂的范圍內(nèi)也包括下述基團(tuán)，其中芳香環(huán)稠合到一個(gè)或多個(gè)非芳香環(huán)上，如在茚滿(mǎn)基、菲啶基或四氫萘基中，其中連接基團(tuán)或連接點(diǎn)在芳香環(huán)上。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指穩(wěn)定的雜環(huán)基，和具有5-14個(gè)環(huán)原子的多雜環(huán)芳香基團(tuán)。雜芳基可以被取代或未取代，且可以包含一個(gè)或多個(gè)環(huán)。一般的雜芳環(huán)的實(shí)例包括5-元單環(huán)基團(tuán)，如噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、異噻唑基、呋咱基、異噁唑基、噻唑基等；6-元單環(huán)基團(tuán)，如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、三嗪基等；和多環(huán)雜環(huán)基基團(tuán)，如苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、苯并氧硫雜環(huán)己烯基(phenoxathienyl)、吲嗪基、異吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并噻唑、苯并咪唑、四氫喹啉、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌間二氮雜苯基(perimidinyl)、二氮菲基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等(參見(jiàn)，如Katritzky，Handbook of HeterocyclicChemistry)。雜芳基環(huán)的其它特定的實(shí)例包括2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-異噁唑基、4-異噁唑基、5-異噁唑基、2-噁二唑基、5-噁二唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-噠嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、異喹啉基、吲哚基、異吲哚基、吖啶基或苯并異噁唑基。雜芳基還包括下述基團(tuán)，其中雜芳香環(huán)稠合到一個(gè)或多個(gè)芳香或非芳香環(huán)上，其中連接基團(tuán)或連接點(diǎn)在雜芳香環(huán)上。實(shí)例包括四氫喹啉、四氫異喹啉和吡啶并[3，4-d]嘧啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、吡唑并[1，5-a][1，3，5]三嗪基、吡唑并[1，5-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]噠嗪基、咪唑并[1，5-a]嘧啶基、吡唑并[1，5-b][1，2，4]三嗪、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、咪唑并三嗪基、吡咯并[2，3-d]嘧啶基、三唑并嘧啶基、吡啶并吡嗪基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”也指任選被取代的環(huán)。術(shù)語(yǔ)＂雜芳基＂可以與術(shù)語(yǔ)＂雜芳基環(huán)＂或術(shù)語(yǔ)＂雜芳香基＂互換使用。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、或芳氧烷基等的芳基部分)或雜芳基(包括雜芳烷基或雜芳基烷氧基等的雜芳基部分)可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基。芳基或雜芳基的不飽和碳原子上合適的取代基的例子包括鹵素(F、Cl、Br或I)、烷基、烯基、炔基、-CN、-R4、-OR2、-S(O)rR2(其中r是0、1或2的整數(shù))、-SO2NR2R3、-NR2R3、-(CO)YR2、-O(CO)YR2、-NR2(CO)YR2、-S(CO)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2，其中在每種情況下，Y獨(dú)立地是-O-、-S-、-NR3-、或化學(xué)鍵；因此-(CO)YR2包括-C(＝O)R2、-C(＝O)OR2、和-C(＝O)NR2R3。其它的取代基包括-YC(＝NR3)Y’R2、-COCOR2、-COMCOR2(其中M是1-6個(gè)碳的烷基)、-YP(＝O)(YR4)(YR4)(包括-P(＝O)(R4)2)、-Si(R4)3、-NO2、-NR2SO2R2和-NR2SO2NR2R3。為了進(jìn)一步說(shuō)明，其中Y是-NR3的取代基還包括-NR3C(＝O)R2、-NR3C(＝O)NR2R3、-NR3C(＝O)OR2、和-NR3C(＝NH)NR2R3。R4取代基選自烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基；R2和R3取代基在每種情況下獨(dú)立地選自氫、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、以及R2、R3和R4取代基本身可以被取代或未被取代。R2、R3和R4上可有的取代基的例子包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、鹵素、烷基、芳基、雜芳基、碳環(huán)、雜環(huán)、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰氧基、二烷基氨基羰氧基、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羥基、烷氧基、鹵烷氧基。另外的示例包括保護(hù)的OH(例如酰氧基)、苯基、取代的苯基、-O-苯基、-O-(取代的)苯基、-芐基、取代的芐基、-O-苯乙基(即-OCH2CH2C6H5)、-O-(取代的)苯乙基。取代的R2、R3或R4基團(tuán)的非限制性示例包括鹵烷基和三鹵烷基、烷氧基烷基、鹵苯基、-M-雜芳基、-M-雜環(huán)、-M-芳基、-M-OR2、-M-SR2、-M-NR2R3、-M-OC(O)NR2R3、-M-C(＝NR2)NR2R3、-M-C(＝NR2)OR3、-M-P(O)R2R3、Si(R2)3、-M-NR2C(O)R3、-M-NR2C(O)OR2、-M-C(O)R2、-M-C(＝S)R2、-M-C(＝S)NR2R3、-M-C(O)NR2R3、-M-C(O)NR2-M-NR2R3、-M-NR2C(NR3)NR2R3、-M-NR2C(S)NR2R3、-M-S(O)2R3、-M-C(O)R3、-M-OC(O)R3、-MC(O)SR2、-M-S(O)2NR2R3、-C(O)-M-C(O)R2、-MCO2R2、-MC(＝O)NR2R3、-M-C(＝NH)NR2R3、和-M-OC(＝NH)NR2R3(其中M是1-6個(gè)碳的烷基)。
一些更具體的例子包括但不限于氯甲基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基乙基、烷氧基苯基、鹵苯基、-CH2-芳基、-CH2-雜環(huán)、-CH2C(O)NH2、-C(O)CH2N(CH3)2、-CH2CH2OH、-CH2OC(O)NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NEt2、-CH2OCH3、-C(O)NH2、-CH2CH2-雜環(huán)、-C(＝S)CH3、-C(＝S)NH2、-C(＝NH)NH2、-C(＝NH)OEt、-C(O)NH-環(huán)丙基、C(O)NHCH2CH2-雜環(huán)、-C(O)NHCH2CH2OCH3、-C(O)CH2CH2NHCH3、-CH2CH2F、-C(O)CH2-雜環(huán)、-CH2C(O)NHCH3、-CH2CH2P(O)(CH3)2、Si(CH3)3等。
烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基或非芳香族的雜環(huán)基還可以含有一個(gè)和多個(gè)取代基。這些基團(tuán)上合適的取代基的例子包括，但不限于前面用于芳基或雜芳基的碳原子所列出的那些取代基，另外還包括下述用于飽和碳原子的取代基＝O、＝S、＝NH、＝NNR2R3、＝NNHC(O)R2、＝NNHCO2R2、或＝NNHSO2R2，其中在每種情況下，R2和R3獨(dú)立地是氫、烷基、烯基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基。脂肪族、雜脂肪族或雜環(huán)的基團(tuán)上取代基的示例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、鹵素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰氧基、二烷基氨基羰氧基、烷氧基、硝基、-CN、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、-OH、鹵烷氧基、或鹵烷基。
氮(例如在雜芳基或非芳香族的雜環(huán)中)上的示例取代基包括R4、-NR2R3、-C(＝O)R2、-C(＝O)OR2、-C(＝O)SR2、-C(＝O)NR2R3、-C(＝NR2)NR2R3、-C(＝NR2)OR2、-C(＝NR2)R3、-COCOR2、-COMCOR2、-CN、-SO2R3、S(O)R3、-P(＝O)(YR2)(YR2)、-NR2SO2R3和-NR2SO2NR2R3，其中在每種情況下，R4是烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基；在每種情況下，R2和R3獨(dú)立地是氫、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基芳基、雜芳基和雜環(huán)基。
當(dāng)環(huán)體系(例如環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、或雜芳基)被在清楚定義范圍內(nèi)變化的許多取代基取代時(shí)，應(yīng)理解取代基的總數(shù)不超過(guò)存在條件下的正?？捎玫幕蟽r(jià)。因此，例如被“p”個(gè)取代基取代的苯環(huán)(其中“p”的范圍是0-5)可具有0-5個(gè)取代基，而應(yīng)理解被“p”個(gè)取代基取代的吡啶環(huán)具有0-4個(gè)取代基。本發(fā)明化合物的基團(tuán)的最大取代基數(shù)可以容易的確定。
本發(fā)明僅包括在穩(wěn)定的或化學(xué)上可用的化合物中的取代基和變體的那些組合。穩(wěn)定的化合物或化學(xué)上可用的化合物為對(duì)于其制備和檢測(cè)足夠穩(wěn)定的化合物。優(yōu)選的本發(fā)明化合物是足夠穩(wěn)定的，使得當(dāng)在40℃或更低的溫度下，在水分存在下或其它化學(xué)反應(yīng)條件下保持至少一周基本上不改變。
某些本發(fā)明的化合物可以以互變異構(gòu)體形式存在，且除非另有說(shuō)明本發(fā)明包括所有這些化合物的互變異構(gòu)體形式。
除非另有說(shuō)明，本文所述的結(jié)構(gòu)也包括所有所述結(jié)構(gòu)的立體化學(xué)形式；即，對(duì)于每個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心為R和S構(gòu)型。因此，單個(gè)立體化學(xué)異構(gòu)體以及本發(fā)明化合物的對(duì)應(yīng)異構(gòu)體和非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體混合物在本發(fā)明的范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明包括每種非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體或?qū)?yīng)異構(gòu)體而基本不含其它異構(gòu)體(>90％，且優(yōu)選>95％，摩爾比例，不含其它立體異構(gòu)體)，以及這些異構(gòu)體的混合物。
可以通過(guò)常規(guī)方法拆分外消旋體混合物得到具體的光學(xué)異構(gòu)體，所述方法如通過(guò)用光學(xué)活性的酸或堿處理形成非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體鹽。適合的酸的實(shí)例為酒石酸、二乙?；剖?、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯?；剖帷⒑驼聊X磺酸，然后通過(guò)結(jié)晶分離非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體混合物，然后從這些鹽中析出光學(xué)活性的堿。分離光學(xué)異構(gòu)體的不同方法包括使用對(duì)于最大分離對(duì)應(yīng)異構(gòu)體最佳選擇的手性色譜柱。其它方法包括通過(guò)使本發(fā)明的化合物與活性形式光學(xué)純的酸或光學(xué)純的異氰酸反應(yīng)，以合成共價(jià)結(jié)合的非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體分子。該合成的非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體可以通過(guò)常規(guī)方法分離，如色譜法、蒸餾、結(jié)晶或升華，然后水解得到對(duì)應(yīng)異構(gòu)體純的化合物。
本發(fā)明的光學(xué)活性的化合物可以通過(guò)使用活性起始物料得到。這些異構(gòu)體可以為游離酸、游離堿、酯或鹽的形式。
本發(fā)明的化合物可以以放射標(biāo)記的形式存在，即所述化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)原子量或質(zhì)量數(shù)不同于自然界中通常存在的原子量或質(zhì)量數(shù)的原子。氫、碳、磷、氟和氯的放射性同位素分別包括3H、14C、32P、35S、43F和36Cl。含有這些放射性同位素和/或其它原子的其它放射性同位素的本發(fā)明的化合物在本發(fā)明的范圍中。氚即3H，和碳-14即14C同位素對(duì)于它們?nèi)菀椎闹苽浜蜋z測(cè)是尤其優(yōu)選的。
放射性標(biāo)記的本發(fā)明的化合物通?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。方便地，這些放射性標(biāo)記的化合物可以通過(guò)本文所述的方法制備，只是容易地將可用的放射性標(biāo)記的反應(yīng)試劑替換非放射性的反應(yīng)試劑。
4.合成概述 專(zhuān)業(yè)人員擁有關(guān)于雜環(huán)及其它相關(guān)的化學(xué)轉(zhuǎn)變、回收和純化技術(shù)的公知文獻(xiàn)，將其與下面的實(shí)施例所包含的信息結(jié)合使用，用于指導(dǎo)對(duì)本發(fā)明化合物的合成、回收和表征的合成策略、保護(hù)基、和其它原料和方法，所述化合物包括含有多種選擇的Rt、Ra、Rb、Rc、Rd、Re和環(huán)T、A、B、C和D的化合物。
可以使用多種合成方法制備本文所述的化合物，包括下述方案所述的方法。專(zhuān)業(yè)人員將理解這些方法中可以使用保護(hù)基。＂保護(hù)基＂是用于暫時(shí)阻斷潛在的反應(yīng)位點(diǎn)化學(xué)反應(yīng)的部分(例如，胺、羥基、巰基、醛等)使得反應(yīng)可以在多個(gè)官能團(tuán)化合物的其它位點(diǎn)上選擇性進(jìn)行。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，保護(hù)基選擇性反應(yīng)以高產(chǎn)率得到適合計(jì)劃反應(yīng)的被保護(hù)的物質(zhì)；所述保護(hù)基應(yīng)該通過(guò)快速可用的優(yōu)選無(wú)毒的反應(yīng)試劑以高產(chǎn)率選擇性除去，所述反應(yīng)試劑不會(huì)過(guò)度影響本發(fā)明的其它官能團(tuán)；保護(hù)基優(yōu)選形成可容易分離的衍生物(更優(yōu)選不產(chǎn)生新的立構(gòu)中心)；且保護(hù)基優(yōu)選具有最小的其它功能以避免使反應(yīng)其他位點(diǎn)復(fù)雜化。多種保護(hù)基和使用和移除這些保護(hù)基的方案、試劑和條件是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)，例如＂Protective Groups in Organic Synthesis＂Third Ed.Greene，T.W.和Wuts，P.G.，Eds.，John Wiley & Sons，New York1999。對(duì)于保護(hù)基方法的其它背景信息(用于保護(hù)和去保護(hù)的物料、方法和方案)和其它用于保護(hù)本文所述化合物的合成化學(xué)轉(zhuǎn)化參見(jiàn)R.Larock，Comprehensive organic Transformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd.Ed.，John Wileyand Sons(1999)；L.Fieser和M.Fieser，F(xiàn)ieser and Fieser′s Reagents for OrganicSynthesis，John Wiley and Sons(1994)；和L.Paquette，ed.，Enrcyclopedia ofReagents for Organic Synthesis，John Wiley和Sons(1995)。這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容在此引用作為參考。
而且，人們可以選擇富集所需同位素的試劑，如氘代替氫，以制備含有這些同位素的本發(fā)明的化合物。在一個(gè)或多個(gè)位置含有氘代替氫的化合物，或含有多種C、N、P和O同位素的化合物包括在本發(fā)明中，且可以用于例如研究這些化合物的代謝和/或組織分布，或改變代謝的速度或途徑，或生物學(xué)功能的其它方面。
本發(fā)明的化合物可以使用下述方法與有機(jī)化學(xué)合成領(lǐng)域已知的合成方法，或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員理解對(duì)這些方法的變化方法合成。優(yōu)選的方法包括，但不限于下述方法。在適合于所用的反應(yīng)試劑和物料和適合影響轉(zhuǎn)化的溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解分子中存在的官能度應(yīng)該與打算的轉(zhuǎn)化一致。有時(shí)需要一些判斷以改變合成步驟的順序或選擇一種特殊的工藝方案以得到所需的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明化合物可以按照方案I至方案XVII中概括的方法和通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
如方案I和II所示，鈀催化的Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)用于將“頂部”環(huán)T與“底部”[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]部分連接在一起。在方案I中，由炔類(lèi)“頂部”環(huán)T和[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]部分進(jìn)行所述Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)，其中[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]部分被存在的反應(yīng)活性基W活化；W是碘、溴或其它允許所需偶聯(lián)反應(yīng)的反應(yīng)活性基團(tuán)。中間體W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]中的變量如前所定義，環(huán)A和B任選地分別被允許的Ra和Rb基團(tuán)取代。

方案ISonogashira偶聯(lián)反應(yīng) 在方案II中描述了可選的偶聯(lián)反應(yīng)，其中環(huán)T是被存在的反應(yīng)活性基W(例如I或Br)活化并在類(lèi)似的鈀催化偶聯(lián)條件下偶聯(lián)到“底部”炔類(lèi)[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]上。

方案II可選的Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng) 方案I和II中所述的Sonogashira偶聯(lián)條件可應(yīng)用于本發(fā)明的所有單環(huán)雜芳基環(huán)T并可用于合成本發(fā)明的所有化合物。
根據(jù)已知的轉(zhuǎn)化，在下面的方案III至VI中說(shuō)明多種示例性的用于制備炔類(lèi)環(huán)T部分的全合成方法
方案III2-取代的乙炔基咪唑的制備
方案IV2-取代的乙炔基噻唑的制備
方案V2-氨基取代的乙炔基噁唑的制備
方案VI2-氨基羰基取代的乙炔基噁唑的制備 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)用于制備多種取代的炔類(lèi)環(huán)T基的這些方法廣泛地適用于沒(méi)有顯示出的其它單環(huán)雜芳環(huán)。
下面的方案VII至XI說(shuō)明方案I和II中所述偶聯(lián)反應(yīng)的有用中間體式W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]化合物的合成。
顯然下式的中間體是特別有意義的
因?yàn)槠渑c“頂部”雜芳環(huán)發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生本發(fā)明化合物?？勺兓鶊F(tuán)A、L1、和B如前所定義并且如本文所述任選地被取代，W是I或允許所需偶聯(lián)反應(yīng)的其它反應(yīng)活性基團(tuán)。
這些中間體的示例包括下述結(jié)構(gòu)

其中變量如Ra、Rb、Rc和Rd如前所定義。例如，在一些實(shí)施方案中Ra選自F或烷基如Me，在一些實(shí)施方案中Rb選自Cl、F、Me、叔丁基、-CF3或-OCF3等。這些和具有多種允許的取代基的式W-[環(huán)A]—L1—[環(huán)B]的其他化合物用于制備本文中所公開(kāi)的多種結(jié)構(gòu)式、種類(lèi)和小類(lèi)所定義的本發(fā)明相應(yīng)化合物。
試劑和代表性中間體制備的一些示例性合成路線(xiàn)如下所示 方案VII描述了其中環(huán)A和B是苯基，和L1是NHC(O)的W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]的示例性合成。

方案VII 方案VIII描述了其中環(huán)B是2-吡啶和L1是C(O)NH(即另一個(gè)方向上)的前述中間體變體的合成。

方案VIII 下面的方案IX和X說(shuō)明了其中環(huán)A和B是苯基、環(huán)C是雜芳環(huán)的W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]的合成。這些中間體用于制備式II化合物。
更具體地，方案IX描述了其中環(huán)C是咪唑環(huán)的中間體的制備。

方案IX 方案X描述了其中環(huán)C是吡咯或噁唑環(huán)的中間體的制備。

方案X 方案XI說(shuō)明了其中環(huán)A和B是苯基、Rb取代基是[L2]-[環(huán)D]的W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]的合成。這些中間體用于制備其中環(huán)D是含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的5或6-元雜環(huán)的式III化合物。

方案XI 在該方案中，環(huán)B上取代基Rb的非限制性例子包括鹵素、例如Cl，低級(jí)烷基、例如異丙基；和取代的低級(jí)烷基，例如-CF3；環(huán)D的非限制性例子是N，N-二甲基吡咯烷、N-(2-羥基乙基)哌嗪、和N-甲基哌嗪。
中間體W-[環(huán)A]—[L1]—[環(huán)B]，例如上面各種合成方案中所示的那些可以使用一般方案I中所述的Sonogashir偶聯(lián)條件與炔類(lèi)環(huán)T反應(yīng)。
在下面的方案XII中說(shuō)明一個(gè)例子，其中環(huán)T部分可在Sonogashir偶聯(lián)步驟之后，進(jìn)一步衍生化得到多種有意義的取代的本發(fā)明類(lèi)似物。

方案XII 可選地，在一般方案II中另外描述的與碘或溴活化的環(huán)T偶聯(lián)之前，中間體W-[環(huán)A]-[L1]-[環(huán)B]可在Sonogashira條件下與三甲基硅烷基乙炔反應(yīng)。
方案XIII中說(shuō)明一個(gè)例子。

方案XIII 在其它實(shí)施方案中，所述步驟可以不同的順序進(jìn)行。例如，如方案XIV中所示，Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)可用于連接環(huán)T和環(huán)A，之后將該部分連接到環(huán)B和/或[環(huán)B]-[L2]-[環(huán)D]和/或[環(huán)B]-[環(huán)C]上。

方案XIV 在其中環(huán)A和B是苯基、L1是CONH的非限制性例子中，方案XV描述了炔類(lèi)環(huán)T與3-碘-4-甲基苯甲酸(環(huán)A部分)的Sonogashira偶聯(lián)產(chǎn)生[環(huán)T]-[環(huán)A]中間體，然后其與任選取代的環(huán)B部分進(jìn)行酰胺偶聯(lián)反應(yīng)
方案XV 該方法顯示于方案XVI中，其說(shuō)明乙炔類(lèi)環(huán)T(即5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺)與取代的W-[環(huán)A](即3-碘-4-甲基苯甲酸)偶聯(lián)，然后所得[環(huán)T]-[環(huán)A]-COOH中間體與H2N-[環(huán)B]-L2-[環(huán)C]部分(即4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基苯胺)進(jìn)行酰胺偶聯(lián)
方案XVI 可選地，如方案XVII說(shuō)明的，專(zhuān)業(yè)人員的連接選擇范圍內(nèi)的另一示例是3-碘-4-甲基苯甲酸環(huán)A中間體可以與三甲基硅烷基乙炔進(jìn)行Sonogashira反應(yīng)，然后其在硅烷基脫保護(hù)之后可以與活化的環(huán)T進(jìn)行第二次Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)。

方案XVII 按照諸如前面所述的合成方法，結(jié)合下面的實(shí)施例、本文中提供的其它信息以及常規(guī)方法和原料，專(zhuān)業(yè)人員應(yīng)該能夠制備本文所公開(kāi)的全部范圍內(nèi)化合物。
5.用途、制劑、給藥 藥學(xué)用途；適應(yīng)癥 本發(fā)明提供了具有生物學(xué)性質(zhì)的化合物，這些性質(zhì)使這些化合物能夠治療或改善所關(guān)注的可能涉及激酶的疾病，這些疾病的癥狀，或由激酶介導(dǎo)的其它生理學(xué)事件的作用。例如，許多本發(fā)明的化合物顯示出抑制Src和abl的酪氨酸激酶活性，以及其它認(rèn)為調(diào)節(jié)癌癥的生長(zhǎng)、發(fā)展和/或轉(zhuǎn)移的酪氨酸激酶。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多本發(fā)明的化合物具有強(qiáng)效的體外抵抗癌癥細(xì)胞系的活性，所述癌癥細(xì)胞系包括K-562白血病細(xì)胞。在用K562細(xì)胞的常規(guī)抗增殖試驗(yàn)中所觀察到的效果是格列衛(wèi)的10倍。
因此這些化合物對(duì)治療癌癥是關(guān)注的，所述癌癥包括原發(fā)性的和轉(zhuǎn)移的癌癥，包括實(shí)體瘤以及淋巴瘤和白血病(包括CML、AML和ALL)，且包括對(duì)其它治療(包括涉及給藥激酶抑制劑，如格列衛(wèi)、特羅凱或易瑞沙的治療)抵抗的癌癥。
這些癌癥包括乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、頭頸癌、胃腸基質(zhì)癌，以及下述疾病，如黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、非何杰金(氏)淋巴瘤、黑素瘤、胃癌和白血病(如骨髓性、淋巴細(xì)胞性、髓細(xì)胞性和成淋巴細(xì)胞性白血病)，包括對(duì)一種或多種其它治療(包括格列衛(wèi)、特羅凱或易瑞沙)抵抗的疾病。
對(duì)多種抗癌藥抵抗可能是由于癌癥介體或效應(yīng)子的突變(如，在激酶如Src或Abl中的突變)引起，這與病人的藥物結(jié)合性質(zhì)、磷酸結(jié)合性質(zhì)、蛋白結(jié)合性質(zhì)、自身調(diào)節(jié)或其它性質(zhì)有關(guān)。例如，在BCR-Abl(與慢性髓細(xì)胞性白血病相關(guān)的激酶)的情況中，對(duì)格列衛(wèi)的抵抗已經(jīng)映射到多種BCR/Abl突變，所述突變與多種功能后果有關(guān)，包括藥物在激酶的活性位點(diǎn)占據(jù)的立體位阻、磷酸結(jié)合P環(huán)可變性的改變、對(duì)于圍繞活性位點(diǎn)的激活環(huán)的結(jié)構(gòu)的影響等。參見(jiàn)例如Shah等人，2002，Cancer Cell 2，117-125和Azam等人，2003，Cell 112，831-843，和其中對(duì)于這些在與藥物抵抗有關(guān)的Bcr/Abl中的突變的代表性實(shí)例所引用的參考文獻(xiàn)。也參見(jiàn)下述參考文獻(xiàn)對(duì)于BCR/Abl背景信息的補(bǔ)充，其在CML和藥物抵抗產(chǎn)生機(jī)理和突變中的機(jī)理作用Kurzrock等人，Philadelphia chromosome-positive leukemiasfrom basic mechanisms tomolecular therapeutics，Ann Intern Med.2003 May 20；138(10)819-30；O′Dwyer等人，Demonstration of Philadelphia chromosome negative abnormal clones inpatients with chronic myelogenous leukemia during major cytogenetic responsesinduced by imatinib mesylate.Leukemia.2003 Mar；17(3)481-7；Hochhaus等人，Molecular and chromosomal mechanisms of resistance to imatinib(STI571)therapy，Leukemia.2002 Nov；16(11)2190-6；O′Dwyer等人，The impact ofclonal evolution on response to imatinib mesylate(STI571)in accelerated phaseCML.Blood.2002 Sep 1；100(5)1628-33；Braziel等人，Hematopathologic andcytogenetic findings in imatinib mesylate-treated chronic myelogenous leukemiapatients14 months′experience.Blood.2002 Jul 15；100(2)435-41；Corbin等人，Analysis of the structural basis of specificity of inhibition of the Abl kinase bySTI571.J Biol Chem.2002 Aug 30；277(35)32214-9；Wertheim等人，BCR-ABL-induced adhesion defects are tyrosine kinase-independent.Blood.2002 Jun 1；99(11)4122-30；Kantarjian等人，Hematologic and cytogeneticresponses to imatinib mesylate in chronic myelogenous leukemia，N Engl J Med.2002 Feb 28；346(9)645-52.Erratum inN Engl J Med 2002 Jun 13；346(24)1923；Hochhaus等人，Roots of clinical resistance to STI-571 cancertherapy.Science.2001 Sep 21；293(5538)2163；Druker等人，Activity of aspecific inhibitor of the BCR-ABL tyrosine kinase in the blast crisis of chronicmyeloid leukemia and acute lymphoblastic leukemia with the Philadelphiachromosome.N Engl J Med.2001 Apr 5；344(14)1038-42.Erratum inN Engl JMed 2001 Jul 19；345(3)232；Mauro等人，Chronic myelogenous leukemia.Curr Opin Oncol.2001 Jan；13(1)3-7.Review；Kolibaba等人，CRKL bindingto BCR-ABL and BCR-ABL transformation.Leuk Lymphoma.1999 Mar；33(1-2)119-26；Bhat等人，Interactions of p62(dok)with p210(bcr-abl)andBcr-Abl-associated proteins.J Biol Chem.1998 Nov 27；273(48)32360-8；Senechal等人，Structural requirements for function of the Crkl adapter proteinin fibroblasts and hematopoietic cells.Mol Cell Biol.1998 Sep；18(9)5082-90；Kolibaba et al.，Protein tyrosine kinases and cancer.Biochim Biophys Acta.1997Dec 9；1333(3)F217-48.Review；Heaney等人，Direct binding of CRKL toBCR-ABL is not required for BCR-ABL transformation.Blood.1997 Jan 1；89(1)297-306；Hallek等人，Interaction of the receptor tyrosine kinase p145c-kitwith the p210bcr/abl kinase in myeloid cells.Br J Haematol.1996 Jul；94(1)5-16；Oda等人，The SH2 domain of ABL is not required forfactor-independent growth induced by BCR-ABL in a murine myeloid cell line.leukemia.1995 Feb；9(2)295-301；Carlesso等人，Use of a temperature-sensitivemutant to define the biological effects of the p210BCR-ABL tyrosine kinase onproliferation of a factor-dependent murine myeloid cell line.Oncogene.1994Jan；9(1)149-56。
再次，我們認(rèn)為本發(fā)明的化合物既可以單一療法也可以組合療法，用于抵抗白血病和其它癌癥，包括對(duì)于其它抗癌藥(尤其包括格列衛(wèi)和其它激酶抑制劑)完全或部分抵抗的癌癥，且尤其包括涉及BCR/Abl中一個(gè)或多個(gè)突變(激酶區(qū)域中或外面)的白血病，包括但不限于上述公開(kāi)的任何一種。尤其參見(jiàn)Azam等人的論文和其中對(duì)于BCR/Abl中的突變的實(shí)例所引用的參考文獻(xiàn)，所述突變包括在藥物結(jié)合裂解中的突變、磷酸結(jié)合P環(huán)中的突變、激活環(huán)中的突變、激酶β-3片層的保守VAVK的突變、小N葉(lobe)的催化α-1螺旋的突變、大C葉中長(zhǎng)α-3螺旋的突變、和活化環(huán)的C葉下游中的區(qū)域的突變。
藥學(xué)方法 本發(fā)明的方法包括向所需受治療者給藥治療有效量的本發(fā)明的化合物。
＂治療有效量＂為對(duì)于下述作用有效的量可檢測(cè)的殺死癌細(xì)胞或抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)或擴(kuò)散；腫瘤的大小或數(shù)量；或?qū)Π┌Y水平、階段、進(jìn)展或嚴(yán)重程度的其它測(cè)定。確切的量將根據(jù)受治療者的不同而改變，其根據(jù)受治療者的人種、年齡和一般情況，疾病的嚴(yán)重程度，特定的抗癌藥物，給藥方式，與其它治療的組合治療等而改變。
化合物或含有該化合物的組合物可以使用有效殺死或抑制腫瘤生長(zhǎng)或其它癌癥形成的任何量和任何給藥途徑給藥。
本發(fā)明的抗癌化合物優(yōu)選配制為方便給藥的單位劑型，且劑量均勻。本文所用的術(shù)語(yǔ)＂單位劑型＂是指對(duì)所治療的病人適合的抗癌藥的物理分離的單位。通常，本發(fā)明的化合物和組合物的總?cè)談┝繉⒂芍髦吾t(yī)師使用根據(jù)合理的醫(yī)學(xué)判斷的常規(guī)程序決定。對(duì)于任何具體病人或有機(jī)體的特定治療有效劑量水平將依賴(lài)于多種因素，包括要治療的疾病；疾病的嚴(yán)重程度；所用具體化合物的效能；所用的具體組合物；病人的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；給藥的途徑和方案；化合物代謝和/或排泄的速度；治療的持續(xù)時(shí)間；組合藥物中使用的或與本發(fā)明化合物同時(shí)給藥的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類(lèi)似因素。
而且，以所需劑量與適合的藥學(xué)可接受的載體配制后，本發(fā)明的組合物可以向人或其它動(dòng)物以下述方式給藥口服、經(jīng)直腸、胃腸外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(如通過(guò)透皮貼片、粉末、軟膏或滴劑)、舌下、含服、口或鼻噴霧等。
該化合物的有效全身劑量通常范圍為0.01至500mg化合物/kg病人體重，優(yōu)選0.1至125mg/kg，且有時(shí)1至25mg/kg，以單劑量或多劑量給藥。通常，向需要這種治療的病人給藥該化合物的日劑量范圍為約50至約2000mg/病人。給藥可以以周為單位中(或其它多天間隔)每天1次或多次，或以間隔的時(shí)間。例如，以周為單位(如每周一)該化合物可以每天給藥一次或多次不定或持續(xù)幾周，如4-10周。或者，每天給藥持續(xù)幾天(如2-10天)，然后幾天(如1-30天)不給藥該化合物，不定的重復(fù)該循環(huán)或重復(fù)給定的次數(shù)，如4-10個(gè)循環(huán)。例如，本發(fā)明的化合物可以每天給藥，持續(xù)5天，然后間斷9天，然后再每天給藥持續(xù)5天，然后間斷9天，等等，不定的重復(fù)該循環(huán)或共重復(fù)4-10次。
有效用于治療或預(yù)防特定病癥或疾病的化合物的量將部分依賴(lài)于影響藥物劑量的公知的因素。而且，任選使用體外或體內(nèi)試驗(yàn)幫助確定最佳劑量范圍。對(duì)于有效劑量的大概指導(dǎo)可以從劑量-響應(yīng)曲線(xiàn)中外推得到，所述曲線(xiàn)來(lái)自體外或動(dòng)物模型試驗(yàn)體系。精確的劑量水平應(yīng)該由主治醫(yī)師或其他衛(wèi)生保健人員確定，且將依賴(lài)于下述公知的因素，包括給藥途徑、個(gè)體的年齡、體重、性別和一般健康狀況；疾病的性質(zhì)、嚴(yán)重程度和臨床階段；共同治療的使用(或不使用)；病人中細(xì)胞的基因工程的性質(zhì)和范圍。
當(dāng)用于治療或預(yù)防特定疾病狀態(tài)或病癥給藥時(shí)，本發(fā)明化合物的有效劑量可根據(jù)下述因素而改變所用的具體化合物、給藥方式、所治療的病癥的病情和其嚴(yán)重程度、以及多種與所治療的個(gè)體相關(guān)的身體因素。在許多病例中，當(dāng)化合物以下述劑量給藥時(shí)得到滿(mǎn)意的結(jié)果，所述劑量為約0.01mg/kg-500mg/kg，優(yōu)選0.1至125mg/kg，且更優(yōu)選1至25mg/kg。計(jì)劃的每日劑量根據(jù)給藥途徑改變。因此，胃腸外給藥劑量通常為約口服給藥劑量的10％至20％。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用作組合藥物給藥方法的一部分時(shí)，在所需治療期間給藥組合藥物中每種成分的劑量。組合藥物的成分可以同時(shí)給藥；以含有兩種成分的單一劑型，或分開(kāi)的劑型；在治療期間組合的成分也可以在不同時(shí)間給藥，或給藥一種成分作為另一種成分的預(yù)先治療。
關(guān)于化合物 本發(fā)明的化合物可以以用于治療的游離形式存在，或如果合適以其藥學(xué)可接受的鹽或其它衍生物存在。本文所用的術(shù)語(yǔ)＂藥學(xué)可接受的鹽＂是指在合理的醫(yī)藥判斷范圍內(nèi)適合用于與人或較低級(jí)動(dòng)物的組織接觸而沒(méi)有過(guò)度毒性、刺激、過(guò)敏反應(yīng)等的那些鹽，且具有相當(dāng)?shù)暮侠砝?風(fēng)險(xiǎn)比。胺、羧酸、膦酸和其它類(lèi)型的化合物的藥學(xué)可接受的鹽是本領(lǐng)域公知的。例如，S.M.Berge，等人詳細(xì)描述了藥學(xué)可接受的鹽，J.Pharmaceutical Sciences，661-19(1977)，在此引用作為參考。在分離和純化本發(fā)明化合物時(shí)可以原位制備所述的鹽，或使本發(fā)明化合物的游離堿或游離酸分別與適合的酸或堿反應(yīng)。藥學(xué)可接收的非毒性的酸加成鹽的實(shí)例為氨基與無(wú)機(jī)酸形成的鹽，所述無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸；氨基與有機(jī)酸形成的鹽，所述有機(jī)酸如乙酸、草酸、馬來(lái)酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸；或通過(guò)使用本領(lǐng)域中的其它方法如離子交換。其它藥學(xué)可接受的鹽包括已二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、半硫酸鹽(hernisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖醛酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、過(guò)硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。代表性的堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽等。當(dāng)適合時(shí)，藥學(xué)可接受的鹽還包括無(wú)毒銨鹽、季銨鹽和胺的陽(yáng)離子與反離子形成的鹽，所述反離子如鹵素離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低級(jí)烷基磺酸根和芳基磺酸根。
而且，本文所用的術(shù)語(yǔ)＂藥學(xué)可接受的酯＂優(yōu)選是指體內(nèi)水解的酯，且包括在人體內(nèi)快速分解以產(chǎn)生母體化合物或其鹽的酯。適合的酯包括，例如，來(lái)自藥學(xué)可接受的脂肪族羧酸的酯，所述羧酸尤其為鏈烷酸、鏈烯酸、環(huán)烷酸和鏈烷二酸，其中每個(gè)烷基或烯基部分有利地最多6個(gè)碳原子。具體酯的實(shí)例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。明顯地，酯可以由本發(fā)明化合物的羥基或羧酸基形成。
而且，本文所用的術(shù)語(yǔ)＂藥學(xué)可接受的前藥＂是指本發(fā)明化合物的前藥，其在合理的醫(yī)藥判斷的范圍內(nèi)，所述前藥適合用于與人和較低級(jí)動(dòng)物的組織接觸而沒(méi)有過(guò)度的毒性、刺激、過(guò)敏反應(yīng)等，具有合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比例，且對(duì)其所要的用途是有效的，以及如果合適可以為本發(fā)明化合物的兩性離子形式。術(shù)語(yǔ)＂前藥＂是指在體內(nèi)轉(zhuǎn)化(例如通過(guò)在血液中水解)產(chǎn)生上述結(jié)構(gòu)式的母體化合物的化合物。參見(jiàn)例如T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as NovelDelivery Systems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，和Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Assocn.and Pergamon Press，1987，均在此引用作為參考。
組合物 提供的組合物包含任何一種本文所述的化合物(或其前藥，藥學(xué)可接受的鹽或其它藥學(xué)可接受的衍生物)，和一種或多種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。這些組合物任選還包含一種或多種其它治療劑?；蛘撸景l(fā)明的化合物可以與一種或多種其它治療方案(如格列衛(wèi)或其它激酶抑制劑、干擾素、骨髓移植、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、二膦酸鹽、沙利度胺、癌癥疫苗、激素療法、抗體、放療等)組合向所需病人給藥。例如，對(duì)于組合給藥或包括在具有本發(fā)明化合物的藥學(xué)組合物中的其它治療劑可以為其它一種或多種抗癌藥。
如本文所述，本發(fā)明的組合物包含本發(fā)明的化合物以及本文所用的適合所需具體劑型的藥學(xué)可接受的載體(包括任何和所有的溶劑、稀釋劑或其它賦形劑、分散劑或助懸劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤(rùn)滑劑等)。Remington′s Pharmaceutical Sciences，F(xiàn)ifteenthEdition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1975)公開(kāi)了多種用于配制藥物組合物的載體和其制備的已知技術(shù)。除非任何常規(guī)載體介質(zhì)與本發(fā)明化合物不相容，如產(chǎn)生不希望的生物學(xué)作用或與藥物組合物中的任何其它成分產(chǎn)生有害的相互作用，認(rèn)為任何常規(guī)載體介質(zhì)在本領(lǐng)域的范圍內(nèi)?？梢宰鳛樗帉W(xué)可接受的載體的物料的一些實(shí)例包括，但不限于，糖類(lèi)，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，如羧基甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉末化的西黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；油，如花生油、棉籽油；紅花油；麻油；橄欖油；玉米油和豆油；乙二醇；丙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無(wú)熱原的水；等滲鹽水；林格溶液；乙醇、和磷酸鹽緩沖液，以及本發(fā)明也可以使用其它無(wú)毒相容的潤(rùn)滑劑，如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑、防腐劑和抗氧化劑。
制劑 本發(fā)明也包括一類(lèi)組合物，其包含本發(fā)明的活性化合物與一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑(本文總稱(chēng)為＂載體＂物質(zhì))，以及視需要其它活性成分。本發(fā)明的活性化合物可以通過(guò)任何適合的途徑給藥，優(yōu)選以適合這些途徑的藥物組合物的形式，且以對(duì)于所需治療有效的劑量給藥。本發(fā)明的化合物和組合物可以例如通過(guò)下述方式給藥，口服、粘膜、局部、直腸、肺(如通過(guò)吸入噴霧)、或胃腸外，包括血管內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)和輸注技術(shù)，以含有常規(guī)藥學(xué)可接受的載體、佐劑和賦形劑的劑量單位劑型。
本發(fā)明藥學(xué)活性的化合物可以根據(jù)常規(guī)藥劑學(xué)方法加工以制備向病人(包括人和其它哺乳動(dòng)物)給藥的藥物試劑。
對(duì)于口服給藥，所述藥物組合物可以以下述形式，例如，片劑、膠囊、混懸劑或液體。所述藥物組合物優(yōu)選制備成含有特定量活性成分的劑量單位形式。
這些劑量單位的實(shí)例為片劑或膠囊。例如，這些劑量單位可以含有的活性成分的量為約1-2000mg，優(yōu)選約1至500mg，更通常為約5至200mg。對(duì)于人或其它哺乳動(dòng)物適合的日劑量可以根據(jù)病人的情況和其它因素改變，但是再次可以使用常規(guī)方法確定。
給藥的化合物的量和使用本發(fā)明的化合物和/或組合物治療疾病的劑量方案依賴(lài)于多種因素，包括受治療者的年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況、疾病的類(lèi)型、疾病的嚴(yán)重程度、給藥途徑和頻率、和所用的具體化合物。因此，劑量方案可以在很寬范圍內(nèi)改變，但可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法常規(guī)地確定。通常的日劑量范圍為0.01至500mg化合物/kg體重，優(yōu)選0.1至125mg/kg體重，且有時(shí)為1至25mg/kg體重。如上所述，日劑量可以一次給藥或可以分為2、3、4或更多次給藥。
為了治療目的，本發(fā)明的活性化合物通常與所述適合給藥途徑的一種或多種佐劑、賦形劑或載體組合。如果口服給藥，所述化合物可以與下述物質(zhì)混合乳糖、蔗糖、淀粉粉末、鏈烷酸的纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉鹽和鈣鹽、明膠、金合歡膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇，然后制成適合方便給藥的片劑或膠囊。當(dāng)活性化合物分散在羥丙甲纖維素中時(shí)，這些膠囊或片劑可以含有控釋制劑。
對(duì)于皮膚病況，可以?xún)?yōu)選使用本發(fā)明化合物的局部制劑在受侵襲的區(qū)域每天施用2-4次。
適合局部給藥的制劑包括適合通過(guò)皮膚滲透液體或半液體制劑(如搽劑、洗劑、軟膏劑、乳膏劑或糊劑)和適合對(duì)于眼、耳或鼻給藥的滴劑。本發(fā)明化合物的活性成分的適合局部給藥的劑量為0.1mg至150mg，每天給藥1-4次，優(yōu)選1或2次。對(duì)于局部給藥，活性成分可以占制劑的0.001％至10％w/w，如1％至2％重量，雖然可以占制劑的10％w/w，但是優(yōu)選不超過(guò)5％w/w，且更優(yōu)選0.1％至1％。
當(dāng)配制成軟膏劑時(shí)，活性成分可以與石蠟或與水可溶混的軟膏基質(zhì)使用?；蛘?，活性成分可以與水包油乳膏基質(zhì)配制成乳膏劑。視需要，乳膏基質(zhì)的水相可以包括例如至少30％ w/w的多元醇，如丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油、聚乙二醇及其混合物。局部制劑可以希望包括提高活性成分通過(guò)皮膚或其它受侵襲區(qū)域吸收或滲透的化合物。這些皮膚滲透增強(qiáng)劑的實(shí)例包括二甲亞砜和相關(guān)類(lèi)似物。
本發(fā)明的化合物也可以通過(guò)經(jīng)皮設(shè)備給藥。優(yōu)選的經(jīng)皮給藥將使用存儲(chǔ)器和多孔膜類(lèi)型的貼片或固體基質(zhì)類(lèi)型的貼片實(shí)現(xiàn)。在這兩種情況中，遞送活性試劑—該活性試劑連續(xù)地從存儲(chǔ)器或微囊中通過(guò)膜進(jìn)入活性試劑可滲透的粘合劑，該粘合劑與接受者的皮膚或粘膜接觸。如果活性試劑通過(guò)皮膚吸收，則以可控和預(yù)定流量的活性試劑向接受者給藥。在微囊的情況中，包入膠囊的藥物也可以起膜的功能。
本發(fā)明乳劑的油相可以從已知成分用已知方式構(gòu)成。
而該相可以?xún)H含乳化劑，該相可以含有至少一種乳化劑與脂或油的混合物或至少一種乳化劑與脂和油的混合物。優(yōu)選的親水性乳化劑可以與作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑一起包含在乳化劑中。優(yōu)選既包括油又包括脂。含或不含穩(wěn)定劑的乳化劑組成所謂的乳化蠟，且該蠟與油和脂一起組成所謂的乳化軟膏基質(zhì)，該基質(zhì)形成乳膏制劑的油分散相。用于本發(fā)明制劑中的乳化劑和乳化穩(wěn)定劑包括吐溫60、司盤(pán)80、十八/十六醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、二硬脂酸甘油酯，這些物質(zhì)單獨(dú)使用或與蠟或其它本領(lǐng)域公知的物料一起使用。
對(duì)于制劑合適的油或脂的選擇可以基于實(shí)現(xiàn)所需的裝飾性質(zhì)，因?yàn)榛钚猿煞衷诖蠖鄶?shù)可能用于藥物乳劑中的油中的溶解度是非常低的。因此，所述乳劑應(yīng)該優(yōu)選是非油脂的、不污染的、和可洗滌的產(chǎn)品，其具有合適的稠度以避免從管或其它容器中漏出。可以使用直鏈或支鏈、一-或二烷基酯，如異己二酸二酯、硬脂酸異十六烷基脂、丙二醇二椰油脂肪酸酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己基酯或支鏈酯的混合物。根據(jù)所需的性質(zhì)，這些物質(zhì)可以單獨(dú)使用或組合使用。
或者，可以使用高熔點(diǎn)脂質(zhì)，如白軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適合向眼局部給藥的制劑也包括滴眼劑，其中活性成分溶解或混懸在適合的載體中，尤其是活性成分的含水溶劑中。
在這些制劑中存在的活性成分的濃度優(yōu)選為0.5至20％，有利地為0.5至10％，且特別為約1.5％ w/w。
用于胃腸外給藥的制劑可以為含水或不含水的等滲無(wú)菌注射溶液或混懸液的形式。這些溶液和混懸液可以從無(wú)菌粉末或顆粒使用配制口服給藥的制劑中所用的一種或多種載體或稀釋劑制備，或通過(guò)使用其它穩(wěn)定的分散劑或潤(rùn)濕劑和助懸劑配制。該化合物可以溶解在下述物質(zhì)中水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、麻油、苯甲醇、氯化鈉、黃蓍膠和/或各種緩沖液。
其它佐劑和給藥方法是藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的?；钚猿煞挚梢酝ㄟ^(guò)注射組合物給藥，所述組合物具有適合的載體，包括鹽水、葡萄糖或水，或具有環(huán)糊精(即Captisol)、共溶劑增溶劑(即丙二醇)或膠束增溶劑(即吐溫80)。
無(wú)菌可注射制劑也可以為在無(wú)毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或混懸劑，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的賦形劑和溶劑中，可以使用水、林格溶液和等滲氯化鈉溶液。而且，無(wú)菌的不揮發(fā)油方便地用作溶劑或混懸介質(zhì)。為此目的可以使用任何混和的不揮發(fā)油，包括合成的單甘油酯或二甘油酯。而且，發(fā)現(xiàn)了脂肪酸，如油酸在可注射制劑中的使用。
對(duì)于肺給藥，藥物組合物可以以氣霧劑或吸入劑，包括干燥粉末氣霧劑的吸入劑形式給藥。
用于直腸給藥的栓劑可以通過(guò)將藥物與適合的無(wú)刺激的賦形劑混合來(lái)制備，所述賦形劑如可可脂和聚乙二醇，所述賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體，且因此將在直腸中熔解和釋放藥物。
可以對(duì)藥物組合物進(jìn)行常規(guī)的藥學(xué)操作，如滅菌和/或可以含有常規(guī)的佐劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、緩沖劑等。可以用腸衣進(jìn)一步制備片劑和丸劑。這些組合物也可以包含佐劑，如潤(rùn)濕劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑。
本發(fā)明的藥物組合物包含本文所述的結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽；其它藥物，其選自激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過(guò)度增殖化合物；和任何藥學(xué)可接受的載體、佐劑或賦形劑。
本發(fā)明的其它組合物包含本文所述結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽；和藥學(xué)可接受的載體、佐劑或賦形劑。這些組合物可以任選包含一種或多種其它治療試劑，包括例如，激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過(guò)度增殖化合物。
術(shù)語(yǔ)＂藥學(xué)可接受的載體或佐劑＂是指可以與本發(fā)明的化合物一起向病人給藥的載體或佐劑，且其不破壞本發(fā)明化合物的藥理學(xué)活性，且當(dāng)以足以遞送治療量的化合物的量給藥時(shí)是無(wú)毒的。
可以用于本發(fā)明的藥物組合物中的藥學(xué)可接受的載體、佐劑和賦形劑包括，但不限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物遞送體系(SEDDS)如d-atocopherol聚乙二醇1000琥珀酸酯、藥物劑型中所用的表面活性劑如吐溫或其它相似的聚合物遞送基質(zhì)、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)如魚(yú)精蛋白硫酸鹽(protamine sulfate)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素基的物質(zhì)、聚乙二醇、羧基甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。環(huán)糊精，如u-、P-和y-環(huán)糊精，或化學(xué)改性的衍生物如羥基烷基環(huán)糊精，包括2和3-羥基丙基-環(huán)糊精，或其它可溶衍生物也可有利地用于提高本文所述結(jié)構(gòu)式的化合物的遞送。
藥物組合物可以以下述任何口服可接受的劑型口服給藥，所述劑型包括，但不限于，膠囊、片劑、乳劑和含水混懸劑、分散劑和溶液。在用于口服的片劑的情況中，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。一般也加入潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和無(wú)水玉米淀粉。當(dāng)口服給藥含水混懸劑和/或乳劑時(shí)，可以將活性成分混懸或溶解在與乳化劑和/或助懸劑混合的油相中。
視需要，可以加入某些甜味劑、矯味劑和/或著色劑。
藥物組合物可以包括利用脂質(zhì)體或微膠囊技術(shù)的制劑，其多種實(shí)例是本領(lǐng)域已知的。
藥物組合物可以通過(guò)鼻氣霧劑或吸入劑給藥。這些組合物根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域公知的技術(shù)制備，且可以使用下述物質(zhì)制備成在鹽水中的溶液苯甲醇或其它適合的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟代烴和/或其它增溶劑或分散劑，其實(shí)例是本領(lǐng)域公知的。
組合藥物 雖然本發(fā)明的化合物可以以單獨(dú)活性藥物給藥，但是它們也可以與一種或多種其它本發(fā)明的化合物或一種或多種其它藥物組合給藥。當(dāng)以組合藥物給藥時(shí)，可以將治療藥物配制為單獨(dú)的組合物，同時(shí)給藥，或在不同的時(shí)間順序給藥，或可以作為單個(gè)組合物給予治療藥物。
術(shù)語(yǔ)“組合療法＂是指本發(fā)明的化合物與其它藥物一起使用，即在在各種情況下在將提供藥物組合的有益效果的給藥方案中，以基本上同時(shí)的方式同時(shí)給藥每種藥物，以及以順序方式給藥每種藥物。同時(shí)給藥包括尤其同時(shí)給予，如以單個(gè)片劑、膠囊、注射劑或具有這些活性劑固定比例的其它劑型方式，以及以多個(gè)對(duì)于每種藥物分別為單獨(dú)的劑型同時(shí)遞送。
因此，給藥本發(fā)明的化合物可以與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的預(yù)防和治療癌癥的其它療法組合，如放療或細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑、細(xì)胞毒劑、其它抗癌劑和改善癌癥或任何藥物副作用的癥狀的其它藥物。
如果配制為固定的劑量，這些組合產(chǎn)物使用了在可接受的劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明的化合物。當(dāng)組合制劑不適合時(shí)，本發(fā)明的化合物也可以與其它抗癌劑或細(xì)胞毒劑順序給藥。本發(fā)明不限于順序給藥；本發(fā)明的化合物可以在給藥其它抗癌劑或細(xì)胞毒劑之前、同時(shí)或之后給藥。
現(xiàn)在，對(duì)于原發(fā)腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療包括外科手術(shù)切除，視需要，然后放療或化療，且一般靜脈(IV)給藥。通?；煼桨赴―NA烷化劑、DNA嵌入劑、CDK抑制劑或微管毒劑。所用的化療劑量剛好低于最大耐受劑量，且因此劑量限制毒性通常包括惡心、嘔吐、腹瀉、脫發(fā)、中性粒細(xì)胞減少癥等。
有許多抗腫瘤劑可用于商業(yè)使用、在臨床評(píng)定和在臨床前研究中，選擇這些抗腫瘤劑通過(guò)組合藥物化療用于治療癌癥。且有一些主要種類(lèi)的這些抗腫瘤劑，即抗生素類(lèi)藥、烷基化劑、抗代謝藥、激素類(lèi)藥、免疫藥、干擾素類(lèi)藥和混合類(lèi)型藥。
用于與本發(fā)明的化合物組合的第一類(lèi)的抗腫瘤劑包括抗代謝藥-類(lèi)型/胸苷酸合成抑制劑抗腫瘤劑。適合的抗代謝抗腫瘤劑可以選自，但不限于5-FU-纖維蛋白原、acanthifolic acid、氨基噻二唑、布喹那鈉、卡莫氟、CibaGeigyCGP-30694、環(huán)戊基胞嘧啶、阿糖胞苷磷酸硬脂酸鹽、阿糖胞苷結(jié)合物、禮來(lái)DATHF、Merrel Dow DDFC、地扎呱寧、雙脫氧胞苷、雙脫氧鳥(niǎo)苷、didox、Yoshitomi DMDC、去氧氟尿苷、威康(Wellcome)EHNA、默克EX-015、法扎拉濱、氟脲嘧啶脫氧核苷、磷酸氟達(dá)拉濱、5-氟尿嘧啶、N-(21-呋喃烷基)氟尿嘧啶、第一制藥FO-152、異丙基吡咯烷、禮來(lái)LY-188011、禮來(lái)LY-264618、methobenzaprim、甲氨蝶呤、威康MZPES、去甲精瞇、NCINSC-127716、NCI NSC-264880、NCI NSC-39661、NCI NSC-612567、華納-藍(lán)伯特PALA、噴他司丁、吡曲克辛、普卡霉素、旭化成PL-AC、武田TAC788、硫鳥(niǎo)嘌呤、噻唑呋林、Erbamont TIF、三甲曲沙、酪氨酸激酶抑制劑、大鵬UFT和優(yōu)你生。
用于與本發(fā)明的化合物組合的第二類(lèi)的抗腫瘤劑包括烷化劑類(lèi)抗腫瘤劑。適合的烷化劑類(lèi)抗腫瘤劑可以選自但不限于鹽野義(Shionogi)254-S、醛磷酰胺類(lèi)似物、六甲密胺、阿那昔酮、寶靈曼公司(Boehringer Mannheim)BBR-2207、百垂布西、布度鈦、涌永CA-102、卡鉑、卡莫司汀、Chinoin-139、Chinoin-153、苯丁酸氮芥、順鉑、環(huán)磷酰胺、氰胺公司(American Cyanamid)CL-286558、Sanofi CY-233、cyplatate、Degussa D 384、SumimotoDACHP(Myr)2、二苯基螺莫司汀、二鉑生長(zhǎng)抑制劑、Erba偏端霉素衍生物、Chugai DWA-2114R、ITI E09、依莫司汀、Erbamont FCE-24517、雌莫司汀磷酸鈉、福莫司汀、Unimed G M、Chinoin GYKI-17230、hepsulfam、異環(huán)磷酰胺、異丙鉑、洛莫司汀、馬磷酰胺、二溴衛(wèi)矛醇日本化藥NK-121、NCINSC-264395、NCI NSC-342215、奧沙利鉑、Upjohn PCNU、潑尼莫司汀、Proter PTT-119、雷莫司汀、司莫司汀、史克SK&F-101772、Yakult HonshaSN-22、螺莫司汀、田邊制藥TA-077、?；悄就?、替莫唑胺、替羅昔隆、四鉑和三甲密醇。
用于與本發(fā)明的化合物組合的第三類(lèi)的抗腫瘤劑包括抗生素類(lèi)抗腫瘤劑。適合的抗生素類(lèi)抗腫瘤劑可以選自但不限于大鵬4181-A、阿柔比星、放線(xiàn)菌素D、actinoplanone、Erbamont ADR-456、aeroplysinin衍生物、味之素AN II、味之素AN3、日本曹達(dá)茴香霉素、蒽環(huán)類(lèi)抗生素、阿齊諾霉素-A、bisucaberin、施貴寶(Bristol-Myers)BL-6859、施貴寶BMY-25067、施貴寶BNY-25551、施貴寶BNY-26605 I施貴寶BNY-27557、施貴寶BMY-28438、硫酸博萊霉素、苔蘚抑素-1、大鵬C-1027、加里剎霉素、chromoximycin、放線(xiàn)菌素D、柔紅霉素、協(xié)和發(fā)酵DC-102、協(xié)和發(fā)酵DC-79、協(xié)和發(fā)酵DC-88A、Kyowa Hakko、DC89-A1、協(xié)和發(fā)酵DC92-B、蒽環(huán)霉素B、鹽野義DOB-41、多柔比星、多柔比星-纖維蛋白原、elsamicin-A、表柔比星、癌基因抑活藥、依索比星、埃斯培拉霉素-Al、埃斯培拉霉素-Alb、ErbamontFCE21954、藤澤藥品FK-973、福司曲星、藤澤藥品FR-900482、滑行菌素、gregatin-A、grincamycin、除莠霉素、伊達(dá)比星、傘菌醇、kazusamycin、kesarirhodins、協(xié)和發(fā)酵KM-5539、Kirin Brewery KRN-8602、協(xié)和發(fā)酵KT-5432、協(xié)和發(fā)酵KT-5594、協(xié)和發(fā)酵KT-6149、氰胺公司LL-D49194、明治制果(Meiji seika)ME 2303、美諾立爾、絲裂霉素、米托蒽醌、史克M-TAG、neoenactin、日本化藥NK-313、日本化藥NKT-01、SRI InternationalNSC-357704、噁溶菌素、oxaunomycin、培洛霉素、pilatin、吡柔比星、porothramycin、pyrindanycin A、Tobishi RA-I、雷帕霉素、根霉素、羅多比星、西班米星、siwenmycin、Sumitomo SM5887、Snow Brand SN-706、SnowBrand SN-07、sorangicin-A、司帕霉素、SS Pharmaceutical SS-21020、SSPharmaceutical SS-7313B、SS Pharmaceutical SS-9816B、司替霉素B、大鵬4181-2、他利霉素、武田TAN-868A、terpentecin、thrazine、tricrozarin A、Upjohn U-73975、協(xié)和發(fā)酵UCN-10028A、藤澤藥品WF-3405、YoshitomiY-25024和佐柔比星。
用于與本發(fā)明的化合物組合的第四類(lèi)的抗腫瘤劑包括混合類(lèi)型抗腫瘤試劑，包括微管干擾劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑和激素類(lèi)藥，其選自但不限于(xcarotene，(X-二氟甲基-精氨酸、阿昔曲丁、BiotecAD-5、Kyorin AHC-52、解熱樹(shù)堿、氨萘非特、amphethinile、安吖啶、Angiostat、ankinomycin、抗贅生物A10、抗贅生物A2、抗贅生物A3、抗贅生物A5、抗贅生物AS2-1F Henkel APD、甘氨酸阿非迪霉素、天冬酰胺酶、阿甫羅醇、燕茜素、batracylin、苯氟倫、氯苯酰色氨酸、Ipsen-Beaufour BIM-23015、比生群、BristoMyers BNY-40481、Vestar boron-10、bromo fosfamide、威康BW-502、威康BW-773、卡醋胺、鹽酸carmethizole、味之素CDAF、chlorsulfaquinoxalone、Chemes CHX-2053、Chemex CHX-100、華納-藍(lán)伯特CI-921、WarnerLambert CI-937、華納-藍(lán)伯特CI-941、華納-藍(lán)伯特CI958、克蘭氟脲、claviridenone、ICN化合物1259、ICN化合物4711、Contracan，YakultHonsha CPT-11、克立那托、curaderm、細(xì)胞松弛素B、阿糖胞苷、cytocytin、Merz D-609、馬來(lái)酸DABIS、達(dá)卡巴嗪、datelliptinium、代代寧-B、雙血卟淋醚、dihydrolenperone、地那林、偏端霉素、Toyo Pharmar DM-341、ToyoPharmar DM-75、第一制藥DN-9693、多西紫杉醇elliprabin、乙酸依利醋銨、Tsumura EPMTC、埃博霉素、麥角胺、依托泊苷、依曲替酯、芬維A胺、藤澤藥品FR-57704t硝酸鎵、芫花烯、Chugai GLA-43、Glaxo GR-63178、灰樹(shù)花多糖NMF5N、十六烷膽堿磷酸、Green Cross HO-221、高三尖杉酯堿、羥基脲、BTG ICRF-187、伊莫福新、異谷酰胺、異維甲酸、Otsuka JI-36、Ramot K-477、Otsuak K-76COONa、Kureha Chemical K-AM、MECT CorpKI-8110、氰胺公司L-623、白細(xì)胞調(diào)節(jié)素、氯尼達(dá)明、Lundbeck LU 1121禮來(lái)LY-186641、NCI(US)MAP、marycin、Merrel Dow MDL-27048、MedcoMEDR-340、merbarone、merocyanlne衍生物、甲基苯胺基吖啶、MolecularGenetics MGI136、茗萘酊、米托萘胺、米托喹酮莫哌達(dá)醇、莫維A胺、ZenyakuKogyo MST-16、N-(類(lèi)維A酸)氨基酸、Nisshin Flour Milling N-021、N-乙酰化-去氫丙氨酸、那法扎瓊、Taisho NCU-190、諾考達(dá)唑衍生物、Normosang、NCI NSC-145813、NCI NSC-361456、NCI NSC-604782、NCI NSC-95580、八肽奧曲肽(ocreotide)、Ono ONO-112、oquizanocine、Akzo Org-10172、紫杉醇、水鬼蕉堿、帕折普汀、華納-藍(lán)伯特(Warner-Lambert)PD-111707、華納-藍(lán)伯特PD-115934、華納-藍(lán)伯特PD-131141、Pierre Fabre PE-1001、ICRT肽D、吡羅蒽醌、polyhaematoporphyrin、polypreic acid、Efamol卟啉、丙雙嗎琳、丙卡巴肼、丙谷胺、Invitron蛋白酶連結(jié)素I、Tobishi RA-700、雷佐生、Sapporo Breweries RBS、節(jié)制蛋白-P、瑞替普汀、維A酸、Rhone-PoulencRP-49532、Rhone-Poulenc RP-56976、史克SK&F-104864、Sumitomo SM-108、Kuraray SMANCS、SeaPharm SP10094、褐舌藻醇、螺環(huán)丙烷衍生物、螺旋鍺、Unimed、SS Pharmaceutical SS-554、strypoldinone、Stypoldione、三得利SUN 0237、三得利SUN 2071、超氧化物歧化酶、Toyama T-506、ToyamaT-680、紫杉醇、Teijin TEI-0303、替尼泊昔、thaliblastine、Eastman KodakTJB-29、生育三烯酸、托泊替康、Topostin、Teijin TT82、協(xié)和發(fā)酵UCN-01、協(xié)和發(fā)酵UCN-1028、ukrain、Eastman Kodak USB-006、硫酸長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、vinestramide、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春曲醇、長(zhǎng)春利定、醉茄內(nèi)酯和山之內(nèi)YM。另一方面，本發(fā)明的化合物也可以用于與其它抗腫瘤劑聯(lián)合治療，所述抗腫瘤劑例如乙酰嗎喃、阿柔比星、阿地白介素、阿侖單抗、alitretinoin、六甲密胺、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、ANCER、安西司亭、ARGLABIN、三氧化二砷、BAM 002(Novelos)、貝沙羅汀、比卡魯胺、溴尿苷、卡培他濱、西莫白介素、西曲瑞克、克拉曲濱、克霉唑、阿糖胞苷ocfosfate、DA 3030(Dong-A)、達(dá)克珠單抗、地尼白介素-毒素連接物、地洛瑞林、右雷佐生、地拉卓、多西紫杉醇、二十二烷醇、度骨化醇、去氧氟尿苷、多柔比星、溴隱亭、卡莫司汀、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、HIT雙氯芬酸、干擾素α、柔紅霉素、多柔比星、維甲酸、依地福新、依決洛單抗依氟鳥(niǎo)氨酸、乙嘧替氟、表柔比星、紅細(xì)胞生成素β、磷酸依托泊苷、依西美坦、依昔舒林、法倔唑、非格司亭、非那雄胺、磷酸氟達(dá)拉濱、福美坦、福莫司汀、硝酸鎵、吉西他濱、吉姆單抗奧佐米星、吉美嘧啶/奧替拉西/替加氟組合、glycopine、戈舍瑞林、庚鉑、人絨毛膜促性腺激素、人胎兒α胎兒球蛋白、伊班膦酸、伊達(dá)比星、(咪喹莫特、干擾素α、干擾素α、天然干擾素α-2、干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素α-NI、干擾素α-n3、干擾素α-1、干擾素α、天然干擾素β、干擾素β-1a、干擾素β-1b、干擾素γ、天然干擾素γ-1a、干擾素γ-1b、白細(xì)胞介素-Iβ、碘芐胍、伊立替康、伊索拉定、蘭瑞肽、LC 9018(Yakult)、來(lái)氟米特、來(lái)格司亭、硫酸香菇多糖、來(lái)曲唑、白細(xì)胞α干擾素、亮丙瑞林、左旋咪唑+氟尿嘧啶、利阿唑、洛鉑、氯尼達(dá)明、洛伐他汀、馬索羅酚、美拉胂醇、甲氧氯普胺、米非司酮、米替福新、米立司亭、錯(cuò)配雙鏈RNA、米托胍腙、二溴衛(wèi)矛醇、米托蒽醌、莫拉司亭、那法瑞林、納洛酮+噴他佐辛、那托司亭、奈達(dá)鉑、尼魯米特、那可丁、新紅細(xì)胞生成刺激因子、NSC 631570奧曲肽、奧普瑞白介素、奧沙特隆、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米磷酸、培門(mén)冬酶、聚乙二醇干擾素α-2b、木聚硫鈉、噴他司丁、溶鏈菌、吡柔比星、兔抗胸腺細(xì)胞多克隆抗體、聚乙二醇干擾素α-2a、卟吩姆鈉、雷洛昔芬、雷替曲塞、拉布立酶、乙二胺四乙酸錸Re 186、RII維胺脂、利妥昔單抗、羅莫肽、來(lái)昔決南釤(153Sm)、沙格司亭、西佐喃、索布佐生、索納明、氯化鍶-89、蘇拉明、他索納明、他扎羅汀、替加氟、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊昔、十氧化四氯、沙利度胺、胸腺法新、促甲狀腺素α、托泊替康、托瑞米芬、托西莫單抗-碘131、曲妥單抗、曲奧舒凡、維甲酸、曲洛司坦、三甲曲沙、曲普瑞林、腫瘤壞死因子α、天然苯丁抑制素、膀胱癌疫苗、Maruyama.疫苗、黑素瘤溶菌產(chǎn)物疫苗、戊柔比星、維替泊芬、長(zhǎng)春瑞濱、VIRULIZIN、凈司他丁斯酯或唑來(lái)膦酸；阿巴瑞克；AE 941(Aeterna)、氨莫司汀、反義寡核苷酸、bcl-2(Genta)、APC 8015(Dendreon)、西妥昔單抗、地西他濱、去氨基格魯米特、地吖醌、EL 532(Elan)、EM 800(Endorecherche)、恩尿嘧啶、依他硝唑、芬維A胺I非格司亭SDO1(Amgen)、氟維司群、加洛他濱、胃泌素17免疫原、HLA-B7基因療法(Vical)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、二鹽酸組胺、替伊莫單抗、伊洛馬司他、IM 862(Cytran)、白細(xì)胞介素iproxifene、LDI 200(Milkhaus)、來(lái)立司亭、林妥珠單抗、CA 125 MAb(Biomira)、癌癥MAb(JapanPharmaceutical Development)、HER-2和Fc MAb(Medarex)、個(gè)體基因105AD7MAb(CRC Technology)、個(gè)體基因CEA MAb(Trilex)、LYM碘131 MAb(Techniclone)、多形態(tài)上皮粘蛋白-釔90MAb(Antisoma)、馬立馬司他、美諾立爾、米妥莫單抗、莫特沙芬、釓、MX 6(Galderma)、奈拉濱、諾拉曲塞、P 30蛋白、培維索孟、培美曲塞、泊非霉素、普啉司他、RL 0903(Shire)、盧比替康、沙鉑、苯基乙酸鈉、膦門(mén)冬酸、SRL 172(SR Pharma)、SU 5416(SUGEN)y SU 6668(SUGEN)、TA 077(Tanabe)、四硫鉬酸鹽、thaliblastine、血小板生成素、錫乙基初紫紅素、替拉扎明、癌癥疫苗(Biomira)、黑素瘤疫苗(New York University)、黑素瘤疫苗(Sloan Kettering Institute)、黑素瘤腫瘤溶解劑疫苗(New York Medical College)、病毒黑素瘤細(xì)胞溶胞產(chǎn)物菌苗(Royal Newcastle Hospital)或伐司樸達(dá)。
治療試劑盒 在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及方便和有效實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒。通常，藥包或試劑盒包含一個(gè)或多個(gè)裝有本發(fā)明藥物組合物的一種或多種成分的容器。這些試劑盒尤其適合于遞送固體口服劑型，例如片劑或膠囊。這樣的試劑盒優(yōu)選包括許多單位劑量，且也可包括具有為了希望的用途所標(biāo)定的劑量的卡片。視需要可以提供記憶輔助，例如以數(shù)字、字母或其它標(biāo)記，或日歷插頁(yè)，表明治療方案的日期，其中所述劑量為給藥劑量。任選地，組合的容器應(yīng)以政府機(jī)關(guān)規(guī)定的方式注釋?zhuān)哉{(diào)節(jié)藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)、用途或銷(xiāo)售，所述注釋反應(yīng)批準(zhǔn)的生產(chǎn)廠(chǎng)家，對(duì)人給藥的用途或銷(xiāo)售。
下述代表性實(shí)施例包括適合本發(fā)明以其多種實(shí)施方案和等同方案實(shí)施重要的其它信息、示例和指導(dǎo)。這些實(shí)施例是為了幫助說(shuō)明本發(fā)明，而不是為了將本發(fā)明限制在該范圍內(nèi)。事實(shí)上，當(dāng)看完本文件(包括下述實(shí)施例和本文所引用的科學(xué)參考文獻(xiàn)和專(zhuān)利文件)后，除本文所示和所述外，本發(fā)明的多種改進(jìn)和其許多其它實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。所引用的這些內(nèi)容在此引用作為參考以幫助說(shuō)明本領(lǐng)域的狀況。而且，為達(dá)到本發(fā)明的目的，在本說(shuō)明書(shū)中所述化學(xué)元素與元素周期表(Periodic Table ofthe Elements)，CAS版，化學(xué)和物理手冊(cè)(Handbook of Chemistry and Physics，第75版，內(nèi)表(inside cover))相同。而且，有機(jī)化學(xué)的一般規(guī)則以及特定官能團(tuán)部分和活性如“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University ScienceBooks，Sausalito1999，和“Organic Chemistry”，Morrison & Boyd(3d Ed)中所述，二者全部在此引用作為參考。
實(shí)施例 下述實(shí)施例中的一些化合物轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽。生成鹽酸鹽的一般方法如下所述 向最終產(chǎn)物中加入恰好足夠的HCl(g)飽和的甲醇使最終產(chǎn)物溶解，冷卻至0℃保持0.5-1小時(shí)，過(guò)濾，用冰冷卻的甲醇然后是Et2O洗滌固體，所得固體在真空干燥器中干燥，大多數(shù)情況下得到三鹽酸鹽。
實(shí)施例1 3-(1H-吡唑-1-甲酰胺-N-甲基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺
1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯在氮?dú)庀拢瑢?-甲基-5-硝基次芐基三氟化物(3.90g，19mmol)、N-溴代琥珀酰亞胺(NBS，3.56g，20mmol)、2，2’-偶氮二(2-甲基丙腈)(AIBN，94mg，0.6mmol)的CCl4(40mL)懸浮液回流16小時(shí)。HPLC顯示約50％轉(zhuǎn)化。再加入NBS(10mmol)和AIBN(0.6mmol)，將該混合物再回流14小時(shí)。HPLC顯示約80％轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物冷卻，濾去固體并用乙酸乙酯洗滌。合并的濾液用NaHCO3水溶液洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(rotovap)上濃縮，真空干燥。1H NMR顯示所需產(chǎn)物與未反應(yīng)2-甲基-5-硝基次芐基三氟化物的比例是75:25。該物質(zhì)未進(jìn)行純化直接用于下一步中。
1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基)芐基)哌嗪向粗1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(13.33mmol，75％純)的DCM(10mL)溶液中加入Et3N(1.4mL，10mmol)和1-甲基哌嗪(1.1mL，10mmol)。在室溫下攪拌3小時(shí)后，加入NaHCO3水溶液，該混合物用DCM萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠層析純化(用10％甲醇/DCM洗脫)得到2.21g產(chǎn)物，呈淡黃色油狀。
4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺將1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基)芐基)哌嗪(1.23g，4mmol)和亞硫酸氫鈉(7.0g，純度85％，購(gòu)自Aldrich，40mmol)在丙酮和水(1:1，20mL)中的懸浮液回流3小時(shí)。冷卻時(shí)，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去揮發(fā)性成分(主要是丙酮)，并過(guò)濾所得混合物。固體用乙酸乙酯充分地洗滌。合并的濾液用n-BuOH(4x)萃取。合并的有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠層析純化(用5％甲醇/DCM洗脫，甲醇預(yù)先用氨氣飽和)，得到0.71g產(chǎn)物，呈淡黃色固體。
3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺將3-碘-4-甲基苯甲酰氯(0.48g，1.7mmol)(由3-碘-4-甲基苯甲酸和SOCl2反應(yīng)制得(如前所述))加入到4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯胺(0.47g，1.7mmol)、N，N-二異丙基乙基胺(0.26g，2.0mmol)和催化量的DMAP在THF(10mL)中的溶液中。在室溫下攪拌2小時(shí)后，用水淬滅反應(yīng)。加入乙酸乙酯并分層。合并的有機(jī)層濃縮至干，硅膠層析純化(用5％甲醇/DCM洗脫，甲醇預(yù)先用氨氣飽和)，得到0.51g產(chǎn)物，呈乳白色固體。
4-甲基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-3-三甲基硅烷基乙炔基-苯甲酰胺將3-碘-4-甲基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-苯甲酰胺(2.59g，5mmol)、Pd[(PPh3)]4(289mg，0.25mmol)、CuI(71mg，0.375mmol)置于schlenk燒瓶中。將該燒瓶進(jìn)行3次真空-再充滿(mǎn)氮?dú)獾难h(huán)。向該混合物中加入無(wú)水N，N-二異丙基乙基胺(1.1mL，6mmol)、DMF(5mL)、和三甲基硅烷基乙炔(0.92mL，6.5mmol)。在室溫下攪拌該溶液24小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯，進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，過(guò)濾，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱純化(用5％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到所需產(chǎn)物，呈淡黃色固體，產(chǎn)率82％(2.0g)。
3-乙炔基-4-甲基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-苯甲酰胺向4-甲基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-3-三甲基硅烷基乙炔基-苯甲酰胺(2.0g，4.1mmol)的THF(15mL)溶液中加入5mL的TBAF在THF(1.0M)中的溶液。室溫下攪拌1小時(shí)后，混合物在H2O和乙酸乙酯之間分配。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，過(guò)濾，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物在硅膠柱上純化(用10％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到所需產(chǎn)物，呈淡黃色固體，產(chǎn)率78％(1.33g)。
1H-吡唑-1-N-甲基甲酰胺向4-碘吡唑(3g，15.5mmol)的干燥CH2Cl2(20mL)溶液中加入氯甲酸對(duì)-硝基苯基酯(3.43g，17mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液，然后加入TEA(2.5mL，18.6mmol)。將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。然后該混合物用過(guò)量的CH2Cl2(60mL)稀釋并用10％ NaHCO3水溶液洗滌。有機(jī)層用Na2SO4干燥并蒸去溶劑，所得固體經(jīng)Et2O重結(jié)晶，得到白色固體(5g)。用MeNH2溶液(2mL，2M的THF溶液)處理所得產(chǎn)物(1g，2.79mmol)的THF(12mL)溶液10分鐘。蒸發(fā)有機(jī)層，將所得固體溶于DCM并用5％NaOH洗滌。干燥有機(jī)層、過(guò)濾、并用乙醚研制，得到無(wú)色有光澤的片狀產(chǎn)物(0.55g)。
3-(1H-吡唑-1-甲酰胺-N-甲基)-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺將3-乙炔基-4-甲基-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-苯甲酰胺(91mg，0.22mmol)、1H-吡唑-1-N-甲基甲酰胺(0.2mmol)、Pd[(PPh3)]4(11.6mg，0.01mmol)、CuI(2.9mg，0.015mmol)置于蓋有橡膠片(septa)的瓶中。讓該瓶進(jìn)行3次真空/充滿(mǎn)氮?dú)獾难h(huán)。向該混合物中加入無(wú)水N，N-二異丙基乙基胺(0.1mL，0.6mmol)和DMF(1.0mL)。在80℃攪拌所得溶液24小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻之后，加入水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥、過(guò)濾、然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱純化(用10％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到所需產(chǎn)物，呈淡黃色固體，產(chǎn)率56％(63.0mg)MS(M+H)+538。
實(shí)施例2 1-甲基-5-(2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基氨基甲?；鵠-苯基乙炔基)-1H-咪唑-2-甲酰胺
5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺在-78℃下，向1-甲基-5-三甲基硅烷基乙炔基-1H-咪唑(1.78g，10mmol)的THF(30mL)溶液中緩慢加入n-BuLi的己烷溶液(2.5M，4.4mL)，并在相同溫度下攪拌所得懸浮液1小時(shí)。在-78℃下，向其中緩慢加入異氰酸三甲基硅烷基酯(購(gòu)自Aldrich，純度85％，11.76mmol，1.6mL)。在-78℃再攪拌30分鐘之后，除去冷卻浴讓反應(yīng)混合物緩慢升溫。加入水(2mL)和甲醇(1mL)淬滅反應(yīng)，并攪拌該混合物過(guò)夜。再加入水和乙酸乙酯進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥、過(guò)濾、然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱純化(洗脫液40-60％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到所需產(chǎn)物，呈白色固體，產(chǎn)率26％(387mg)。
1-甲基-5-(2-甲基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基氨基甲酰基]-苯基乙炔基)-1H-咪唑-2-甲酰胺將5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(33mg，0.22mmol)、3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(103.4mg，0.2mmol)(如實(shí)施例1所述制備)、Pd[(PPh3)4](11.6mg，5mol％)、和CuI(2.9mg，7.5mmol％)置于有橡膠片的瓶中。讓該混合物進(jìn)行3次真空/充滿(mǎn)氮?dú)獾难h(huán)，加入DMF(1.5ml)和N，N-二異丙基乙基胺(53μL，0.3mmol)。在室溫下攪拌該混合物16小時(shí)，用水淬滅該反應(yīng)。加入乙酸乙酯和另一些水用于萃取。合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠層析純化(洗脫液5％甲醇的二氯甲烷溶液，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到呈米黃色固體的標(biāo)題化合物(65％，70mg)MS(M+H)+539。
實(shí)施例3 1-甲基-5-(2-甲基-5-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基-苯基氨基甲?；鵠-苯基乙炔基)-1H-咪唑-2-甲酰胺
按照實(shí)施例2使用5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺和3-碘-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺制得標(biāo)題化合物MS(M+H)+507。
3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺將3-溴-5-(三氟甲基)苯胺(4.8g，20mmol)、4-甲基咪唑(1.97g，24mmol)、碳酸鉀(3.04g，22mmol)、CuI(0.57g，3mmol)、和8-羥基喹啉(0.44g，3mmol)在無(wú)水DMSO(20mL)中的懸浮液置于壓力管中，在攪拌的同時(shí)通過(guò)向該懸浮液中吹入氮?dú)饷摎?0分鐘。將該管緊密地密封。在120℃(油浴溫度)加熱該混合物15小時(shí)。將該混合物冷卻至45-50℃并加入14％ NH4OH(20mL)水溶液。讓混合物保持該溫度1小時(shí)。冷卻至室溫后，加入水和乙酸乙酯。水層用乙酸乙酯萃取，合并有的機(jī)層通過(guò)短硅膠柱以除去大多數(shù)的綠/藍(lán)Cu鹽。濾液用硫酸鈉干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶，得到純的淡黃色針狀物。濃縮母液，殘留物用硅膠柱純化(5％甲醇/二氯甲烷)，得到第二批產(chǎn)物，呈淡黃色針狀物。
3-碘-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺將3-碘-4-甲基苯甲酸(2.62g，10mmol)在SOCl2(10mL)中回流1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于苯(10mL)中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干，然后再真空干燥。將所得酰氯加入到3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(2.46g，10.2mmol)、N，N-二異丙基乙基胺(1.56g，12mmol)、和催化量的DMAP在THF(20mL)中的溶液中。室溫下攪拌2小時(shí)后，反應(yīng)用水淬滅。加入乙酸乙酯并分層。合并的有機(jī)層濃縮至干，并不用純化即用于下一步驟。
實(shí)施例4 5-[5-(3-咪唑-1-基-5-三氟甲基苯基氨基甲酰基)-2-甲基-苯基乙炔基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺
按照實(shí)施例2使用5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺和N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺制得上述化合物MS(M+H)+493。
3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺在氬氣氛下，將3-氨基-5-溴代次芐基三氟化物(4.0g，0.0167mol)、8-羥基喹啉(0.362g，0.0025mol)、CuI(0.476g，0.025mol)、咪唑(1.36g，0.0199mol)、和碳酸鉀(2.52g，0.0183mol)在17mL的DMSO中的混合物(用氬氣脫氣～10分鐘)在120℃下加熱15小時(shí)；HPLC表示沒(méi)有起始物料。將14％的氫氧化銨水溶液加入冷卻的混合物中，在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)。加入水(50mL)和乙酸乙酯(200mL)，水層用乙酸乙酯(3 x 30mL)萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠快速層析(用乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到2.51g產(chǎn)物。
N-(3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺向3-碘-4-甲基苯甲酸(3.07g，0.0117mol)中加入亞硫酰二氯(10mL)，回流2小時(shí)。小心地除去過(guò)量的亞硫酰二氯，所得酰氯真空干燥2小時(shí)。然后將殘留物溶解在DCM(無(wú)水，25mL)中并在冰上冷卻。向冷卻溶液中加入3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(3.46g，0.0152mol)的DCM溶液，然后滴加二異丙基乙基胺(8.2mL，0.047mol)。將其在環(huán)境溫度下攪拌21小時(shí)。過(guò)濾分離的白色固體，用水洗滌并干燥得到4.65g產(chǎn)物。另外的產(chǎn)物可以由濾液濃縮，硅膠快速層析(用乙酸乙酯/己烷洗脫)純化得到。
實(shí)施例5 3-[(2-氨基-1，3-噻唑-5-基)乙炔基]-4-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺
{5-[(三甲基硅烷基)乙炔基]-1，3-噻唑-2-基}氨基甲酸叔丁酯在氮?dú)夥障?，?5-溴-1，3-噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.79g，10mmol)、乙炔基三甲基硅烷(1.27g，13mmol)、Pd(PPh3)4(578mg，0.5mmol)、CuI(143mg，0.75mmol)、和二異丙基乙基胺(1.94g，15mmol)在DMF(10mL)中的混合物于50℃下加熱過(guò)夜。冷卻到環(huán)境溫度后，將反應(yīng)混合物濃縮，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速層析(用20％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到黃色固體(2.55g，86％)。
{5-[(2-甲基-5-{[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；鶀苯基)乙炔基]-1，3-噻唑-2-基}氨基甲酸叔丁酯在氮?dú)夥障?，將{5-[(三甲基硅烷基)乙炔基]-1，3-噻唑-2-基}氨基甲酸叔丁酯(166mg，0.56mmol)、3-碘-4-甲基-N-(3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺(247mg，0.51mmol)、Pd(PPh3)4(29mg，0.025mmol)、CuI(7.1mg，0.0375mmol)、TBAF(1.0M的THF溶液，0.62mL，0.62mmol)、和二異丙基乙基胺(0.14mL，0.78mmol)在3.0mL的DMF中的混合物于環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)用水淬滅。加入乙酸乙酯和另一些水用于萃取。合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)，得到呈褐色固體的所需產(chǎn)物(216mg，73％)。
3-[(2-氨基-1，3-噻唑-5-基)乙炔基]-4-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺在室溫下攪拌{5-[(2-甲基-5-{[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；鶀苯基)乙炔基]-1，3-噻唑-2-基}氨基甲酸叔丁酯(216mg)的TFA/CH2Cl2(10mL，1:1)溶液1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去揮發(fā)性成分，殘留物在乙酸乙酯和NaHCO3水溶液之間分配。合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物用硅膠快速層析純化(用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到呈褐色固體的所需產(chǎn)物(170mg，95％)482m/z(M+H)。
實(shí)施例6 3-{[2-(乙酰基氨基)-1，3-噻唑-5-基]乙炔基}-4-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺
將3-[(2-氨基-1，3-噻唑-5-基)乙炔基]-4-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(100mg)的Ac2O(10mL)溶液在130℃下加熱2小時(shí)。冷卻到室溫后，真空除去揮發(fā)性成分，殘留物在乙酸乙酯和NaHCO3水溶液之間分配。合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物用硅膠快速層析純化(用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到呈褐色固體的所需產(chǎn)物(105mg，96％)524 m/z(M+H)。
實(shí)施例7 4-[(5-{[3-{2-[(二甲基氨基)甲基]-1H-咪唑-1-基}-5-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；鶀-2-甲基苯基)乙炔基]-N-甲基-1H-吡唑-1-甲酰胺的可選合成方法
標(biāo)題化合物可以由1H-吡唑-1-N-甲基甲酰胺和N-[3-{2-[(二甲基氨基)甲基]-1H-咪唑-1-基}-5-(三氟甲基)苯基]-3-乙炔基-4-甲基苯甲酰胺按照與實(shí)施例1所述類(lèi)似的方法合成。
1-(1H-咪唑-2-基)-N，N-二甲基甲胺向安裝有回流冷凝器和壓力平衡加料漏斗的兩頸圓底燒瓶中加入2-咪唑甲醛(6g，62.5mmol)的甲醇(60mL)溶液。向該懸浮液(環(huán)境溫度)中快速滴加二甲胺(40％水溶液，60mL)溶液(20分鐘)。加完后，用45分鐘分次小心加入固體硼氫化鈉(7g，186.8mmol，)。每次加入后形成泡沫，并且使內(nèi)部溫度保持在～50℃而無(wú)需外部冷卻。然后將該反應(yīng)混合物加熱至65℃保持3小時(shí)，然后冷卻至環(huán)境溫度過(guò)夜。真空濃縮反應(yīng)物，所得殘留物溶于乙酸乙酯(2×30mL)，用鹽水和CHCl3(4×100mL)洗滌。棄去乙酸乙酯萃取液。用NaSO4干燥CHCl3萃取液，并真空濃縮得到3.7g所需產(chǎn)物，呈蠟狀固體。
3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺將3-氨基-5-溴代次芐基三氟化物(6g，25mmol)和1-(1H-咪唑-2-基)-N，N-二甲基甲胺(3.7g，29.6mmol)溶于無(wú)水DMSO(25mL)中。向其中加入CuI(0.95g，7.5mmol)、8-羥基喹啉(0.72g，7.5mmol)和K2CO3(6.9g，50mmol)。劇烈攪拌該混合物并用氮?dú)饷摎?5分鐘。然后將燒瓶安裝上冷凝器并在120℃加熱18小時(shí)。將所得不均勻混合物冷卻至室溫，倒入至14％ NH4OH(100mL)水溶液中并用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。合并的萃取液用NaSO4干燥，真空濃縮。殘留物經(jīng)硅膠層析，用甲醇/DCM(5:95)洗脫，得到3.5g所需產(chǎn)物，呈棕黃色，285 m/z(M+H)。
N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺將3-碘-4-甲基苯甲酰氯(2.2g，7.88mmol)溶于無(wú)水THF(13mL)中，然后在～5℃將其滴加入至3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(1.5g，5.5mmol)、DIPEA(2.1mL，11.8mmol)在THF(30mL)中的溶液中。所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。真空除去溶劑，粗殘留物再次溶解于CH2Cl2中，用1N的NaOH洗滌。然后有機(jī)層用水和鹽水洗滌，NaSO4干燥，然后真空濃縮。然后棕色殘留物用己烷/DCM混合物研制，沉淀得到1.4g所需產(chǎn)物，呈米黃色粉末529 m/z(M+H)。
N-[3-{2-[(二甲基氨基)甲基]-1H-咪唑-1-基}-5-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[(三甲基硅烷基)乙炔基]苯甲酰胺的可選合成方法將N-(3-(2-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺(5mmol)、Pd[(PPh3)]4(289mg，0.25mmol)、CuI(71mg，0.375mmol)置于schlenk燒瓶中。將該燒瓶進(jìn)行3次真空-再充滿(mǎn)氮?dú)獾难h(huán)。向該混合物中加入無(wú)水N，N-二異丙基乙基胺(1.1mL，6mmol)、DMF(5mL)、和三甲基硅烷基乙炔(0.92mL，6.5mmol)。在室溫下攪拌該溶液24小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯，進(jìn)行萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，過(guò)濾，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱純化(用5％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)得到所需產(chǎn)物。
N-[3-{2-[(二甲基氨基)甲基]-1H-咪唑-1-基}-5-(三氟甲基)苯基]-3-乙炔基-4-甲基苯甲酰胺的可選合成方法向N-[3-{2-[(二甲基氨基)甲基]-1H-咪唑-1-基}-5-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[(三甲基硅烷基)乙炔基]苯甲酰胺(4.1mmol)的THF(15mL)溶液中加入5mL TBAF的THF(1.0M)溶液。在室溫下攪拌1小時(shí)后，將該混合物在水和乙酸乙酯之間分配。合并有機(jī)層，用Na2SO4干燥，過(guò)濾，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱純化(用10％甲醇的CH2Cl2溶液洗脫，甲醇用氨氣預(yù)先飽和)得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例8 N-{3-氯-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-4-甲基-3-[(1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基]苯甲酰胺的可選合成方法
按照實(shí)施例2，由5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑(由1-甲基-5-三甲基硅烷基乙炔基-1H-咪唑脫保護(hù)制得)和N-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成標(biāo)題化合物。
1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基-苯在氮?dú)夥障?，?-氯-4-硝基甲苯(10.0g，58.3mmol)、N-溴代琥珀酰亞胺(NBS，10.9g，61.2mmol)、和2，2’-偶氮二(2-甲基丙腈)(AIBN，0.29g，1.75mmol)在120mL CCl4中的懸浮液回流加熱12小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，過(guò)濾固體并用乙酸乙酯洗滌。合并的濾液用NaHCO3水溶液洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，進(jìn)一步真空干燥。1H NMR顯示所需產(chǎn)物與未反應(yīng)2-氯-4-硝基甲苯的比例為50:50.該物質(zhì)直接用于下一步驟。
1-(2-氯-4-硝基芐基)-4-甲基哌嗪向粗1-(溴甲基)-2-氯-4-硝基-苯(29.1mmol；純度50％)的30mL的DCM溶液中加入Et3N(4.2mL，30mmol)和1-甲基哌嗪(3.4mL，30mmol)。環(huán)境溫度下攪拌3小時(shí)后，加入NaHCO3水溶液并用DCM萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠層析純化(用5％甲醇/DCM洗脫)，得到6.80g產(chǎn)物，呈暗黃色油狀物。
3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺向1-(2-氯-4-硝基芐基)-4-甲基哌嗪(0.96g，3.6mmol)的甲醇/水(4:1，50mL)溶液中加入1.80g(33.7mmol)NH4Cl和1.47g(26.3mmol)鐵粉，在氮?dú)夥障禄亓骷訜嵩摶旌衔?小時(shí)(HPLC顯示無(wú)進(jìn)展)。向其中加入4mL冰醋酸，再將該混合物回流加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，過(guò)濾并濃縮濾液。殘留物在乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液之間分配，分離的水層用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌合并的有機(jī)物并用Na2SO4干燥。濃縮后，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化(用5-7％甲醇/DCM洗脫；硅膠用1％三乙胺/DCM鈍化)，得到0.53g產(chǎn)物。
N-{3-氯-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-4-甲基-3-[(1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基]苯甲酰胺的其它可選合成方法 5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑在環(huán)境溫度下向1-甲基-5-三甲基硅烷基乙炔基-1H-咪唑(1.39mol)在10x體積的乙酸乙酯和1.5x體積的甲醇中的溶液中加入2.5當(dāng)量的碳酸鉀，攪拌該溶液1小時(shí)。濾去碳酸鉀，有機(jī)液用水和飽和氯化鈉溶液洗滌(2次或更多次)。合并水相并再次用乙酸乙酯萃取。然后合并有機(jī)液，真空濃縮至約0.5L。濃縮時(shí)可沉淀出固體。冷卻該漿液，例如至約-5℃，保存過(guò)夜，過(guò)濾，并用約0.3L冷乙酸乙酯洗滌。然后真空干燥該固體。
4-甲基-3-[(1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基]苯甲酸可按照與上述Sonogashira反應(yīng)所述類(lèi)似的方式制備。5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑和3-碘-4-甲基苯甲酸用作偶聯(lián)對(duì)?？蛇x地，溶劑(DMF)可被乙酸乙酯代替，堿(Hunig堿)可被三乙胺代替?？赏ㄟ^(guò)過(guò)濾粗反應(yīng)混合物來(lái)分離產(chǎn)物。濾餅依次用溶劑諸如乙酸乙酯然后是水洗滌，接著在真空烤箱中干燥。進(jìn)一步的純化可以通過(guò)將所述固體在水中制漿，加入濃HCl調(diào)節(jié)至pH3而實(shí)現(xiàn)。過(guò)濾并水洗后，在真空烤箱中干燥產(chǎn)物。
N-{3-氯-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-4-甲基-3-[(1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基]苯甲酰胺將4-甲基-3-[(1-甲基-1H-咪唑-5-基)乙炔基]苯甲酸(18mmol)溶于二氯甲烷(100mL)。向該溶液中加入3當(dāng)量的4-甲基嗎啉(NMM)，然后加入1.05當(dāng)量的草酰氯。在環(huán)境溫度下攪拌30分鐘后，加入0.8當(dāng)量的3-氯-4-((4-甲基-哌嗪-1-基)甲基)苯胺(如上述所制備)同時(shí)加入5摩爾％的DMAP。在環(huán)境溫度下初始攪拌后，回流該混合物并攪拌過(guò)夜。16小時(shí)后，加入另外0.2當(dāng)量的所述苯胺，使得總量達(dá)到1當(dāng)量。然后再攪拌該混合物2小時(shí)，用水淬滅，分層。水層可用二氯甲烷(2 X 50mL)萃取，合并的萃取液用水洗滌。然后合并的二氯甲烷層蒸發(fā)，殘留物溶于100mL乙酸乙酯(20mL)中。靜置1小時(shí)后，使產(chǎn)物結(jié)晶。冷卻該混合物例如至0℃，過(guò)濾，固體產(chǎn)物用冷乙酸乙酯洗滌。
實(shí)施例9 3-[(2-氨基-1，3-噻唑-5-基)乙炔基]-N-{3-環(huán)丙基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-4-甲基苯甲酰胺的可選合成方法
按照與實(shí)施例2所述類(lèi)似的方法，標(biāo)題化合物可由(5-乙炔基-1，3-噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯和N-(3-環(huán)丙基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成(按照與實(shí)施例8所述類(lèi)似的方法進(jìn)行硝基還原；0.25M的甲醇溶液/10％乙酸)?？梢园凑諏?shí)施例5所述在偶聯(lián)之后進(jìn)行t-BOC脫保護(hù)。
(5-乙炔基-1，3-噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯的可選合成方法環(huán)境溫度下向{5-[(三甲基硅烷基)乙炔基]-1，3-噻唑-2-基}氨基甲酸叔丁酯(如實(shí)施例5所述制備，1.39mol)在10x體積的乙酸乙酯和1.5x體積的甲醇的溶液中加入2.5當(dāng)量的碳酸鉀，攪拌該溶液1小時(shí)。濾去碳酸鉀，有機(jī)液用水和飽和氯化鈉溶液洗滌(2次或更多次)。合并水相并再次用乙酸乙酯萃取。然后合并有機(jī)液，真空濃縮至約0.5L。濃縮后可沉淀出固體。冷卻該漿液，例如至約-5℃，保存過(guò)夜，過(guò)濾，并用約0.3L冷乙酸乙酯洗滌。然后真空干燥該固體。
1-(2-環(huán)丙基-4-硝基芐基)-4-甲基哌嗪在氮?dú)夥障?，?-(2-溴-4-硝基芐基)-4-甲基哌嗪(0.94g，3.0mmol)、0.77g(9.0mmol)的環(huán)丙基硼酸、0.067g(0.30mmol)Pd(OAc)2、2.87g(13.5mmol)K3PO4、和0.168g(0.60mmol)三環(huán)己基膦在18mL甲苯/水(5:1)中的混合物回流加熱19小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化(用5％甲醇/DCM洗脫；甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到0.80g產(chǎn)物。
實(shí)施例10 1-甲基-5-({2-甲基-5-[({4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}羰基)氨基]苯基}乙炔基)-1H-咪唑-2-甲酰胺的可選合成方法
按照與實(shí)施例2所述類(lèi)似的方法，標(biāo)題化合物可由5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺和N-(3-碘-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺合成。5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺按照實(shí)施例2制備。
N-(3-碘-4-甲基苯基)-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺向含有1.0g(2.67mmol)的4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸(CAS# 859027-02-4；根據(jù)Asaki，T.等Bioorg.Med.Chem.Lett.(2006)，16，1421-1425制備)、0.62g(2.67mmol)的3-碘-4-甲基苯胺、0.77g(4.0mmol)的N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)、0.43g(3.2mmol)ofN-羥基苯并三唑一水合物(HOBt·H2O)的燒瓶中加入5mL的DCM和5mL的三乙胺。在氮?dú)夥?、環(huán)境溫度下攪拌該溶液3天，濃縮，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化(用100％乙酸乙酯洗脫，然后用10％甲醇/乙酸乙酯洗脫)，得到0.69呈白色固體的產(chǎn)物。
實(shí)施例11 5-[(5-{[4-{[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]甲基}-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；鶀-2-甲基苯基)乙炔基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺的可選合成方法
按照與實(shí)施例2所述類(lèi)似的方法，標(biāo)題化合物可由5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺和(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺合成。5-乙炔基-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺按照實(shí)施例2制備。
1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯在N2下將2-甲基-5-硝基次芐基三氟化物(3.90g，19mmol)、N-溴代琥珀酰亞胺(NBS，3.56g，20mmol)、2，2’-偶氮二(2-甲基丙腈)(AIBN，0.094g，0.6mmol)的CCl4(40mL)懸浮液回流16小時(shí)。HPLC顯示約50％轉(zhuǎn)化。再加入NBS(10mmol)和AIBN(0.6mmol)，將該混合物再回流加熱14小時(shí)。HPLC顯示約80％轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，濾去固體并用乙酸乙酯洗滌。合并的濾液用NaHCO3水溶液洗滌，Na2SO4干燥，過(guò)濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，進(jìn)一步真空干燥。1H NMR顯示所需產(chǎn)物與未反應(yīng)2-甲基-5-硝基次芐基三氟的比例是75:25。該物質(zhì)直接用于下一步中。
(R)-N，N-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)芐基)吡咯烷-3-胺向粗1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(17.5mmol，純度75％)的40mL DCM溶液中加入Et3N(2.69mL，19.3mmol)和(R)-(+)-3-(二甲基氨基)吡咯烷(2.0g，17.5mmol)。在氮?dú)夥?、環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜后，濃縮反應(yīng)溶液，加入NaHCO3水溶液(100mL)，所得混合物用DCM(4 x 50mL)萃取。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥、過(guò)濾、濃縮，所得殘留物經(jīng)硅膠層析純化(用0-10％甲醇/DCM洗脫)得到3.35g產(chǎn)物，呈黃色油狀。
(R)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)芐基)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺向(R)-N，N-二甲基-1-(4-硝基-2-(三氟甲基)芐基)吡咯烷-3-胺(1.20g，3.79mmol)的20mL含水乙醇溶液中加入0.26g Pd/C(10％Pd負(fù)載在C上)，該混合物在Parr裝置(用H2充分吹洗壓力反應(yīng)器且壓力始終控制在45psi)上振蕩2-3小時(shí)。反應(yīng)混合物通過(guò)小塊硅藻土墊過(guò)濾，用乙酸乙酯洗滌。合并的有機(jī)物濃縮，得到定量的淡黃色油狀物。該物質(zhì)直接用于下一步驟。
(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺在氮?dú)夥障?，向冷卻的(0℃)(R)-1-(4-氨基-2-(三氟甲基)芐基)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(3.79mmol)的14mL DCM溶液中加入3-碘-4-甲基苯甲酰氯(1.17g，4.17mmol；CAS# 52107-98-9，由3-碘-4-甲基苯甲酸和SOCl2反應(yīng)制得)，隨后滴加N，N-二異丙基乙基胺(2.64mL，15.2mmol)。在環(huán)境溫度攪拌1.5小時(shí)之后，濃縮反應(yīng)混合物，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化(用0-8％甲醇/DCM洗脫；甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到0.71g產(chǎn)物，呈深黃色油狀物。
5-[(5-{[4-{[(3R)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基]甲基}-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲?；鶀-2-甲基苯基)乙炔基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺的可選合成方法在氮?dú)夥障?，?-乙炔基嘧啶(0.34mmol)、0.150g(0.28mmol)的(R)-N-(4-((3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-碘-4-甲基苯甲酰胺、0.016g(0.014mmol)的Pd(PPh3)4、0.004g(0.021mmol)的CuI、和0.09mL(0.51mmol)的N，N-二異丙基乙基胺在3.5mL DMF中的混合物在環(huán)境溫度下攪拌3天(加入補(bǔ)充當(dāng)量的試劑并加熱到80℃推進(jìn)反應(yīng)完成)。濃縮反應(yīng)混合物，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化(用0-10％甲醇/DCM洗脫；甲醇用氨氣預(yù)先飽和)，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例12化合物的生物學(xué)評(píng)價(jià) 在多個(gè)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定了本發(fā)明化合物的生物學(xué)活性以評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物。例如，可以測(cè)試本發(fā)明化合物抑制各種關(guān)注的蛋白激酶的能力。一些測(cè)試的化合物對(duì)下述激酶顯示出有力的納摩爾級(jí)的活性Abl、Abl T315I、Src和FGFR。此外，篩選了其中一些化合物對(duì)轉(zhuǎn)染了野生型Bcr-Abl或Bcr-AblT315I突變體的BAF3細(xì)胞的抗增殖活性，并顯示出活性在1-100nM之間。
還評(píng)估了所述化合物對(duì)關(guān)注的腫瘤細(xì)胞，例如下面更詳細(xì)描述的和如前面所示對(duì)于一些代表性化合物的腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性或生長(zhǎng)抑制作用。例如參見(jiàn)WO 03/000188，115-136頁(yè)，其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
本發(fā)明的一些代表性化合物如下所示


激酶抑制作用 更具體地，對(duì)于激酶抑制活性篩選出本文所述化合物。適合用于下述方案的激酶包括，但不限于Abl、Lck、Lyn、Src、Fyn、Syk、Zap-70、Itk、Tec、Btk、EGFR、ErbB2、Kdr、Flt1、Flt-3、Tek、c-Met、InsR和AKT。
激酶被表達(dá)為與大腸桿菌(E.coli)或桿狀病毒(Baculovirus)-High Five表達(dá)體系中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)或多組氨酸標(biāo)記的融合蛋白融合的激酶區(qū)域或全長(zhǎng)結(jié)構(gòu)。通過(guò)前人所述親和色譜法(Lehr等人，1996；Gish等人，1995)將它們純化至接近均一。在一些實(shí)例中激酶與純化的或部分純化的調(diào)節(jié)性多肽共表達(dá)或混合，然后測(cè)定活性。
激酶活性和抑制性可以通過(guò)已建立的方案(參見(jiàn)，例如Braunwalder等人，1996)測(cè)定。在這些實(shí)例中，將33PO4從ATP向連接于微量滴定板的生物活性表面的合成底物多(Glu，Tyr)4:1或多(Arg，Ser)3:1的轉(zhuǎn)移作為對(duì)酶活性的量度。溫育一段時(shí)間后，通過(guò)下述方法測(cè)定轉(zhuǎn)移的磷酸的量，首先用0.5％磷酸洗滌該板，加入液體閃爍劑，然后在液體閃爍檢測(cè)器中計(jì)數(shù)。通過(guò)導(dǎo)致?lián)饺肱c板結(jié)合的底物中的33P的量降低50％的化合物的濃度求得IC50。
在一個(gè)方法中，用生物素化的底物肽(含酪氨酸)，在有或沒(méi)有本發(fā)明化合物存在下，溫育活化的激酶。激酶試驗(yàn)溫育期后，加入過(guò)量的用于停止激酶反應(yīng)的激酶抑制劑，以及銪-標(biāo)記的抗-磷酸酪氨酸抗體(Eu-Ab)和別藻藍(lán)蛋白-鏈霉抗生物素蛋白(SA-APC)。溶液中的生物素化的底物肽(有或沒(méi)有磷酸化的酪氨酸)通過(guò)生物素-親和素結(jié)合與SA-APC結(jié)合。Eu-Ab僅與具有磷酸化的酪氨酸的底物結(jié)合。當(dāng)溶液在615nm受到激發(fā)，當(dāng)銪和APC的距離很近時(shí)(即連接于生物素化和磷酸化的底物肽的相同分子)，能量從銪轉(zhuǎn)移到APC上。然后APC發(fā)出665nm波長(zhǎng)的熒光。激發(fā)和發(fā)射發(fā)生在Wallac Victor2V板讀取器中，其中讀取該板的熒光，并記錄在615和665nm的吸光度。然后通過(guò)Excel板處理器處理這些數(shù)據(jù)，通過(guò)將熒光換算為所用磷酸化底物的量，并求出需要抑制磷酸化底物顯色(development)的50％(IC50)的測(cè)定化合物的濃度，來(lái)計(jì)算測(cè)定化合物的IC50。
也可以使用基于磷酸向肽或多肽底物的轉(zhuǎn)移的其它方法，所述底物包含溶液或固定(即固相)形式的單獨(dú)的酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或組氨酸；它們彼此組合或與其它氨基酸組合。
例如，也可以使用閃爍親近、熒光偏振或勻質(zhì)時(shí)間分辨熒光檢測(cè)磷酸向肽或多肽的轉(zhuǎn)移。或者，可以使用基于抗體的方法測(cè)定激酶活性，其中抗體或多肽用作檢測(cè)磷酸化目標(biāo)多肽的反應(yīng)試劑。
對(duì)于進(jìn)一步的背景信息，如試驗(yàn)方法，參見(jiàn)例如Braunwalder等人，1996，Anal.Biochem.234(1)23；Cleaveland等人，1990，Anal Biochem.190(2)249Gish等人(1995).Protein Eng.8(6)609 Kolb等人(1998).Drug Discov.TodaV.3333 Lehr等人(1996).Gene 169(2)27527-87 Seethala等人(1998).AnalBiochem.255(2)257Wu等人(2000)。
觀察到本發(fā)明的化合物對(duì)抗多種激酶(包括Src、Abl和kdr)的IC50值在低的納摩爾的范圍內(nèi)。
基于細(xì)胞的試驗(yàn) 也已經(jīng)證明了某些本發(fā)明的化合物對(duì)于腫瘤和其它癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性作用和生長(zhǎng)抑制作用，因此本發(fā)明化合物可用于治療癌癥和其它細(xì)胞增殖疾病。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的體內(nèi)和體外試驗(yàn)測(cè)定這些化合物的抗腫瘤活性。通常，在細(xì)胞試驗(yàn)中初篩化合物以確定候選的抗癌藥物。然后在這些基于細(xì)胞的試驗(yàn)中確定具有抗增殖活性的化合物可繼續(xù)在整個(gè)有機(jī)體中進(jìn)行抗腫瘤活性和毒性試驗(yàn)。一般來(lái)說(shuō)，基于細(xì)胞的篩選相對(duì)于使用整個(gè)有機(jī)體的試驗(yàn)來(lái)說(shuō)更快速且更經(jīng)濟(jì)。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“抗腫瘤”和“抗癌”活性可以互換使用。
對(duì)于測(cè)定抗增殖活性的基于細(xì)胞的方法是公知的，且可以用于比較本發(fā)明的化合物的特征。通常，設(shè)計(jì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力試驗(yàn)使其在細(xì)胞有代謝活性時(shí)提供可檢測(cè)的信號(hào)。可以通過(guò)測(cè)定當(dāng)細(xì)胞暴露于化合物后任何可觀測(cè)的細(xì)胞代謝活性的降低，來(lái)測(cè)定化合物的抗增殖活性。常用的方法包括，例如，測(cè)定膜完整性(作為細(xì)胞活力的量度)(如使用錐蟲(chóng)藍(lán)排斥)或測(cè)定DNA合成(如通過(guò)測(cè)定BrdU或3H-胸苷的摻入)。
測(cè)定細(xì)胞增殖的一些方法使用在細(xì)胞增殖期間轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的化合物的反應(yīng)試劑。尤其優(yōu)選的化合物為四唑鎓鹽，且包括但不限于MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)、MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑)、XTT(2，3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基)-2H-四唑鎓-5-N-甲酰苯胺(carboxanilide))、INT、NBT和NTV(Bernas等人Biochim Biophys Acta1451(1)73-81，1999)。優(yōu)選的試驗(yàn)使用四唑鎓鹽通過(guò)檢測(cè)四唑鎓鹽向藍(lán)甲

衍生物的酶轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖，這可以通過(guò)分光光度方法快速檢測(cè)(Mosman.J.Immunol.Methods.6555-63，1983)。
通常，測(cè)定細(xì)胞增殖的優(yōu)選的方法涉及在所需的生長(zhǎng)培養(yǎng)基(有或沒(méi)有所測(cè)定的化合物)中溫育細(xì)胞。多種原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的生長(zhǎng)條件對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是公知的(Ausubel等人Current Protocols in MolecularBiology.Wiley和Sons.1999；Bonifacino等人Current Protocols in Cell Biology.Wiley和Sons.1999均在此引用作為參考)。為檢測(cè)細(xì)胞增殖，將四唑鎓鹽加入到被溫育的培養(yǎng)細(xì)胞中，使其被活細(xì)胞酶促轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的產(chǎn)物。處理細(xì)胞，并測(cè)定細(xì)胞的光密度以測(cè)定甲

衍生物的量。而且，可使用市售的包括反應(yīng)試劑、規(guī)程的試劑盒，例如購(gòu)自Promega Corporation(Madison，WI)，Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)，和Trevigen(Gaithersburg，MD)。
更特別的，現(xiàn)在我們使用CellTiter 96 AQueous One Solution細(xì)胞增殖試驗(yàn)試劑盒(Promaga，Cat#G3581)進(jìn)行細(xì)胞增殖試驗(yàn)。該試驗(yàn)是測(cè)定增殖或細(xì)胞毒性試驗(yàn)中的活細(xì)胞數(shù)量的比色法。該試驗(yàn)使用四唑鎓鹽，通過(guò)檢測(cè)四唑鹽向藍(lán)甲

衍生物的酶促轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖，這可以通過(guò)在板讀取器Wallac Victor2V(PerkinElmer)中于490nm檢測(cè)吸光度來(lái)檢測(cè)。
基于細(xì)胞的試驗(yàn)的實(shí)例如下所示。用于試驗(yàn)中的細(xì)胞系為Ba/F3，它是鼠類(lèi)原B(pro-B)細(xì)胞系，該細(xì)胞系已經(jīng)被全長(zhǎng)野生型Bcr-Abl或具有多個(gè)激酶域點(diǎn)突變(包括T351I、Y253F、E255K、H396P、M351T等)結(jié)構(gòu)的Bcr-Abl構(gòu)建體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。使用親代Ba/F3細(xì)胞系作為對(duì)照。從Brian J.Druker(Howard Hughes Medical Institute，Oregon Health and Science University，Portland，Oregon，USA)得到這些細(xì)胞系。將表達(dá)Bcr-Abl或Bcr-Abl突變體的Ba/F3細(xì)胞維持在含有200μML-谷氨酰胺，10％ FCS，青霉素(200U/ml)和鏈霉素(200μg/ml)的PRMI 1640生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。親代Ba/F3細(xì)胞在相同的補(bǔ)充有10ng/ml IL-3的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
將親代Ba/F3細(xì)胞(補(bǔ)充有IL-3)或表達(dá)WT或突變體Bcr-Abl的Ba/F3細(xì)胞一式兩份以1 x 104細(xì)胞/孔接種于96-孔板中，所述96-孔板中含有在培養(yǎng)基中的不同濃度的所述化合物。首先將所述化合物溶解并稀釋在DMSO中制成4倍稀釋液；然后將等體積的化合物與DMSO轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中，再轉(zhuǎn)移到細(xì)胞板中?；衔锏慕K濃度從10μM至6nM。相同百分比的DMSO用作對(duì)照?；衔锱c細(xì)胞溫育3天后，使用CellTiter 96 AQueous One Solution細(xì)胞增殖試驗(yàn)試劑盒按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)活細(xì)胞的數(shù)量?；旧?，將四唑鎓鹽加入到溫育培養(yǎng)的細(xì)胞中使其被活細(xì)胞酶促轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的產(chǎn)物。處理細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞的光密度以檢測(cè)甲

衍生物的量。從一式兩份的孔中得到平均數(shù)+/-SD，并以相對(duì)于對(duì)照吸光度的百分比報(bào)導(dǎo)。使用Micorsoft Excel-擬合軟件用最佳擬合曲線(xiàn)計(jì)算IC50。
而且，許多細(xì)胞類(lèi)型可以用于對(duì)于抗增殖活性篩選化合物，包括下述細(xì)胞系COLO 205(結(jié)腸癌)、DLD-1(結(jié)腸癌)、HCT-15(結(jié)腸癌)、HT29(結(jié)腸癌)、HEP G2(肝癌)、K-562(白血病)、A549(肺癌)、NCI-H249(肺癌)、MCF7(乳腺癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、SAOS-2(骨肉瘤)、OVCAR-3(卵巢癌)、PANC-1(胰腺癌)、DU-145(前列腺癌)、PC-3(前列腺癌)、ACHN(腎癌)、CAKI-1(腎癌)、MG-63(肉瘤)。
雖然所述細(xì)胞系優(yōu)選為哺乳動(dòng)物的，但也可以使用低等真核細(xì)胞如酵母菌篩選化合物。優(yōu)選的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系來(lái)自人、大鼠、小鼠、兔、猴、倉(cāng)鼠和豚鼠，因?yàn)閬?lái)自這些有機(jī)體的細(xì)胞便于研究和表征。然而，也可以使用其它細(xì)胞。
適合的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系通常來(lái)自腫瘤。例如，下述腫瘤細(xì)胞類(lèi)型可以為培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞源黑素瘤、髓樣白血病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、胰腺癌和睪丸癌、心肌細(xì)胞(cardiomyocytes)、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞(T-細(xì)胞和B細(xì)胞)、肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、血管內(nèi)膜細(xì)胞、肝細(xì)胞、白細(xì)胞(包括單個(gè)核白細(xì)胞)、干細(xì)胞(如造血干細(xì)胞、神經(jīng)、皮膚、肺、腎、肝和肌干細(xì)胞(用于篩選分化和去分化因子))、破骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和其它結(jié)締組織細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、黑素細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。已經(jīng)被研究者廣泛使用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的非限制性實(shí)例包括HeLa、NIH/3T3、HT1080、CHO、COS-1、293T、WI-38和CV1/EBNA-1。
可以使用根據(jù)報(bào)道基因檢測(cè)代謝活性細(xì)胞的其它細(xì)胞試驗(yàn)。報(bào)道基因表達(dá)體系的非限制性實(shí)例包括綠色熒光蛋白(GFP)和螢光素酶。使用GFP篩選潛在抗腫瘤藥物的實(shí)例，Sandman等人(Chem Biol.6541-51；在此引用作為參考)使用含有GFP的可誘導(dǎo)的變異體的HeLa細(xì)胞檢測(cè)抑制GFP表達(dá)且由此抑制細(xì)胞增殖的化合物。
然后通過(guò)這些細(xì)胞試驗(yàn)鑒定具有抗細(xì)胞增殖活性的化合物在整個(gè)有機(jī)體中測(cè)試抗腫瘤活性。優(yōu)選地，所述有機(jī)體為哺乳動(dòng)物。用于研究癌癥的較好表征的哺乳動(dòng)物體系包括嚙齒類(lèi)，如大鼠和小鼠。通常，將所關(guān)注的腫瘤移植到小鼠中，所述小鼠發(fā)起對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)能力較低，以降低排斥反應(yīng)的可能性。這些小鼠包括例如，裸小鼠(無(wú)胸腺)和SCID(重度聯(lián)合的免疫缺陷)小鼠。在該試驗(yàn)中可以使用其它轉(zhuǎn)基因的小鼠，如含癌基因的小鼠(參見(jiàn)，例如USP 4,736,866和USP 5,175,383)。對(duì)于用于檢測(cè)抗腫瘤藥物的嚙齒類(lèi)模型的綜述和討論參見(jiàn)Kerbel(Cancer Metastasis Rev.17301-304，1998-99)。
通常，將所關(guān)注的腫瘤植入所檢測(cè)的有機(jī)體中，優(yōu)選皮下移植。含有腫瘤的有機(jī)體用一些劑量的候選抗腫瘤化合物治療。定期檢測(cè)腫瘤的大小以確定所檢測(cè)化合物對(duì)腫瘤的作用。一些腫瘤類(lèi)型在其它位點(diǎn)植入而不是皮下植入(如腹膜內(nèi)位點(diǎn))，并檢測(cè)存活率作為終點(diǎn)。通過(guò)常規(guī)篩選檢測(cè)的參數(shù)包括不同腫瘤模型，多種腫瘤和藥物途徑，以及劑量和方案。對(duì)于使用小鼠檢測(cè)抗腫瘤化合物的綜述參見(jiàn)Corbett等人(Invest New Drugs.15207-218，1997；在此引用作為參考)。
實(shí)施例8藥物組合物 提供本發(fā)明的化合物的代表性的藥物劑型(活性成分稱(chēng)作“化合物”)以用于人類(lèi)的治療和預(yù)防 (a)片劑I mg/片 化合物.................................................100 乳糖Ph.Eur.............................................182.75 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉.....................................12.0 玉米淀粉糊(5％ w/v糊)..................................2.25 硬脂酸鎂...............................................3.0 (b)片劑II mg/片 化合物.................................................50 乳糖Ph.Eur.............................................223.75 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉.....................................6.0 玉米淀粉...............................................15.0 聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyffolidone)(5％ w/v糊).........2.25 硬脂酸鎂................................................3.0 (c)片劑III mg/片 化合物..................................................1.0 乳糖Ph.Eur..............................................93.25 交聯(lián)羧甲基纖維素鈉......................................4.0 玉米淀粉糊(5％ w/v糊)...................................0.75 硬脂酸鎂................................................1.0-76 (d)膠囊 mg/膠囊 化合物..................................................10 乳糖Ph.Eur..............................................488.5 鎂................................................1.5 (e)注射劑I(50mg/ml) 化合物.............................................5.0％ w/v 1M氫氧化鈉溶液.....................................15.0％ v/v 0.1M鹽酸(調(diào)節(jié)pH至7.6) 聚乙二醇400........................................4.5％ w/v 注射用水 至100％ (f)注射劑II(10mg/ml) 化合物.............................................1.0％ W/v 磷酸鈉BP...........................................3.6％ w/v 0.1M氫氧化鈉溶液...................................15.0％ v/v 注射用水 至100％ (g)注射劑III (1mg/ml，緩沖至pH6) 化合物.............................................0.1％ w/v 磷酸鈉BP...........................................2.26％ w/v 檸檬酸.............................................0.38％ w/v 聚乙二醇400........................................3.5％ w/v 注射用水 至100％ (h)氣霧劑I mg/ml 化合物.............................................10.0 脫水山梨糖醇三油酸酯...............................13.5 三氯氟甲烷.........................................910.0 二氯二氟甲烷.......................................490.0 (i)氣霧劑IImg/ml 化合物.............................................0.2 脫水山梨糖醇三油酸酯...............................0.27 三氯氟甲烷........................................70.0 二氯二氟甲烷......................................280.0 二氯四氟乙烷......................................1094.0 (j)氣霧劑III mg/ml 化合物............................................2.5 脫水山梨糖醇三油酸酯..............................3.38 三氯氟甲烷........................................67.5 二氯二氟甲烷......................................1086.0 二氯四氟乙烷......................................191.6 (k)氣霧劑IVmg/ml 化合物.............................................2.5 大豆卵磷脂.........................................2.7 三氯氟甲烷.........................................67.5 二氯二氟甲烷.......................................1086.0 二氯四氟乙烷.......................................191.6 (l)軟膏劑 ml 化合物..............................................40mg 乙醇................................................300μl 水..................................................300μl 1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷酮..............................50μl 丙二醇..............................................至1ml 注意這些制劑可以使用藥學(xué)領(lǐng)域公知的常規(guī)方法制備。視需要，片劑(a)-(c)可以使用常規(guī)方法包衣，以提供例如醋酸鄰苯二甲酸纖維素包衣。氣霧劑(h)-(k)可以與標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)量的氣霧劑分配器一起使用，且懸浮劑，脫水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂可以被其它懸浮劑替換，所述懸浮劑如脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇倍半油酸酯、聚山梨醇酯80、聚油酸甘油酯(polyglycerol oleate)或油酸。
權(quán)利要求
1.式I的化合物、其互變異構(gòu)體、單個(gè)異構(gòu)體、異構(gòu)體的混合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物
式I
其中
環(huán)T代表5-元單環(huán)雜芳基環(huán)，其包含1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子并任選地被1-3個(gè)Rt基團(tuán)取代；
環(huán)A代表5-或6-元芳基或雜芳基環(huán)，并且其任選地被1-4個(gè)Ra基團(tuán)取代；
環(huán)B代表5-或6-元芳基或雜芳基環(huán)，并且其任選地被1-5個(gè)Rb基團(tuán)取代；
L1選自NR1C(O)和C(O)NR1；
在每種情況下，Ra、Rb和Rt獨(dú)立地選自鹵素、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR4)(YR4)、-Si(R4)3、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y獨(dú)立地是化學(xué)鍵、-O-、-S-或-NR3-；
R1、R2和R3獨(dú)立地選自H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
或者，NR2R3基團(tuán)可以是5-或6-元飽和的、部分飽和的或不飽和的環(huán)，其可任選地被取，代并且其含有0-2個(gè)選自N、O和S(O)r的其它雜原子；
在每種情況下，R4獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
前述的各個(gè)烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基任選地被取代；
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2或3；
p是0、1、2、3、4或5；和
r選自0、1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中環(huán)T是選自如下的單環(huán)5-元環(huán)
并且其在碳或雜原子上任選地被1-3個(gè)Rt基團(tuán)取代。
3.權(quán)利要求1的化合物，其具有下式
其中
環(huán)C代表5-或6-元雜環(huán)或雜芳環(huán)，其包含碳原子和1-3個(gè)選自O(shè)、N、和S(O)r的雜原子，并在碳或雜原子上任選地被1-5個(gè)Rc基團(tuán)取代；
在每種情況下，Rc獨(dú)立地選自鹵素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR4)(YR4)、-Si(R4)3、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y獨(dú)立地是化學(xué)鍵、-O-、-S-或-NR3-；
R2和R3獨(dú)立地選自H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
或者，NR2R3基團(tuán)可以是5-或6-元飽和的、部分飽和的或不飽和的環(huán)，其可任選地被取代并且其含有0-2個(gè)選自N、O和S(O)r的其它雜原子；
在每種情況下，R4獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
前述的各個(gè)烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被取代；
v是0、1、2、3、4或5，
t是0、1、2、3或4。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中環(huán)A和B是芳基。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中環(huán)C是雜芳基環(huán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中環(huán)C是咪唑環(huán)。
7.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其選自式IIa、IIb和IIc
式IIa
式IIb
式IIc。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中Rt獨(dú)立地選自-CH3、或-C(O)NH2，v是1，n是0或1，m是1，t是1，Ra是-CH3，Rb是CF3和Rc是-CH3。
9.權(quán)利要求1的化合物，其具有下式
其中
環(huán)D代表5-或6-元雜環(huán)或雜芳環(huán)，其包含碳原子和1-3個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、N、S(O)r的雜原子，并且環(huán)D任選地被1-5個(gè)Rd基團(tuán)取代；
L2是(CH2)z、O(CH2)x、NR3(CH2)x、S(CH2)x或(CH2)xNR3C(O)(CH2)x并且該連接單元可以以任一方向連接；
在每種情況下，Rd選自鹵素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-R4、-OR2、-NR2R3、-C(O)YR2、-OC(O)YR2、-NR2C(O)YR2、-SC(O)YR2、-NR2C(＝S)YR2、-OC(＝S)YR2、-C(＝S)YR2、-YC(＝NR3)YR2、-YP(＝O)(YR4)(YR4)、-Si(R4)3、-NR2SO2R2、-S(O)rR2、-SO2NR2R3和-NR2SO2NR2R3，其中Y獨(dú)立地是化學(xué)鍵、-O-、-S-或-NR3-；
R2和R3獨(dú)立地選自H、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
或者，NR2R3基團(tuán)可以是5-或6-元飽和的、部分飽和的或不飽和的環(huán)，其可任選地被取代，并且其含有0-2個(gè)選自N、O和S(O)r的其它雜原子；
在每種情況下，R4獨(dú)立地選自烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜環(huán)基和雜芳基；
前述的各個(gè)烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選地被取代；
w選自0、1、2、3、4或5；
x是0、1、2或3；
z是1、2、3或4；和
t是0、1、2、3或4。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中環(huán)A和B是芳基。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中環(huán)D是取代或未取代的哌嗪環(huán)和L2是CH2。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中環(huán)D是取代或未取代的雜芳基。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其選自式IIIa、IIIb和IIIc
式IIIa
式IIIb
式IIIc。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中Rt獨(dú)立地選自-CH3和-C(O)NH2，n是0或1，m是1，t是1，Ra是甲基，Rb是CF3，一個(gè)Rd選自甲基和CH2CH2OH。
15.在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療癌癥的方法，其包括向所述哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物。
16.組合物，其包含權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式(I)的化合物，其中變化基團(tuán)如說(shuō)明書(shū)中定義，還涉及它們的制備和用途。
文檔編號(hào)C07D487/00GK101490053SQ200780025995
公開(kāi)日2009年7月22日 申請(qǐng)日期2007年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月8日
發(fā)明者威廉·C·莎士比亞, 黃衛(wèi)生, 戴維·C·達(dá)爾加諾, 朱笑天, R·馬修·托馬斯, 王義漢, 戚積緯, 拉杰斯瓦里·桑達(dá)拉莫爾蒂, 東 鄒, 切斯特·A·梅特卡夫, 托米·K·索耶, 簡(jiǎn)安托瓦妮特·C·羅梅羅 申請(qǐng)人:阿里亞德醫(yī)藥股份有限公司