高度氧化的二萜化合物在制備心肌保護的藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術領域，具體設及從澤漆的干燥全草中分離得到的一種高度氧 化的二祗化合物在屯、肌保護作用藥物領域的醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 澤漆是大戟屬化uphorbia L.)植物澤漆Eu地orbia helioscopia L.的干燥全草， 別名貓兒眼睛草、五鳳靈芝等，分布于除新疆、西藏W外的全國各地。長期W來澤漆一直作 為民間草藥，味苦，性微寒，有毒，歸肺、小腸、大腸經。據《本草綱目》記載，澤漆有利水消腫、 消疲退熱、散結殺蟲等功效。臨床用于治療腹水、水腫、肺結核、頸淋己結核、疲多喘咳、癖 瘡。
[0003] 澤漆主要含二祗醋類、黃酬類化合物，是其主要的生物活性物質，另外還含有= 祗、醬醇、多酪類、氨基酸、天然油脂類化合物等多種成分。二祗醋類化合物是澤漆的主要有 效成分，主要分布于澤漆的乳汁中，根部也有分布。二祗醋類化合物對皮膚有刺激性，有輔 助抗癌的作用。
[0004] 現代藥理研究表明澤漆具有抗腫瘤、抑菌、平喘止咳，抑制磨茹酪氨酸酶活性等生 理活性。民間還用于治療宮頸癌、食道癌等，并具有一定療效，因此澤漆是一味很有研究開 發(fā)價值的藥材。

【發(fā)明內容】

[000引本發(fā)明的目的是提供一種從澤漆的干燥全草中分離得到的一種二祗化合物在開 發(fā)屯、肌保護作用藥物中的應用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現的：
[0007] -種高度氧化的二祗化合物(I)在制備屯、肌保護的藥物中的應用，
[0009] 作為優(yōu)選，所述高度氧化的二祗化合物（I)在從澤漆的干燥全草中分離獲得，其分 離包含W下操作步驟：
[0010] a、將澤漆的干燥全草粉碎，用80~90 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇 味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃 取物和正下醇萃取物；
[0011] b、步驟a中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用 80 %乙醇洗脫8個柱體積，收集80 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得80 %乙醇洗脫物浸膏；
[0012] 〇、步驟6中80%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50:1、35:1、 15:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得至化個組分；
[0013] d、步驟C中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和5:1的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0014] e、步驟d中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的 甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0015] 作為優(yōu)選，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0016] 作為優(yōu)選，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85%。
[0017] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。實驗表 明：化合物（I)各給藥組均能使屯、肌細胞存活率明顯增加;在屯、肌細胞過氧化氨損傷培養(yǎng)液 中LDH的活性試驗中，化合物（I)低、中、高劑量組、陽性藥物組的LDH活性明顯降低，表明化 合物(I)可W進一步研究開發(fā)成屯、肌細胞保護的藥物。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物（I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不W此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可W對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0021] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023] 制備方法：（a)將澤漆的干燥全草(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(2化X3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水飽和的 正下醇（化X3次)萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（359g)和正下醇萃取物； (b)步驟(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用 80%乙醇洗脫8個柱體積，收集80%乙醇洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫物浸膏（138g); (C)步驟(b)中80%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個柱體積）、50:1 (8個柱體積）、35:1(6個柱體積）、15:1(8個柱體積)和1:1(5個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；（d)步驟(C)中組分4(32g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 25:1(8個柱體積）、15:1(10個柱體積)和5:1(6個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3 個組分；（e)步驟(d)中組分2(17g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(29mg)。
[0024] 結構確證:HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 369.1708，結合核磁特征可得分子式為 C2〇H26〇日，不飽和度為8。核磁共振氨譜數據Sh(郵m，DMSO-ds，600MHz): H-2 (3.57，m)，H-2 (3.42，m)，H-5(1.99，dd，J = 3.1，14.6)，H-6(2.51，dd，J = 3.1，14.6)，H-6(2.39，m)，H-ll (2.32，m)，H-ll(2.67，m)，H-12(1.57，m)，H-12(1.49，m)，H-14(4.24，s)，H-15(4.18，t，J= 7.8)，H-16(4.10，t，J = 7.8)，H-16(3.56，t，J = 7.8)，H-17(0.93，s)，H-18(0.97，s)，H-19 (1.01，s)，H-20( 1.21，s);核磁共振碳譜數據5c(ppm，DMS0-d6,150MHz) :206.4(C，1-C) ,52.2 (C 此，2-C)，201.1(C，3-C)，44.7(C，4-C)，42.6(CH，5-C)，34.0(afe，6-C)，198.8(C，7-C)， 128.9(C，8-C)，168.3(C，9-C)，44.5(C，10-C)，20.7(afe，ll-C)，21.9(CH2，12-C)，40.6(C， 13-C)，76.5(CH，14-C)，79.4(CH，15-C)，70.0(CH2，16-C)，17.9(Ol3，17-C)，27.3(CH3，18-C) ,20.4(C曲，19-C) ,21.8(C出，20-C);碳原子標記參見圖I。紅外光譜顯示該化合物含有徑 基（3215cm-i)和幾基（1687cm-i)基團。Ih NMR譜顯示含有四個甲基信號姐0.93(s，H3-17)， 0.97(3，出-18)，1.01(3，出-19)^及1.21(3，出-20)。1化醒財普表明該化合物含有四個甲基， 五個亞甲基(一個含氧亞甲基SC70.0)，=個次甲基(兩個含氧次甲基SC76.5,79.4)，八個季 碳[包括=個幾基碳(SC206.4,201.1,198.8)，兩個締控碳(SC128.9,168.3)]。上述數據表 明該化合物為高度氧化的二祗類化合物。HMBC譜中曲-20與C-I (SC206.4)，曲-18和出-19與 C-3(SC201.1)的相關性表明C-巧PC-3為酬幾基。另夕hH-5和H-14與C-7(SC198.8)的相關性 表明C-7亦為酬幾基。通過HMBC譜中出-6與C-8，H-14與C-8,出-20與C-9的相關性C-8(5 C128.9)和C-9(SC168.3)之間為雙鍵。C-14位低場核磁碳信號（SC76.5)，再結合不飽和度推 測在C-14和C-16(SC7〇.〇)之間存在酸鍵。HMBC譜中H-14與C-16;H-14與C-15; W及此-16與 C-13的相關性驗證了上述推測。NOESY譜中H-14與出-17;H-15與H-12a;H-15與出-17的相關 性表明H-14，H-15和出-17為0-構型。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，W及文獻關于相關 類型核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過EC的式驗確定，理論值 與實驗值基本一致(圖2)。
[0025] 實施例2:化合物（I)藥理作用試驗
[0026] -、材料和儀器
[0027]新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF級），雌雄不拘，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中屯、提供 (試驗動物生產許可證:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(純度^ 98% )為自制。胎牛血清購于 Hy Clone公司，DMEM培養(yǎng)基購于GIBCO公司，二甲基亞諷(DMSO)、0.25 %膜酶(含抓TA)購于 Solarbio公司，5-漠脫氧尿巧（5-Brdu)、四甲基偶氮挫鹽(MTT)購于美國Sigma公司，LDH測 試盒購于南京建成生物工程研究所，NOS試劑盒(分型）南京建成生物工程研究所，ATP酶試 劑盒(南京建成生物工程研究所），cTnI酶聯(lián)免疫吸附測試試劑盒、CK-MB酶聯(lián)免疫