S比-1 RH及 其混合物的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)的濃度高于正常血液中的所述蛋白質(zhì)的基線濃度。在 另一實(shí)例中，蛋白質(zhì)溶液包含：
[0055] (a)白介素-1受體括抗劑（比-Ira)，其濃度比正常血液中比-Ira濃度高至少3倍；
[0056] (b)可溶性組織壞死因子-rl(sTNF-rl)，其濃度比正常血液中IL-Ira的濃度高至 少2倍。
[0057] 制備蛋白質(zhì)溶液的方法：
[0058] 蛋白質(zhì)溶液可通過各種方法制成，包括單個(gè)組分的混合，和其中一個(gè)或多個(gè)組分 來源于從源物質(zhì)的方法。在各種實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)溶液通過從天然或合成來源得到的組 分的混合制成。不限制本技術(shù)的范圍，機(jī)制或功能，運(yùn)樣的無細(xì)胞抗炎性細(xì)胞因子的組合物 可能在某些應(yīng)用中提供優(yōu)勢，只要它們不引起被施用的對象的免疫原性應(yīng)答。
[0059] 特別是，通過示例的方式，除了上述的方法，蛋白質(zhì)溶液可W包含合成或重組的， 或從自體、同種異體或異種的血液或其他生物來源分離的白介素-1受體括抗劑（化-Ira)。 例如，Kineret?(阿那白滯素）是重組的、非糖基化形式的比-ira，由Amgen Manufacturing, Ltd.銷售(Thousand Oaks ,California)。各種重組白介素-I抑制劑和治療方法描述于美國 專利號6599873，Sommer等人，公開于2003年7月29日；美國專利號5075222，化nnum等人，公 開于1991年12月24日；美國申請公開號2005/0197293，Mellis等人，公開于2005年9月8日。 另外，從體液產(chǎn)生IL-Ira的方法，包括使用自體的液體，描述在美國專利號6623472， Reinecke等人，公開于2003年9月23日；美國專利號6713246 ,Reinecke等人，公開于2004年3 月30日；美國專利號6759188 ,Reinecke等人，公開于2004年7月6日。當(dāng)要產(chǎn)生同種異體的抗 炎性細(xì)胞因子，可合并來自多個(gè)對象的多種IL-Ira來源。
[0060] 無細(xì)胞蛋白質(zhì)溶液的組分也可來源于生物材料，例如血液凝塊和尿液。組分也可 從細(xì)胞培養(yǎng)物中獲得。
[0061 ]從血液凝塊獲得組分
[0062] 具體地，方法包括從血液凝塊中鎖住的液體（"凝塊提取物"）獲得一種或多種蛋白 質(zhì)溶液組分。液體(細(xì)胞釋放物)可W通過壓縮（"擠壓"）、血塊破壞或離屯、得到。用于產(chǎn)生凝 塊的血液可W是自體的（即，要使用蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行治療的對象獲得的），或同種異體來源 的（即來自與溶液將被施用的對象同物種的對象），或異種的（即，來自與溶液將被施用的對 象不同物種的動(dòng)物來源）。在一些實(shí)施方案中，同種異體血液從多個(gè)供體獲得的。
[0063] 血液凝塊可用或不用抗凝血?jiǎng)?，用或不用外源性凝血酶，通過將血液或血液組分 與凝血?jiǎng)┞?lián)用來制備。合適的凝血?jiǎng)┌?例如，牛源、重組人源、合并的人源或自體 源）、自體凝血蛋白和聚乙二醇。巧可W是巧鹽的形式，例如氯化巧。
[0064] 在一些實(shí)施方案中，凝血?jiǎng)┌鞍?。合適的凝血部分可W通過W下方法來 獲得:將全血或血漿與巧溶液(例如，乙醇中的氯化巧)加載進(jìn)入血液分離裝置;加熱全血或 血漿至少約20分鐘，溫度至少約20°C; W及分離凝固部分。分離可W通過離屯、加熱的全血或 血漿完成。合適的分離裝置是市面有售的，如Clotalyst?自體凝血酶采集系統(tǒng)（W下簡稱 乂lo1:alyst系統(tǒng)"），由Biomet Biologies IiX,Warsaw, Indiana,USA銷售。
[0065] 用于生產(chǎn)凝血?jiǎng)┑氖纠匝b置100示于圖1。制備凝血?jiǎng)┑姆椒ㄩ_始于將含有氯化 巧和乙醇試劑通過第一端口 110注射進(jìn)入主腔室105。玻璃珠也放置在主腔室105中。在試劑 已經(jīng)注入后，第一端口 110使用第一替換帽115關(guān)閉。血液與抗凝劑通過第二端口 120注入到 主腔室105。在血液注入后，第二端口 120使用第二替換帽125關(guān)閉。任選地，注射器和血液分 離裝置400被預(yù)熱到約25°C的溫度。
[0066] 裝置100中的內(nèi)容物可通過反復(fù)反轉(zhuǎn)裝置100混合，例如大約12次，W便使血液與 玻璃珠接觸。混合后，將設(shè)備溫育。溫育過程可W是在一定溫度下進(jìn)行，在此期間允許設(shè)備 100的內(nèi)容物在約25°C被加熱約15分鐘。一旦溫育完成，凝塊的紅細(xì)胞、血漿和玻璃珠在主 腔室105的第二端106形成。溫育完成后，設(shè)備100被充分搖晃W去除和破碎任何可能存在的 凝膠。
[0067] 凝塊提取物可與一種固相提取材料接觸W產(chǎn)生含蛋白質(zhì)的液體。然后從固相提取 材料分離該液體，作為本技術(shù)的蛋白質(zhì)溶液。不限制本技術(shù)的范圍、機(jī)制或功能，本發(fā)明中 的固相提取的材料可用于濃縮凝塊提取物中的細(xì)胞因子或其他蛋白質(zhì)。
[0068] 固相提取材料可包括提供特定表面W積接觸細(xì)胞的各種材料。固相提取材料可W 是連續(xù)的材料，也可W是不連續(xù)的，并且包括多個(gè)單獨(dú)的顆粒的材料。例如，固相提取材料 可W是多個(gè)珠、纖維、粉末、多孔材料或包含所述凝塊提取物的容器的表面。固相提取材料 可包含具有各種橫截面形狀的幾何形狀，例如球形、楠圓形或多邊形，等等。固相提取材料 還可W包括連續(xù)多孔網(wǎng)絡(luò)，類似海綿，或者可W包括多個(gè)單獨(dú)的多孔顆粒。固相提取材料還 可W由多孔提供與非多孔材料相比更大的表面積。
[0069] 在一些實(shí)施方案中，固相提取材料包括具有大縱橫比的顆粒，例如，顆粒是針狀 的。固相提取材料也可由長纖維形成W及可W是或采取類似玻璃棉的形式。
[0070] 在一些情況下，固相提取材料可包含容納包含白細(xì)胞的液體的容器的內(nèi)壁。例如， 固相提取材料可包含注射器的內(nèi)腔，所述注射器含有凝塊提取物。其他容器包括管，如離屯、 管，或血液分饋裝置或濃縮器組件，如本文別處所述。
[0071] 在固相提取材料是一種連續(xù)材料，例如多孔海綿狀材料時(shí)，固相提取材料使用的 量應(yīng)足W將整個(gè)凝塊提取物基本上吸收或吸收或包括在固相提取材料的孔隙或空隙內(nèi)。在 固相提取材料是不連續(xù)的材料，例如多個(gè)粒子時(shí)，固相提取材料可W與含有細(xì)胞的液體聯(lián) 用W形成漿狀組合物。該漿稠度上可從具有高比例固體部分的膏狀，到具有低比例固體部 分的易流動(dòng)漿狀變化。
[0072] 固相提取材料可W提供與凝塊提取物接觸的大表面積。然而，在一些情況下，固相 提取材料可W進(jìn)一步處理W增加它的表面積，例如，通過物理或化學(xué)蝕刻或侵蝕固相提取 材料的表面。就化學(xué)蝕刻而言，腐蝕劑可W用來根據(jù)材料的性質(zhì)修飾固相提取材料的表面。 修飾的表面可通過使用堿或酸產(chǎn)生，例如氯橫酸，特別是強(qiáng)度上約20%-80%，優(yōu)選約50% 的氯橫酸。固相提取材料可W與腐蝕劑溫育約5-30分鐘，W便化學(xué)蝕刻表面，并增加表面 積。隨后可W洗涂固相提取材料除去腐蝕劑。例如，固相提取材料可包括用于盛放凝塊提取 物的容器的內(nèi)壁，其中內(nèi)壁被蝕刻隨后增加與凝塊提取物接觸的表面積。
[0073] 各種聚合物、金屬、陶瓷和玻璃可W用作固相提取的材料。在一些實(shí)施方案中，固 相提取材料包括吸濕材料。合適的固相提取材料的實(shí)例包括玻璃、礦物、聚合物、金屬和多 糖。礦物包括剛玉和石英。聚合物包括聚苯乙締、聚乙締、聚氯乙締、聚丙締和聚丙締酷胺。 金屬包括鐵。多糖包括葡聚糖和瓊脂糖。如下進(jìn)一步描述，優(yōu)選的固相提取材料包含聚丙締 酷胺，或基本上由其組成。
[0074] 固相提取材料可W包含，例如，玻璃的連續(xù)固相提取的材料或多個(gè)玻璃顆粒、玻璃 棉，連續(xù)的金屬，例如鐵的固相提取的材料，多個(gè)金屬珠，金屬粉，W及它們的組合。金屬的 連續(xù)固相提取材料可W包括具有開孔結(jié)構(gòu)的多孔金屬或金屬合金構(gòu)成的塊或其他=維形 狀。固相提取材料可W包括各種尺寸的各種珠或顆粒，包括基本上球形的珠。珠包括聚苯乙 締珠、聚丙締酷胺珠、玻璃珠、金屬(例如，鐵)珠，或任何其它合適的珠。珠可W是對所使用 的容器和包含白細(xì)胞的液體的量合適的任何尺寸。在一些情況下，珠的尺寸范圍為直徑約 0.001毫米到約3毫米。如珠尺寸足夠小，珠更像是粉末。
[0075] 用作固相提取材料的聚丙締酷胺珠可W通過聚合丙締酷胺單體形成，所述聚合使 用本領(lǐng)域已知的生產(chǎn)相對均勻的由聚丙締酷胺凝膠形成的珠的受控和標(biāo)準(zhǔn)化的方案。在一 般情況下，聚丙締酷胺通過將丙締酷胺用合適的雙官能交聯(lián)劑聚合形成，最常用的交聯(lián)劑 是N，N '亞甲基雙丙締酷胺(雙丙締酷胺）。凝膠聚合通常W過硫酸錠開始，反應(yīng)速率通過 加入催化劑加速，如N，N，N '，N '四甲基乙二胺(TEMED)。在各種實(shí)施方案中，聚丙締酷胺 珠包含0.5微摩爾簇基/毫升珠，賦予輕微的陰離子特性(負(fù)電荷）。珠也通常耐pH值的變化， 并且在許多水性溶液和有機(jī)溶液里是穩(wěn)定的。通過調(diào)節(jié)總的丙締酷胺濃度，可W形成寬范 圍孔徑大小的聚丙締酷胺凝膠。此外，聚丙締酷胺珠可W形成多種尺寸，并且可W具有相對 均勻的尺寸分布。珠大小可W從幾微米的直徑到幾毫米的直徑。例如，各種類型的Bio-Gel?p聚丙締酷胺凝膠珠(Bio-Rad Laboratories ,Hercules ,California,USA)的顆粒尺寸 范圍從小于約45叫I到高達(dá)180叫!。聚丙締酷胺珠也可購自SNF FLOERGER(Riceboro, Georgia,USA),Pierce Biotechnology,Inc.(Rockford, Illinois,USA)和PoIymers,Inc. (Fayetteville,Arkansas,USA)。
[0076] -旦聚合，聚丙締酷胺珠可W進(jìn)行干燥并W粉末狀的形式儲(chǔ)存。干燥的珠是不溶 于水，但一旦被再水合，能大大膨脹。再水合使聚丙締酷胺珠回復(fù)凝膠稠度，可W是干燥狀 態(tài)大約2-3倍的的大小。因此，干燥的聚丙締酷胺珠（即，干燥劑聚丙締酷胺珠)可用于吸收 部分的液體的體積，包括比珠孔小的溶質(zhì)，并可W用于濃縮IL-Ira和由白細(xì)胞產(chǎn)生的其它 蛋白質(zhì)。例如，干聚丙締酷胺珠與血液和/或富含血小板的血漿聯(lián)用，激活白細(xì)胞產(chǎn)生IL-Ira，并因?yàn)楦芍橹匦滤虾腿苊浗档涂傄后w體積。
[OOW]優(yōu)選地，固相提取材料使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)進(jìn)行滅菌，W防止凝塊提取物的 污染。例如，可W根據(jù)固相提取材料的特定組成而使用加熱和壓力滅菌法，如高壓滅菌。當(dāng) 固相提取材料在高壓滅菌過程中會(huì)受到不利影響時(shí)，可使用替代方法，如化學(xué)滅菌或福射。
[0078] 在一些實(shí)施方案中，凝塊提取物與固相提取材料一起溫育一定時(shí)間，W有效去除 部分液體。例如，溫育可W是24小時(shí)或更短，10個(gè)小時(shí)或更短，5小時(shí)或更短，2小時(shí)或更短，1 小時(shí)或更短，30分鐘或更短，15分鐘或更短，10分鐘或更短，5分鐘或更短，4分鐘或更短，3分 鐘或更短，2分鐘或更短。溫育可最少為約15秒，約30秒，約1分鐘，約90秒，約2分鐘，約10分 鐘，或約30分鐘。在一些實(shí)施方案中，溫育從約1-3分鐘。在一些實(shí)施方案中，溫育在約37°C 進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中液體不與固相提取材料溫育，但接觸僅為了后續(xù)處理所需的時(shí)間。 接觸可發(fā)生在常溫條件下，例如，在約20-25°C的溫度下進(jìn)行。
[0079] 在一些實(shí)施方案中，凝塊提取物和固相提取材料攬拌，使在接觸的過程中更徹底 混合運(yùn)些成分。攬拌可通過反轉(zhuǎn)、搖動(dòng)、搖晃、攬動(dòng)或滿旋液體和固相提取材料來完成。攬拌 可W增加凝塊提取物與固相提取材料接觸。攬拌可W進(jìn)行一次、重復(fù)多次、周期性地重復(fù)或 是連續(xù)進(jìn)行。關(guān)于使用聚丙締酷胺珠和其它固相提取材料生產(chǎn)富含蛋白質(zhì)的溶液的其他方 面和特征描述于:美國專利申請公開號2009/0220482，Higgins等，公開于2009年9月3日；美 國專利申請公開號2010/0055087，Higgins等，公開于2010年3月4日；美國專利申請公開 2011/0052561 ,Hoeppner,公開于2011年3月3日；國際申請公開號2012/030593