基于s－腺苷蛋氨酸類似物的免疫檢測方法及應(yīng)用于指導(dǎo)個體化用藥的制作方法
【專利說明】基于S-腺昔蛋氨酸類似物的免疫檢測方法及應(yīng)用于指導(dǎo)個 體化用藥
[0001 ]本發(fā)明專利申請延續(xù)臨時美國專利US61/801，547題目為"S-腺巧蛋氨酸的免疫檢 測用于個體化用藥或者用于健康與癌癥評估"，提交日期為2013年3月15日.本專利申請將 包括上述臨時專利的全部內(nèi)容。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明設(shè)及測定S-腺巧蛋氨酸在生物樣品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作為許多疾 病的標(biāo)志物。
[0003] 本發(fā)明設(shè)及使用由本發(fā)明中的抗原類似物制備的抗體的方法，測定S-腺巧蛋氨酸 在生物樣品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作為許多疾病的標(biāo)志物。
[0004] 本發(fā)明設(shè)及測定S-腺巧蛋氨酸在生物樣品中的含量，S-腺巧蛋氨酸可作為許多疾 病的標(biāo)志物，S-腺巧蛋氨酸的含量與疾病進(jìn)展有關(guān)系，根據(jù)S-腺巧蛋氨酸的水平制定合適 的治療方案。
[0005] 本發(fā)明設(shè)及診斷、篩查、早期檢測癌癥的方法，且可W用來監(jiān)測腫瘤和其它疾病的 治療效果和復(fù)發(fā)監(jiān)測。
[0006] 本發(fā)明還設(shè)及一種開發(fā)祀向特異檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)用來決定病人是否會對祀向特 異性藥物有反應(yīng)，具體的設(shè)及一種經(jīng)濟(jì)的、在同時開發(fā)診斷試劑和治療藥物時提供協(xié)同作 用的系統(tǒng)。
[0007] 本發(fā)明設(shè)及發(fā)現(xiàn)、篩選、尋找、檢出、開發(fā)和評估測定甲基化指數(shù)的方法，甲基化指 數(shù)可用于疾病進(jìn)展、治療和對治療反應(yīng)的監(jiān)測指標(biāo)。
[000引本發(fā)明設(shè)及使用甲基化指數(shù)(有些文獻(xiàn)說成甲基化狀態(tài)，即S-腺巧蛋氨酸/S-腺巧 同型半脫氨酸)作為標(biāo)志物、方法、機(jī)制、試劑、系統(tǒng)與試劑盒用于檢測和診斷癌癥和其它疾 病，也用于監(jiān)測癌癥進(jìn)展，檢測各種癌癥和其它疾病的治療效果。癌癥進(jìn)一步惡化發(fā)展一般 認(rèn)為與進(jìn)行性整體DNA低甲基化，區(qū)域性CpG過度甲基化和遺傳物質(zhì)不穩(wěn)定性增強(qiáng)有關(guān)系。 甲基化指數(shù)降低與整體DNA低甲基化和遺傳物質(zhì)不穩(wěn)定性增強(qiáng)有相關(guān)關(guān)系。因此，甲基化指 數(shù)是輔助健康狀況與疾病進(jìn)展\和的較好的標(biāo)志物。
[0009] 發(fā)明的背景
[0010] S-腺巧甲硫氨酸或S-腺巧蛋氨酸（SAMe)幾乎存在于體內(nèi)所有的組織及體液中。 SAM對于轉(zhuǎn)甲基作用運一過程至關(guān)重要，而甲基化幾乎參與到生命的每一方面。SAM是體內(nèi) DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂類及小分子甲基轉(zhuǎn)移反應(yīng)中的甲基供體。正常的胚胎發(fā)育需要適當(dāng)?shù)?DNA甲基化，有研究證明甲基轉(zhuǎn)移酶缺失可能導(dǎo)致死亡（Pegg,A.E.，F(xiàn)eith,D.J. ,Fong, L.Y.,Coleman,C.S.,0'Brian,T.G.,and Shantz,L.M.,2003,Biochem.Soc.Trans.31,356-360)。許多腫瘤細(xì)胞中DNA的甲基化呈現(xiàn)異常，DNA甲基化模式的改變甚至可誘發(fā)致腫瘤因 子基因的表達(dá)或沉默腫瘤抑制因子的基因，有研究表明，給與曬齒類動物缺乏甲基的食物 將引發(fā)肝癌。
[0011] SAMe具有轉(zhuǎn)硫基作用。SAMe脫甲基后生成S-腺巧同型半脫氨酸（SAH)，隨后SAH水 解生成同型半脫氨酸，經(jīng)轉(zhuǎn)硫基作用后生成脫硫酸，隨后進(jìn)一步轉(zhuǎn)換為半脫氨酸并最終成 為谷脫甘膚。谷脫甘膚是肝細(xì)胞的抗氧化劑，可作為解毒劑。
[0012] SAMe的另一個重要功能是轉(zhuǎn)氨丙基作用。SAM脫簇后將氨丙基轉(zhuǎn)移給與腐胺，生成 亞精胺和精胺，運兩種物質(zhì)對細(xì)胞生長、分化W及DNA和RNA的穩(wěn)定至關(guān)重要。此外，該反應(yīng) 過程的副產(chǎn)物甲硫腺巧(MTA)是一種強(qiáng)效止痛消炎藥，運可能是SAMe對骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎和纖維肌痛的臨床治療有功效的原因。
[0013] SAMe是免疫體系中一種重要的物質(zhì)，可維護(hù)細(xì)胞膜的正常功能，且有助于大腦中 血清素、稱黑激素及多己胺的等化學(xué)物質(zhì)的產(chǎn)生與分解。缺乏維生素 B12或葉酸鐵可造成 SAMe水平降低。SAMe還是一種抗氧化劑，可W保護(hù)機(jī)體免受活性氧分子的損害，活性氧分子 可能來自于機(jī)體自身或環(huán)境污染，被認(rèn)為是造成衰老及變性疾病的重要因素。一般認(rèn)為 SAMe可提高機(jī)體內(nèi)其它氨基酸的功能水平。
[0014] 進(jìn)一步的研究表明，SAMe經(jīng)裂解酶裂解后轉(zhuǎn)化為甲硫分子和高絲氨酸，它是tRNA 的氨基下酸鏈供體，也是生物素生物合成的氨基酸鏈供體。脫簇后的SAMe則是生物合成神 經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)多胺，亞精胺和精胺的氨丙基供體（Zappia et al(1979),Biomedical and Pharmacologcial roles of Adenosylmethionine and the Central Nervous System, page I,Pergamon Press.N.Y.)D
[0015] SAMe在臨床上可作為肝臟疾病化riedel H，Goa，K丄?，and Benfield P. ,(1989)， S-AdenosyI-I-methionine: a review of its pharmacological properties and therapeutic potential in liver dysfunction and affective disorders in relation to its physiological role in cell metabolism.Drugs. 38，389-416)、關(guān)節(jié) 炎（Di Padova C,( 1987 ),Sadenosyl-I-methionine in the treatment of osteoarthritis:review of the clinical studies.Am J.Med.83，（Suppl. 5) ,6-65似及 抑郁癥（Kagan，B, Sultzer D.L. ,Rosenlicht N and Gerner R.(1990), Oral S-adenosy!methionine in depressionia randomized,double blind,placebo-controlled trial. Am. J.Psychiatry 147,591-595.)的治療藥物。阿茲海默癥患者腦脊髓液中的SAMe 水平降f氏(Bottiglieri et al，( 1990) ,Cerebrospinal fluid Sadenosy 1-1-methionine in depression and dementia:effects of treatment with parenteral and oral S-adenosy 1-1-methionine .J.Neurol .Neurosurg.Psychiatry 53,1096-1098.) D初步的研究 結(jié)果表明，給予SAMe可改善阿茲海默癥患者的認(rèn)知能力（Bottiglierietal(1994)，The clinical potential of admetionine(S-adenosyl-l_methioinine)in neurological disorders . Drugs 48,137-152.) D阿茲海默癥患者腦脊髓液中的SAMe水平急劇下降 (Morrison et al，（1996)，Brain S-adenosyImethionine levels are severely decreased in Alzheimer's disease,Journal of Neurochemistry,67，1328-1331.)，中白 金森氏癥患者血液中的SAMe水平也顯著下降（Cheng et al，（1997), Levels of L-methionine S-adenosyItransferase activity in erythrocytes and concentrations of S-adenosy!methionine and S-adenosy!homocysteine in whole blood of patients with Parkinson's disease.Experimental Neurology 145,580-585.)。
[0016] 使用抗腫瘤藥甲氨蝶吟的患者體內(nèi)SAMe水平降化，該藥物與SAMe-起使用可減少 其神經(jīng)毒性（Bottiglieri et al(1994),The Clinical Potential of Ademetionine(S- adenosy!methionine)in neurological disorders,Drugs,48(2)，137-152.)。
[0017] 有研究報道艾滋病伴有癡呆癥或癡呆/HIV病毒感染復(fù)合性腦病患者的腦脊液中 SAM-e水平，發(fā)現(xiàn)其SAM-e水平比無 HIV感染的癡呆病人明顯降化（Keating et al(1991)， Evidence of brain methyltransferase inhibition and early brain involvement in HIV positive patients Lancet:337:935-9.)〇
[0018] De La Cruz等人的研究表明，SAMe是一種有效的抗氧化劑，長期施用SAMe可通過 增強(qiáng)抗氧化防御功能改變大腦、肝臟及腎臟組織中的氧化狀態(tài)（De La Cruz et al， Effects of chronic administration of S-adenosyI-I-methionine on brain oxidative stress in rats.Naunyn-Schmiedeberg's Archives Pharmacol，2000，361: 47-52.)。
[0019] 無肝臟疾病及有肝臟疾病的患者口服SAMe后，其肝臟中谷脫甘版水平均有上升 (Vendemiale G et al，（1989),Effect of oral S-adenosy1-1-methionine on hepatic glutathione in patients with liver disease.Scand J Gastroenterol；24:407-15.)〇 在口服SAMe后，肝內(nèi)膽汁齡積患者的搔癢癥狀及膽汁齡積有所改善(Giudici et al，化e use of admethionine(SAM-e) in the treatment of cholestatic liver disorders.Metaanalysis of clinical trials.IniMato et al editors.Methionine Metabolism:Molecular Mechanism and Clinical Implications.Madrid:CSIC Press; 1992pp67-79.)。而原發(fā)性纖維肌痛患者在短期服用SAMe后其癥狀也有所改善(Tavoni et al,Evaluation of S-adenosyImethioine in Primary Fibromaylgia. The American Journal of Medicine,Vol 83(suppl 5A),PP 107-110,1987. )D此外SAMe還可用于骨關(guān)節(jié) 炎白勺、冶療（Koenig B.A long-term( two years ) c I in i ca I trial with Sadenosylmethionine for the treatment of osteoarthritis.The American Journal of Medicine,Vol83(su卵I 5A)，Nov.20，1987pp 89-94)。
[0020] SAMe在細(xì)胞的基礎(chǔ)代謝過程中發(fā)揮重要作用，因此在許多似乎不相關(guān)的領(lǐng)域仍具 有重要的臨床意義，其中它在酒精性肝硬化的臨床治療方面的應(yīng)用最引人矚目，因為酒精 性肝硬化在醫(yī)學(xué)上目前還無法治愈DMato等人的研究表明口服SMe可將酒精性肝硬化的總 死亡率和/或發(fā)展為肝移植的概率降化達(dá)29%，而安慰劑治療組僅12% (Mato et al (1999),S-adenosylmethionine in alcohol liver cirrhosis:a randomized,placebo-control led ,double blind,multi-center clinical trial,Journal of Hepatology,30， 1081-1089.)〇
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