液過層析柱，收集到5.36克產(chǎn)物，產(chǎn)率為82%。
[0195] 實(shí)施例17
[0196] 化合物4:甲醋化合物3(7.76克，18.4mmo 1)放入250mL的圓底燒瓶中，往圓底燒瓶 中加入15mL甲醇和15mL純水，攬拌10分鐘。加入1.55克固體氨氧化裡攬拌反應(yīng)2小時(shí)(直到 薄層色譜和液相色譜檢測反應(yīng)完全）。粗品濃縮后進(jìn)行下一步，無需進(jìn)一步純化。
[0197] 實(shí)施例18
[0198] 化合物5:約7克的粗裡鹽4溶解于150毫升3摩爾每升的鹽酸，在室溫下攬拌反應(yīng)4 小時(shí)(直到原料完全消失在化C和LCMS)。粗的混合物經(jīng)過濾后，然后在壓力下濃縮干燥。粗 渣使用5次，每次120克的40%甲醇水洗脫液過柱純化。將純化的組分匯集，然后集中在高真 空下，在40°C下干燥。該產(chǎn)品是一種棟色的油狀物質(zhì)。產(chǎn)品通過高效液相色譜、質(zhì)譜和核磁 共振譜確認(rèn)。4.8克99.55%產(chǎn)品轉(zhuǎn)入9瓶Wl :1甲醇和水的混合物分裝，每一瓶樣品集中在 40°C高真空下干燥完全。
[0199] 所有在本申請中引用的專利，專利申請和期刊出版物，包括其中引用的參考資料， 在此通過引用的方式全部并入本發(fā)明。
[0200] 雖然本發(fā)明的許多實(shí)施方案包括目前優(yōu)選的實(shí)施方案被簡單描述如上，許多其它 稍有變化的類似的實(shí)施方案實(shí)屬在本公開的闡述和W下權(quán)利要求之范圍內(nèi)。因此，該所提 供的優(yōu)選實(shí)施方案和實(shí)施例的細(xì)節(jié)不被解釋為限制性的。應(yīng)當(dāng)理解的是，運(yùn)里使用的術(shù)語 僅僅是描述而不是限制性的，并且各種類似的變體和許多等效物或概念將不脫離其宗旨或 離開所要求保護(hù)的發(fā)明的范圍。
[0201] 實(shí)施例19
[0202] 測定了一期癌癥病人的SAM和SAH水平，對于甲基化指數(shù)小于2(比正常平均值小一 倍左右），建議給化療的病人SAM-e進(jìn)行輔助治療。
[0203] 實(shí)施例20
[0204] 可W測定病人尿液或者血液(如果尿液中有些特別的成分影響測定結(jié)果使得結(jié)果 偏低等）中的甲基化指數(shù)是個(gè)體化治療抑郁癥病人的好辦法。SAM治療方案可W包括如下：
[0205] 每天服用SAM-e 800-1600毫克SAMe的經(jīng)口服6周。SAMe通過靜脈注射或給予肌肉 注射，劑量范圍從200至400mg/天至多8周?？诜?000-1600毫克/天15天至6周。靜脈注射 150-400毫克/每天持續(xù)3-4周的劑量是最常見的。400mg的S-腺巧-心甲硫氨酸-1,4-下二橫 酸穩(wěn)定鹽(諾爾制藥公司，米蘭，意大利)每日肌肉注射。75-200毫克SAMe肌肉注射14-30天。 200-400毫克/250毫升生理鹽水，前S天靜脈注射的治療，隨后W400毫克/日的SMe治療4-14天。
[0206] 使用在本發(fā)明中開發(fā)的甲基化指數(shù)化ISA試劑盒，對服用高劑量（MOOmg/天）的 SAM-e的病人每3-5天測量的甲基化指數(shù)，W便有效地及時(shí)地調(diào)整SAM-e的劑量。如果甲基化 指數(shù)增加太快，比如在任何兩次測定之間差別超過5倍或甲基化指數(shù)為一個(gè)特定數(shù)字如0.5 (同時(shí)患者明顯伴有與SAM-e使用相關(guān)聯(lián)的臨床癥狀時(shí)），建議減少用量，特別是對于有高血 壓或其它屯、血管疾病的患者。高危人群最好每日測試甲基化指數(shù)或每天使用SAM和SAH快速 檢測試紙條W定性或半定量檢測在血液或尿中SAM和SAH水平，W確保SAM-e用藥的安全性， W避免任何可能的副作用。
[0207] 對于那些每日口服SAM-e低于400毫克的情況，也建議測定甲基化指數(shù)，或者至少 在需要的時(shí)候測定，或者每周測定一次，W便明確SAM的用量是否合適，W及何時(shí)停止服藥。
[0208] 除非甲基化指標(biāo)恢復(fù)正常并穩(wěn)定一兩個(gè)星期，不要停止服藥SAM-e。
[0209] 對于甲基化指數(shù)正?；蚪咏５囊钟舭Y患者，不要將SAM-e作為首選治療用藥 或方法。相反，使用其他類型的抗抑郁藥品。但是，甲基化指數(shù)仍然可能是一個(gè)很好的指標(biāo) 來監(jiān)測藥物治療的有效性等。定期進(jìn)行檢測甲基化指數(shù)仍然是重要的，W確定何時(shí)可W停 止藥物治療。
[0210] 實(shí)施例21
[0211] 可W測定病人尿液或者血液(如果尿液中有些特別的成分影響測定結(jié)果使得結(jié)果 偏低等）中的甲基化指數(shù)是個(gè)體化治療肝臟和/或膽管狹窄病人的好辦法。SAM治療方案可 W包括如下：
[0212] 對于成年人，根據(jù)肝臟和/或膽管狹窄或其它疾病的嚴(yán)重性，可W使用如下方案：
[0213] 每天口服SAM-e 1600毫克SAM-e約2周。SAM-e通過靜脈注注射，劑量1000 mg/天約4 周。
[0214] 治療妊娠期間膽管阻塞問題，緩慢地靜脈輸注500毫克的Tmnsmeti!(珍，2次/天，持 續(xù)14天，然后每天2次口服SAM-e 500毫克SAM-e知道分娩完畢。另外，每天口服600毫克的 Samyr?也可W用來處理妊娠性膽汁渺積的問題。每天口服SAM-e 1800毫克Samy愧)和 beta-mimetics。每天口服2次SAM-e 500毫克/次。其它SAM-e使用方法：1000毫克每日肌肉 注射直到分娩;200毫克/天靜脈注射持續(xù)20天;400毫克/次，2次/天靜脈注射知道分娩;800 毫克/天靜脈滴注3小時(shí)，持續(xù)20天。SOOmg的S-腺巧-1^-甲硫氨酸-1,4-下二橫酸穩(wěn)定鹽(諾 爾化noil)制藥公司，米蘭，意大利)每日靜脈注射。
[0215] 使用在本發(fā)明中開發(fā)的甲基化指數(shù)化ISA試劑盒，對服用高劑量（〉600mg/天）的 SAM-e的病人每3天測量的甲基化指數(shù)，W便有效地及時(shí)地調(diào)整SAM-e的劑量。如果甲基化指 數(shù)增加太快，比如在任何兩次測定之間差別超過5倍或甲基化指數(shù)為一個(gè)特定數(shù)字（同時(shí)患 者明顯伴有與SAM-e使用相關(guān)聯(lián)的臨床癥狀時(shí)），建議減少用量，特別是對于有高血壓或其 它屯、血管疾病的患者。高危人群最好每日測試甲基化指數(shù)或每天使用SAM和SAH快速檢測試 紙條W定性或半定量檢測在血液或尿中SAM和SAH水平，W確保SAM-e用藥的安全性，W避免 任何可能的副作用。
[0216] 對于那些每日口服SAM-e低于600毫克的情況，也建議測定甲基化指數(shù)，或者至少 在需要的時(shí)候測定，或者每周測定一次，W便明確SAM的用量是否合適，W及何時(shí)停止服藥。
[0217] 除非甲基化指標(biāo)恢復(fù)正常并穩(wěn)定一兩個(gè)星期，不要停止服藥SAM-e。
[0218] 所有在本申請中引用的專利，專利申請和期刊出版物，包括其中引用的參考資料， 在此通過引用的方式全部并入本發(fā)明。
[0219] 雖然本發(fā)明的許多實(shí)施方案包括目前優(yōu)選的實(shí)施方案被簡單描述如上，許多其它 稍有變化的類似的實(shí)施方案實(shí)屬在本公開的闡述和W下權(quán)利要求之范圍內(nèi)。因此，該所提 供的優(yōu)選實(shí)施方案和實(shí)施例的細(xì)節(jié)不被解釋為限制性的。應(yīng)當(dāng)理解的是，運(yùn)里使用的術(shù)語 僅僅是描述而不是限制性的，并且各種類似的變體和許多等效物或概念將不脫離其宗旨或 離開所要求保護(hù)的發(fā)明的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 哺乳動物類癌癥治療方法： (a) 測定癌癥病人體液中的甲基化指數(shù) (b) 分析病人的疾病階段和進(jìn)展變化和甲基化指數(shù)的關(guān)系 (c) 根據(jù)(b)的結(jié)果決定合適的治療方案2. 上述權(quán)利要求1中甲基化指數(shù)使用以下方法測定的： (al)用以下方法測定哺乳類體內(nèi)S-腺苷蛋氨酸含量：（i)采集樣品；（ii)樣品與抗S-腺 苷蛋氨酸特異性抗體混合；（iii)測定樣品中的S-腺苷蛋氨酸與{ii}中抗體的結(jié)合情況； (iv)定量Uii}中S-腺苷蛋氨酸抗體與S-腺苷蛋氨酸結(jié)合量，以算出樣品中S-腺苷蛋氨酸 的濃度；（a2)用本發(fā)明建立的免疫測定方法測定體內(nèi)S-腺苷同型半胱氨酸含量；（a3)計(jì)算 (al)/(a2)比率即是樣品的甲基化指數(shù)。3. 選擇哺乳動物類腫瘤治療方案： (a) 測定癌癥病人體液中的甲基化指數(shù) (b) 比較甲基化指數(shù)和對照的甲基化指數(shù)，看看測得的病人的甲基化指數(shù)是否有指導(dǎo) 意義 (c) 根據(jù)(b)的結(jié)果決定合適的治療方案。根據(jù)甲基化指數(shù)的大小不僅指導(dǎo)治療方案， 而且可以提示病人對當(dāng)前治療反應(yīng)好還是反應(yīng)不佳。4. 治療人類抑郁癥或情緒異常性疾病的方法由以下組成： (a) 用以下方法測定人類體內(nèi)S-腺苷蛋氨酸含量：（i)采集樣品；（ii)樣品與抗S-腺苷 蛋氨酸特異性抗體混合；（iii)測定樣品中的S-腺苷蛋氨酸與（ii)中抗體的結(jié)合情況；（iv) 定量(iii)中S-腺苷蛋氨酸抗體與S-腺苷蛋氨酸結(jié)合量，以算出樣品中S-腺苷蛋氨酸的濃 度； (b) 分析甲基化指數(shù)和抑郁癥或情緒異常性疾病的的關(guān)系 (c) 根據(jù)(b)的相關(guān)結(jié)果決定合適劑量的有效藥物治療抑郁癥或情緒異常性疾病5. 上述權(quán)利要求4中治療的藥物:苯乙肼，苯環(huán)丙胺，嗎氯貝胺，丙咪嗪，阿米替林，地昔 帕明，去甲替林，多慮平，普羅替林，曲米帕明，氯米帕明，阿莫沙平，氟西汀，舍曲林，帕羅西 汀，西酞普蘭，氟伏沙明，文拉法辛，馬普替林，阿莫沙平，曲唑酮，安非他酮，度洛西汀，艾司 西酞普蘭，西酞普蘭，奈法唑酮，文拉法辛，米那普侖，瑞波西汀，米氮平，Kava-卡瓦，圣約翰 疣，S-腺苷蛋氨酸，促甲狀腺激素釋放激素，神經(jīng)激肽受體，拮抗劑，甲狀腺素，神經(jīng)肽，以神 經(jīng)肽受體和激素為靶子的化合物。6. -種用于在受試者中診斷精神性疾病或/和神經(jīng)變性病癥或預(yù)測受試者對于精神性 疾病或/和神經(jīng)變性病癥的易感性的方法，該方法包括：（a)獲得一個(gè)或多個(gè)來自受試者的 生物樣品；（b)測定樣品中S-腺苷蛋氨酸水平或甲基化指數(shù);和(c)比較(b)中樣品中的生物 標(biāo)志物(S-腺苷蛋氨酸水平或甲基化指數(shù))的水平與對照樣品中相應(yīng)的生物標(biāo)志物的水平， 其中如果來自受試者的樣品的兩個(gè)或更多生物標(biāo)志物的水平與對照的相比較明顯異常，預(yù) 計(jì)受試者將容易患精神性疾病或神經(jīng)退行性疾病。7. 上述權(quán)利要求6中對照樣品來源于1個(gè)或多個(gè)沒有精神性疾病或/和神經(jīng)變性性疾患 的個(gè)體或正常人（陰性對照）。另外還包括已被明確診斷為精神性疾病或神經(jīng)退行性疾病的 受試者（陽性對照）。8. -種檢測在患者中疾病的存在或不存在的方法，其中所述的疾病是伴隨著S-腺苷蛋 氨酸缺陷的各種疾病:選定懷疑患有所述疾病的患者或處于具有所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)的人;從 所述患者或潛在患者中收集生物樣品;使用從S-腺苷蛋氨酸的半抗原類似物制備的抗體測 定所述生物樣品中S-腺苷蛋氨酸的水平;分析生物樣品中S-腺苷蛋氨酸的水平與所述疾病 存在或不存的關(guān)系。9. 一種用于評估受試者是否需要進(jìn)行用S-腺苷蛋氨酸的單獨(dú)治療或與其它化療劑合 用的方法，包括以下步驟組合：（a)從懷疑需要這種治療的受試者中收集體液樣品；（b)測定 所述樣品中S-腺苷蛋氨酸水平的量；（c)測量的S-腺苷同型半胱氨酸的水平并計(jì)算的甲基 化指數(shù)；（d)比較所述樣品與的正常標(biāo)準(zhǔn)的甲基化指數(shù);和(e)如果所述樣品的甲基化指數(shù) 超出正常范圍，提示需要S-腺苷蛋氨酸治療。10. 個(gè)性化藥物治療哺乳動物類疾病的方法，該方法包括從患者體液中測量甲基化指 數(shù)，并基于所測定的甲基化指數(shù)水平，提出一個(gè)最有可能有效的治療方案。11. 一種用于監(jiān)測癌癥患者的治療功效的方法，診斷時(shí)測定第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的甲基化指 數(shù);治療患者;療程完成后測定第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)的甲基化指數(shù)水平;比較第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)的第一 個(gè)時(shí)間點(diǎn)的受試者的甲基化指數(shù)變化，以確定癌癥治療的效果。
【專利摘要】本發(fā)明提供了檢測患者中的疾病的存在或不存在的方法，其中所述疾病是伴隨著S-腺苷蛋氨酸(或S-腺苷甲硫氨酸)水平降低的情況：尋找被懷疑具有所述疾病或處于具有患所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)的病人；從所述患者中獲得生物樣品；使用從S-腺苷蛋氨酸的半抗原類似物制備的抗體測定所述生物樣品中S-腺苷蛋氨酸的水平；將該樣品中S-腺苷蛋氨酸的水平與是否存在或不存在所懷疑的疾病或其嚴(yán)重程度相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明還提供了用于確定S-腺苷同型半胱氨酸(或稱S-腺苷高半胱氨酸)的方法，以便計(jì)算出甲基化指數(shù)(SAM/SAH的比率)，該指數(shù)是表示一個(gè)人是否健康的指標(biāo)。此外，本發(fā)明還包括用于確定S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸的試紙條的方法。
【IPC分類】A61K31/7076, A61P35/00, G01N33/574
【公開號】CN105492012
【申請?zhí)枴緾N201480015695
【發(fā)明人】郝秀娟, 埃塞克·安格雷斯
【申請人】湖南天合生物技術(shù)有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2014年3月18日
【公告號】CA2906955A1, EP2968386A1, US20140271945, WO2014146137A1