專利名稱：通過(guò)添加礦物和酸處理增加蛋氨酸的溶解度的方法
通過(guò)添加礦物和酸處理增加蛋氨酸的溶解度的方法發(fā)明背景 1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及增加蛋氨酸的溶解度的方法。2.相關(guān)技術(shù)的描述蛋氨酸是身體必需的氨基酸之一并廣泛用作動(dòng)物飼料和食物添加劑以及用于醫(yī)藥產(chǎn)品的藥物水溶液和其它原料的組分。蛋氨酸充當(dāng)膽堿(卵磷脂)和肌酸的前體，并還用作合成半胱氨酸和?；撬岬脑稀Ａ硗?，其充當(dāng)硫供體。S-腺苷-蛋氨酸源自L-蛋氨酸且在身體內(nèi)充當(dāng)甲基供體，并且它與大腦中各種神經(jīng)遞質(zhì)的合成有關(guān)。還發(fā)現(xiàn)蛋氨酸和/ 或S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)能預(yù)防肝臟和動(dòng)脈中脂肪的累積并對(duì)于抑郁癥、炎癥、肝臟疾病和肌肉疼痛的治療是有用的(Jeon BR等人，JH印atol.，2001年三月；34(3) :395-401)。對(duì)于蛋氨酸的化學(xué)合成，通過(guò)5-(β_甲基巰乙基)_乙內(nèi)酰脲的水解來(lái)制備 L-蛋氨酸。然而，不利的是化學(xué)合成的蛋氨酸以L-型和D-型的混合物形式存在。因此， 本發(fā)明者開(kāi)發(fā)了用于選擇性合成L-蛋氨酸的生物方法，并且他們已經(jīng)申請(qǐng)了專利(W0 2008/103432)。簡(jiǎn)稱為“兩步法”的方法包括發(fā)酵制備L-蛋氨酸前體和將L-蛋氨酸前體酶轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)-蛋氨酸。L-蛋氨酸前體優(yōu)選包含0-乙酰高絲氨酸和0-琥珀酰高絲氨酸。此外，同時(shí)與制備DL-蛋氨酸的常規(guī)化學(xué)合成相比，兩步法具有僅對(duì)L-蛋氨酸有選擇性和伴隨制備有機(jī)酸的優(yōu)點(diǎn)，更具體的是作為有用副產(chǎn)物的琥珀酸或醋酸。在前體的制備過(guò)程中， 在兩步法中獲得的L-蛋氨酸包含在微生物發(fā)酵的溶液中，并通常以水溶液的形式存在。對(duì)此，水溶液中DL-蛋氨酸或L-蛋氨酸的溶解度通常為約5% (w/v)。當(dāng)以水溶液形式使用蛋氨酸時(shí)，偶爾需要制備高濃度的蛋氨酸水溶液。不利地，由于蛋氨酸的低溶解度而難于制備高濃度的蛋氨酸水溶液。能將高濃度的蛋氨酸水溶液直接用于飼料等，且其體積小于低濃度的蛋氨酸水溶液。此外，容易將高濃度蛋氨酸水溶液用于多種應(yīng)用中，例如制劑改性和衍生物的制備。公開(kāi)了使用礦物或酸處理作為增加蛋氨酸的溶解度的常規(guī)方法。第M30164號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)了使用礦物將DL-蛋氨酸的溶解度增加至高達(dá)12% (w/v)。在Dominik Fuchs 等人的文章中報(bào)道了使用酸處理將DL-蛋氨酸的溶解度增加至18% (w/v)，特別是在pH為 2 時(shí)(Dominik Fuchs 等人，Ind. Eng. Chem. Res. 2006，45，6578-6584)。第M30164號(hào)美國(guó)專利公開(kāi)了通過(guò)使用礦物螯合DL-蛋氨酸來(lái)增加溶解度的方法。DL-蛋氨酸的螯合能通過(guò)形成1 1或1 2的礦物與DL-蛋氨酸的螯合物來(lái)增加 L-蛋氨酸的溶解度。然而，該方法的缺點(diǎn)在于高濃度的DL-蛋氨酸的溶解還需要高含量的礦物。特別地，對(duì)于制備IL最高濃度為50%的蛋氨酸溶液，需要總計(jì)3. 5M至3. 9M(全部蛋氨酸溶液的39. 6%至49. 6% )的包含3. 35M的硫酸鋅和0. 167M至0. 569M的氯化鐵的礦物。相對(duì)昂貴的礦物的使用增加了原料成本。因此，應(yīng)降低礦物的量以在大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)中獲得經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)，通過(guò)酸處理增加DL-蛋氨酸的溶解度的方法具有產(chǎn)物強(qiáng)酸化的問(wèn)題。
因此，為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明者證實(shí)通過(guò)添加礦物和添加酸的組合能將蛋氨酸的溶解度最大化至50%且在該情況下與前面使用的方法相比礦物量?jī)H不足15%，由此完成了本發(fā)明。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供使用最小用量的礦物來(lái)最大化蛋氨酸的溶解度的方法，并提供了根據(jù)所述方法獲得的具有增加的蛋氨酸溶解度的蛋氨酸溶液。發(fā)明效果本發(fā)明的方法能使用最小用量的各種礦物制備高濃度的蛋氨酸溶液。因此，能將高濃度的蛋氨酸溶液直接用于飼料等，并且其體積小于低濃度的蛋氨酸溶液。此外，容易將高濃度蛋氨酸溶液用于多種應(yīng)用，例如制劑改性和衍生物的制備。附圖簡(jiǎn)述

圖1是顯示用于將本發(fā)明的L-蛋氨酸的溶解度提高至50%的方法的流程圖。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一方面提供了用于增加蛋氨酸溶液的溶解度的方法， 其包括步驟1，向含蛋氨酸的溶液加入含有一種或多種二價(jià)金屬離子的礦物；以及步驟2，向步驟1中獲得的含蛋氨酸的溶液加入酸。本發(fā)明的另一方面提供了通過(guò)上述方法制備的具有增加的蛋氨酸溶解度的高濃度的蛋氨酸溶液。 在下文中，詳細(xì)描述本發(fā)明的組成。本發(fā)明一方面提供了用于增加蛋氨酸溶液的溶解度的方法，其包括步驟1，向含蛋氨酸的溶液加入含一種或多種二價(jià)金屬離子的礦物；以及步驟2，向步驟1中獲得的含蛋氨酸的溶液加入酸。本發(fā)明的技術(shù)特征在于與常規(guī)方法相比，通過(guò)使用二價(jià)金屬離子螯合以及通過(guò)酸處理降低pH的組合來(lái)顯著降低用于制備高濃度的蛋氨酸溶液的金屬離子的使用。在本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施方案中，含蛋氨酸的溶液可為含DL-蛋氨酸或L-蛋氨酸的溶液。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，含蛋氨酸的溶液可以是包含通過(guò)發(fā)酵或酶轉(zhuǎn)化制備的L-蛋氨酸，或通過(guò)它的純化、濃縮或干燥過(guò)程制備的L-蛋氨酸濃縮物的溶液，或者是通過(guò)再溶解L-蛋氨酸的干粉制得的L-蛋氨酸溶液。對(duì)此，L-蛋氨酸的純度可為10%至 100%。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，通過(guò)WO 2008/013432所述方法，通過(guò)微生物菌株的發(fā)酵以及酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備L-蛋氨酸。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，在發(fā)酵后通過(guò)酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備L-蛋氨酸，然后使用流化床制粒機(jī)以粉末顆粒的干燥形式回收。粉末顆粒形式的L-蛋氨酸的純度為約60%。根據(jù)本發(fā)明，在通過(guò)發(fā)酵和酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備的含L-蛋氨酸的溶液中，可將L-蛋氨酸的溶解度增加至高達(dá)35%。其表明包含通過(guò)發(fā)酵和酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制備的L-蛋氨酸的溶液具有除L-蛋氨酸之外的高含量雜質(zhì)，因此其比純度為90%或以上的蛋氨酸具有更低的溶解度。因此，當(dāng)增加蛋氨酸的純度時(shí)，能將蛋氨酸的溶解度從35%增加至50%。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，在使用通過(guò)純化由發(fā)酵和酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制得的L-蛋氨酸而制備的純度為99%或以上的L-蛋氨酸的情況下，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與從Sigma購(gòu)買的純度為99%的市售L-蛋氨酸相同。在本發(fā)明中，二價(jià)金屬離子可選自Fe2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Cu2+和Si2+，并優(yōu)選地選自 Fe2+、Mn2+ 和 Zn2+。包含二價(jià)金屬離子的礦物可為選自硫化鐵、硫化錳和硫化鋅中的一種或多種，并且更優(yōu)選的是具有較低的分子量的礦物?？梢詥为?dú)或以其兩種或多種混合物的形式使用所述礦物。更優(yōu)選地，避免使用具有較高分子量的礦物或昂貴的礦物。基于蛋氨酸溶液的總體積，優(yōu)選以1 %至10 %，且更優(yōu)選為2 %至8 %以及最優(yōu)選為3 %至6 %的濃度的礦物量來(lái)使用。在本發(fā)明中，優(yōu)選地，通過(guò)向含蛋氨酸的溶液添加酸來(lái)進(jìn)行酸處理，所述添加的酸的濃度為0. OlM至0. 5M，更優(yōu)選為0. 05M至0. 4M且最優(yōu)選為0. 1M。在具體的實(shí)例中，使用 0. 1M。在本發(fā)明中，酸可以為硫酸，但不限于此。在本發(fā)明的具體實(shí)例中，相對(duì)于具有各種雜質(zhì)的蛋氨酸，使用1.88%至8. 43%的礦物，由此制備35%至50%的蛋氨酸溶液(表1)。另外，與單獨(dú)使用礦物相比，通過(guò)使用兩種或多種礦物的混合物更能減少礦物的總注入量(參見(jiàn)表1)。根據(jù)本發(fā)明，為提高蛋氨酸的溶解度，通過(guò)加入最小量的礦物，隨后進(jìn)行酸處理能將蛋氨酸在水中的總?cè)芙舛茸畲蠡?0倍或更高。本發(fā)明的另一方面提供了具有根據(jù)上述方法增加的蛋氨酸的溶解度的高濃度的蛋氨酸溶液?？赏ㄟ^(guò)另外的純化方法純化蛋氨酸溶液，然后將其制成干粉形式或通過(guò)將其溶解于水溶液中制成溶液形式。與分別進(jìn)行添加礦物或添加酸的常規(guī)方法相比，根據(jù)本發(fā)明添加礦物隨后進(jìn)行酸處理能精密增加蛋氨酸的溶解度而沒(méi)有使用過(guò)量的礦物和由于添加酸而引起的產(chǎn)品強(qiáng)酸化的問(wèn)題。因此，制備的蛋氨酸溶液能應(yīng)用于多種領(lǐng)域，包括動(dòng)物飼料、食物添加劑、藥物以及用于醫(yī)藥產(chǎn)品的其它原料。在下文中，參考實(shí)施例來(lái)更詳細(xì)地描述本發(fā)明的組成和效果。然而，這些實(shí)施例僅出于例示性的目的，并且本發(fā)明不旨在受這些實(shí)施例的限制。實(shí)施例1 在使用硫化錳制備12%的蛋氨酸溶液后通過(guò)添加酸制備50%的蛋氨酸溶液通常，已知室溫下蛋氨酸在水中的溶解度為約50g/L至55g/L。因此，將2. 5g的 L-蛋氨酸(99%，Sigma，USA)溶解于50mL的水以制備5%的L-蛋氨酸溶液(50g/L)。當(dāng)在 70°C至80°C下攪拌該溶液時(shí)，加入23. 5mM的L-蛋氨酸(3. 5g)和23. 5mM的硫化錳(3. 97g) 從而制備12%的L-蛋氨酸溶液(120g/L)。計(jì)算硫化錳的量以使添加的L-蛋氨酸和硫化錳的摩爾比為1 1。在完成溶解L-蛋氨酸晶體之后，在室溫?cái)嚢柘?，?2%的L-蛋氨酸溶液加入另外40g的L-蛋氨酸(約40g)。在該過(guò)程中，向該L-蛋氨酸溶液加入98%的硫酸(36. 8N)以達(dá)到0. IM的最終濃度，由此引起放熱反應(yīng)。在放熱反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行過(guò)濾以去除未溶解的殘留L-蛋氨酸晶體。在過(guò)濾后，通過(guò)HPLC測(cè)定L-蛋氨酸溶液中的L-蛋氨酸濃度，求得溶液中的L-蛋氨酸濃度為50% (500g/L)。在增加蛋氨酸的溶解度的過(guò)程中， 通過(guò)添加過(guò)量的蛋氨酸最終將50ml的最初為5%的蛋氨酸溶液增加至為80ml的50%的蛋氨酸溶液。因此，最終獲得80ml的50%的蛋氨酸溶液。
使用DL-蛋氨酸(99%，Sigma, USA)進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)，從而獲得相同的結(jié)果。實(shí)施例2 使用硫化鋅制備12%的蛋氨酸溶液后通過(guò)添加酸制備50%的蛋氨酸溶液在按照實(shí)施例1制備5%的L-蛋氨酸溶液之后，在70°C至80°C，在攪拌下向50ml 的該溶液加入23. 5mM的L-蛋氨酸(3. 5g)。然后，注入23. 5mM的硫化鋅(6. 75g)以使添加的L-蛋氨酸和硫化鋅的摩爾比為1 1，從而制備12%的L-蛋氨酸溶液(120g/L)。在完成溶解L-蛋氨酸晶體后，在室溫?cái)嚢柘孪?2%的L-蛋氨酸溶液加入過(guò)量的L-蛋氨酸(約 40g)。在該過(guò)程中，將98%的硫酸(36. 8N)加入至該L-蛋氨酸溶液以達(dá)到0. 1M，由此引起放熱反應(yīng)。在放熱反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行過(guò)濾以去除未溶解的殘留L-蛋氨酸，并測(cè)量L-蛋氨酸的濃度。L-蛋氨酸溶液為50% (500g/L)的溶液。通過(guò)HPLC測(cè)定L-蛋氨酸的濃度。在增加蛋氨酸的溶解度過(guò)程中，通過(guò)添加過(guò)量的蛋氨酸最終將50ml的最初為5% 的蛋氨酸溶液增加至為80ml的50%的蛋氨酸溶液。因此，最終獲得80ml的50%的蛋氨酸溶液。使用DL-蛋氨酸進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)，從而獲得相同的結(jié)果。實(shí)施例3 在使用硫化錳、硫化鋅和硫化鐵制備12 %的蛋氨酸溶液之后通過(guò)添加酸制備50%的蛋氨酸和3. 75%的礦物的溶液在按照實(shí)施例1制備5%的L蛋氨酸溶液后，在70°C至80°C，在攪拌下向其50ml 的溶液加入23. 5mM的L-蛋氨酸(3. 5g)。此外，加入各自為Ig的硫化錳、硫化鋅和硫化鐵， 從而制備12%的L-蛋氨酸溶液(120g/L)。在該過(guò)程中，礦物各自變?yōu)?. 92mM的硫化錳、 3. 48mM的硫化鋅和2. 5mM的硫化鐵。在完成溶解L-蛋氨酸晶體之后，在室溫?cái)嚢柘拢?12%的L-蛋氨酸溶液加入過(guò)量的L-蛋氨酸(約40g)。在該過(guò)程中，將98%的硫酸(36. 8N) 加入至L-蛋氨酸溶液以達(dá)到0. 1M，由此引起放熱反應(yīng)。在放熱反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行過(guò)濾以去除未溶解的殘留L-蛋氨酸晶體，并測(cè)量L-蛋氨酸濃度。溶液為50% (500g/L)的L-蛋氨酸和3. 75%的礦物的溶液。通過(guò)HPLC測(cè)定L-蛋氨酸的濃度。在增加蛋氨酸的溶解度過(guò)程中，通過(guò)添加過(guò)量的蛋氨酸最終將50ml的最初為5% 的蛋氨酸溶液增加至為80ml的50%的蛋氨酸溶液。因此，最終獲得80ml的50%的蛋氨酸溶液。使用DL-蛋氨酸進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)，從而獲得相同的結(jié)果。實(shí)施例4 在使用硫化錳、硫化鋅和硫化鐵制備12 %的蛋氨酸溶液之后通過(guò)添加酸制備50%的蛋氨酸和1. 88%的礦物的溶液在按照實(shí)施例2制備5%的L-蛋氨酸溶液之后，在70°C至80°C，在攪拌下向其 50ml的溶液加入23. 5mM的L-蛋氨酸(3. 5g)。此外，加入各自為0. 5g的硫化錳、硫化鋅和硫化鐵，從而制備12%的L-蛋氨酸溶液(120g/L)。在該過(guò)程中，礦物各自變?yōu)?. 96mM的硫化錳、1. 74mM的硫化鋅和1. 25mM的硫化鐵。在完成溶解L-蛋氨酸晶體之后，在室溫?cái)嚢柘?，?2%的L-蛋氨酸溶液加入過(guò)量的L-蛋氨酸(約40g)。在該過(guò)程中，將98%的硫酸 (36. 8N)加入至L-蛋氨酸溶液以達(dá)到0.1M，由此引起放熱反應(yīng)。在放熱反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行過(guò)濾以去除未溶解的殘留L-蛋氨酸晶體，并測(cè)量L-蛋氨酸的濃度。溶液為50% (500g/L) 的L-蛋氨酸和1. 88%的礦物的溶液。通過(guò)HPLC測(cè)定L-蛋氨酸的濃度。在增加蛋氨酸溶解度的過(guò)程中，通過(guò)添加過(guò)量的蛋氨酸最終將50ml的最初為5%的蛋氨酸溶液增加至為80ml的50%的蛋氨酸溶液。因此，最終獲得80ml的50%的蛋氨酸溶液。使用DL-蛋氨酸進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)，從而獲得相同的結(jié)果。實(shí)施例5 使用通過(guò)發(fā)酵和轉(zhuǎn)化反應(yīng)制得的L-蛋氨酸制備L-蛋氨酸溶液在本實(shí)施例中，將通過(guò)發(fā)酵制備的0-乙酰高絲氨酸的酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)制得的L-蛋氨酸粉末用于制備高濃度的L-蛋氨酸。首先，通過(guò)發(fā)酵制得的0-乙酰高絲氨酸的酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)來(lái)制備L-蛋氨酸，然后將該溶液干燥以使用流化床制粒機(jī)制備L-蛋氨酸顆粒。通過(guò)HPLC定量L-蛋氨酸顆粒中 L-蛋氨酸的含量，并發(fā)現(xiàn)其純度為約60%。L-蛋氨酸溶液的具體制備方法在現(xiàn)有技術(shù)WO 2008/013432中進(jìn)行描述。將L-蛋氨酸顆粒定量以制備5%的L-蛋氨酸溶液。在70°C至80°C，在攪拌下向其50ml的溶液加入5. 83g的L-蛋氨酸顆粒。此外，加入5g的硫化鐵(13mM)，從而制備 12%的L-蛋氨酸溶液(120g/L)。在完成溶解L-蛋氨酸顆粒之后，在室溫?cái)嚢柘?，?2% 的L-蛋氨酸溶液加入過(guò)量的L-蛋氨酸(約67g)。在該過(guò)程中，將98%的硫酸(36. 8N)加入L-蛋氨酸溶液以達(dá)到0. 1M，由此引起放熱反應(yīng)。在放熱反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行過(guò)濾以去除未溶解的殘留L-蛋氨酸顆粒晶體，并測(cè)量L-蛋氨酸的濃度。溶液為80ml的35%的L-蛋氨酸溶液(350g/L)。通過(guò)HPLC測(cè)定L-蛋氨酸的濃度。其表明該溶液的濃度低于上述實(shí)施例中純度為99%的L-蛋氨酸或DL-蛋氨酸，因?yàn)榇嬖谟贚-蛋氨酸顆粒中的40%的雜質(zhì)也溶解在溶液中，從而抑制L-蛋氨酸的溶解。為證實(shí)這點(diǎn)，從發(fā)酵和酶轉(zhuǎn)化制成的L-蛋氨酸溶液制備純度為99%或以上的 L-蛋氨酸。用硫酸將L-蛋氨酸溶液滴定至pH為1. 0，并在陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上進(jìn)行吸附，并用氨溶液洗提。用硫酸將洗脫液滴定至PH為7.0，然后加熱以制備2X的濃縮液。向該濃縮液加入過(guò)量的甲醇以誘導(dǎo)結(jié)晶，并將形成的晶體回收和干燥。通過(guò)HPLC定量干燥晶體的含量。發(fā)現(xiàn)晶體的純度為99%或以上。使用回收的L-蛋氨酸晶體粉末以與實(shí)施例1至4相同的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果，與上述實(shí)施例相同能制備50%或更高的蛋氨酸溶液。實(shí)施例6 實(shí)施例1至5中所使用礦物的量的比較使用分子量為169. 02g/摩的硫化錳、分子量為IKl. 53g/摩的硫化鋅和分子量為 399. 88g/摩的硫化鐵，并將實(shí)施例1至5中所使用礦物的總量進(jìn)行比較。表 權(quán)利要求
1.增加蛋氨酸的溶解度以制備蛋氨酸溶液的方法，其包括步驟1，向含蛋氨酸的溶液加入包含一種或多種二價(jià)金屬離子的礦物；以及步驟2，向步驟1中獲得的含蛋氨酸的溶液加入酸。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述二價(jià)金屬離子選自i^2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、CU2+和 Si2+中的一種或多種。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述含二價(jià)金屬離子的礦物選自硫化鐵、硫化錳和硫化鋅中的一種或多種。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酸為硫酸。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述蛋氨酸為DL-蛋氨酸或L-蛋氨酸。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述含蛋氨酸的溶液為含通過(guò)發(fā)酵或酶轉(zhuǎn)化制備的 L-蛋氨酸的溶液。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中基于所述含蛋氨酸的溶液的總體積，加入至所述溶液的礦物的量達(dá)到至10%的濃度。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中加入至所述含蛋氨酸的溶液的酸的量達(dá)到0.OlM至 0. 5M的濃度。
9.具有根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法而增加的蛋氨酸的溶解度的高濃度的蛋氨酸溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及提高蛋氨酸的溶解度的方法。更具體地，本發(fā)明涉及增加蛋氨酸的溶解度的方法，其中以適當(dāng)?shù)谋壤砑拥V物和硫酸以提高蛋氨酸的溶解度，由此克服蛋氨酸在水中的低溶解度的問(wèn)題。
文檔編號(hào)C07K1/02GK102333787SQ201080009633
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2010年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者全成*, 孫晟光, 徐昌一, 李漢珍, 李相穆, 申容旭, 羅光鎬, 許仁庚, 金日出, 金朱恩, 金泰影, 金賢雅 申請(qǐng)人:Cj第一制糖株式會(huì)社