本發(fā)明涉及一種全葉馬蘭總黃酮提取物的制備方法及其用途，該提取物可以預(yù)防或治療免疫性肝損傷。
二、
背景技術(shù)：
肝損傷是多種肝臟疾病共有的一種病理狀態(tài)，其常見的病因?yàn)椴《靖腥?，如臨床上乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等病毒的感染，其重要特征是肝組織內(nèi)大量的炎癥細(xì)胞浸潤，產(chǎn)生免疫/炎癥應(yīng)答，導(dǎo)致免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的肝損傷。病毒侵入肝細(xì)胞后，可與肝細(xì)胞DNA整合在一起，免疫細(xì)胞或抗病毒藥物在殺滅病毒的同時(shí)，也會受感染的肝細(xì)胞，從而造成免疫性肝損傷。其長期存在是導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌發(fā)生的重要始動因素。已有大量研究表明，肝內(nèi)免疫功能的異常改變和氧自由基的大量產(chǎn)生是引起肝組織損傷的重要機(jī)制之一(胡成穆，金銀花總黃酮對小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]，中藥藥理與臨床，2007，23(5):85-87)，可見調(diào)節(jié)免疫功能在病毒性肝炎，尤其是慢性肝炎治療過程中的重要性。
現(xiàn)代對免疫性肝損傷的治療措施主要有抗病毒治療、免疫調(diào)節(jié)治療和一般治療(恢復(fù)肝功能、抗肝纖維化等)等。常用的藥物主要集中在干擾素、胸腺素、Th細(xì)胞因子、疫苗等的應(yīng)用(范江虹，慢性乙型病毒性肝炎免疫治療藥物的研究進(jìn)展[J]，國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊，2002，29(4):222-228)。疫苗是目前預(yù)防肝病的重要的措施，自20世紀(jì)80年代后期開始全民接種乙肝疫苗后，我國的乙肝感染率大大降低。但目前在臨床實(shí)踐中存在乙肝疫苗注射后可能不產(chǎn)生抗體的情況，使很多健康人在接種疫苗不久后，又處于感染肝炎的危險(xiǎn)中而不自知。干擾素、胸腺素及核苷類藥物是目前公認(rèn)的抗病毒藥物。核苷類藥物主要有拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋等。拉米夫定作為目前臨床普遍使用治療肝炎的藥物，其優(yōu)點(diǎn)是高效、方便、無明顯毒副反應(yīng)，但長期使用拉來夫定，可導(dǎo)致病毒耐藥，因此它不是一種可以根治肝病的藥物。臨床中在應(yīng)用核苷類藥物的同時(shí)，又常常聯(lián)合干擾素如α-干擾素、β-干擾素以及干擾素α-1b、α-2b和能刺激T細(xì)胞分泌干擾素及白介素等淋巴因子的胸腺素(注射用胸腺肽α1等)進(jìn)行治療。這種聯(lián)合治療可以調(diào)節(jié)患者免疫(細(xì)胞免疫、體液免疫)功能，并促進(jìn)藥物對病毒的清除能力。但僅對部分患者有較好的療效，而對絕大多數(shù)患者療效差且副作用大(張廣業(yè)，王育群，張瑋，等.中醫(yī)藥免疫調(diào)節(jié)治療慢性乙型病毒性肝炎研究進(jìn)展[J].安徽中醫(yī)臨床雜志,2002,14(6):5l8-521)，容易引起病毒耐藥株的產(chǎn)生，停藥后易復(fù)發(fā)，且療程長、治療費(fèi)用高。由于目前抗乙肝病毒的藥物效果不能令人滿意，因此，尋找有效的抗病毒制劑進(jìn)行治療的同時(shí)，進(jìn)一步研究和尋找有效的中草藥制劑進(jìn)行抗肝損傷治療，阻斷肝硬化和肝癌的發(fā)生，延緩疾病進(jìn)程，具有十分重要的意義。
全葉馬蘭(Kalimeris integrtifolia Turcz.Ex DC.)為菊科(Asteraceae)馬蘭屬(Kalimeris)多年生草本植物，別名全緣葉馬蘭、野白菊(湖北)、黃花三草、掃帚花、掃帚雞腸、全葉紫菀、全葉雞兒腸、路邊菊等，主要生于山坡、林緣、灌叢、路旁。廣泛分布于我國東北部、西部和中部，國外在俄羅斯的東部西伯利亞、蒙古和朝鮮也有分布?！吨腥A本草》中記載，全葉馬蘭味苦、性寒，具有清熱解毒、止咳、散瘀止血的功效。全葉馬蘭以其嫩莖葉供蔬食，也可做優(yōu)良的牧草(閆紅.微波法提取全葉馬蘭總黃酮成分工藝優(yōu)化[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2014,37(04):43-44)。民間早已用其全草煎服治療慢性支氣管炎，療效很好，在1970年我們?yōu)榱颂接懭~馬蘭的藥理作用，對其根，莖，葉，全草的鎮(zhèn)咳及中樞抑制作用進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)證明，全葉馬蘭有明顯的鎮(zhèn)咳及中樞抑制作用，全草作用最強(qiáng)(石樂鳴.全葉馬蘭鎮(zhèn)咳作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材,1990,13(11):36-37；徐慶榮.全葉馬蘭對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用[J].中藥材,1991,14(7):41-43)。另實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，全葉馬蘭還具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用(徐慶榮.全葉馬蘭的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2002,19(03):199-201)。本發(fā)明者的研究表明，全葉馬蘭含有豐富的黃酮類物質(zhì)，且黃酮類化合物具有抑菌、消炎、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗病毒等諸多功效，但目前未見對全葉馬蘭總黃酮藥用的報(bào)道，也未見對全葉馬蘭總黃酮提取物治療免疫性肝損傷的報(bào)道。
三、
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在提供一種全葉馬蘭總黃酮提取物的制備方法及其用途，以實(shí)現(xiàn)抗肝損傷治療，阻斷肝硬化和肝癌的發(fā)生。
本發(fā)明全葉馬蘭總黃酮提取物的制備方法，包括如下步驟：
全葉馬蘭用極性溶劑提取，提取液過濾后，60℃減壓濃縮干燥，獲得粗提物；將粗提物用水溶解后上大孔樹脂柱，用兩倍柱體積的蒸餾水洗脫后再用乙醇溶液洗脫，收集乙醇溶液的洗脫液，回收溶劑后于60℃真空干燥，即得全葉馬蘭總黃酮提取物。
所述極性溶劑為乙醇的水溶液，體積百分比為10％-100％，優(yōu)選為40％-80％。
所述大孔樹脂選自NKA-9、HPD-100、HPD-300、HPD-500、HPD-750、HPD-826、D-101、AB-8，優(yōu)選為AB-8、HPD-100、HPD-300。
洗脫時(shí)所用乙醇溶液的體積濃度為30％-90％，優(yōu)選為90％。
提取時(shí)極性溶劑的質(zhì)量為全葉馬蘭質(zhì)量的9-21倍。
本發(fā)明全葉馬蘭總黃酮提取物從全葉馬蘭中提取而得，全葉馬蘭總黃酮的含量為50～95％重量百分比。
本發(fā)明采用紫外分光光度法，以芹菜素為對照品，在330nm波長處測定全葉馬蘭總黃酮提取物中全葉馬蘭總黃酮的含量。
色譜條件為：Kromasil C18色譜柱(250mm×4.6mm)，柱溫30℃；流動相A：乙腈；B：0.5％甲酸-水；梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?～10min 91％～91％B，10～25min 91％～86％B，25～54min 86％～86％B，54～55min 86％～82％B，55～72min 82％～82％B，72～73min 82％～70％B，73～88min 70％～70％B，88～89min 70％～64％B，89～99min 64％～64％B，99～100min 64％～58％B，100～110min 58％～58％B，110～112min 58％～50％B，112～120min 50％～50％B，120～122min 50％～43％B，122～132min 43％～43％B，132～134min 43％～27％B，134～142min 27％～27％B，142～144min 27％～13％B，144～162min 13％～13％B，162～164min 13％～0％B，164～165min 0％～91％B；流速1mL/min，紫外檢測器，檢測波長為330nm時(shí)，可測定芹菜素的含量。
本發(fā)明的全葉馬蘭總黃酮提取物中還含有kalinturflavone A、kalinturflavone B的至少一種。
本發(fā)明所述的全葉馬蘭為菊科馬蘭屬多年生草本植物全葉馬蘭的全草。
本發(fā)明全葉馬蘭總黃酮提取物的用途，是在制備具有預(yù)防或治療免疫性肝損傷藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開了一種含有全葉馬蘭總黃酮提取物的藥物組合物，包括本發(fā)明制備的全葉馬蘭總黃酮提取物及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。例如，一種藥物組合物，為全葉馬蘭總黃酮提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定比例混合而成；也可以是全葉馬蘭總黃酮提取物、其他中藥提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的比例混合而成。
上述藥物組合物可進(jìn)一步按照常規(guī)制劑方法配制成可供給藥的形式，包括經(jīng)口或胃腸外給藥形式。在可供給藥的形式中，應(yīng)包含治療有效劑量的全葉馬蘭總黃酮提取物。所謂“治療有效量”是在在該劑量下，本發(fā)明的提取物能夠改善或減輕疾病癥狀，或能夠抑制或阻斷疾病的發(fā)展。
可供給藥的組合物可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑或液體制劑(如口服或無菌胃腸外溶液或懸浮液)。這些可供給藥的組合物還可以根據(jù)需要制備成緩控釋制劑或靶向制劑。
口服給藥的形式可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑等，它們可以含有常規(guī)賦形劑如填充劑乳糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合劑像糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、羥丙基甲基纖維或聚乙烯吡咯烷酮；潤滑劑如硬脂酸鎂；崩解劑如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、微晶纖維素或藥學(xué)上可接受的潤濕劑如十二烷基硫酸鈉。
液體組合物(如口服液體組合物)可以制備成乳液或糖漿劑形式，或者將它們制備成干燥產(chǎn)物形式，在使用前用水貨其它適當(dāng)?shù)娜苊饺芙?。此類液體制劑可以含有常規(guī)的添加劑，如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨醇單甘油酯或阿拉伯膠；非水溶媒包括可食用油、油性酯；防腐劑如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常規(guī)的矯味劑或著色劑。
胃腸外組合物(如胃腸外給藥組合物)可以含有所述活性化合物和無菌溶媒，根據(jù)使用的濃度，所述化合物可以懸浮或溶解于該溶媒中，制備胃腸外給藥的溶液時(shí)，可以將本發(fā)明的組合物溶于注射用水中，過濾除菌，然后灌裝于適當(dāng)?shù)墓苤破炕虬碴持胁⒚芊?。為增加穩(wěn)定性，可以將該組合物灌裝于管制瓶中后冷凍并真空去除水分。以基本相同的方法可以制備胃腸外懸浮液，但是所述活性化合物是懸浮于溶媒中而不是溶解于其中，并且除菌不能通過過濾進(jìn)行。可以將所述化合物通過暴露于環(huán)氧乙烷中滅菌，然后將其懸浮于無菌溶媒中。最好該組合物中含有表面活性劑或潤濕劑以有助于活性組分的均勻分布。
藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的全葉馬蘭總黃酮提取物具有預(yù)防或治療免疫性肝損傷作用。
本發(fā)明以小鼠肝臟功能和肝臟病理學(xué)檢查等指標(biāo)作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明：BCG+LPS誘導(dǎo)的肝損傷可引起ALT、AST、NO、T-BiL、AKP、TNF-α、INF-γ、IL-4、MDA、iNOS水平升高，SOD、GSH-Px水平降低，而全葉馬蘭總黃酮提取物能降低免疫性肝損傷小鼠血清過高的ALT、AST、NO、T-BiL、AKP、MDA、TNF-α、INF-γ、IL-4、iNOS水平，對抗SOD活性降低，升高GSH-Px水平，說明全葉馬蘭總黃酮提取物具有增強(qiáng)機(jī)體清除氧自由基的能力，提示全葉馬蘭總黃酮提取物具有保護(hù)免疫性肝損傷小鼠的作用，其機(jī)制可能與其直接清除自由基、提高抗氧化物酶的活性和降低脂質(zhì)過氧化物水平，并可調(diào)節(jié)免疫功能，減少NO和TNF-α的產(chǎn)生等有關(guān)。
急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，全葉馬蘭總黃酮經(jīng)灌胃給藥途徑，ICR小鼠的食量、體重未見異常，LD50>3.1g/kg，表明毒性低，具有良好的用藥安全性。
本發(fā)明具備以下優(yōu)點(diǎn)：
1、本發(fā)明提供的全葉馬蘭總黃酮提取物的制備工藝能有效的富集，去除雜質(zhì)，其全葉馬蘭總黃酮含量高，質(zhì)量控制可以通過紫外分光光度法和高效液相色譜法進(jìn)行含量測定和高效液相指紋圖譜進(jìn)行分析，該方法簡單易行可控。
2、本發(fā)明全葉馬蘭總黃酮提取物具有明顯的治療免疫性肝損傷的作用，其作用為首次發(fā)現(xiàn)。
3、急毒試驗(yàn)表面全葉馬蘭總黃酮提取物的毒性低，具有很好的用藥安全性。
4、本發(fā)明提供的提取物制備方法簡單、快捷、重現(xiàn)性好；所選用的溶劑低廉、無毒。
正因?yàn)橐陨蟽?yōu)點(diǎn)，充分說明了該工藝適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很大的實(shí)用性。
四、附圖說明
圖1是小鼠肝臟組織HE染色病理切片。
五、具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：
取全葉馬蘭50kg，用藥材重量16倍的40vt％乙醇溶液提取，90℃熱回流提取3次，每次2h；提取液過濾后于60℃減壓濃縮，60℃真空干燥，獲得粗提物162.539g(全葉馬蘭總黃酮的含量為26.51％)。
實(shí)施例2：
取全葉馬蘭50kg，用藥材重量的16倍的40vt％乙醇溶液提取，90℃熱回流提取3次，每次2h；提取液過濾后，60℃減壓濃縮干燥，獲得粗提物；將粗提物用水溶解后上HPD-300大孔樹脂柱，用兩倍柱體積的蒸餾水洗脫后再用90vt％乙醇溶液洗脫，收集乙醇溶液的洗脫液，回收溶劑后于60℃真空干燥，即得全葉馬蘭總黃酮提取物91.574g(全葉馬蘭總黃酮的含量為56.34％)。
實(shí)施例3：
取實(shí)施例1、2方法制備的提取物400mg和微粉硅膠200mg，過60目篩充分混勻，加入適量硬脂酸鎂混合，干法制粒。過40目篩，灌裝成膠囊劑。
實(shí)施例4：【藥效學(xué)試驗(yàn)】
(一)動物分組、模型建立及給藥方案
將動物按體重隨機(jī)分為6組，分別為正常組、模型組、陽性藥組(聯(lián)苯雙酯，Bifendate,Bif)及全葉馬蘭總黃酮組(TFKT組)，TFKT組又分別分為高、中、低(600、400、200mg·kg-1)劑量組，每組10只，正常飼養(yǎng)5天以適應(yīng)環(huán)境。
第一天給予除正常組外所有組小鼠尾靜脈注射BCG 4mg/0.2mL/只，正常組給予等量的生理鹽水。然后按0.2mL/(體重10g)給Bif組灌胃給藥Bif 150mg·kg-1；TFKT高、中、低組灌胃給藥蒸餾水溶解的TFKT 600、400、200mg·kg-1；正常組、模型組灌胃給予蒸餾水。灌胃給藥持續(xù)十天，其間正常飲水進(jìn)食，末次給藥后，除正常組外組均尾靜脈注射LPS(10μg/0.2mL/只)激發(fā)肝損傷，給藥后禁食16小時(shí)，然后摘眼球取血，頸椎脫臼處死后立即摘取肝臟組織。
(二)指標(biāo)測定
全血靜置45分鐘后1500r·min-1離心10分鐘后取血清，按試劑盒說明書測定血清NO、ALT、AST、T-BiL、AKP含量。
取小鼠肝臟同一部位組織，準(zhǔn)確稱量(約0.3g)，用冰生理鹽水制成10％的肝勻漿液，按說明書測定肝勻漿MDA、SOD、iNOS、GSH-Px含量測定。
取血清，采用ELISA法檢測TNF-α、INF-γ、IL-4即分別向TNF-α、INF-γ和IL-4單抗包被的96孔PVC板每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或待檢樣本100μL，并設(shè)空白對照和標(biāo)準(zhǔn)曲線孔，各試劑稀釋濃度和步驟按試劑盒操作說明進(jìn)行，終止反應(yīng)后即用酶標(biāo)儀均于450nm處測定相應(yīng)的吸光度。
(三)肝臟組織學(xué)檢查
從各組小鼠肝右葉相同部位取約0.5cm×1cm×1cm的肝組織，10％甲醛固定，HE染色，通過光鏡觀察肝組織損傷程度，并進(jìn)行病理組織學(xué)損傷程度分級：0級，未見明顯病理損傷或肝臟有輕微變性，肝細(xì)胞無壞死；1級，肝組織濁腫伴有散在的點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)少許炎性細(xì)胞浸潤，壞死占肝小葉＜1/4；2級，肝組織細(xì)胞濁腫有點(diǎn)狀壞死及小灶性壞死占肝小葉1/4～1/3，肝細(xì)胞間質(zhì)少量充血，匯管區(qū)有較多炎性細(xì)胞浸潤；3級，肝細(xì)胞濁腫，灶狀壞死，1/3＜壞死占肝小葉≤1/2，肝細(xì)胞間質(zhì)少量充血，匯管區(qū)及周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤；4級，肝細(xì)胞渾濁，腫脹，部分肝細(xì)胞破裂，片狀壞死，壞死占肝小葉﹥1/2，匯管區(qū)及周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤。
(四)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0對實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用One-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以表示。
(五)結(jié)果
1、TFKT對ALT、AST的影響
與正常組比較，模型組小鼠血清ALT、AST水平明顯升高；與模型組相比,TFKT各劑量組均能降低ALT水平，但只有TFKT高劑量組對于AST水平值有降低作用，結(jié)果見表1。
表1 TFKT對ALT、AST的影響(n＝10)
“##”表示與正常組比較P<0.01；“**”表示與模型組相比P<0.01，“*”表示與模型組相比P<0.05，下同。
2、TFKT對血清中NO、T-BiL、AKP的影響
與正常組比較，模型組小鼠血清NO、T-BiL、AKP水平明顯升高；與模型組相比，TFKT各劑量組均有降低小鼠血清過高的NO、T-BiL、AKP水平，但對于T-BiL水平值，只有TFKT的中、高劑量組有降低作用，低劑量組無明顯作用，結(jié)果見表2。
表2 TFKT對NO、T-BiL、AKP的影響(n＝10)
3、TFKT對肝臟勻漿中MDA、SOD、iNOS、GSH-Px水平的影響
與正常組比較，模型組小鼠肝臟勻漿MDA、iNOS水平明顯升高，SOD、GSH-Px水平顯著降低；與模型組相比，TFKT各劑量組均能夠降低小鼠肝臟勻漿過高的MDA、iNOS水平，TFKT各劑量組均能一定程度的提升SOD水平，但只有高、中劑量組能升高GSH-Px水平，低劑量組對其無顯著性影響，結(jié)果見表3。
表3 TFKT對MDA、SOD、iNOS、GSH-Px的影響(n＝10)
4、TFKT對TNF-α、INF-γ、IL-4的影響
采用ELISA法檢測血清中的TNF-α、INF-γ、IL-4，發(fā)現(xiàn)TFKT組中的任何劑量組均對TNF-α、INF-γ、IL-4的水平有顯著的影響，結(jié)果見表4。
表4 TFKT對TNF-α、INF-γ、IL-4的影響(n＝10)
5、TFKT對小鼠肝臟組織病理學(xué)變化的影響
HE染色結(jié)果顯示正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，以中央靜脈為中心肝細(xì)胞板呈放射狀排列，胞漿深染，匯管區(qū)無炎性細(xì)胞浸潤；模型組小鼠HE染色切片發(fā)現(xiàn)中央靜脈周圍肝細(xì)胞腫脹變性，部分肝細(xì)胞破裂，間質(zhì)大量充血，匯管區(qū)及周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤，大面積片狀壞死；TFKT的高、中劑量組均能明顯減輕肝細(xì)胞壞死范圍和程度，炎性細(xì)胞浸潤程度也較模型組輕，但低劑量組對肝細(xì)胞的損傷保護(hù)效果不明顯，見圖1。
實(shí)施例5：【急性毒性試驗(yàn)】
本實(shí)驗(yàn)觀察小鼠單次灌服全葉馬蘭總黃酮提取物后，由于吸收所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。結(jié)果表明本發(fā)明提供的全葉馬蘭總黃酮提取物3.1g/kg(相當(dāng)于生藥量31g/kg)灌胃給藥后，14d內(nèi)小鼠均無一死亡，且小鼠的飲食、活動、皮毛色澤、糞便、口、眼、鼻分泌物等無異常，14d后處死小鼠，肉眼觀察其心、肝、肺、腎、胃、腸等內(nèi)臟器官未有異常變化。因此全葉馬蘭總黃酮灌胃給藥的LD50>3.1g/kg.
1、實(shí)驗(yàn)材料
1.1動物
ICR小鼠，清潔級，18-22g，雌雄兼用。
1.2受試藥物
從全葉馬蘭中提取的全葉馬蘭總黃酮提取物(按實(shí)施例1、2工藝方法制備，含量大于50％)
2、實(shí)驗(yàn)方法
ICR小鼠20只，體重18～22g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h。實(shí)驗(yàn)時(shí)給藥組小鼠每只以受試藥物的最大可灌胃濃度(提取物0.13g/mL生藥量1.3g/mL)和小鼠的最大可灌胃容量(0.4mL/10g)一次給予提取物5.2g/kg(相當(dāng)于生藥量52g/kg)，對照組小鼠給予等體積的0.5％的CMC-Na溶液。給藥量已達(dá)最大體積。實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫25±2℃，，觀察14d內(nèi)小鼠的飲食、活動、皮毛、糞便、口、眼、鼻分泌物等反應(yīng)，14d后用頸椎脫臼法處死小鼠，進(jìn)行解剖觀察其心、肝、肺、腎、胃、腸等內(nèi)臟器官。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在急性毒性試驗(yàn)過程中，給藥小鼠均無一死亡，小鼠的飲食、活動、皮毛色澤、糞便、口、眼、鼻分泌物等無異常，14d后處死小鼠，肉眼觀察其心、肝、肺、腎、胃、腸等內(nèi)臟器官未有異常變化。
4、結(jié)論
全葉馬蘭總黃酮提取物灌胃給藥的LD50>3.1g/kg，這個(gè)結(jié)果提示該提取物在用于臨床時(shí)毒性不大，這說明經(jīng)過本發(fā)明制備工藝處理后的樣品明顯無毒。