專利名稱：苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物及其制法和其在制備藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新型苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物及其制備方法，該類化合物能夠抑制白三烯B4(LTB4)的生物合成，可用于制備治療與LTB4有關的炎癥性或過敏性疾病的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這些化合物在制備治療上述疾病的藥物中的應用以及包含上述化合物的藥物組合物。
白三烯(Leukotrienes，LTs)是七十年代末發(fā)現(xiàn)的一類重要的花生四烯酸代謝產(chǎn)物。其中白三烯B4(LTB4)能夠誘導白細胞聚集，改變血管通透性，在很大程度上與心血管、肺、皮膚、腎等的許多類型的炎癥性和過敏性疾病有關，這些疾病包括風濕性關節(jié)炎、痛風、哮喘、局部缺血再灌注損傷、牛皮癬及腸炎。
最近有幾篇綜述文章涉及白三烯B4生物合成抑制劑或白三烯受體拮抗劑，如John A.Salmon，Lawrence G.Garland.的Prog.DrugRes.，1991，379-90.及Clint D.W.Brooks，James B.Summers.的J.Med.Chem.，1996，39(14)2629-2653。
美國專利US4,755,524、US5,132,319、US5,514,702及歐洲專利EP292,977等披露了一系列自三烯B4生物合成抑制劑及白三烯B4受體拮抗劑。
非甾體抗炎藥(Non-steroidal antiinflammatory drugs，NSAIDs)廣泛地用于治療各種急性和慢性炎癥。然而現(xiàn)用的絕大多數(shù)已知NSAIDs均有嚴重的胃腸道刺激作用，會引起消化道潰瘍。前列腺素一方面是重要的炎癥介質，另一方面也是保護消化道粘膜免受消化液損傷的重要保護性因子，因此長期使用NSAIDs不可避免地將導致胃腸道的損傷。另外，甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥選擇性差，副作用也較多。因此通過新的作用環(huán)節(jié)和藥理機制來尋找高效、低毒、副作用小的抗炎藥物是當前抗炎新藥研究的必然趨勢。
在本領域的現(xiàn)有技術中已有一些使用有機硒化合物抑制白三烯B4生物合成的報導。Carl-Magnus Andersson等報道了一類含有取代氨基的二芳基硒醚，該類化合物在體外明顯抑制白三烯B4的生物合成(Free Rad.Bio.Med.，1994，1617-28)。特別是日本第一制藥公司開發(fā)了以依布硒啉(Ebselen)為代表的抗炎、抗氧化藥物
由于Ebselen分子結構中硒原子直接與芳環(huán)相連，在代謝過程中硒原子不會進入硒庫，因而毒性很低(LD50＞6810毫克/千克小鼠)，沒有通常限制有機硒藥物發(fā)展的毒性問題，目前日本第一制藥公司已完成Ebselen的三期臨床研究。
然而迄今報導的有機硒類LTB4生物合成抑制劑或活性不高或水溶性極差，因而限制了其臨床應用。
本發(fā)明的目的是提供一類新型苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物，該類衍生物在抑制LTB4生物合成方面具有高活性并且具有很好的水溶性，適用于制備治療與LTB4有關的炎癥性或過敏性疾病的藥物組合物。
本發(fā)明涉及一類新型苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物，其通式如下
其中R1為H或1-5碳烷基，R2、R3可相同或不同，選自H、鹵素、1-5碳烷基及1-5碳烷氧基，R4選自H、鹵素、硝基、羥基、乙酰基、1-5碳烷基及1-5碳烷氧基。
本發(fā)明中鹵素是指氟、氯、溴、碘；烷基可以是直鏈烷基或支鏈烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基。
本發(fā)明優(yōu)選具有通式(1)的下列代表性化合物N-(4-氟苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(4-甲氧苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(3-氟苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(2-甲基苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-甲基-N-苯基-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮本發(fā)明的通式(1)化合物可以通過如下酰化關環(huán)反應制備
其中，原料2-氯硒基苯甲酰氯的合成參見文獻Bull.Chem.Soc.Jpn.，186，592179-2183。
原料4-氨基苯磺酰苯胺(2)的合成參見文獻J.Am.Chem.Soc.，1940，62372-374。
本發(fā)明的通式(1)的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物是通過將上述兩種原料在有機溶劑或有機溶劑/水混合體系中在一種作為縛酸劑的堿的存在下，經(jīng)?；P環(huán)反應獲得的。
在本發(fā)明的一個實施方案中，將上述兩種原料在有機溶劑如苯、甲苯、乙醚、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氧六環(huán)、乙腈、DMF或DMSO中，以有機堿如三乙胺、吡啶或六氫吡啶為縛酸劑，經(jīng)?；P環(huán)反應，獲得通式(1)的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，將上述兩種原料在乙醚及水混合體系中，以無機堿如NaHCO3、Na2CO3或NaOH為縛酸劑，經(jīng)?；P環(huán)反應，獲得通式(1)的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物。
本發(fā)明的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物可以抑制LTB4的生物合成，這種性能使其能夠被用于控制哺乳動物體內由花生四烯酸之內源代謝產(chǎn)物LTB4所誘發(fā)的病癥。由此上述苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物可以用來制備一種藥物組合物，該藥物組合物能有效地防止和治療與LTB4有關的疾病。這些疾病包括風濕性關節(jié)炎、痛風、哮喘、局部缺血再灌注損傷、牛皮癬及腸炎。
本發(fā)明的藥物組合物包括藥物載體或賦形劑和一定量的通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物。組合物中含有足以能抑制LTB4的作用的化合物(1)。
當藥物組合物以溶液或懸浮液的形式使用時，合適的藥物載體或賦形劑包括對于含水體系可以是水，對于非含水體系可以是乙醇、甘油、丙二醇、玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、液體石蠟和它們與水的混合物；對于固體形式的藥物組合物，合適的藥物載體或賦形劑可以是結晶纖維素、淀粉、乳糖醇；對于氣溶膠形式的藥物組合物，合適的藥物載體可以是一氯二氟甲烷、氯代三氟乙烷和壓縮的二氧化碳。所述的藥物組合物還包括結合劑，例如羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂和滑石等；崩解劑，例如羧甲基纖維素鈣等。此外，本發(fā)明的藥物組合物中還可包括其它的組分如穩(wěn)定劑、抗氧化劑、粘性調節(jié)劑等，只要這些附加的組分對于本發(fā)明化合物的治療作用不會具有有害的影響即可。
本發(fā)明的化合物的給藥途徑例如可非經(jīng)口用藥或經(jīng)口用藥。非經(jīng)口用藥劑型可以是例如注射劑、栓劑、乳劑、軟膏、擦劑、洗劑、糊狀物和滴劑等中的一種劑型。經(jīng)口用藥劑型可以是例如片劑、顆粒劑、膠囊、糖漿、懸浮劑等中的一種劑型。
通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物在使用時，都是以非毒性的、但是能抑制主要由LTB4引起的疾病的劑量包含在組合物中施用的。所用的組合物的劑量為每次給藥10毫克-500毫克活性組分，可每天分1-4次給藥。給藥劑量可根據(jù)患者年齡、體重和癥狀作適當?shù)脑鰷p。
下述實施例旨在進一步闡述本發(fā)明。但應明確的是，本發(fā)明并不限于下面詳述的范圍。
實施例1N-(4-氟苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮將2.66克(10毫摩爾)N-(4-氟苯基)-4-氨基苯磺酰胺懸浮于150毫升乙醚之中，加入1.68克(20毫摩爾)NaHCO3的50毫升水溶液，冰水浴下45分鐘內緩慢加入2.54克(10毫摩爾)2-氯硒基苯甲酰氯的150毫升乙醚溶液。室溫下繼續(xù)攪拌反應4小時，過濾，用水和乙醚充分洗滌，干燥得粗品，經(jīng)95％乙醇重結晶得白色粉末狀固體3.09克，收率69.1％，mp221-224℃。
MS m/z(％)448(M+，100)，337(39)，184(71)，156(27)。
實施例2N-(4-甲氧苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮按照實施例1相似方法，以2.78克(10毫摩爾)N-(4-甲氧苯基)-4-氨基苯磺酰胺為原料，用二氧六環(huán)和水重結晶，得2.92克淺黃色晶體，收率63.7％，mp225.5-227.5℃。
MS m/z(％)460(M+，10)，337(15)，184(57)，156(39)，61(100)。
實施例3N-(3-氯苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮按照實施例1相似方法，以2.82克(10毫摩爾)N-(3-氨苯基)-4-氨基苯磺酰胺為原料，用無水乙醇重結晶，得3.54克淺黃色粒狀晶體，收率76.4％，mp212-214℃。
MS m/z(％)464(M+，74)，400(10)，338(51)，274(100)，194(95)，184(59)，156(35)。
實施例4N-(2-甲基苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮按照實施例1相似方法，以2.62克(10毫摩爾)N-(2-甲基苯基)-4-氨基苯磺酰胺為原料，無水乙醇重結晶，得2.64克白色針狀晶體，收率59.7％，mp223-225℃。
MS m/z(％)444(M+，41)，380(11)，338(19)，184(31)，156(15)，106(100)。
實施例5N-甲基-N-苯基-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮按照實施例1相似方法，以2.62克(10毫摩爾)N-甲基-4-氨基苯磺酰苯胺為原料，無水乙醇重結晶，得2.54克淺黃色固體，收率57.3％，mp216-218℃。
MS m/z(％)444(M+，44)，380(94)，338(25)，274(100)，194(77)，184(46)，156(23)，106(59)。
本發(fā)明的化合物可抑制LTB4的生物合成。這種抑制作用已借助上述化合物對大鼠胸腔炎性白細胞在鈣離子載體A23187誘發(fā)下的LTB4生物合成的影響的實驗而證實。
對本發(fā)明的化合物還進行了下列應用測試(a)測定通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對fMLPP誘發(fā)的白細胞趨化作用的影響；(b)測定通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫脹的影響；(c)測定通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對二硝基氟苯(DNFB)誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響；(d)測定通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對巴豆油誘導髓過氧化物酶(MPO)的影響；(e)測定通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對二硝基氟苯誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應中髓過氧化物酶(MPO)活性的影響。
上述測試可以證明，與現(xiàn)有技術的依布硒啉相比，本發(fā)明化合物的水溶性及作為LTB4的生物合成抑制劑的活性都有很大提高。具體參見下列實驗例實驗例1苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物對LTB4生物合成的影響取角叉菜膠誘導的大鼠胸腔中性粒細胞，懸浮于無Ca2+，無Mg2+的Dulbecco”s緩沖液中，濃度為1.1×107細胞/毫升。取細胞懸液0.9毫升，加入待測化合物，37℃溫孵10分鐘，依次加入A23187(終濃度10-6摩爾/升)，花生四烯酸(終濃度10-5摩爾/升)，CaCl2(終濃度5×10-4摩爾/升)，MgCl2(終濃度5×10-4摩爾/升)。37℃溫孵5分鐘，加入無水乙醇2毫升終止反應，加入前列腺素B220納克。離心，取上層清液，經(jīng)Sep-Pak色譜柱提取白三烯B4，用乙酸乙酯洗脫，N2吹干，甲醇復溶，用HPLC分析，280nm檢測。結果如下化合物 抑制率(％) IC505×10-71×10-65×10-61×10-5(μm)Ebselen 9±9氨苯磺胺 2±3實施例1 104196 100 4.21實施例2 0 3 61 100 6.27x±s，n＝2上述結果表明，實施例1及實施例2的化合物可明顯抑制由A23187誘發(fā)的LTB4生物合成，其活性大大高于現(xiàn)有技術依布硒啉及氨苯磺胺。此外，測試結果還說明本發(fā)明的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物并不是現(xiàn)有技術的苯并異硒唑酮與磺酰胺的簡單加合，而是一類新型的、高活性的LTB4生物合成抑制劑。
實驗例2兔血中性粒細胞趨化實驗從兔血中分離中性粒細胞，采用Boyden chamber法上下兩個室，趨化劑(fMLPP 5×10-10摩爾/升)在下室，細胞在上室(濃度3×106個/毫升)。兩室由濾膜隔開(濾膜孔徑3.0μm，φ13毫米)，在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時，除去螺帽和濾膜，將濾膜染色，計數(shù)下室膜上的細胞數(shù)。結果如下化合物抑制率(％) IC5010-1010-910-810-710-610-5(摩爾/升)實施例1 44555987 82 92 1.2×10-10實施例2 40554770 86 85 1.3×10-8上述結果說明，實施例1及實施例2的化合物均可抑制由fMLPP誘發(fā)的中性粒細胞的趨化作用。
實驗例3巴豆油引起小鼠耳腫脹實驗(I型變態(tài)反應)將昆明小鼠隨機分組，每組10只，用待測化合物外涂給藥(1毫克/只)，30分鐘后，向小鼠左耳涂2％巴豆油，4小時后敲下左右耳片，直徑(8毫米)，稱重。結果如下化合物抑制率(％) 顯著性實施例1 80 **(P＜0.01)實施例2 36不顯著由上述結果可見，實施例1的化合物可顯著抑制由巴豆油引起的小鼠耳腫脹。
實驗例4二硝基氟苯(dinitrofluro benzene，DNFB)誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應實驗取ICR小鼠，隨機分組，每組10只。每天皮下給藥(50毫克/千克/天)。每只小鼠腹部去毛，將1％DNFB溶液50微升均勻涂抹其上，第二天加強一次。5天后，將1％DNFB溶液10微升均勻涂抹于小鼠左耳。24小時后，剪下左右耳殼，用打孔器敲下直徑為8毫米的耳片，稱重。結果如下化合物 抑制率(％) 顯著性實施例1 4不顯著實施例2 46 **(P＜0.01)由上述結果可見，實施例2的化合物可顯著抑制由二硝基氟苯誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應。
實驗例5巴豆油誘導髓過氧化物酶(MPO)實驗將昆明小鼠隨機分組，每組10只，用待測化合物外涂給藥(1毫克/只)，30分鐘后，向小鼠左耳涂2％巴豆油，4小時后敲下左右耳片，直徑(8毫米)，稱重。取一定重量耳片，用剪刀剪碎，加入2毫升磷酸緩沖液(pH6.0)，高速勻漿15秒，低溫冷凍高速離心15分鐘，棄去上清。按50毫克組織/毫升加入含0.5％十六烷基三甲基溴化銨的磷酸緩沖液，高速勻漿30秒，低溫冷凍高速離心15分鐘。取上清0.1毫升加至2.9毫升含0.001％過氧化氫和16.7克/升鄰二甲基聯(lián)苯胺的顯色液中，在460nm處測定3分鐘。結果如下化合物 抑制率(％)實施例1 77實施例2 137上述結果表明，實施例1和實施例2的化合物均可抑制巴豆油誘導的髓過氧化物酶的活性。
實驗例6二硝基氟苯誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應中髓過氧化物酶(MPO)活性實驗取ICR小鼠，隨機分組，每組10只。每天皮下給藥(50毫克/千克/天)。每只小鼠腹部去毛，將1％DNFB溶液50微升均勻涂抹其上，第二天加強一次。5天后，將1％DNFB溶液10微升均勻涂抹于小鼠左耳。24小時后，剪下左右耳殼，用打孔器敲下直徑為8毫米的耳片，稱重。取一定重量耳片，用剪刀剪碎，加入2毫升磷酸緩沖液(pH6.0)，高速勻漿15秒，低溫冷凍高速離心15分鐘，棄去上清。按50毫克組織/毫升加入含0.5％十六烷基三甲基溴化銨的磷酸緩沖液，高速勻漿30秒，低溫冷凍高速離心15分鐘。取上清0.1毫升加至2.9毫升含0.001％過氧化氫和16.7克/升鄰二甲基聯(lián)苯胺的顯色液中，在460nm處測定3分鐘。結果如下化合物 抑制率(％)實施例1 81實施例2-19上述結果表明，實施例1化合物可明顯抑制由二硝基氟苯誘導的小屬遲發(fā)型變態(tài)反應中髓過氧化物酶的活性。
權利要求
1.通式(1)的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物，
其中R1為H或1-5碳烷基，R2、R3可相同或不同，選自H、鹵素、1-5碳烷基及1-5碳烷氧基，R4選自H、鹵素、硝基、羥基、乙?；?、1-5碳烷基及1-5碳烷氧基。
2.如權利要求1的通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物，包括N-(4-氟苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(4-甲氧苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(3-氟苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-(2-甲基苯基)-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮N-甲基-N-苯基-2-(4-氨磺酰苯基)-1，2-苯并異硒唑-3(2H)-酮
3.權利要求1的通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物的制備方法，其特征在于以2-氯硒基苯甲酰氯及通式(2)表示的4-氨基苯磺酰苯胺為原料，
在有機溶劑或有機溶劑/水混合體系中在一種作為縛酸劑的堿的存在下，經(jīng)關環(huán)縮合反應，獲得通式(1)苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑包括苯、甲苯、乙醚、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氧六環(huán)、乙腈、DMF或DMSO；所述的作為縛酸劑的堿包括三乙胺、吡啶或六氫吡啶。
5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑/水混合體系為乙醚及水的混合體系；所述的作為縛酸劑的堿包括NaHCO3、Na2CO3或NaOH。
6.權利要求1的通式(1)表示的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物在制備治療與白三烯B4有關的疾病，包括風濕性關節(jié)炎、痛風、哮喘、局部缺血再灌注損傷、牛皮癬及腸炎的藥物組合物中的應用。
7.含有至少一種權利要求1的通式(1)表示的苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物的藥物組合物。
8.根據(jù)權利要求7的藥物組合物，其形式適于通過口服給藥、吸入給藥、腸外給藥、注射給藥及局部給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及苯并異硒唑酮磺酰胺衍生物以及制備這些化合物的方法。本發(fā)明的化合物能夠抑制白三烯B4的生物合成,可用于制備治療與白三烯B4有關的炎癥性及過敏性疾病的藥物組合物。
文檔編號A61K31/635GK1253135SQ9812448
公開日2000年5月17日 申請日期1998年11月11日 優(yōu)先權日1998年11月11日
發(fā)明者郭宗儒, 程桂芳, 褚鳳鳴 申請人:中國醫(yī)學科學院藥物研究所