專利名稱：抑制細胞因子產(chǎn)生的抑制劑和抑制細胞粘著的抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑制細胞因子產(chǎn)生的抑制劑和一種抑制細胞粘著的抑制劑。
發(fā)現(xiàn)許多細胞因子是抑制人體生理活性表達的蛋白因子，它們的結(jié)構(gòu)和功能正逐漸為人們所了解，所述生理活性的表達例如是免疫應(yīng)答、炎癥、血細胞生成以及類似現(xiàn)象。因此很顯然，細胞因子不僅影響人體免疫系統(tǒng)，而且影響人體其它多種生理活性，甚至與人體的發(fā)育、分化、自身穩(wěn)定以及疾病密切相關(guān)。
人們業(yè)已識別出許多的細胞因子，例如TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ以及類似細胞因子。并且已知它們還具有多種的藥理學活性。
在上述細胞因子中，TNF-α(腫瘤壞死因子-α)被認為是一種抗腫瘤的細胞因子，人們期望將它用作抗癌劑。但隨后卻發(fā)現(xiàn)，TNF-α是與惡液質(zhì)素(一種惡病質(zhì)誘導物)相同的物質(zhì)，而且據(jù)報導，它具有例如刺激IL-1以及其它細胞因子產(chǎn)生的活性、成纖維細胞增殖活性、內(nèi)毒素性休克誘發(fā)活性、增加ICAM-1、ICAM-2(胞間粘附分子)、ELAM(內(nèi)皮細胞-白細胞粘附分子-1)等分子(這些分子是使白細胞粘著在內(nèi)皮細胞上的蛋白質(zhì))以致使白細胞加速粘附在內(nèi)皮細胞上的活性，以及關(guān)節(jié)炎誘發(fā)活性，例如骨吸收、軟骨破壞或類似所作用[Beutler,B.等人，自然(Nature),316,552-554(1985)；Peetre,C.等人，臨床研究雜志(J.Clin.Invest.),78,1694-1700(1986)；Kurt-Jones,E.A.，等人，免疫學雜志(J.Immunol.),139,2317-2324(1987)；Bevilacqua,M.P.等人，科學(Science),241,1160-1165(1989)；Akatu,K.& Suda,T.，醫(yī)學實踐(Medical Practice),8(9)1393-1396(1991)]。
另據(jù)報導，血液或腦脊液內(nèi)的TNF濃度在細菌或寄生蟲感染性的疾病中呈現(xiàn)為增高[Mitsuyama,M.，臨床和實驗醫(yī)學雜志(Journalof Clinical and Experimental Medicine)(IGAKU NO AYUMI),159(8)467-470(10991)；Nakao,M.，臨床和實驗醫(yī)學雜志(IGKU NOAYUMI),159(8)467-470(1991)；Nakao,M.，臨床和實驗醫(yī)學雜志(IGKU NO AYUMI)159(8)[471-474(1991)]。
也有報導說，在慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎的滑液或血清內(nèi)發(fā)現(xiàn)了TNF的活性，并且這種活性是TNF-α活性[Saxne,T.等人，類風濕性關(guān)節(jié)炎(Arthritis Rheum.),31,1041(1988)；Chu,C.Q.等人，類風濕性關(guān)節(jié)炎，34,1125-1132(1991)；Macnaul,K.L.等人，免疫學雜志，145,4154-4166(1990)；Brennan,F.M.等人，免疫學雜志，22,1907-1912(1992)；Brennan,F.M.等人，英國類風濕病雜志(Bri.J.Rheum),31,293-298(1992)]。
也有報導說，ARDS(急性呼吸窘迫綜合征)患者唾液內(nèi)的TNF濃度很高，而ARDS是一種嚴重的呼吸病[Millar,A.B.等人，自然，324,73(1986)]，而且據(jù)稱，TNF與暴發(fā)型病毒性肝炎有關(guān)[Muto,Y.等人，柳葉刀(Lancet),ii,72-74(1986)]。
也有報導說，心肌缺血(例如急性心肌梗塞)時，血液內(nèi)的TNF-α濃度較高[Latini,R.等人，心血管藥理學雜志(J.Cardiovasc.Pharmacol.),23,1-6(1994)]。人們認為TNF-α與這種疾病有關(guān)聯(lián)[Lefer,A.M.等人，科學，249,61-64(1990)]。近期有報導說，TNF-α可以抑制心肌收縮性[Finkel,M.S.等人，科學，257,387-389(1992)；Pagani,D.F.等人，臨床研究雜志，90,389-398(1992)]。
目前還沒有開發(fā)出令人滿意的化學療法來治療上述多種疾病，例如慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素性休克、ARDS以及類似的疾病。癥狀療法中只用甾類藥物、抗炎劑、血小板凝集抑制劑、抗生素等治療此類疾病。鑒于上文所闡明的這些疾病與TNF-α濃度或活性增高之間所存在的密切聯(lián)系，現(xiàn)已有將TNF-α抗體或類似物應(yīng)用于此類疾病的嘗試；但是，這種途徑仍未獲得滿意的結(jié)果。因此，該領(lǐng)域的技術(shù)人員期望能夠研制出那些通過新的機制來抑制特別是TNF-α的過度產(chǎn)生從而治療上述疾病的藥物。
B細胞可以被抗原激活，并可增殖和分化成為抗體生產(chǎn)細胞。已知IL-6是參與這種分化作用的細胞因子。
顯然，IL-6不僅在B細胞的抗體生產(chǎn)中起重要作用，而且還能誘發(fā)T細胞的增殖與分化。此外，IL-6作用于肝臟細胞而誘導急性期中的蛋白質(zhì)合成，作用于造血細胞而促進多能集落的形成，并且，IL-6是生物防御系統(tǒng)，例如免疫系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟等中的重要因子。
作為與IL-6有關(guān)的疾病，可以提及的是一系列的自身免疫疾病，例如高-γ-球蛋白血癥、慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)以及類似疾病；單克隆B細胞異常疾病(例如骨髓瘤)；多克隆白細胞異常疾??；心房粘液瘤；Castleman氏綜合征；原發(fā)型腎小球腎炎；腎小球系膜增生型腎炎；癌性惡病質(zhì)；Lennander淋巴瘤；牛皮癬；AIDS中出現(xiàn)的卡波西肉瘤；絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松；等等。
已知IL-1β具有多種生理學活性。這些活性的具體實例為抑制腫瘤細胞；促進活化的T細胞產(chǎn)生細胞因子；增殖成纖維細胞、滑膜細胞和血管內(nèi)皮；細胞的分解代謝和促體溫上升作用；使活化的B細胞分化；增強NK活性；粘著嗜中性粒細胞；抗炎作用；抑制放射性疾?。坏鹊?。
當以加快的速率產(chǎn)生IL-1β并使其過量時，IL-1β會引起許多疾病，例如慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性炎癥以及類似疾病。
已知IFN具有多種生理學作用，實際上，在許多疾病中都可以在組織和血液內(nèi)檢測出IFN。其發(fā)作與IFN密切相關(guān)的疾病包括病毒性傳染病、由病毒以外的微生物引起的傳染病、慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎、膠原性疾病(例如SLE)、I型變態(tài)反應(yīng)、眼色素層炎、貝切赫特病、肉樣瘤病、動脈硬化、糖尿病、暴發(fā)型肝炎、惡性瘤、川崎病、皮膚或粘膜創(chuàng)傷等(臨床和實驗醫(yī)學雜志(IGAKU NO AYUMI),174(14),p.1077,1995)。
嗜中性粒細胞對進入人體的外來物表現(xiàn)出殺菌作用，這種作用通過遷移、吞噬作用、產(chǎn)生活化氧以及釋放溶酶體酶類來實現(xiàn)。然而人們發(fā)現(xiàn)，嗜中性粒細胞可粘著于血管內(nèi)皮細胞上，并在局部缺血、再灌注或多種組織急性炎癥的過程中浸潤到組織的內(nèi)部，從而導致組織功能的紊亂。
如上所述，已知許多細胞因子在過度時將引起多種疾病，這種過度歸因于，例如它的異常高產(chǎn)。因此，人們希望能夠改善細胞因子的異常狀態(tài)，從而達到對多種疾病的預防或治療。
另外，人們還期望開發(fā)出一種試劑，用它來抑制由于嗜中性粒細胞粘著于血管內(nèi)皮細胞上而引起的組織功能紊亂。
有些如下通式(1)所示的噻唑衍生物
{其中R1為苯基，該苯基的苯環(huán)上可以帶有作為取代基的低級烷氧基；而且R2為下面通式所示的基團 ，或者是含有1至2個雜原子的雜環(huán)殘基，所述雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子，該雜環(huán)殘基可以在其雜環(huán)上帶有1至3個取代基，所述取代基選自羧基和低級烷氧基}及其鹽業(yè)已被公開，例如，JP-A-5-51318和JP-A-6-65222。這些噻唑衍生物及其鹽也是眾所周知的可以作為活化氧抑制劑。
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制細胞因子的異常高產(chǎn)或嗜中性粒細胞在血管內(nèi)皮細胞上粘著的抑制劑，即細胞因子產(chǎn)生抑制劑或細胞粘著抑制劑，它能夠滿足本領(lǐng)域的要求。
本發(fā)明人對上式(1)所示的噻唑衍生物及其鹽的藥理學作用作了進一步研究。結(jié)果本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，這些噻唑衍生物及其鹽可以用作細胞因子產(chǎn)生的抑制劑或細胞粘著的抑制劑，兩者都與本發(fā)明的上述目的相吻合。本發(fā)明的完成就是基于這些發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明提供一種抑制細胞因子產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑含有至少一種選自由式(1)所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物作為活性組分。
本發(fā)明還提供一種抑制細胞粘著的抑制劑，該抑制劑含有至少一種選自由式(1)所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物作為活性組分。
本發(fā)明還提供一種抑制TNF-α產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑含有至少一種選自由式(1)所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物作為活性組分。
在式(1)所示的噻唑衍生物中，優(yōu)選6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-羧酸。
如上所述，JP-A-5-51318和JP-A-6-65222中描述了某些式(1)的噻唑衍生物及其鹽和它們的制備方法，而且還知道這些噻唑衍生物可用作活性氧的抑制劑。但同時，本發(fā)明的對細胞因子產(chǎn)生或細胞粘著的抑制作用與上述的噻唑衍生物對活性氧的抑制作用毫無關(guān)聯(lián)，并且無法從這種活性氧抑制作用預測。
本發(fā)明所述細胞因子產(chǎn)生或細胞粘著的抑制劑適用于多種與細胞因子，特別是TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的異常高產(chǎn)或者與粘著增加有關(guān)的疾病。這樣的抑制劑可以適用作預防性藥物或治療劑，特別是用于慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎；內(nèi)毒素性休克；由吸入胃內(nèi)容物、毒氣、膿毒癥等引起的ARDS；燒傷；哮喘；心肌缺血中的心肌梗塞；處于急性期的病毒性心肌炎；慢性心力衰竭(例如特發(fā)型擴張型心肌病)；等等。本發(fā)明抑制劑還適合作為預防或治療性試劑，應(yīng)用于冠狀動脈旁路移植(CABG)時或人工心肺裝置使用時引起的局部缺血-再灌注損傷；由全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)轉(zhuǎn)向器官衰竭(例如嚴重的急性胰腺炎、彌散型血管內(nèi)凝血(DIC))；由肝切除術(shù)(例如切除肝癌)后的肝功能不全或急性胰腺炎所引起的多發(fā)性器官衰竭；嚴重的急性胰腺炎；炎癥性腸病，例如潰瘍性結(jié)腸炎、局限性回腸炎等；一系列的自身免疫疾病，例如高-γ-球蛋白血癥、慢性類風濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡(SLE)、多發(fā)性硬化癥等；轉(zhuǎn)移的癌癥；移植中的排異；單克隆B細胞異常性疾病(例如骨髓瘤)；心房粘液瘤；Castleman綜合征；原發(fā)型腎小球腎炎；腎小球系膜增生型腎小球腎炎；癌性惡病質(zhì)；Lennander淋巴瘤；牛皮癬；特應(yīng)性皮炎；AIDS中出現(xiàn)的卡波西肉瘤；絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松；糖尿病；膿毒癥；動脈硬化；以及炎癥性疾病(例如脈管炎和肝炎)。
下列文獻涉及到用本發(fā)明的細胞因子產(chǎn)生抑制劑或細胞粘著抑制劑可以有效治療的疾病。(1)有關(guān)移植的文獻(a)Kojima,Y.等人，(1993)，心血管外科(Cardiovasc,Surg.),1,577-582(b)Yamataka,T等人，(1993)兒科外科雜志(J.Pediatr.Surg.),28,1451-1457(c)Stepkowshi,S.M.等人，(1994)免疫學雜志(J.Immunol.),153,5336-5346(2)有關(guān)哮喘的文獻(a)Ohkawara,Y等人，(1995)美國呼吸細胞分子生物學雜志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol),12,4-12(b)Chihara,J等人，(1995)免疫學通訊(Immunol.
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(c)Cannella,B.和Raine,C.S.,(1995)神經(jīng)學紀事(Ann.
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通式(1)中使用的各基團的具體例子如下所述。
可在苯環(huán)上帶有低級烷氧基作為取代基的苯基包括那些苯環(huán)上可帶有1至3個含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基的苯基，它們例如是苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-乙氧基苯基、3-乙氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-戊氧基苯基、4-己氧基苯基、3,4-二甲氧基苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基、2,3-二甲氧基苯基、3,4-二乙氧基苯基、2,5-二甲氧基苯基、2,6-二甲氧基苯基、3-丙氧基-4-甲氧基苯基、3,5-二甲氧基苯基、3,4-二戊氧基苯基、3,4,5-三甲氧基苯基、3-甲氧基-4-乙氧基苯基等。
低級烷基包括含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基等。
低級烷氧基包括含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
低級鏈烯基包括含有2至6個碳原子的直鏈或支鏈烯基，例如乙烯基、烯丙基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲代烯丙基、2-戊烯基、2-己烯基等。
-(A)1-NR4R5所示基團(A為低級亞烷基；R4和R5可以相同或不同并且各自是氫原子或低級烷基；且l為0或1)包括由-(A)1-NR4R5所代表的那些基團(A為含有1至6個碳原子的亞烷基；R4和R5可以相同或不同并且各自為氫原子或含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；且l為0或1)，例如氨基、甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、異丙基氨基、叔丁基氨基、丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲基乙基氨基、甲基丙基氨基、氨甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、6-氨基己基、1,1-二甲基-2-氨基乙基、2-甲基-3-氨基丙基、甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、丙基氨基甲基、丁基氨基甲基、戊基氨基甲基、己基氨基甲基、二甲基氨基甲基、2-二甲基氨基乙基等。
羥基取代的低級烷基包括帶1至3個羥基的含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如，羥甲基、2-羥乙基、1-羥乙基、1,2-二羥基乙基、3-羥丙基、2,3-二羥丙基、4-羥丁基、1,1-二甲基-2-羥乙基、5,5,4-三羥基戊基、5-羥戊基、6-羥己基、1-羥基異丙基、2-甲基-3-羥丙基等。
由低級烷氧基取代的低級烷氧基包括其烷氧基部分各自為含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基的烷氧基烷氧基，例如，甲氧基甲氧基、3-甲氧基丙氧基、乙氧基甲氧基、4-乙氧基丁氧基、6-丙氧基己氧基、5-異丙氧基戊氧基、1,1-二甲基-2-丁氧基乙氧基、2-甲基-3-叔丁氧基丙氧基、2-戊氧基乙氧基、己氧基甲氧基等。
可例舉的低級烷氧基羰基是含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基羰基，例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基、己氧基羰基等。
由低級烷氧基取代的低級烷氧基羰基包括其烷氧基部分各自為含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基的烷氧基取代的烷氧基羰基，例如，甲氧基甲氧基羰基、3-甲氧基丙氧基羰基、乙氧基甲氧基羰基、4-乙氧基丁氧基羰基、6-丙氧基己氧基羰基、5-異丙氧基戊氧基羰基、1,1-二甲基-2-丁氧基-乙氧基羰基、2-甲基-3-叔丁氧基丙氧基羰基、2-戊氧基乙氧基羰基、己氧基甲氧基羰基等。
由羧基取代的低級烷氧基包括其烷氧基部分為含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基的羧基取代的烷氧基，例如，羧基甲氧基、2-羧基乙氧基、1-羧基乙氧基、3-羧基丙氧基、4-羧基丁氧基、5-羧基戊氧基、6-羧基己氧基、1,1-二甲基-2-羧基乙氧基、2-甲基-3-羧基丙氧基等。
含有1至2個雜原子并且雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子的雜環(huán)殘基包括例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉代、吡啶基、1,2,5,6-四氫吡啶基、噻吩基、喹啉基、1,4-二氫喹啉基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡咯基、喹諾酮、3,4-二氫喹諾酮、1,2,3,4-四氫喹啉基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、咪唑烷基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基(phthaladinyl)、咔唑基、吖啶基、苯并二氫吡喃基、異二氫吲哚基、異苯并二氫吡喃基、吡唑基、咪唑基、吡唑烷基、吩噻嗪基、苯并呋喃基、2,3-二氫[b]呋喃基、苯并噻吩基、吩噁噻吩基、吩噁嗪基、4H-色烯基、1H-吲唑基、吩嗪基、咕噸基、噻蒽基、2-咪唑啉基、2-吡咯啉基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡喃基、2-吡唑啉基、奎寧環(huán)基、1,4-苯并噁嗪基、3,4-二氫-2H-1,4-苯并噁嗪基、3,4-二氫-2H-1,4-苯并噻嗪基、1,4-苯并噻嗪基、1,2,3,4-四氫喹喔啉基、1,3-二噻-2,4-二氫萘基、菲啶基和1,4-二噻萘基。
含有1至2個雜原子(該雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子)并帶有1-3個基團(選自羧基和低級烷氧基)的雜環(huán)殘基包括例如4-羧基-2-呋喃基、5-羧基-2-呋喃基、4-羧基-2-吡啶基、6-羧基-2-吡啶基、4-甲氧基-5-羧基-2-苯硫基、4-羧基-2-噻唑基、2-羧基-4-吡啶基和4-羧基-2-嘧啶基。
在通式(1)所示的噻唑衍生物中，那些帶有堿性基團的化合物輕易地與常規(guī)的藥理上可接受的酸反應(yīng)形成相應(yīng)的鹽。可例舉的此類酸是無機酸，例如硫酸、硝酸、鹽酸、磷酸、氫溴酸等；和有機酸，例如醋酸、對甲苯磺酸、乙磺酸、草酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、苯甲酸等。
在通式(1)所示的噻唑衍生物中，那些帶有酸性基團的化合物容易和常規(guī)的藥理可接受堿性化合物反應(yīng)形成相應(yīng)的鹽。這些堿性化合物包括例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸鈉和碳酸氫鉀。
不用說，本發(fā)明化合物包括旋光異構(gòu)體。
通常，每種通式(1)化合物通常都以常規(guī)藥物制劑的形式來使用。通過采用常用稀釋劑或賦形劑，例如填充劑、增量劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑等制備所述藥物制劑。藥物制劑可被制成為多種形式，而這取決于藥物的目的，典型的劑型則包括片劑、丸劑、粉劑、溶液、懸浮劑、乳劑、粒劑、膠囊、栓劑、注射劑(例如溶液或懸浮液)等。在片劑的制備中，可以采用該技術(shù)領(lǐng)域已知的多種載體。所述載體的例子有賦形劑，例如乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、脲、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素、硅酸等；粘合劑，例如水、乙醇、丙醇、凈糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干淀粉、藻酸鈉、粉狀瓊脂、粉狀海帶多糖、碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、十二烷基硫酸鈉、單硬脂酸甘油酯、淀粉、乳糖等；崩解抑制劑，例如白糖、硬脂精、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；濕潤劑，例如甘油、淀粉等；吸附劑，例如淀粉、乳糖、高嶺土、皂土、膠體硅酸等；和潤滑劑，例如精細滑石、硬脂酸鹽、硼酸粉末、聚乙二醇等。若需要，所述片劑可以被制成常規(guī)的包衣片劑形式，例如糖衣片劑、明膠包衣的片劑、腸溶衣片劑或薄膜衣片劑，或者是雙層片劑或多層片劑。在丸劑的制備中，可以采用多種本領(lǐng)域已知的載體。載體的例子有賦形劑，例如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高嶺土、滑石等；粘合劑，例如粉狀阿拉伯膠、粉狀黃耆膠、明膠、乙醇等；和崩解劑，例如海帶多糖、瓊脂等。在制備栓劑時，可以采用多種本領(lǐng)域已知的載體。可例舉的載體有聚乙二醇、可可酯、高級醇、高級醇酯、明膠及半合成甘油酯。膠囊是按照常規(guī)方法、通過將上述活性組分與所述多種載體混合并將所得混合物填充到硬明膠膠囊、軟明膠膠囊或類似物中而制得。在注射劑(溶液、乳液或懸浮液)的制備中，需進行滅菌，并且優(yōu)選它等滲于血液。在溶液、乳液或懸浮液的制備中，可以采用該領(lǐng)域的所有常用稀釋劑，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧異硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。在這種情況下，注射劑可以含有足夠量的氯化鈉、葡萄糖或甘油以使注射劑等滲，進而還可以含有增溶助劑、緩沖溶液、安撫劑等，所有這些都是常規(guī)使用的。所述藥物制劑可根據(jù)需要進一步地含有著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑和其它藥物。
本發(fā)明藥物制劑中，活性組分化合物的含量并無特定限制，并且可以在較寬的范圍內(nèi)對其作適當選擇，但是，其在藥物制劑中的一般預期量為約1-70％。
本發(fā)明藥物制劑的給藥方法也無特殊限制。給藥方式的選擇取決于劑型、患者的年齡、性別及其它狀況、患者的疾病癥狀等。例如，口服片劑、丸劑、溶液、懸浮劑、乳劑、粒劑或膠囊。注射劑被單獨地或者與葡萄糖、氨基酸等常見輔助液混合在一起靜脈內(nèi)給藥；或者，若需要，可以是肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)單獨給藥。栓劑是直腸內(nèi)給藥。
應(yīng)根據(jù)給藥方式、患者年齡、性別以及其它狀況、患者的疾病癥狀等因素適當選擇本發(fā)明藥物制劑的劑量，但是通常，就活性組分(即通式(1)化合物或其鹽)的量而言，所需劑量為約0.2-200mg/kg體重/天。
實施例下文將通過參考例、實施例、藥理學實驗和制劑例來具體描述本發(fā)明。參考例1將0.19ml溴滴加至0.88g 6-乙?；?3-乙酰氧基-2-乙氧基羰基吡啶在8.8ml乙酸中的溶液中，75℃下攪拌該混合物5分鐘。蒸除溶劑，得到0.77g 6-(2-溴乙?；?-2-乙氧基羰基-3-羥基吡啶氫溴化物。參考例2
從5-乙?；?2-甲氧基羰基呋喃，采用參考例1的方法制得5-(2-溴乙?；?-2-甲氧基羰基呋喃。參考例390℃下，將120ml 10％鹽酸-DMF中的29g 3,4-二乙氧基芐腈和23g硫代乙酰胺的溶液攪拌3小時，進而在130℃下攪拌5小時。溶劑蒸發(fā)后，殘余物用乙醚(2×100ml)和水(2×100ml)洗滌。通過過濾收集所得結(jié)晶，干燥，得到21.7g 3,4-二乙氧基硫代苯甲酰胺。參考例4按照參考例3的方法從4-甲氧基-3-丙氧基芐腈制備4-甲氧基-3-丙氧基硫代苯甲酰胺。參考例5向40ml甲醇中的877mg 5-(2-溴乙酰基)-2-甲氧基羰基呋喃的溶液中加入800mg 4-甲氧基-3-丙氧基硫代苯甲酰胺，混合物回流1小時。將反應(yīng)混合物濃縮至大約1/4，隨后添加乙醚。待溶液冷卻后，通過過濾收集沉淀物，干燥，得到1.05g 2-(4-甲氧基-3-丙氧基苯基)-4-(5-甲氧基羰基-2-呋喃基)噻唑的棕色粉末。熔點141.0-142.0℃。參考例6-36采用適當?shù)钠鹗荚喜凑疹愃朴谏鲜鰠⒖祭姆椒?，制得如?至表6所列的化合物。
表1
參照例 R1R2性質(zhì)6
熔點141.0-142.0℃棕色粉末7
熔點138.0-139.0℃淡黃色粉末8
熔點82.5-85.0℃淡黃色粉末表1(續(xù))參照例R1R2性質(zhì)9
熔點83.5-85.5℃白色粉末10
與JP-A-5-51318所述的一個化合物的性質(zhì)相同11
熔點95.0-97.5℃白色粉末表2參照例R1R2性質(zhì)12
粘性無色油NMR(3)
表2(續(xù))參照例R1R2性質(zhì)15
粘性無色油NMR(4)16
粘性無色油NMR(5)17
粘性無色油NMR(6)
表3參照例R1R2性質(zhì)18
熔點104.0-106.5℃淡黃色針狀物19
熔點158.5-159.5℃淡黃色粉末20
淡棕色固體NMR(7)
表3(續(xù))參照例R1R2性質(zhì)21
淡黃色油NMR(8)22
熔點179.5-180.5℃淡棕色針狀物23
熔點165.0-167.0℃白色粉末表4參照例R1R2性質(zhì)24
無色無定形物NMR(9)25
黃色無定形物NMR(10)26
粘性淡黃色油NMR(11)
表4(續(xù))參照例R1R2性質(zhì)27
淡黃色粉末NMR(12)28
粘性淡黃色油NMR(13)
表5參照例R1R2性質(zhì)29
熔點106.0-107.0℃淡黃色粉末30
黃色油NMR(14)31
粘性無色油NMR(15)
表5(續(xù))參照例R1R2性質(zhì)32
粘性無色油NMR(16)
表6參照例R1R2性質(zhì)33
棕色油NMR(17)34
淡黃色油NMR(18)35
熔點101.5-105.5℃淡黃色粉末上述獲得的化合物具有下列NMR譜NMR(1):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.86(3H,d,J=1.2Hz),1.98(3H,d,J=1.2Hz),3.81(3H,s),3.95(3H,s),4.12(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),6.36(1H,br-s),6.92(1H,d,J=8.3Hz),7.37(1H,s),7.53(1H,dd,J=2.0Hz,J=8.3Hz),7.61(1H,d,J=2.0Hz),7.97(1H,d,J=2.3Hz),8.22(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(2):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.52(3H,t,J=7.0Hz),1.74-2.04(3H,m),2.86(2H,t,J=7.7Hz),3.58-3.72(2H,m),3.89(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),6.93(1H,d,J=8.4Hz),7.40(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.60(1H,d,J=2.1Hz),8.02(1H,d,J=2.3Hz),8.23(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(3):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz)1.52(3H,t,J=7.0Hz),3.53(2H,d,J=6.4Hz),3.86(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),5.02-5.21(2H,m),5.91-6.19(1H,m),6.93(1H,d,J=8.4Hz),7.39(1H,s),7.53(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),7.98(1H,d,J=2.4Hz),8.26(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(4):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.27(6H,s),1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),2.61(1H,br-s),2.95(2H,s),3.89(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),6.93(1H,d,J=8.3Hz),7.40(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz),J=8.3Hz),7.59(1H,d,J=2.1Hz),8.00(1H,d,J=2.4Hz),8.31(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(5):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.29(3H,d,J=6.2Hz),1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.52(3H,t,J=7.0Hz),2.08(1H,br-s),2.75-3.05(2H,m),3.89(3H,s),3.97(3H,s),4.08-4.29(1H,m),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),6.93(1H,d,J=8.4Hz),7.40(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),8.02(1H,d,J=2.3Hz),8.28(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(6):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.23(3H,d,J=6.2Hz),1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.71-1.98(3H,m),2.86(2H,t,J=8.0Hz),3.69-3.86(1H,m),3.89(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),6.93(1H,d,J=8.4Hz),7.40(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.60(1H,d,J=2.1Hz),8.01(1H,d,J=2.3Hz),8.23(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(7):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),2.30(6H,s),3.56(2H,s),3.88(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.43(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),8.15(1H,d,J=2.4Hz),8.35(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(8):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),3.90(3H,s),3.96(3H,s),3.99(2H,s),4.15(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),6.92(1H,d,J=8.3Hz),7.43(1H,s),7.53(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.59(1H,d,J=2.1Hz),8.14(1H,d,J=2.3Hz),8.29(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(9):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.19(3H,s),1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.52(3H,t,J=7.0Hz),2.72(1H,t,J=6.8Hz),2.91(1H,d,J=13.5Hz),3.01(1H,s),3.07(1H,d,J=13.5Hz),3.37(2H,dd,J=2.1Hz,J=6.8Hz),3.92(1H,s),3.97(1H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),6.93(1H,d,J=8.3Hz),7.42(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.59(1H,d,J=2.1Hz),8.02(1H,d,J=2.3Hz),8.32(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(10):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.52(3H,t,J=7.0Hz),1.58(3H,d,J=6.5Hz),2.32(1H,d,J=4.2Hz),3.91(3H,s),3.97(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),5.21-5.38(1H,m),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.43(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),8.25(1H,d,J=2.2Hz),8.33(1H,d,J=2.2Hz).
NMR(11):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.41-1.59(9H,m),1.94(3H,dd,J=1.6Hz,J=6.6Hz),6.22-6.51(1H,m),6.68-6.85(1H,m),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.32(1H,s),7.41(1H,d,J=2.0Hz),7.54(1H,dd,J=2.0Hz,J=8.4Hz),7.60(2H,d,J=2.0Hz).
NMR(12):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),3.47(2H,d,J=6.4Hz),3.87(1H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.19(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),5.00-5.19(2H,m),5.91-6.15(1H,m),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.30(1H,s),7.33(1H,d,J=2.0Hz),7.44(1H,d,J=2.0Hz),7.53(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.60(1H,d,J=2.1Hz).
NMR(13):1H-NMR (CDCl3)δppm；1.08(3H,t,J=7.5Hz),1.50(3H,t,J=7.0Hz),1.82-2.05(5H,m),3.85(3H,s),3.93(3H,s),4.11(2H,t,J=6.9Hz),4.19(2H,q,J=7.0Hz),6.22-6.51(1H,m),6.65-6.83(1H,m),6.93(1H,d,J=8.3Hz),7.33(1H,s),7.41(1H,d,J=2.0Hz),7.55(1H,dd,J=2.0Hz,J=8.3Hz),7.60(2H,d,J=2.0Hz).
NMR(14):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.78(3H,s),3.47(2H,s),3.85(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),4.69(1H,s),4.88(1H,s),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.39(1H,s),7.53(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),7.96(1H,d,J=2.3Hz),8.28(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(15):1H-NMR(CDCl3)δppm；0.95(6H,d,J=6.6Hz),1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.90-2.14(1H,m),2.61(2H,d,J=7.3Hz),3.85(3H,s),3.96(3H,s),4.15(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),6.92(1H,d,J=8.3Hz),7.38(1H,s),7.55(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.60(1H,d,J=2.1Hz),7.93(1H,d,J=2.4Hz),8.23(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(16):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.01(3H,t,J=7.4Hz),1.44(3H,t,J=7.1Hz),1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.71(2H,sextet,J=7.4Hz),2.72(2H,t,J=7.4Hz),3.87(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.22(2H,q,J=7.0Hz),4.43(2H,q,J=7.1Hz),6.92(1H,d,J=8.4Hz),7.39(1H,s),7.53(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.4Hz),7.62(1H,d,J=2.1Hz),7.97(1H,d,J=2.3Hz),8.21(1H,d,J=2.3Hz).
NMR(17):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),1.97(3H,dd,J=1.6Hz,J=6.5Hz),3.85(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),6.41(1H,dq,J=6.5Hz,J=15.9Hz),6.75(1H,dd,J=1.6Hz,J=15.9Hz),6.93(1H,d,J=8.3Hz),7.40(1H,s),7.55(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.60(1H,d,J=2.1Hz),8.21(2H,s).
NMR(18):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.51(3H,t,J=7.0Hz),3.87(3H,s),3.96(3H,s),4.16(2H,q,J=7.0Hz),4.23(2H,q,J=7.0Hz),5.44(1H,dd,J=1.1Hz,J=11.1Hz),5.92(1H,dd,J=1.1Hz,J=17.7Hz),6.93(1H,d,J=8.3Hz),7.09(1H,dd,J=11.1Hz,J=17.7Hz),7.42(1H,s),7.54(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.61(1H,d,J=2.1Hz),8.28(2H,br-s).實施例1向970mg 2-(4-甲氧基-3-丙氧基苯基)-4-(5-甲氧基羰基-2-呋喃基)噻唑在30ml甲醇中的懸浮液內(nèi)，加入20ml 1,4-二噁烷和5ml5N氫氧化鈉水溶液。混合物回流3小時，進而濃縮至近1/10。在殘余物中加入水，用乙酸乙酯洗滌。以5N鹽酸酸化該水層，并且用乙酸乙酯提取。合并的有機層以水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶液，殘余物自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到420mg 2-(4-甲氧基-3-丙氧基苯基)-4-(5-羰基-2-呋喃基)噻唑的白色粉末，熔點191.0-192.0℃。實施例2-35采用適當?shù)钠鹗荚喜凑疹愃朴谏鲜鰧嵤├?的方法，制得如表7至表12所列的化合物。
表7
實施例R1R2性質(zhì)1
熔點191.0-192.0℃白色粉末2
熔點182.0-184.0℃白色粉末3
熔點163.0-167.0℃淡黃色粉末表7(續(xù))實施例R1R2性質(zhì)4
熔點202.0-203.0℃白色粉末5
熔點201.0-202.0℃白色粉末6
熔點153.0-154.0℃淡黃色粉顆粒表8實施例R1R2性質(zhì)7
淡黃色無定形物NMR(1)8
熔點109.5-111.5℃白色粉末9
熔點137.0-139.0℃白色粉末表8(續(xù))實施例R1R2性質(zhì)10
熔點135.0-138.0℃白色粉末11
熔點110.0-112.5℃白色粉末12
熔點165.0-167.0℃無色針狀物表9實施例R1R2性質(zhì)13
熔點204.5-206.5℃無色針狀物14
形式-氫氯化合物NMR(2)15
熔點201.0-202.0℃淡黃色針狀物表9(續(xù))實施例R1R2性質(zhì)16
熔點206.0-207.0℃白色粉末17
熔點134.0-136.0℃白色粉末18
熔點189.0-190.0℃淡黃色片狀物表10實施例R1R2性質(zhì)19
熔點147.5-149.0℃淡黃色棱晶20
熔點139.0-141.0℃淡黃色棱晶21
與JP-A-5-51318所述的一個化合物的性質(zhì)相同表10(續(xù))實施例R1R2性質(zhì)22
與JP-A-5-51318所述的一個化合物的性質(zhì)相同23
與JP-A-5-51318所述的一個化合物的性質(zhì)相同24
與JP-A-5-51318所述的一個化合物的性質(zhì)相同25
與JP-A-6-65222所述的一個化合物的性質(zhì)相同表11實施例R1R2性質(zhì)26
與JP-A-6-65222所述的一個化合物的性質(zhì)相同27
與JP-A-6-65222所述的一個化合物的性質(zhì)相同28
與JP-A-6-65222所述的一個化合物的性質(zhì)相同表11(續(xù))實施例R1R2性質(zhì)29
熔點65.0-68.0℃淡黃色粉末30
熔點163.0-165.0℃白色粉末31
熔點145.0-147.0℃白色粉末表12實施例R1R2性質(zhì)32
熔點176.0-179.0℃無色針狀物33
熔點208.0-210.0℃白色粉末34
熔點175.5-177.5℃無色棱晶35
熔點188.5-190.0℃白色粉末上面獲得的化合物具有如下NMR譜。
NMR(1):1H-NMR(CDCl3)δppm；1.14(3H,s),1.35(3H,s),1.49(3H,t,J=7.0Hz),1.50(3H,t,J=7.0Hz),3.84(3H,s),4.15(2H,q,J=7.0Hz),4.21(2H,q,J=7.0Hz),4.96(1H,s),6.91(1H,d,J=8.3Hz),7.44(1H,s),7.52(1H,dd,J=2.1Hz,J=8.3Hz),7.58(1H,d,J=2.1Hz),8.37(1H,d,J=2.4Hz),8.55(1H,d,J=2.4Hz).
NMR(2):1H-NMR(DMSO-D6)δppm；1.34(3H,t,J=6.8Hz),1.36(3H,t,J=6.8Hz,2.74(3H,s),2.76(3H,s),3.86(3H,s),4.08(2H,q,J=6.8Hz),4.14(2H,q,J=6.8Hz),4.29-4.56(2H,m),7.06(1H,d,J=8.9Hz),7.35-7.72(2H,m),8.16(1H,s),8.39(1H,d,J=1.9Hz),8.67 (1H,d,J=1.9Hz),10.95(1H,br-s).藥理學實驗1(粘著抑制作用1)將被測化合物溶于0.1M氫氧化鈉中。在所得溶液中加入9倍體積的Dulbecco配方(Takara公司的產(chǎn)品)的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)，從而制得被測化合物的1mM溶液。以0.1M氫氧化鈉/PBS(1∶9)稀釋該溶液，得到0.1mM的被測化合物溶液和0.01mM的被測化合物溶液。上述兩種被測化合物的溶液各自用RPMI-1640培養(yǎng)基[含有10％FCS(胎牛血清)]稀釋40倍。另外，用RPMI-1640培養(yǎng)基[含有10％FCS]稀釋N-甲酰基甲硫氨?；涟滨；奖彼?fMLP)(溶于二甲基甲酰胺中的2mM溶液)，制得fMLP的0.25mM溶液。
通過葡聚糖沉降、菲可-帕克-密度的密度梯度離心以及紅細胞溶血，從健康人全血中獲得純化的嗜中性粒細胞；隨后，將其懸浮于PBS(3mL)中；室溫下，用50μl熒光標記試劑(BCECF-AM,Dojindo實驗室出品)標記1小時。在24孔培養(yǎng)平板上培養(yǎng)人的臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)(Clonetics公司的產(chǎn)品)，當細胞鋪滿時才開始試驗。
除去培養(yǎng)平板各孔內(nèi)的培養(yǎng)基。在每個孔中加入0.2ml RPMI-1640(含有10％FCS)或0.2ml被測化合物的稀釋溶液以及0.2ml的fMLP溶液。隨后，在各孔內(nèi)加入106個熒光標記的嗜中性粒細胞，所得各個混合物在37℃下培養(yǎng)30分鐘。分別收集粘著的嗜中性粒細胞和未粘著的嗜中性粒細胞，測定其熒光強度。利用另外繪制好的、嗜中性粒細胞和熒光強度之間的標準線，測定出細胞的數(shù)目以及50％粘著抑制時的被測化合物濃度，即IC50。
所得結(jié)果列于表13中。
表13被測化合物 IC50(μM)實施例1的化合物 ＞10實施例2的化合物 0.6實施例3的化合物 ＞10實施例4的化合物 8.5實施例5的化合物 ＜0.1實施例6的化合物 ＜0.1實施例7的化合物 ＞10實施例8的化合物 ＞10實施例9的化合物 ＞10實施例10的化合物 ＞10實施例11的化合物 ＞10實施例12的化合物 2.5實施例13的化合物 3.0實施例21的化合物 ＞10實施例22的化合物 ＞10實施例23的化合物 5.6實施例24的化合物 ＜0.1實施例25的化合物 5.0實施例27的化合物 2.9實施例29的化合物 ＜0.1實施例30的化合物 4.4實施例31的化合物 0.5實施例32的化合物 0.1實施例33的化合物 0.95實施例34的化合物 5.9實施例35的化合物 0.8藥理學實驗2(粘著抑制作用2(對內(nèi)皮細胞上ICAM-1或VCAM-1出現(xiàn)的作用))將被測化合物溶于0.1M氫氧化鈉中。向所得溶液中加入9倍體積的Dulbecco配方(Takara公司的產(chǎn)品)的PBS，從而制得被測化合物的1mM溶液。用0.1M氫氧化鈉/PBS(1∶9)稀釋該溶液，以制得分別含300μM、100μM、30μM、10μM和3μM被測化合物的溶液。采用RPMI-1640(含有10％FCS)將上述溶液分別稀釋10倍，從而得到100μM、30μM、10μM、3μM、1μM和0.3μM的被測化合物溶液。
用RPMI-1640(含有10％FCS)稀釋TNF-α(R & D Systems出品，10μg/ml的溶液)，制得6ng/ml TNF-α溶液。分別用96孔培養(yǎng)平板培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細胞(HAEC)和人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)。當細胞鋪滿時，除去各孔內(nèi)的培養(yǎng)基。隨后，把50μl各種已配制好的被測化合物溶液加入孔內(nèi)。分別在陽性對照孔和陰性對照孔中加入50μl培養(yǎng)基和100μl培養(yǎng)基。使該平板在37℃下保溫30分鐘。隨后將50μl已配得的TNF-α溶液加入到除陰性對照孔以外的所有孔內(nèi)，該平板在37℃下保溫24小時。去除各孔中的培養(yǎng)基，并向各孔內(nèi)加入100μl仲甲醛(2％,PBS中)。室溫下固定10分鐘。用生理鹽水溶液洗滌6次后，在每個孔內(nèi)加入封閉溶液(0.1％BSA(牛血清白蛋白)/PBS)。該培養(yǎng)平板在室溫下保溫1小時。除去封閉液。加入100μl初級抗體溶液(用0.1％BSA/PBS將抗體稀釋1,000倍)，反應(yīng)混合物在4℃下保溫18小時。用生理鹽水溶液洗滌5次后，加入100μl次級抗體溶液(抗體用0.1％BSA/PBS稀釋1,000倍)，該反應(yīng)混合物在室溫下溫育2小時。用生理鹽水溶液洗滌5次后，加入100μl過氧化物酶標記的抗生物素蛋白溶液(DAKO公司產(chǎn)品，用0.1％BSA/PBS稀釋1,000倍)。將該反應(yīng)混合物在室溫下保溫1小時。用生理鹽水溶液洗滌5次后，加入100μl OPD(鄰苯二胺二氫氯化物)底物溶液，讓其在37℃下顯色。在492/692nm下進行吸收度測定，并且測出表現(xiàn)ICAM-1或VCAM-1的50％抑制時的被測化合物濃度，即IC50。
選用實施例2的化合物作為被測化合物。初級抗體和次級抗體如下所述初級抗體小鼠抗人ICAM-1(Becton,Dickinson & Co.的產(chǎn)品)小鼠抗人VCAM-1(Becton,Dickinson & Co.的產(chǎn)品)次級抗體兔抗人免疫球蛋白(DAKO Co.的產(chǎn)品)所得結(jié)果如表14所示表14
藥理學實驗3(抑制TNF-α產(chǎn)生的作用)被測化合物被溶于0.1M氫氧化鈉中。在其中加入9倍體積的PBS(一種Dulbecco配方，Takara公司產(chǎn)品)，以便制得1mM的被測化合物溶液。用0.1M氫氧化鈉/PBS(1∶9)稀釋該溶液，從而制得0.1mM、0.01mM、1μM、0.μM和0.01μM的被測化合物溶液。
用RPMI-1640(含有10％FCS)配制50μg/ml的脂多糖(LPS)溶液。采用24孔的培養(yǎng)平板。在無LPS刺激的對照孔內(nèi)加入1.35mlRPMI-1640(含有10％FCS)，在受LPS刺激的對照孔內(nèi)加入1.32mlRPMI-1640(含有10％FCS)。再在其它的孔中加入1.17ml的RPMI-1640(含有10％FCS)和0.15ml各種已配制好的上述被測化合物稀釋液。向所有孔中加入0.15ml人全血，并使它們在37℃下保溫30分鐘。此后，向所有孔中加入0.03ml的上面制備LPS溶液但無LPS刺激的對照孔除外，全部孔在37℃下培養(yǎng)24小時。低速離心，收集各孔中的上清液，用市售的ELISA試劑盒測定TNF-α濃度。測出抑制50％TNF-α產(chǎn)生時的被測化合物濃度，即IC50。結(jié)果列于表15。
表15被測化合物 IC50(μM)實施例2的化合物10實施例3的化合物6.4實施例4的化合物36.0實施例5的化合物40.0實施例6的化合物33.5實施例7的化合物7.4實施例8的化合物3.4實施例9的化合物0.7實施例10的化合物 4.0實施例11的化合物 19實施例12的化合物 5.7實施例13的化合物 7.5實施例14的化合物 0.47實施例15的化合物 2.3實施例16的化合物 2.7實施例17的化合物 2.0實施例18的化合物 2.3實施例19的化合物 0.88實施例20的化合物 4.7藥理學實驗4(對IL-1產(chǎn)生的抑制作用)按照與藥理學試驗3相同的方式對IL-1的產(chǎn)生進行測定，并檢測出抑制50％產(chǎn)生時的被測化合物濃度，即IC50。當被測化合物為實施例2所述化合物時，IC50為80μM。藥理學實驗5(對IL-6產(chǎn)生的抑制作用)按照與藥理學試驗3相同的方式對IL-6的產(chǎn)生進行測定，并檢測出抑制50％產(chǎn)生時的被測化合物濃度，即IC50。當被測化合物為實施例2所述化合物時，IC50為100μM或更高。藥理學實驗6(對IFN-γ產(chǎn)生的抑制作用)將被測化合物溶于0.1M氫氧化鈉中。在其中加入9倍體積的PBS(一種Dulbecco配方，Takara公司產(chǎn)品)，以便制得1mM的被測化合物溶液。用0.1M氫氧化鈉/PBS(1∶9)稀釋該溶液，從而制得0.1mM、0.01mM、1μM、0.1μM和0.01μM的被測化合物溶液。
用RPMI-1640(含有10％FCS)配制50mg/ml的伴刀豆球蛋白(ConA,Seikagaku公司產(chǎn)品)溶液。采用24孔的培養(yǎng)平板。在無Con A刺激的對照孔內(nèi)加入1.35ml RPMI-1640(含有10％FCS)，在受Con A刺激的對照孔內(nèi)加入1.32ml RPMI-1640(含有10％FCS)。再在其它的孔中加入1.17ml的RPMI-1640(含有10％FCS)和0.15ml各種已配制好的上述被測化合物稀釋液。向所有孔中加入0.15ml人全血，并使它們在37℃下保溫30分鐘。此后，向所有孔中加入0.03ml的上述Con A溶液但無Con A刺激的對照孔除外，全部孔在37℃下培養(yǎng)48小時。低速離心，收集各孔中的上清液，用市售的ELISA試劑盒測定IFN-γ的濃度。測出抑制50％產(chǎn)生時的被測化合物濃度，即IC50。當被測化合物為實施例2所述化合物時，IC50為5μM。制劑例1實施例1的化合物 150gAvicel(Asahi化學工業(yè)有限公司出售 40g的微晶纖維素的商品名稱)玉米淀粉 30g硬脂酸鎂 2g羥丙基甲基纖維素10g聚乙二醇-6000 3g蓖麻油 40g乙醇 40g將本例的活性化合物組分、Avicel、玉米淀粉和硬脂酸鎂一起混合并研磨，用常規(guī)沖錘(R 10mm)將混合物成形為用于糖包衣的片劑。利用薄膜包衣劑包封所得片劑，以制備薄膜包衣的片劑，所述薄膜包衣劑由羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇-6000、蓖麻油和乙醇組成。制劑例2實施例2的化合物150g檸檬酸 1.0g乳糖 33.5g磷酸二鈣 70.0gPluronic F-68 30.0g十二烷基硫酸鈉 15.0g聚乙烯吡咯烷酮 15.0g聚乙二醇(Carbowax 1500) 4.5聚乙二醇(Carbowax 6000) 45.0g玉米淀粉 30.0g干燥的十二烷基硫酸鈉3.0g干燥的硬脂酸鎂 3.0g
乙醇 所需量將本例的活性化合物成分、檸檬酸、乳糖、磷酸二鈣、PluronicF-68和十二烷基硫酸鈉一起混合。
該混合物經(jīng)No.60篩篩分。過篩后的混合物用含有聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax1500和Carbowax6000的乙醇溶液濕法造粒。在必要時，添加乙醇使混合物成為一種糊狀物。添加玉米淀粉，持續(xù)混合，直至形成均勻顆粒為止。使所得顆粒通過No.10篩，進而置于盤中，在100℃的烘箱內(nèi)干燥12至14小時。這樣的干燥顆粒經(jīng)No.16篩篩分。隨后，向過篩后的干燥顆粒中加入干燥十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂。用片壓機將混合物壓縮成具有所需形狀的芯片。
用涂劑處理上述芯片，隨后將滑石噴在它上面以防吸溫。在所得芯片的表面上，形成了內(nèi)涂層。再在內(nèi)涂層上用充足時間進行涂劑包衣，從而使片劑適合在體內(nèi)使用。此外，進行內(nèi)涂層的形成以及光滑包衣，使包衣片劑獲得徹底的圓滑。進行著色包衣直到片劑表面形成所需顏色時為止。干燥后，包衣片劑被拋光，從而制得均勻光澤的片劑。制劑例3實施例2的化合物 5g聚乙二醇(分子量4000) 0.3g氯化鈉0.9g聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯0.4g焦亞硫酸鈉 0.1g對羥基苯甲酸甲酯 0.18g對羥基苯甲酸丙酯 0.02g注射用蒸餾水10.0ml在80℃和攪拌的條件下，將對羥基苯甲酸酯類化合物、焦亞硫酸鈉和氯化鈉溶解在大約為上述體積一半的蒸餾水中。所得溶液冷卻至40℃。將本例的活性成分化合物、聚乙二醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯溶于上述溶液中。向所得溶液中加入剩余體積的蒸餾水以達到最終體積。由此制得的溶液通過適當?shù)臑V紙進行滅菌，從而制得一種注射劑。
權(quán)利要求
1．一種抑制細胞因子產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑包括，作為活性組分的至少一種選自由下面通式所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物
其中R1為苯基，該苯基的苯環(huán)上可以帶有作為取代基的低級烷氧基；而且R2為下面通式所示的基團
[其中各個R3可以相同或不同并且各自為羧基、低級烷氧基、低級烷基、低級鏈烯基、由-(A)1-NR4R5所示的基團(A為低級亞烷基；R4和R5可以相同或不同并且各自為氫原子或低級烷基；且1為0或1)、羥基取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷氧基、低級烷氧基取代的低級烷氧羰基或羧基取代的低級烷氧基；且m為1至3的整數(shù)]，或者是含有1至2個雜原子的雜環(huán)殘基，所述雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子，該雜環(huán)殘基可以在其雜環(huán)上帶有1至3個取代基，所述取代基選自羧基和低級烷氧基。
2．一種抑制細胞粘著的抑制劑，它包括至少一種選自權(quán)利要求1所述噻唑衍生物及其鹽的化合物作為活性組分。
3．一種抑制TNF-α產(chǎn)生的抑制劑，它包括至少一種選自權(quán)利要求1所述噻唑衍生物及其鹽的化合物作為活性組分。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制細胞因子產(chǎn)生的抑制劑，其中活性組分是6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
5．根據(jù)權(quán)利要求2所述的抑制細胞粘著的抑制劑，其中活性組分是6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
6．根據(jù)權(quán)利要求3所述的抑制TNF-α產(chǎn)生的抑制劑，其中活性組分是6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
7．一種化合物在制備用于抑制細胞因子產(chǎn)生的藥物中的應(yīng)用，其中該藥物包括，至少一種選自由下面通式所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的活性成分
其中R1為苯基，該苯基的苯環(huán)上可以帶有作為取代基的低級烷氧基；而且R2為下面通式所示的基團
[其中各個R3可以相同或不同并且各自為羧基、低級烷氧基、低級烷基、低級鏈烯基、由-(A)1-NR4R5所示的基團(A為低級亞烷基；R4和R5可以相同或不同并且各自為氫原子或低級烷基；且1為0或1)、羥基取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷氧基、低級烷氧基取代的低級烷氧羰基或羧基取代的低級烷氧基；且m為1至3的整數(shù)]，或者是含有1至2個雜原子的雜環(huán)殘基，所述雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子，該雜環(huán)殘基可以在其雜環(huán)上帶有1至3個取代基，所述取代基選自羧基和低級烷氧基。
8．一種化合物在制備用于抑制細胞粘著的藥物中的應(yīng)用，其中該藥物包括至少一種權(quán)利要求7所述的活性組分。
9．一種化合物在制備用于抑制TNF-α產(chǎn)生的藥物中的應(yīng)用，其中該藥物包括至少一種權(quán)利要求7所述的活性組分。
10．根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
11．根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
12．根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
13．一種抑制細胞因子產(chǎn)生的方法，該方法是給需要它的患者施用一種細胞因子產(chǎn)生抑制劑，所述細胞因子產(chǎn)生抑制劑包括，作為活性組分的至少一種選自由下面通式所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物
其中R1為苯基，該苯基的苯環(huán)上可以帶有作為取代基的低級烷氧基；而且R2為下面通式所示的基團
[其中各個R3可以相同或不同并且各自為羧基、低級烷氧基、低級烷基、低級鏈烯基、由-(A)1-NR4R5所示的基團(A為低級亞烷基；R4和R5可以相同或不同并且各自為氫原子或低級烷基；且1為0或1)、羥基取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷氧基、低級烷氧基取代的低級烷氧羰基或羧基取代的低級烷氧基；且m為1至3的整數(shù)]，或者是含有1至2個雜原子的雜環(huán)殘基，所述雜原子選自氮原子、氧原子和硫原子，該雜環(huán)殘基可以在其雜環(huán)上帶有1至3個取代基，所述取代基選自羧基和低級烷氧基。
14．一種抑制細胞粘著的方法，該方法是給需要它的患者施用一種細胞粘著抑制劑，所述細胞粘著抑制劑包括至少一種權(quán)利要求13所述的化合物作為活性組分。
15．一種抑制TNF-α產(chǎn)生的方法，該方法是給需要它的患者施用一種TNF-α產(chǎn)生抑制劑，所述TNF-α產(chǎn)生抑制劑包括至少一種權(quán)利要求13所述的化合物作為活性組分。
16．根據(jù)權(quán)利要求13所述的抑制細胞因子產(chǎn)生的方法，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
17．根據(jù)權(quán)利要求14所述的抑制細胞粘著的方法，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
18．根據(jù)權(quán)利要求15所述的抑制TNF-α產(chǎn)生的方法，其中活性組分為6-[2-(3,4-二乙氧基苯基)噻唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于抑制細胞因子產(chǎn)生或細胞粘著的抑制劑,它包括至少一種選自由通式(1)所示噻唑衍生物及其鹽組成的組的化合物,式中R
文檔編號A61K31/4439GK1232396SQ97198406
公開日1999年10月20日 申請日期1997年9月29日 優(yōu)先權(quán)日1996年9月30日
發(fā)明者千尋正利, 松崎敬之, 長本尚, 都田悟朗, 末吉忍, 森豐樹, 北野和良, 竹村勛, 山下博司, 栗村宗明, 田房不二男 申請人:大塚制藥株式會社