專利名稱：細(xì)胞粘連抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的化合物，該化合物可用于抑制、改變或預(yù)防細(xì)胞粘連和細(xì)胞粘連介導(dǎo)的病變。本發(fā)明也涉及鑒別另外具有所需活性的新穎化合物的方法，以及含有這些化合物的藥物制劑，和使用它們來抑制與預(yù)防細(xì)胞粘連和細(xì)胞粘連介導(dǎo)的病變。本發(fā)明的化合物和藥物組合物能夠作為治療劑或預(yù)防劑使用。特別是它們非常適合治療很多炎癥和自體免疫疾病。
背景技術(shù)：
通過細(xì)胞粘連這樣一種過程，細(xì)胞彼此聯(lián)合，向一個(gè)特定的目標(biāo)移行或集中在細(xì)胞外基質(zhì)中。因此，細(xì)胞粘連構(gòu)成了許多生物學(xué)現(xiàn)象的基本機(jī)理之一。例如，細(xì)胞粘連引起造血細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘連，繼而引起這些造血細(xì)胞從血管中移行至炎性損傷部位。因此，細(xì)胞粘連在許多病變中起到重要作用，例如哺乳動(dòng)物的炎癥和免疫反應(yīng)。
細(xì)胞粘連的分子基礎(chǔ)研究揭示了不同細(xì)胞表面大分子-總體上被認(rèn)為是細(xì)胞粘連分子或受體-介導(dǎo)了細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用。例如，名為“整合素”的一類蛋白質(zhì)是造血細(xì)胞與其微環(huán)境之間的粘連作用中的關(guān)鍵介質(zhì)(M.E.Hemler，“整合素類中的VLA蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能及其對白細(xì)胞的作用”，《免疫學(xué)年評(Ann.Rev.Immunol)》8,p365(1990))。整合素是非共價(jià)的雜二聚配合物，由兩個(gè)亞單位α和β組成。目前已鑒別出至少有16個(gè)不同的α亞單位(α1-α9、α-L、α-M、α-D、α-X、αⅡB、α-V和α-E)和至少9個(gè)不同的β亞單位(β1-β9)。根據(jù)α和β亞單位成分的類型，每種整合素分子可以分成不同的亞類。
α4β1整合素也被認(rèn)為是活化-4的最新抗原(“VLA-4”)或CD49d/CD29，是一種參與廣泛的細(xì)胞-細(xì)胞與細(xì)胞-基質(zhì)粘連作用的白細(xì)胞表面受體(M.E.Hemler，《免疫學(xué)年評》8,p365(1990))。它起到可誘導(dǎo)細(xì)胞因子的內(nèi)皮細(xì)胞表面蛋白、血管細(xì)胞粘連分子-1(“VCAM-1”)、以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)纖連蛋白(“FN”)的受體的作用(Ruegg等，《細(xì)胞生物學(xué)雜志》177,p179(1991)；Wayner等，《細(xì)胞生物學(xué)雜志》105,p1873(1987)；Kramer等，《生物化學(xué)雜志》264,p4684(1989)；Gehlsen等，《科學(xué)》24,p1228(1988))?？筕LA-4單克隆抗體(“mAb’s”)已顯示出對VLA-4依賴的粘連作用的體外和體內(nèi)抑制作用(Ferguson等，《美國國家科學(xué)院院報(bào)》88,p8072(1991)；Ferguson等，《免疫學(xué)雜志》150,p1172(1993))。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，VLA-4依賴的細(xì)胞粘連的抑制作用可以預(yù)防、抑制或改變?nèi)舾裳仔院妥泽w免疫病變(R.L.Lobb等，“α4整合素的體內(nèi)病理生理學(xué)作用”，《臨床研究雜志》94,PP.1722-28(1994))。
另一種整合素αⅡbβⅢa整合素(“Ⅱb/Ⅲa”)是正常血小板膜表面上發(fā)現(xiàn)的最豐富的整合素。Jennings等，《生物化學(xué)雜志》257,p10458(1982)。血小板依靠糖蛋白、例如Ⅱb8Ⅲa整合素的粘連作用發(fā)揮恰當(dāng)功能。J.Hawiger，《動(dòng)脈粥樣硬化癥評論》21,PP.165-86(1990)。因此抑制該相互作用是一種調(diào)節(jié)血小板血栓形成或聚集的方法。已知多種化合物抑制αⅡbβⅢa整合素與其天然配體結(jié)合，從而能夠調(diào)節(jié)人與血栓形成過多狀態(tài)有關(guān)的疾病。下列專利和專利申請描述了已知的抑制Ⅱb/Ⅲa的化合物GB2271567A；GB2292558 A；EP 0645376 A1；EP 0668278 A1；EP 0608759A2；EP0635492A1；WO 94/22820；US 5,340,798 and WO 94/09029；US5,256,812,EP 0381033 and US 5,084,466；WO 94/18981；WO94/01396 and US 5,272,162；WO 94/21602；WO 94/22444；WO94/29273；WO 95/18111；WO 95/18619；WO 95/25091；WO 94/18162,US5,220,050 and WO 93/16038；US 4,879,313 and EP 0352249 B1；WO93/16697,US 5,227,490,EP 0478363 A2,US 5,229,616 and WO94/12181；US 5,258,398 and WO 93/11759；WO 93/08181 and EP 0537980 A1；WO 93/09133；EP 0530505B1；EP 0566919 A1；EP 0540334 B1；EP 0560730 A2；WO 93/10091,EP 0542363 A2 and WO93/14077；EP 0505868 B1；EP 0614664 A1；US 5,358,956；US5,334,596 and WO 94/26745；WO 94/12478；WO 94/14776；WO93/00095；WO 93/18058,W O93/07867,US 5,239,113,US 5,344,957and EP 0542708 A1；WO 94/22825；US 5,250,679 and WO 93/08174；US 5,084,466；EP 0668278 A1；US 5,264,420；WO 94/08962；EP 0529858；US 5,389,631；WO 94/08577；EP 0632016；EP 0503548；EP 0512831 and WO 92/19595；WO 93/22303；EP 0525629；EP 0604800；EP 0587134；EP 0623615；EP 0655439；US 5,446,056and WO 95/14682；US 5,399,585；WO 93/12074；EP 0512829；EP 0372486 and US 5,039,805；EP 0632020 and US 5,494,922；US5,403,836；WO 94/22834；WO 94/21599；EP 0478328；WO 94/17034WO 96/20192,WO 96/19223,WO 96/19221,WO 96/19222,EP 727425,EP 478362,EP 478363,US 5,272,158,US 5,227,490,US 5,294,616,US 5,334,596,EP 645376,EP 711770,US 5,314,902,WO 94/00424,US 5,523,302,EP 718287,DE 4446301,WO 96/22288,WO 96/29309,EP 719775,EP 635492,WO 96/16947,US 5,602,155,WO 96/38426,EP712844,US 5,292,756,WO 96/37482,WO 96/38416,WO 96/41803,WO97/11940每篇參考文獻(xiàn)全文均特別地結(jié)合在此。
為了鑒別結(jié)合VLA-4所需的最小活性氨基酸序列，Komoriya等合成了各種基于特定種類的纖連蛋白CS-1區(qū)(VLA-4結(jié)合功能區(qū))的氨基酸序列的重疊肽(“纖連蛋白的主要細(xì)胞類型特異的粘連部位(CS1)在另一種剪接Ⅲ型連接段功能區(qū)內(nèi)的最小必要序列是亮氨酸-天冬氨酸-纈氨酸”，《生物化學(xué)雜志》266(23),pp.15075-79(1991))。他們鑒別了一種8個(gè)氨基酸的肽，Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr，以及兩種更小的重疊的五肽，Glu-Ile-Leu-Asp-Val和Leu-Asp-Val-Pro-Ser，它們具有抑制FN依賴的細(xì)胞粘連的活性。這些結(jié)果說明，三肽Leu-Asp-Val是細(xì)胞粘連活性所需的最小序列。后來表明，Leu-Asp-Val僅與表達(dá)VLA-4活化形式的淋巴細(xì)胞結(jié)合，這便引起人們對這樣一種肽在體內(nèi)的應(yīng)用的懷疑(E.A.Wayner等，“纖連蛋白Ⅴ區(qū)中LDV序列的造血細(xì)胞的活化依賴識別”，《細(xì)胞生物學(xué)雜志》116(2),pp.489-497(1992))。不過，某些含有LDV序列的更大的肽隨后表現(xiàn)出體內(nèi)活性(T.A.Ferguson等，“兩種整合素結(jié)合肽體內(nèi)消除T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答”，《美國國家科學(xué)院院報(bào)》88,PP.8072-76(1991)；S.M.Wahl等，“合成的纖連蛋白肽通過阻斷白細(xì)胞粘連和募集反應(yīng)抑制大鼠關(guān)節(jié)炎”，《臨床檢查雜志》94,PP.655-62(1994))。
還描述了一種環(huán)五肽Arg-Cys-Asp-TPro-Cys(其中TPro指4-硫脯氨酸)，它能抑制VLA-4以及VLA-5與FN粘連(例如參見D.M.Nowlin等，“一種新穎的環(huán)五肽抑制以α4β1和α5β1整合素介導(dǎo)的細(xì)胞粘連”，《生物化學(xué)雜志》268(27),pp.20352-59(1993)；和PCT公開說明書PCT/US91/04862)。該五肽是以來自FN的三肽序列Arg-Gly-Asp為基礎(chǔ)的，該三肽已知是一種若干細(xì)胞外基質(zhì)蛋白識別部位中的常見基序。
其他VLA-4抑制劑例子已有報(bào)道，例如未決的美國專利申請08/376372，特別地結(jié)合在此作為參考。USSN 376372描述了含有b氨基酸的直鏈肽基化合物，該化合物具有細(xì)胞粘連抑制活性。特別結(jié)合在此作為參考的國際專利申請WO 94/15958和WO 92/00995描述了具有細(xì)胞粘連抑制活性的環(huán)肽和擬肽化合物。國際專利申請WO 93/08823和WO 92/08464(結(jié)合在此作為參考)描述了含有胍基、尿素和硫脲的細(xì)胞粘連抑制化合物。美國專利5260277號描述了含有胍基的細(xì)胞粘連調(diào)節(jié)化合物，也特別結(jié)合在此。
盡管已取得這些進(jìn)展，但仍需要小分子的有效的細(xì)胞粘連抑制劑，特別是有效的VLA-4或Ⅱb/Ⅲa細(xì)胞粘連抑制劑。理想的情況是該抑制劑足夠小，以便可以口服給藥。這樣的化合物將制成有用的藥劑，來治療、改變、預(yù)防或抑制各種由細(xì)胞粘連和VLA-4或Ⅱb/Ⅲa結(jié)合介導(dǎo)的病變。
發(fā)明概述本發(fā)明通過提供新穎的化合物來解決該問題，該化合物抑制細(xì)胞粘連，特別是抑制配體與VLA-4的結(jié)合。這些化合物可用于抑制、預(yù)防和阻止VLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞粘連，和與該粘連有關(guān)的病變，例如炎癥和免疫反應(yīng)。本發(fā)明化合物可以單獨(dú)使用，或者與其他的治療劑或預(yù)防劑結(jié)合使用抑制、改變、預(yù)防或阻止細(xì)胞粘連。
本發(fā)明于是提供了新穎的化合物、制劑和方法，它們可以用在涉及細(xì)胞粘連的疾病和病癥的研究、診斷、治療或預(yù)防中，包括但不限于關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、心血管疾病、血栓形成或有害的血小板聚集、同種異體移植排斥反應(yīng)、腫瘤疾病、牛皮癬、多發(fā)性硬化、CNS炎癥、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)膜炎、腎小球性腎炎及相關(guān)的炎癥性腎病、糖尿病、眼部炎癥(例如眼色素層炎)、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥和自體免疫疾病。本發(fā)明也提供了含有這些VLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞粘連的抑制劑的藥物制劑，和使用本發(fā)明化合物及組合物抑制細(xì)胞粘連的方法。
按照本發(fā)明的一種實(shí)施方式，這些新穎的化合物、組合物和方法在用于治療炎癥和免疫疾病是有益的。本發(fā)明也提供了用于制備本發(fā)明化合物的方法和用于該方法的中間體。
因此，本發(fā)明涉及細(xì)胞粘連抑制劑，該抑制劑含有一種具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物，A-B(Ⅰ)其中A包含一個(gè)特異性決定因子，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B包含一個(gè)整合素骨架。更具體來說，本發(fā)明涉及一種具有VLA-4抑制活性的式Ⅰ化合物，和一種來源于具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物的整合素骨架。
在其他的實(shí)施方式中，要求保護(hù)的本發(fā)明涉及優(yōu)選的VLA-4抑制劑，其中B選自表2所列化合物的整合素骨架，或者更優(yōu)選地，選自由表1化合物所確定的骨架。進(jìn)一步的，最優(yōu)選的化合物是表3中的化合物，優(yōu)選的骨架以及優(yōu)選的特異性決定因子來源于表1、2和3所列舉的化合物。
此外，本發(fā)明涉及細(xì)胞粘連抑制劑的制備方法，一般來說，該方法是從Ⅱb/Ⅲa抑制劑中除去Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，再用VLA-4特異性決定因子取代所述的Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，從而產(chǎn)生一個(gè)新的、迄今未描述過的VLA-4抑制劑。
更具體來說，本發(fā)明的細(xì)胞粘連抑制劑的制備方法包含提供具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的第一化合物的步驟。該第一化合物包含一個(gè)Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子和一個(gè)整合素骨架，該決定因子包含一個(gè)堿性的氮官能團(tuán)，例如可以是苯基脒部分。人們除去苯基脒部分，或者如果沒有苯基脒存在的話，例如，若氮官能團(tuán)是哌啶或芐胺，則產(chǎn)生一個(gè)“虛擬的”苯基脒部分，方法是在對位取向創(chuàng)建虛擬鍵，除去不需要的鍵，下文對此有詳細(xì)討論，再除去該“虛擬的”部分。然后用VLA-4特異性決定因子取代苯基脒部分，從而生成第二化合物，它具有VLA-4特異性決定因子和整合素骨架，并且具有VLA-4活性。在某些實(shí)施方式中，優(yōu)選可以在整合素骨架與特異性決定因子之間的連接處或鄰近位置插入一個(gè)附加的基團(tuán)，以賦予化合物所需的特征。該所需特征是容易為本領(lǐng)域技術(shù)人員所決定的，例如可以包含這樣的特征，諸如柔性或?yàn)楦淖兓衔锘钚远M(jìn)行的結(jié)構(gòu)修飾?？梢允褂萌魏芜m宜的附加基團(tuán)，這對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是已知的。優(yōu)選的基團(tuán)可以包括但不限于羰基、羧酰胺、醚、氮、氧、硫化物、硫酰胺和亞甲基。
進(jìn)而在其他的實(shí)施方式中，上述方法可用來制備用于治療與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病的藥物組合物。在進(jìn)行上述制備VLA-4抑制劑的方法之后，可以加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體、賦型劑、添加劑、穩(wěn)定劑等。要求保護(hù)的本發(fā)明也包含“雞尾酒”組合物，也就是那些除了其他活性試劑以外還含有本發(fā)明化合物的組合物。下文對這樣的組合物進(jìn)行更詳細(xì)的討論。
某些實(shí)施方式包含了哺乳動(dòng)物與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病的治療方法，該方法是將治療有效量的組合物給藥。要求保護(hù)的治療方法最適合于人，不過其他哺乳動(dòng)物也是合適的對象。
由于本發(fā)明化合物相對較小，這一點(diǎn)有利于其組合物特別適合以固體、液體或混懸液的方式口服給藥。
如下說明書將列舉本發(fā)明另外的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)，部分內(nèi)容通過說明將顯而易見，或者通過實(shí)施本發(fā)明而獲知。借助成文的說明書及其權(quán)利要求書特別指出的方法和組合物，將認(rèn)識到并達(dá)到本發(fā)明的目的和其他優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明的詳細(xì)說明A·定義本說明書使用下列縮寫名稱試劑或片段Ac ?；鵅n 芐基Boc 叔丁氧基羰基Bu 丁基Cbz 芐酯基Cy 環(huán)己基CyM 環(huán)己基甲基DIPEA 二異丙基乙胺EDC 1-(3-二乙氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺HOBT1-羥基苯并三唑水合物I-amyl 異戊基I-Pn異戊基I-Pr異丙基Me 甲基2-MPUBA 4-(N=-(2-甲苯基)脲)苯甲氨基2-MPUPA 4-(N=-(2-甲苯基)脲)苯乙?；鵑MP N-甲基吡咯烷酮NMM N-甲基嗎啉Ph 苯基PUPA4-(N=-苯基脲)苯乙酰基Su 琥珀酰亞胺基TBTU四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-
1,1,3,3-四甲基TEA 三乙胺TFA 三氟乙酸THAM三(羥基)甲氨基甲烷定義本文單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烷基”指的是含有1至10個(gè)、優(yōu)選為1至6個(gè)、更優(yōu)選為1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。這樣的基團(tuán)例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、癸基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烯基”指的是含有2至10個(gè)、優(yōu)選為2至6個(gè)、更優(yōu)選為2至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基。這樣的基團(tuán)例子包括但不限于乙烯基、E-與Z-丙烯基、異丙烯基、E-與Z-丁烯基、E-與Z-異丁烯基、E-與Z-戊烯基、癸烯基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“炔基”指的是含有2至10個(gè)、優(yōu)選為2至6個(gè)、更優(yōu)選為2至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈炔基。這樣的基團(tuán)例子包括但不限于乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸炔基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“環(huán)烷基”指的是含有3-12個(gè)、優(yōu)選為3-8個(gè)、更優(yōu)選為3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，并且可選是芳基稠合的。這樣的基團(tuán)例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“環(huán)烯基”指的是含有4至8個(gè)、優(yōu)選為5或6個(gè)碳原子和一條或多條雙鍵的碳環(huán)。這樣的環(huán)烯基例子包括但不限于環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)戊二烯基等等。
術(shù)語“芳基”指的是碳環(huán)芳族基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組苯基、萘基、茚基、茚滿基、薁基、芴基和蒽基；或雜環(huán)芳族基團(tuán)，選自由下列基團(tuán)組成的組呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、異噁唑基、異噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,3-三唑基、1,3,4-噻二唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、1,3,5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、異吲哚基、3H-吲哚基、二氫吲哚基、苯并[b]呋喃基、2,3-二氫苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、1,8-二氮雜萘基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、吡唑并[1,5-c]三嗪基等等。
如本說明書所定義的“芳基”、“環(huán)烷基”和“環(huán)烯基”可以獨(dú)立地含有至多三個(gè)取代基，取代基獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組鹵素、羥基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、烯基、炔基、氰基、羧基、碳烷氧基、Ar’取代的烷基、Ar’取代的烯基或炔基、1,2-二氧亞甲基、1,2-二氧亞乙基、烷氧基、烯氧基或炔氧基、Ar’取代的烷氧基、Ar’取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯氨基或炔氨基、Ar’取代的烷基氨基、Ar’取代的烯氨基或炔氨基、Ar’取代的羰基氧基、烷基羰基氧基、脂族或芳族?；?、Ar’取代的酰基、Ar’取代的烷基羰基氧基、Ar’取代的羰基氨基、Ar’取代的氨基、Ar’取代的氧基、Ar’取代的羰基、烷基羰基氨基、Ar’取代的烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、Ar’取代的烷氧基羰基氨基、Ar’氧基羰基氨基、烷基磺酰氨基、單或雙(Ar’磺酰)氨基、Ar’取代的烷基磺酰氨基、嗎啉代羰基氨基、硫嗎啉代羰基氨基、N-烷基胍基、N-Ar’胍基、N,N-(Ar’，烷基)胍基、N,N-(Ar’,Ar’)胍基、N,N-二烷基胍基、N,N,N-三烷基胍基、N-烷基脲、N,N-二烷基脲、N-Ar’脲、N,N-(Ar’，烷基)脲、N,N-(Ar’)2脲、芳烷氧基羰基取代的烷基、芳烷基氨基羰基、硫代芳氧基等等；其中“Ar’”與芳基相似，但是含有至多三個(gè)取代基，取代基選自由下列基團(tuán)組成的組鹵素、羥基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、烯基、炔基、1,2-二氧亞甲基、1,2-二氧亞乙基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、烷基氨基、烯氨基或炔氨基、烷基羰基氧基、脂族或芳族酰基、烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、烷基磺酰氨基、N-烷基或N,N-二烷基脲。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳烷基”指的是芳基取代的烷基，其中的術(shù)語“烷基”和“芳基”定義同上。適當(dāng)?shù)姆纪榛影ǖ幌抻诒郊谆?、苯乙基、苯己基、二苯甲基、吡啶甲基、四唑甲基、呋喃甲基、咪唑甲基、吲哚甲基、噻吩丙基等等?br> 單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烷氧基”指的是烷基醚基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。適當(dāng)?shù)耐榛鸦鶊F(tuán)例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烯氧基”指的是式烯基-O-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烯基”定義同上，其條件是該基團(tuán)不是烯醇醚。適當(dāng)?shù)南┭趸影ǖ幌抻谙┍趸?、E-與Z-3-甲基-2-丙烯氧基等等。單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“炔氧基”指的是式炔基-O-基團(tuán)，其中的術(shù)語“炔基”定義同上，其條件是該基團(tuán)不是炔醇醚。適當(dāng)?shù)娜惭趸影ǖ幌抻诒惭趸?-丁炔氧基等等。
術(shù)語“硫代烷氧基”指的是式烷基-S-的硫醚基團(tuán)，其中的烷基定義同上。
單獨(dú)或與其他取代基結(jié)合使用的術(shù)語“烷基氨基”指的是單或二烷基取代的氨基(也就是式烷基-NH-或(烷基)2-N-基團(tuán))，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。適當(dāng)?shù)耐榛被影ǖ幌抻诩装被⒁野被?、丙氨基、異丙氨基、叔丁氨基、N,N-二乙氨基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烯氨基”指的是式烯基-NH-或(烯基)2-N-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烯基”定義同上，其條件是該基團(tuán)不是烯胺。這樣的烯氨基的一個(gè)例子是烯丙氨基。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“炔氨基”指的是式炔基-NH-或(炔基)2-N-基團(tuán)，其中的術(shù)語“炔基”定義同上，其條件是該基團(tuán)不是胺。這樣的炔氨基的一個(gè)例子是丙炔氨基。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳氧基”指的是式芳基-O-基團(tuán)，其中的芳基定義同上。芳氧基例子包括但不限于苯氧基、萘氧基、吡啶氧基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳基氨基”指的是式芳基-NH-基團(tuán)，其中的芳基定義同上。芳基氨基例子包括但不限于苯氨基(酰替苯胺)、萘氨基、2-、3-及4-吡啶氨基等等。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“二芳基”指的是式芳基-芳基-基團(tuán)，其中的術(shù)語“芳基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“硫代芳基”指的是式芳基-S-基團(tuán)，其中的術(shù)語“芳基”定義同上。一個(gè)硫代芳基的例子是苯硫基。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳基稠合的環(huán)烷基”指的是與芳基共用兩個(gè)鄰位原子的環(huán)烷基，其中的術(shù)語“環(huán)烷基”和“芳基”定義同上。一個(gè)芳基稠合的環(huán)烷基的例子是苯并稠合的環(huán)丁基。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“脂族?；敝傅氖莵碓从谕?、烯或炔羧酸的式烷基-CO-、烯基-CO-和炔基-CO-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”、“烯基”和“炔基”定義同上。這樣的脂族酰基的例子包括但不限于乙?；?、丙酰基、丁?；⑽祯；?、4-甲基戊酰基、丙烯?；?、巴豆基、丙炔?；?、甲基丙炔?；鹊取?br> 單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳族酰基”或“芳?；敝傅氖鞘椒蓟?CO-基團(tuán)，其中的術(shù)語“芳基”定義同上。適當(dāng)?shù)姆甲艴；影ǖ幌抻诒郊柞；?-鹵代苯甲?；?、4-羧基苯甲?；?、萘甲?；⑦拎驶鹊?。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“雜環(huán)酰基”指的是式雜環(huán)-CO-基團(tuán)，其中的術(shù)語“雜環(huán)”定義如下。適當(dāng)?shù)碾s環(huán)?；影ǖ幌抻谒臍溥秽驶?、哌啶羰基、四氫噻吩羰基等等。
單獨(dú)或與其他術(shù)語結(jié)合使用的術(shù)語“嗎啉代羰基”和“硫嗎啉代羰基”分別指的是N-羰基化的嗎啉代和N-羰基化的硫嗎啉代基團(tuán)。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烷基羰基氨基”指的是式烷基-CONH基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烷氧基羰基氨基”指的是式烷基-OCONH-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“烷基磺酰氨基”指的是式烷基-SO2NH-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“芳基磺酰氨基”指的是式芳基-SO2NH-基團(tuán)，其中的術(shù)語“芳基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“N-烷基脲”指的是式烷基-NH-CO-NH-基團(tuán)，其中的術(shù)語“烷基”定義同上。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“N-芳基脲”指的是式芳基-NH-CO-NH-基團(tuán)，其中的術(shù)語“芳基”定義同上。
術(shù)語“鹵素”意為氟、氯、溴和碘。
單獨(dú)或結(jié)合使用的術(shù)語“雜環(huán)”指的是含有至少一個(gè)環(huán)內(nèi)N、O或S原子的非芳族的3至10元環(huán)。該雜環(huán)可選是芳基稠合的。該雜環(huán)還可以可選被一至三個(gè)取代基取代，取代基獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組氫、鹵素、羥基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、芳烷基、烯基、炔基、芳基、氰基、羧基、碳烷氧基、Ar’取代的烷基、Ar’取代的烯基或炔基、1,2-二氧亞甲基、1,2-二氧亞乙基、烷氧基、烯氧基或炔氧基、Ar’取代的烷氧基、Ar’取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯氨基或炔氨基、Ar’取代的烷基氨基、Ar’取代的烯氨基或炔氨基、Ar’取代的羰基氧基、烷基羰基氧基、脂族或芳族?；?、Ar’取代的?；?、Ar’取代的烷基羰基氧基、Ar’取代的羰基氨基、Ar’取代的氨基、Ar’取代的氧基、Ar’取代的羰基、烷基羰基氨基、Ar’取代的烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、Ar’取代的烷氧基羰基氨基、Ar’氧基羰基氨基、烷基磺酰氨基、單或雙(Ar’磺酰)氨基、Ar’取代的烷基磺酰氨基、嗎啉代羰基氨基、硫嗎啉代羰基氨基、N-烷基胍基、N-Ar’胍基、N,N-(Ar’，烷基)胍基、N,N-(Ar’,Ar’)胍基、N,N-二烷基胍基、N,N,N-三烷基胍基、N-烷基脲、N,N-二烷基脲、N-Ar’脲、N,N-(Ar’，烷基)脲、N,N-(Ar’)2脲、芳烷氧基羰基取代的烷基、羧基烷基、氧、芳基磺?；头纪榛被驶?br> 術(shù)語“離去基團(tuán)”一般指的是易被親核試劑取代的基團(tuán)，例如胺、醇或硫醇親核試劑。這樣的離去基團(tuán)是本領(lǐng)域所熟知的，包括羧酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基苯并三唑、鹵素(鹵化物)、三氟甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、烷氧基、硫代烷氧基等等。
術(shù)語“疏水基團(tuán)”指的是抗混合水或吸收水的基團(tuán)。這樣的疏水基團(tuán)的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、苯基、芐基、萘基、N-芐基咪唑基、甲基硫乙基等等。
術(shù)語“酸性官能團(tuán)”指的是其中具有酸性氫的基團(tuán)。這樣的基團(tuán)例子包括但不限于羧酸、四唑、咪唑、羥基、巰基、羥基氨基羰基、磺酸、亞磺酸、磷酸和膦酸。
術(shù)語“適當(dāng)被保護(hù)的氨基酸的活化衍生物”和“活化的取代的苯乙酸衍生物”指的是羧酸衍生物，其中的-OH基被高級離去基團(tuán)取代。活化的酸衍生物例子包括但不限于相應(yīng)的酰鹵(例如酰氟、酰氯和酰溴)、相應(yīng)的活化的酯(例如硝基苯酯，1-羥基苯并三唑、即HOBT的酯，或羥基琥珀酰亞胺、即HOSu的酯)，和其他本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)衍生物。
術(shù)語“氨基酸側(cè)鏈”指的是連接在氨基酸α碳上的側(cè)鏈。氨基酸側(cè)鏈的例子分別包括但不限于丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸和天冬氨酸的甲基、異丙基、芐基和羧甲基。
術(shù)語“被保護(hù)的或保護(hù)基團(tuán)”指的是一種適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團(tuán)，該基團(tuán)可以連接在分子的官能團(tuán)上，然后在后面的步驟中除去之，以露出完整的官能團(tuán)和分子。適合于不同官能團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)例子在下列文獻(xiàn)中有所描述T.W.Greene和P.G.M.Wuts，《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》第2版，John Wiley and Sons(1991)；L.Fieser和M.Fieser，《有機(jī)合成的Fieser和Fieser=s試劑》，John Wiley and Sons(1994)；L.Paquette編《有機(jī)合成試劑百科全書》，John Wiley and Sons(1995)。
本發(fā)明化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)不對稱碳原子，于是出現(xiàn)了外消旋物及外消旋混合物、單一的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體混合物和個(gè)別非對映異構(gòu)體。所有這些化合物的異構(gòu)體形式均清楚地包含在本發(fā)明中。每個(gè)立體構(gòu)型的碳可以是R或S構(gòu)型。盡管本申請中舉例說明的具體化合物可以描述為特定立體化學(xué)構(gòu)型，在任何給定手性中心具有相反立體化學(xué)的化合物或其混合物也都預(yù)期是本發(fā)明的一部分。盡管氨基酸和氨基酸側(cè)鏈可以描述為特定的構(gòu)型，其天然形式和非天然形式也都預(yù)期是本發(fā)明的一部分。
從上述定義來看，在整個(gè)本申請中使用的其他化學(xué)術(shù)語對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是易于理解的。術(shù)語可以單獨(dú)或結(jié)合使用。優(yōu)選的和更優(yōu)選的基團(tuán)鏈長適用于所有這樣的組合。
B·說明本發(fā)明化合物由下列發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生現(xiàn)有的Ⅱb/Ⅲa整合素抑制化合物可以轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制化合物，并且，通過使獨(dú)特的VLA-4整合素骨架與Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子結(jié)合，可以制得Ⅱb/Ⅲa抑制化合物。已知的Ⅱb/Ⅲa抑制劑可以從結(jié)構(gòu)上進(jìn)行描述，包括一個(gè)“特異性決定因子”和一個(gè)“整合素骨架”?！疤禺愋詻Q定因子”是這樣的化合物部分，它賦予所述化合物所需的對結(jié)合對象的選擇性?！罢纤毓羌堋笔撬龌衔锏钠溆嗖糠?。例如，一種典型的Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子可含有堿性的氮官能團(tuán)，而整合素骨架可表示具有酸性官能團(tuán)的部分。
例如，本發(fā)明的新化合物包含式Ⅰ化合物A-B(Ⅰ)其中A是一個(gè)特異性決定因子，B是一個(gè)整合素骨架。更具體來說，出于本發(fā)明的目的，式Ⅰ化合物具有VLA-4抑制活性，并且，A包含一個(gè)特異性決定因子，該決定因子不賦予該化合物顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B是來源于一種Ⅱb/Ⅲa抑制劑的。本文所用的術(shù)語“顯著的活性”意為具有小于約50μM的IC50值。
包含一個(gè)VLA-4特異性決定因子和一個(gè)Ⅱb/Ⅲa骨架的VLA-4抑制劑在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，式Ⅰ化合物是一種VLA-4抑制劑，其中A是一個(gè)VLA-4特異性決定因子，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B是一個(gè)整合素骨架，該骨架來源于具有Ⅱb/Ⅲa活性的分子。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，B是一個(gè)整合素骨架，該骨架來源于表2所述的任意一個(gè)Ⅱb/Ⅲa抑制劑。不過，不言而喻的是根據(jù)申請人的發(fā)明，利用要求保護(hù)的方法，事實(shí)上任何具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物都能轉(zhuǎn)化為VLA4抑制劑，其方法是除去Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，并用VLA-4特異性決定因子取代之。下文將對轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行詳細(xì)解釋。
當(dāng)來自Ⅱb/Ⅲa抑制劑的整合素骨架連接到VLA-4特異性決定因子上，意外地生成具有VLA-4抑制活性的化合物。而且，所得一類VLA-4抑制劑證明，相對于作為骨架來源的Ⅱb/Ⅲa抑制劑，不具有任何顯著的Ⅱb/Ⅲa抑制活性。因此，本發(fā)明提供了VLA-4抑制劑，該抑制劑包含任何來源于具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物的整合素骨架，和任何VLA-4特異性決定因子。
要求保護(hù)的本發(fā)明也包含了這些具有細(xì)胞粘連抑制活性、更優(yōu)選為VLA-4抑制活性的化合物的制備方法。另外，本文還公開了含有這些化合物的藥物組合物的制備方法，以及使用它們治療的方法。
這里，申請人提供了具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物的鑒別方法，和具有VLA-4抑制活性的化合物的鑒別方法。申請人進(jìn)一步描述了任何具有Ⅲb/Ⅲa活性的化合物上“骨架”的鑒別方法，和任何具有VLA-4抑制活性的化合物上特異性決定因子的鑒別方法。另外還公開了將“骨架”與VLA-4特異性決定因子結(jié)合、生成一種新穎的VLA-4抑制劑的方法。
將具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物轉(zhuǎn)化為新穎的具有VLA-4抑制活性的化合物的方法一般來說，本發(fā)明提供了將具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物轉(zhuǎn)化為新穎的具有VLA4抑制活性的化合物的方法，并且不保留顯著的Ⅱb/Ⅲa活性。一般該方法涉及鑒別Ⅱb/Ⅲa抑制劑中的整合素骨架，和鑒別VLA-4特異性決定因子。特異性決定因子是賦予化合物分子結(jié)合活性的化合物部分。一旦這些結(jié)構(gòu)被鑒別出來，人們就能夠?qū)ⅱ騜/Ⅲa整合素骨架與來自具有VLA-4抑制活性的化合物的特異性決定因子結(jié)合，得到一種新穎的VLA-4抑制劑。
因此在一個(gè)基本的實(shí)施方式中，本領(lǐng)域技術(shù)人員首先鑒別具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物。具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，并且是易于得到的，例如參見表2和結(jié)合在發(fā)明背景部分中的參考文獻(xiàn)。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以利用任何這些已知的化合物。另一種選擇是，人們可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的分析方法確定某種化合物是否具有Ⅱb/Ⅲa活性。如果分析結(jié)果為陽性，那么該骨架可用于本發(fā)明。Ⅱb/Ⅲa抑制活性分析是本領(lǐng)域所熟知的。例如，通過評價(jià)化合物抑制Ⅱb/Ⅲa受體與-例如-已知Ⅱb/Ⅲa配體、如纖維蛋白原或纖連蛋白，或與已知拮抗劑結(jié)合的能力，來證明Ⅱb/Ⅲa活性。(WO93/00095，特別結(jié)合在此作為參考。)另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過血小板聚集試驗(yàn)?zāi)軌蛟u價(jià)上述與配體的結(jié)合。
很多現(xiàn)有的Ⅱb/Ⅲa抑制劑含有一個(gè)包括苯基脒部分的特異性決定因子，出于本發(fā)明的目的，該苯基脒部分起到所述Ⅱb/Ⅲa抑制劑轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制劑的取向點(diǎn)的作用。在不含有苯基脒部分的抑制劑中，現(xiàn)有的堿性官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為“虛擬的”苯基脒部分，下文對此作進(jìn)一步詳細(xì)解釋。因此，按照本文講述方法，通過取代Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，事實(shí)上人們能夠?qū)⑷魏尉哂孝騜/Ⅲa活性的化合物轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制劑。
利用任何具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物作為原料，下列講述方法將使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠制備出要求保護(hù)的VLA-4抑制劑。于是基于下列講述方法，人們能夠掌握任何Ⅱb/Ⅲa化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且能夠預(yù)知具有VLA-4抑制活性的化合物結(jié)構(gòu)。申請人已經(jīng)將該講述方法內(nèi)容成功地應(yīng)用于多數(shù)化合物，并測定出以這種方式鑒別出的化合物實(shí)際上確實(shí)具有VLA-4抑制活性。
講述方法Ⅰ在某些實(shí)施方式中，由技術(shù)人員鑒別具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，例如下式

正如上文所討論的那樣，為了將該Ⅱb/Ⅲa結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為具有VLA-4抑制活性的結(jié)構(gòu)，人們必須用VLA-4特異性決定因子取代Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子。
已知的Ⅱb/Ⅲa抑制劑通常具有含一個(gè)苯基脒部分或其他堿性官能團(tuán)的特異性決定因子。例如，在上面的Ⅱb/Ⅲa抑制劑中(US5239113，在此作為參考)，特異性決定因子含一個(gè)苯基脒部分。為了將該化合物轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制化合物，“除去”該苯基脒，加上VLA-4特異性決定因子。
例如在該轉(zhuǎn)化反應(yīng)的第一步中，上述化合物中苯基脒部分的苯環(huán)可以變成二苯基脲的內(nèi)部苯環(huán)。在第二步中，除去脒官能團(tuán)，并加上脲的其余部分。在本例中，連接特異性決定因子與整合素骨架之間的鍵是鄰近脲內(nèi)部苯環(huán)的酰胺鍵。該講述方法內(nèi)容的步驟不限于含脒的苯環(huán)。這些步驟也能以同樣方式應(yīng)用于-例如-含脒官能團(tuán)的哌嗪和哌啶環(huán)。

由該講述方法內(nèi)容產(chǎn)生的化合物是一種新穎的具有VLA-4抑制活性的化合物。它一般含有一個(gè)Ⅱb/Ⅲa抑制劑的整合素骨架和一個(gè)VLA-4特異性決定因子、即脲。該化合物不具有顯著的Ⅱb/Ⅲa抑制活性。
講述方法Ⅱ不是所有的Ⅱb/Ⅲa抑制劑都具有苯基脒部分。于是為了將沒有苯基脒部分的Ⅱb/Ⅲa化合物轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制劑，可以利用堿性官能團(tuán)作為參照點(diǎn)。例如，在下面的Ⅱb/Ⅲa抑制劑中(WO92/19595的，在此作為參考)，技術(shù)人員將利用特異性決定因子的堿性官能團(tuán)、即哌啶氮作為參照點(diǎn)，從理論上產(chǎn)生一個(gè)“虛擬的”苯基脒。

通過在哌啶3位與內(nèi)酰胺氮的α碳之間訂出“虛擬的”鍵，可實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。該“虛擬的”鍵在下面的結(jié)構(gòu)中以虛線表示。“虛擬”環(huán)上的基團(tuán)的取向優(yōu)選為對位。

產(chǎn)生該“虛擬”苯基脒的第二步是除去不需要的鍵和原子，生成含有“虛擬的”對位取代的苯基脒的結(jié)構(gòu)，如下所示。

第三，由于“虛擬的”特異性決定因子含一個(gè)苯基脒部分，在講述方法Ⅰ步驟后可以訂出具有VLA-4活性的化合物結(jié)構(gòu)。在本例中，連接特異性決定因子與整合素骨架之間的鍵是將脲內(nèi)部苯環(huán)連接到內(nèi)酰胺氮上的鍵。

講述方法Ⅲ在其他的實(shí)施方式中，最初的Ⅱb/Ⅲa化合物可以具有一個(gè)含胍基的特異性決定因子。如講述方法Ⅱ，可以利用該堿性官能團(tuán)作為將Ⅱb/Ⅲa抑制劑轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制劑的參照點(diǎn)。

在上面的結(jié)構(gòu)中(WO93/08174，在此作為參考)，“虛擬的”苯基脒是由內(nèi)部胍氮和鄰近酰胺羰基的α碳構(gòu)成的。這種構(gòu)成的選擇是使“虛擬”環(huán)上的基團(tuán)為優(yōu)選的對位取向?！疤摂M”鍵在下面的結(jié)構(gòu)中以虛線表示。

如前文所述，將脒官能團(tuán)除去并用脲部分的其余部分取代。本例中連接的鍵是酰胺鍵。在某些實(shí)施方式中，在連接鍵處或鄰近連接鍵的位置加入官能團(tuán)是可取的。于是在本例中，在脲內(nèi)部苯環(huán)與酰胺羰基之間插入可選的亞甲基。因此具有下面結(jié)構(gòu)的化合物具有VLA-4抑制活性，而沒有顯著的Ⅱb/Ⅲa活性。

講述方法Ⅳ在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，某些最初的Ⅱb/Ⅲa化合物具有4,4’-雙哌啶部分作為特異性決定因子，如下結(jié)構(gòu)所示(WO 94/14776，在此作為參考)。

本例類似于講述方法Ⅱ；“虛擬”環(huán)是如下在雙哌啶系統(tǒng)的3位與3’位碳之間生成的

如前文講述方法，除去不需要的原子，使所得“虛擬”環(huán)是對位取代的。

除去脒官能團(tuán)，如講述方法Ⅰ構(gòu)成脲。本例中，連接的鍵是酰胺鍵。在某些實(shí)施方式中，在連接鍵處修飾官能團(tuán)是可取的。因此在這種情況下，突出的酰胺鍵可能反轉(zhuǎn)。由該轉(zhuǎn)化反應(yīng)得到的化合物具有對VLA-4的抑制活性，而沒有顯著的Ⅱb/Ⅲa活性。

講述方法Ⅳ的步驟可以應(yīng)用于具有類似的Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子的結(jié)構(gòu)，例如但不限于4-哌嗪基苯基、4-吡啶基哌嗪基、4-哌啶基哌嗪基、4-哌啶基苯基和4-乙烯基哌啶基。
類似于講述方法Ⅰ-Ⅳ概述的鑒別新穎的VLA-4抑制化合物的方法可以應(yīng)用于在其特異性決定因子中含有官能團(tuán)的Ⅱb/Ⅲa抑制劑，特異性決定因子例如脒基苯基、雙哌啶基、哌啶基、芐氨基、吡啶基、氨基吡啶基、烷基氨基、脒基哌嗪基、胍基等等。因此，這些分析類似于上文特別說明的內(nèi)容。進(jìn)一步地，上述講述方法的應(yīng)用不僅是鑒別特異性決定因子和整合素骨架，而且-不履行地-還鑒別連接兩部分之間的鍵。因此，Ⅱb/Ⅲa抑制劑的特異性決定因子部分明顯有別于整合素骨架，使VLA-4抑制化合物將由特異性決定因子的適當(dāng)交換而產(chǎn)生。此處進(jìn)行分析的VLA-4抑制劑可以在連接VLA-4特異性決定因子與整合素骨架之間的鍵處或鄰近該鍵的位置進(jìn)行官能團(tuán)的進(jìn)一步延長、縮短、反轉(zhuǎn)或取代。該連接的官能團(tuán)包括但不限于C1-C3烷基、C1-C3烯基、C1-C3炔基、酰胺、酯、醚和硫醚。不過，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，這樣的改變被認(rèn)為是顯而易見的，任何變化將根據(jù)所需的化合物特征而作出。進(jìn)一步地，盡管講述方法Ⅰ-Ⅳ都提供了鄰甲苯基脲基苯基部分包含VLA-4特異性決定因子的介紹，不言而喻的是任何VLA-4特異性決定因子都能夠與任何其他本申請另述的決定因子進(jìn)行交換。因此，上述講述方法使本領(lǐng)域技術(shù)人員事實(shí)上能夠?qū)⑷魏尉哂孝騜/Ⅲa抑制活性的化合物轉(zhuǎn)化為VLA-4抑制劑。
講述方法Ⅴ在另一種實(shí)施方式中，任何VLA-4特異性決定因子一旦被鑒別出來，就能夠與任何其他決定因子進(jìn)行交換，從而得到新穎的具有VLA-4抑制活性的化合物。例如，下列化合物是如上所述得到的VLA-4抑制劑。

連接的鍵是酰胺鍵。因此，VLA-4特異性決定因子是鄰甲苯基脲基苯乙酰部分。它可以整個(gè)被不同的VLA-4特異性決定因子取代，例如下述的吲哚羰基氨基苯乙酰部分。該化合物具有VLA-4抑制活性。

講述方法Ⅵ還有另一種實(shí)施方式，VLA-4特異性決定因子可以被取代，連接的鍵也可以如上講述方法Ⅳ討論的內(nèi)容被修飾。例如講述方法Ⅴ的鄰甲苯基脲基苯乙酰部分可以如下所示，被VLA-4特異性決定因子鄰羥基苯乙炔基苯乙?；〈?。該可供選擇的VLA-4特異性決定因子在本申請中另有公開。該新穎的化合物具有VLA-4抑制活性。

在第二步中，連接的酰胺鍵例如可以被所述的醚鍵代替。

由于能夠在連接鍵處或鄰近該鍵的位置進(jìn)行這樣一種官能團(tuán)的置換，醚鍵的氧原子可能代替兩個(gè)突出的碳中的任一個(gè)而被固定。由該轉(zhuǎn)化反應(yīng)產(chǎn)生的化合物具有VLA-4抑制活性。因此，講述方法Ⅴ和Ⅵ使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在保留選擇性VLA-4抑制活性的同時(shí)，可預(yù)知地置換VLA-4特異性決定因子，以及在連接的鍵上修飾官能團(tuán)。
本發(fā)明的組合物本發(fā)明提供了一大類新穎的化合物，該化合物通過抑制配體與其受體結(jié)合，能夠抑制以VLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞粘連。這些化合物是由式Ⅰ所代表的A-B(Ⅰ)其中A是一個(gè)特異性決定因子，B是一個(gè)整合素骨架。具體來說，A包含一個(gè)VLA-4決定因子，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B包含一個(gè)整合素骨架，該骨架優(yōu)選為來自一種Ⅱb/Ⅲa抑制劑的整合素骨架。更具體來說，本發(fā)明包含了式Ⅰ化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物，其中A是一個(gè)特異性決定因子，選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；可選被N-烷基或N-芳基氨基取代的脂族酰基；芳?；?；雜環(huán)酰基；烷基或芳基磺?；?；可選被芳基取代的芳烷基羰基；雜環(huán)烷基羰基；烷氧基羰基；芳烷氧基羰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基；雜環(huán)烷氧基羰基；烷基氨基羰基；可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基；烷基磺酰基；芳烷基磺酰基；芳基磺?；?；可選與芳基稠合的環(huán)烷基磺?；?；雜環(huán)基磺?；?；雜環(huán)基烷基磺?；?；芳烷氧基羰基；芳氧基羰基；環(huán)烷氧基羰基；雜環(huán)氧基羰基；雜環(huán)基烷氧基羰基；可選被芳基取代的單或二烷基氨基羰基；(烷基)(芳烷基)氨基羰基；單或二芳烷基氨基羰基；單或二芳基氨基羰基；(芳基)(烷基)氨基羰基；單或二環(huán)烷基氨基羰基；雜環(huán)基氨基羰基；雜環(huán)基烷基氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；可選被芳基取代的烯酰基；可選被芳基取代的烯基磺?；?；可選被芳基取代的炔?；豢蛇x被芳基取代的炔基磺?；?；環(huán)烯基羰基；環(huán)烯基磺?；?；環(huán)烷基烷?；?；環(huán)烷基磺酰基；芳基芳酰基；二芳基磺?；煌檠趸酋；?；芳烷氧基磺酰基；烷基氨基磺?；?；芳氧基磺?；?；芳基氨基磺酰基；N-芳基脲取代的烷?；籒-芳基脲取代的烷基磺?；?；環(huán)烯基取代的羰基；環(huán)烯基取代的磺?；豢蛇x被芳基取代的烯氧基羰基；可選被芳基取代的烯氧基磺?；?；可選被芳基取代的炔氧基羰基；可選被芳基取代的炔氧基磺酰基；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基羰基；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基磺?；?；酰氨基取代的烷酰基；酰氨基取代的烷基磺酰基；氨基羰基取代的烷酰基；氨甲?；〈耐轷；话奔柞；〈耐榛酋；浑s環(huán)基烷?；浑s環(huán)基氨基磺?；?；羧基烷基取代的芳烷?；?；羧基烷基取代的芳烷基磺酰基；氧碳環(huán)稠合的芳酰基；氧碳環(huán)稠合的芳基磺?；浑s環(huán)基烷?；?；N’,N’-烷基，芳基肼基羰基；芳氧基取代的烷酰基和雜環(huán)基烷基磺?；幌┗?、炔基、環(huán)烷基、芳基稠合的環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基(“芳烷基”)、芳基取代的烯基或炔基、環(huán)烷基取代的烷基、環(huán)烯基取代的環(huán)烷基、二芳基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳基取代的烷氧基(“芳烷氧基”)、芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、N-烷基脲取代的烷基、N-芳基脲取代的烷基、烷基羰基氨基取代的烷基、氨基羰基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基取代的烷基、雜環(huán)基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、氧碳環(huán)稠合的芳基和雜環(huán)基烷基。
B優(yōu)選包含一個(gè)選自由式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc組成的組的骨架。

n=0-5；m=1-4；q=1或2；r=0或1；Y為H2或O；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R10選自由R2、NHSO2R11、NH2、OR2和NHZR12組成的組；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；芳烷氧基；R13為H或-CH2(CH2)mCH2-；R2和R7可以共同構(gòu)成-(CH2)m-；R2和R10可以共同構(gòu)成-(CH2)m-；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基。
在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，B為一個(gè)式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc結(jié)構(gòu)

其中A4選自由(CR1R2)n、O、S、NR1、SO2NR1、CONR1、CH2NR11、NR1SO2、CH2O、CH2NCOR11和CH2CONR1組成的組；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R4選自由H、OR1、SR1、NR1R2、烷基、NZR1、NSO2R11和CO2R1組成的組；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，B包含一個(gè)式Ⅴa或Ⅴb結(jié)構(gòu)

A6選自由NR1、O、S、CR1(NR1R2)和(CR1R2)r組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CR1R2)nR7組成的組；n=0-5；m=1-4；r=0或1；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P為CO或SO2；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；若R8為H，則R9為R7，或者R8和R9共同構(gòu)成一個(gè)可選被羥基、-OR1、-N1R1R2、-SR1、SO2R11、-SOR11取代的4-7元環(huán)；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
如式Ⅰ中“A”所定義的化學(xué)基團(tuán)是上述“特異性決定因子”的例子。如式Ⅰ中“B”所定義的化學(xué)基團(tuán)是上述“整合素骨架”的例子。盡管描繪了來自已知Ⅱb/Ⅲa抑制劑的“整合素骨架”的具體例子，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知這些Ⅱb/Ⅲa抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)衍生物也具有類似的Ⅱb/Ⅲa抑制活性。也可以想象到的是，來自該Ⅱb/Ⅲa衍生物或任何顯示具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物的“整合素骨架”都能夠摻入本發(fā)明的VLA-4抑制劑中。
“藥學(xué)上可接受的衍生物”表示本發(fā)明化合物的任何藥學(xué)上可接受的鹽、酯、該酯的鹽、酰胺或該酰胺的鹽。本發(fā)明也包括任何其他的化合物，該化合物在對患者給藥后能夠(直接或間接)提供本發(fā)明化合物(例如前體藥物)。本發(fā)明也包括本發(fā)明化合物的代謝物或殘余物，其特征在于能夠抑制、預(yù)防或阻止細(xì)胞粘連和細(xì)胞粘連介導(dǎo)的病變。
在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，A選自由下列基團(tuán)組成的組烷基、可選被N-烷基或N-芳基酰氨基取代的脂族?；?、芳酰基、雜環(huán)?；?、烷基及芳基磺?；⒖蛇x被芳基取代的芳烷基羰基、雜環(huán)烷基羰基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基、可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基、雜環(huán)烷氧基羰基、烷基氨基羰基、可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基。
更優(yōu)選地，A選自由下列基團(tuán)組成的組脂族酰基、芳?；?、芳烷基羰基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基和雜環(huán)烷基羰基。在其他的實(shí)施方式中，A優(yōu)選選自由(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基和(N-Ar’-脲)-對位取代的芳基組成的組。最優(yōu)選地，A選自由(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基和(N-Ar’-脲)-對位取代的苯基組成的組。
表2提供了本發(fā)明具體優(yōu)選的化合物例子。
更優(yōu)選的化合物例子包括表1中所述的化合物。
表3描述了最優(yōu)選的化合物。
進(jìn)一步地，用VLA-4結(jié)合分析法測得優(yōu)選的化合物具有約1pM至約10μM的IC50。更優(yōu)選的抑制劑具有小于約100nM的IC50，更優(yōu)選為約1pM至約100nM，最優(yōu)選為約1pM至10nM。
新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑及其制備方法在其他的實(shí)施方式中，申請人發(fā)現(xiàn)他們能夠成功地將新穎的具有一個(gè)此前沒有Ⅱb/Ⅲa存在的整合素骨架的VLA-4抑制劑轉(zhuǎn)化為新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。申請人因此進(jìn)一步證明了Ⅱb/Ⅲa和VLA-4骨架的可移植性，即產(chǎn)生新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑，并用Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子取代新VLA-4抑制劑的特異性決定因子。具體來說，通過用Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子取代VLA-4特異性決定因子，能夠?qū)⒕哂兄T如肽類骨架等新骨架的VLA-4抑制劑轉(zhuǎn)化為新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。例如，有一種式Ⅰ化合物，其中A是VLA-4特異性決定因子，B是VLA-4骨架，優(yōu)選包含肽類。然后用具有Ⅱb/Ⅲa活性的特異性決定因子取代原來的A，從而產(chǎn)生一個(gè)新穎的具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物。
這個(gè)概念從化合物A得到證實(shí)，其結(jié)構(gòu)如下所示

化合物A具有VLA-4抑制活性的化合物A包含一個(gè)特異性決定因子和一個(gè)如舉例說明的整合素骨架，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性。Ⅱb/Ⅲa文獻(xiàn)中沒有該整合素骨架例子的報(bào)道。用一種Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子、例如雙哌啶基取代VLA-4特異性決定因子，得到諸如化合物B的一種化合物，它是一種有效的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。

化合物B因此在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，由PB-1和PB-2所代表的化合物也是要求保護(hù)的新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑，該化合物是將新穎的VLA-4骨架與已知的Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子結(jié)合而得到的。

其中A為任意Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，例如表2例示。
A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CR1R2)nR7組成的組；n=0-5；m=1-4；r=0、1；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P為CO或SO2；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R15和R16獨(dú)立為H或甲基；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
該轉(zhuǎn)化反應(yīng)證明，現(xiàn)在可以根據(jù)從VLA-4抑制劑中發(fā)現(xiàn)的整合素骨架設(shè)計(jì)新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。因此本發(fā)明的VLA-4抑制劑是一種新的整合素骨架來源，可用于產(chǎn)生新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。
為便于討論，申請人在本文中例舉了藥物制劑和治療方法，這些都指的是本發(fā)明的VLA-4抑制劑。不過，申請人要求保護(hù)的發(fā)明是想要包含在本文中公開的上述制劑和治療方法，這些制劑與方法包含新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑而不是要求保護(hù)的VLA-4抑制劑，或者除了要求保護(hù)的VLA-4抑制劑，還包含新穎的Ⅱb/Ⅲa抑制劑。
在本文所附的表中“Name”是指化合物名稱代碼。結(jié)構(gòu)-活性9 表1216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表1 216化合物

本發(fā)明化合物可以使用任何常規(guī)技術(shù)合成。優(yōu)選地，這些化合物是從易于得到的原料用化學(xué)方法合成的，例如α-氨基酸及其功能等價(jià)物。合成這些化合物的模塊法和匯集法也是優(yōu)選的。例如在集合法中，大部分終產(chǎn)物是在合成的最后一步中生成的，而不是通過小部分的漸增加成法來生成分子鏈。
本發(fā)明化合物也可以通過附加適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)來進(jìn)行修飾，以提高選擇的生物學(xué)性質(zhì)。這樣的修飾是本領(lǐng)域所已知的，包括提高對給定生物系統(tǒng)(例如血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))的生物學(xué)透過、提高口服利用度、提高溶解度以便注射給藥、改變代謝和改變排泄率。這些修飾的例子包括但不限于與聚乙二醇的酯化反應(yīng)、與新戊酸酯或脂肪酸取代基的衍生反應(yīng)、轉(zhuǎn)化為氨基甲酸酯、芳環(huán)的羥基化反應(yīng)和芳環(huán)中的雜原子取代反應(yīng)。
遍及本申請所用的術(shù)語“患者”指的是哺乳動(dòng)物，包括人。術(shù)語“細(xì)胞”指的是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括人細(xì)胞。
一旦合成后，按照本發(fā)明的化合物的活性和VLA-4或Ⅱb/Ⅲa特異性可以利用體外和體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行測定和/或確認(rèn)。
例如，通過測定阻斷VLA-4表達(dá)細(xì)胞與纖連蛋白或CS1覆蓋的板結(jié)合所需的抑制劑濃度，可以測量這些化合物的細(xì)胞粘連抑制活性。在該分析中，微量滴定孔用纖連蛋白(含有CS-1序列)或CS-1覆蓋。如果用的是CS-1，為了與孔結(jié)合，它必須與一種載體蛋白共軛，例如牛血清白蛋白。一旦孔被覆蓋，共同加入不同濃度的供試化合物和適當(dāng)標(biāo)記的VLA-4表達(dá)細(xì)胞。另一種選擇是，可以先加入供試化合物，使其在細(xì)胞的加入前與覆蓋的孔進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞在孔中培養(yǎng)至少30分鐘。培養(yǎng)后，將孔排空并洗滌。測量對結(jié)合的抑制作用，方法是對每種濃度的供試化合物以及不含有供試化合物的對照品，定量測定結(jié)合到板上的熒光或放射性。
本分析法可以利用的VLA-4表達(dá)細(xì)胞包括Ramos細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、A375黑素瘤細(xì)胞以及人外周血淋巴細(xì)胞(PBLs)。這些細(xì)胞是商業(yè)上可得到的，并且如果需要的話，是可以進(jìn)行熒光或放射性標(biāo)記的。
也可以利用直接結(jié)合分析法(“DBA”)來定量測定本發(fā)明化合物的抑制活性。例如在直接結(jié)合分析中，含有連接在IgG1分子鉸鏈區(qū)上方的VCAM的前兩個(gè)免疫球蛋白功能區(qū)(D1D2)的VCAM-IgG融合蛋白與一種標(biāo)記酶共軛，例如堿性磷酸酶(“AP”)。PCT申請WO 90/13300描述了該VCAM-IgG融合物的合成，其公開內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。該融合物與標(biāo)記酶的共軛可以通過本領(lǐng)域所熟知的交聯(lián)方法實(shí)現(xiàn)。
然后將VCAM-IgG酶共軛物置于多孔滴定板的孔中，例如微孔多篩網(wǎng)測定系統(tǒng)(Millipore Multiscreen Assay System)(Millipore公司，Bedford,MA)中所含有的多孔滴定板。然后向孔中加入不同濃度的供試抑制化合物，隨后加入VLA-4表達(dá)細(xì)胞。一起混合細(xì)胞、化合物和VCAM-IgG酶共軛物，在室溫下培養(yǎng)。
培養(yǎng)后，孔用真空排空，留下細(xì)胞和所有結(jié)合的VCAM。通過加入一種適當(dāng)?shù)呐cVCAM-IgG共軛的酶的比色底物，測定反應(yīng)產(chǎn)物的量，來定量測定結(jié)合的VCAM。反應(yīng)產(chǎn)物減少，說明結(jié)合抑制活性增加。規(guī)程具體描述如下A·分析用板的準(zhǔn)備1·在室溫下，用阻斷緩沖液(1x磷酸鹽緩沖鹽水、0.1％吐溫20、1％BSA)以200∶1/孔阻斷96孔微孔多篩網(wǎng)測定系統(tǒng)的滴定板1至少1小時(shí)。1微孔多篩網(wǎng)測定系統(tǒng)(Millipore公司，Bedford,MA)96池滴定板(商品目錄#MAHV N45 50)真空源(商品目錄#XX55000 00)真空歧管(商品目錄#MAVM 096 01)2·用真空歧管排空滴定板，用200μl/孔的分析緩沖液(Tris緩沖鹽水、0.1％BSA、2mM葡萄糖、10mM HEPES,pH7.5)，在兩次洗滌中間排空滴定板。重復(fù)兩次。然后將滴定板在紙上吸干，以除去過量的緩沖液。
B·向滴定板加入分析試劑
3·在分析緩沖液中制備4μg/ml VCAMIg-AP溶液(與VCAMIg偶合的堿性磷酸酶)，用0.2低蛋白結(jié)合注射濾器(Gelman Sciences#4454)過濾。由該儲(chǔ)備溶液制備分析緩沖液中的VCAMIg-AP的0.4μg/ml工作溶液。向每孔中加入25∶1的0.4μg/ml VCAMIg-AP。
5·制備供試化合物在分析緩沖液中的稀釋液。濃度應(yīng)當(dāng)是所需最終濃度的4倍，一式三份。向指定的孔中加入25μl化合物稀釋液。
6·向全部結(jié)合(TB)孔中加入25μl分析緩沖液(代替供試化合物)，向非特定結(jié)合(NSB)孔中加入75μ1分析緩沖液，NSB孔是不再接受細(xì)胞的。
微孔多篩網(wǎng)分析系統(tǒng)操作與養(yǎng)護(hù)手冊7·將Jurkat細(xì)胞離心，除去細(xì)胞培養(yǎng)基，在分析緩沖液中洗滌一次。將洗滌過的Jurkat細(xì)胞再次懸浮在含有2mM MnCl2的分析緩沖液中，使其濃度為8×106/ml。上下吸移混合物，以確保細(xì)胞懸液均勻。向每孔中加入50∶1的細(xì)胞懸液，NSB孔除外。
8·輕微拍打板的側(cè)部，使內(nèi)容物充分混合。在室溫(RT)下培養(yǎng)60分鐘。
C·分析顯色9·將盤子置于真空歧管上，排空孔內(nèi)容物。用100μl/孔的洗滌緩沖液(含有1mM MnCl2的分析緩沖液)洗滌兩次。排空滴定板，在紙碗上吸干。
10·向底物緩沖液(0.1M甘氨酸、lmM ZnCl2、1mM MgCl2,pH10.5)中加入10mg/ml磷酸4-硝基苯。加入100μl/孔，在RT下培養(yǎng)精確的30分鐘。
11·加入100μl/孔的3N NaOH終止反應(yīng)。
12·在分子設(shè)備ELISA板讀數(shù)器中，讀取405nm下的96孔板數(shù)據(jù)。用SoftMax軟件分析數(shù)據(jù)。
為了評價(jià)本發(fā)明化合物的VLA-4抑制特異性，還對其他主要類型的整合素、即β2與β3，以及其他81種整合素、如VLA-5、VLA-6和α4β7進(jìn)行了分析。這些分析法可以類似于上述的粘連抑制和直接結(jié)合分析法，只要代替適當(dāng)?shù)恼纤乇磉_(dá)細(xì)胞和相應(yīng)配體即可。例如，多形核細(xì)胞(PMNs)在其表面表達(dá)β2整合素，并與ICAM結(jié)合。β3整合素涉及血小板聚集反應(yīng)，在標(biāo)準(zhǔn)血小板聚集反應(yīng)分析法中可以測量對其的抑制作用。VLA-5與Arg-Gly-Asp特異性結(jié)合，VLA-6與層粘連蛋白結(jié)合。α4β7是最近發(fā)現(xiàn)的VLA-4同系物，它也與纖連蛋白和VCAM結(jié)合。有關(guān)α4β7的特異性在一種結(jié)合分析法中測定，該分析法利用了上述VCAM-IgG-酶標(biāo)記共軛物和一種細(xì)胞系，該細(xì)胞系表達(dá)α4β7，但不是VLA-4，例如RPMI-8866或JY細(xì)胞。
一旦VLA-4抑制劑被鑒別出來，可以在體內(nèi)試驗(yàn)中進(jìn)一步描繪其特征。有一種這樣的試驗(yàn)測試了對動(dòng)物接觸過敏性的抑制作用，例如P.L.Chisholm等，“整合素α-4亞單位的單克隆抗體抑制鼠接觸過敏性反應(yīng)”，《歐洲免疫學(xué)雜志》23,pp.682-688(1993)和《最新免疫學(xué)規(guī)程》，J.E.Coligan等編，John Wiley&Sons,New York,1,PP.4.2.1-4.2.5(1991)，其公開內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。在這些試驗(yàn)中，將動(dòng)物皮膚暴露在一種刺激物下進(jìn)行致敏，例如二硝基氟苯，然后進(jìn)行輕微的物理刺激，例如用鋒利的刀刃刮擦皮膚?；謴?fù)一定階段后，用相同方法再次對動(dòng)物致敏。致敏若干天后，將動(dòng)物的一只耳朵暴露在化學(xué)刺激劑下，另一只耳朵用不含刺激劑的對照溶液處理。動(dòng)物耳朵處理完畢后立即皮下注射不同劑量的VLA-4抑制劑。通過測量處理過的耳朵對未處理的耳朵的腫脹反應(yīng)，評價(jià)與細(xì)胞粘連有關(guān)的炎癥的體內(nèi)抑制作用。用卡尺或其他適當(dāng)?shù)钠餍禍y量耳朵的厚度，代表腫脹程度。以這種方法可以鑒別出最適合于抑制炎癥的本發(fā)明抑制劑。
另一種可以用來測試本發(fā)明抑制劑的體內(nèi)試驗(yàn)是綿羊哮喘試驗(yàn)。該試驗(yàn)基本上如下述方法進(jìn)行W.M.Abraham等，“α整合素介導(dǎo)的抗原誘導(dǎo)的綿羊晚期支氣管反應(yīng)和延長的過度氣道反應(yīng)性”，《臨床檢查雜志》93,pp.776-87(1994)，其公開內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。該試驗(yàn)測量對蛔蟲屬抗原誘導(dǎo)的過敏綿羊晚期氣道反應(yīng)和氣道過度反應(yīng)性的抑制作用。
本發(fā)明化合物也可以用血小板聚集試驗(yàn)進(jìn)行測試。
本發(fā)明化合物可以以來源于無機(jī)或有機(jī)酸和堿的藥學(xué)上可接受的鹽的形式使用。在這樣的酸鹽中包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、門冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(pamoate)、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基-丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。堿鹽包括銨鹽；堿金屬鹽，例如鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽，例如鈣鹽和鎂鹽；有機(jī)堿鹽，例如二環(huán)己胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺、三(羥甲基)甲胺；氨基酸鹽，例如精氨酸、賴氨酸的鹽等等。而且，堿性含氮基團(tuán)可以被諸如下列試劑四元化低級烷基鹵，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯，例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長鏈鹵化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物，例如芐基溴和苯乙基溴及其他。從而得到可溶于或可分散于水或油中的產(chǎn)物。
本發(fā)明化合物可以配制成藥物組合物，可被口服、胃腸外、吸入噴霧、局部、直腸、鼻飼、口含、陰道內(nèi)或通過植入貯藥器給藥。本文所用的術(shù)語“胃腸外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病變部位內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
本發(fā)明藥物組合物包含任意的本發(fā)明化合物，或其藥學(xué)上可接受的衍生物，以及任意的藥學(xué)上可接受的載體。本文所用的術(shù)語“載體”包括可接受的助劑和賦型劑。可用于本發(fā)明藥物組合物的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白，例如人血清白蛋白；緩沖物質(zhì)，例如磷酸鹽；甘氨酸；山梨酸；山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂；聚乙烯吡咯烷酮；纖維素類物質(zhì)；聚乙二醇；羧甲基纖維素鈉；聚丙烯酸酯；蠟；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。
按照本發(fā)明，藥物組合物可以是無菌注射劑的形式，例如無菌可注射的水或油狀懸液。該懸液可以按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)進(jìn)行配制，并使用適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶檮┖蛻腋?。該無菌注射劑也可以是無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射的溶液或懸液，例如1,3-丁二醇溶液。這些可被利用的可接受的賦型劑和溶劑有水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌的不揮發(fā)性油是常規(guī)用來作為溶劑或懸浮介質(zhì)的。為此，可以利用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的單或二甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物，可用于注射劑的制備，也可用天然的藥學(xué)上可接受油狀物，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙烯化形式。這些油溶液或懸液也可以含有一種長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如Ph.Helv或類似的醇。
本發(fā)明藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型口服給藥，劑型包括但不限于膠囊劑、片劑、水懸液或溶液。
在口服片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。一般也可加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對口服給藥的膠囊劑來說，可用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)需要水懸液口服給藥時(shí)，將有效成分與乳化劑和懸浮劑結(jié)合。如果需要的話，也可加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。
另一種選擇是，本發(fā)明藥物組合物可以以直腸給藥用栓劑的劑型給藥。通過混合藥劑與無刺激性賦型劑，可制得栓劑，該賦型劑在室溫下為固態(tài)，但在直腸溫度下為液態(tài)，因此可在直腸中熔化并釋放藥物。這樣的物質(zhì)包括椰子油、蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明藥物組合物也可以局部給藥，尤其當(dāng)所治療的靶向部位包括了局部給藥易接近的區(qū)域或器官，包括眼部、皮膚或下部腸道疾病。對每一個(gè)這些區(qū)域或器官來說，適當(dāng)?shù)木植恐苿┦且子谥苽涞摹?br> 直腸栓劑(見上)或適當(dāng)?shù)墓嗄c劑可以實(shí)現(xiàn)下部腸道的局部用藥。也可以使用局部透皮貼劑。
對局部用藥來說，藥物組合物可以配制成適當(dāng)?shù)能浉鄤?，其中含有懸浮或溶解在一種或多種載體中的有效成分。本發(fā)明化合物的局部給藥用載體包括但不限于礦物油、液體礦脂、白礦脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。另一種選擇是，藥物組合物可以配制成適當(dāng)?shù)南磩┗蛉楦鄤?，其中含有懸浮或溶解在一種或多種藥學(xué)上可接受的載體中的有效成分。適當(dāng)?shù)妮d體包括但不限于礦物油、脫水山梨糖醇一硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨蠟基酯蠟、鯨蠟(cetearyl)醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
為了眼部用途，藥物組合物可以配制成等滲、pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的微粒化懸液，或者優(yōu)選地配制成等滲、pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的溶液，加入或不加入一種防腐劑，例如苯扎氯銨(benzylalkoniumchloride)。另一種眼用的選擇是，藥物組合物可以配制成軟膏劑，如礦脂。
本發(fā)明藥物組合物也可以配制成鼻飼氣霧劑或吸入劑，使用時(shí)借助噴霧器、干粉吸入器或計(jì)量吸入器。這樣的組合物按照藥物制劑領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備，可以制成鹽水溶液，并利用苯甲醇或其他適當(dāng)?shù)姆栏瘎?、提高生物利用度的吸收助劑、氟化碳、?或其他常規(guī)的增溶劑或分散劑。
可以與載體物質(zhì)結(jié)合生成單劑量方式的有效成分的量將因所治療對象和具體給藥方式而異。不過應(yīng)當(dāng)被理解的是，對任何具體患者的特定劑量和治療方案將取決于各種因素，包括所用特定化合物的活性、年齡、體重、一般身體狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄率、藥物組合、主治醫(yī)師的判斷和具體所治療疾病的嚴(yán)重性。有效成分的量也可取決于治療劑或預(yù)防劑，如果有預(yù)防劑的話，它是與有效成分共同給藥的。
本發(fā)明化合物有效預(yù)防、阻止或抑制細(xì)胞粘連的劑量和劑量率將取決于各種因素，例如抑制劑的性質(zhì)、患者的大小、治療目的、所治療病變的性質(zhì)、所用特定的藥物組合物和主治醫(yī)師的判斷?？捎眉s0.001至約100mg/kg體重每天的有效成分劑量水平，優(yōu)選為約0.1至約10mg/kg體重每天。
按照另一種實(shí)施方式，含有一種本發(fā)明化合物的組合物也可以包含一種附加的藥劑，選自下列藥劑組成的組皮質(zhì)類固醇、支氣管擴(kuò)張藥、平喘藥(肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑)、抗炎劑、抗風(fēng)濕劑、免疫抑制劑、抗代謝物、免疫調(diào)節(jié)劑、治牛皮癬藥和治糖尿病藥。這些藥劑中每種特定化合物可以從下面這本書中適當(dāng)?shù)慕M下列舉的化合物中選擇，標(biāo)題為《綜合醫(yī)藥化學(xué)》，英國牛津Pergamon出版社，PP.970-986(1990)，其公開內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。該組中也包括這樣的化合物，例如茶堿、柳氮磺胺吡啶和對氨基水楊酸鹽(抗炎劑)；環(huán)孢菌素、FK-506和雷帕霉素(免疫抑制劑)；環(huán)磷酰胺和甲氨蝶呤(抗代謝物)；類固醇(吸入、口服或局部給藥)和干擾素(免疫調(diào)節(jié)劑)。
按照其他的實(shí)施方式，本發(fā)明提供了預(yù)防、抑制或阻止與細(xì)胞粘連有關(guān)的炎癥和與細(xì)胞粘連有關(guān)的免疫或自體免疫反應(yīng)的方法。與VLA-4有關(guān)的細(xì)胞粘連在各種炎癥、免疫和自體免疫疾病中具有重要作用。因此，本發(fā)明化合物對細(xì)胞粘連的抑制作用可以用在炎癥、免疫和自體免疫疾病的治療或預(yù)防方法中，這些疾病包括但不限于關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、心血管疾病、血栓形成或有害的血小板聚集、同種異體移植排斥反應(yīng)、腫瘤疾病、牛皮癬、多發(fā)性硬化、CNS炎癥、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)膜炎、腎小球性腎炎及相關(guān)的炎癥性腎病、糖尿病、眼部炎癥(例如眼色素層炎)、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥和自體免疫疾病。本發(fā)明也提供了含有這些VLA-4介導(dǎo)的細(xì)胞粘連的抑制劑的藥物制劑，和使用本發(fā)明化合物和組合物抑制細(xì)胞粘連的方法。優(yōu)選地，用本發(fā)明方法治療的疾病選自哮喘、關(guān)節(jié)炎、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、心血管疾病、血栓形成或有害的血小板聚集、同種異體移植排斥反應(yīng)、腫瘤疾病、牛皮癬、多發(fā)性硬化、CNS炎癥、克羅恩氏病、眼部炎癥(例如眼色素層炎)、動(dòng)脈粥樣硬化、牛皮癬移植排斥反應(yīng)、多發(fā)性硬化、糖尿病和炎癥性腸病。
這些方法可以在單一療法中、或者與一種抗炎劑或免疫抑制劑聯(lián)合療地中，利用本發(fā)明的化合物。這樣的聯(lián)合療法包括在相同時(shí)間或不同時(shí)間將單劑量方式或多劑量方式的各藥劑給藥。
在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，所附分析數(shù)據(jù)中的英文含義如下hexanes己烷，requires需要，MeOH in CH2Cl2甲醇的CH2Cl2溶液，acetone丙酮，Yield產(chǎn)率，adduct加合物，rotomers旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，partial NMR of compound化合物的部分NMR數(shù)據(jù)，min分鐘，and和，respectively分別地。
AX7的制備A在0℃下，向β-丙氨酸叔丁酯(67mg,0.124mmol)的NMP(20mL)溶液中緩慢加入2-溴乙酸芐基酯的NMP(10mL)溶液。反應(yīng)混合物在0℃下攪拌4小時(shí)，再在RT下攪拌6小時(shí)。混合物用EtOAc(150mL)稀釋，用水(50mL×2)、飽和NaCl(30mL)洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(1∶1)作為洗脫液，得到210mg(72％)胺。在5℃下，在Et3N(167mg,1.65mmol)的存在下，向該胺(160mg,0.55mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液中滴加對茴香酰氯。在RT下攪拌18小時(shí)后，混合物用Et2O(150mL)稀釋，用5％檸檬酸(30mL)、飽和NaHCO3(30mL)、飽和NaCl(30mL)洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(2∶1)作為洗脫液，得到230mg(98％)所需產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.33(m,7H,Ar),6.80(m,2H,Ar),5.15(s,2H,Bn),4.19(m,2H),3.79(s,3H,OMe),2.62(m,2H),2.55(m,2H),1.40(s,9H)；TLC,hexanes/EtOAc(1∶1),Rf=0.43.
B在H2(1atm)氣下，將來自步驟A的化合物(170mg,0.4mmol)、10％Pd(OH)2(140mg,0.1mmol)和EtOAc(30mL)在RT下攪拌18小時(shí)?；旌衔镞^濾，濾液在減壓下濃縮，得到100mg(74％)所需化合物。1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.32(m,2H,Ar),6.88(m,2H,Ar),4.16(m,2H),3.79(s,3H,OMe),3.67(m,2H),2.56(m,2H),1.40(s,9H)；TLC,10％MeOHin CH2Cl2,Rf=0.09.
C將來自步驟B的化合物(50mg,0.148mmol)的DMF(1.0mL)溶液用EDC HCl(34mg,0.178mmol)活化15分鐘?；罨乃崤c(33mg,0.148mmol)在RT下偶合18小時(shí)。混合物用EtOAc稀釋，用5％檸檬酸、飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。有機(jī)層在減壓下濃縮，得到67mg(84％)所需化合物。1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.60-6.61(m,10H,Ar+NH),4.25-3.30(m,9H),3.13-2.48(m,4H),1.54(m,2H),1.34(s,9H),1.18(m,1H),0.84(m,6H)；MS,m/z540(C26H33N3O6of M++1requires 540).
D將來自步驟C的化合物(67mg,0.124mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液用TFA(5mL)處理。反應(yīng)混合物在RT下攪拌6小時(shí)，然后在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物在Vydac反相C18柱(22cm×25cm)上精制，用15％CH3CN/H2O(0.1％TFA)至40％CH3CN/H2O(0.1％TFA)的線性梯度洗脫，流速為10mL/min，得到AX7(10.0mg,17％分離的收率)1HNMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.94(m,1H),7.59-6.91(m,9H),4.36-4.03(m,4H),3.76(s,3H,OMe),3.53-3.11(m,4H),2.59(m,2H),1.52-0.71(m,9H)；MS,m/z484(C26H33N3O6of M++1requires 484).
BX17的制備A向2-甲胺-5-碘苯甲酸(6.93g,25mmol)和Na2CO3(2.65g)的水(70mL)溶液中滴加光氣的甲苯溶液(1.93M,20mL,38.5mmol)。在RT下攪拌4小時(shí)后，反應(yīng)混合物過濾，收集固體。固體用水洗滌(100mL×2)，干燥，得到5.9g(78％)所需產(chǎn)物。將上述固體(5.33g,17.6mmol)、鹽酸β-丙氨酸乙酯(3.07g,20mmol)、Et3N(2.23g,22mmol)和4-二甲氨基吡啶(50mg,0.41mmol)在DMF(50mL)中的混合物在60℃下加熱2小時(shí)。混合物在真空中濃縮，殘余物用EtOAc(90mL)稀釋，用水、飽和NaHCO3和飽和NaCl洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，得到5.7g(86％)所需化合物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.52-7.46(m,2H,Ar+NH),6.67(s,1H,NH),6.40(d,J=8.7Hz,1H,Ar),4.14(q,J=7.2Hz,2H),3.61(q,J=6.0Hz,2H),2.79(s,3H,N-Me),2.58(t,J=6.0Hz,3H),1.24(t,J=7.1Hz,3H)；MS,m/z399(C13H17N2O3I of M++Na requires 399).
B將來自步驟A的化合物(3.76g,10mmol)、α-溴乙酰溴(3.03g,15mmol)、CH2Cl2(25mL)和水(25mL)在RT下攪拌2小時(shí)。分離后，有機(jī)層用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，得到4.2g(85％)所需化合物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.87-7.80(m,2H,Ar),7.06(d,J=8.2Hz,1H,Ar),6.75(s,1H,NH),4.12(q,J=7.1Hz,2H),3.73-3.57(m,4H),3.14(s,3H,N-Me),2.56(t,J=5.8Hz,3H),1.22(t,J=7.1Hz,3H).
C將來自步驟B的化合物(3.1g,6.24mmol)和Cs2CO3(3.05g,9.36mmol)在DMF(20mL)中的混合物在氮、RT下攪拌2小時(shí)?；旌衔镉肊tOAc(90mL)稀釋，用水、5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(1∶2)作為洗脫液，得到1.65g(64％)所需化合物1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)8.29(d,J=1.8Hz,1H),7.76(m,1H),6.90(d,J=8.6Hz,1H),4.10(q,J=7.1Hz,2H),4.04-3.83(m,4H),3.32(s,3H,N-Me),2.77-2.56(m,2H),1.22(t,J=7.1Hz,3H)；TLC,hexane/EtOAc(1∶1),Rf=0.22.
D在CO(1atm)下，將來自步驟C的化合物(100mg,0.24mmol)、2-甲基苯脲苯胺(87mg,0.36mmol)、PdCl2(PPh3)2(17mg,0.024mmol)和Bu3N(89mg,0.48mmol)在DMF(10mL)中的混合物在100℃下加熱18小時(shí)?；旌衔镉肊tOAc(90mL)稀釋，用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用5％MeOH的CH2Cl2溶液作為洗脫液，得到40mg(30％)所需化合物1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.18(s,1H),8.55(s,1H),8.19(d,J=8.5Hz,1H),7.69(s,1H),7.41(d,J=8.3Hz,3H),7.24-7.09(m,7H),4.10(t,J=7.1Hz,2H),4.01-3.85(m,4H),3.36(s,3H,N-Me),2.70-2.59(m,2H),2.24(s,3H,Me),1.22(t,J=7.1Hz,3H)；MS,m/z580(C30H31N5O6ofM++Na requires 580)；TLC,5％MeOH in CH2Cl2,Rf=0.56.
E將來自步驟D的化合物(20mg,0.036mmol)的MeOH(4mL)溶液用LiOH(2N,2mL)處理。反應(yīng)混合物在RT下攪拌2小時(shí)，然后用TFA酸化(直至pH=5-6)。將產(chǎn)物在Vydac反相C18柱(22cm×25cm)上精制，用15％CH3CN/H2O(0.1％TFA)至27％CH3CN/H2O(0.1％TFA)的線性梯度洗脫，流速為10mL/min，得到BX7(12.0mg,63％分離的收率)1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.02(s,1H),8.34(s,1H),8.16(d,J=8.5Hz,1H),7.91-6.90(m,11H),4.11-3.75(m,4H),3.33(s,3H,N-Me),2.88-2.56(m,2H),2.24(s,3H,Me)；MS,m/z 530(C28H27N5O6of M++1 requires 530)BX31的制備A
在RT下，向3-甲基-4-硝基苯甲酸(3.62g,20mmol)的吡啶(48mL)溶液中加入苯磺酰氯(7.1g,40mmol)。攪拌10分鐘后，將混合物冷卻至5℃，加入叔丁醇(4.44g,60mmol)。所得混合物在RT下攪拌2小時(shí)。將混合物傾入冰水混合物(200mL；1∶1)中。收集固體，用水洗滌(30mL×3)。在真空下干燥后，得到4.6g(97％)的酯。
在RT下，向上述酯(3.55g,15mmol)的CCl4(50mL)溶液中加入N-溴琥珀酰亞胺(2.94g,16.5mmol)和苯甲酸基過氧化物(182mg,0.75mmol)。將混合物回流18小時(shí)。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(19∶1)作為洗脫液，得到1.90g(40％)的溴化物，為一黃色油狀物。
在RT下歷時(shí)60分鐘，向甲胺的THF溶液(2N,30mL,60mmol)中加入溴化物(1.57g,10mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液。所得混合物在RT下攪拌18小時(shí)，然后在真空中濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2(80mL)，用飽和NaHCO3(20mL)和飽和NaCl(20mL)洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(1∶1)作為洗脫液，得到810mg(61％)所需化合物，為淺黃色油狀物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.47(s,1H),8.15(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),4.02(s,2H,Bn),2.43(s,3H,Me),1.62(s,1H,NH),1.58(s,9H)；TLC,hexanes/EtOAc(1∶1),Rf=0.27.
B將來自步驟A的化合物(810mg,3.05mmol)、二叔丁基二碳酸酯(1.33g,6.1mmol)和Et3N(926mg,9.15mmol)在CH2Cl2(50mL)中的混合物攪拌18小時(shí)?；旌衔镉肅H2Cl2(50mL)稀釋，用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(3∶1)作為洗脫液，得到1.06g(95％)產(chǎn)物。
在H2(50psi)氣下，將保護(hù)的胺(1.06g,2.9mmol)、10％Pd/C(300mg,0.28mmol)和EtOH(40mL)的混合物在RT下攪拌18小時(shí)。將混合物過濾，濾液在減壓下濃縮。殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(4∶1)作為洗脫液，得到620mg(64％)所需化合物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.72-7.65(m,2H,Ar),6.56(d,J=8.3Hz,1H,Ar),5.06(s,2H,NH),4.32(s,2H,Bn),2.73(s,3H,Me),1.55(s,9H),1.45(s,9H)；TLC,hexanes/EtOAc(3∶1),Rf=0.49.
C將來自步驟B的化合物(0.62g,1.84mmol)和二甲基二羧酸乙炔酯(275mg,1.93mmol)在MeOH(30mL)中的混合物在氮?dú)庀禄亓?小時(shí)。除去過量溶劑后，得到0.85g(96％)加合物。在H2(40psi)氣下，將這些加合物(0.85g,1.78mmol)、10％Pd/C(300mg,0.28mmol)和EtOH(40mL)的混合物在RT下攪拌5小時(shí)。將混合物過濾，濾液在減壓下濃縮。殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(3∶1)作為洗脫液，得到0.75g(88％)還原產(chǎn)物。
將上述還原產(chǎn)物(0.99g,2.06mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在RT下用TFA(10mL)處理。反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)?；旌衔镌跍p壓下濃縮，得到0.68g(99％)所需產(chǎn)物，為TFA鹽1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)8.57(s,1H,NH),7.89(s,1H,Ar),7.79(d,J=9.0Hz,1H,Ar),6.76(d,J=8.8Hz,1H,Ar),6.34(d,J=8.6Hz,1H,NH),4.64(m,1H),3.64(s,3H,Me),3.61(s,3H,Me),3.05-2.87(m,2H),2.43(s,3H,N-Me)；MS,m/z 325(C15H20N2O6of M+1requires 325)；TLC,10％MeOH in CH2Cl2,Rf=0.13.
D在氮?dú)庀?，將來自步驟C的化合物(200mg,0.62mmol)和NaOMe(0.5N,2.47mL,1.23mmol)在MeOH(30mL)中的混合物回流5小時(shí)。冷卻至0℃后，加入HCl(1N,2mL)。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用MeOH/CH2Cl2(1∶9)作為洗脫液，得到110mg(82％)所需的酸，為一淺黃色固體1H NMR(DMSO-d6,300 MHz,ppm)7.58(s,1H,Ar),7.53(d,J=8.5Hz,1H,Ar),6.62(s,1H,NH),6.56(d,J=8.5Hz,1H,Ar),5.45(d,J=16.4Hz,1H,Bn),5.16(s,1H),3.92(d,J=16.6Hz,1H,Bn),3.59(s,3H,Me),2.90(s,3H,Me),2.76(m,2H)；MS,m/z293(C14H16N2O5of M+1 requires 293)；TLC,10％MeOH in CH2Cl2,Rf=0.47.
E將來自步驟D的酸(45mg,0.154mmol)的DMF(1.0mL)溶液用EDCHCl(35.5mg,0.185mmol)活化15分鐘。將活化的酸與2-甲基苯脲苯胺(41mg,0.169mmol)在RT下偶合72小時(shí)。混合物用EtOAc稀釋，用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。有機(jī)溶液在減壓下濃縮，得到所需化合物，收率為82％1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.70-6.40(m,15H),5.50(m,1H,Bn),5.11(m,1H),3.90(m,1H,Bn),3.60(s,3H,OMe),2.92(s,3H,Me),2.81-2.48(m,2H),2.23(s,3H,Me)；MS,m/z538(C28H29N5O5of M+Na requires 538).
F將來自步驟E的化合物(65mg,0.13mmol)的MeOH(3mL)溶液用LiOH水溶液(2N,1mL)處理。反應(yīng)混合物在RT下攪拌2小時(shí)，然后用TFA酸化(直至pH=5-6)。將產(chǎn)物在Vydac反相C18柱(22cm×25cm)上精制，用15％CH3CN/H2O(0.1％TFA)至32％CH3CN/H2O(0.1％TFA)的線性梯度洗脫，流速為10mL/min，得到BX31(15mg,23％分離的收率)1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.73(s,1H),8.94(s,1H),7.89-6.40(m,13H),5.52(d,J=16.6Hz,1H),5.11(m,1H),3.88(d,J=16.6Hz,1H),2.94(s,3H,NMe),2.82-2.52(m,2H),2.23(s,3H,Me)；MS,m/z 502(C27H27NsO5of M++1 requires502)BX36的制備A在RT下，向4-甲基-3-硝基苯甲酸(10g,55mmol)的吡啶(100mL)溶液中加入苯磺酰氯(19.4g,110mmol)。攪拌10分鐘后，將混合物冷卻至5℃，加入叔丁醇(12.2g,165mmol)。所得混合物在RT下攪拌2小時(shí)。將混合物傾入冰水混合物(500mL；1∶1)中。收集固體，用水洗滌(30mL×3)。在真空下干燥后，得到12.5g(96％)的酯。
在RT下，向上述酯(7.1g,30mmol)的CCl4(50mL)溶液中加入N-溴琥珀酰亞胺(5.88g,32mmol)和苯甲酸基過氧化物(727mg,3mmol)。將混合物回流18小時(shí)。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(19∶1)作為洗脫液，得到8.0g(91％)的溴化物，為一黃色油狀物。在RT下歷時(shí)60分鐘，向甲胺的THF溶液(2N,30mL,60mmol)中加入溴化物(3.16g,10mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液。所得混合物在RT下攪拌18小時(shí)，然后在真空中濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2(80mL)，用飽和NaHCO3(20mL)和飽和NaCl(20mL)洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(1∶1)作為洗脫液，得到1.43g(54％)所需的胺，為一淺黃色油狀物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.47(s,1H),8.15(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),4.02(s,2H,Bn),2.43(s,3H,Me),1.62(s,1H,NH),1.58(s,9H)；TLC,10％MeOH in CH2Cl2,Rf=0.49.
B將來自步驟A的化合物(1.09g,3.45mmol)、二叔丁基二碳酸酯(1.5g,6.9mmol)和Et3N(1.05g,10.35mmol)在CH2Cl2(50mL)中的混合物攪拌18小時(shí)?；旌衔镉肅H2Cl2(50mL)稀釋，用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(3∶1)作為洗脫液，得到1.16g(92％)產(chǎn)物。
在H2(50psi)氣下，將保護(hù)的胺(1.16g,3.17mmol)、10％Pd/C(300mg,0.28mmol)和EtOH(40mL)在RT下攪拌18小時(shí)。將混合物過濾，濾液在減壓下濃縮。殘余物用快速色譜法精制，用己烷/EtOAc(4∶1)作為洗脫液，得到0.78g(73％)所需化合物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.25-7.0(m,3H,Ar),4.60(s,2H,NH),4.34(s,2H,Bn),2.71(s,3H,Me),1.54(s,9H),1.45(s,9H)；TLC,hexanes/EtOAc(4∶1),Rf=0.29.
C將來自步驟B的化合物(0.78g,2.32mmol)和二甲基二羧酸乙炔酯(363mg,2.55mmol)在MeOH(30mL)中的混合物在氮?dú)庀禄亓?小時(shí)。除去過量溶劑后，得到1.05g(95％)加合物。在H2(40psi)氣下，將這些加合物(1.05g,2.2mmol)、10％Pd/C(300mg,0.28mmol)和EtOH(40mL)的混合物在RT下攪拌6小時(shí)。將混合物過濾，濾液在減壓下濃縮，得到0.99g(94％)還原產(chǎn)物。
將上述還原產(chǎn)物(0.99g,2.06mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在RT下用TFA(15mL)處理。反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)?；旌衔镌跍p壓下濃縮，得到0.90g(99％)所需產(chǎn)物，為TFA鹽1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)8.63(s,1H),7.37-7.26(m,3H,Ar),5.96(d,J=8.8Hz,1H,NH),4.53(m,1H),4.15(m,2H,Bn),3.64(s,3H,Me),3.62(s,3H,Me),3.04-2.85(m,2H),2.57(s,3H,Me)；TLC,10％MeOHin CH2Cl2,Rf=0.22.
D在氮?dú)庀拢瑢碜圆襟EC的化合物(550mg,1.70mmol)和NaOMe(0.5N,6.8mL,3.4mmol)在MeOH(60mL)中的混合物回流過夜。冷卻至0℃后，加入HCl(1N,5mL)。除去過量溶劑后，殘余物用快速色譜法精制，用MeOH/CH2Cl2(1∶9)作為洗脫液，得到200mg(40％)所需的酸，為一淺黃色固體1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)7.18(s,1H,Ar),7.04(s,2H,Ar),6.17(s,1H,NH),5.47(t,J=6.6,1H),5.07(m,3H,OMe),3.89(d,J=6.6Hz,2H),3.58(s,3H,Me),2.89(s,3H,Me),2.83-2.60(s,2H)；MS,m/z291(C14H16N2O5of M-1 requires 291)；TLC,10％MeOH in CH2Cl2,Rf=0.22.
E
將來自步驟D的酸(50mg,0.17mmol)的DMF(0.5mL)溶液用EDC(39mg,0.204mmol)活化15分鐘。將活化的酸與2-甲基苯脲苯胺(45mg,0.188mmol)在RT下偶合96小時(shí)?；旌衔镉肊tOAc稀釋，用5％檸檬酸和飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥。有機(jī)溶液在減壓下濃縮，得到所需化合物，收率為10％:1HNMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.97-8.57(m,2H),7.95-6.50(m,12H),6.10(m,1H),5.50(m,1H,Bn),4.98(m,1H),3.90(m,1H,Bn),3.58(s,3H,OMe),2.90(s,3H,Me),2.89-2.55(m,2H),2.20(s,3H,Me)；MS,m/z538(C28H29N5O5of M+Na requires 538).
F將來自步驟E的化合物(9.0mg,0.017mmol)的MeOH(3mL)溶液用LiOH水溶液(2N,1mL)處理。反應(yīng)混合物在RT下攪拌2小時(shí)，然后用TFA酸化(直至pH=5-6)。將產(chǎn)物在Vydac反相C18柱(22cm×25cm)上精制，用15％CH3CN/H2O(0.1％TFA)至32％CH3CN/H2O(0.1％TFA)的線性梯度洗脫，流速為10mL/min，得到BX36(3.0mg,35％分離的收率)1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)9.98(s,1H),8.98(s,1H),7.89-6.92(m,12H),6.06(s,1H),5.48(d,J=6.6Hz,1H),5.03(m,1H),3.89(d,J=6.6Hz,1H),2.91(s,3H,NMe),2.75-2.53(m,2H),2.23(s,3H,Me)；MS,m/z502(C27H27N5O5of M++1 requires 502)BX47的制備A·將N-甲基羧氨基苯甲酸酐(10.12g,57.15mmol)和甘氨酸(4.29g,57.17mmol)在冰醋酸(125mL)中的漿液在120℃下加熱3.5小時(shí)。然后將反應(yīng)溶液在真空中濃縮成濃稠的油狀物，加入乙醚(100mL)。所得固體過濾，用乙醚清洗，空氣干燥，得到8.80g黃褐色固體。將該固體與CHCl3(250ml)混合1小時(shí)成漿狀。溶液過濾，濾液在真空中濃縮，得到7.43g(68％收率)黃褐色固體，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)190.9m/z；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)3.38(s,3H),3.78-3.83(m,2H),6.85(br t,1H),7.20-7.34(m,2H),7.52-7.58(m,1H),7.88(dd,J=7.81,1.65Hz,1H).
B·在室溫下，將來自過程A的化合物(1.52g,8.01mmol)、無水CsF(1.22g,8.03mmol)、原硅酸四乙酯(1.79mL,8.03mmol)和丙烯酸乙酯(0.96mL,8.86mmol)在無水THF(8.0mL)中混合26小時(shí)成漿狀。然后將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，濾液在真空中濃縮，所得固體用快速色譜法精制(CHCl3610∶1CHCl3/乙醚)，得到1.63g(70％收率)淺黃色固體，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)291m/z；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)1.24(t,J=7.12Hz,3H),2.60-2.78(m,2H),3.37(s,3H),3.94(ABq,J=14.86 Hz,)L=52.41Hz,2H),3.92(t,J=7.01Hz,2H),4.13(q,J=7.10Hz,2H),7.17(d,J=8.07Hz,1H),7.29(d,J=8.57Hz,1H),7.50(dt,J=7.78,1.67Hz,1H),7.84(dd,J=7.83,1.63Hz,1H).
C·將來自過程B的化合物(1.61g,5.55mmol)溶于冰冷卻的發(fā)煙硝酸(7.4mL)。使反應(yīng)溶液溫度緩慢升至室溫，2小時(shí)后傾入飽和NaHCO3水溶液(100mL)/冰(100g)的混合物中。用固體NaHCO3將漿液調(diào)至中性pH。含水溶液用乙酸乙酯萃取(4×100mL)。合并后的有機(jī)相用水(1×100mL)和飽和NaCl水溶液(1×100mL)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到1.83g(98％收率)黃色油狀物，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)336,358m/z；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)1.25(t,J=7.10Hz,3H),2.62-2.81(m,2H),3.42(s,3H),3.90-3.95(m,2H),4.01(s,2H),4.13(q,J=7.17Hz,2H),7.32(d,J=9.05Hz,1H),8.33(dd,J=8.97,2.70Hz,1H),8.73(d,J=2.71Hz,1H).
D·將來自過程C的化合物(1.82g,5.44mmol)和＜10微米Fe粉(0.91g,16.99mmol)在2∶1乙醇/水(54mL)中的漿液加熱回流，加入冰醋酸(0.63mL,11.01mmol)。2小時(shí)后，將熱的反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，濾墊用熱乙醇洗滌(3×50mL)。濾液在真空中濃縮，溶于乙酸乙酯(125mL)，用飽和NaHCO3水溶液(2×40mL)、水(1×40mL)和飽和NaCl水溶液(1×40mL)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到一黃色固體。將該固體溶于1∶1CHCl3/THF，使其通過硅膠填料，在真空中濃縮，得到1.20g(72％收率)黃色泡沫，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)306.1,328.2m/z；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)*1.21(t,J=7.13Hz,3H),2.57-2.76(m,2H),3.27(s,3H),3.63(br s,1H),3.87(t,J=7.25Hz,2H),3.89(ABq,J=14.69Hz,)L=77.45Hz,2H),4.10(q,J=7.12Hz,2H),6.79(dd,J=8.84,2.56Hz,1H),6.95(d,J=8.66Hz,1H),7.07(d,J=2.56Hz,1H).
E·在氮?dú)?、室溫下，?-鄰甲苯基脲基苯乙酸(0.57g,2.00mmol)、EDC·HCl(0.43g,2.24mmol)和來自過程D的化合物(0.61g,2.00mmol)溶于無水DMF(10mL)。攪拌3天后，反應(yīng)用水(30mL)終止。所得攪拌24小時(shí)，過濾。黃褐色沉淀用5％檸檬酸水溶液(2×20mL)、10％NaHCO3水溶液(3×20mL)和水(2×20mL)洗滌，在真空中干燥，得到0.76g(66％收率)黃褐色固體，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)572.4,594.5m/z；1H NMR(acetone-d6,300MHz,ppm)1.19(t,J=7.17Hz,3H),2.25(s,3H),2.62-2.68(m,2H),3.31(s,3H),3.64(s,2H),3.78-3.96(m,2H),3.96(ABq,J=14.87Hz,)L=86.48Hz,2H),4.07(q,J=7.08Hz,2H),6.94(dd,J=8.42,7.51Hz,1H),7.13(dd,J=7.90,5.36Hz,2H),7.27-7.32(m,3H),7.47-7.59(m,3H),7.91-7.94(m,3H),8.40(s,1H),9.46(s,1H).
F·在氮?dú)?、室溫下，向來自過程E的化合物(0.57g,0.99mmol)的無水THF(100mL)溶液中加入1.0M三甲基硅醇鈉/CH2Cl2(4.0mL,4.0mmol)。攪拌5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物過濾，沉淀用THF洗滌。將沉淀與1∶1冰醋酸/乙醚(10mL)混合22小時(shí)成漿狀，過濾，用1∶1冰醋酸/乙醚洗滌(3×10mL)，乙醚與空氣干燥，得到0.42g(78％收率)白色固體，經(jīng)鑒別為BX47:MS(ESP+)544.2,566.2m/z；1H NMR(acetone-d6,300MHz,ppm)2.14(s,3H),2.56(t,J=7.10Hz,1H),2.57(t,J=7.50Hz,1H),3.20(s,3H),3.53(s,2H),3.72-3.77(m,2H),3.87(ABq,J=15.13Hz,)L=75.08Hz,2H),6.82-6.85(m,1H),7.01-7.05(m,2H),7.27(ABq,J=8.59Hz,)L=60.76Hz,4H),7.16-7.21(m,1H),7.80-7.84(m,3H),8.28(s,1H),9.34(s,1H).
RX18的制備A·在氮?dú)庀?，向?溴-3-硝基甲苯(0.22g,1.04mmol)和β-乙基丙氨酸AHCl(0.19g,1.24mmol)的無水THF(5mL)漿液中加入三乙胺(0.35mL,2.51mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，在60℃下攪拌18小時(shí)，冷卻至室溫，用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用水(1×15mL)、5％NaHCO3(1×15mL)和飽和NaCl(1×15mL)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到一黃色油狀物。將該油狀物用快速柱色譜法精制(2∶1乙酸乙酯/己烷)，得到0.22g(84％收率)黃色油狀物，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)1.24(t,J=7.16Hz,3H),1.68(br s,1H),2.52(t,J=6.30Hz,2H),2.88(t,J=6.31Hz,2H),3.89(s,2H),4.13(q,J=7.14Hz,2H),7.47(t,J=7.89 Hz,1H),7.66(d,J=7.52Hz,1H),8.09(d,J=8.12Hz,1H),8.02(s,1H).
B·將來自過程A的化合物(0.072g,0.28mmol)、無水吡啶(0.035mL,0.43mmol)和苯甲酰氯(0.050mL,0.43mmol)溶液在0℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液然后用乙酸乙酯(14mL)稀釋，用5％檸檬酸(2×5mL)、10％NaHCO3(2×5mL)、水(1×5mL)和飽和NaCl(1×5mL)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到一濃稠的油狀物。該油狀物用快速柱色譜法精制(95∶5氯仿/乙醚)，得到0.089g(92％收率)無色油狀物，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)1.23(br s 3H),2.50(br s,1H),2.72(br s,1H),3.65(br s,2H),4.10(br s,2H),4.73(br s,2H),7.40(s,5H),7.53(t,J=7.81Hz,1H),7.60(br s,1H),8.00(br s,1H),8.14(d,J=7.13 Hz,1H).
C·在室溫下，對10％Pd/C(0.016g,0.15mmol)和來自過程B的化合物(0.086g,0.25mmol)在2∶1乙醇/乙酸乙酯(1.8mL)中的漿液施用H2氣(60ps)18小時(shí)。反應(yīng)混合物然后通過硅藻土過濾，濾墊用乙酸乙酯充分地洗滌。合并后的洗液在真空中濃縮，得到0.80g(95％收率)橙色油狀物，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)327m/z；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)峰非常寬，但與所需產(chǎn)物一致。
D·在室溫、氮?dú)庀拢瑢碜赃^程C的產(chǎn)物(0.077g,0.24mmol)、4-鄰甲苯基脲基苯乙酸(0.075g,0.26mmol)、TBTU(0.089g,0.28mmol)和二異丙基乙胺(0.046mL,0.26mmol)的NMP(0.60mL)溶液攪拌3天。然后用乙酸乙酯(25mL)稀釋，用5％檸檬酸(2×6mL)、5％NaHCO3(2×6mL)、水(1×6mL)和飽和NaCl(1×6mL)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到一黃色油狀物。該油狀物用快速柱色譜法精制(99∶1氯仿/甲醇-98∶2氯仿/甲醇)，得到0.11g(78％收率)白色玻璃狀物，經(jīng)鑒別為所需產(chǎn)物MS(ESP+)593,615m/z；1HNMR(CDCl3,300MHz,ppm)峰非常寬，但與所需產(chǎn)物一致。
E·將來自過程D的產(chǎn)物(0.047g,0.079mmol)和氫氧化鋰水合物(0.021g,0.51mmol)的2∶1THF/水(3mL)溶液在室溫下攪拌4小時(shí)。然后用冰醋酸終止反應(yīng)，在真空中濃縮得到一白色固體。該固體用快速柱色譜法精制(98∶1∶1氯仿/甲醇/乙酸-94∶5∶1氯仿/甲醇/乙酸)，冷凍干燥后得到0.037g(82％收率)白色玻璃狀物，經(jīng)鑒別為RX18MS(ESP+)565,587 m/z；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)2.23(F,3/),2.48-2.59(m,2/),3.31-3.70(m,4/),4.44(F,1/),4.66(F,1/),6.84-7.56(m,16H),7.83(d,J=7.55Hz,1H),7.88(s,1H),8.89(s,1H),10.17(s,1H).
在固體載體上合成1,4-苯并二氮雜-2,5-二酮的一般方法β-丙氨酸類似物A·將裝載有Fomc保護(hù)的β-丙氨酸(7.0g,2.8mmol)的Wang樹脂用20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液(75mL)處理15分鐘。樹脂然后用二甲基甲酰胺(3×75mL)、甲醇(1×75mL)和二氯甲烷(3×75mL)洗滌。
B·向樹脂中加入2-氟-5-硝基苯甲酸(5.18g,28.0mmol)和二異丙基碳二亞胺(4.4ml,28.0mmol)的N-甲基吡咯烷酮(50mL)溶液。樹脂在用機(jī)械方法振搖5小時(shí)后，用N-甲基吡咯烷酮(3×10mL)和二氯甲烷(3×75mL)洗滌。
C·將樹脂分成14等份(以重量計(jì))，分別置于反應(yīng)器中。向每個(gè)含有樹脂的反應(yīng)器中加入一種伯胺在N-甲基吡咯烷酮中的0.20M溶液(10mL)。該步驟中所用的一些代表性伯胺為芐胺、苯乙胺、仲丁胺、四氫呋喃基胺、甘氨酸甲酯、β-丙氨酸乙酯、纈氨酸甲酯、β-丙氨酸叔丁酯、2-氨基-1-甲氧基丙烷、異丁胺、(氨甲基)環(huán)丙烷、4-氨基-1-芐基哌啶、4-氟芐胺和環(huán)己胺。每份樹脂用機(jī)械方法振搖20小時(shí)。樹脂用N-甲基吡咯烷酮(3×10mL)和二氯甲烷(2×10mL)洗滌。
D·然后在80℃下，每份樹脂用2.0g(8.86mmol)氯化錫(Ⅱ)二水合物的10mL1/1乙醇/N-甲基吡咯烷酮溶液處理1小時(shí)。樹脂用N-甲基吡咯烷酮(2×10mL)、碳酸氫鈉在1/1水/N-甲基吡咯烷酮中的0.5％溶液(5×10mL)、N-甲基吡咯烷酮(5×10mL)和二氯甲烷洗滌。
E·向每份樹脂中加入4-(2-甲苯基脲基)苯乙酸(570mg,2.0mmol)和二異丙基碳二亞胺(0.315mL,2mmol)在5mL N-甲基吡咯烷酮中的混合物。樹脂用機(jī)械方法振搖5小時(shí)。然后，每份樹脂用N-甲基吡咯烷酮(3×10mL)和二氯甲烷(2×10mL)洗滌。
F·向每個(gè)樹脂反應(yīng)器中加入溴乙酰溴在N-甲基吡咯烷酮(10mL)中的0.2M溶液和二異丙基乙胺(0.350mL,2.0mmol)。連續(xù)用機(jī)械方法振搖5小時(shí)后，每份樹脂用N-甲基吡咯烷酮(5×10mL)洗滌。
G·向每份樹脂中加入1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯的0.2M溶液(10mL)。樹脂用機(jī)械方法振搖5小時(shí)，用N-甲基吡咯烷酮(3×10mL)和二氯甲烷(3×10mL)洗滌，然后干燥。
H·向每份樹脂中加入三氟乙酸/水9.5/0.5溶液(5.0mL)。振搖樹脂30分鐘。樹脂過濾。將每份酸溶液分別收集在50mL離心管中。向每支管中加入乙醚(30mL)。使每支管自旋5分鐘。棄去乙醚。粗產(chǎn)物(沉淀)用RP-HPLC精制，得到相應(yīng)的1,4-苯并二氮雜-2,5-二酮。例BX58,MS,m/z620；BX52,MS,m/z634；BX49,MS,m/z586；BX40,MS,m/z612；BX55,MS,m/z614；BX39,Mz,m/z602；BX57,MS,m/z602；BY84,MS,m/z630；BX63,MS,m/z644；BX53,MS,m/z586；BX54,MS,m/z602；BX46,MS,m/z584；BX43,MS,m/z703；BX48,MS,m/z638.
DL-3-氨基丁酸類似物將用于β-丙氨酸的所述相同方法完全應(yīng)用于Fmoc-DL-氨基丁酸Wang樹脂(0.476g,0.20mmol)。樹脂與溶劑及試劑之比與該方法成比例。步驟C中，向樹脂中加入β-丙氨酸叔丁酯在N-甲基吡咯烷酮中的0.2M溶液(10mL)。在完成步驟H后，得到BY76,MS,m/z616。
合成肽類的一般方法過程A1·在RT下，向4-硝基苯基異氰酸酯(60.0mmol)的CH2Cl2(100mL)溶液中加入丙氨酸或取代的丙氨酸(60.0mmol)。反應(yīng)混合物在RT下攪拌1.5小時(shí)。過濾固體脲產(chǎn)物，用CH2Cl2(3×100mL)和乙醚(3×100mL)洗滌。然后，將脲產(chǎn)物進(jìn)行空氣干燥。
E-1的前體產(chǎn)率94％；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):8.52(d,1H),8.2-8.4(m,2H),7.78-7.9(m,4H),7.06-7.35(m,1H),2.35(s,3H)；MS(FAB):272.2.
E-2的前體產(chǎn)率95％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):8.4(d,2H),7.86(d,2H),7.65(d,2H),7.51(t,2H),7.35(t,1H)；MS(FAB):258.
2·向來自步驟A的產(chǎn)物(15.0mmol)的乙醇(30mL)溶液中加入氯化錫(Ⅱ)二水合物(45.0mmol,Aldrich)，所得混合物在75℃(油浴)下回流2.5小時(shí)。反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻，加入1N HCl對溶液進(jìn)行酸化。酸化的反應(yīng)混合物用EtOAc洗滌(3×100mL)。水相萃取液合并，用飽和K2CO3溶液調(diào)pH為10-12。用EtOAc萃取(3×100mL)。EtOAc萃取液合并，用飽和NaHCO3溶液洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥。在真空中過濾濃縮，得到純產(chǎn)物。E-1:Yield:85％；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):8.91(s,1H),8.09(s,1H),7.92(d,1H),7.15-7.26(m,4H),6.98(t,1H),6.6(d,2H),4.82(s,2H),2.32(s,3H)；MS(FAB):241.E-2:Yield:88％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.58(m,2H),7.45(t,2H),7.32(d,2H),7.27(t,1H),6.88(d,2H)；MS(FAB):227.
過程B1·用5N NaOH將二鹽酸4,4=-二哌啶(5.0g,20mmol)的20mL去離子水溶液調(diào)為pH8-9。溶液用240mL乙醇稀釋、在RT下攪拌后，一次性加入二叔丁基二碳酸酯的160mL乙醇溶液。周期性加入5NNaOH以保持溶液的pH為8-9。在RT下3小時(shí)后，反應(yīng)溶液用1NHCl酸化。用EtOAc洗滌(2×100mL)后，將水溶液調(diào)為pH7，然后有機(jī)層用飽和NaHCO3(2×100mL)和飽和NaCl(2×100mL)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。溶液在真空中濃縮后，得到2.5g(52％收率)一-Boc仲胺。B-1:1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):4.3(d,2H),3.25(d,2H),2.9(t,2H),2.73(t,2H),1.93(d,4H),1.65(s,9H),1.22-1.56(m,6H)；MS(FAB):268.9；HPLC(溶液A的梯度5％B至95％B，在15分鐘內(nèi)；C18柱，100；緩沖液B:0.1％TFA的乙腈溶液；緩沖液A:0.1％TFA的HPLC級水溶液)。5.67分鐘。
過程C1·向伯胺(1.0mmol，由過程A得到)或仲胺(1.0mmol，由過程B得到)的NMP(5mL)溶液中加入EDC(1.1mmol)，然后在RT下迅速加入溴乙酸(1.0mmol)。反應(yīng)混合物在RT下攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水(10mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×10mL)、飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到溴化產(chǎn)物F-1:Yield:84％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.83(d,1H),7.57-7.73(m,4H),7.4(m,2H),7.34(t,1H),4.39(s,2H),2.49(s,3H)；MS(FAB):362.F-2:Yield:89％；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):7.44-7.61(bm,6H),7.41(t,2H),7.02(t,1H),3.25(s,2H)；MS(FAB):348.F-3:Yield:61％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.53(d,1H),3.92-4.12(m,4H),3.82(d,1H),3.0(t,1H),2.4-2.7(m,3H),1.55-1.8(m,4H),1.4(s,9H),0.98-1.33(bm,6H)；MS(FAB):382(Na+adduct).
2·在0℃下，向胺(5mmol)的NMP(4mL)溶液中滴加來自步驟C1的溴化產(chǎn)物(1.0mmol)的NMP(2mL)溶液。反應(yīng)混合物在0℃下攪拌30分鐘后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水(10mL)中分配。有機(jī)相用飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)水溶液洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到仲胺產(chǎn)物。G-1:Yield:78％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.55-8.0(bm,6H),7.4(m,2H),7.24(m,1H),3.61(s,2H),2.9(t,2H),2.52(s,3H),1.9(m,1H),1.69(m,2H),1.23(d,6H)；MS(FAB):369.G-2:Yield:80％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.55-7.72(bm,6H),7.49(t,2H),7.21(t,1H),3.59(s,2H),2.84(t,2H),1.89(m,1H),1.64(q,2H),1.12(d,6H)；MS(FAB):355.G-3:Yield:75％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.55-7.72(bm,6H),7.49(m,2H),7.21(t,1H),3.59(s,2H),2.95(t,2H),2.8(t,2H),2.5(s,3H),2.29(s,3H),2.05(m,2H)；MS(FAB):387.
3·向來自步驟C2的仲胺產(chǎn)物(1.0mmol)的NMP(3mL)溶液中加入EDC(1.1mmol)，然后在0℃下迅速加入溴乙酸(1.0mmol)。反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3小時(shí)后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水(10mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×10mL)、飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到N-取代的溴乙酰產(chǎn)物。H-1；Yield:82％；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR ofcompound:9.08(d,1H),7.94(m,2H),7.43-7.62(m,4H),7.22(q,2H),7.02(t,1H),4.58(s,1H),4.44(s,1H),4.28(s,1H),4.18(s,1H),2.32(s,3H),1.54-1.75(m,2H),1.38-1.53(m,1H),0.98(m,6H).H-2:Yield:72％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.9(d,1H),3.54-3.82(bm,6H),3.4(d,1H),2.49-2.78(m,2H),2.0-2.3(m,3H),1.02-1.43(bm,8H),0.9(s,9H),0.58-0.88(bm,6H),0.49(m,6H).H-3:Yield:50％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.9(d,1H),3.54-3.82(bm,6H),3.4(d,1H),2.49-2.78(m,2H),2.3-2.52(bm,3H),2.2(s,3H),1.45-1.72(m,4H),1.3(s,9H),0.8-1.2(bm,6H).H-4:Yield:45％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.5(d,1H),3.9-4.1(m,6H),3.6(d,1H),2.75-3.0(bm,1H),2.4-2.6(m,3H),1.48-1.71(bm,4H),1.3(s,9H),0.9-1.25(bm,6H).
4.a·在RT下，向鹽酸β-丙氨酸叔丁酯(5mmol,SIGMA)的CH2Cl2(20mL)溶液中加入三乙胺(5mmol)。溶液在RT下攪拌15分鐘后，過濾所生成的沉淀，在真空中除去CH2Cl2，得到游離的胺，β-丙氨酸叔丁酯。
4.b·在0℃下，向來自步驟4.a的β-丙氨酸叔丁酯(5mmol)的NMP(10mL)溶液中滴加來自步驟C3的N-取代的溴乙酰產(chǎn)物的NMP(2mL)溶液。反應(yīng)混合物在0℃下攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水(10mL)中分配。有機(jī)相用飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到仲胺產(chǎn)物。I-1:Yield:75％；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.1(d,1H),7.92-8.1(m,2H),7.45-7.61(m,4H),7.25(m,2H),7.04(t,1H),4.1-4.28(bd,2H),3.5(m,2H),2.74-2.91(m,3H),2.44(m,3H),2.32(s,3H),1.55-2.1(m,3H),1.5(s,9H),0.99(m,6H)；MS(FAB):554.I-2:Yield:45％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.6(d,1H),3.9-4.2(m,6H),3.63-3.9(m,1H),3.25(m,1H),2.89-3.04(m,2H),2.4-2.7(m,5H),1.0-1.85(bm,28H)；MS(FAB):511.4.I-3:Yield:50％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):4.55(d,1H),4.0-4.3(m,4H),3.5-3.85(m,4H),2.85-3.18(m,5H),2.48-2.71(m,5H),1.0-1.85(bm,28H)；MS(FAB):525.4.I-4:Yield:60％；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):3.75-4.62(m,8H),3.25(m,1H),2.9(m,2H),2.49-2.75(m,5H),1.0-1.85(bm,32H),0.9(m,6H)；MS(FAB):581.5.
過程D1·在RT下，向攪拌的Boc-L-脯氨酸或Boc-L-取代的脯氨酸(10mmol)和EDC(11mmol)的NMP(10mL)溶液中加入由過程A得到的胺E-1(100mol)。溶液攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(100mL)和去離子水(60mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×60mL)、飽和NaHCO3和飽和NaCl(50mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到偶合產(chǎn)物。
J-1的前體Yield:70％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.82(d,1H),7.56-7.77(m,4H),7.4(m,2H),7.22(t,1H),4.4-4.6(m,1H),3.6-3.85(m,2H),2.5(s,3H),2.0-2.33(m,4H),1.5-1.75(bd,9H)；MS(FAB):439.2.
2·在0℃下，向步驟D1的產(chǎn)物中緩慢加入75％TFA的CH2Cl2(25mL)溶液?；旌衔镌?℃下攪拌大約2小時(shí)后，在真空中濃縮。將產(chǎn)物再次溶解在CH2Cl2中，再濃縮兩次，置于高真空下以除去最終痕量的TFA。然后，將固體殘余物在乙醚中研制18小時(shí)，過濾，空氣干燥。(定量收率)J-1:Yield:80％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.82(d,1H),7.6-7.8(m,4H),7.82-7.93(q,2H),7.74(t,1H),4.58(m,1H),～3.6(m,2H),2.62(m,1H),2.5(s,3H),2.32(m,3H)；MS(FAB):339.5.J-2:Yield:75％；1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.82(d,1H),7.6-7.8(m,4H),7.82-7.93(q,2H),7.74(t,1H),4.58-4.76(m,3H),3.75(m,2H),2.5(s,3H)；MS(FAB):358.4(Na+adduct).
實(shí)施例1AY50A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程A中使用鄰甲苯胺而得)和步驟C2中的異戊胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-1)。
B·將攪拌的實(shí)施例1A中制得的胺(0.9102mmol,0.504g)溶液先在0℃下(在氮?dú)庀?，用DIEA(0.9102mmol,158.6∶1)的20mL NMP溶液處理，然后滴加苯甲酰氯(0.9102mmol,105.7∶1)。溶液攪拌4小時(shí)后，使其在EtOAc(50mL)和去離子水(40mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×25mL)、飽和NaHCO3(2×25mL)和飽和NaCl(25mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到所需化合物(350mg,59％)，為一泡沫狀物1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):6.72-7.55(brm,12H),6.3-6.7(brd,1H),3.8-4.2(m,4H),3.55-3.7(m,2H),3.1-3.5(brm,2H),2.45(t,1H),2.1(m,3H),0.6-1.6(brm,19H)；MS(FAB):658.5.
C·在0℃下，向?qū)嵤├?B的產(chǎn)物(350mg,0.5315mmol)中緩慢加入25％TFA的CH2Cl2(5mL)溶液。在0℃下攪拌1小時(shí)后，將反應(yīng)物在真空中濃縮。將產(chǎn)物再次溶解在CH2Cl2中，再濃縮兩次，置于高真空下以除去最終痕量的TFA。產(chǎn)物用HPLC精制，得到AY50(260mg,91％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.7-10.32(m,1H),9.05(s,1H),7.99(m,2H),7.35-7.77(m,7H),7.25(q,2H),7.05(t,1H),4.0-4.55(brm,4H),3.68(q,1H),3.2(m,1H),2.72(m,1H),2.3(s,3H),1.3-1.75(brm,4H),0.77-1.22(brm,6H)；MS(FAB):602.5；HPLC(Gr A):8.72 min.
實(shí)施例2AY49A·利用由實(shí)施例1A中所述的過程制得的胺(I-1,0.9102mmol,0.504g)、DIEA(0.9102mmol,158.5∶1)和間茴香酰氯(0.9102mmol,127.9ul)進(jìn)行如實(shí)施例1B中所述的過程，得到所需產(chǎn)物(380mg,61％收率)，為一泡沫1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.1(s,1H),7.95(m,2H),7.3-7.65(m,5H),7.23(m,2H),6.83-7.15(brm,4H),4.0-4.5(brm,4H),3.8-3.91(m,3H),3.15-3.22(m,4H),2.5-2.8(m,2H),2.35(s,3H),1.35-1.8(m,12H),0.77-1.22(brm,6H)；MS(FAB):710.2(Na+adduct).
B·利用來自步驟B的化合物(380mg,0.5523mmol)和25％TFA的CH2Cl2(10mL)溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到AY49(315.0mg,91％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.1(s,1H),7.95(m,2H),7.3-7.65(m,5H),7.23(m,2H),6.83-7.15(brm,3H),4.0-4.5(brm,4H),3.8-3.91(m,3H),3.15-3.22(m,4H),2.5-2.8(m,2H),2.35(s,3H),1.35-1.8(m,3H),0.77-1.22(brm,6H)；MS(FAB):632.3,654.2(Na+adduct)；HPLC(Gr A):9.05min.
實(shí)施例3AY62A·在RT下，向含有一滴DMF的2,3-二甲氧基苯甲酸(10.9781mmol,2.0g)的CH2Cl2(20mL)溶液中滴加草酰氯(10.9781mmol,957.702∶1)。2小時(shí)后反應(yīng)混合物在真空中濃縮，得到2,3-二甲氧基苯甲酰氯(1.9g,90％):1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):7.52(m,1H),7.12(d,2H),3.89(s,3H),3.88(s,3H).
B·利用由實(shí)施例1A中所述的過程制得的胺(I-1,2.0031mmol,1.073g)、DIEA(2.2034mmol,383.81∶1)和實(shí)施例3A中制得的2,3-二甲氧基苯甲酰氯(2.2034mmol,440.677mg)進(jìn)行如實(shí)施例1B中所述的過程，得到所需產(chǎn)物(856.0mg,51％收率)，為一泡沫1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:9.1(s,1H),7.9-8.1(m,2H),7.4-7.65(m,3H),6.95-7.3(brm,4H),6.6-6.9(brm,1H),3.7-4.7(brm,10H),2.38(s,3H),1.2-1.8(brm,12H),0.9-1.1(m,5H),0.8(d,2H)；Ms(FAB):740.4(Na+adduct).
C·利用來自步驟B的化合物(856.0mg,1.1922mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到AY62(786.0mg,98％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:9.1(s,1H),7.9-8.1(m,2H),7.4-7.65(m,3H),6.95-7.3(brm,4H),6.6-6.9(brm,1H),3.7-4.7(brm,10H),2.38(s,3H),1.2-1.8(brm,1H),1.18(t,3H),0.89-1.1(m,4H),0.8(d,2H)；MS(FAB):662.2,684.2(Na+adduct；HPLC(Gr A):8.795min實(shí)施例4CX13A·在RT下，向攪拌的己二酸一甲酯(0.271mmol,40.15∶1)和EDC(0.271mmol,51.951mg)的4mL NMP溶液中加入利用步驟C1中的胺E-1(在過程A中使用間甲苯胺而得)和C2中的異戊胺由過程C中步驟C2得到的胺(G-1,0.271mmol,100.0mg)。反應(yīng)物在RT下攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水(10mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×10mL)、飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到所需化合物(103mg,75％)，為一泡沫1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotomers):8.88(s,1H),7.55(d,2H),6.6-7.4(brm,7H),4.0(m,2H),3.62(s,3H),3.43(m,1H),1.9-2.4(brm,7H),1.29-1.8(brm,8H),0.9(d,6H)；MS(FAB):511.3.
B·在RT下，將攪拌的來自步驟A的化合物(103mg,0.2034mmol)的甲醇(2mL)溶液用LiOH水溶液(1.0M,1.0mL,1.0mmol)處理3小時(shí)。反應(yīng)物用1N HCl酸化，在真空中濃縮。粗產(chǎn)物用HPLC精制，得到CX13(66.0mg,65％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.9-10.1(brd,1H),9.05(d,1H),7.95(m,2H),7.55(m,4H),7.25(q,2H),7.05(t,1H),4.1-4.25(brd,1H),3.5(m,1H),2.21-2.52(m,7H),1.38-1.71(m,7H),1.2(t,1H),0.95(m,6H)；MS(FAB):4 97.2；HPLC(Gr A):8.24min.
實(shí)施例5P1
A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程B中使用二鹽酸4,4’-二哌啶而得)和步驟C2中的氨，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-2)。
B·向攪拌的苯甲酸(0.1351mmol,16.5mg)和EDC(0.1351mmol,25.902mg)的3mL NMP溶液中加入由實(shí)施例5A中所述的過程制得的胺(I-2,0.1351mmol,69.0g)。溶液攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(10mL)和去離子水(5mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×5mL)、飽和NaHCO3(2×5mL)和飽和NaCl(5mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到所需產(chǎn)物(35.0mg,51％)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(35.0mg,0.068mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到P1(17.0mg,55％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:8.4(m,1H),7.9-8.25(m,2H),7.4(d,3H),4.4(d,1H),3.7-4.2(m,5H),2.18-3.12(m,4H),1.6-1.85(d,4H),0.85-1.41(m,6H)；MS(FAB):458.8；HPLC(Gr A):4.1min.
實(shí)施例6P2A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程B中使用二鹽酸4,4’-二哌啶而得)和步驟C2中的甲胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-3)。
B·利用由實(shí)施例6A中所述的過程制得的胺(I-3,0.2835mmol,148.8mg)、苯甲酸(0.2836mmol,34.63mg)和EDC(0.2836mmol,54.37mg)進(jìn)行如實(shí)施例5B中所述的過程，得到所需產(chǎn)物(84.0mg,56％收率)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(84.0mg,0.158mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到P2(49.0mg,66％)，為一冷凍干燥的粉末。1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:8.5(m,1H),8.2(m,1H),7.35-7.6(m,4H),4.1-4.6(m,6H),3.8-4.1(m,3H),2.77-3.2(m,7H),1.7-2.0(m,4H),1.0-1.6(m,6H)；MS(FAB):473.2；HPLC(Gr A):4.403min.
實(shí)施例7P3A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程B中使用二鹽酸4,4’-二哌啶而得)和步驟C2中的異戊胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-4)。
B·利用由實(shí)施例7A中所述的過程制得的胺(I-4,0.05131mmol,29.8mg)、苯甲酸(0.0513lmmol,6.2657mg)和EDC(0.05131mmol,9.836mg)進(jìn)行如實(shí)施例5B中所述的過程，得到所需產(chǎn)物(15.0mg,51％收率)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(15.0mg,0.0256mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到P3(9.0mg,67％)，為一冷凍干燥的粉末。1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:8.5(m,1H),8.2(m,1H),7.33-7.6(m,4H),3.85-4.6(brm,6H),2.8-3.2(m,4H),0.78-2.0(brm,19H)；MS(FAB):529.4,551.3(Na+adduct)；HPLC(Gr A):6.27min.
實(shí)施例8CY14A·在RT下，向攪拌的己二酸一甲酯(0.2955mmol,43.78∶1)和EDC(0.2955mmol,56.651mg)的4mL NMP溶液中加入利用Boc-L-脯氨酸由過程D得到的游離胺產(chǎn)物(J-1,0.2955mmol,100.0mg)。反應(yīng)物攪拌18小時(shí)后，使其在EtOAc(15mL)和去離子水中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×10mL)、飽和NaHCO3(2×10mL)和飽和NaCl(10mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到所需產(chǎn)物(88.2mg,62％)，為一泡沫1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):7.1-7.52(brm,8H),6.1-6.42(s,1H),4.75(d,1H),3.42-3.68(m,5H),1.94-2.42(brm,10H),1.6-1.8(m,4H)；MS(FAB):481.4,503.3(Na+adduct).
B·利用來自步驟A的化合物(88.2mg,0.1832mmol)和LiOH水溶液(1.0M,1.0mL,1.0mmol)的MeOH(2mL)溶液進(jìn)行與實(shí)施例4B所述相同的過程，得到CY14(50.8mg,60％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.9-10.12(brd,1H),9.05(d,1H),7.95(m,2H),7.45-7.61(m,4H),7.24(q,2H),7.05(t,1H),4.45-4.61(m,1H),3.52-3.74(m,2H),1.88-2.44(brm,11H),1.6(m,4H)；MS(FAB):467.2,489.2(Na+adduct)；HPLC(Gr A):6.66min.
實(shí)施例9CY17A·在氮?dú)庀?，向?75℃下攪拌(干冰/丙酮)的二乙基膦酰乙酸叔丁酯(3.0mmol,756.75mg)的25mL無水THF溶液中歷時(shí)5分鐘滴加正丁基鋰(3.0mmol,1.875mL)。溶液在0℃下攪拌1小時(shí)后，在N2、0℃下加入乙酰丙酸乙酯(2.7mmol,425.7∶1)。將反應(yīng)物溫度逐漸升至RT，攪拌3.5小時(shí)。3.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和NH4Cl洗滌(3×100mL)，在真空中濃縮。然后向殘余物中加入100mL乙醚，醚層用去離子水(60mL)和飽和NaCl(2×60mL)洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到粗產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物用快速色譜法精制，用20∶1己烷EtOAc洗脫，得到正交保護(hù)的叔丁基-6-碳乙氧基-3-甲基-3-戊烯酸酯(404.0mg,54％)，為一粘性液體1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,isomers):5.6(s,1H),4.12(q,2H),2.84(t,1H),2.4-2.53(m,4H),2.1(s,2H),1.47(s,9H),1.23(t,3H)；MS(FAB):264.6(Na+adduct)；HPLC(Gr A):12.24min and12.48 min.
B·在加壓氫化反應(yīng)容器中用5摩爾％的10％Pd/C(0.04139mmol,43.63mg)還原來自實(shí)施例9A的產(chǎn)物(0.8277mmol,200.3mg)的10mLEtOAc溶液。1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物離心30分鐘。用EtOAc(2×30mL)重復(fù)離心30分鐘。匯集所有的有機(jī)層，在真空中濃縮，得到叔丁基-6-碳乙氧基-3-甲基-3-戊烯酸酯(150.0mg,75％):1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):4.1(q,2H),2.18-2.4(m,3H),1.88-2.1(m,2H),1.45-1.75(m,3H),1.44(s,9H),1.23(t,3H),0.92(d,3H)；MS(FAB):266.6(Na+adduct).
C·利用叔丁基-6-碳乙氧基-3-甲基-3-戊烯酸酯(150.0mg,0.6147mmol)和LiOH水溶液(1.0M,1.0mL,1.0mmol)的MeOH(2mL)溶液進(jìn)行與實(shí)施例4B所述相同的過程，得到一酸產(chǎn)物(100mg,75％)，為一固體1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm):2.18-2.4(m,3H),1.88-2.1(m,2H),1.45-1.75(m,3H),1.44(s,9H),0.92(d,3H)；MS(FAB):239.1(Na+adduct).
D·利用來自實(shí)施例9C的酸產(chǎn)物(0.0925mmol,20.0mg)、過程D中使用Boc-L-脯氨酸而得到的胺(J-1,0.0925mmol,31.30mg)和EDC(0.0925mmol,17.73mg)的NMP(3mL)溶液進(jìn)行如實(shí)施例8A中所述的過程，得到所需化合物(39.3mg,73％)1H NHR(CDCl3,300MHz,ppm)partial NMR of compound:7.1-7.8(brm,8H),4.75(m,1H),3.43-3.62(m,2H),1.9-2.6(brm,12H),0.8-1.0(m,3H)；MS(FAB):559.3.
E·利用來自步驟D的化合物(39.3mg,0.0703mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到CY17(20.2mg,60％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(MeOH-d4,300MHz,ppm):7.81(d,1H),7.52-7.71(m,4H),7.38(q,2H),7.23(t,1H),4.64-4.8(m,1H),3.7-4.0(m,2H),2.05-2.74(brm,12H),1.68-2.0(m,2H),1.05-1.23(m,3H)；MS(FAB):481.3,503.4(Na+adduct)；HPLC(Gr A):8.1min.
實(shí)施例10CX12A·利用過程D中使用Boc-L-硫代脯氨酸得到的胺(J-2,0.2974mmol,100.0mg)、己二酸(0.2974mmol,43.46mg)和EDC(0.3569mmol,68.414mg)的NMP(3mL)溶液進(jìn)行如實(shí)施例8A中所述的過程，得到粗酸產(chǎn)物。將該粗產(chǎn)物用HPLC精制，得到CX12(30.0mg,30％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm):9.99(s,1H),9.1(s,1H),7.98(m,2H),7.48-7.62(m,4H),7.25(q,2H),7.05(t,1H),4.55-5.05(m,4H),3.22(m,1H),2.41(m,6H),1.6(m,4H)；MS(FAB):485.5；HPLC(Gr A):7.935min.
實(shí)施例11AX41A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程A中使用鄰甲苯胺而得)和步驟C2中的異戊胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-1)。
B·在0℃下，向攪拌的實(shí)施例11A中制得的胺(0.072mmol,39.8mg)和DIEA(0.0864mmol,15.1∶1)的NMP(4mL)溶液中加入乙酸酐(0.0792mmol,7.5∶1)。溶液在0℃下攪拌4小時(shí)后，使其在EtOAc(10mL)和去離子水(5mL)中分配。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×5mL)、飽和NaHCO3(2×5mL)和飽和NaCl(5mL)洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮，得到所需化合物(20mg,50％)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(20.0mg,0.034mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到AX41(9.0mg,50％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:9.76-10.22(brm,1H),9.05(d,1H),7.95(m,2H),7.45-7.65(m,4H),7.24(q,2H),7.03(t,1H),4.1-4.54(brm,4H),2.33(s,3H),2.18(s,1H),1.98(d,2H),1.3-1.8(brm,3H),0.98(m,6H)；MS(FAB):540.3；HPLC(Gr A):7.047min.
實(shí)施例12AY48
A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程A中使用鄰甲苯胺而得)和步驟C2中的異戊胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-1)。
B·利用來自實(shí)施例12A的胺(0.0905mmol,50.0mg)、琥珀酸一甲酯(0.0905mmol,11.96mg)和EDC(0.09955mmol,19.084mg)進(jìn)行如實(shí)施例5B中所述的過程，得到所需化合物(30mg,50％收率)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(30mg,0.045mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到AY48(15mg,46％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:9.76-10.22(brm,1H),9.05(d,1H),7.95(m,2H),7.45-7.65(m,4H),7.24(q,2H),7.03(t,1H),4.1-4.54(brm,4H),3.18(s,3H),2.33(s,3H),1.3-1.8(brm,3H),0.98(m,6H)；MS(FAB):612.4；HPLC(Gr A):7.998min.
實(shí)施例13AY44A·接著過程C所述的方法，使用步驟C1中的胺E-1(過程A中使用鄰甲苯胺而得)和步驟C2中的異戊胺，得到步驟C4中的胺產(chǎn)物(I-1)。
B·利用來自實(shí)施例12A的胺(0.0398mmol,22.0mg)、3-甲氧基丙酸(0.0398mmol,3.7μl)和EDC(0.04378mmol,8.393mg)進(jìn)行如實(shí)施例5B中所述的過程，得到所需化合物(15mg,59％收率)，為一泡沫。
C·利用來自步驟B的化合物(15mg,0.0234mmol)和25％TFA的CH2Cl2溶液進(jìn)行如實(shí)施例1C中所述的過程，得到AY44(10mg,74％)，為一冷凍干燥的粉末1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)partial NMR of compound:9.05(d,1H),7.95(m,2H),7.45-7.65(m,4H),7.24(q,2H),7.03(t,1H),4.1-4.54(brm,4H),3.29(m,3H),2.33(s,3H),1.3-1.8(brm,3H),0.98(m,6H)；MS(FAB):584.3,607.4(Na+adduct)；HPLC(Gr A):6.17min
SX44的合成A·向1,4-亞苯基二胺(9.15g,86mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入鄰甲苯基異氰酸酯(10.5mL,86mmol)。在室溫下攪拌30分鐘后，混懸液過濾，用二氯甲烷(200mL)洗滌。在真空下干燥，得到所需產(chǎn)物，為灰色固體(15.8g,65.6mmol,76％)，基于HPLC的純度＞99％。1HNMR(d6-dmso):δ8.61(1H,s),7.95(1H,d),7.81(1H,s),7.30(2H,m),7.15(2H,d),7.0(1H,t),6.61(2H,d),4.88(2H,bs),2.32(3H,s).
B·向冷卻至0℃的(2R)-[(叔丁氧基羰基)甲基]-4-甲基戊酸(牛津不對稱)(2.4g,10.4mmol)的DMF(20mL)溶液中加入HOBT(2.1g,15.5mmol)，然后加入EDC(2.4g,13.0mmol)和Hunigs堿(5.4mL,31.1mmol)。攪拌15分鐘后，加入鹽酸2,3-二甲氧基β-苯丙氨酸甲酯(2.9g,10.4mmol)。攪拌過夜、同時(shí)使溫度升至室溫后，用60％碳酸氫鹽水溶液將反應(yīng)物中的產(chǎn)物沉淀出來。產(chǎn)物過濾，用水、5％檸檬酸和鹽水洗滌。產(chǎn)物在真空下干燥，得到所需產(chǎn)物(4.5g,9.9mmol,99％)，基于HPLC的純度＞88％，為一白色粉末。1HNMR(CDCl3):δ6.81(3H,m),6.60(1H,bd),5.35(1H,m),3.76(3H,s),3.75(3H,s),3.63(3H,s),2.90-2.50(4H,m),2.30(1H,-1.45(2H,m),1.40(9H,s),1.15(1H,m),0.88(3H,d),0.82(3H,s).
C·向來自步驟B的化合物(4.5g,9.9mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入三氟乙酸(5mL)，反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)。在真空中除去溶劑，加入乙醚使產(chǎn)物沉淀出來。將固體過濾，并在真空下干燥，得到所需化合物(2.9g,7.3mmol,74％)，為一白色粉末，基于HPLC的純度＞96％。1HNMR(CDCl3):δ6.92(1H,bd),6.70(3H,m),5.35(1H,m),3.85(6H,s),3.65(3H,s),2.95-2.40(5H,m),1.55(2H,m),1.35(1H,m),0.90(3H,d),0.87(3H,d).
D·向來自步驟C的化合物(1.9g,4.8mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HBTU(2.1g,5.5mmol)，然后加入Hunigs堿(2.1mL,12.1mmol)和來自步驟A的化合物(1.15g,4.8mmol)。在室溫下攪拌過夜后，用60％碳酸氫鹽水溶液對反應(yīng)物進(jìn)行沉淀操作，用水、5％檸檬酸和鹽水洗滌。在真空下干燥，得到所需產(chǎn)物(2.9g,4.7mmol,98％)，為一黃褐色固體，基于HPLC的純度＞87％。1HNMR(CDCl3):δ9.01-6.81(15H,m),5.35(1H,m),3.85(3H,s),3.84(3H,s),3.65(3H,s),2.90-2.35(5H,m),2.33(3H,s),1.65-0.90(3H,m),0.90(3H,d).0.86(3H,d).
E·向來自步驟D的化合物(2.9g,4.6mmol)的含DMF(15mL)甲醇(30mL)溶液中加入2M LiOH(7mL,13.8mmol)，反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。在真空中除去甲醇，向粗混合物中滴加0℃的1M HCl溶液。沉淀過濾，用水、甲醇/乙醚(1∶9)和乙醚洗滌。產(chǎn)物在真空下干燥，得到粗SX44，基于HPLC的純度＞91％。從異丙醇中重結(jié)晶，得到純的SX44，為一白色固體(1.25g,2.1mmol,46％)，基于HPLC的純度＞98％。1HNMR(d6-dmso):δ9.95(1H,s),9.11(1H,s),8.61(1H,d),8.01(1H,s),7.95(1H,d),7.60(2H,d),7.47(2H,d),7.24(2H,m),7.02(2H,m),6.90(2H,m),5.25(1H,m),3.82(3H,s),3.81(3H,s),2.98-2.60(3H,m),2.46(2H,m),2.33(3H,s),1.65-1.10(3H,m),0.93(3H,d).0.84(3H,s).ESMS(+):m/z=605SY62的合成A·向冷卻至-78℃的(S)-3-(1-氧丙基)-4-(苯甲基)-2-噁唑烷酮(922mg,3.95mmol)的無水THF(40mL)溶液中滴加二異丙酰胺鋰(2.4mL,4.5mmol,Aldrich2.0M)。保持反應(yīng)物在-78℃下1小時(shí)，得到淡黃色溶液。然后立即加入溴乙酸叔丁酯(1.74mL,11.8mmol)，將反應(yīng)物在-78℃下攪拌15分鐘，然后使溫度升至0℃，并繼續(xù)攪拌45分鐘。反應(yīng)用飽和氯化銨水溶液終止，除去THF。含水層用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并了的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮，得到一濃稠的糖漿，將其置于冰箱后固化為蠟狀固體。用冷己烷研制，得到所需產(chǎn)物(735mg,2.11mmol,54％)，為一白色固體，HPLC純度＞90％。1HNMR(CDCl3):δ7.40-7.15(5H,m),4.65(1H,m),4.25-4.0(3H,m),3.32(1H,dd),2.83(1H,dd),2.76(1H,dd),2.37(1H,dd),1.41(9H,s),1.19(3H,d).
B·向0℃的來自步驟A的化合物(350mg,1.00mmol)的THF(15mL)和水(5mL)溶液中加入30％過氧化氫(1.10mL,10.1mmol)，然后加入2.0M氫氧化鋰(1.0mL,2.0mmol)，溶液攪拌2-3小時(shí)，直至用HPLC判斷反應(yīng)完全。用過量亞硫酸鈉終止反應(yīng)，如果必要的話用飽和碳酸氫鈉調(diào)pH為～10。在真空中除去THF，水層用水(30mL)稀釋，用二氯甲烷(30mL)萃取兩次。水層然后用1M HCl酸化至pH～2，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并了的有機(jī)萃取液用鹽水(30mL)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮，得到所需產(chǎn)物(153mg,0.81mmol,81％)，基于HPLC的純度＞95％，為一澄清糖漿，保持在冰箱中則變?yōu)橄灎罟腆w。1HNMR(CDCl3):δ2.88(1H,m),2.61(1H,dd),2.35(1H,dd),1.42(9H,s),1.22(3H,d).
C·接著SX44B的合成所用的過程，將來自步驟B的化合物(153mg,0.81mmol)與鹽酸2,3-二甲氧基β-苯丙氨酸甲酯(253mg,0.85mmol)偶合，得到所需化合物(268mg,0.6mmol,78％)，基于HPLC的純度＞85％，為一白色泡沫。1HNMR(CDCl3):δ6.81(3H,m),6.72(1H,bd),5.40(1H,m),3.85(3H,s),3.84(3H,s),3.41(3H,s),2.96-2.15(5H,m),1.41(9H,s),1.14(3H,d).
D·接著SX44C的過程，將來自步驟C的化合物(268mg,0.6mmol)去保護(hù)，得到所需產(chǎn)物(210mg,0.59mmol,98％)，為一濃稠的淡黃色糖漿。1HNMR(CDCl3):δ6.97(1H,bd),5.33(1H,m),3.85(3H,s),3.84(3H,s),3.58(3H,s),2.95-2.40(5H,m),1.24(3H,d).
E·接著SX44D的制備過程，將來自步驟D的化合物(210mg,0.60mmol)與SX44A(168mg,0.70mmol)偶合，得到所需化合物(320mg,0.55mmol,92％)，基于HPLC的純度為～72％，為一黃褐色固體。1HNMR(d6-dmso):δ9.92(1H,s),9.42(1H,br),8.52(1H,d),8.15(1H,br),7.92(1H,d),7.61(2H,d),7.47(2H,d),7.25(2H,m),7.10-6.85(4H,m),5.35(1H,m),3.85(3H,s),3.84(3H,s),3.63(3H,s),3.15-2.40(5H,m),2.35(3H,s),1.12(3H,d).
F·接著SX44D的水解過程，由來自步驟E的化合物(300mg,0.52mmol)得到粗SY62(108mg)，基于HPLC的純度＞90％。少量用HPLC精制，得到SY62(8mg)，基于HPLC的純度＞99％，為一白色固體。1HNMR(d6-dmso):δ9.95(1H,s),9.04(1H,s),8.46(1H,d),7.93(2H,bm),7.59(2H,d),7.47(2H,d),7.24(2H,m),7.21-6.89(4H,m),5.22(1H,m),3.83(3H,s),3.8(3H,s),2.95-2.65(5H,m),2.34(3H,s),1.10(3H,d).ESMS(-):m/z-H=561SY60的合成A·向琥珀酸酐(200mg,2.0mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入SX44A(482mg,2.0mmol)，漿液在室溫下攪拌過夜。固體過濾，用二氯甲烷洗滌，得到所需產(chǎn)物(630mg,1.8mmol,92％)，為一淺灰色固體。1HNMR(d6-dmso):δ12.25(1H,br),9.95(1H,s),9.05(1H,s),7.95(2H,m),7.60(2H,d),7.50(2H,d),7.25(2H,m),7.05(1H,m),2.33(4H,m).
B·向來自步驟A的化合物(192mg,0.56mmol)的DMF(4mL)溶液中加入HBTU(265mg,0.70mmol)，然后加入Hunigs堿(0.25mL)和2,3-二甲氧基-β-苯丙氨酸甲酯(154mg,0.56mmol)。在室溫下攪拌過夜后，用60％碳酸氫鹽水溶液將產(chǎn)物沉淀出來，用水、5％檸檬酸、鹽水洗滌，在真空下干燥，得到所需產(chǎn)物(100mg,0.18mmol,32％)，為一黃褐色固體，基于HPLC的濃度＞85％。1HNMR(d6-dmso):δ9.93(1H,s),9.10(1H,s),8.47(1H,d),8.0(1H,s),7.95(1H,d),7.60 2H,d),7.46(2H,d),7.25(2H,m),7.05(1H,m),6.92(2H,m),5.26(1H,m),3.85(3H,s),3.84(3H,s),3.66(3H,s),2.85(2H,m),2.55(2H,m),2.36(3H,s).
C·向來自步驟B的化合物(100mg,0.18mmol)的甲醇溶液中加入2M LiOH(0.3mL)，反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)。除去甲醇，用1N HCl將產(chǎn)物沉淀出來。固體過濾，用水、乙醚/甲醇(9∶1)和乙醚洗滌。在真空下干燥，得到SY60(74mg,0.13mmol,72％)，為一淺黃褐色固體，基于HPLC的純度＞97％。1HNMR(d6-dmso):δ9.88(1H,s),9.05(1H,s),8.41(1H,d),8.47(1H,s),7.90(1H,d),7.54(2H,d),7.43(2H,d),7.20(2H,m),6.96(2H,bm),6.90(2H,bm),5.21(1H,m),3.81(3H,s),3.80(3H,s),2.71(2H,m),2.50(2H,m),2.30(3H,s).ESMS(-):m/z-1=547RX19的合成A·在室溫下，向攪拌的N-t-Boc-L-亮氨酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(3.28g,0.01mmol)的DMF(20ml)溶液中歷時(shí)30分鐘分次加入酪胺(1.37g,0.01mmol)。攪拌兩小時(shí)后，在減壓下抽去DMF，將殘余物溶于50ml二氯甲烷。有機(jī)相用5％檸檬酸(2×15ml)、H2O(15ml)和鹽水(15ml)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，濃縮，得到所需化合物(3.32g,95％)，為一白色泡沫。H1NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.96(d,1H,8Hz),6.93(d,2H,8Hz),6.73(d,2H,8Hz),6.53(bs,1H),5.09(d,1H,8Hz),4.02(bs,1H),3.47-3.31(bm,2H),2.64(t,2H,7Hz),1.55(m,2H),1.37(s,9H),0.84(d,6H,6Hz),m/z 351.
B·將來自步驟A的化合物(1g,2.85mmol)和乙酸溴甲酯(0.45g,2.85mmol)在丙酮(15ml)中的混合物用固體K2CO3回流3.5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻，過濾，濃縮，得到所需產(chǎn)物(1.09g,91％)，為一琥珀色膠。H1NMR(CDCl3,300MHz,ppm),7.08(d,2H,8Hz),6.81(d,2H,8Hz),6.14(s,1H),4.84(s,1H),4.59(s,2H),4.00(s,1H),3.78(s,3H),3.78-3.40(bm,2H),2.71(t,2H,7Hz),1.60-1.39(m,2H),0.89(s,9H),0.87(d,6H,6Hz)；m/z423.
C·向來自步驟B的化合物(353mg,0.836mmol)的1ml冷CH2Cl2溶液中加入TFA(3ml)，混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)物在減壓下濃縮，得到所需產(chǎn)物，使用時(shí)無需精制。H1NMR CDC13,300MHz,ppm)7.59(bs,3H),7.24(m,1H),7.04(d,2H,9Hz),6.77(d,2H,9Hz),4.60(s,2H,4.04(m,1H),3.79(s,3H),3.52-3.43(bm,2H),2.75-2.70(t,2H,6 Hz),1.56(m,2H),1.46(m,1H),0.84(d,6H,6Hz)；m/z323.
D·在室溫下，將2-MPUPA(225mg,0.79mmol)、HOBt(169mg,1.25mmol)和EDC(192mg,1.00mmol)的混合物在DMF(5ml)中攪拌1.5小時(shí)。在另一只小瓶中，一邊攪拌一邊向來自步驟C的化合物(0.836mmol)的冷DMF(1ml)溶液中滴加TEA，使溶液中和(遇石蕊呈綠色)。合并兩種溶液，在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物過濾，在真空下使體積減少一半，然后迅速將其滴入快速攪拌的5％碳酸氫鈉(50ml)。攪拌一小時(shí)后，過濾收集固體，用水洗滌，空氣干燥，得到所需化合物(140mg,35％)，為一淡棕色固體。H1NMR(DMSO,300MHz,ppm)9.06(s,1H),8.20(d,1H,8Hz),8.07(m,1H),8.00(s,1H),7.94(d,1H,8Hz),7.47(d,2H,9Hz),7.27-7.19(m,6H),7.03(t,1H,7Hz),6.92(d,2H,9Hz),4.84(s,2H),4.34-4.31(m,1H),3.78(s,2H),3.48(d,1H,6Hz),3.44(s,3H),3.37-3.27(m,2H),2.72(t,2H,7Hz),2.33(s,3H),1.58-1.46(m,3H),0.91(dd,6H,6Hz,13Hz)；m/z589.
E·將來自步驟D的化合物(24mg,0.041mmol)和2N LiOH(62ul,0.122mmol)的DMF(1ml)溶液在室溫下攪拌6小時(shí)。反應(yīng)混合物用TFA酸化(遇石蕊呈紅色)，直接用制備型HPLC精制，得到RX19(10mg,43％)，為一白色固體。H1HMR(DMSO,300MHz,ppm)9.27(s,1H),8.18(m,1H),8.16(m,1H),7.92(d,1H,7Hz),7.46(d,2H,8Hz),7.19-7.03(m,12H),6.88(d,2H,8Hz),4.63(s,2H),4.33(m,1H),2.69(t,8Hz),2.34(s,3H),1.51-1.33(m,3H),0.96-0.88(dd,6H,6Hz,12Hz),m/z5.73.
RX23的合成A·在0℃下，向攪拌的間羥基苯胺(1.09g,0.01mmol)和HOBt(2.0g,0.015mmol)的DMF(12ml)溶液中加入EDC(2.7g,0.014mmol)。使混合物溫度升至室溫，攪拌1小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至0℃后，加入2-MPUPA(2.84g,0.01mmol)。滴加三乙胺，直至混合物為堿性(遇石蕊呈綠色)，繼續(xù)在室溫下攪拌過夜。過濾后，將混合物滴入500ml劇烈攪拌的5％碳酸氫鈉中。攪拌兩小時(shí)后，通過粗燒結(jié)玻璃漏斗過濾收集固體，用H2O洗滌多次。在真空下干燥過夜后得到所需產(chǎn)物(3.2g,85％)，為一不完全白色固體。1H NMR(DMSO,300MHz,ppm)7.94(s,1H),7.82(d,1H 8Hz),7.21(d,2H,8Hz),7.20-6.90(m,7H),6.42(d,1H,7Hz)3.53(s,2H),2.22(s,3H)；m/z376.
B·向攪拌的來自步驟A的化合物(200mg,0.53mmol)和丁酸4-溴乙酯(104mg,0.53mmol)的DMF(1ml)溶液中加入K2CO3(120mg,1.45mmol)。漿液在70-75℃下攪拌6小時(shí)，通過燒結(jié)玻璃漏斗過濾，滴入50ml劇烈攪拌的5％HCl。含水漿液用3×50ml的EtOAc萃取。有機(jī)相合并，用鹽水(25ml)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，濃縮，得到所需化合物(150mg,57％)，為一黃色固體。1H NMR(DMSO,300MHz,ppm)8.98(s,1H)7.88(s,1H),7.85(d,1H,8Hz),7.40(d,2H,7Hz)7.3-7.1(m,6H),6.95(t,1H,6Hz),6.6(d,1H,6Hz)4.45(t,1H,6Hz),4.02(q,2H,7Hz),3.91(t,2H,7Hz),3.54(s,2H),2.42(t,2H,7Hz),2.25(s,3H),1.94(t,2H,7Hz),1.15(t,3H,7Hz)；m/z
C·在室溫下,向攪拌的來自步驟B的化合物(150mg,0.31mmol)的DMF(1ml)溶液中加入2N LiOH(385ul,0.77mmol)?；旌衔飻嚢柽^夜，用TFA酸化(遇石蕊呈紅色)后，等分試樣用制備型HPLC精制，得到RX23。1HNMR(DMSO,300MHz,ppm)9.01(s,1H),7.91(s,1H)7.83(d,1H,8Hz),7.39(d,1H,8Hz),7.29(s,1H),7.23-7.14(m,5H),6.92(t,1H,8Hz)6.6(d,1H,8Hz),3.92(t,2H,7Hz),3.54(s,2H),2.35(t,2H,7Hz),2.22(s,1H),1.90(m,2H)；m/z460.
RX19的合成A·如RX23B的合成所述,使用RX23A(119mg,0.317mmol)和3-溴丙醛二甲基乙縮醛(89mg,0.49mmol)與250mg K2CO3。將固體過濾，在高真空下抽去DMF。從甲醇中重結(jié)晶，得到所需產(chǎn)物(75mg,52％)，為一白色固體。
H1NMR(DMSO,300MHz,ppm)8.98(s,1H),7.88(s,1H),7.83(d,1H,8Hz),7.39(d,2H,8Hz),7.32(s,1H),7.32-7.12(m,6H),6.93(t,1H,6H),6.6(m,1H),4.53(t,6H),3.92(t,2H,7H),3.54(s,2H),3.33(s,3H),3.24(s,3H),2.22(s,3H),1.95(q,2H,6Hz,6Hz),m/z(M+Na)+500.
B·將來自步驟A的化合物(29mg,0.061mmol)的2mL50/50THF/H2O溶液與催化量的對甲苯磺酸在40℃下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物在真空下還原，使用時(shí)無需精制m/z454。將粗殘余物溶于2ml丙酮，在冰浴中冷卻至0℃，加入44uL瓊斯試劑。在攪拌過夜下，使反應(yīng)混合物溫度升至室溫。加入異丙醇(2ml)，混合物另攪拌30分鐘，過濾，在高真空下濃縮。制備型HPLC得到RX19(15.5mg,57％)，為一黃褐色固體。H1NMR(DMSO,300MHz,ppm)9.01(s,1H),7.9(s,1H),7.83(d,1H,8Hz),7.40(d,2H,8Hz),7.31(s,1H),7.24-7.09(m,6H),6.93(t,1H,7Hz),6.59(d,1H,8Hz),4.09(t,2H,6Hz),3.54(s.2H),2.66(t,2H,6Hz),2.22(s,3H)；m/z448.
BX41的制備A·向Na2CO3(1.33g,12.51mmol)的H2O(35mL)溶液中分次加入2-氨基-4-氟苯甲酸(1.94g,12.51mmol)?；旌衔镌赗T下攪拌，直至均勻，然后在冰浴中冷卻。向冷溶液中逐漸加入光氣(9.72mL的1.93M甲苯溶液，18.76mmol)。加入完成后，反應(yīng)物在RT下輕快地?cái)嚢?小時(shí)。吸濾收集所沉淀出來的固體，用H2O清洗(1×35mL,1×20mL)，用正己烷逐出，在濾器上干燥。得到2.023g(89％)所需產(chǎn)物，為一白色固體m.p.=228-229℃；TLC(1∶1CH2Cl2/Et2O)Rf=0.74；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.97-7.93(m,1H),6.84-6.79(m,2H).
B·在干燥N2氣流下，將NaH(0.459g的60％分散液，11.48mmol)用正己烷洗滌(2×10mL)，懸浮在無水DMF(55mL)中，在冰浴中冷卻。向冷的混懸液中滴加來自A部分的產(chǎn)物(1.98g,10.93mmol)的無水DMF(55mL)溶液。加入完成后，混合物在0℃下攪拌45分鐘。向所得幾乎無色的溶液中加入MeI(0.71mL,11.48mmol)。反應(yīng)物在RT下攪拌2小時(shí)，直至用TLC分析判斷反應(yīng)完全。在高真空下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去DMF。將糖漿狀殘余物溶于EtOAc/H2O，分離，有機(jī)層用H2O(1x)、鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)。過濾和濃縮，得到2.04g(96％)所需產(chǎn)物，為一淡黃色固體TLC(100％；CH2Cl2)Rf=0.18；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.10-8.04(m,1H),6.95-6.89(m,1H),6.84-6.77(m,1H),3.46(s,3H).
C·在N2下，將來自B部分的產(chǎn)物(2.04g,10.45mmol)和甘氨酸(0.79g,10.45mmol)在冰AcOH(22mL)中的混合物輕快地回流。18小時(shí)后，用TLC分析判斷反應(yīng)完全，冷卻至RT。在高真空下用選自蒸發(fā)法除去大部分AcOH。糖漿狀殘余物用Et2O(20mL)研制，在RT下輕快地?cái)嚢?小時(shí)。吸濾收集所沉淀的固體，用Et2O清洗，在濾器上干燥。得到1.806g(83％)所需產(chǎn)物，為一白色固體MS(ESP+)208.9；TLC(100％EtOAc)Rf=0.30；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.84(br t,1H),7.89-7.74(m,1H),6.92-6.86(m,1H),6.83-6.79(m,1H),3.65(m,2H),3.24(s,3H).
D·在BX47的制備方法B部分所述的方法中，在RT、N2下，使上述C部分產(chǎn)物(0.50g,2.402mmol)、丙烯酸乙酯(0.39mL,3.60mmol)、無水CsF(0.401g,2.642mmol)和原硅酸四乙酯(0.54mL,2.40mmol)在THF(8mL)中反應(yīng)18小時(shí)。粗產(chǎn)物用快速色譜法精制(100％CH2Cl2至10％Et2O/CH2Cl2)，得到0.51g(69％)純產(chǎn)物，為一白色固體MS(ESP+)309.2；TLC(10％Et2O/CH2Cl2)Rf=0.30；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.83-7.78(m,1H),6.97-6.90(m,1H),6.86-6.82(m,1H),4.08(q,2H,J=7.15Hz),3.98(B of AB,1H,J=14.91Hz),3.87-3.80(m,3N),3.30(s,3H),2.74-2.54(m,2H),1.19(t,3H,J=7.20Hz).
E·在BX47的制備方法C部分所述的方法中，使上述D部分產(chǎn)物(0.51g,1.68mmol)與發(fā)煙硝酸(3mL)反應(yīng)18小時(shí)。得到0.49g(83％)粗產(chǎn)物，為-泡沫MS(ESP+)354.0；TLC(100％Et2O)Rf=0.25；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.61(d,1H,J=8.34Hz),7.07(d,1H,J=11.83Hz),4.11(q,2H,J=7.11Hz),4.02(s,2H),3.88(t,2H,J=6.63Hz),3.38(s,3H),2.80-2.57(m,2H),1.23(t,3H,J=7.21Hz).
F·在BX47的制備方法D部分所述的方法中，在N2下，將上述E部分產(chǎn)物(0.35g,0.991mmol)、Fe粉(0.166g,2.97mmol)和冰AcOH(0.11mL,1.98mmol)在2∶1EtOH/H2O(10mL)中回流3小時(shí)。得到0.302g(94％)所需粗產(chǎn)物，為一油狀物MS(ESP+)324.0；TLC(100％EtOAc)Rf=0.53；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.32(d,1H,J=9.41Hz),6.85(d,1H,J=11.8Hz),4.51(br s,1H),4.15-4.00(m,3H),3.89-3.79(m,3H),3.29(s,3H),2.78-2.60(m,2H),1.26-1.20(m,3H).
G·將F部分產(chǎn)物(0.30g,0.93mmol)、4-硝基苯乙酸(0.169g,0.93mml)和EDC(0.269g,1.40mmol)溶于無水DMF，在RT、N2下攪拌。18小時(shí)后，用TLC判斷反應(yīng)完全，在高真空下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去DMF。將殘余物溶于EtOAc/H2O，分離，有機(jī)層用H2O(1x)和5％NaHCO3(1x)洗滌。合并了的水層用EtOAc萃取(2x)。匯集了的有機(jī)層用鹽水洗滌(1x)，干燥(MgSO4)。過濾，蒸發(fā)，通過快速色譜法(100％CHCl3至40％THF/CHCl3)得到0.279g(61％)純的所需產(chǎn)物，為一泡沫MS(ESP+)486.6；TLC(1∶1THF/CHCl3)Rf=0.53；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.54(d,2H,J=8.64Hz),8.22(dd,1H,J=1.90,6.82Hz),7.52(d,2H,J=8.68Hz),6.89(d,1H,J=11.79Hz),4.12(q,2H,J=7.13Hz),4.01(Aof AB,1H,J=14.98Hz),3.87(s,2H),3.92-3.77(m,3H),3.31(s,3H),2.79-2.57(m,2H),1.2 3(t,3H,J=7.13Hz).
H·在上述F部分的方法中，在N2下，將G部分產(chǎn)物(0.28g,0.574mmol)、Fe粉(0.096g,1.722mmol)和冰AcOH(66μl)在2∶1EtOH/H2O(6mL)中回流2小時(shí)。得到0.208g(78％)所需粗產(chǎn)物，為一泡沫MS(ESP+)457.3；TLC(1∶1THF/CHCl3)Rf=0.38；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)8.54(d,1H,J=8.64 Hz),7.53(br s,1H),7.07(d,2H,J=8.24Hz),6.84(d,1H,J=11.70Hz),6.73(d,2H,J=8.06Hz),4.14-4.04(m,2H),3.99(A of AB,1H,J=14.92Hz),3.88-3.72(m,3H),3.64(s,2H),3.27(s,3H),2.78-2.58(m,2H),1.25-1.20(m,3H).
I·在N2下，將H部分產(chǎn)物(0.21g,0.456mmol)和鄰甲苯基異氰酸酯(0.11mL,0.89mmol)的EtOAc(4.5mL)溶液回流2小時(shí)，直至用TLC分析判斷反應(yīng)完全。反應(yīng)物冷卻至RT。吸濾收集所沉淀的固體，用EtOAc清洗，在濾器上干燥，得到0.159g(59％)純產(chǎn)物，為一不完全白色固體MS(ESP+)590.2；TLC(1∶1THF/CHCl3)Rf=0.50；1HNMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)10.07(s,1H),8.99(s,1H),8.22(d,1H,J=8.77Hz)7.89(s,1H),7.83(d,1H,J=7.96Hz),7.42-7.38(m,3H),7.23(d,2H,J=8.46Hz),7.17-7.10(m,2H),6.92(t,1H,J=7.33 Hz),4.08-3.98(m,3H),3.84-3.76(m,2H),3.70-3.60(m,1H),3.66(s,2H),3.25(s,3H),2.60-2.54(m,2H),2.23(s,3H),1.14t,(3H,J=7.11Hz).
J·在N2下，向輕微回流的Ⅰ部分產(chǎn)物(0.100g,0.170mmol)在無水THF(17mL)中的混懸液中加入三甲基硅醇鈉(0.68mL的1.0M CH2Cl2溶液，0.678mmol)。撤去熱源，反應(yīng)物在RT下攪拌過夜。吸濾收集所沉淀的固體，用THF清洗，在濾器上干燥。將粗產(chǎn)物溶于冰AcOH(1mL)，用Et2O(1mL)處理，輕快地?cái)嚢柽^夜。收集所得固體，用1∶1Et2O/AcOH清洗，在濾器上干燥。得到0.059g(62％)BX41，為一不完全白色固體MS(ESP+)584.0(M+Na)；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm)10.07(s,1H),9.03(s,1H),8.22(d,1H,J=8.71Hz),7.93(s,1H),7.82(d,1H,J=7.91Hz),7.42-7.38(m,3H),7.24(d,2H,J=8.36Hz),7.17-7.10(m,2H),6.92(t,1H,J=7.32Hz),4.05(A of AB,1H,J=15.1Hz),3.83(Bof AB,1H,J=15.1Hz),3.72-3.66(m,4H),3.25(s,3H),2.50-2.46(m,2H),2.23(s,3H).
BX67的制備A·在BX41的制備方法D部分所述的方法中，在RT、N2下，使1-甲基-1,4-苯并二氮雜-2,5-二酮(5.00g,26.29mmol)、無水CsF(4.393g,28.92mmol)、巴豆酸乙酯(4.90mL,39.44mmol)和原硅酸四乙酯(5.86mL,26.29mmol)在無水THF(88mL)中反應(yīng)72小時(shí)。粗產(chǎn)物用快速色譜法精制(100％CH2Cl2至25％Et2O/CH2Cl2)，得到4.04g(50％)純的所需產(chǎn)物，為一白色固體MS(ESP+)305.4；m.p.=84-86℃；TLC(1∶1Et2O/CH2Cl2)Rf=0.51；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)7.87-7.79(m,1H),7.51-7.45(m,1H),7.28-7.23(m,1H),7.17-7.14(m,1H),5.31-5.22and5.19-5.08(m,1H),4.13-4.03(m,2H),3.86-3.73(m,2H),3.35(s,3H),2.85-2.77and2.59-2.45(m,2H),1.33and1.28(d,3H,J=6.9Hz),1.24-1.16(m,3H).
B·在BX47的制備方法E部分所述的方法中，使上述A部分產(chǎn)物(4.04g,13.27mmol)與發(fā)煙硝酸(26mL)反應(yīng)2小時(shí)。在-20℃下，粗產(chǎn)物用Et2O(45mL)研制，得到一固體物質(zhì)，用刮刀破碎之?；鞈乙喝缓笤赗T下輕快地?cái)嚢?8小時(shí)。吸濾收集固體，用Et2O洗滌，在濾器上干燥。得到4.061g(88％)純產(chǎn)物，為一微黃色粉末MS(ESP+)350.3；m.p.=104-106℃；TLC(100％EtOAc)Rf=0.76；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)8.75-8.70(m,1H),8.34-8.29(m,1H),7.33-7.30(m,1H),5.24-5.06(m,1H),4.15-4.03(m,2H),3.94-3.78(m,2H),3.41(s,3H),2.85-2.76and2.63-2.47(m,2H),1.35and1.30(d,3H,J=6.9Hz),1.27-1.17(m,3H).
C·在N2下，將B部分產(chǎn)物(4.06g,11.62mmol)、Fe粉(1.95g,34.87mmol)和冰AcOH(1.33mL,23.24mmol)在2∶1EtOH/H2O(120mL)中回流3小時(shí)。將反應(yīng)完全的反應(yīng)物冷卻至RT，用H2O(40mL)稀釋，通過硅藻土過濾。反應(yīng)燒瓶和濾餅用EtOAc洗滌(4×100mL)。在一分離用的漏斗中，合并了的濾液用5％NaHCO3洗滌(2×100mL)。合并了的含水洗液用EtOAc萃取(1×100mL)，匯集了的有機(jī)液用鹽水洗滌(1×100mL)，干燥(MgSO4)。過濾和濃縮，得到粗產(chǎn)物，為一泡沫。最初在-20℃下、然后在回流下將其用Et2O研制2小時(shí)進(jìn)行精制。冷卻至RT后，吸濾收集固體，用Et2O清洗，在濾器上干燥。得到3.09g(83％)純產(chǎn)物，為一桃色固體MS(ESP+)320.0；m.p.=116-118℃；TLC(100％EtOAc)Rf=0.35；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)7.15-7.08(m,1H),6.96-6.93(m,1H),6.84-6.79(m,1H),5.27-5.05(m,1H),4.27(br s,2H),4.11-4.01(m,2H),3.84-3.62(m,2H),3.26(s,3H),2.81-2.73and2.56-2.42(m,2H),1.30-1.24(d,3H,J=6.9Hz),1.22-1.14(m,3H).
D·在BX41的制備方法G部分所述的方法中，在RT、N2下，在EDC(2.78g,14.49mmol)的存在下，將C部分產(chǎn)物(3.09g,9.66mmol)與4-硝基苯乙酸(2.10g,11.59mmol)在無水DMF(50mL)中縮合18小時(shí)。在RT下粗產(chǎn)物用Et2O研制，進(jìn)行精制。吸濾收集固體，用Et2O(100mL)清洗，在濾器上干燥。得到4.30g(92％)所需產(chǎn)物，為一淡黃色粉末MS(ESP+)483.3；m.p.=118-120℃；TLC(100％EtOAc)Rf=0.45；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)8.77and8.32(s,1H),8.25(dd,1H,J=2.54,8.99Hz),8.19and8.17(d,2H,J=8.67and8.64Hz,respectively),7.69and7.59(d,1H,J=2.60and2.56Hz,respectively),7.50and7.49(d,2H,J=8.73and8.68Hz,respectively),7.15(d,1H,J=8.98Hz),5.28-5.13(m,1H),4.09and3.98(q,2H,J=7.12and7.13Hz,respectively),3.87-3.73(m,4H),3.35and3.32(s,3H),2.84-2.75and2.54-2.47(m,2H),1.32and1 25(d,3H,6.93and6.86Hz,respectively),1.21and1.15(t,3H,J=7.23and7.12Hz,respectively).
E·在上述C部分中所述的方法中，在回流的2∶1EtOH/H2O(90mL)中，用Fe粉(1.49g,26.74mmol)和AcOH(1.02mL,17.82mmol)還原D部分產(chǎn)物(4.30g,8.91mmol)。處理水層后，得到3.98g(99％)粗產(chǎn)物，為一脆性泡沫MS(ESP+)453.5；TLC(100％EtOAc)Rf=0.30；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)8.09(m,1H),7.43-7.38(m,1H),7.10-7.02(m,3H),6.73-6.69(m,2H),5.21-5.08(m,1H),4.13-4.01(m,2H),3.76(s,2H),3.60(s,2H),3.31and3.30(s,3H),2.82-2.74and2.53-2.46(m,2H),1.34-1.15(m,6H).
F·在BX41的制備方法Ⅰ部分所述的方法中，將E部分產(chǎn)物(3.98g,8.8mmol)在EtOAc(90mL)中與鄰甲苯基異氰酸酯(2.18mL,17.6mmol)回流3小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至RT，濃縮至體積減少為原來的約三分之一。吸濾收集所沉淀的固體，用EtOAc(1×25mL)清洗，在濾器上干燥。得到3.77g(73％)所需產(chǎn)物，為一不完全白色粉末MS(ESP+)586.4；m.p.=164-166℃；TLC(1∶1THF/CHCl3)Rf=0.45；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm,rotamers)9.02and8.90(br s,1H),7.96and7.92(br s,1H),7.88-7.84(m,1H),7.68-7.63(m,1H),7.51-7.48(m,1H),7.31(br s,1H),7.03-6.85(m,8H),5.22-5.10(m,1H),4.06-3.92(m,2H),3.75-3.65(m,2H),3.40(s,2H),3.26and3.23(s,3H),2.79-2.70and2.51-2.44(m,2H),2.06(s,3H),1.30and1.22(d,3H,J=6.9Hz),1.17-1.11(m,3H).
G·在RT下，向F部分產(chǎn)物(1.00g,1.71mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液中逐漸加入三甲基硅醇鈉(10.25mL的1.0M CH2Cl2溶液，10.25mmol)。在RT下攪拌過夜后，反應(yīng)物濃縮至干，固體殘余物用1N HCl處理至pH2-3。粘性混合物用H2O(50mL)稀釋，用20％Et2O/THF萃取(1×100mL)。有機(jī)萃取液用H2O(1×25mL)和鹽水(2×25mL)洗滌，干燥(MgSO4)。過濾和蒸發(fā)，得到0.93g粗產(chǎn)物，從MeCN(25mL)中重結(jié)晶，得到0.657g(69％)的BX67，為一淡棕色粉末MS(ESP+)558.2；m.p.=237-239℃；TLC(3∶1THF/CHCl3)Rf=0.37；1H NMR(DMSO-d6,300MHz,ppm,rotamers)10.46(s,1H),8.99(s,1H),7.95-7.93(m,1H),7.88(s,1H),7.84-7.76(m,2H),7.40(d,2H,J=8.56Hz),7.33(dd,1H,J=1.82,8.93Hz)7.23(d,2H,J=8.50Hz),7.17-7.07(m,2H),6.95-6.90(m,1H),5.03-4.90(m,1H),3.84-3.71(ABq,2H),3.56(s,2H),3.24and3.22(s,3H),2.56-2.40(m,2H),2.22(s,3H),1.17and1.14(d,3H,J=7.0and6.80Hz,respectively).
MX3的制備A·在N2下，向Z-Asp(OtBu)(1.00g,3.09mmol)的無水DME(8mL)溶液中按順序加入N-甲基嗎啉(0.34mL,3.09mmol)和氯甲酸異丁酯(0.40mL,3.09mmol)。5分鐘后，使反應(yīng)物通過玻璃棉過濾，以除去固體。在0℃下，向?yàn)V液中加入醚制的CH2N2(約4.64mmol)。30分鐘后，向反應(yīng)物中通入無水N2氣流10分鐘，以除去過量的CH2N2。反應(yīng)物濃縮至干，將殘余物溶于MeOH(16mL)，在RT下加入苯甲酸銀(0.14g,0.62mmol)的Et3N(1.55mL)溶液。攪拌30分鐘后，反應(yīng)物蒸發(fā)至干，將殘余物溶于EtOAc，使該溶液通過SiO2墊。濾液用5％NaHCO3(3x)、H2O(1x)、5％檸檬酸(3x)和鹽水(2x)洗滌，干燥(MgSO4)。過濾和蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物，為一油(0.70g,64％):MS(FAB)348；TLC(20％EtOAc/hexane)Rf=0.30；1HNMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.35-7.27(m,5H),5.72and5.58(br d,1H,8.9Hz),5.10and5.06(s,2H),4.60-4.51and4.36-4.29(m,1H),3.73and3.64(s,3H),2.75-2.47(m,4H),1.40(s,9H).
B·在RT下，將上述產(chǎn)物(0.70g,1.99mmol)的MeOH(3mL)溶液用1N NaOH(3mL)處理。攪拌1小時(shí)后，用TLC分析判斷反應(yīng)完全。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去MeOH。殘余物用H2O稀釋，用Et2O萃取(3x)。棄去這些萃取液。加入1M NaHSO4使含水部分呈酸性(pH4)，用EtOAc萃取(3x)。合并了的EtOAc萃取液用H2O(1x)和鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)。所得產(chǎn)物為一油(0.52g,77％):MS(FAB)338(M+H),360(M+Na)；TLC(1∶1EtOAc/CHCl3)Rf=0.13；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.33-7.28(m,5H),5.77and5.63(d,1H,J=8.7Hz),5.11and5.07(s,2H),4.63-4.58and4.37-4.30(m,1H),2.78-2.50(m,4H),1.40(s,9H).
C·將DCC(1.85g,8.95mmol)和HOBT(1.37g,8.95mmol)在EtOAc(55mL)中的混合物在RT下攪拌20分鐘，直至均勻。然后加入B部分產(chǎn)物(3.02g,8.95mmol)、4-甲氧基芐胺(1.17mL,8.95mmol)和N-甲基嗎啉(1.97mL,17.9mmol)。攪拌過夜后，過濾反應(yīng)物以除去固體，濾餅用新制得的EtOAc(50mL)洗滌。濾液用H2O(2x)、5％檸檬酸(1x)、5％NaHCO3(1x)和鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)。在SiO2上進(jìn)行快速柱色譜法，用100％CHCl3、然后用10％EtOAc/CHCl3洗脫，所得產(chǎn)物為一白色固體(3.41g,83％):mp=100-102℃；MS(FAB)457；TLC(9∶1CHCl3/MeOH)Rf=0.71；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.33-7.27(m,5H),7.16(d,2H,J=8.6Hz),6.82(d,2H,J=8.7Hz),6.06(br s,1H),5.89(br d,1H),5.04(s,2H),4.31(d,2H,J=5.6Hz),4.31-4.22(m,1H),3.76(s,3H),2.68-2.44(m,4H),1.39(s,9H).
D·將該產(chǎn)物(0.50g,1.1mmol)和Degussa型E101NE/W10％Pd/C(0.117g)在MeOH(20mL)中的混懸液在25psi H2下氫解18小時(shí)。反應(yīng)物通過硅藻土過濾，用MeOH清洗。濾液蒸發(fā)至干。所得產(chǎn)物為一無色油(0.36g,100％):MS(FAB)323；TLC(9∶1CHCl3/MeOH)Rf=0.30；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.58(br s,1H),7.15(d,2H,J=8.6Hz),6.79(d,2H,J=8.6Hz),4.30(d,2H,J=6.50Hz),3.74(s,3H),3.54(m,1H),3.15(br s,2H),2.46-2.29(m,4H),1.40(s,9H).
E·在一種惰氣下，將來自D部分的產(chǎn)物(0.36g,1.1mmol)和Eschenmoser氏鹽(0.204g,1.1mmol)在MeCN(10mL)中回流42小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至RT，蒸發(fā)至干。殘余物用5％NaHCO3稀釋，用EtOAc(3x)萃取。合并了的有機(jī)萃取液用5％NaHCO3(1x)、H2O(1x)和鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)。用CHCl3/EtOAc梯度進(jìn)行快速柱色譜法，所得產(chǎn)物為一油(0.19g,51％):MS(FAB)335；TLC(1∶1EtOAc/CHCl3)Rf=0.22；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.16(d,2H,J=8.6Hz),6.81(d,2H,J=8.6Hz),4.64(A of AB,1H,J=14.6Hz),4.27(B of AB,1H,J=14.6Hz),4.10(ABq,2H,J=11.7Hz),3.75(s,3H),3.28(m,1H),2.50(dd,1H,J=4.4,17.2Hz),2.37(AB of ABX,2H,J=15.8Hz),2.24(dd,1H,J=11.2,17.2Hz),1.99(br s,1H),1.40(s,9H).
F·將鄰甲苯基脲基苯乙酸(3.53g,12.4mmol)、H-Leu-OtBu·HCl(2.78g,12.4mmol)、TBTU(3.98g,12.4mmol)和iPr2NEt(4.32mL,24.8mmol)在DMF(25mL)中的混合物在RT下攪拌過夜。加入H2O(10mL)使產(chǎn)物沉淀出來。在玻璃料介質(zhì)上過濾收集固體，用2∶1DMF/H2O(35mL)、H2O(25mL)和Et2O(2×25mL)洗滌，在濾器上干燥(4.18g,74％)。將所有該產(chǎn)物懸浮在CH2Cl2(16mL)中，用TFA(16mL)處理，在RT下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)物濃縮為糖漿，從CH2Cl2中蒸發(fā)(2×20mL)。殘余物用Et2O(100mL)在RT下研制2小時(shí)。在玻璃料介質(zhì)上過濾收集固體，用Et2O(50mL)洗滌，在濾器上干燥(3.40g,93％):MS(FAB)398。
H·在RT下，將來自步驟G的產(chǎn)物(0.66g,1.96mmol)、F部分產(chǎn)物(0.78g,1.96mmol)和EDC(0.410g,2.14mmol)在NMP(4mL)中攪拌48小時(shí)。將反應(yīng)物傾入EtOAc(60mL)，用H2O(8×6mL)和鹽水(1x)洗滌，干燥(MgSO4)。用反復(fù)快速柱色譜法分離所需純的非對映異構(gòu)體，用1∶1EtOAc/CH2Cl2洗脫MS(ESP+)714.3；TLC(100％EtOAc)Rf=0.53；1H NMR(CDCl3,300MHz,ppm)7.53-7.43(m,2H),7.20-7.00(m,9H),6.80-6.73(m,2H),6.45-6.33(m,1H),5.31-4.58(m,4H),4.21-4.00(m,1H),3.73(s,3H),3.41(s,2H),2.74-2.35(m,4H),2.14(s,3H),1.36(s,9H),1.56-1.05(m,3H),0.88,0.82,0.68,0.63(4d,6H total,J=6.17,6.32,6.46,6.37Hz,respectively).
G·在RT下，將該產(chǎn)物(0.34g,0.476mmol)在TFA(3mL)中攪拌3小時(shí)。反應(yīng)物濃縮至干，殘余物從CH2Cl2蒸發(fā)(3×3mL)。在RT下，粗產(chǎn)物用Et2O研制，過濾收集并在濾器上干燥。所得產(chǎn)物MX3為一淺黃色固體(0.263g,84％):MS(ESP+)680.2(M+Na)；1H NMR(d6-DMSO,300MHz,ppm)與旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)和指標(biāo)一致。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將會(huì)顯而易見的是，在不背離本發(fā)明精神或范圍的情況下，可以對本發(fā)明方法和組合物作出各種修改和變化。因此，本發(fā)明意圖覆蓋本發(fā)明的修改和變化，只要這些修改和變化落在附加的權(quán)利要求及其等價(jià)物的范圍之內(nèi)。表2

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物

結(jié)構(gòu)-活性9 表3 52化合物























權(quán)利要求
1·一種細(xì)胞粘連抑制劑，該抑制劑包含一種具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物，A-B(I)其中A包含一個(gè)VLA-4特異性決定因子，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B包含一個(gè)整合素骨架。
2·權(quán)利要求1的抑制劑，其中所述的抑制劑具有VLA-4抑制活性，B包含一個(gè)來源于具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物的整合素骨架。
3·權(quán)利要求2的細(xì)胞粘連抑制劑，其中B選自由表2中化合物的整合素骨架組成的組。
4·權(quán)利要求1的細(xì)胞粘連抑制劑，其中B是一種化合物，選自由式Ⅱa、Ⅱb和Ⅱc組成的組
其中A1選自由NR1、O、S、(CR1R2)r和N[(CR1R2)m(C=Y)A2R1]組成的組；A2選自由O、NR2、S和(CR1R2)r組成的組；A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；X選自由H2、O和S組成的組；Y為H2或O；r=0或1；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；U選自由COR12、(CR1R2)nR12和SO2R11組成的組；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R3為R1或氨基酸側(cè)鏈；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基、SR1、NZR12和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、羧酰胺取代的烷基；芳烷氧基。
5·權(quán)利要求2的細(xì)胞粘連抑制劑，其中B包含一個(gè)骨架，選自由式Ⅲa、式Ⅲb和式Ⅲc組成的組
n=0-5；m=1-4；q=1或2；r=0或1；Y為H2或O；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R10選自由R2、NHSO2R11、NH2、OR2和NHZR12組成的組；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；或芳烷氧基；R13為H或-CH2(CH2)mCH2-；R2和R7可以共同構(gòu)成-(CH2)m-；R2和R10可以共同構(gòu)成-(CH2)m-；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基。
6·權(quán)利要求2的細(xì)胞粘連抑制劑，其中B包含一個(gè)骨架，選自由式Ⅳa、式Ⅳb和式Ⅳc組成的組
其中A4選自由(CR1R2)n、O、S、NR1、SO2NR1、CONR1、CH2NR11、NR1SO2、CH2O、CH2NCOR11和CH2CONR1組成的組；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R4選自由H、OR1、SR1、NR1R2、烷基、NZR1、NSO2R11和CO2R1組成的組；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
7·權(quán)利要求2的抑制劑，其中B包含一個(gè)具有式Ⅴa或Ⅴb結(jié)構(gòu)的骨架
其中A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CRuR2)nR7組成的組；n=0-5；m=1-4；r=0或1；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P為CO或SO2；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；若R8為H，則R9為R7，或者R8和R9共同構(gòu)成一個(gè)可選被羥基、-OR1、-N1R1R2、-SR1、SO2R11、-SOR11取代的4-7元環(huán)；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
8·一種VLA-4抑制劑，選自由化合物63、64和66組成的組。
9·一種VLA-4抑制劑，選自由化合物42、44、45、46、48、49、50、51、52和53組成的組。
10·權(quán)利要求1或2的細(xì)胞粘連抑制劑，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；可選被N-烷基或N-芳基氨基取代的脂族?；环减；浑s環(huán)?；?；烷基或芳基磺?；豢蛇x被芳基取代的芳烷基羰基；雜環(huán)烷基羰基；烷氧基羰基；芳烷氧基羰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基；雜環(huán)烷氧基羰基；烷基氨基羰基；可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基；烷基磺?；?；芳烷基磺?；?；芳基磺酰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基磺酰基；雜環(huán)基磺酰基；雜環(huán)基烷基磺酰基；芳烷氧基羰基；芳氧基羰基；環(huán)烷氧基羰基；雜環(huán)氧基羰基；雜環(huán)基烷氧基羰基；可選被芳基取代的單或二烷基氨基羰基；(烷基)(芳烷基)氨基羰基；單或二芳烷基氨基羰基；單或二芳基氨基羰基；(芳基)(烷基)氨基羰基；單或二環(huán)烷基氨基羰基；雜環(huán)基氨基羰基；雜環(huán)基烷基氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；可選被芳基取代的烯?；?；可選被芳基取代的烯基磺酰基；可選被芳基取代的炔?；?；可選被芳基取代的炔基磺?；?；環(huán)烯基羰基；環(huán)烯基磺酰基；環(huán)烷基烷酰基；環(huán)烷基磺?；?；芳基芳?；?；二芳基磺?；?；烷氧基磺?；环纪檠趸酋；?；烷基氨基磺酰基；芳氧基磺酰基；芳基氨基磺酰基；N-芳基脲取代的烷?；?；N-芳基脲取代的烷基磺酰基；環(huán)烯基取代的羰基；環(huán)烯基取代的磺?；豢蛇x被芳基取代的烯氧基羰基；可選被芳基取代的烯氧基磺?；?；可選被芳基取代的炔氧基羰基；可選被芳基取代的炔氧基磺酰基；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基羰基；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基磺?；?；酰氨基取代的烷?；?；酰氨基取代的烷基磺?；话被驶〈耐轷；话奔柞；〈耐轷；?；氨甲酰基取代的烷基磺?；?；雜環(huán)基烷酰基；雜環(huán)基氨基磺?；?；羧基烷基取代的芳烷?；霍然榛〈姆纪榛酋；?；氧碳環(huán)稠合的芳酰基；氧碳環(huán)稠合的芳基磺?；浑s環(huán)基烷?；籒’,N’-烷基，芳基肼基羰基；芳氧基取代的烷?；碗s環(huán)基烷基磺?；?；烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基稠合的環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基、芳基取代的烯基或炔基、環(huán)烷基取代的烷基、環(huán)烯基取代的環(huán)烷基、二芳基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳基取代的烷氧基、芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、N-烷基脲取代的烷基、N-芳基脲取代的烷基、烷基羰基氨基取代的烷基、氨基羰基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基取代的烷基、雜環(huán)基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、氧碳環(huán)稠合的芳基和雜環(huán)基烷基。
11·根據(jù)權(quán)利要求10的細(xì)胞粘連抑制劑，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；可選被N-烷基或N-芳基酰氨基取代的脂族酰基；芳酰基；雜環(huán)?；?；烷基及芳基磺酰基；可選被芳基取代的芳烷基羰基；雜環(huán)烷基羰基；烷氧基羰基；芳烷氧基羰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基；雜環(huán)烷氧基羰基；烷基氨基羰基；可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基。
12·根據(jù)權(quán)利要求11的細(xì)胞粘連抑制劑，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組脂族?；⒎减；⒎纪榛驶?、雜環(huán)基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基和雜環(huán)烷基羰基。
13．根據(jù)權(quán)利要求12的細(xì)胞粘連抑制劑，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基和(N-Ar’-脲)-對位取代的芳基。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的細(xì)胞粘連抑制劑，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基和(N-Ar’-脲)-對位取代的苯基。
15·根據(jù)權(quán)利要求14的細(xì)胞粘連抑制劑，其中B選自由式Ⅱa、Ⅱb和Ⅱc組成的組
其中A1選自由NR1、O、S、(CR1R2)r和N[(CR1R2)m(C=Y)A2R1]組成的組；A2選自由O、NR2、S和(CR1R2)r組成的組；A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；X選自由H2、O和S組成的組；Y為H2或O；r=0或1；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；U選自由COR12、(CR1R2)nR12和SO2R11組成的組；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R3為R1或氨基酸側(cè)鏈；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基、SR1、NZR12和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、羧酰胺取代的烷基；芳烷氧基。
16·根據(jù)權(quán)利要求13的VLA-4抑制劑，其中B選自由式Ⅲa、式Ⅲb和式Ⅲc組成的組
其中n=0-5；m=1-4；q=1、2；r=0、1；Y為H2或O；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R10選自由R2、NHSO2R11、NH2、OR2和NHZR12組成的組；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；或芳烷氧基；R13為H或-CH2(CH2)nCH2-；R2和R7可以可選地共同構(gòu)成-(CH2)m-；R2和R10可以可選地共同構(gòu)成-(CH2)m-；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；Q為(CR1R2)r或NR12。
17·根據(jù)權(quán)利要求13的VLA-4抑制劑，其中B是一種選自由式Ⅳa、式Ⅳb和式Ⅳc組成的組的結(jié)構(gòu)
其中A4選自由(CR1R2)n、O、S、NR1、SO2NR1、CONR1、CH2NR11、NR1SO2、CH2O、CH2NCOR11和CH2CONR1組成的組；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R4選自由H、OR1、SR1、NR1R2、烷基、NZR1、NSO2R11和CO2R1組成的組；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
18·根據(jù)權(quán)利要求13的VLA-4抑制劑，其中B是一種式Ⅴa或Ⅴb結(jié)構(gòu)
其中A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CR1R2)nR7組成的組；n=0-5；m=1-4；r=0或1；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P為CO或SO2；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；若R8為H，則R9為R7，或者R8和R9共同構(gòu)成脯氨酸、硫代脯氨酸或2-甲基哌啶環(huán)；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
19·一種藥物組合物，該組合物含有(a)權(quán)利要求1或2的細(xì)胞粘連抑制劑，其含量是有效預(yù)防、抑制或阻止細(xì)胞粘連所需的；和(b)一種藥學(xué)上可接受的載體。
20·根據(jù)權(quán)利要求2的VLA-4抑制劑，其中所述的抑制劑具有約1pM至約10μM的IC50，該IC50由VLA-4直接結(jié)合分析法測量得到。
21·根據(jù)權(quán)利要求20的VLA-4抑制劑，其中所述的抑制劑具有約1pM至約100nM的IC50。
22·根據(jù)權(quán)利要求21的VLA-4抑制劑，其中所述的抑制劑具有約1pM至約10nM的IC50。
23·一種將具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的第一種化合物轉(zhuǎn)化為不同的第二種化合物的方法，所述第一種化合物包含一個(gè)Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子和一個(gè)整合素骨架，所述特異性決定因子包含一個(gè)苯基脒部分或堿性官能團(tuán)，所述第二種化合物能夠干擾哺乳動(dòng)物VLA-4細(xì)胞粘連，且不顯著地抑制以Ⅱb/Ⅲa為基礎(chǔ)的細(xì)胞粘連，所述的方法包括下列步驟a)鑒別所述第一種化合物的特異性決定因子中苯基脒部分，或者如果沒有苯基脒存在的話，通過在對位取向產(chǎn)生虛擬的鍵，并除去不需要的鍵，將所述特異性決定因子中堿性官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為一個(gè)虛擬的苯基脒部分；b)除去步驟a)中鑒別出來的苯基脒部分，并用一個(gè)VLA-4特異性決定因子取代所述部分，從而生成第二種化合物。
24·權(quán)利要求23的方法，進(jìn)一步包括在所述特異性決定因子處或鄰近其位置插入一個(gè)附加的基團(tuán)的步驟，以賦予所述第二種化合物所需的特征。
25·權(quán)利要求24的方法，其中所述的附加基團(tuán)是亞甲基。
26·權(quán)利要求24的方法，進(jìn)一步包括修飾該第二種化合物的步驟，以改變所述化合物的VLA-4活性。
27·一種用于治療與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病的藥物組合物的制備方法，所述方法包括下列步驟a)提供具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的第一種化合物，所述第一種化合物包含(ⅰ)一個(gè)Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，所述特異性決定因子包含一個(gè)苯基脒部分或一個(gè)堿性氮官能團(tuán)，和(ⅱ)一個(gè)整合素骨架；b)除去所述Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，并用一個(gè)VLA-4特異性決定因子取代之，從而生成具有VLA-4抑制活性的第二種化合物；和c)將所述第二種化合物與一種藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合，從而制得藥物組合物。
28·由權(quán)利要求的方法制得的藥物組合物。
29·權(quán)利要求27的方法，進(jìn)一步包括將所述藥物組合物以商業(yè)數(shù)量制備的步驟。
30·一種治療哺乳動(dòng)物與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病的方法，該方法包括將一種治療有效量的具有式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物對所述哺乳動(dòng)物給藥的步驟，該化合物能夠干擾VLA-4活性，A-B(Ⅰ)其中A是一個(gè)VLA-4特異性決定因子，該決定因子不賦予顯著的Ⅱb/Ⅲa活性，B包含一個(gè)整合素骨架。
31·權(quán)利要求30的治療方法，其中B包含一個(gè)來源于具有Ⅱb/Ⅲa活性的化合物的整合素骨架。
32·權(quán)利要求31的方法，其中B選自由表2中化合物的整合素骨架組成的組。
33·權(quán)利要求31的方法，其中B是一種化合物，選自由式Ⅱa、式Ⅱb和式Ⅱc組成的組
其中A1選自由NR1、O、S、(CR1R2)r和N[(CR1R2)m(C=Y)A2R1]組成的組；A2選自由O、NR2、S和(CR1R2)r組成的組；A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；X選自由H2、O和S組成的組；Y為H2或O；r=0或1；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；U選自由COR12、(CR1R2)nR12和SO2R11組成的組；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R3為R1或氨基酸側(cè)鏈；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基、SR1、NZR12和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、羧酰胺取代的烷基；芳烷氧基。
34·權(quán)利要求31的方法，其中B是一種化合物，選自由式Ⅲa、式Ⅲb和式Ⅲc組成的組
其中n=0-5；m=1-4；q=1或2；r=0或1；Y為H2或O；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R10選自由R2、NHSO2R11、NH2、OR2和NHZR12組成的組；R12選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、雜環(huán)、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；或芳烷氧基；R13為H或-CH2(CH2)mCH2-；R2和R7可以可選地共同構(gòu)成-(CH2)m-；R2和R10可以可選地共同構(gòu)成-(CH2)m-；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；Q為(CR1R2)r或NR12。
35·權(quán)利要求31的方法，其中該抑制劑選自由表3中化合物組成的組。
36·權(quán)利要求31的方法，其中該化合物選自由表1中化合物組成的組。
37·權(quán)利要求31的方法，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；可選被N-烷基或N-芳基氨基取代的脂族?；环减；?；雜環(huán)?；煌榛蚍蓟酋；?；可選被芳基取代的芳烷基羰基；雜環(huán)烷基羰基；烷氧基羰基；芳烷氧基羰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基；雜環(huán)烷氧基羰基；烷基氨基羰基；可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基；烷基磺?；?；芳烷基磺?；?；芳基磺酰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基磺?；?；雜環(huán)基磺?；?；雜環(huán)基烷基磺?；?；芳烷氧基羰基；芳氧基羰基；環(huán)烷氧基羰基；雜環(huán)氧基羰基；雜環(huán)基烷氧基羰基；可選被芳基取代的單或二烷基氨基羰基；(烷基)(芳烷基)氨基羰基；單或二芳烷基氨基羰基；單或二芳基氨基羰基；(芳基)(烷基)氨基羰基；單或二環(huán)烷基氨基羰基；雜環(huán)基氨基羰基；雜環(huán)基烷基氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基)氨基羰基；(芳烷基)(雜環(huán)基烷基)氨基羰基；可選被芳基取代的烯酰基；可選被芳基取代的烯基磺?；?；可選被芳基取代的炔?；?；可選被芳基取代的炔基磺?；?；環(huán)烯基羰基；環(huán)烯基磺酰基；環(huán)烷基烷?；?；環(huán)烷基磺?；环蓟减；?；二芳基磺?；?；烷氧基磺?；?；芳烷氧基磺酰基；烷基氨基磺?；?；芳氧基磺?；?；芳基氨基磺?；籒-芳基脲取代的烷?；?；N-芳基脲取代的烷基磺?；画h(huán)烯基取代的羰基；環(huán)烯基取代的磺酰基；可選被芳基取代的烯氧基羰基；可選被芳基取代的烯氧基磺?；豢蛇x被芳基取代的炔氧基羰基；可選被芳基取代的炔氧基磺?；?；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基羰基；可選被芳基取代的烯基-或炔基-氨基磺?；货０被〈耐轷；?；酰氨基取代的烷基磺?；?；氨基羰基取代的烷酰基；氨甲酰基取代的烷?；?；氨甲?；〈耐榛酋；?；雜環(huán)基烷酰基；雜環(huán)基氨基磺?；?；羧基烷基取代的芳烷?；?；羧基烷基取代的芳烷基磺酰基；氧碳環(huán)稠合的芳?；谎跆辑h(huán)稠合的芳基磺?；浑s環(huán)基烷?；?；N’,N’-烷基，芳基肼基羰基；芳氧基取代的烷?；碗s環(huán)基烷基磺?；?；烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基稠合的環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、芳基取代的烷基、芳基取代的烯基或炔基、環(huán)烷基取代的烷基、環(huán)烯基取代的環(huán)烷基、二芳基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳基取代的烷氧基、芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、N-烷基脲取代的烷基、N-芳基脲取代的烷基、烷基羰基氨基取代的烷基、氨基羰基取代的烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基取代的烷基、雜環(huán)基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、氧碳環(huán)稠合的芳基和雜環(huán)基烷基。
38·根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；可選被N-烷基或N-芳基酰氨基取代的脂族?；环减；浑s環(huán)?；煌榛胺蓟酋；豢蛇x被芳基取代的芳烷基羰基；雜環(huán)烷基羰基；烷氧基羰基；芳烷氧基羰基；可選與芳基稠合的環(huán)烷基羰基；雜環(huán)烷氧基羰基；烷基氨基羰基；可選被雙(烷基磺酰)氨基、烷氧基羰基氨基或烯基取代的芳基氨基羰基和芳烷基氨基羰基。
39·根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組脂族?；⒎减；?、芳烷基羰基、雜環(huán)基、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基和雜環(huán)烷基羰基。
40·根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的芳烷基和(N-Ar’-脲)-對位取代的芳基。
41·根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中的A選自由下列基團(tuán)組成的組(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基羰基、(N-Ar’-脲)-對位取代的苯甲基和(N-Ar’-脲)-對位取代的苯基。
42·權(quán)利要求31的方法，其中B是一種結(jié)構(gòu)，選自由式Ⅳa、式Ⅳb和式Ⅳc組成的組
其中A4選自由(CR1R2)n、O、S、NR1、SO2NR1、CONR1、CH2NR11、NR1SO2、CH2O、CH2NCOR11和CH2CONR1組成的組；n=0-5；m=1-4；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；Z為CO或(CR1R2)n；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R4選自由H、OR1、SR1、NR1R2、烷基、NZR1、NSO2R11和CO2R1組成的組；R5和R6獨(dú)立選自由H、OR1、鹵素、烷基和NR1R2組成的組；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
43·權(quán)利要求31的方法，其中B是一種式Ⅴa或Ⅴb結(jié)構(gòu)
其中A3選自由NR1、O、S和
組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CR1R2)nR7組成的組；n=0-5m=1-4；r=0或l；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P為CO或SO2；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；若R8為H，則R9為R7，或者R8和R9共同構(gòu)成一個(gè)可選被羥基、-OR1、-N1R1R2、-SR1、SO2R11、-SOR11取代的4-7元環(huán)；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
44·一種Ⅱb/Ⅲa抑制劑，該抑制劑包含一種具有式Ⅱ結(jié)構(gòu)的化合物X-Y其中X包含一個(gè)Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子，該決定因子不賦予顯著的VLA-4活性，Y包含一個(gè)來源于一種VLA-4抑制劑的整合素骨架。
45·權(quán)利要求44的Ⅱb/Ⅲa抑制劑，其中的Y包含一個(gè)下式的肽類
其中A是任意如表2所例舉的Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子；A3選自由NR1、O、S和(CR1R2)r組成的組；A5選自由SO2R11、COR7和(CR1R2)nR7組成的組；n=0-5；m=1-4；r=0、1；W選自由CO2H、SO3H、PO4H2、四唑和H組成的組；P選自由CO、SO2組成的組；R1和R2獨(dú)立選自由下列基團(tuán)組成的組H；烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基或羧酰胺取代的烷基；R7選自由下列基團(tuán)組成的組H；芳基；取代的芳基；芳烷基；烷基；烯基；可選被雜環(huán)、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基、烷氧基或鹵素取代的烷基；R15和R16獨(dú)立為H或甲基；R11選自由下列基團(tuán)組成的組烷基；烯基；炔基；環(huán)烷基；環(huán)烯基；芳基；芳烷基；雜環(huán)；可選被環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)、烯基、炔基、烷氧基、羥基、鹵素、芳烷氧基、硫代烷氧基、羧基、烷氧基羰基和羧酰胺取代的烷基。
46·一種Ⅱb/Ⅲa抑制劑的制備方法，該方法包括下列步驟a)提供一種VLA-4抑制劑，該抑制劑包含一個(gè)VLA-4特異性決定因子和一個(gè)整合素骨架；b)用一個(gè)Ⅱb/Ⅲa特異性決定因子取代所述VLA-4特異性決定因子，從而生成一種具有Ⅱb/Ⅲa抑制活性的化合物。
47·權(quán)利要求46的方法，其中步驟a)中的整合素骨架是一種肽類。
48·一種治療與Ⅱb/Ⅲa細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病的方法，該方法包括將含有有效量的權(quán)利要求44的抑制劑的組合物對哺乳動(dòng)物給藥。
49·一種藥物組合物，該組合物含有權(quán)利要求44的化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體。
50·一種細(xì)胞粘連抑制劑，選自表1中的化合物。
51·一種藥物組合物，該組合物含有一種或多種權(quán)利要求50的抑制劑和一種藥學(xué)上可接受的載體。
52·權(quán)利要求30的方法，其中所述的與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病是哮喘或成人呼吸窘迫綜合征。
53·權(quán)利要求30的方法，其中所述的與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病是多發(fā)性硬化。
54·權(quán)利要求30的方法，其中所述的與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病是糖尿病。
55·權(quán)利要求30的方法，其中所述的與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病是一種炎癥或自體免疫疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的化合物,該化合物可用于抑制和預(yù)防細(xì)胞粘連和細(xì)胞粘連介導(dǎo)的病變。本發(fā)明也涉及含有這些化合物的藥物組合物,和使用它們來抑制和預(yù)防細(xì)胞粘連與細(xì)胞粘連介導(dǎo)的病變的方法。本發(fā)明的化合物和藥物組合物可用作治療劑或預(yù)防劑。它們特別適用于治療多種炎癥和自體免疫疾病。
文檔編號C07D243/24GK1230110SQ97197953
公開日1999年9月29日 申請日期1997年7月24日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月25日
發(fā)明者鄭中立, C·L·安辛格, S·P·阿達(dá)姆斯 申請人:拜奧根有限公司