宜肝樂(lè)片在制備抑制喉表皮樣癌細(xì)胞HEp-2細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種宜肝樂(lè)片在制備抑制喉表皮樣癌細(xì)胞 HEp-2細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用及宜肝樂(lè)片的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 宜肝樂(lè)顆粒標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS-10148(ZD-0148)-2002,記載于國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科肝 膽分冊(cè)。由雞矢藤200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功勞木100g、冷水花70g作為原料藥制成，具有清熱解毒，利膽退黃的功效。用于肝膽 濕熱所致的急慢性乙型肝炎。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有宜肝樂(lè)片在在制備抑制人喉表皮樣癌細(xì)胞HEp-2細(xì)胞增殖藥 物中的應(yīng)用的報(bào)道，也未見(jiàn)有宜肝樂(lè)片提取制備方面采用超臨界萃取的報(bào)道，而傳統(tǒng)水煎 煮、乙醇回流提取的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影 響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的:本發(fā)明的目的在于提供一種宜肝樂(lè)片在制備抑制喉表皮樣癌細(xì)胞HEp-2細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種宜肝樂(lè)片的制備方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的： 宜肝樂(lè)片在制備抑制喉表皮樣癌細(xì)胞HEp-2細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，所述宜肝樂(lè)片由 雞矢藤200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功勞 木100g、冷水花70g作為原料藥制成，所述宜肝樂(lè)片的制備方法包括如下步驟：取雞矢藤 200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功勞木 100g、冷水花70g，加入到C0 2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體 積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C〇2流量l_3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間 700-800min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成 200片，每片重0.30g。
[0007] 優(yōu)選的，上述的宜肝樂(lè)片在制備抑制喉表皮樣癌細(xì)胞HEp-2細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，所述宜肝樂(lè)片的制備方法包括如下步驟:取雞矢藤200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪 200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功勞木100g、冷水花70g，加入到⑶2超臨界萃取 器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40 °C，C0 2流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間750min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀 粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.30g。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)中，宜肝樂(lè)顆?？诜?，一次10g，一日3-4次。宜肝樂(lè)顆粒服藥量大。采用本 發(fā)明方法制備成的宜肝樂(lè)片每片重〇.30g，每次僅需2片，一日服用3-4次。在具有更多活性 成分的條件下大大減少了服用量。此結(jié)論可以通過(guò)下述試驗(yàn)證明。
[0009]試驗(yàn)一、不同方法制備的宜肝樂(lè)片中大黃素含量的比較 1、儀器及試藥本發(fā)明宜肝樂(lè)片：按實(shí)施例1方法制備，使用1500g原料藥，經(jīng)提取制成 200片，每片重0.30g。原宜肝樂(lè)顆粒，按照13-10148(20-0148)-2002標(biāo)準(zhǔn)方法制備。 Agi 1 ent 1200高效液相色譜儀;METTLERAE240電子分析天平;大黃素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物 制品檢定所）。
[0010] 2、方法 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2015年版第四部凡例十五)測(cè)定。
[0011]色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-〇. 1%磷酸 溶液(80:20)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為437nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
[0012] 對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含50yg的溶 液，即得。
[0013] 本發(fā)明的宜肝樂(lè)片的供試品溶液的制備取本發(fā)明的宜肝樂(lè)片5片，研細(xì)，取 0.12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加無(wú)水乙醇20ml，超聲處理（功率250W，頻率25kHZ)l小 時(shí)，放冷，濾過(guò)，藥渣用無(wú)水乙醇洗滌4次，每次10ml，合并濾液與洗滌液，蒸干，殘?jiān)酉←} 酸l〇ml使溶解，加氯仿20ml，加熱回流30分鐘，放冷，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容 器，并入分液漏斗中；分取氯仿液，酸液加氯仿洗滌2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)?精密加入甲醇l〇ml，稱定重量，微熱使溶解，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0014] 對(duì)照產(chǎn)品供試品溶液的制備取本品對(duì)照的宜肝樂(lè)顆粒20g，研細(xì)，取4g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，加無(wú)水乙醇20ml，超聲處理(功率250W，頻率25kHZ) 1小時(shí)，放冷，濾過(guò)， 藥渣用無(wú)水乙醇洗滌4次，每次10ml，合并濾液與洗滌液，蒸干，殘?jiān)酉←}酸10ml使溶解， 加氯仿20ml，加熱回流30分鐘，放冷，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗 中；分取氯仿液，酸液加氯仿洗滌2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)芗尤爰状?10ml，稱定重量，微熱使溶解，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得。
[0015] 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
[0016] 3、結(jié)果 結(jié)果表明，本發(fā)明宜肝樂(lè)片中大黃素的含量為0.95-1.86mg/片；而原宜肝樂(lè)顆粒中大 黃素的含量為〇.91mg/袋(每袋含顆粒劑10g)，每次服用量2片的大黃素含量為原顆粒劑10g 含量的2-4倍，在服用量減少的情況下，大黃素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本發(fā)明制備方法制備的宜肝樂(lè)片，有效成分含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于評(píng)5_ 10148 (ZD-0148 ) -2002標(biāo)準(zhǔn)記載的方法制備的宜肝樂(lè)顆粒。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說(shuō)明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解 本發(fā)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述 內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0019] 實(shí)施例1 取雞矢藤200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功勞木100g、冷水花70g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃 取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C，C0 2流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間 750min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200 片，每片重0.30g。
[0020]經(jīng)檢測(cè)，成品中大黃素的含量為1.85mg/片。
[0021 ] 實(shí)施例2 取雞矢藤200g、虎杖160g、馬鞭草200g、六月雪200g、馬蘭草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功勞木100g、冷水花70g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃 取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C0 2流量lml/g生藥· min，萃取時(shí)間 900min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200 片，每片重0.30g。
[0022]經(jīng)檢測(cè)，成品中大黃素的含量為1.21mg/片。
[0023]