專利名稱：結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4’-磷酸酯二乙醇化物的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇溶劑化物。
鬼臼乙叉甙是目前美國批準的抗癌藥物，用于治療小細胞肺癌和頑固性睪丸腫瘤。由于鬼臼乙叉甙只微溶于水，因此制備其溶液需要有機溶劑或有機溶劑混合物。目前市售的非腸道給藥的鬼臼乙叉甙產(chǎn)品是溶于多溶劑系統(tǒng)中的。
鬼臼乙叉甙4′磷酸酯(Ⅰ)及其二鈉鹽(Ⅱ)由美國專利4，904，768號作為鬼臼乙叉甙的前體形式公開，而且在體內(nèi)的抗癌測定中，其活性與鬼臼乙叉甙相同。
ⅠR＝HⅡR＝Na鬼臼乙叉甙在水中的溶解度是約0.1mg/ml，而鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯及其二鈉鹽在水中的溶解度為≥100mg/ml，因此這允許用少量或不用有機溶劑制備藥物制劑。以前公開的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯及其二鈉鹽是絨毛狀非晶形物質(zhì)，它們難于處理，且儲存時有分解傾向。因此，本發(fā)明目的之一是提供一種形式的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯，該形式的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯比其以前的形式更具優(yōu)點地用于制藥目的。本發(fā)明涉及新的結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯乙醇溶劑化物，它與鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的已知形式相較，更易于處理并且有意想不到的穩(wěn)定性。
本發(fā)明提供了式(Ⅲ)的穩(wěn)定的結(jié)晶鬼臼叉甙4′-磷酸酯二乙醇溶劑化物，下文稱為鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物。
另一方面，本發(fā)明提供了制備結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的方法，它包括在含溶劑系統(tǒng)的乙醇中形成鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的飽和溶液。


圖1 表示鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的X射線粉末衍射圖。
圖2 表示鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的質(zhì)子NMR光譜圖(D2O，200MHz)。
Ⅰ.鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的制備按下法可制得結(jié)晶鬼臼乙叉甙4-磷酸酯二乙醇化物在含有溶劑系統(tǒng)的乙醇中形成鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的飽和溶液;讓結(jié)晶形成;和收集所述結(jié)晶。按美國專利4，904，768號公開的方法可制備原料鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯，所述方法包括將鬼臼乙叉甙與氯磷酸二苯酯反應，得到的產(chǎn)物再催化氫化。此法得到的產(chǎn)物是非晶形物質(zhì)，它可被轉(zhuǎn)變成本發(fā)明的結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物。
混合鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯、乙醇和共溶劑，可制得鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的飽和乙醇溶液。所述的共溶劑可以是例如水或甲醇。必要時，該混合物可加熱得到完全的溶液。當溶液在一個適合于結(jié)晶形成的溫度下靜置時，使形成了鬼臼乙叉甙4-磷酸酯二乙醇化物的結(jié)晶;所述溫度并不特別限制，可在例如，約0-65℃范圍，但最好在室溫下，即約15-25℃進行結(jié)晶。期望的產(chǎn)物的結(jié)晶一般非常慢，通常在收集結(jié)晶之前，將該溶液攪拌約18-72小時。此外，也可向溶液中加入少量預先形成的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物結(jié)晶作為晶種。按常規(guī)方法(如過濾)收集結(jié)晶，用無水乙醇洗，然后干燥，得鬼臼叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物，無色結(jié)晶固體。干燥最好在20-25℃下真空干燥。
在一典型方法中，將鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯與無水乙醇混合，最好是1g鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯用15ml乙醇;然后加熱回流。向混合物中加入足夠量的水以得到完全的溶液，一般每克鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯需要約0.3-0.6ml水。必要時趁熱過濾該溶液，除去不溶的雜質(zhì)，然后攪拌下讓濾液冷卻至室溫，即約15-25℃。濾液保持在有助于結(jié)晶形成的溫度，直至足夠的結(jié)晶形成。雖然可在約55-65℃發(fā)生，但最好將溶液保持在室溫。于是，攪拌溶液約18-72小時，得期望的產(chǎn)物，無色結(jié)晶固體。通過下述實施例更充分地解釋上述方法。
實施例1由鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯制備鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物。
向非晶形鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯(18.0g)中加入無水乙醇(270ml，加熱回流，加入去離子水(約需5-10ml)直至得到一完全的溶液。趁熱過濾，濾液冷卻至約20℃，攪拌18小時。過濾收集產(chǎn)物，用無水乙醇(2×20ml)洗，于20℃真空干燥18小時，得鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物，無色結(jié)晶固體，15.4g(91%回收率)。
在另一變異方法中，在美國專利4，904，768號公開的制備鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的方法中最后加一結(jié)晶步驟，也可制得結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物。由鬼臼乙叉甙為原料制備結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的通用方法描述如下。通過美國專利4，904，768號公開方法的改良方法制備鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯。
實施例2由鬼臼乙叉甙制備鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物A.鬼臼乙叉甙4′-二芐基磷酸酯的制備向亞磷酸二芐酯(446.5g，1.70mol，2N)的二氯甲烷(3.5L)溶液中，于20℃和攪拌下一次加入N-氯琥珀酰亞胺(227.5g，1.70mol，2N)，反應混合物于30℃攪拌3小時，冷卻至0℃，在0℃保持12-72小時，然后過濾。在攪拌和惰性氣體環(huán)境下，用1至1.5小時，將上述制備的一部分氯代磷酸二芐酯溶液(62.5%，1.25N)加入冷卻到-15℃至-20℃的鬼臼乙叉甙(500g，0.85mol)、4-二甲氨基吡啶(10.5g，0.86mol，0.1N)、N，N-二異丙基乙胺(311.5ml，1.79mol，2.1N)和無水乙腈(5L)的混合物中，在-15℃至-20℃攪拌該反應混合物，再加入少量氯代磷酸二芐酯溶液(0.1至0.25N)，直至HPLC表明至少98%的鬼臼叉甙已被消耗為止。向反應混合物中加入0.5M KH2PO4(5L)，升溫至室溫，分出有機相，用10%NaCl(2L)洗兩次，用NaSO4干燥，真空蒸發(fā)溶劑，得到的固體粗品經(jīng)硅膠色譜純化，先用20% EtOAc/CH2Cl2，40%Et OAc/CH2Cl2，然后用乙酸乙酯洗脫，合并含期望產(chǎn)物的餾份，真空蒸發(fā)至2L，在良好的攪拌下將其慢慢加入庚烷(5L)中，于20℃攪拌1-3小時，過濾，于40℃真空干燥18小時，得標題化合物(505g，70%產(chǎn)率)。
B.結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的制備將鬼臼乙叉甙4′-二芐基磷酸酯(500g，0.59mol)的甲醇(2L)溶液加入10% Pd/C(50g)的甲醇(1L)混懸液中，加熱至約37℃，向其中慢慢加入1-甲基-1，4-環(huán)己二烯(555g，660ml，5.89mol，10N)甲醇(1L)溶液，于40-45℃攪拌該混合物，直至TLC表明反應完全為止。過濾，濃縮或加入甲醇將濾液調(diào)至約1L體積，將其加入無水乙醇(4L)中。該溶液接種標準的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯，并濃縮至約2.5L，加入無水乙醇(3.5L)，在約20℃攪拌18-72小時，過濾收集固體，用無水乙醇(2×250ml)洗，于約20℃真空干燥18小時，得300-350g產(chǎn)物(80-90%產(chǎn)率)。
Ⅱ.結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的物理-化學性質(zhì)m.p141-150℃(失去溶劑);
160-720(熔化)。
乙醇殘留11.8%(NMR分析);
13.2%(熱重量分析);
按C29H33O16P·2C2H6O計算為12.1%。
水份含量0.22%(用Karl Fischer方法)。
NMR見圖2用裝有垂直測角計(θ/2θ)的Philips APD 3720型粉末衍射系統(tǒng)得到圖1所示的X射線粉末衍射圖。X射線發(fā)生器(Philips XRG3100型)在45KV和40mA條件下操作，用1.544056 的銅Kα線作為放射源。每個樣品在2至32deg.2θ間掃描，所用步長為0.04deg.2θ，掃描速度為0.04deg.2θ/sec，用philips APD軟件4.00進行所有數(shù)據(jù)的收集和分析。
Ⅲ.所用材料a.上述制備的結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物。
b 按下述方法制備結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′磷酸酯(未溶劑化)。攪拌下將鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯(300mg)的乙醇(175ml)溶液于70℃加熱，得到澄清溶液，過濾，濾液于70℃加熱至體積減至約34ml為止，將部分溶液(約17ml)放于小瓶中，加入少量以前得到的針狀鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯結(jié)晶作晶種，于-12℃冰箱中放四天，收集生成的針狀結(jié)晶，白色絨毛狀物質(zhì)。NMR分析表明該物質(zhì)的乙醇含量為約1.6%W/W。
C.按美國專利4，904，768號描述方法制備非晶形鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二鈉鹽。
d.將結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物(125mg)溶于甲醇(50ml)中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干，殘余物在25℃真空干燥1小時，得到非晶形鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯。
B.方法精確稱重試驗樣品，并裝于Ⅰ型燧石玻璃瓶中，用涂過特氟隆(Teflon)的塞子和鋁蓋密封。將小瓶放于50℃儲存。分別在2、4和8周用HPLC測定這些樣品的含量。在4℃干燥儲存的樣品作為對照(假定其含量為100%。
C.HPLC測定條件柱Jones Apex十八烷基，5μ，150×4.6mm流速1ml/min流動相A0.02M磷酸銨(-堿基)的Milli-Q水(pH～4.5)/乙腈(85∶15)溶液流動相B乙腈梯度0-3分，等濃度 0%B;
3-18分，線性梯度 0-30%B;
18-23分，等濃度 30%B;
23-25分，線性梯度 30-0%B;
25-30分，100%A重新平衡(即0%B)波長235nm樣品濃度0.1mg/ml樣品稀釋液流動相A進樣量20μl保留時間鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯-5.4分;
木酚素P-11.5分;
鬼臼乙叉甙-17.5分。
在0.05-0.20mg/ml濃度范圍內(nèi)，鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的峰面積與濃度線性相關(相關系數(shù)＝0.9999)。
D.結(jié)果上述穩(wěn)定性試驗的結(jié)果列于下表中，其中“EP”表示鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯。
在50℃的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物在8周期間的含量降低極小，這清楚地證明結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物比其它形式的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的穩(wěn)定性更好。
本發(fā)明的結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物可直接用于藥物制備中。例如，它可以與隋性的藥學上可接受的賦形劑(例如乳糖，甘露糖醇，右旋糖酐，或其它適宜填充劑;調(diào)pH的檸檬酸鈉)混合而制劑。固體混合物可裝入小瓶中，在給藥前用常用的生理學上可接受的稀釋劑(如右旋糖溶液或生理鹽水)稀釋成注射溶液。固體混合物也可填入適合于鬼臼叉甙4′-磷酸酯口服給藥的明膠膠囊中。
此外，結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物可用于制備鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的凍干制劑。于是，將結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物溶于注射用水中，加入藥學上接受的堿(例如氫氧化鈉或檸檬酸鈉)調(diào)溶液pH至約4-5范圍;溶液中也可含有其它制藥賦形劑，例如填充劑(如乳糖或右旋糖酐)。向每一玻璃瓶中裝1ml溶液，并凍干。給予病人前，凍干物用生理學上可接受的稀釋劑再配制。
值得注意的是結(jié)晶鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物不管是作為藥物制劑，還是以填充藥物形式，都應該保持在相對濕度低的環(huán)境中，優(yōu)選低于33%的相對濕度，最好在干燥劑存在下或在密封容器中保存，以避免不希期的暴露于濕氣中。
上述的描述和非限定的解釋性實施例使專業(yè)人員能夠最充分地實施和應用本發(fā)明。專業(yè)人員用適當?shù)膶嶒灪苋菀讓崿F(xiàn)本發(fā)明范圍內(nèi)的任何變化和改良。
權(quán)利要求
1.結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物，其結(jié)構(gòu)式如下
2.制備結(jié)晶的鬼臼叉甙4′-磷酸酯二乙醇化物的方法，它包括在含有溶劑系統(tǒng)的乙醇中形成鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯的飽和溶液。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述溶劑系統(tǒng)包括水和乙醇。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述溶劑系統(tǒng)包括甲醇和乙醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了溫度穩(wěn)定的結(jié)晶的鬼臼乙叉甙4′-磷酸酯二乙醇溶劑化物及其制備方法。
文檔編號A61P35/00GK1071432SQ92111350
公開日1993年4月28日 申請日期1992年9月30日 優(yōu)先權(quán)日1991年10月8日
發(fā)明者D·法夫羅 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司