專利名稱:被取代的胍基苯甲酸苯酯生產(chǎn)方法和其作為藥劑的應(yīng)用的制作方法
本發(fā)明是關(guān)于新的被取代的胍基苯甲酸苯酯，它的應(yīng)用以及它的制備方法，和按照權(quán)利要求
含有這種化合物的藥物制劑。
4-胍基苯甲酸的芳基酯適宜于陰道避孕(美國書4423，069)。它作為受孕的主要酶，精蟲頭粒旦白的一種抑制劑而起作用，這種酶是一種處于精蟲頭粒內(nèi)部的絲氨酸-朊酶。精蟲頭粒旦白對受孕部分至關(guān)重要，在此部分精子透過明帶(卵膜)，包圍卵細胞的三層的最內(nèi)層。
現(xiàn)已找到，存在通式為Ⅰ
的新的胍基苯甲酸脂，其中X為-氫原子，-氰基或-帶1-4個炭原子的烷氧基，例如甲氧基-，乙氧基-或丙氧基團，而y為-氫原子，-具有1-4個炭原子的烷氧基或烷氧羰基，例如甲氧基-，乙氧基-，丙氧基-或甲氧羰基-，乙氧羰基-，丙氧羰基團，或一個
NRR′-基團，R和R′為氫原子或帶1-4個炭原子的低飽和烷基，例如甲基-，乙基-，丙基-或異丙基團，在這當(dāng)中，x和y不應(yīng)同時為氫，以及其生理上無副作用的有機或無機酸的鹽類，例如鹽酸，檸檬酸或?qū)?甲苯磺酸，與已知的芳基-胍基苯甲酸鹽相比不僅作為(人的)-精蟲頭粒蛋白抑制劑，而且也作為在動物實驗中的避孕藥，具有一種出乎預(yù)料的、明顯的、較強的作用。
藥理學(xué)的觀察1)，精蟲頭粒蛋白的(人類的)-檢定這種試驗體現(xiàn)了真正的第一次篩選，它指出了一種論據(jù)，對有關(guān)酶(人類的精蟲頭粒蛋白)本身的一種化合物的抑制作用，但還沒能陳述出所試驗化合物的生物效應(yīng)(也就是說，在正常的精子中精蟲頭粒蛋白的抑制以及避孕的效應(yīng))。
由人的精子通過酸性抽提獲得的酶，精蟲頭粒蛋白，用有藥效的抑制劑的不同濃度進行培育，并確定了這種濃度，該濃度導(dǎo)致精蟲頭粒蛋白的活性有50%的抑制。絲氨酸-朊酶精蟲頭粒蛋白以生理的方式主要分裂成精氨酸組和賴氨酸組，因此對于用來確定精蟲頭粒蛋白活性的在活體外的試驗，使用了苯甲酰-精氨酸-乙基脂作為基質(zhì)。
測得的數(shù)據(jù)(表1)不僅證明了本發(fā)明的化合物(號2至6)對酶，精蟲頭粒蛋白有抑制作用，它也證明了其效果大于已知的被視為鉛-化合物的Ⅰ號物質(zhì)。
2)，凝膠分解這種試驗同樣可視為第一次篩選的組成部分。對于所希望的精蟲頭粒蛋白所抑制的避孕作用，(除了在分離出的酶的原有的精蟲頭粒蛋白抑制之外)，是有重要意義的，這樣一種抑制劑能夠通過原生質(zhì)膜和一個正常精子外邊的精蟲頭粒膜，因為精蟲頭粒蛋白是在內(nèi)部的精蟲頭粒膜上。
按照皮、加杜姆和爾、蔡，波蘭島(科學(xué)170745-751)的凝膠分解模型，根據(jù)威、比、希勒修改的(國際月刊，男性生殖器病學(xué)425-38)并且按照自己的制作，證明特別適于這種特殊課題的試驗。在這種方法中，用于自射線照相，用末爆光定影的和用亞甲藍著色的膠片進行工作，通過精蟲頭粒蛋白溶解的活動，使其凝膠層溶解。其后果是在精子的頭部周圍生成了明顯可見的廣闊暈圈(所謂的暈圈-形成，細胞溶解暈)。在抑制精蟲頭粒蛋白時，不形成這種暈圈。
為了試驗證實的精蟲頭粒蛋白抑制劑的滲透性和由此在正常精子出現(xiàn)抑制精蟲頭粒蛋白，用多種抑制劑濃度預(yù)先培育了人的精液。接著，在相應(yīng)的預(yù)先準(zhǔn)備好的條件下(見上)，在顯微鏡的載物玻片的凝膠小片上，涂上部分精液，并在血庫潮濕的空氣中培育，接著在反差顯微鏡下半微量地測定暈圈構(gòu)成的強度。
在表2中這種試驗陳述了藥理學(xué)結(jié)果，代表申請要求保護的化合物，與已知的鉛-化合物(1號)相比證明了所述物質(zhì)的作用和優(yōu)越性。
3)，在活體外受精(老鼠)這個試驗可以首先核實避孕效果，以及核實其作用原理。
按照波倫斯特，威查和威廷海姆在一介質(zhì)滴中，它含有抑制劑，首先轉(zhuǎn)化成由排卵過速取得的卵母細胞，接著以吸移液管添加一未經(jīng)處理的老鼠精液的一部分。這樣選擇抑制劑，使不產(chǎn)生抑制有機體的能動性。24小時以后測定分裂的和沒有分裂的卵母細胞，并由此定出受孕率。
因此要審查，是否要試驗的精蟲頭粒蛋白抑制劑，以一種方式給藥，這種給藥方式使卵母細胞和精子直接接觸，能夠阻止受孕而沒有阻礙精子的能動性。
在表3中，舉出了基于這類試驗測定了本發(fā)明物質(zhì)的阻礙受孕的作用，用2-氰基-或3-甲氧基羰基-化合物(號碼2或3)的例子與以前已知的鉛-物質(zhì)(號碼1)相比;這些數(shù)值顯示出新物質(zhì)有明顯的優(yōu)越性。
4)，預(yù)先培育的精子按照人工授精在活體內(nèi)受精(家兔)
這個試驗在活體內(nèi)條件的情況下，能夠說明避孕作用借助于人造陰道獲得的預(yù)先要與進行試驗的精蟲頭粒蛋白一起進行培育。然后為了誘導(dǎo)盡快排卵，使用PmS(妊娠的牡馬血清)，用預(yù)先處理過的精子，使作好準(zhǔn)備試驗的母家兔進行人工授精，為了引起盡快排卵，接著給母家兔以HCG(人類的絨毛膜促性腺激素)。
36小時以后，將兔殺死，取出輸卵管和子宮，并沖洗，以取得早期胚胎或未分裂的卵母細胞并以其數(shù)目測定受孕率。
這種在活體內(nèi)的試驗結(jié)果(參見表4)，對本發(fā)明的化合物來說，舉出了號碼2和3的化合物為例，與鉛-物質(zhì)(號碼為1)相比較，也證明有意外增高的阻礙受孕的作用(受孕率由51%降低到4或1%)。
避開作用原理不談，這種化合物的避孕作在申請專利時，與適當(dāng)?shù)淖珜懮暾埼谋居兄种匾年P(guān)系。
作為實際應(yīng)用的藥劑，將本發(fā)明的化合物按原已知的處方配制藥劑的方法寫或陰道避孕藥物。
膠類、膏類、泡沫、小栓或可溶解的膜類可以作為適宜的使用形式。優(yōu)先選用的是使用一種“緩慢釋放”系統(tǒng)，以便保證有一經(jīng)過較長時間的(不低于24小時)持久的避孕作用。
作為適宜的載體物質(zhì)，該載體物質(zhì)可以單獨使用或者與適宜的溶劑如水一起使用，并且必須保證有效物質(zhì)容易分布，既使不需要是液體的，也還考慮，聚乙烯乙二醇衍生物以及甲基纖維素化合物。
有效物質(zhì)的濃度是在0.1-10.0重量百分數(shù)的范圍之內(nèi)。
用于人，每次服用的劑量單位是1-10毫克。
本發(fā)明的通式Ⅰ的胍基苯甲酸酯的制備，按照權(quán)利要求
8根據(jù)原為公知的方法進行羧酸的酯化。優(yōu)先選擇的是在0℃-30℃進行的，通過二環(huán)己基炭化二亞胺引起的，和一種酸性的，例如對-甲苯磺酸，和一種堿性的，例如吡啶，催化劑加速的，通式Ⅱ的酚類
的縮合反應(yīng)，其中X和Y具有權(quán)利要求
1中提到的含義，用一種4-胍基苯甲酸的鹽(主要是氫氯化物)在一適宜的對質(zhì)子有情性的極性溶液劑中，例如二甲基甲酰胺，二乙基乙酰胺，二甲基亞砜，四氫呋喃，二乙基醚，二氯甲烷，乙腈或吡啶。在適宜的加工和凈化以后(作為最重要的副產(chǎn)品，必須去掉N，N′-二環(huán)己基尿素)通過慣用的工藝，如過濾，用適宜的溶劑抽提，尤其是色譜分離方法，得到所希望的通式Ⅰ的胍基苯甲酸酯，按照不同的反應(yīng)情況，得到游離的咸，或無機的或有的鹽，例如氫氯化物，檸檬酸鹽或?qū)?甲苯磺酸鹽。通過技術(shù)人員熟悉的方式方法，可以將這些鹽轉(zhuǎn)化或游離咸，或?qū)⒂坞x咸轉(zhuǎn)化成鹽。
表Ⅰ 人類精蟲頭粒蛋白的不同芳基-4-胍基基甲酸衍生物I50的測定
表Ⅱ通過芳基-4-胍基苯甲酸鹽衍生物產(chǎn)生的人類精蟲頭粒蛋白的阻礙性
例1由1.0克(4.64毫克分子)4-胍基苯甲酸氫氯化物，2.12克(13.92毫克分子)3-氫氧基苯甲酸-甲基酯和100毫克(0.58毫克分子)無水的對-甲苯磺酸組成的一種混合物，在氬氣存在情況下，在4毫升的吡啶中在0℃攪拌15小時。在加入2.87克(13.92毫克分子)二環(huán)己基炭化二亞胺以后，在室溫下，要繼續(xù)攪拌3天，然后在0℃時加入1毫升的冰醋酸。在0℃攪拌2小時以后，過濾出固體物質(zhì)，濾液加入大約25克冰，并用5N鹽酸酸化，使PH不高于1。用25毫升二氯甲烷分出底層以后，還要在冰冷卻情況下攪拌1小時，然后在50℃進行濃縮。生產(chǎn)出的油-結(jié)晶-混合物(9.93克)用二氯甲烷/甲醇/冰醋酸(80∶20∶0.1)在硅膠上進行色譜分離。然后由氯仿進行再結(jié)晶，得到270毫克4-胍基苯甲酸-(3-甲氧基羰基苯基)-酯，熔點為194℃-195℃的氫氯化物。
例2實施和加入的數(shù)量與例1的情況相適應(yīng)。但替代3-氫氧基苯甲酸甲基酯，使用了2.31克(13.92毫克分子)3-氫氧基苯甲酸乙基酯。在濃縮后出現(xiàn)的油-結(jié)晶-混合物(12.4克)用二氯甲烷/甲醇/冰醋酸(80∶20∶0.1)在硅膠上進行色譜分離，并且相應(yīng)的餾份(960毫克)由丙酮/乙醇再結(jié)晶。得到330毫克4-胍基苯甲酸(3-乙氧基羰基苯基)-酯，熔點為137℃的氫氯化物。
例3實施和加入的數(shù)量與例1的情況相適應(yīng)。但替代3-氫氧基苯甲酸甲基酯，使用了1.66克(13.92毫克分子)2-氫氧基苯基氰。在濃縮后得到油-結(jié)晶-混合物(12.55克)用二氯甲烷/甲醇/丙醋酸(90∶10∶0.1)在硅膠上進行色譜分離，并且相應(yīng)的餾份用15毫升氯仿進行再結(jié)晶。得到960毫克4-胍基苯甲酸-(2-氰苯基)-酯，溶點為178℃的氫氯化物。
例4實施和加入的數(shù)量與例1的情況相適應(yīng)。但替代3-氫氧基苯甲酸甲基酯，使用了2.15克(13.92毫克分子)2.3-二甲氧基酚。在濃縮后得到的油(4.46克)用二氯甲烷/甲醇/冰醋酸(8∶2∶1)在硅膠上進行色譜分離，并且先后用70毫升乙醇/二氯甲烷(1∶1)和10毫升二氯甲烷在室溫浸漬相應(yīng)的750毫克餾份。在吸濾以后，得到245毫克4-胍基苯甲酸-(2，3-二甲氧基苯基)-酯，熔點為197-201℃(分解)的氫氯化物。
例5實施和加入的數(shù)量與例1的情況相適應(yīng)。但替代3-氫氧基苯甲酸甲基酯，使用了1.91克(13.92毫克分子)3-氫氧基苯甲酰胺。用5N鹽酸處理和用二氯甲烷分層以后，將沉淀出的固體物質(zhì)(820毫克)進行吸濾，并用17毫升氯仿煮熬。通過過濾得到530毫克4-胍基苯甲酸-(3-氨基甲酰基苯基)-酯，熔點為104-105℃的氫氯化物。
例6實施和加入的數(shù)量與例1的情況相適應(yīng)。但替代3-氫氧基苯甲酸甲基酯，使用了1.81克(12.00毫克分子)3-氫氧基-N-甲基苯甲酰胺。用5N鹽酸處理以后，用二氯甲烷抽提。用炭酸氫鈉中和以后，將水相濃縮，剩余的固體殘渣先后用300毫升乙醇和150毫升異丙醇在室溫搖蕩。
濃縮集中的濾液，油質(zhì)殘渣(2，40克)用二氯甲烷/乙醇(1∶1)在硅膠上進行色譜分離，相應(yīng)的餾份用異丙醇進行再結(jié)晶。得到330毫克4-胍基苯甲酸-(3-甲基氨基甲酰基-苯基)-酯，熔點為194.5-195.6℃(分解)的氫氯化物。
權(quán)利要求
1.制備陰道避孕藥劑方法，其特征在于該藥劑至少含有通式為(I)
(I)的胍基苯甲酸苯脂，其中X為一氫原子，一氰基式一帶有1-4個碳原子的烷氧基和Y為一氫原子，一帶有1-4個碳原子的烷氧基或烷氧羰基團或一個帶有含義為氫原子或帶有1-4個碳原子的低飽和的烷基團R和R′的
RR′一基團，在這當(dāng)中，X和Y不應(yīng)當(dāng)同時是氫，或其生理上無副作用的無機或有機酸的鹽類。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1制備方法，其特征是該藥劑含有一種下述化合物，a)4-胍基苯甲酸-(3-甲氧基羰基苯基)-酯和其氫氯化物。b)4-胍基苯甲酸-(3-乙氧基羰基苯基)-酯和其氫氯化物。c)4-胍基苯甲酸-(2-氰苯基)-酯和其氫氯化物。d)4-胍基苯甲酸-(2，3-二甲氧基苯基)-酯和其氫氧化物。e)4-胍基苯甲酸-(3-甲氨酰苯基)-酯和其氫氧化物。f)胍基苯甲酸-(3-甲基甲氨酰苯基)-酯和其氫氧化物。
3.制取通式Ⅰ化合物的方法，其特征在于，以已知的方法使4-肪基苯甲酸的一種鹽與通式Ⅱ的一種酚，
在這當(dāng)中X和Y具有權(quán)利要求
1所提到的含義，進行縮合。
4.按照權(quán)利要求
1-7使用一種或數(shù)種化合物制取藥劑。
專利摘要
一種胍基苯甲酸酯(I)，其中X為-氫原子，-氰基或-帶有1-4個碳原子的烷氧基和Y為-氫原子，-帶有1-4個碳原子的烷氧基或烷氧羰基團或-帶有含義為氫原子或具有1-4個碳原子低飽和烷基的R和R′的
文檔編號A61K31/21GK85104997SQ85104997
公開日1986年12月31日 申請日期1985年7月1日
發(fā)明者哈本尼特, 基爾希, 克洛斯, 勞倫特, 恩特比 申請人:施林股份公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan