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一種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖

文檔序號:10527032閱讀:942來源:國知局
一種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途,本發(fā)明提供的芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物中含有芐達(dá)賴氨酸和一種從延胡索的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ),芐達(dá)賴氨酸、化合物(Ⅰ)單獨作用時,可以提高小鼠肝組織中GSH含量,降低MDA含量,抑制TG的積累,具有一定的保肝作用;芐達(dá)賴氨酸和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時,保肝效果更好,可以開發(fā)成保護(hù)肝臟的藥物,與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
一種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域,涉及芐達(dá)賴氨酸的新用途,具體涉及芐達(dá)賴氨酸的藥 物組合物及其在保護(hù)肝臟中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 芐達(dá)賴氨酸化學(xué)名稱為L-賴氨酸(1-芐基-1H-吲哚唑-3-氧基)乙酸鹽,是一種眼 科用藥,適用于早期老年性白內(nèi)障。
[0003] 酒精的代謝和分解多在肝臟中完成,因此大量飲酒會給肝臟帶來很大負(fù)擔(dān)。同時 在酒精代謝過程中會產(chǎn)生許多代謝產(chǎn)物,如乙醛、自由基離子等。這些代謝產(chǎn)物的對機(jī)體的 傷害都大于酒精本身,會引發(fā)炎癥,造成肝細(xì)胞損傷,降低免疫功能,導(dǎo)致死亡。機(jī)體大量攝 入乙醇后,主要在乙醇脫氫酶(ADH)的催化下氧化為乙醛,并被乙醛脫氫酶氧化為乙酸鹽類 物質(zhì)。因此認(rèn)為ADH是乙醇代謝過程中的一種重要酶類,保持其活性能夠加速體內(nèi)乙醇的分 解代謝,降低體內(nèi)乙醇的蓄積。乙醇大量氧化使得三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影 響脂肪代謝,致使脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積。同時乙醇能激活氧分子,產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致肝細(xì)胞 膜的脂質(zhì)過氧化及體內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)消耗、丙二醛(MDA)升高,甘油三酯(TG)的代 謝也會受到明顯影響。
[0004] 迄今為止,尚未見芐達(dá)賴氨酸及其藥物組合物與保護(hù)肝臟的相關(guān)性報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物,該藥物組合物中含有芐達(dá) 賴氨酸和一種天然產(chǎn)物,芐達(dá)賴氨酸和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同保護(hù)肝臟。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的:
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I),
[0009] -種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物,包括芐達(dá)賴氨酸、如權(quán)利要求1所述的化合物(I) 和藥學(xué)上可以接受的載體,制備成需要的劑型。
[0010] 進(jìn)一步地,藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進(jìn)一步地,所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物(I)的制備方法,包含以下操作步驟:(a)將延胡索的干燥塊莖粉碎,用 80~90 %乙醇熱回流提取,合并提取液,濃縮至無醇味,依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取,分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物;(b)步驟(a)中正 丁醇取物用大孔樹脂除雜,先用30 %乙醇洗脫6個柱體積,再用85 %乙醇洗脫12個柱體積, 收集85%洗脫液,減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物;(c)步驟(b)中85%乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離,依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個組分;(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離,依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分;(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離,用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫,收集13~16個柱體積洗脫液,洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地,化合物(I)的制備方法中,步驟(a)用85%乙醇熱回流提取,合并提取 液。
[0014] 進(jìn)一步地,化合物(I)的制備方法中,所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進(jìn)一步地,化合物(I)的制備方法中,步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取,得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點:
[0019] 本發(fā)明提供的芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物中含有芐達(dá)賴氨酸和一種從延胡索的干 燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物,芐達(dá)賴氨酸和該天然產(chǎn)物單獨作用時,具有肝 臟作用;二者聯(lián)合作用時,對肝臟的保護(hù)作用進(jìn)一步提高,可以開發(fā)成保護(hù)肝臟的藥物。本 發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進(jìn)步。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容,但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換,而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源:乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純,購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司,甲醇,分析純,購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]分離方法:(a)將延胡索的干燥塊莖(2kg)粉碎,用85 %乙醇熱回流提?。?5L X 3 次),合并提取液,濃縮至無醇味(3L),依次用石油醚(3LX3次)、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取,分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物;(b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜,先用30%乙醇洗脫6個柱體積,再用 85%乙醇洗脫12個柱體積,收集85%洗脫液,減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物;(c)步驟(b) 中85 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離,依次用體積比為100:1 (12個柱體積)、50:1 (10個 柱體積)、25:1(8個柱體積)和12:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分; (d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離,依次用體積比為20:1(6個柱體積)、12:1(8個 柱體積)和2:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分;(e)步驟(d)中組分2用 十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離,用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫,收集 13~16個柱體積洗脫液,洗脫液減壓濃縮得到化合物(I) (270mg,HPLC歸一化純度大于 98%)〇
[0024] 結(jié)構(gòu)確證:白色固體;HRAPCHMS給出的準(zhǔn)分子離子峰m/z 219.1715[M+H] +,表明化 合物分子式為Ci5H22〇2,不飽和度為5。h-NMR譜(CDC1 3,600MHz)中,H-1 (2.56,d,J = 4.3Hz), H-2(3.17,dd,J = 6.2,4.3Hz),H-3(5.39,d,J = 6.2Hz),H-5(2.04,br,d,J=13.2Hz),H-6a (1.45,m),H-6b(1.84,m),H-7(2.11,tt,J=13.5,4.4Hz),H-8a(1.57,m),H-8b(1.79,m),H-9a(1.37,dt,J = 12.6,3.5Hz),H-9b(2.03,dt,J=12.6,4.0Hz),H-12(4.83,br,s,2H),H-13 (1.84,8),!1-14(0.99,8),!1-15(1.83,1^,8) ;13(:-匪1?譜(〇)(:13,1501抱)中,顯示有15個碳信 號,01(80.3,0〇,02(52.7,01),(:-3(121.7,01),(:-4(136.1,〇,(:-5(47.2,01),(:-6 (26.1,CH 2),C-7(43.9,CH),C-8(26.5,CH2),C-9(36.2,CH2),C-10(40.2,C),C-11(149.2, 個烯烴質(zhì)子信號3!15.39(1!1,(1,1 = 6.2他,!1-3);兩個甲基質(zhì)子信號6!10.99(3!1,8,!1-14)與 1.83(3!1,1^,8,!1-15);-組異丙烯基質(zhì)子信號5!11.84(1!1,8,!1-13)、4.83(2!1,1^,8,!1-12) ; 兩個次甲基質(zhì)子信號δΗ2.04( lH,br,d,J= 13·2Ηζ,Η-5),2· 11 (lH,tt,J= 13.5,4·4Ηζ,Η- 7);-組環(huán)氧丙基質(zhì)子信號5!12.56(1!1,(1,了 = 4.3!^,!1-1),3.17(1!1,(1(1,了 = 6.2,4.3!^,!1-2)。13C-NMR譜結(jié)合DEPT譜表明該結(jié)構(gòu)中有三個甲基碳信號,四個亞甲基碳信號(三個飽和碳 和一個烯烴碳),五個次甲基碳信號(兩個飽和碳,兩個連氧碳和一個烯烴碳),三個季碳信 號(一個飽和碳和兩個烯烴碳)。通過HMBC譜分析可知,H-7與C-6,C-8和C-11,以及H 2-12與 C-7和C-13的相關(guān)信號表明異丙烯基與C-7位相連。N0ESY譜中,Me-14與H-l、Me-14與H-2、H-1與H-2、H-5與H-7存在相關(guān)性,同時,Me-14與H-8a之間也存在相關(guān)性,另外H-5與H-7偶合常 數(shù)分別為J = 13.2Hz與J = 13.5Hz,可以確證H-5和H-7的構(gòu)型方向一致,為α構(gòu)型,同時N0ESY 譜中未表明Me-14與Η-5存在相關(guān)性,因此Me-14、H-1與Η-2為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜 和N0ESY譜,以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù),可基本確定該化合物如下式所示,立體構(gòu)型 進(jìn)一步通過ECD試驗確定,理論值與實驗值基本一致。
[0025] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下:

[0027] 實施例2:藥理作用 [0028] 1、材料與方法
[0029] 1.1材料與儀器
[0030]芐達(dá)賴氨酸購自中國藥品生物制品檢定所?;衔铮↖)自制,制備方法見實施例1。 ICR雌性小白鼠體重(25 ± 5)g,上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司;考馬斯亮藍(lán)G-250、甘油 三脂試劑盒、丙二醛測試盒、谷胱甘肽過氧化物試劑盒、乙醇脫氫酶測定試劑盒南京建成生 物工程研究所;海王金樽,廣東深圳海王藥業(yè)有限公司;56°紅星二鍋頭白酒,北京紅星釀酒 廠。Alpha-D2凍干機(jī)德國Christ公司;電子天平,上海天平儀器廠;UV752N紫外可見分光光 度計,上海儀電分析儀器有限公司。
[0031] 1.2動物分組
[0032] 將72只ICR小鼠在(22 ± 1) °C,濕度40 %~60 %,12h日夜交替,自由進(jìn)食、進(jìn)水的條 件下適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為六組。空白對照組12只:實驗過程中不做任何處理,自由 喂養(yǎng);模型組12只:0.9%的生理鹽水;芐達(dá)賴氨酸組12只:濃度為100mg/mL;化合物(I)組12 只:濃度為l〇〇mg/mL;芐達(dá)賴氨酸與化合物(I)組合物組12只:濃度為50mg/mL芐達(dá)賴氨酸+ 50mg/mL化合物(I);陽性對照組12只:濃度為25mg/mL的海王金樽溶液。
[0033] 1.3給藥
[0034]每日經(jīng)口灌胃給予20mL/kg · BW受試樣品。空白對照組不做任何灌胃,自由進(jìn)食、 進(jìn)水;模型對照組按體重給予生理鹽水,連續(xù)給藥30d。每周稱重一次,根據(jù)體重調(diào)整用藥 量。給予受試樣品結(jié)束時,將模型對照組及各樣品組一次灌胃給予白酒5mL/kg · BW,空白對 照組給蒸餾水。
[0035] 1.4肝臟樣品制備
[0036]末次給藥后,禁食不禁水12h,將小鼠頸椎脫白處死,解剖取出完整肝臟,預(yù)冷生理 鹽水清洗至洗液無血色后,吸干肝臟表面水分。剪取〇. lg肝臟組織置于小燒杯中(于冰水), 準(zhǔn)備9倍(0.9mL)于肝臟組織重量的0.9%的生理鹽水,轉(zhuǎn)移總量2/3的生理鹽水于燒杯中, 盡快剪碎組織塊,倒入玻璃勻漿器,再將剩余的1/3生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織 塊,一起倒入勻漿管進(jìn)行勻漿,充分研磨后制成10 %的組織勻漿,于離心機(jī)中以2000r/min 離心15min,取上清液備用。
[0037] 1.5檢測指標(biāo)
[0038]小鼠體重:每周稱量一次小鼠體重,直到實驗結(jié)束,以考察受試樣品對各組小鼠體 重的影響。肝組織指標(biāo)測定:各組肝組織中GSH、MDA和TG含量,ADH活性測定根據(jù)各試劑盒說 明書操作步驟進(jìn)行。
[0039] 1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計
[0040]數(shù)據(jù)均以(平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差)表示,組間差異采用SPSS16.0進(jìn)行單因素分析 (AN0VA),以P<0.05或P<0.01確定差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0041 ] 2、實驗結(jié)果
[0042] 2.1對谷胱甘肽、丙二醛含量的影響
[0043]肝臟谷胱甘肽(GSH)的總含量是評價藥物醒酒保肝功能的一個重要指標(biāo)。由表1可 知,與空白組比較,模型組小鼠經(jīng)白酒灌胃后,肝臟GSH含量極顯著降低(P〈0.01),說明該模 型造模成功。陽性對照組和芐達(dá)賴氨酸與化合物(I)組合物組小鼠肝勻漿中GSH含量與模型 組相比極顯著升高(P〈〇.01),芐達(dá)賴氨酸組、化合物(I)組小鼠肝勻漿中GSH含量也明顯升 高(P〈0.05)。組合物能夠維持肝臟GSH含量,對抗乙醇損傷引起的肝臟GSH耗竭,提高機(jī)體清 除自由基的能力,從而對小鼠肝臟起到保護(hù)作用。由于GSH能在一定程度上阻止肝組織中脂 質(zhì)過氧化反應(yīng),而丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物之一,因此GSH濃度的降低會間接 導(dǎo)致肝臟MDA含量的增加。由表1可知,與空白組比較,模型組小鼠灌胃后,肝臟MDA含量極顯 著升高(P〈0.01),說明該模型造模成功。陽性對照組和芐達(dá)賴氨酸與化合物(I)組合物組小 鼠肝勻漿中MDA含量與模型組相比顯著下降P(〈0.01),芐達(dá)賴氨酸組、化合物(I)組也表現(xiàn) 出MDA含量明顯下降,顯著性水平(P〈0.05)。
[0044] 表1受試樣品對小鼠肝組織中GSH、MDA含量的影響
[0046] 2.2對甘油三酯含量的影響
[0047]當(dāng)機(jī)體攝入大量乙醇時,乙醇在乙醇脫氫酶的作用下大量氧化,使得三羧酸循環(huán) 和脂肪代謝受阻,使得甘油三酯(TG)在肝臟中不斷堆積,不但會誘發(fā)較為嚴(yán)重的心血管疾 病,還會引發(fā)脂肪肝。由表2可知,與空白組比較,模型組小鼠肝臟組織TG含量極顯著升高(P 〈0.01),說明該模型造模成功。與模型組比較,芐達(dá)賴氨酸與化合物(I)組合物組和陽性對 照組小鼠肝勻漿中TG含量極顯著降低(P〈0.01)。本實驗中,各藥物組都表現(xiàn)出降低醉酒小 鼠肝臟TG含量,并且組合物組都達(dá)到極顯著水平(P〈0.01),說明此組合物可降低醉酒小鼠 肝臟組織TG含量,減輕肝臟脂肪堆積,起到保護(hù)肝臟的作用。
[0048]表2受試樣品對小鼠肝組織中TG含量的影響
[0050] 上述試驗表明,芐達(dá)賴氨酸、化合物(I)可以提高小鼠肝組織中GSH含量,降低MDA 含量,抑制TG的積累,具有一定的保肝作用;芐達(dá)賴氨酸和化合物(I)聯(lián)合使用時,治療效果 更好,可開發(fā)成保肝藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容,但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換, 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I),2. -種芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物,其特征在于:包括芐達(dá)賴氨酸、如權(quán)利要求1所述的 化合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體,制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物,其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載 體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載 體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物,其特征在于:所述劑型包括片劑、 膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射 劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物(I)的制備方法,其特征在于,包含以下操作步驟:(a)將延 胡索的干燥塊莖粉碎,用80~90%乙醇熱回流提取,合并提取液,濃縮至無醇味,依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取,分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物;(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜,先用30%乙醇洗脫6個柱體積,再用 85%乙醇洗脫12個柱體積,收集85%洗脫液,減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物;(c)步驟(b) 中85 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離,依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分;(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離,依次用體積 比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分;(e)步驟(d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離,用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫,收集13~ 16個柱體積洗脫液,洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物(I)的制備方法,其特征在于:步驟(a)用85%乙醇熱回 流提取,合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物(I)的制備方法,其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物(I)的制備方法,其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取,得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物(I)在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的芐達(dá)賴氨酸的藥物組合物在制備保護(hù)肝臟的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號】A61P1/16GK105884715SQ201610260273
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月23日
【發(fā)明人】陳斌
【申請人】陳斌
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